Mtodos Analticos Sensibles

1) Introduccin
El anlisis de sensibilidad busca investigar los efectos producidos por los
cambios del entorno sobre el sistema.
Los mtodos instrumentales se basan en la medida de alguna propiedad
fsica-qumica. Su uso ha aumentado con el desarrollo de la electrnica,
por la facilidad de detectar cambios en las propiedades fsico-qumicas y
transformarlos a un lenguaje entendible por el ser humano. Un
instrumento analtico es el soporte en el cual se desarrolla esa
transformacin.
Dentro de los mtodos analticos sensibles ms importantes destacan:
Mtodos espectroscpicos: La espectroscopia es una ciencia que trata la
interaccin de la radiacin electromagntica u otras partculas, con la
materia.
-

Espectroscopa de emisin atmica.

Espectroscopa de absorcin atmica.

Mtodos Cromatogrficos: La cromatografa en si es un mtodo de

separacin de sustancias en mezclas complejas. Se utiliza generalmente
para separacin pero a los instrumentos se les acopla algn componente
para la posterior determinacin por algn mtodo analtico instrumental.
Dentro de la cromatografa destaca:
-

Cromatografa de gases.
Cromatografa de lquidos.

2) Clasificacin de los Mtodos Analticos sensibles:

- Cualitativos: Los que de la medida de una propiedad se puede
indicar la presencia de un analito en una matriz.
- Cuantitativos: La magnitud de la propiedad medida es proporcional
a la concentracin del analito en la matriz.
3) Esquema general Tcnica Instrumental

Muest
ra

Fuente de

Respuest
a

DATO
S

4) Mtodos Espectroscpicos:
4.1. Espectroscopia: medicin e interpretacin de fenmenos de
absorcin, dispersin o emisin de radiacin electromagntica que
ocurre en tomos, molculas u otras especies qumicas. La absorcin
o emisin estn asociadas a los cambios de estado energticos de las
partculas actuantes.
Significa la observacin y el estudio del espectro, o registro que se tiene
de una especie tal como una molcula, un in o un tomo, cuando estas
especies son excitadas por alguna fuente de energa que sea apropiada
para el caso.
Las aplicaciones de la espectroscopia en el anlisis cualitativo fueron
casi inmediatas, su utilidad en el aspecto cuantitativo tuvo que esperar
muchos aos, ya que el desarrollo cientfico y tecnolgico de ese
momento era insuficiente.
4.2. Espectroscopia de emisin: Los mtodos de emisin se basan
en la medida de la radiacin emitida por los tomos de una muestra,
previamente excitados, la energa utilizada en el proceso de
excitacin puede proceder de diferentes fuentes, dando lugar a
distintas tcnicas.

Fuente de energa

Tcnica
2

LLama
Radiacin electromagntica
Elctrica
Plasma
Rayos x

Fotometra de llama
Fluorescencia atmica
Espectrometra de emisin
ICP
Fluorescencia de rayos x

4.3. Fotometra de Llama de Emisin: Es la fuente menos

energtica de las indicadas.

En la espectrofotometra de emisin de llama, la muestra en solucin es

nebulizada e introducida dentro de la llama, en donde es vaporizada y
atomizada, todo esto en rpida sucesin. Subsecuentemente, los tomos
y las molculas se elevan a estados excitados por colisiones trmicas
con los constituyentes de los componentes de la llama parcialmente
quemados.
La llama se emplea para:
-

Transformacin de la muestra.
Descomposicin del compuesto molecular.
Excitacin de las partculas.

Sistema de quemadores:
-

Nebulizador: Aspira la muestra y la transforma en un fino aerosol.

Quemador: Evapora el disolvente y la muestra se convierte en un
gas.

Sistema ptico:
Su funcin es colectar la luz de la parte ms estable de la llama, volverla
monocromtica y luego enfocarla en la superficie de un detector
fotosensible.
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Consiste en:
-

Un filtro.
Un lente sencillo.

