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Module M 1
Biologie
cellulaire
Automne 2016

Cours de biologie cellulaire

Partie 1

Professeur
Zine El Abidine
TRIQUI
1
 Programme

Chapitre 1
Gnralits sur la biologie cellulaire
Chapitre 2
Constitution chimique des tres vivants
Chapitre 3
Mthodes dtude de la cellule
Chapitre 4
La membrane plasmique
Chapitre 5
Le hyaloplasme
Chapitre 6
Le noyau
Chapitre 7
Les systmes de conversion dnergie
Chapitre 8
Les systmes endomembranaires

2
 Chapitre 1
Gnralits sur la biologie cellulaire

1. Historique
Les cellules ne peuvent pas tre observes lil nu en raison de leur trs petite taille. Lhistoire de la
biologie cellulaire est donc troitement lie au perfectionnement dun appareil optique agrandissant: le
microscope.
Les premiers microscopes composs ont t mis au point la fin du XVIe sicle ce qui a activ les
recherches sur les objets microscopiques.
A partir de cette poque on peut rsumer lhistoire de la biologie cellulaire comme suit:

Langlais Robert Hooke (1665)

propose, pour la premire fois, le terme
cellule (petite chambre) en observant des
coupes de lige avec un microscope
rudimentaire une seule lentille (en fait
des cellules vgtales mortes).

Le hollandais Antony Van

Leeuwenhoek (1674) dcrit plusieurs
micro-organismes vivants (protistes,
bactries).

3
 Les allemands Mathias Schleiden et Theodor Schwann (1838-1839),
suite lobservation de multiples organismes animaux et vgtaux,
parviennent la formulation de la thorie cellulaire travers deux
principes:

Principe 1:Tous les organismes sont constitus dune ou de plusieurs cellules.

Principe 2: La cellule est lunit structurale de la vie.

Louis pasteur a par la suite rfut la gnration spontane. La mme anne,
lallemand Rudolph Virschow (1855) a nonc le 3e principe:

Principe 3: Les cellules ne peuvent provenir que de la division dune cellule

prexistante. (omnis cellula ex cellula)

Les progrs incessants dans

les quipements
microscopiques ont permis
lidentification des
principales structures
cellulaires :

2. Dfinition

La cellule est lunit de base de point de vue

structure et fonction des organismes
biologiques.

Toute cellule drive dune cellule

prexistante par division.

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3. Diffrents types de cellules
Il existe deux types fondamentaux de
cellules:
Les cellules procaryotes (pro =
primitif; caryon = noyau)
Les cellules eucaryotes (eu =vrai,
caryon= noyau)
Les cellules procaryotes (pro = primitif;
caryon = noyau): cellules sans vrai noyau
cest--dire que le matriel gntique nest
pas enferm dans une enveloppe nuclaire.et
sans organites part des replis de la
membrane plasmique dits mesosomes.

Les cellules eucaryotes (eu =vrai, caryon=

noyau): le noyau est dlimit par une
enveloppe nuclaire. Des membranes
internes dlimitent des compartiments
cytoplasmiques appels organites.

5
La figure suivante illustre la structure dune cellule procaryote :

6
Parmi les cellules eucaryotes on distingue deux
types de cellules:

Les cellules
animales
Les cellules
vgtales

7
Les cellules animale et vgtale sont entoures par une membrane plasmique et prsentent, en grande
partie les mmes organites. Mais, La cellule vgtale est caractrise par:

La prsence dune paroi squelettique

La prsence des plastes.

Une vacuole de grande taille pouvant occuper la plus grande partie du volume cellulaire.

Les cellules procaryotes correspondent essentiellement des organismes unicellulaires. Il sagit

essentiellement des bactries.

8
Les cellules eucaryotes peuvent constituer des organismes unicellulaires comme :

9
Les cellules eucaryotes constituent la quasi-totalit des organismes multicellulaires animaux et vgtaux.
Au sein de ces organismes, les cellules prsentent une spcialisation structurale et fonctionnelle: elles
sont dites diffrencies.

La Diffrenciation cellulaire est le processus par

lequel une cellule peu ou pas diffrencie acquiert
les caractristiques dun type cellulaire sur le plan
morphologique et fonctionnel.
Les cellules diffrencies :sont caractrises par une
structure cellulaire particulire (cellule pithliale,
musculaire, neurone..), une production spcifique
(hormone, enzymes ; hmoglobine) et une fonction
cellulaire spcifique (contractio musculaire,
transport de gaz, communication nerveuse).
Les cellules dun organisme donn sont carctrises
par des tats de diffrenciation diffrents mais
possdent le mme le
gnome : cest
lexpression de gnes
spcifiques qui explique
la diffrence.
Une cellule capable de se
diffrencier en:
En tous les types
cellulaires dun
organisme si elle
est totipotente:
(zygote et trs jeunes cellules embryonnaires)
En plusieurs types de cellules : cellules pluripotentes ou cellules souches
Peut sauto-renouveler
Spcialise : cellules souches hmatopotiques, de lpiderme

10
4. Cas des virus
Les virus sont des structures vivantes constitues par un
matriel gntique (ADN ou ARN) et par une coque
protique.
Les virus se caractrisent par:

Absence des structures cellulaires essentielles comme la

membrane plasmique, lhyaloplasme ou les ribosomes.

