PARTEA

D : METODE DE LUCRU N LABORATOR

91

Capitolul 21: Imuno - hematologie

Observaii generale
n domeniul imunohematologiei legat de transfuzie, controlul de calitate are drept
scop asigurarea securitii, prin meninerea unei caliti constante i reducnd
la minimum numrul erorilor: trebuie pus accentul , n mod special, pe formarea
personaluluui i
evaluarea
capacitilor sale, pe
ntreinerea i
calibrarea
echipamentului.
Trebuie
pus accemtul de asemenea, pe
controlul
condiiilor de
stocare ale
produselor testului i reactivelor, pe obinerea de informaii legate de aspectele
susmenionate, ca i repetarea testelor pe un esantion n cazul reaciilor pozitive
conformate, pentru a reconfirma
identitatea donrii pozitive iniial. Erorile se pot
mpri n dou mari categorii:
a. erori de organizare, datorate unei identificri inexacte a esanioanelor sau
erori n transcrierea sau clasarea rezultatelor;
b. erori tehnice, datorate proastei caliti a echipamentelor sau a reactivelor
sau a unor teste incorect efectuate.
Controlul de calitate
destinat
evitrii erorilor de
organizare n
verificarea
periodic a etapelor diversilor operaiuni. Un control mai riguros poate fi aplicat
operaiilor tehnice. Recomandrile n
acest sens sunt
formulate n prezenttul
capitol.
n imunohematologia donatorilor sau
primitorilor, controlul de calitate se face, n
general, prin compararea grupajului ABO i Rh cu datele anterioare . Aceasta permite
punerea n eviden a erorilor aparinnd celor dou categorii susmenionate. Erorile
trebuie clasificate pentru a culege informaii mai detailate asupra originii lor.
Tehnicile
serologice
trebuie
supuse controalelor interne i externe.
Cei mai
adesea, serologie este cel ce face
controalele interne. Rezultatele
controalelor
trebuie
nregistrate
sistematic
i
analizate la intervale
regulate de ctre
responsabilul
laboratorului. Tehnicile trebuie s fac obiectul unei validri
complete nainte de ntroducerea lor. Iar rezultatul obinut trebuie s fie cel
puin cae a furnizat metodele anterioare.
1. Controlului intern de calitate.
n imunohematologia s-a stabilit o distincie ntre procedeele de control intern de calitate ,
dup cum sunt aplicate echipamentului , reactivilor sau tehnicilor de lucru . Aceast
clasificare raspunde nevoii de claritate , chear dac tolereaz suprapuneri pariale , n
special ntre controalele ce se aplic reactivelor i tehnicilor de lucru .
1.1. Controlul de calitate al echipamentului
Calitatea echipamentului utilizat n serologia transfuzional , n special centrifugile ,
spltorul automat de globule roii , bains - marie , incubatoarele , frigiderele ,
congelatoarele trebuie s fac obiectul controalelor periodice (vezi capitolul 23 ).
Echipamentele automate de grupaj sanguin trebuie sa fie supuse i ele unui control
sistematic , conform instruciunelor fabricantului .
1.2. Controlul calitaii reactivilor
Controlul calitaii reactivilor trebuie s depisteze tot ceea ce se indeparteaz de la normele
calitative minimale . Consiliul Europei a publicat norme de acest tip , ce privesc reactivii de
grup sanguin i reactivii antiglobulin .
Normele rezumate figureaz n tabelele acestui capitol . Noi standarte minime pentru
activitatea serurilor anti - A , anti - B i IgM anti - D sunt n curs de elaborare . Activitatea
lor va fi echivalent standardelor F.D.A.

92

S-a plecat de la epoteza c o evaluare a calitaii se face pe esantioane nainte de a se

cumpra un loc de reactivi. Viitorii cumprtori au dreptul sa atepte potenialii furnizori ,
care s le pun la dispoziie toate datele de validare , ale tuturor reactivilor n curs de
evaluare . Metodele de control ce urmeaz servec verificarii de rutin nainte de folosire .
Procedurele controlului de calitate recomandate n aceast parte pot fi aplicate reactivilor
utilizai n tehnicile manuale . In acelai timp , reactivii destinai automatelor de grupaj
sanguin , de grupaj sanguin , pot necesita norme de calitate particulare i controale mai
detailate ; acestea sunt n general asigurate de fabricanii aparatelor .
Tabel 23 (a) : Controlul de calitate al hematiilor - test
Parametri
verificat

de Norme de calitate

Aspectul

Reactivitate
i
specificitate

Fregvena
controlului

Nu este admis nici o

hemoliz
sau
turbiditate
decelabil vizual n lichidul
supernatant
Reacia clar a antigenelor
eritrocitare cu antiserurile
corespunztoare

