Sunteți pe pagina 1din 4

4

REFERATE

EVALUAREA RISCULUI MICROBIOLOGIC.


MSURI DE PROTECIE N LABORATOR.
Dr. Maria Nica*, Dr. Iuliana Apostol **
Clinic Boli Infecioase i Tropicale Dr. Victor Babe
**Centrul de Diagnostic i Tratament Dr. Victor Babe Bucureti
*Spitalul

REZUMAT
Laboratorul de microbiologie este considerat prima linie de detectare a evenimentelor neobinuite, de natura infecioas. Circulaia
datelor ctre autoritile naionala i internaionale este realizat prin utilizarea strategiilor de supraveghere pasiv i activ. OMS
a clasificat microorganismele n 4 grupe de risc infecios. De asemenea, OMS a clasificat laboratoarele de microbiologie n 4
niveluri, n funcie de gradul de protecie necesar pentru personal, mediul nconjurtor i comunitate: nivele I i II laboratoare de
baz, nivel III nivel restrictiv, nivel IV laborator de maxim restricie. Limitarea bioriscului const n asigurarea barierelor
antiinfecioase, primare i secundare. Regulile de siguran microbiologic i antiepidemic impun ca laboratoarele de microbiologie
s funcioneze n circuit cu sens unic. Echipamentul individual de protecie este obligatoriu pentru personal, iar activitatea trebuie
s se desfoare n boxe de siguran antiepidemic. Dotarea tehnic obligatorie a laboratoarelor de microbiologie include
aparatura de sterilizare, iar controlul eficienei sterilizarii trebuie efectuat periodic prin teste chimice i biologice.
Cuvinte cheie: bioterorism, biorisc, grupe de risc, biosiguran, biosecuritate

ABSTRACT
The microbiology laboratory is considered to be the first line for detection of unusual biological events. The national and international
authorities receive the informational flux through the use of passive or active surveillance strategies. WHO has classified
microorganisms in 4 infectious risk groups. WHO has also classified microbiology laboratories n 4 levels, based on protection
level necessary for personnel, environment and community: BSL I/II-basic laboratories; BSL III- restrictive level and BSL IV-maxim
restrictive level. Biorisk reduction consists in primary and secondary antiinfectious barriers. Biorisk hazard necessitates one way
circuit inside the microbiology laboratories. Specific biosafety rules are wearing special equipment by the laboratory personnel and
running specific activities inside biosafety cabinets. Each microbiology laboratory is mandatory to be equipped with sterilising
devises and the control of sterilizing efficiency must be done periodically through chemical and biological tests.
Key words: bioterrorism, biological risk, risk groups, biological safety, biosecurity

Noile ameninri microbiologice, ca de


exemplu sindromul respirator acut sever i actualele forme de grip uman ct i posibilitatea
bioterorismului evideniaz nevoia implementrii
unor programe de supraveghere a bolilor infecioase. Crearea de reele de supraveghere pentru
combaterea bioterorismului ncepe cu includerea
laboratoarelor de microbiologie, care constituie
verigi sau noduri cheie ale reelei. Laboratoarele
de microbiologie faciliteaz stabilirea unui diagnostic etiologic de suspiciune sau certitudine,
putnd fi prima linie de detectare a evenimentelor
neobinuite de natura infecioas. Datorit rolului
pivotal n identificarea ameninrilor de natura
infecioas, aceste laboratoare ar trebui s participe
la elaborarea strategiilor de raportare, de transmitere

rapid a informaiilor i de implementare a unor


msuri de intervenie (3).
Tradiional, circulaia datelor catre autoritatile
naionale i internaionale este realizat prin utilizarea strategiilor de supraveghere pasiv. Programele de supraveghere activ, utiliznd tehnici i
metodologii noi, sunt superioare n detectarea timpurie a caracteristicilor neobinuite ale patogenilor
microbieni i apariiei focarelor epidemice. Implementarea unor strategii de rspuns la situaii neobinuite trebuie planificat i realizat n cooperare
cu laboratoarele de microbiologie, iar protocoalele
de intervenie trebuie definite prin participarea
microbiologilor clinici.
Microorganismelor prezinta un risc infecios,
clasificat de OMS-Organizaia Mondial a Sntii
n 4 grupe de risc individual i colectiv.