La ncessit de la machinerie cellulaire dune cellule

hte pour se reproduire. Hors des cellules htes cest un
simple assemblage de macromolcules.
DONC ce ne sont pas des cellules: cest un tat dit acaryote

11
 Chapitre 2

Composition chimique de la cellule

Les tres vivants sont composs de trois types de matires quon peut dcouvrir successivement
lorsquun chantillon vivant est expos la chaleur:
De la vapeur deau se dgage en premier rvlant la prsence de leau. Sa teneur dpasse en gnral
les 60 %.
Lchantillon devient noir cause de la combustion dune matire riche en carbone: la matire
organique.
A la fin de la combustion, il persiste de cendres composes dlments minraux.

1. Eau
1.1. Structure de leau
Cest une petite molcule (PM = 18). Elle
prsente un atome doxygne li par liaisons
covalentes deux atomes dhydrogne.
Loxygne attire le nuage lectronique et
constitue une charge partielle ngative alors
que les hydrognes prsentent une charge

12
partielle positive: leau est une molcule polaire.
Leau, par sa nature polaire, attire les autres molcules polaires et les ions (hydrophiles) et repousse les
molcules apolaires (hydrophobes)
Leau peut aussi se dissocier en H+ et OH-.Lquilibre est mesur par le pH.

1.2. Leau dans la cellule

Leau est la molcule la plus abondante dans les
cellules vivantes. Elle dpasse les 60 % de la matire
vivante. Ses rles les plus importants sont :
Cest le solvant de beaucoup de substances
cellulaires.
Cest le milieu o se droule la quasi-totalit des
ractions biologiques.
Il peut participer comme substrat (ractif) ou se
librer comme produit dans certaines ractions
comme lhydrolyse.
Il contribue, par son interaction avec les molcules hydrophiles et/ou hydrophobes, stabiliser
beaucoup de structures cellulaires comme les membranes.

2. Les substances organiques

Ce sont des molcules dont latome principal est le carbone. La molcule la plus simple est le mthane
qui comprend un atome de carbone associ 4 atome dhydrogne.

Il existe quatre types de molcules organiques:

Les glucides
Les lipides
Les protines
Les acides nucliques

13
 2.1. Les glucides
Les glucides comprennent les sucres et leurs polymres. Les
glucides comprennent le carbone, loxygne et lhydrogne. Le
nom des glucides se termine par ose.
On distingue :
Les monosaccharides: ce sont les glucides les plus simples
avec une formule chimique constitue dun multiple de
CH2O. Le plus connu est le glucose.
Les disaccharides: cest lassociation de deux
monosaccharides. Le plus connu est le
saccharose.
Les polysaccharides: Cest lassociation dun
grand nombre de monosaccharides pour
former des polymres.
Exemple 1: lamidon qui constitue la forme de
rserve dans les graines (haricot) ou les
tubercules.
Exemple 2: la cellulose qui est le principal
constituant de la paroi vgtale

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Les principaux rles des glucides sont :
Source dnergie pour la cellule
Entrent dans la composition des acides nucliques
Composent la paroi des cellules vgtales et bactriennes
Font partie de la membrane plasmique o ils jouent, entre autres, le rle dans ladhrence et la
reconnaissance cellulaires

2.2. Les lipides

Ce sont des molcules hydrophobes ou amphiphiles(molcules hydrophobes possdant un
domaine hydrophile) trs diversifies. Ils Comprennent entre autres les graisses, les cires, les strols
les vitamines liposolubles, les mono-, di- et triglycrides, ou encore les phospholipides.
Dans le cadre de ce cours nous
nous limiterons ltude des
acides gras et leurs
associations en triglycrides et
en phospholipides
Les acides gras sont de
longues chanes carbones nombre pair de carbones et portant une fonction acide au niveau du carbone
1.

15
Ces acides gras peuvent tre:
Saturs sils ne comprennent que des simples liaisons.

Insaturs sils portent au moins une double ou triple liaison.

Les acides gras peuvent ragir avec une

molcule de glycrol peuvent former
soit un triglycride.

16
Lassociation du glycrol avec deux acides gras et un groupement phosphate associ un groupement
hydrophile donne un lipide amphiphile: cest un phospholipide.

Les rles des lipides sont multiples. On peut citer entre autres :
Constitution de la bicouche lipidique des membranes.
Source importante dnergie pour la cellule
Forme de rserves chez les vgtaux (graines olagineuses) et chez les animaux (tissus adipeux)
Constitution des hormones lipophiles.

2.3. Les protines

Les protines sont des chanes dacides amins
relis entre eux par des liaisons peptidiques
CO-NH.
Un acide amin est une molcule carbone
comprenant un groupe carboxyle (-COOH), un
groupe amine (-NH2) et une chane latrale
variable (-R) qui diffre entre les 20 acides amins.

17
Les acides
amins peuvent
avoir
diffrentes
proprits
selon la nature
de leur chane
latrale.
La synthse des
protines passe
par la formation dune liaison covalente dite liaison peptidique entre les acides amins pour former une
chane linaire dacides amins. La succession des acides amins varie dune protine l autre. On
parle de squence primaire. Diffrentes interactions au sein des chanes peptidiques donnent une
structure secondaire, tertiaire puis quaternaire aboutissant une structure tridimensionnelle particulire
permettant la fonctionnalit de la protine.
Les rles des protines sont trs nombreux. On peut les classer en 2 catgories :

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 Protines de structure: beaucoup de protines participent diffrentes structures cellulaires
comme les membranes, le cytosquelette et dautres.
Protines enzymatiques : les ractions de la cellule vivante sont catalyses par des protines
appeles enzymes.