Control
realizat de
Laboratorul
de grupaj

n fiecare zi

Fiecare lot n prima i

ultima
zi
a
perioadei
de
valabilitate
declarate

Laboratorul
de grupaj

Tabel 23 (b) : Controlul de calitate al reactivilor OAB

Parametri de
verificat

Norme de calitate

Aspectul

Frhemoliz, precipitat,
prin examenul vizual

Reactivitate i
specificitate

Fr hemoliza imun,fr rulouri sau

fenomene de prozon. Reacie net cu
hematiile care poart antigenul
corespunztor:fr falsa reacie (a se vedea i
control de calitate al grupajului ABO/ Rh) .
Serul nediluat trebuie s dea o
Reacie de 3 la 4 + n mediu salin,cu o
suspensie de hematide 3% la temperat.
ambiant. Titrul trebuie s fie de 128 pt.antiA, anti-B, anti-AB cu hematii A i B,
trebuie s fie 64 cu hematii A2 i A2B

Activitate

flacoane,

Tabel 23 : Controlul de calitate al

Parametri
verificat

de

detectabile

Fregvena
controlului
n fiecare zi

Control realizat de

Fiecare lot
nou

Laboratorul de grupaj

Fiecare
nou

lot

Laboratorul de grupaj

Laboratorul de
grupaj

reactivelor Rh

Norme de calitate

Fregventa
controlului

Controlul realizat de

Aspectul

Identic ca la reactivii ABO

n fiecare zi

Reactivitate i
specificitate

Identic ca la reactivii ABO

Fiecare lot nou

Laboratorul de grupaj
Laboratorul de grupaj

Activitate

Serul nediluat trebuie s dea o reacie

de 3 la 4+ n testul adecvat pt. fiecare ser
i un titru
de 16 pt. anti- D anti-C,
anti-E-c, anti
-e
i
hematiile
heterozigote aferente.

Fiecare
nou

Laboratorul
grupaj

lot

de

93

Tabel 23 ( d) : Controlul de calitate al reactivului antiglobulin (antiglobulin

polivalent) utilizat pentru testul cu antiglobulin
Parametri
de
verificat
Reactivitate
i
specificitate

Norme de calitate

Fregvena
controlului

Control realizat de

a)fr activitate hemolitic, fr aglutinarea

hematiilor nesensibilizate,
Sau hematii oricare ar fi grupul ABO
b)Aglutinarea hematiilor sensibilizate cu
un ser anti-D cu o activitate anticorp
maxim de 10ng/ml.
c) aglutinarea hematiilor sensibilizate cu un
ser alloanticorp fixator de compliment
(ex.:antiJK)cu titrul mai crescut n prezenta,
dect n apsenta complementului ,sau
aglutinarea hematiilor acoperite cu C3d i
C3d

n fiecare zi

Laboratorul de grupaj

n fiecare zi

Laboratorul de grupaj

n fiecare zi

Laboratorul de grupaj

Tabela 23 (e) : Controlul de calitate al albuminii

Parametri
de
verificare

Norme de calitate

Fregvena
controlului

Control
de

Aspectul

Fr precipitat, sau formare de

gel detectabil vizual
>98% albumin detectat prin
electrofarez
Fr aglutinarea hematiilor
nesensibilizate, fr activitate
hemolitic, fr fenomene de
prozon sau de trenare

n fiecare zi

Laboratorul de
grupaj
Laboratorul de
grupaj
Laboratorul de
grupaj

Puritate
Reactivitat
e

Fiecare lot nou

Fiecare lot nou

realizat

Tabel 23 (f) : Control de calitate al serului fiziologic

Parametri de
verificat

Norme de calitate

Fragvena
controlului

Controlul
de

Reactivita
te

Fr aglutinare sau hemoliz cu ser

Abinert; aglutinarea hematiisensibilizate cu
un anti-D IgG slab
Un anticorp de IgG preferabil anti-D
etalonat incat s se obin un titru de
aprox 64-128 prin tehnica enzimatic,
trebuie s aib acelai titru la repetarea
testei pe loturi diferite