Detector fotosensible:
Es el sistema que transforma la energa luminosa que recibe en forma de
fotones de energa elctrica.
La seal electrnica resultante es mostrada directamente en la aguja de
un galvanmetro sensible o un dispositivo digital.

Aplicaciones:
La fotometra de llama de emisin se utiliza fundamentalmente en la
determinacin de:
-

Electrolitos.
Fluidos biolgicos (k y Na).

4.4. Fotometra de llama de absorcin atmica:

Partes:
Lmpara de ctodo hueco:
-

Posee un ctodo del metal que ser analizado.

Ventana de cuarzo o vidrio.
Contiene argn o nen.
Se debe utilizar una lmpara distinta para le medida de cada
elemento.

Llama:
-

Reemplaza al porta muestras y su funcin es transformar las

soluciones a analizar en tomos en estado gaseoso.

Sistema de quemadores:
-

Posee el mismo descrito para el fotmetro de emisin.

Sistema ptico:
-

Monocromador: se emplea para rechazar la radiacin originada por

la llama.
Detector fotomultiplicador.

Aplicaciones:
5

Se utiliza ampliamente para la determinacin de metales en

diferentes sustancias.
Es capaz de analizar ms de 65 elementos distintos.

4.5. Fluorescencia atmica:

Tambin se utiliza la llama, pero nicamente como medio de
atomizacin, ya que la excitacin de los tomos previamente
vaporizados se lleva a cabo mediante una radiacin electromagntica.
En esta tcnica se mide la absorbancia de resonancia que se produce
despus del proceso de absorcin.
Llama.
Vapor fro: Origina un aumento en la sensibilidad y reduce las
interferencias para la deteccin en ppt de mercurio, arsnico, cadmio,
zinc, bismuto, selenio, teluro, antimonio, estao, plomo (Hg, As, Sb y Se
a niveles de ppt).
Aplicaciones:
-

Utilizada para el anlisis de trazas de metales en agua de mar,

sustancias biolgicas y muestras agrcolas.
Su mayor sensibilidad es al zinc, mercurio y selenio.
Permite estimar el triptfano.

4.6. Espectrometra de emisin:

Analiza las longitudes de onda de los fotones emitidos por los tomos o
molculas durante su transicin desde un estado excitado a un estado
de inferior energa.
Espectro de emisin: La radiacin emitida por una fuente excitada se
caracteriza adecuadamente por medio de un espectro de emisin.
Este espectro toma la forma de una representacin grfica de la
potencia relativa de la radiacin emitida en funcin de la longitud de
onda o de la frecuencia.
4.7. Plasma de Acoplamiento Inductivo (ICP)
Mezcla gaseosa conductora de la electricidad que contiene una
concentracin significativa de cationes y electrones, con carga neta
cero. Se usa Argn, las especies conductoras son los iones argn,
electrones y en menor concentracin, cationes de la muestra.
6

Los iones resultantes y sus electrones asociados interaccionan con el

campo magntico oscilante que se produce en la bobina, movindose en
trayectorias circulares.
Se alcanzan altas temperaturas, hacindose necesario el aislamiento
trmico del cilindro exterior inyectando Ar alrededor de las paredes del
tubo.
Se utilizan nebulizadores, la muestra se vaporiza en un horno similar al
de la atomizacin electrotrmica aunque, slo para la introduccin de la
muestra.

4.8. Fluorescencia de Rayos X:

Se produce al excitar una muestra con rayos X. La radiacin incidente
expulsa electrones de capas interiores del tomo dando lugar a que los
de capas ms externas ocupan su lugar. El exceso energtico resultante
de esta transicin se disipa en forma de fotones (radiacin X) cuya
energa es caracterstica para cada elemento qumico y cuya intensidad
depende de su concentracin.

4.9. Radiacin electromagntica: consiste en cargas elctricas en

movimiento que producen campos elctricos y magnticos.

Caractersticas de la onda electromagntica:

-

Amplitud: Desplazamiento mximo de un punto respecto de la

posicin de equilibrio.
Longitud de onda: Distancia entre dos puntos.
Frecuencia: Nmero de vibraciones por unidad de tiempo.
Periodo: Tiempo invertido en efectuar una vibracin completa.
Velocidad: Velocidad con la que se propaga la onda.