2.4. Les acides nucliques

Voir plus loin

3. Sels minraux
Les sels minraux sont les constituants qui restent (sous forme de cendres) aprs calcination des tissus
organiques.
Chimiquement, ce sont des lments ioniss chargs soit positivement (cations) ou ngativement
(anions).
Les sels minraux sont essentiels l'organisme, notamment parce qu'ils :
- contrlent l'quilibre hydrique (pression osmotique)
- rglent l'quilibre acide-base (pH)
- font partie de certaines structures (os, dents)
- entrent dans la composition des enzymes, des hormones
- catalysent de nombreuses ractions du mtabolisme
Selon les quantits mises en jeu dans l'organisme, les sels minraux sont couramment
diviss en 2 groupes:
- les lments principaux ou macrolments: Ca, P, K, Cl, Na, Mg
- les lments traces ou oligolments: Fe, Zn, Cu, Mn, I, Mo, etc.

19
 Chapitre 3
Mthodes dtude de la cellule

1. La microscopie
Le microscope transmission (photonique ou
lectronique) permet dobserver. sur une coupe
trs fine les dtails infiniment petits dun objet
(animal, plante, roche).

1.1. Le microscope optique

La figure ci-contre montre un microscope optique
et ses diffrentes composantes. Il permet de
visualiser des objets trs fins, monts dans une
goutte deau ou de liquide color sur une lame
porte objet et recouvert dune lamelle couvre objet
trs fragile, ou des coupesfixes et colores selon
un protocole qui sera prsent ultrieurement. La
lumire qui traverse lobjet remonte dans les
lentilles de verre (objectif et oculaire) ce qui
agrandit lobjet.
Lobservation au microscope passe par les tapes
suivantes :
Prparation de lobservation: la
prparation observer est place sur la
platine et centre pour que la lumire
traverse le tube optique donnant un
rond lumineux dans loculaire.
La mise au point: le petit objectif
(faible grossissement) est plac dans
laxe du tube optique. Il faut ensuite
regarder dans loculaire et, laide de

20
 la vis macromtrique de mise au point, remonter le tube jusqu lobtention dune image
nette.
Exploration de la prparation : la prparation est dplace dlicatement jusqu trouver
lobjet recherch.
Changement de grossissement: il faut placer la zone agrandir au centre de la platine, puis
changer dobjectif en tournant le barillet, sans toucher au rglage prcdent. Le changement
dobjectif se fait toujours du plus faible au plus fort grossissement. La nouvelle mise au point
se fait seulement par la petite vis.
Que faire pour ne pas endommager les prparations ?

Toujours commencer lobservation avec lobjectif le plus faible.

Nutiliser la vis macromtrique (la grosse) qu faible grossissement.
Fixer la lame avec les valets : si lun deux est manquant, ne pas incliner le microscope!
Ne jamais descendre le tube sans surveiller la platine et la lame en regardant sur le ct.
Aux grossissements suprieurs, nutiliser que la vis micromtrique.
Si la vis semble bloque, il faut sassurer
que lobjectif nappuie pas sur la lame.

1.2. Microscope lectronique transmission

1.2.1. Principe du fonctionnement
Il est comparable celui du microscope photonique.
La source S est une cathode qui met des lectrons (au
lieu des photons) qui sont acclrs par
lapplication dune diffrence de potentiel entre la
cathode et lanode (60 100 Kv). Le vide pouss
lintrieur du ME est ncessaire au dplacement des
lectrons. Les lectrons traversent 3 lentilles
lectromagntiques L1, L2, L3 et lobjet AB.

- L1 : le condensateur permet de focaliser le

flux dlectrons sur lobjet.
- L2 et L3 jouent le rle dobjectif et permettent
lagrandissement de lobjet AB.

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Limage est observe directement sur lcran rendu fluorescent par le bombardement lectronique ou sur
une plaque photographique. Le MET permet des grossissements allant de 2000 un million.

1.2.2. Prparation des coupes cellulaires ultrafines

Les cellules doivent tre coupes en tranches trs fines (50 100 nm) pour permettre aux lectrons de les
traverser, pour cela :

- Les cellules sont tues par des fixateurs

(glutaraldhyde, ttroxyde dosmium) qui
prservent les structures cellulaires.
- Les chantillons fixs sont lavs dans
leau, puis dshydrats par des solvants
organiques (actone).
- Les chantillons sont inclus dans une rsine
(araldite).
- Les blocs de rsine renfermant lchantillon
sont coups laide dun ultra microtome
muni dun couteau de verre ou de diamant.
- Les coupes cellulaires sont recueillies sur
une grille en cuivre. La grille est trempe
dans une solution de mtaux lourds
(uranium, plomb) pour noircir les structures
cellulaires et augmenter le contraste. La
grille est ensuite introduite dans le MET pour lobservation.

22
 1.3. .Comparaison entre microscope lectronique transmission et microscope photonique
La figure ci-contre montre que les deux fonctionnent selon les mmes principes. Les diffrences rsident
dans la nature de la source (lampe ou cathode), la nature des lentilles (en verre ou lectromagntiques) et
en fin le mode dobservation : lil pour le microscope photonique et lcran ou le clich pour le
microscope lectronique.

Microscope lectronique Microscope photonique

Source dnergie lectrons Photons
Couleur Noir et blanc Couleur (Lugol, rouge neutre)
Etat des cellules Cellules mortes car fixes Vivantes ou mortes.
Grossissement 2000 1000000 25 1000
Pouvoir sparateur 4 0.2 m
Lentilles Magntiques En verre
Image reue Sur cran fluorescent Par lil
Prparations coupes A lultramicrotome Au microtome

1.4. Autres microscopes

1.4.1. Microscope lectronique balayage
Cest le microscope dobservation des surfaces et permet dobtenir une image en relief de la surface de
lchantillon. La surface cellulaire est recouverte par une mince couche dor, de platine ou de palladium
pour empcher la traverse des lectrons. Un faisceau dlectrons balaye la surface ce qui provoque une
mission dlectrons qui sont capts par lcran. Langle dimpact du faisceau dlectrons avec la surface
cellulaire varie. Limage ainsi reconstitue est tridimensionnelle.

