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No.
2. ABSTRACT
Realizar un estudio metagenmico que sirva como base para describir extremo
enzimas y protenas con potencial bioindustrial provenientes de
microorganismos de los dominios Bacterias y Archaea, de tapetes microbianos
de ambientes hipersalinos, de salinas solares de Ban y Monte Cristi, Repblica
Dominicana.
Conocer las condiciones del medio ambiente y los parmetros fsicos -qumicos
de los mismos como son temperatura, salinidad, pH, etc. Para saber si estas
condiciones son nicas en su habitad para la supervivencia de los
microorganismos comparados con otros estudios realizados en otros pases.
Objetivo General Objetivos especficos Resultados o impactos Medios de Verificacin Supuestos de trabajo
esperados al trmino del
proyecto
Artculos cientficos Mayor conocimiento sobre
la biodiversidad de
RE1 Dar a conocer nuevas microorganismos y su
especies utilizacin en futuras
Realizar estudio
investigaciones en ciencia
metagenmico que sirvan OE1 Describir especies de aplicada
como base para describir
bacterias y arqueas RE2 Conocer el consorcio de rbol filogentico Referencias para futuras
extremo enzimas y microorganismos en los tapetes investigaciones
protenas con potencial nuevas para la ciencia microbianos.
bioindustrial provenientes RE3 Crear un cepario de halfilos Reporte Referencias para futuras
de microorganismos de los con disponibilidad para las investigaciones
dominios Bacterias y universidades e institutos de
Archaea de tapetes investigacin
microbianos de ambientes OE2 Utilizar RE1 Biorremediacin de zonas Anlisis qumico Especies potenciales en
hipersalinos, de las salinas costeras biorremediacin
microorganismos RE2 Biorremediacin de suelos Anlisis qumico Especies potenciales en
solares de Ban y Monte
Cristi, Repblica
identificados en los contaminados biorremediacin
Dominicana. tapetes microbianos Anlisis qumico Descomposicin de
materiales como hojas de
hipersalinos en procesos RE3 Biodegradacin de residuos
papel, plstico, detergentes,
de biorremediacin etc.
OE3 Obtenido el perfil Ensayos de laboratorio Potenciales aplicaciones en
RE1 Obtencin de frmacos
medicina
enzimtico determinar Anlisis bioinformticos de las Potenciales aplicaciones en
algunas enzimas que RE2 Obtencin de
secuencias Industria, Agricultura y
extremoenzimas
actan a alta salinidad y medicina
Obtencin de enzimas Potenciales aplicaciones en
temperatura, con potencial RE3 Desarrollo sector
Industria, Agricultura y
uso a nivel industrial. bioindustrial nacional e
medicina
internacional
C. ANTECEDENTES Y REVISION DE LITERATURA.
Desde la antigedad los microorganismos halfilos de las salinas han sido objeto
de atencin, principalmente por el color rojizo o purpura que estos confieren a
estas fuentes de agua que se ponen a evaporar para la produccin de sal.
Jannasch (1657) sugiere que la primera plaga de Egipto (xodo 7: 17-25), en la
que el agua del Nilo se volvi sangre se debi a la presencia de pigmentos
carotenoides de bacterias halfilas del rio.
9. ESTADO DEL ARTE (Deben tratarse aqu: con base en la revisin de la literatura relativa
al tema y/o problemtica de investigacin deben presentarse las tendencias actuales en materia
de investigacin y desarrollo, el estado del arte a nivel internacional y nacional y la contribucin
especfica que se espera realizar en el marco del desarrollo de la propuesta.
Los tapetes microbianos son sistemas muy complejos que han evolucionado
desde hace millones de aos, teniendo registros fsiles de los mismos, los
estrematolitos, datados en aproximadante 3800 millones de aos (Ma)(Cloud,
1976). Se han realizado diversos estudios en las costas de Canad,
describiendo un total de al menos 28 grupos de estrematolitos y
miniestrematolitos provenientes de salinas y aragonita, donde se presentaron
diversos tipos de cianobatceriaw como Ribularia sp. Y Phormidium sp. La
abundancia relativa de estos grupos indica que los fosiles mas antiguos estaban
principalmente formados por cianobacterias (3800 Ma) y posteriormente se
agregaron representantes algales, principalmente algas fibrosas o coralinas
(2000 Ma) a los estrematolitos ( Hofmann, 1969 1976 1977 Hoffmann y
Jackson, 1987).
Los primeros estudios en tapetes microbianos indicaban una presencia
importante de cianobatcerias en los estrematolitos (Cloud, 1976), aunque
recientemente se ha encontrado una gran diversidad de otros microorganismos,
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No.