Espectro Electromagntico:
Si las ondas electromagnticas se organizan en un continuo de acuerdo
a sus longitudes en donde las ondas ms largas se encuentran en un
extremo.
4.10. Espectrofotometra UV Visible:

La medida de absorbancia se lleva a cabo con la ayuda de un

espectrofotmetro, que en esencia consta de un Monocromador que
controla la longitud de onda de la radiacin que se hace incidir sobre la
muestra. La radiacin no absorbida se detecta y mide
9

convenientemente. La absorbancia de la muestra se compara con la de

una referencia que consta estrictamente de disolvente.
Instrucciones:
-

Encendido de la lmpara de tungsteno (zona del visible, 900 a 340

nm), encendido instantneo.
Lmpara de deuterio (zona del UV, 340 a 200 nm), necesita un
calentamiento previo.
Adaptacin del espejo a la lmpara adecuada, atendiendo al rango
de longitud de onda de trabajo.
Seleccionar el valor de onda.
Ajuste del cero de transmitancias con ayuda del mando.
Ajuste del 100% de transmitancia con la referencia que
normalmente es el disolvente de la muestra.
Leer el valor de absorbancia.

4.11. Espectrofotmetro de Infrarrojo:

El espectrofotmetro infrarrojo va equipado con una fuente de emisin

de radiacin infrarroja, que normalmente es una barra de un material
cermico. La radiacin emitida por esta fuente se divide en dos haces al
atravesar una serie de espejos.

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De los dos haces uno de ellos pasa por una celda que contiene una
disolucin del compuesto orgnico (haz de la muestra) que se desean
estudiar, mientras que el otro haz atraviesa una celda que slo contiene
el disolvente empleado (haz de referencia). Los dos haces se dirigen
luego hacia un dispositivo que permite el pase alternativamente de un
haz y luego del otro (interruptor rotatorio).
El haz se dirige a la rejilla de difraccin donde se separa en las
longitudes de onda que lo componen (espectro de IR). Estas
radiaciones, separadas por su valor de longitud de onda, pasan a travs
de una ranura y llegan al detector. El detector es una bobina de
alambre cuya resistencia aumenta debido al calentamiento que produce
la radiacin incidente. As pues, la resistencia del detector depende de
la intensidad de la radiacin.
4.12. Espectroscopa de Absorcin atmica:
La absorcin atmica es una tcnica comn para detectar metales y
metaloides en muestras ambientales, aguas, suelos y aire, as como
muestras minerales, alimentos, productos qumicos aplicaciones y
fundiciones.
-

Todos los tomos pueden absorber luz.

La longitud de onda a la cual la luz es absorbida es especfica para
cada elemento en particular.
La cantidad de luz absorbida es proporcional a la concentracin de
tomos absorbentes.

Es la parte de la espectroscopia que se encarga de llevar a cabo

mediciones cuantitativas, midiendo la fraccin de luz de una
determinada longitud de onda que atraviesa por la muestra.
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Para llevar a cabo el anlisis por absorcin, se efectan 2 mediciones de la

cantidad de luz absorbida:
-

Se mide la cantidad de luz (a una longitud de onda elegida), que cae al

detector al introducir un blanco al aparato, es decir se mide la potencia
de la energa cuando la concentracin de la muestra es igual a cero.
Se mide la cantidad de la luz cuando se colocan muestras de calibracin
y se compraran con la medicin del blanco.

Las muestras lquidas generalmente presentan pocos problemas de pre

tratamiento; entonces todas las muestras slidas son primero disueltas.
Las muestras gaseosas son casi siempre pretratadas extrayendo el anlito por
burbujeo del gas en una solucin y analizando entonces esa solucin, o
absorbiendo los analitos en una superficie slida.