1.4.2. Microscope pifluorescence

Cet appareil permet danalyser la lumire rmise par fluorescence par un chantillon clair par une
lumire dune longueur donde donne. Il est trs utile pour analyser aussi bien des substances
fluorescentes naturellement (comme la chlorophylle) que des substances fluorescentes fixes
artificiellement sur des molcules comme marqueurs.

23
2. Mthodes d'analyse des constituants cellulaires
De manire gnrale, ces mthodes d'analyse ont un double objectif :

Etablir un catalogue des molcules constituant un chantillon biologique donn,

indpendamment de leur fonction

Reprer dans une fraction, ou localiser dans une structure, une seule espce molculaire connue,
dj identifie, dans le cadre d'une approche plus cible, fonctionnelle/

2.1. Fractionnement chimique

Cest un ensemble de techniques qui consistent sparer les petites molcules (organiques ou minrales)
des macromolcules.

Lorsquun extrait biologique brut, tel qu'un homognat, est trait par un acide fort froid, les
macromolcules (en particulier, les protines) sont dnatures et forment des prcipits faciles
sdimenter par centrifugation. Le surnageant contient tous les prcurseurs organiques solubles dans
lacide : acides amins, glucides, nuclotides, produits de dgradation..., ainsi que les ions minraux.

La mthode de tamisage molculaire, relativement rcente et plus rsolutive, permet de sparer aisment
les macromolcules natives en solution des composs de faible masse molculaire (sels minraux ou
prcurseurs organiques), par filtration sur gel. Cette technique consiste en une chromatographie sur
colonne utilisant un gel poreux form de microbilles de nature polysaccharidique ; il s'agit d'une filtration
par exclusion car les plus grosses molcules sont lues les premires et donc spares des autres.

2.2. Mthodes de sparation: chromatographie et

lectrophorse
La chromatographie est une mthode sparative qui
permet lidentification et le dosage des diffrents composs
dun mlange. Le principe est bas sur les proprits de
solubilit diffrentielle des composs dans des solvants ou
des mlanges de solvants varis. Chaque espce chimique
se dplace une vitesse propre dpendant de ses
caractristiques et de celles des deux phases mobile et/ou
stationnaire. La chromatographie permet donc de sparer
les constituants d'un mlange homogne.
Il existe diffrents types de chromatographies suivant la
mthode de sparation utilise: dadsorption, de partage,
dchange dions, d'exclusion.

24
La chromatographie sur couche mince (CCM), par exemple, est une technique physique de sparation
d'espces chimiques. Pour cela on utilise un luant: solvant qui monte par capillarit le long du support
entranant ainsi les diffrentes espces chimiques.

Dans certains cas, le partage se fait plus facilement par chromatographie de partage bidimensionnelle :
une premire chromatographie dans un premier systme de solvants est suivie par une deuxime
migration dans un systme de solvants diffrent effectue
sur la plaque pralablement sche et tourne de 90.
les constituants du mlange sont rpartis sur toute la
surface de la plaque et donc mieux spars qu'aprs une
migration monodimensionnelle.

Llectrophorse est base sur les diffrences de charge

lectrique. Elles permettent aisment de sparer les sucres
simples, les acides amins, les acides organiques et les
acides gras, les nuclotides... Cest aussi une mthode
intressante pour sparer, en prsence d'un champ
lectrique, les centaines ou les milliers d'espces
molculaires de protines et d'acides nucliques
constituant les mlanges naturellement rencontrs dans les
cellules.

25
3. Sparation de diffrents organites : le fractionnement cellulaire
Cest une technique qui permet disoler les organites cellulaires tout en conservant intactes leur structure
et leurs proprits physiologiques. Les organites cellulaires obtenus par cette technique sont vivants et
fonctionnels. On peut faire une analyse chimique pour tudier leur composition et tudier leur fonction in
vitro dans un milieu synthtique.

Cette technique
comporte 3 tapes :

Broyage (homognisation) : le tissu cellulaire est broy dans les conditions suivantes :

- Dans une solution de saccharose isotonique par rapport au milieu intracellulaire pour viter les
changes deau.

26
 - Dans une solution pH constant pour viter les changes de protons.
- A 0c pour annuler lactivit enzymatique.
On obtient une suspension ou homognat o sont disperss les organites cellulaires vivants.

Centrifugation diffrentielle : lhomognat est soumis une premire centrifugation brve et

faible vitesse. Celle-ci fait sdimenter les organites les plus lourds (noyaux) qui se sparent dun
liquide appel surnageant contenant les particules les plus lgres. Le surnageant est centrifug
nouveau plus longtemps avec une vitesse plus leve etc. Le dernier surnageant est le
hyaloplasme, il contient des protines (des enzymes librs par le broyage), des acides amins
mais pas dorganites.
Purification des constituants cellulaires par centrifugation en gradient de densit : la
centrifugation en
gradient de densit
permet la sparation
complte des
organites. Pour cela,
on introduit dans le
tube des solutions de
saccharose dont la
concentration molaire
augmente du haut vers
le bas (gradient), on tale en une fine couche la fraction purifier sur la dernire solution de
saccharose puis on centrifuge. Selon leur densit, les organites migrent dans le tube et se
stabilisent dans des zones de saccharose de densit identique celle du constituant cellulaire. Les
organites isols sont rcuprs.