Fiecare lot nou

Laboratorul
grupaj

de

Fiecare lot nou

Laboratorul
grupaj

de

Activitate

realizat

Tabel 23 (g) : Control de calitate al serului fiziologic

Parametri de
verificat
Aspect
Coninutul
n NaCl
pH

Norme de calitate
Fr
turbiditate
particule vizibile
0,54mol/L(=0,9g/L

6 -8

sau

Fregvena
controlului
n fiecare zi
Fiecare lot nou

1.Ser
fiziologic
tamponat :fiecare
lot;
2. ser fiziologic

Controlul
realizat de
Laboratorul
grupaj
Laboratorul
grupaj
Laboratorul
grupaj

de
de

de

94

Reactivitate

netamponat :zilnic
Fiecare lot nou

Sau nu aglutineaz sau s

nu hemolizeze hematiile

Laboratorul
grupaj

de

Tabel 23 (h) : Controlul de calitate al soluiei saline cu for ionic joas (BFI)
Parametri
verificat
Aspect
PH
Conductibilitate

de

Norme de calitate
Fr turbiditate
particule vizibile
6,7 (6,5 - 7,0)
3,7ms/cm
3,75)

sau

Fragvena
controlului
n fiecare zi
Fiecare lot nou

23C(3,44-

Fiecare lot nou

Controlul
realizat de
Laboratorul
grupaj
Laboratorul
grupaj
Laboratorul
grupaj

de
de
de

1.3 Controlul de calitate al tehnicilor de lucru

Cnd calitatea echipamentului i a reactivelor corespunde normelor, rezultatele
eronate sunt datorite tichetilor utilizate, fie c metoda este necorespunztoare, fie
c 8 cel mai adesea ) tehnicienii au comis " erori operaionale" ne-efectund testul
cu toat acurateea necesarsau greit la ntreprinderea rezultatelor . Metodele de
control recomandate n prezentul capitol sunt axate pe tehnicile de lucru , dar este
evident c ele vor evidenia de asemenea , proast calitatea echipamentelor i/sau a
reactivelor.

Tabel 23(i): Controlul de calitate al

tehnicilor pentru grupaj sanguin

Parametr
Norme minime
i
de
verificat
1)
Grupajul Utilizarea
serurilor anti-A,
ABO
anti-B (utiliznd reactivi n
dublu
exemplar, dac
contragrupajul nu poate fi
efectuat . Aceasta trebuie
considerat
ca o exigen
mimim, posibil odat cu
ntroducerea
reactivelor
naonoclonali.
2)
Se utiliezaz hematii
Contragrupaju A, i B
l ABO
grupaj dublu cu 2
3) Grupajul
Rh(D)
seruri anti-D
diferite,
provenind din
loturi
diferite;
Utilizarea
unui
test
indirect
cu
antiglobulin, nainte de
a
confirma
Du la
donator.
Dac se utilizeaz 2
anticorpi
monoclonale
anti-D , trebuie
s
provin din 2 clone
diferite.
Trebuie s fim siguri c
sistemul
va
recunoate.
Variantele
D
cele
mai
importante
( mai
ales

Probe martor

Fregvena

Controlul
realizat de

Un eanion de
snge din fiecare
din
urmtoarele
grupe O,A,A,

Pt.fiecare serie Laborator

de
de teste sau ul
cel puin
o grupaj
dat pe zi cu
condiia
utilizrii
acelorai
reactive
Laborator
de grupaj

Laborator
O prob Rh (D) Fiecare serie
pozitiv
i una de teste sau
de grupaj.
Rh(D) negativ
cel puin o
dat pe zi , cu
condiia
utilizrii
acelorai
reactivi.

