Introduccin

Las enzimas son catalizadores biolgicos que se encargan de realizar todas las
transformaciones energticas que ocurren en un organismo, modificando la velocidad
de las reacciones qumicas, ms no el equilibrio final. Las enzimas se caracterizan por
su especificidad y eficacia es importante resaltar que pueden verse afectadas por
factores tales como temperatura, pH, concentracin de enzima, concentracin de
sustrato e inhibidores que son los factores que se estudiarn durante la prctica para
observar cmo reaccionan las enzimas ante ellos.
En la prctica se va a estudiar la actividad enzimtica de la amilasa salival la cual es
una enzima producida en el pncreas y las glndulas salivales, su funcin principal es
la de digerir parcialmente almidn catalizando la hidrlisis del monosacrido la glucosa
y de l disacrido maltosa, su pH normal se encuentra entre 6,7-6,9.
Es importante saber que la amilasa pude ser inhibida y esto puede provocar
disminucin de la digestin de almidn y absorcin de glucosa, uno de esos inhibidores
es la acarbosa que es un medicamento disponible en farmacias este compuesto
produce disminucin de los gases intestinales, existe otro compuesto que puede inhibir
la actividad de la amilasa y es el cido sulfrico. Las enzimas juegan un papel
preponderante a la hora de realizar diagnsticos ya que si alguna se encuentra muy
elevada o muy baja puede indicar una serie de patologas.

Efecto de la concentracin de la enzima

Buffer

Incubaci

Enzim

Tr

Lugo

Agua

Lectura de

Sustrat

pH

n por 5

a (ml)

(min

l (ml)

(ml)

la

o(ml)

7,2

min

absorbanci

(ml)

a a 600
nm
0,2

6,8

0,4

6,
6

37C

1,140

0,964

2
0,6

6,
4
6,

0,8

0,310

0,300
2
Fuente: Datos obtenidos en el Laboratorio de Bioqumica de la Universidad de
Oriente Ncleo Bolvar

Control
Sustrat

Buffe

Incubaci

Lugol

Tr

Agua

Lectura de la

o(ml)

r pH

n por 5

(ml)

(min)

(ml)

absorbancia a

7,2

min

600 nm

(ml)

37C

1,20

Fuente: Datos obtenidos en el Laboratorio de Bioqumica de la Universidad de

Oriente Ncleo Bolvar

Tabla con los valores de la Vo

Vo
Sustrat

CT

o(ml)

(mmol/l)

CN (mmol/l)

Cs (mmol/l)

Enzima

(mmol/m

(ml)

in)

1,140

0,07

0,2

0,035

0,964

0,25

0,4

0,125

0,310

0,9
0,6

0,45

1,210

0,300

0,91

0,8
0,455
Fuente: Datos obtenidos en el Laboratorio de Bioqumica de la Universidad de
Oriente Ncleo Bolvar
Para el clculo de la Vo de la reaccin se utilizar la siguiente frmula:
Vo=

Cs
Tr

Donde:
Cs= mmoles metabolizados

Tr= Tiempo de reaccin

Vo=

0,07 mmol /l
=0,035 mmoles/min
2 min

Vo=

0,25 mmol/l
=0,125 mmoles/min
2 min

Vo=

0,9 mmol/l
=0,45 mmoles/min
2 min

Vo=

0,91 mmol/l
=0,455 mmoles/min
2 min

Efecto de la variacin del pH sobre la actividad de la enzima

Sustr

Buffer

Incubaci

Enzima

Tr

Lugol

Agua

Lectura

1 ml

n por 5

(ml)

(min)

(ml)

(ml)

de la

ato(m

min

absorban

l)

cia a 600
nm
pH 3

0,2

6,5

0,4

6,5

pH 5
1

0,214
37C

2
0,6

pH 7,2

1,004

1
6,5

0,100

0,8

6,5

pH 8

0,063

6,5

0,504
pH 11
Fuente: Datos obtenidos en el Laboratorio de Bioqumica de la Universidad de
Oriente Ncleo Bolvar

Controles
Sustrato

Buffer

Incubaci

Lugol

Tr

Agua

Lectura de la

(ml)

1 ml

n por 5

(ml)

(min

(ml)

absorbancia a

min

600 nm

pH 3

1,235

pH 5

1,237

1,145

37C
pH

7,2
pH 8

1,120
1,054

pH 11

Fuente: Datos obtenidos en el Laboratorio de Bioqumica de la Universidad de

Oriente Ncleo Bolvar

Procesamiento de los mmoles remanentes

Vo
Sustrato(

CT (mmol/l)

CN (mmol/l)

Cs (mmol/l)

pH (ml)

ml)

(mmol/meta
bolizacin/
min)

2,33x10

-3

1 x 10-2

7,67 x 10-3

3,84 x 10-3

2,1 x 10-3

2,30 x 10-4

1,15 x 10-4

1 x 10-3

2,33 x 10-6

7,2

1,17 x 10-6

1,6 x 10-3

7,3 x 10-4

3,65 x 10-4

5 x 10-3
2,67 x 10-3
11
1,34 x 10-3
Fuente: Datos obtenidos en el Laboratorio de Bioqumica de la Universidad de
Oriente Ncleo Bolvar
Para calcular Ct se realizo lo siguiente:
1 ml sustrato total x