27
4. La culture cellulaire
La culture cellulaire est un ensemble de techniques de biologie utilises pour faire crotre des cellules
hors de leur organisme (ex-vivo) ou de leur milieu d'origine, dans un but d'exprimentation
scientifique ou de fcondation in vitro.
Les microorganismes procaryotes (Bactries, Cyanobactries...) ou eucaryotes unicellulaires
(Protistes : Amoeba, Paramecium, Tetrahymena..., Algues : Chlamydomonas, Chlorella,
Micrasterias... ou Champignons : levure de bire...) se cultivent aisment, dans des milieux
synthtiques spcifiques parfaitement contrls et dans des conditions gnralement simples. Ces
milieux sont liquides ou solides, aprs glification au moyen de composs inertes tels que l'agar-agar.
La culture in vitro de cellules d'organismes suprieurs, animaux ou vgtaux, pose davantage de
problmes dans la mesure o, contrairement aux prcdentes, ces cellules sont normalement
intgres au sein d'un organisme et donc le plus souvent tributaires, pour leur croissance,
d'interactions avec d'autres cellule.
Dans cette partie, nous allons dvelopper la culture des cellules animales. Les autres types de cultures
seront dvelopps dans dautres modules.

4.1. Source des cellules

Il sagit de diffrentes catgories de cellules : cellules normales, cellules transformes, cellules
tumorales Le choix dpend de lobjectif de la culture.

4.2. Milieux de culture

Les cellules doivent tre places dans des milieux de culture qui permettent de les nourrir et leur assurer
de bonnes conditions de survie. En mme temps, le milieu comprend des substances qui stimulent la
multiplication et le dveloppement des cellules.

Exigences cellulaires minimales apports par des base communes (milieux Hanks, Earl, PBS,
Gey)

eau
ions minraux donnant une osmolarit identique celle du srum physiologique
source de carbone et d'nergie (glucose par exemple)
source d'azote : acides amins
source dacides gras

28
 pH constant 7,4 (indicateur de pH : rouge de phnol) grce un systme tampon
CO2/HCO3- ou phosphates.
Complments variables selon les milieux (RPMI, MEM, DMEM) : acides amins, vitamines,
cofacteurs, bases azotes, ribose et dsoxyribose.
facteurs de croissance cellulaire (apports parfois par le serum de buf ftal)

EGF (facteur de croissance pidermique),

FGF (facteur de croissance fibroblastique)
PDGF (facteur de croissance driv des plaquettes)
Facteurs de diffrenciation comme fibronectine (ancrage des cellules).
Inhibiteurs comme lalpha1 antitrypsine (neutralisation de laction enzymatique de
la trypsine).
4.3. Conditions de mise en culture
La culture est trs sensible aux contaminations. La culture des cellules doit se faire dans des conditions
garantissant labsence de toute forme de contamination par dautres
cellules comme les microorganismes. Cest ce quon appelle conditions
de strilit ou dasepsie. Un ensemble de prcautions sont ainsi prises
toutes les tapes de la culture.

Le matriel et les milieux utiliss pour la culture sont striliss par :

- Lutilisation de lautoclave la temprature de 121C et une

pression de 1 Kba.
- Certains milieux fragiles sont passs dans des filtres millipores.
- Certains rcipients en plastique sont garantis striles par le
fabricant.
- Certains milieux comprennent des antibiotiques.

La culture de cellules impose l'utilisation de la hotte flux laminaire ou poste de scurit

microbiologique afin dviter la contamination pendant le travail densemencement et/ou de repiquage.

Le PSM est une enceinte qui permet de travailler strilement SANS FLAMME. L'air y est constamment
filtr par des filtres absolus. Le mouvement de l'air, assur par un puissant ventilateur, permet d'tablir un
flux laminaire d'air strile sur le plan de travail. La protection de l'oprateur est assure par une vitre
l'avant de l'enceinte: il pourra ainsi viter sa contamination par les virus manipuls ou par les cellules
dont les acides nucliques pourraient ventuellement lui tre transmis.
29
Le PSM est aussi utilis dans la culture des tissus vgtaux et dans des installations industrielles, pour la
fabrication de composants lectroniques et des disques cdrom ou
DVD.

Au sein de la hotte, des prcautions supplmentaires doivent tre

prises :

- Une petite flamme ou un systme de strilisation thermique

permet de striliser les instruments comme les pinces les
ciseaux
- Le pipetage doit se faire soit par le systme Pipet aid , soit par
les systmes cnes striles.

4.4. Conditions dincubation des cultures

La fragilit des cultures cellulaires impose le contrle strict des conditions de lenvironnement. Ainsi, en
gnral, les rcipients sont placs dans les conditions suivantes :

37C
84% d'humidit
5% de CO2, le CO2 formant systme tampon avec HCO3- du milieu et permettant ainsi un
maintien du pH de la culture 7,2-7,3 (ce qui est attest par le rouge de phnol).