REVISTA ROMN DE B OLI INFECIOASE VOL. X, NR. 1, AN 2007

17

18

REVISTA ROMN DE B OLI INFECIOASE VOL. X, NR. 1, AN 2007

Tabelul 1.
Clasificarea agenilor infecioi n raport cu riscul infeciei de laborator (11,12,13 )

Lucrul cu ageni microbiologici cu un nalt risc


patogen impune reguli stricte de control al bioriscului
n cadrul laboratoarelor de microbiologie. Procedurile de biosiguran descriu caile de manuire i
lucrul corespunztor cu patogenii n cadrul laboratorului de microbiologie, n vederea minimizrii
riscului de expunere i de infecii secundare. Procedurile de biosecuritate descriu responsabilitile
i metode de cuantificare a materialelor biologice
utilizate n cadrul laboratorului de microbiologie, n
vederea protejrii lor de pierdere, furt sau folosire
rea-voit, intenional.
Laboratoarele de microbiologie sunt clasificate
de OMS n 4 niveluri diferite, n funcie de gradul
de protecie necesar pentru personal, mediu
nconjurtor i comunitate. n funcie de exigena
siguranei antiinfecioase exist 4 niveluri diferite:
nivelurile I i II corespund laboratoarelor de baz,
nivelul III laboratoarelor cu regim restrictiv, iar

nivelul IV laboratoarelor cu regim de maxim


restricie. Majoritatea agenilor biologici umani necesit precauii din categoria II. Dac pentru
identificare se folosesc operaii, ca de exemplu:
sonicarea, mojararea, centrifugarea, agitarea energic, operaii prin care se formeaz aerosoli cu
potenial infecios, sunt necesare msuri de protecie
de nivel II-III. Msurile de siguran din categoria
IV sunt necesare dac se lucreaz cu ageni nalt
infecioi, posibil letali, cu cale de infectare aerian
i pentru care nu sunt disponibile mijloace corespunztoare de tratament sau vaccine (1).
Un laborator este autorizat s manipuleze
microorganisme cu un anumit grad de risc, numai
n msura n care personalul este pregtit profesional i poate fi monitorizat periodic starea de
sntate a acestuia, exist dotrile necesare i se
pot aplica metodele de siguran pentru prevenirea
rspndirii agenilor infecioi.

Tabelul 2.
Clasificarea laboratoarelor n funcie de exigena siguranei antiinfecioase (8,13)

REVISTA ROMN DE B OLI INFECIOASE VOL. X, NR. 1, AN 2007

n laboratoarele de microbiologie sunt obligatorii msuri de prevenie privind limitarea rspndirii germenilor patogeni n laborator, prevenie
pentru personal i pentru rspndirea germenilor
patogeni n mediu i care reprezint bariere antiinfecioase (8,11,12,13). Barierele antiinfecioase
se refer la practicile i tehnicile de microbiologie
utilizate n manipularea probelor biologice, sigurana echipamentului (bariere primare) i facilitile
laboratorului (bariere secundare).
A. Practicile i tehnicile de microbiologie utilizate
n cadrul laboratoarelor de microbiologie clinic
este necesar respectarea practicilor standard referitoare la probele biologice, mediile de cultur i
reactivi, recipientele i reziduurile infecioase i la
personalul de laborator. Regulile de siguran microbiologic i antiepidemic impun ca laboratorul de
microbiologie clinic s funcioneze cu circuit n
sens unic (separarea n timp i spaiu a circulaiei
probelor biologice, pentru evitarea contaminrilor
ncruciate) i s existe acces limitat sau controlat
n cadrul laboratorului.
Transportul probelor biologice potenial patologice ctre compartimentele de diagnostic, se
realizeaz n cutii din material lavabil, cu capac i
etichetate (10). Metodele de diagnostic de laborator mbin tehnicile clasice (cultivarea, imunodiagnosticul-ELISA) cu tehnicile moderne i
rapide (de exemplu: tehnici moleculare, amplificare genic PCR). Prin reacii de amplificare
genic, folosind primeri universali, este posibil
identificarea agentului etiologic bacterian, fungic
sau viral, n cteva ore (5,6,7). n incinta laboratorului trebuie respectate urmtoarele: etichetarea
recoltoarelor cu nsemnul riscului biologic pentru
produsele provenite de la pacieni infectai HIV,
cu virusul hepatitei B, C sau alte microorganisme
din categoriile II i III; interzicerea pipetrii cu gura
(se folosesc dispozitive de pipetare); folosirea
anselor i pipetelor de unic utilizare n locul celor
din sticl sau reutilizabile; folosirea tuburilor i a
recipientelor din sticl termorezistent, cu dopuri
sau capioane din metal, nurubabile; nlocuirea
sticlriei cu fisuri; descrcarea ansei cu cultura de
Mycobacterii (aderen la bucl) n flacon cu nisip
i alcool 96%, nainte de flambarea ei (evitarea
formrii de aerosoli).
Materialul infecios rezultat din procesul de
prelucrare bacteriologic precum i din etapele de
diagnostic, este recuperat n saci autoclavabili,
separnd sticlria de materialul plastic, apoi n
glei de inox cu capac, etichetate corespunztor.

