Thme Sant

TP 13 : CCM (Chromatographie sur Couche Mince)

1) Objectif
Savoir raliser et interprter une chromatographie sur couche mince (mlanges colors et incolores).

2) Principe de la CCM

Chromatographie vient du grec Khrma (couleur) et Graphein (crire). Cette technique permet de
sparer les espces chimiques prsentes dans un mlange homogne , donc de contrler la puret dun
chantillon. Elle permet galement didentifier les espces chimiques prsentes dans lchantillon. Les
chantillons tester, ainsi que les chantillons tmoins, sont disposs sur une plaque de chromatographie
(phase fixe) plonge dans un luant (phase mobile).

3) CCM de colorants alimentaires

a) Protocole exprimental

Mthode de prparation de la CCM : http://itarride.chez-alice.fr/simul_anim/prepa-chromato.swf

La cuve lution est un bcher
haut contenant un liquide appel
luant sur une hauteur
denviron 0,5 cm.
Elle doit tre ferme de manire
ce quelle se sature en vapeurs
dluant et place sous la hotte
selon la dangerosit de lluant.
La plaque de chromatographie est
recouverte dun gel de silice sur
un support daluminium. Il faut la
prendre sur les cts pour viter
les traces de doigts qui
fausseraient lexprience.
A 1 cm du bord infrieur, tracer
dlicatement au crayon un trait
fin : cest la ligne de dpt. Les
dpts ne devront pas tremper
dans lluant.

Marquer par des croix ou des
traits les emplacements
correspondant aux chantillons
dposer en gardant un espace
minimum avec les bords de la
plaque. Reprer par un chiffre ou
une lettre les emplacements.
Dposer les chantillons avec une Introduire dlicatement la
pipette pasteur ou un pic en bois plaque dans la cuve et veiller
(inutile den mettre trop). ce que la ligne de dpt ne soit
Eventuellement, scher les dpts pas au contact de lluant.
avec un sche-cheveux. Refermer la cuve, ne plus la
toucher et laisser luer.
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b) Rsultats et exploitations

Les chantillons tests tant des colorants alimentaires (.) et

lluant un mlange deau sale et dthanol. On obtient le chromatogramme suivant.

B V R J

Interprter le chromatogramme laide des informations suivantes :

On appelle phase fixe (ou stationnaire) ce qui constitue la plaque de chromatographie et phase mobile
lluant qui migre (monte) le long de la phase fixe en entranant les espces chimiques dposes des
hauteurs diffrentes.
Une tache (quelle que soit sa grosseur et sa forme) correspond une espce chimique.
Deux taches appartenant deux dpts diffrents mais qui sont la mme hauteur correspondent la
mme espce chimique.
Plusieurs taches pour un mme dpt indique que lchantillon est un mlange, sinon cest un corps pur.
Plus une tache est haute, plus lespce chimique t entrane par lluant facilement.

Remarque :
Dans le cas o les dpts ne sont pas colors (ceux qui est le cas la plupart du temps), pour faire apparatre
les taches (rvlation), on place le chromatogramme sous une lampe UV : les espces chimiques absorbant
les rayons UV feront apparatre une tache sombre sur la chromatogramme. Si ce nest pas le cas, il faut
introduire la plaque dans des rcipients saturs en vapeurs colores (diiode, permanganate de potassium,).

4) CCM de mdicaments
Visionner la vido faux mdicaments .

Proposer un protocole exprimental permettant didentifier les espces

chimiques prsentes dans le mdicament Aspgic .

Complter le chromatogramme ci-contre, linterprter et conclure.

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Sur la paillasse professeur :

luant colorants alimentaires :
600 mL deau sale 40 g.L1 + 120 mL dthanol.
luant mdicaments :
70 mL dacide formique (ou mthanoque HCO2H) + 280 mL de cyclohexane C6H6 + 420 mL
dactate de butyle (CH3COOCH2CH2CH2CH3)
thanol
5 bchers de 250 mL
UPSA, Aspirine du Rhne, Aspirine pH 8, Actron, Doliprane
Papier Whatman
Plaques CCM
Ciseaux
5 Pipettes Pasteur
Agitateur
Lampe UV
Rcipient contenant du sable et du diiode I2
Sur les paillasses lve :
3 colorants alimentaires
piques apritif
Bocal chromato + couvercle

http://www.francetvinfo.fr/france/video-sante-les-risques-de-la-contrefacon_812073.html

http://videos.tf1.fr/jt-20h/2013/attention-au-trafic-de-faux-medicaments-7977892.html