D. METODOLOGIA.
11. HIPOTESIS (En caso de que la propuesta incluya hiptesis de trabajo proyectos de
investigacin bsica e I+D en algunos casos-, las hiptesis debe ser formuladas en trminos
falsables, indicando la relacin supuesta entre las variables y sugiriendo el modelo de
contrastacin emprica que puede darle respuesta. Deben ser formuladas de manera concisa.)
12. MATERIALES Y METODOS (En este punto debe indicarse con precisin los
materiales, tcnicas y mtodos que se requerirn para el desarrollo de la propuesta que
permitan: (i) dar respuestas a las preguntas de investigacin; (ii) la contrastacin
emprica de hiptesis investigacin bsica e I+D si aplica-; (iii) obtener los resultados
esperados (propuestas de innovacin) de manera eficiente y costo-efectiva. En caso de ser
necesario se podr incluir un anexo metodolgico con detalles sobre la tecnologa a ser
utilizada para el desarrollo de la propuesta.
Resumen metodologa :
Etapa I:
Toma de muestra
Zona de muestreo
El rea de estudio tendr lugar en los tapetes microbianos hipersalinos de las
salinas solares de Ban y Monte Cristi, Repblica Dominicana.
Recoleccin de muestras
Se llevarn a cabo 3 muestreos durante el desarrollo del proyecto en distintas
estaciones del ao, para establecer las diferencias de la comunidad microbiana
existente en dicho habitad. Se utilizara un GPS para marcar las coordenadas de
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No.
Analtica
Separacin de las muestras
Se cortarn tiras de 1 cm de ancho por 5-7 cm de largo, retirando el exceso de
sedimento con agua destilada estril. Posteriormente, las muestras se colocarn
en un recipiente a T. A. con solucin de NaCl (1%) por 5 min, para
finalmente introducirlas en un congelador (-80C) por 30 min para generar un
shock trmico. Transcurrido este tiempo se separarn las capas de manera
manual, utilizando una esptula de diseccin estril, cuidando de no romper la
capa y finalmente se enjuagarn con agua destilada estril. Las capas ya
separadas se almacenarn en tubos nuevos de 1.5 ml estriles rotulados a -
80oC.
Anlisis de los factores fisicoqumicos macro y micro ambientales
100L de mezcla, con una tiempo de corrida intermedia de 15 min (100v, 60C),
una vez agregado toda la mezcla amplicon-solucin de carga, se llevar a cabo
la corrida final por 24 horas a un voltaje constante de 60v y una temperatura de
60C.
Tamizaje de la biblioteca metagenmica
Se tomar una pequea cantidad de clulas de cada una de las divisiones de las
cajas maestras y se resuspendern en tubos nuevos rotulados (1.5 mL) con 50
L de agua estril. Una vez resuspendidas las colonias se les agregarn 300 L
de amortiguador TENS(NaOH, 0.1M; SDS 0.5%; Tris-HCl, 10mM, pH 8.0; EDTA,
1mM, pH 8.0), y se agitarn en Vortex por 10 seg. Posteriormente, al
homogenizado se le aadirn 150 L de Acetato de Sodio cido Actico (3M,
pH 5.2) y se agitarn nuevamente por 10 seg. Se separarn las fases mediante
centrifugacin (4 min, 13,000 rpm) y se transferirn el sobrenadante a un tubo
nuevo previamente rotulado y se aadir 1,000 L de etanol absoluto frio.
Posteriormente se realizarn dos lavados con etanol frio al 70%, se descartar el
sobrenadante y se secar la pastilla a TA. Una vez secas las pastillas, se
resuspender el ADNp en 50 L de agua estril.
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No.
A partir del anlisis de ARDRA sern seleccionadas las clonas que tuvieron
distinto patrn de restriccin. Las clonas seleccionadas sern un mximo de 60
por biblioteca. El ADNp se transferir a tubos de PCR de 250l con una
concentracin final de 100ng/l y un volumen de 50l y finalmente se enviarn a
secuenciacin mediante el servicio forneo de la compaa Macrogen (Seul,
Korea).
Caracterizacin de las clonas seleccionadas en el
RibosomalDatabaseProyect (RDP) y utilizacin de programas
bioinformticos.
Etapa V:
Cultivo
Las siembras se realizaran en diferentes medios de cultivo los cuales tendrn
concentraciones distintas de NaCl 5, 10, 15 y 20%. Una vez se obtengan
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No.