19

Deeurile rezultate se autoclaveaz i se transport


n cutii galbene de carton, etichetate, ctre un
incinerator autorizat. Materialele contaminate
neptoare tietoare (ace de sering, lame de
bisturiu) se ncarc n recipiente de plastic galbene
cu capac, etichetate corespunztor i se incinereaz.
Dezinfecia este distrugerea formelor vegetative
ale microorganismelor, nu i a sporilor. Substanele
dezinfectante sunt ageni chimici cu efect antibacterian nespecific. Substanele dezinfectante se
aplic numai pe suprafee inerte datorit efectelor
iritante sau toxice, iar substanele antiseptice,
avnd toxicitatea mai redus pot fi aplicate pe tegument, mucoase sau plgi. Cele mai sensibile la
aciunea substanelor dezinfectante sunt organismele n forma vegetativ: bacterii, fungi, protozoare i virusurile cu nveli lipidic. Relativ
rezistente la substantele dezinfectante sunt
Mycobacteriile i virusurile nude, iar endosporii
bacterieni i muli dintre fungi sunt foarte rezisteni
(2,8,9). Substanele dezinfectante folosite n
laboratorul de microbiologie sunt: derivai fenolici,
derivai de clor-hipoclorit, cloramina (Secusept,
Pursept), alcool etilic (70-96%), Big Spray
(etanol, propanol), etc. n laboratoarele de microbiologie sterilizarea se obine prin mai multe
tehnici: caldura uscat (aer cald, flambare, incinerare); caldura umed (autoclavare) radiaii ultraviolete (lmpi germicide); filtrare (filtre HEPA,
Milipore0,22m). Controlul eficienei sterilizrii
se efectueaz prin metode chimice i bacteriologice
(Bacillus stearotermophilus i Bacillus subtilis).
B. Sigurana echipamentului (bariere primare)
Personalul din laborator trebuie s respecte
urmtoarele reguli: purtarea obligatorie a echipamentului individual de protecie n timpul activitii i pstrarea separat a hainelor de exterior;
interzicerea consumului de alimente i buturi i
a fumatului n incinta laboratorului; efectuarea
controlului medical periodic precum i vaccinarea
conform programelor naionale de sntate; cunoaterea riscului potenial reprezentat de microorganismele manipulate, a cilor de patrundere n
organism i a metodelor corecte de limitare a
accesului la porile de intrare. Cele mai importante
msuri de protecie pentru personal sunt: reducerea
formrii de picaturi sau de aerosoli n timpul
prelucrrii probelor biologice i purtarea echipamentului de protecie, ntruct porile de intrare
sunt reprezentate de mucoase (nazal, oral,
ocular, bucal) i pielea lezat. Echipamentul de

20

REVISTA ROMN DE B OLI INFECIOASE VOL. X, NR. 1, AN 2007

protecie adecvat este reprezentat de halate, mti


faciale (3M), ochelari de protecie panoramici,
capioane, mnui, cotiere, papuci de unic
folosin (4,11,12).
n cadrul barierelor primare sunt incluse i
boxele de siguran antiepidemic. Boxele din
clasele I i II se folosesc pentru manipularea microorganismelor din grupul II i III de risc (laboratoare clinice i laboratoare cu regim restrictiv),
iar boxele din clasa III pentru manipularea
microorganismelor din grupul IV de risc.
C. Faciliti (bariere secundare)
Pentru construcia i instalaiile laboratorului
sunt recomandate urmtoarele exigene: perei
interiori netezi, cu suprafaa lavabil, care permit
splarea i dezinfectarea periodic; tavan neted,
fr profile care rein praf; pavimente fr anuri,
fisuri, lavabile, uor de dezinfectat; ui cu deschidere spre culoar; instalaii de gaze naturale,
electric, de ap curent rece i cald, aer condiionat; iluminare corect-lumin natural direct
i tuburi fluorescente, fixate pe tavan; chiuvete din
materiale necorozive cu surse de ap cald i rece,
rezervoare pentru spun lichid i prosoape din
hrtie de unic folosin; uneori staie de splare

