UNIVERSIDAD NACIONAL DE LOJA

REA DE LA SALUD HUMANA

CARRERA DE MEDICINA

GUAS DE PRCTICAS DE LABORATORIO

PRCTICA NRO: SIETE
SILABO: MICROBIOLOGIA
CODIGO DE LA ASIGNATURA: D1.C4.A2 / 3201.03
CODIGO DEL LABORATORIO:
RESULTADOS DE APRENDIZAJE DE LA PRCTICA:
Los estudiantes:
Explican el fundamento de la tcnica de aglutinacin de ASO, procedimiento e
interpretacin de los resultados
Describen el fundamento de la tcnica de aglutinacin de PCR, procedimiento e
interpretacin de los resultados
fundamentan la tcnica de aglutinacin de FR, procedimiento e interpretacin
de los resultados
TIEMPO PLANIFICADO EN EL SLABO: 2 horas por subgrupo
TIEMPO DE PRCTICA POR GRUPO DE ESTUDIANTES: 2HORAS/
SEMANA
NMERO DE ESTUDIANTES POR GRUPO: 12 ESTUDIANTES
TEMA:

PRUEBAS DE AGLUTINACIN (ASO, PCR Y FR)

OBJETIVOS:
Conocer el fundamento de la tcnica de aglutinacin de ASO, procedimiento e
interpretacin de los resultados
Conocer el fundamento de la tcnica de aglutinacin de PCR, procedimiento e
interpretacin de los resultados
Conocer el fundamento de la tcnica de aglutinacin de FR, procedimiento e
interpretacin de los resultados

FUNDAMENTO TEORICO DE LA PRCTICA A EJECUTAR:

El ASO ltex es una tcnica de aglutinacin en placa para la deteccin cualitativa y
semicuantitativa de antiestreptolisina O en suero humano. Las partculas de ltex
recubiertas con estreptolisina O, son aglutinadas por anticuerpos ASO presentes en la
muestra del paciente
La estreptolisina O es una exoenzima inmunognica txica producida por estreptococos
beta-hemolticos del grupo A, C, y G. La cuantificacin de los anticuerpos ASO se
utilizada para el diagnstico y tratamiento de enfermedades como la fiebre reumtica,
glomerulonefritis aguda y otras infecciones estreptoccicas
La PCR ltex es una tcnica de aglutinacin en placa para la deteccin cualitativa y
semicuantitativa de PCR en suero humano. La partcula de ltex recubiertas con
anticuerpos anti-PCR humana son aglutinadas por molculas de PCR presentes en la
muestra del paciente
La PCR es una protena de fase aguda, presente en el suero de pacientes sanos, la cual
puede incrementarse significativamente en la mayora de procesos infecciosos
bacterianos, virales, tejidos daados, inflamacin y neoplasias malignas. El incremento
de concentracin de esta protena se produce despus de unas horas de desarrollarse la
inflamacin, pudiendo alcanzar niveles de 300 mg x L en 12 a 24 horas.
El FR ltex es una tcnica de aglutinacin en placa para la deteccin cualitativa y
semicuantitativa de factores reumatoides en suero humano. Las partculas de ltex
recubiertas con gamma globulina humana son aglutinadas por factores reumatoides
presentes en la muestra del paciente.
Los Factores Reumatoides son un grupo de anticuerpos dirigidos contra la fraccin Fc
de las inmunoglobulinas G. Aunque se hallan presentes en un gran nmero de
desrdenes reumticos tales como lupus eritematoso sistmico (LES) y el sndrome de
Sjogren, su principal inters clnico est en el diagnstico de la artritis reumatoide (son
positivos en el 80,4%).
TECNICAS Y PROCEDIMIENTOS PARA EJECUTAR LA PRCTICA:
Se utilizar suero de pacientes y controles positivos y negativos,
Los antgenos de ASO, PCR y FR
Tubos de vidrio
Placas de dilucin
Pipetas, puntas, palillos, etc.
Se realizar la tcnica de aglutinacin de SPINREACT

ASO
1. Depositar 50L de la muestra a ensayar

2. Depositar una gota de cada uno de los controles Positivo y Negativo, sobre
crculos distintos en la tarjeta.

3. Mezclar bien el reactivo ASO-Ltex antes de usar. Depositar una gota junto a
cada una de las gotas anteriores.

4. Mezclar las gotas con un palillo, procurando extender la mezcla por toda la
superficie interior del crculo. Emplear distintos palillos para cada muestra.

5. Observar macroscpicamente la presencia o ausencia inmediata de aglutinacin

despus de la agitacin. La presencia de aglutinacin, indica una concentracin
de ASO igual o superior a 200 UI/mL.

PCR
1. Prepara varios tubos de ensayo con 5 ml del lquido de dilucin. Estos
recipientes actuarn como tus diluciones de valores en blanco.
2. Prepara un tubo de ensayo que contenga al menos 5 ml de tu solucin sin diluir
3. Realiza la primera dilucin. Extrae 1 ml de la solucin sin diluir del tubo de
ensayoSSD con una pipeta y transfirelo al tubo de ensayo etiquetado 1:10
4. Extiende este procedimiento para realizar mayores diluciones en serie. Este
proceso puede repetirse tantas veces sea necesario para obtener la solucin
deseada

5. Colocar en cada circula una muestra diluida de cada tubo de ensayo

6. Colocar ASO-Ltex antes de usar. Depositar una gota junto a cada una de las
gotas anteriores
7. Mezclar las gotas con un palillo, procurando extender la mezcla por toda la
superficie interior del crculo. Emplear distintos palillos para cada muestra

8. Observar macroscpicamente la presencia o ausencia inmediata de aglutinacin

despus de la agitacin.