Ces conditions sont assures par un incubateur CO2 (tuve CO2). Cet incubateur prsente les avantages
suivants :

o temprature contrle comme pour un tuvage classique

o hygromtrie contrle
o CO2 contrle

4.5. Diffrents types de cultures

On distingue :

des cultures primaires issues de la multiplication de cellules (souvent de nature embryonnaire)

prleves directement dans les organismes, aprs que leurs tissus aient t dissocis par des enzymes

30
 appropries (protases). La multiplication de ces cellules s arrte lorsque la surface du milieu est
couverte : cest linhibition de contact.
des cultures secondaires, qui rsultent du repiquage de cellules issues de cultures primaires, aprs
dilution et ensemencement dans du milieu nutritif neuf. Ces cultures sont terme condamnes
mourir, comme celles de l'organisme de dpart, aprs environ 50 100 divisions: on parle de souches
cellulaires ;
des lignes cellulaires
ou cellules
immortelles ayant
perdu linhibition de
contact et peuvent se
multiplier
indfiniment suite
des mutations
spontanes
(ponctuelles ou
rarrangements chromosomiques) ou grce des agents chimiques ou physiques mutagnes, par des
Virus ou bien par des manipulations gntiques (transfection d'ADN purifi).
Parmi les lignes cellulaires immortalises, on distingue enfin des lignes dites transformes, qui
induisent des tumeurs si on injecte leurs cellules des animaux sains.

4.6. Intrt des cellules en culture

Lexamen des cellules en culture a apport une contribution considrable la connaissance du
fonctionnement de la cellule. Ces techniques permettent en effet:

Dans les recherches fondamentales pour ltude des phnomnes de diffrenciation, de

ddiffrenciation, les mcanismes du cycle cellulaire
dans l'industrie pour des tudes de toxicologie (notamment en raison des problmes
d'exprimentation animale, exprimentation animale qui ne peut malgr tout pas tre supprime
car les effets sur l'animal entier ne sont pas les mmes que sur des cellules isoles),
Dans le domaine de la sant pour les tudes chromosomiques (caryotype ftal), la production
de peau neuve par culture pour autogreffe ultrieure (pour les grands brls), la culture des virus
(production de vaccin ou diagnostic).

31
5. Marquage des molcules
5.1. Dfinition
Le marquage des molcules est la fixation, sur une molcule, d'un signe de reconnaissance facilement
identifiable qui autorise le suivi d'un compos dans un organisme, un organe, un tissu ou dans la cellule.
Le marquage utilise soit les isotopes radioactifs (autohistoradiographie), soit des composs fluorescents.

5.2. Techniques immunocytochimiques

Limmunocytochimie est l'application la cellule de techniques fondes sur l'antignicit des protines
afin de les localiser de manire spcifique et de suivre leur volution. .

5.2.1. Prparation des anticorps

Un anticorps spcifique de l'antigne (protine) tudier, est prpar
par injection de cet antigne purifi un animal appartenant une
autre espce que celle dont on a extrait l'antigne inject. Lanimal
trait synthtise un 'anticorps spcifique contre cet antigne.
Lanticorps ainsi obtenu se fixe sur la protine qui est l'origine de sa
fabrication.

5.2.2. Marquage de l'anticorps

Afin de visualiser le complexe antigne-anticorps, on associe l'anticorps un systme marqueur (ou
rvlateur) compos d'une molcule dtectable en microscopie:

une substance fluorescente (par exemple l'isothiocyanate de fluorescine)

une enzyme (peroxydase du raifort, phosphatase alcaline) lorigine de la production dun
prcipit color.
marqueurs
mtalliques (ferritine,
or collodal) utiliss
essentiellement en
microscopie
lectronique.

32
 5.2.3. Techniques de dtection
Immunocytochimie directe: Les anticorps reprables par leur marqueur se fixent sur leur
antigne. Le complexe antigne-anticorps-marqueur est alors dtectable en microscopie.
Immunocytochimie indirecte: elle permet d'augmenter la sensibilit de la raction, en combinant
deux types d'anticorps: les anticorps anti-protine (anticorps primaires) qui ne sont pas porteurs
de marqueurs et des anticorps anti-anticorps primaires (anticorps secondaires) porteurs de
marqueurs. La prparation est d'abord traite par des anticorps primaires: ils se combinent avec la
protine X puis les
anticorps secondaires
se fixent alors sur les
anticorps primaires.

5.2.4. Exemple
dapplication :
la mobilit des
protines
On injecte un lapin des
cellules de souris maintenues
en culture in vitro. Le lapin
ragit en produisant des
anticorps anti-cellule de
souris. Ces anticorps sont
marqus la fluoresceine
(fluorescence verte au
microscope lumire U-V).
On injecte un autre lapin
des cellules d'homme en
culture. Le lapin ragit en
produisant des anticorps
anti-cellule d'homme, ces anticorps seront marqus la rhodamine (fluorescence rouge au microscope
lumire U-V).

33
On provoque la fusion entre les cellules de souris et les cellules humaines. Il se forme des htrocaryons
contenant chacun un noyau de souris et un noyau humain.

Au temps T=0mn: on ajoute l'htrocaryon un mlange d'anticorps marqus par la rhodamine et la

fluorescine, pour identifier la position des glycoprotines (antignes) de l'homme et de la souris dans la
membrane de l'htrocaryon ;

5mn aprs l'addition du mlange d'anticorps marqus, on observe au microscope U-V, une fluorescence
rouge d'un hmisphre de l'htrocaryon et une fluorescence verte de l'autre hmisphre. Donc les
anticorps marqus se sont fixs sur les antignes correspondants cd les glycoprotines membranaires.

40 mn aprs l'addition des anticorps marqus, on observe au microscope U-V, une fluorescence
homogne (verte et rouge) sur toute la surface de l'htrocaryon.

Donc le complexe antigne-anticorps de type souris et de type humain se sont mlangs dans la
membrane de l'htrocaryon. On peut conclure que les protines membranaires se dplacent ou
diffusent dans la membrane plasmique.