automat a ochilor i robinete de ap cu deschidere


automat.
Mobilierul de preferat de tip modular trebuie
confecionat din materiale rezistente, uor de curat
i dezinfectat; mesele de lucru trebuie s fie
prevazute cu blat neted, neinflamabil, impermeabil,
necoroziv; dulapurile sunt fie suspendate la perete,
fie la o distan minim de 15-20 cm de la podea.
Traficul n laborator poate fi restricionat sau controlat
funcie de nivelul de biosiguran al laboratorului.
n echipamentul specific un loc deosebit este
ocupat de pupinele, care asigur sterilizarea uscat
pentru sticlria de laborator i de autoclave, care
asigur sterilizarea cu vapori sub presiune a mediilor lichide i solide ct i a deeurilor infecioase.
Folosirea boxelor de siguran antiepidemic de
clasa I, II sau III este recomandat n funcie de
nivelul de biorisc al laboratorului, iar lucrul pe
masa deschis este permis doar n laboratoarele
de nivel I sau II.
Coordonatorul laboratorului de microbiologie
este rspunztor de implementarea i respectarea
msurilor de protecie antiepidemic specific, a
msurilor generale de protecie a muncii, ct i a
msurilor de prevenire i stingere a incendiilor n
incinta laboratorului clinic.

BIBLIOGRAFIE:
1.
2.
3.

5.

6.
7.

8.

August M., Hindler J.A., Huber T.W., Sewell D.L. Quality


Control and quality assurance practices n clinical microbiology.
American Society for Microbiology, Washington D.C., Cumitech 3A.
Buiuc D., Marian Negut 1999. Tratat de Microbiologie Clinic.
Editura Medical, 1990, pg. 43- 72.
Canton R Rolul Laboratorului de Microbiologie n supravegherea
bolilor infecioase. Alert i rspuns. Spitalul Universitar Ramon y
Cajal. Madrid. Spain. Clinical Microbiology Infectious. 11. (Suppl. 1):
3-8, 2005.
C.D.C. N.I.H Biosafety n microbiological and biomedical
laboratories, U. S. Department of Health and Human services, Center
for diseases control, National Institutes of Health, Washington
D.C.,1984
Dorobat Olga Metode de laborator pentru identificarea agentilor
etiologici ai armelor biologice, cap. E, pag. 118- 136. Ludovic Paun.
Bioterorismul i armele biologice, 2003, Ed. Amaltea.
Henckal EA, Teska JD, Ludwig EA et al. Current laboratory
methods for biological threat agent identification. Clinics n Laboratory
Medicine. 2001, 21, 661.
Henchal EA, Ibrahim MS Evaluation of polymerase chain reaction
assays for identifying biological agents. n Stopa PI, Bartoszeze MA.

9.
10.

11.

12.

13.

14.

Rapid Methods for Analysis of Biological Materials n the Environment.


Amsterdam. Olanda. 2000, pag. 239.
Laboratory Biosafety Manual WHO, Third edition. pg 7-65.
Martin B.G., Moore B., McLendon W.W Organization and
management of the clinical laboratory. n J. B. Henry, G.A. Threatte
(editors). Administration of the Clinical laboratory. W.B. Lannders
Company, Philadelphia, 1991, pp. 1307-1320.
Miller J.M., Holmes H.T Specimen collection, transport and
storage. n P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pealler, F.C. Tenover. R.H.
Yolken (editors). Manual of Clinical Microbiology, 6-th edition.
American society for Microbiology, Washington D.C., 1995, pg 19- 32.
Richmond JY, McKinney RW (ed) Biosafety n Microbiological
and Biomedical Laboratories, ed. 4. Washington DC, US Government
Printing Office, 1999.
Richmond J.Y., Shanna L. Nesby ODell. Biosafety n
Microbiological and Biomedical Laboratories (BMBL) 4th Edition. U.S.
Department of Health and Human Services Centers for Disease
Control and Prevention and National Institutes of Health. Fourth
Edition, may 1999.
W.H.O. Laborator biosafety manuel. World Health organization.
Geneva, 1983.