0,8 g
1 mol
100 mmol
1l
3
x
x
x
=2,33 x 10
1 L 342,30 g
1 mol
1000 ml

Posteriormente luego de realizar el clculo de Ct se procedi a graficarlos junto con los

valores de absorbancia del tubo control y para poder obtener Cn se realiz la grfica
para luego extrapolar los valores de absorbancia de los tubos experimentales.
Seguidamente se realiza el clculo de Cs de la siguiente manera:
Cs ( Mmolesmetabolizados )=CT ( mmoles iniciales )CN ( mmolesremanentes)

Para calcular los milimoles metabolizados se sigue la formula anterior de la siguiente

manera:
pH 3 Cs=2,33 x 1031 x 102=7,67 x 103 mmol
pH 5 Cs=2,33 x 1032,1 x 103=2,30 x 104 mmol
pH 7,2 Cs=2,33 x 1031 x 103=1,3 3 x 103 mmol
3

pH 8 Cs=2,33 x 10 1,6 x 10 =7 , 3 x 10 mmol

3

pH 11 Cs=2,33 x 10 5 x 10 =2 ,67 x 10 mmol

Luego de calcular previamente Cs se procedi a realizar el clculo de la Vo de la

reaccin enzimtica se utilizar la siguiente frmula:
Vo

( mmoles metabolizados )
=Cs
( mmolmetabolizado
)
min
Tr (Tiempo de reaccin)

7,67 x 103 mmol

pH 3 Vo=
=3,84 x 103 mmoles/min
2 min
4

pH 5 Vo=

2,30 x 10
=1,15 x 104 mmoles/min
2min

pH 7,2 Vo=

pH 8 Vo=

1,33 x 103
=6,65 x 104 mmoles/min
2 min

7,3 0 x 104
=3,65 x 104 mmoles /min
2 min

pH 11 Vo=

2,67 x 103
=1,34 x 103 mmoles/min
2min

Finalmente se realiz una grfica con las velocidades obtenidas y los pH.

Discusin de los resultados

2. Efecto de la concentracin de la enzima

La grfica fue realizada utilizando los valores de absorbancia obtenidos en el laboratorio

y la velocidad inicial calculada anteriormente la cual se define como la velocidad medida
antes de que se haya formado suficiente producto para permitir que la reaccin inversa
ocurra. Adems, la velocidad inicial de una reaccin enzimtica es siempre proporcional
a la concentracin de la enzima. Al tener concentraciones elevadas de enzimas se
obtiene una grfica en la que la que se alcanza la mxima velocidad de reaccin por lo
que se aprecia una lnea perpendicular ascendente que nos indica que altas
concentraciones de enzima la velocidad de reaccin va en constante ascenso hasta
alcanzar la velocidad mxima de reaccin y llegue a ser constante. En la grfica se
observa que a medida que aumenta la concentracin de la enzima amilasa la
absorbancia es ms baja, esto debido a que mientras ms enzima tiene la reaccin la
velocidad se acelera y degrada ms rpido el almidn que en este caso es el sustrato,
por lo que se obtuvo el comportamiento esperado tambin es importante resaltar que a
concentraciones muy altas de enzima la velocidad de la reaccin aumenta pero de
forma poco evidente hacindose casi constante. Una reaccin enzimtica alcanza el
equilibrio de una manera mucho mas rpida cuando se halla presente la enzima
adecuada ya que incrementa la velocidad de la reaccin.
3. Efecto de la variacin del pH sobre la actividad de la enzima
La grafica ideal con respecto a la concentracin de pH debera mostrar niveles altos en
la velocidad de reaccin cuando la enzima trabaja con su pH ideal, en la grfica que
muestra el efecto de la variacin de pH se aprecia que el punto donde la velocidad de
reaccin es ms baja es en el pH de 7,2 y es donde debera ser ms eficiente su
actividad ya que se acerca al pH fisiolgico de la amilasa mientras que en el pH de 3 y
11 fue donde se observ la mayor velocidad de la reaccin es decir que son los pH
ptimos donde la enzima tuvo mayor funcionalidad lo que muestra cierta discrepancia
ya que son valores extremos de pH donde la velocidad inicial deberia descender por lo
que podemos inferir que se debe a errores durante la realizacin de la prctica, a
diferencia del pH 5 y 8 donde se observ una actividad enzimtica normal. Cabe
destacar que en los pH de 7,2 y 11 fueron los que tuvieron los valores ms bajos de
absorbancia.

Referencias bibliogrficas

David Nelson (2009). Leningher Principios de Bioquimica. 5 ta edicin Espaa: Omega.

Murray, Robert K (2010). Harper Bioquimica Ilustrada. 28 a edicin. Mxico: McGraw-Hill.