5) Diferencias entre Espectroscopa de Emisin y Espectroscopa de

Absorcin:

Espectroscopia de emisin
Aplicacin principal: Anlisis
cualitativo y cuantitativo de
muchos elementos.
Ventaja de anlisis cualitativo:
Anlisis simultneo de metales
pesados.
Muestra promedio: 0,25-2 gramos.
Limitaciones para la muestra: La
mayora de muestras orgnicas
lquidas y slidas requieren de
digestin antes del anlisis.

Espectroscopa de absorcin
Aplicacin principal: Anlisis
cuantitativo de precisin para un
metal dado.
Ventaja de anlisis cualitativo: No
es aplicable.
Muestra promedio: 100
miligramos.
Limitaciones de la muestra: La
mayora de muestras orgnicas
lquidas y slidas requieren de
digestin antes del anlisis.

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6) Ventajas de los mtodos analticos basados en la

espectroscopa atmica:
- Rapidez.
- Amplio rango de aplicacin.
- Excelente sensibilidad.
- Son especficos.
7) Mtodos Cromatogrficos:
7.1. Cromatografa: Escribir en colores. Es un mtodo usado
primariamente para la separacin de los componentes de una
muestra, en la cual los componentes se distribuyen en 2 fases.
Elementos que participan en una cromatografa
-

Fase estacionaria.
Fase mvil:

Si es un gas: Modalidad cromatogrfica gaseosa.

Si es un lquido: Cromatografa lquida.
-

Muestra.

En general, una cromatografa se realiza permitiendo que la mezcla de

molculas que se desea separar (muestra) interaccione con un medio o
matriz de soporte que se denomina fase estacionaria.

7.2. Cromatografa de lquidos:

HPLC (High performance liquid chromatography) Cromatografa lquida
de alta resolucin.
Las muestras no necesitan ser vaporizadas para su anlisis. Cualquier
sustancia puede ser potencialmente analizada por esta tcnica.
Utiliza una fase mvil lquida para separar los componentes de la
mezcla, los componentes o analitos deben ser disueltos en un solvente y
se pasan por la columna cromatogrfica a altas presiones. La resolucin
depende de la interaccin entre el soluto, los componentes y la fase
estacionaria.

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Una muestra en estado lquido es arrastrada por una corriente lquida

llamada eluyente. Como fase estacionaria acta un slido finamente
dividido (dimetro de partcula 3,5, 10 micras), dependiendo de la
retencin de los componentes de la muestra por la fase estacionaria y
de su solubilidad en el eluyente se provocar su migracin diferencial.

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El HPLC representa una de las herramientas ms empleadas en el

laboratorio analtico moderno.
Es una tcnica de anlisis que se basa en la absorcin de radiacin por
parte de las molculas. Aunque existen muchos tipos de espectroscopia,
las ms utilizadas en qumica orgnica se agrupan en 4 categoras.
7.3. Cromatografa de gases:
Es una tcnica cromatogrfica en la que la muestra se volatiliza y se
inyecta en una columna cromatogrfica. Se distribuyen en 2 fases, una
que es fija (fase estacionaria) y la otra que se mueve en una direccin
definida (fase mvil).
- Fase estacionaria: se produce la separacin de los componentes
de la mezcla.
- Fase mvil: se mueve a travs de la fase estacionaria arrastrando
la mezcla de componentes a separar.

Descripcin del equipo:

-

Gas portador: Transporta los componentes de la muestra y crea

una matriz adecuada para el detector.

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Regulador de la presin: Para garantizar que la presin sea

estable.
Regulador de flujo: Para garantizar un flujo estable.
Inyector: Est formado por un bloque metlico, buen conductor de
calor, provisto de un sistema de calentamiento, un termostato
capaz de mantener su temperatura constante y un aislamiento
trmico adecuado.
Detectores: Una vez separadas las muestras se hace preciso
disponer a la salida de sta de un sistema de deteccin, capaz de
sealar la elucin de un componente de la muestra y ofrecer al
mismo tiempo, una seal proporcional a la cantidad se sustancia
que pasa a travs de l.
Columna cromatogrfica: La columna es el corazn del
cromatgrafo de gases, est formada por un tubo, dentro del cual
se encuentra la fase estacionaria.

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