RECURSOS DIDACTICOS:
Se realizar la tcnica cualitativa y semicuantitativa de las tcnicas de ASO, PCR y FR,
en forma demostrativa y se explicar los resultados obtenidos, el significado clnico y
los valores referenciales. En el desarrollo de la prctica tendrn oportunidad de
participar activamente los estudiantes.
RESULTADOS DE APRENDIZAJE:
Los estudiantes:

Explican el fundamento, tcnica e interpretacin de los resultados de la

Antiestreptolisina O (ASO)
Describen el fundamento, tcnica e interpretacin de los resultados de la Protena
C Reactiva (PCR)
Fundamentan la tcnica e interpretan de los resultados del Factor Reumatoideo (FR)

RESULTADOS

En la practica pudimos ver la aglutinacin en el test y control positivo y sin

aglutinacin en el control negativo, luego tambin se pudo observar una
aglutinacin en 1:2 y sin aglutinacin en 1:4, 1:8, 1:16, 1:32; 1:64

Cabe recalcar que debe haber una concentracin aproximada:

o PCR = 6 X 2 = 12 mg/ L.

CONCLUSIONES:
Las pruebas Aso, Pcr y Fr, son pruebas rutinarias que nos servirn para determinar
antgenos especficos en distintas enfermedades.

Una concentracin muy elevada de PCR en la muestra del paciente puede dar lugar
a un resultado falso negativo.

La intensidad de la aglutinacin no es indicativa de la concentracin de PCR en las

muestras ensayadas.

La protena C- reactiva es una protena de fase aguda, presente en el suero de

pacientes sanos

RECOMENDACIONES:

Utilizar siempre elementos manuales o automticos para cada prctica.

Todo el material utilizado debe estar estril.

El puesto de trabajo debe estar limpio y ordenado.

Realizar apuntes de todas las caractersticas de la muestra observada

Permanecer en silencio durante la practica

PREGUNTAS DE CONTROL:
Refuerzos de los aprendizajes
Significado clnico:
La protena C- reactiva es una protena de fase aguda, presente en el suero de pacientes
sanos, la cual puede incrementarse significativamente en la mayora de procesos
infecciosos bacterianos y virales, tejidos daados, inflamacin y neoplasias malignas. El
incremento de concentracin de esta protena se produce despus de unas horas de
desarrollarse la inflamacin pudiendo alcanzar niveles de 300 mg/ L en 12-24 horas.
Reactivos:
1. Ltex: Suspensin de partculas de ltex cubierta de inmunoglobulinas G de
cabra anti- PCR humana.
2. Control + ( tapn rojo): Suero humano con una concentracin de PCR mayor de
20 mg/ L.
3. Control (tapn azul): Suero animal.
Precauciones:
Todos los componentes de origen humano han resultado ser negativos para el antgeno
HBs, HCV y para el anti- VIH (1/2). Sin embargo, deben tratarse con precaucin como
potencialmente infecciosos.
Conservacin y estabilidad:
Todos los componentes del kit estn listos para el uso, y son estables hasta la fecha de
caducidad indicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen los viales bien cerrados
a 2-8 C, y se evita la contaminacin durante su uso. No congelar: la congelacin de los

reactivos altera irreversiblemente la funcionalidad de estos. Indicadores de deterioro de

los reactivos: presencia de partculas y turbidez.
Muestras:
Suero fresco. Estable 7 das a 2-8 C o 3 meses a -20 C.
Las muestras con restos de fibrina deben ser centrifugadas antes de la prueba.
No utilizar muestras altamente hemolizadas o lipemicas.
Lectura e interpretacin:
Examinar macroscopicamente la presencia o ausencia de aglutinacin inmediatamente
despus de retirar el porta del agitador. La presencia de aglutinacin indica una
concentracin de PCR igual o superior a 6 mg/ L. En el mtodo semicuantitativo, se
define el titulo como la dilucion mayor que da resultado positivo.
Calculos:
La concentracin aproximada de PCR en la muestra del paciente se obtiene aplicando la
siguiente formula:
6 x titulo de PCR = mg/ L
Control de calidad:
Se recomienda utilizar el control positivo y negativo para controlar la funcionalidad del
reactivo de ltex, as como modelo de comparacin para la interpretacin de los
resultados.

BIBLIOGRAFA (actualizada 10 aos atrs)

1. Tcnica de SIPNREACT
2. VULLO, D. ; WACHSMAN, M. Y ALCHE, L. : Microbiologa Mdica:
Manual de tcnicas de Laboratorio para la enseanza de microbiologa
bsica aplicada, Ed. Atlante S. R. l. , Buenos Aires, pg. 261, 2000
3. ORGANIZACIN PANAMERICANA DE LA SALUD OPS: Manual
de Tcnicas Bsicas para un Laboratorio de Salud, publicacin cientfica
No.439, Washington, pg. 487, 1983.
4. FORBES, B. ; Sahm, D. : Diagnstico Microbiolgico, ed.

11, Ed.

Panamericana, Buenos Aire, pg. 1115.

5. Edward J Young. Clinical Infectious Diseases 1995; 21: 283-290.
6.

Coulter JBS. Current Pediatrics 1996; 6: 25-29..

7.

David A et al. Currebt Opinion in Infectious Diseases 1994; 7: 616-623.

1. David R et al Current Opinion in Infectious Diseases 1993; 6: 54-62.

2. Bradley D Jones. Annu Rev Immunol 1996; 14: 533 61.
Fecha

de ____________a_________________________________

Hora de_____________________a_________________________________

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ESTUDIANTE C.I.

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DOCENTE