Anlisis bioqumico
Con el objetivo de caracterizar bioqumicamente cada una de las cepas y de
este modo comparar el conjunto de reacciones de los microorganismo aislados
con otros ya caracterizados bioqumicamente, a estos les sern practicadas las
pruebas bioqumicas de rutina, modificando en cada caso los medios de cultivo
con la adicin de sales basales (20%NaCl, 2% MgSO4 7H2O, y 0.2% KCl).
Estas sern realizadas inoculando cada cepa en medios de cultivo con distintos
carbohidratos, aminocidos o protenas, para determinar la produccin de
enzimas y productos del metabolismo en cada caso.
medios de cultivo: Motility Indol Ornitine (ornitina y triptfano) Lisina Iron Agar
(lisina) con sales basales.
La presencia de polihidroxialcanoato (PHA) se determinara por microscopia de
fluorescencia utilizando de solucin acuosa de azul Nilo al 1% para teir el PHA.
Las muestras sern desaladas con acido actico al 5% antes de realizar esta
tincin.
Determinacin del perfil enzimtico de las cepas
Produccin de amilasas.
Produccin de Proteasas.
Produccin de lipasas.
colonias.
Produccin de celulasas.
Etapa VI:
Anlisis Bioinformtico
Una vez encontremos una especie de bacteria o arquea con gran potencial
Etapa VII:
Realizar publicaciones en revistas cientfica destacada.
REA DE AGROEMPRESARIAL
Grupos de Investigacin y respectivas lneas de investigacin:
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No.
Contactos con el personal de investigacin del IEESL al 809528-4010 ext. 3096 , 3047 y 3070,
y 809-819-4623, o a los correos: johnhenrymorales@gmaill.com, jmorales@ipl.edu.do,
cn.pereyra@gmail.com,
Form MCT-01 40
No.
Investigador principal
Experiencia laboral
Con 6 aos de experiencia en microbiologa de alimentos e industrial en varias
empresas reconocidas de la Repblica Dominicana, como son: Junta
Agroempresarial Dominicana, Tropijugos S.A Zona franca industrial, Cortes y
Hermanos, Inversiones y Negocios y Fromages e France actualmente como
encargada de microbiologa y calidad.
Coinvestigadores
Asistentes de investigacin
Aina Ramrez
Colaboracin internacional
G. BIBLIOGRAFIA Y ANEXOS.
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Form MCT-01 45
No.
1. Relacin de los miembros del equipo de investigacin, que incluya sus generales
(nombre completo, cdula o pasaporte, estado civil, direccin, telfonos y correos
electrnicos) y curriculums vitae del personal investigador y de desarrollo (que incluya
copias de sus ttulos acadmicos): Art. 45.
La cuadra nmero I tiene un rea de 20,384.00 m2, de los cuales el pabelln principal
(San Ignacio de Loyola) en la primera planta ocupa 1,777.38 m2, las cuales estn
distribuidas de la siguiente manera: cinco aulas de 65 m2 cada una aproximadamente. Las
oficinas: rectora 51.60 m2, compras 21.60 m2, contabilidad 57.96 m2, registro 72.60 m2,
admisiones 16.47 m2, conserjera 16.76 m2. Sala de conserjera 52.10 m2. Baos 7.42 y
45.04 m2. Saln de audio visuales, 88.07 m2. Gerencia de Tecnologa de Informacin y
Comunicacin 42.07 m2. Investigacin 42.07 m2. Oficina de Tecnologa de Informacin
y Comunicacin 47.40 m2. Sala de profesores 72.00 m2 y el almacn 123.06 m2.
Segundo nivel 1324.23 m2, con 7 aulas de donde cada una mide alrededor de 65 m2,
seguidas de un saln de dibujo que posee una dimensin de 72 m2, la oficina de
sismologa 42.5 m2, rea de ingeniera (Vicerrectora Acadmica, Direccin de
Ingeniera, Coordinaciones de Carreras, Recepcin y Sala de Juntas) 102.67 m2, emisora
Magis FM 40.29 m2, Laboratorio de Diseo Industrial, y Laboratorio de IPLOX.
El auditrium menor posee un rea de 442.13 m2. La rotonda 222.00 m2. La Biblioteca
Padre Bentez tiene un rea de 732.50 m2, una oficina de consejero 72 m2, direccin de
pastoral 80.00 m2, Audiovisuales II 289.08 m2, Bienestar Estudiantil 289.08 m2, Saln de
Pastoral 350.00 m2.
Los laboratorios de qumica, biologa y anlisis de suelos poseen (621.56 m2): el primer
nivel: baos 6.25 m2, depsitos 33.79 m2, Oficinas Escuela de Idiomas Loyola 310.78 m2.
El segundo nivel Laboratorio de Qumica 310.78 m2, oficinas y depsito de 270.74 m2.