5.3. Marquage par des isotopes radioactifs

Le principe de cette technique repose sur l'insertion dans une molcule donne un isotope radioactif la
place d'un atome stable naturellement prsent dans cette molcule. La molcule ainsi marque est suivie
beaucoup plus facilement dans l'organisme ou dans un tissu.

En gnral, le protocole est bas sur le modle Pulse-chase qui comprend deux tapes :

Pulse : cest lexposition des cellules vivantes, pendant une priode brve, un prcurseur
fortement radioactif assimilable.
Chase : les cellules subissent de nombreux lavages afin dliminer les prcurseurs radioactifs non
assimils. Elles sont ensuite incubes sans radioactivit. Lexprience consiste ensuite suivre le
cheminement de la radioactivit dans la cellule.

Lintrt de cette technique est double: elle peut permettre de suivre les transformations de la molcule
marque en dautres molcules dans les voies mtaboliques. Elle peut permettre aussi de suivre la
radioactivit travers les diffrents compartiments cellulaires.

34
La radioactivit est suivie par deux types de techniques :

- Les compteurs de type Geiger ou de type scintium qui dtectent la radioactivit et la transforment
en signal lectrique mesurable.
- Autohistoradiographie : Une mulsion photographique liquide est verse (en chambre noire) sur
la prparation. En schant, elle forme une pellicule sur les cellules. Les rgions occupes par
l'isotope rduisent l'argent leur contact. La coupe est traite, aprs plusieurs jours d'exposition,
comme une pellicule photographique (rvlateur puis fixateur), de telle sorte que les grains
d'argent rduit apparaissent. Les techniques d'autohistoradiographie sont trs efficaces pour
tudier la rpartition de nombreuses molcules, leur dplacement ainsi que les fonctions
cellulaires.

Exemple: le marquage de la cystine par du soufre 35 permet de connatre le chemin qu'elle parcourt dans
le cartilage. La cystine marque est injecte plusieurs rats: ils sont sacrifis des intervalles rguliers
aprs l'injection. Le cartilage prlev est prpar pour un examen en microscopie optique ou en MET.

5.4. Marquage par des substances fluorescentes

Un analogue fluorescent rsulte du couplage de la molcule tudier avec un colorant fluorescent. Cet
analogue est introduit dans la cellule par micro-injection avec une micropipette de verre dont l'extrmit
a un diamtre de l'ordre du micron. Il est ainsi facile de suivre, grce la microscopie pifluorescence
ou confocale, la dynamique des microtubules en injectant un analogue fluorescent de la tubuline coupl
une molcule de rhodamine. Les analogues se polymrisent en MT qu'il est alors possible de voir
individuellement bien que leur diamtre est peine suprieur au pouvoir de rsolution de la microscopie
optique.

35
 Chapitre 4
La membrane plasmique

1. Dfinition
Cest la membrane qui limite la partie vivante de la
cellule et la spare du milieu externe. Son paisseur est de
75 .

2. Structure membranaire
2.1. Au microscope lectronique transmission
La membrane est impossible observer au microscope
optique.

Le microscope lectronique transmission permet de

dcouvrir faible grossissement (environ 40000 50000 fois), une structure simple, dense et noire.

Un grossissement plus fort (>150000x) rvle une

structure trilaminaire avec: deux feuillets denses (20)
de nature protique entourant un feuillet clair (35) de
nature lipidique: Modle de Davson et Danielli (1954).

Cette structure trilaminaire sobserve aussi dans membranes

internes (membrane de la mitochondrie, des plastes, du reticulum
endoplasmique): on parle dunit membranaire.

36
 2.2. Observation lintrieur de la membrane par cryofracture
Cest une technique qui
permet dobserver les
structures ou les
molcules lintrieur de
la membrane. Son
principe est le suivant:

l'chantillon
tudier est plong
-170C (azote
liquide) ou -200C
(propane liquide).
l'chantillon est
fractur en deux
parties. La ligne de
fracture passe par
bicouche lipidique
de la membrane de
moindre rsistance.

un alliage de platine et de carbone est projet sur la surface fracture, avec

un angle de 45. Le mtal se dpose avec une paisseur qui varie selon le
relief de la surface: on obtient une rplique de la surface fracture.
une couche uniforme de carbone est vaporise 90 afin d'augmenter la
rsistance mcanique de la rplique.
l'chantillon couvert de sa rplique de [platine / carbone] est dpos sur une
grille de microscope lectronique transmission.
Le carbone est travers par les lectrons mais le platine les arrte plus ou
moins totalement selon l'paisseur rencontre par le faisceau d'lectrons. Un
film photographique traduit les informations sur le relief en contraste de
gris.

La cryofracture rvle ainsi la localisation

des protines membranaires et met en
vidence des protines intgres dans la bicouche lipidique de
disposition diffrente entre la face E (exoplasmique) et la face P
(protoplasmique):les protines intrinsques.

37
 2.3. Revtement fibreux glucidique ou glycogalyx
Ce revtement est localis la surface externe de la membrane
plasmique. Il sagit de chanes glucidiques attaches soit aux
protines soit aux lipides membranaires

2.4. Mobilit des protines et fluidit membranaire

On procde la fusion de deux cellules diffrentes: des cellules de souris marques par la fluorescine
qui met une lumire verte (visible) et des cellules
dHomme marques par la rhodamine qui met une
lumire rouge.

La cellule hybride ou htrocaryon parait moiti verte et

moiti rouge 5 mn. Mais 40 mn, les marquages vert et
rouge sont disperss sur toute la surface membranaire.