95

4)Fenotiparea
Rh (c,C,e,E)

5) Testul cu
antiglobulin

6) Depistarea
anti-A i antiB
imuni la
donatori

7) Depistarea
aloanticorpilor
iregulari la
donatori
8) Depistarea
aloanticorpilor
iregulari la
pacient
9)
Compatibilitat
e direct

Tabel 23(i):

variantele D grup VI) ca Rh

(D) pozitiv.
Grupaj n dublu cu 2
Pt. 1 fenotip Rh
anti seruri diferite pt.
complect: o prob
Fiecare antigen Rh
pt. fiecare dintre
grupele Rh
urmat.
R1r,R2r,R'r,R "r,rr.
Se spal
de 3 ori
Adugai
la
celulele nainte de a
testul
aduga antiglobulin
negativ
hematii
sensibilizate
Utilizai Hematii A1i B
Eantion de ser
cu nivelul anti-A
i anti - B
imune respectiv
superior i
inferior nivelului
de anticorpi
admii
Realizarea testelor care
Eantion de ser
permit decelarea
continund
anticorpilor clinic importani alloanticorpi
antieritrocitari
cunoscui
Realizat de puin:
Identic 7
testul indirect cu
antiglobulin 8 sau 1 test
manual sau automat de
sensibilitate echivalent
Realizai ce puin
Identic 7
-1 test n mediu salin
la temparatur
ambiant,
-testul indirect cu
antiglobulin
-sau 1 test manual sau
automat de sensibilitate
echivalent
(Continuare)

10) Fenotip i Depistaj ca la . 1,2,3 i

aglutinine
4
iregulare
Cu o metod sensibil
cum ar
fi
testul
antiglobulinic pe panel
de celule
selecionat
hemozigote
pt.
antigenele importante

Identic 7

Laborator
de grupaj

Fiecare
test
negativ

Laborator
de grupaj

Fiecare
serie

Laborator
de grupaj

Ocazional
inclus de
eful
laborat.

Laborator
de grupaj

Identic 7

Laborator
de grupaj

Identic 7

Laborator
de grupaj

Fiecare serie
de teste , cel
puin o dat
/zi

Laborator
de grupaj

1.4. Controlul de calitate al dopajului de anticorpi

n practic dozarea anticorpilor antieritrocitari este limitat la anticorpii anti -D . Se
recomand folosirea tehnicilor automate n locul celor manuale. Serul probei I se va conferi o
valoare de anti-D exprimat n uniti internaionale pe ml, dup compararea rezultatelor cu o
curb de dozaj obinut pornind de la un ser etalon . Toate serurile trebuie s fie testate cel
puin n dublu i toate serurile naionale sau interne trebuie etalonate prin raportare la
etalonul anti-D nternaional . Rezultatele obinute dup dozajele efectuate pe seruri etalon
trebuie conservate . Aceste rezultate nu trebuie s varieze mai mult de 2 deviaii standard .

96

2. Controlul extrem de calitate

Controalele de calitate interne descrise sunt decompletat periodic cu un control de calitate
extern , prin participarea la un program de evaluare a performanei .
Pentru aceste programe externe de evaluare , care sunt mprite n "control normal "i "control
problem ", Laboratorul naional sau regional de referin este cel care distribuie eanionele
de snge laboratoarelor participante , n general de 2-4 ori pe an . Exerciiul propus poate fi
limitat la teste de compatibilitate , de oarece grupajul sanguin ABO , Rh i determinarea
fenotipului , ca i detecia aloanticorpilor , sunt automat acoperite .
Acesta comport o serie de 4 - 6 probe de snge i se cere participanilor s testeze fiecare
eanion de hematii cu fiecare ser (sau plasm) pentru a termina compatibilitatea . Seria este
n aa fel constituit , nct se produc tot odat combinaii, compatibile . Este posibil s se
completeze acest control cernd titrarea unuia sau a doi dintre anticorpii detectai .
Laboratorul de referin adun rezultatele testelor i stabilete gradul de precizie atins de
fiecare laborator participant . Comunic apoi ansamblul rezultatelor ctre toate laboratoarele
(sub form codificat sau nu , dup cum s-a convenit n prealabil ) , cu scopul de a permite
fiecruia s-i compare propriile norme de calitate cu cele ale altor laboratoare , inclusiv cel de
referin .
Dac nu exist nici un program de acest fel ntr-o zon geografic dat , laboratorul local
trebuie s fac teste de eficacitate comparat cu un laborator . Acest tip de control extern de
calitate , nu furnizeaz attea date ca i participarea la un program mai vast , dar completeaz
n mod util controlul intern de calitate .

97