Los laboratorios de fsica y la librera estn en la primera planta poseen un rea de 310.78
m2. En la segunda planta se encuentra el Pabelln de Biologa P. Julio Cicero, SJ. con
310.78 m2, el cual incluye un laboratorio de Biologa, un Museo de Biologa, un Centro
de Documentacin Biolgica, y un aula de conferencias.
La capilla mayor posee un rea de 626.08 m2, con una capacidad para 450 personas.
El pabelln II (San Lus Gonzaga, SJ.), posee un rea de 2111.75 m2 en el primer nivel,
donde se encuentra la oficina del decano de estudiante, la direccin de bachillerato
tcnico, departamento de psicologa, saln de dibujo, mesas de ping-pong, deportes,
oficina de formacin integral, oficina de educacin artstica y sala de profesores.
En la cuadra nmero III estn el auditorio mayor posee una rea de 1476.30 m2, con una
capacidad de acoger ms de 1200 personas.
La Casa Curial (Residencia de padres jesuitas), posee un rea de 174.842 m2. De donde la
primera planta ocupa 746.705 m2, el stano 128.65, la conejera 30.62 m2 y el garaje
174.84 m2.
En la cuadra nmero IV est la escuela General Bsica Padre Silvio Gonzlez, SJ.,
posee un rea de 1529.98 m2, 15 aulas cada una con un rea aproximada de 57.36 m2
lo que hace un total de 860.37 m2. Sala de direccin con un rea12.13 m2. Sala de
profesores y secretaria 27.72 m2. La cocina tiene un rea 42.24 m2. Tiene un deposito que
ocupa un rea de 88.32 m2. Los baos ocupan un rea de 52.93 m2. Un edificio de
manualidades de 142.49 m2, dentro de los que se encuentran 3 salas las que en total
ocupan 111.87 m2, un deposito que ocupa 23.20 m2 y los baos que ocupan 7.42 m2.
Cafetera y el deposito tiene un rea de 92.99 m2,
Taller de Carpintera: ocupa un rea de 486.76 m2, de los cuales 421.66 m2 pertenecen al
taller, 36.00 m2 a la oficina, 20.10 al depsito y 18.00 al vestbulo.
Taller de electricidad: ocupa un rea de 488.06 m2, de las que 412.66 m2 pertenecen al
taller, 32.82 al aula, 24.60m2 al depsito y 18.00 al vestbulo.
Taller de Vapor: posee un rea de 492.324 m2, de los que 414.32 m2 pertenecen al taller.
30.00m2 al depsito, 30.00 a la oficina y 18.00 al vestbulo.
Taller de Fundicin: tiene un rea de 505.42 m2, de los que 438.82 m2 pertenecen al
taller, 45.60 m2 al depsito y 21.00 al vestbulo.
La cuadra VI tiene el Taller de Diesel: un rea de 992.65 m2, de las cuales 768.95 m2
pertenecen al taller, 36.00m2 a la oficina, 73.00 m2 al depsito, 48.00 al aula y 66.50 al
laboratorio.
Taller de Mecnica: posee un rea de 479.25 m2, de donde 404.25 m2 pertenecen al taller,
36.00 m2 a la oficina y 39.00 m2 al aula.
El rea restante (332.35 m2) distribuidos en pasillos (173.35 m2) y baos (159.00m2).
Est ubicada en el lateral sur del Instituto Tcnico de Estudios Superiores Politcnico
Loyola. La edificacin de dos niveles ocupa una extensin de 802 mts2 (metros
cuadrados), las cuales estn distribuidas de la siguiente manera:
PRIMER NIVEL
Coleccin general.
Coleccin de referencia.
rea de circulacin y prstamo.
Sala de lectura.
Centro de Reproduccin de documentos.
rea de recepcin.
Catalogo en lnea.
rea bsica (Coleccin y Banco de Libros).
Sala de Lectura.
rea de circulacin y prstamo de libros.
Biblioteca Virtual.
Batera de Baos.
En el rea del fondo a la derecha:
Oficinas
Direccin.
Procesos Tcnicos.
Sala de Reuniones.
SEGUNDO NIVEL
En el lateral derecho:
Sala de estudio grupal.
Banco de libros.
Hemeroteca.
Batera de baos.
En el lateral izquierdo:
Sala de trabajo para investigadores.
Saln de proyecciones y conferencias.
Saln para equipos y materiales audiovisuales.
Sala para colecciones especiales.
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No.
Agronoma
Laboratorio de computadora
Laboratorio de Entomologa
Laboratorio de anlisis de suelos
Finca experimental