Donc, les protines membranaires sont mobiles:

La membrane est donc fluide.

38
3. Organisation molculaire de la membrane plasmique
3.1. Composition chimique de la membrane
Lanalyse chimique de la membrane plasmique montre quelle est forme de:

60% de protines et glycoprotines

40% de lipides (surtout des phospholipides)

3.2. Les lipides membranaires

Il y a trois catgories principales de lipides membranaires :

Les phospholipides

Les glycolipides

Les strols
Tous ces lipides sont amphiphiles: ils prsentent 2
ples:

Un ple hydrophile ou lipophobe

Un ple hydrophobe ou lipophile

Ces lipides amphiphiles dirigent leur ple
hydrophile vers leau et les ples lipophiles sont
protgs de leau. Par consquent, ces lipides
adoptent spontanment plusieurs conformations comme:

Des monocouches: une seule couche avec les ttes plonges dans
leau

Des micelles surtout lorsque leurs

chaines dacides gras sont courtes.

Des dispositions en bicouches

39
 Leau (rouge) est
limite aux cts
priphriques alors
que les parties
hydrophobes (jaune et
bleu) sont limtes
la partie centrale: cest
donc une disposition
en bicouche.

La disposition des lipides dans la membrane sont donc comme suit :

3.3. Les protines et les glucides membranaires

La membrane comprend aussi des protines. Il y a des protines extrinsques des cts
cytoplasmiques et externes et des protines intrinsques intgres dans la bicouche lipidique. Il y a
aussi le revtement lipidique ou glycocalyx du ct externe.
3.4. Modle molculaire de la membrane plasmique
40
La membrane plasmique est une structure fluide (mobilit des protines) forme dune bicouche
lipidique dans laquelle baignent des protines intrinsques comme une mosaque: cest le modle de
la mosaque fluide dcrit par Singer et Nicholson en 1972.

41
4. Fonctions de la membrane plasmique
La compartimentation (sparation de lextrieur et lintrieur de la cellule) et la protection de la
vie cellulaire.

La rgulation des changes cellulaires.

Les phnomnes de reconnaissance (antignes de surface)

La signalisation : rception et transduction des signaux du milieu extrieur (lumire,

hormone,.) ou dautres cellules (rcepteurs hormonaux, jonctions gap).

Procure un site pour les ractions chimiques ne pouvant pas se produire dans un environnement
aqueux

Les mouvements cellulaires (pseudopodes ).

5. Permabilit membranaire.
Il sagit du passage de leau et des molcules dissoutes
travers la structure membranaire. Il y a 4 types
fondamentaux de transport:

La simple diffusion travers la bicouche

lipidique.

La diffusion travers un canal aqueux.

Le transport facilit par un transporteur.

Le transport actif par une pompe.

5.1. La diffusion

La diffusion est le processus spontan au cours

duquel une substance se dplace dune rgion o une
concentration est leve vers une rgion de faible
concentration cest--dire selon la loi de losmose

a. Transport de leau

Leau se dplace, selon la loi de losmose, du

compartiment le moins concentr (hypotonique)

42
vers le compartiment le plus concentr (hypertonique). des contraintes cellulaires empchent parfois le
passage deau.

Ce transport se fait selon deux

processus:

Une diffusion lente travers la

bicouche lipidique.

Une diffusion rapide travers

un canal protique permettant le
passage spcifique des
molcules deau en file
indienne: les aquaporines

b. Transport des substances dissoutes

La permabilit membranaire aux

molcules dissoutes est influence par trois facteurs
principaux:

La liposolubilit favorise la passage travers la

membrane cause de la nature hydrophobe
(lipophile) de la bicouche lipidique membranaire.

La charge lectrique empche les ions (Mg++, K+,

Cl-) trs hydrats et trs hydrophiles de traverser la
bicouche lipidique de la membrane plasmique.

La taille limite la diffusion. Les petites molcules

traversent plus vite que les grandes ( liposolubilit
gale). La membrane est impermable aux
macromolcules comme les protines, les
polysaccharides et les acides nucliques.

43
 5.2. Transport par les protines membranaires

Les substances dissoutes qui ne peuvent pas diffuser par la membrane plasmique ncessitent
lintervention de 3 types de protines membranaires: les canaux, les pompes ou les transporteurs ou
facilitateurs.

a. Canaux

Les canaux sont des

protines intrinsques en
pores permettant
certains ions ou des
molcules de petite taille
de traverser la bicouche
lipidique par milliers
voire millions d'ions dans
le sens du gradient
lectrochimique. Cest une autre forme de diffusion.

Il y a des canaux ouverts de faon

constante ou constitutive.

Dautres souvrent suite une

excitation lectrique (cellules nerveuses
et musculaires ou un tat osmotique
particulier (cellules pithliales du rein).

b. Transporteurs ou facilitateurs

Les transporteurs ne
font passer quun
nombre limit dions et
prsentent un
fonctionnement qui
rappelle les

44
mcanismes enzymatiques. Cest un transport passif qui se fait dans le sens du gradient de diffusion et ne
ncessite pas dnergie.

c. Pompes

Ce sont des transporteurs actifs qui assurent le passage contre le gradient et donc ncessitent la
consommation dATP.

Exemple: pompe Na+/K+ dans la cellule pithliale de lintestin

Les ions Na+ se fixent au

niveau de 3 sites de la
pompe ouverte vers
lintrieur de la cellule.
L ATP est ensuite fixe
et dgrade par la pompe
qui change de
conformation pour souvrir
vers lextrieur.
Les Na+ sont librs vers
lextrieur et les K+
occupent deux sites.
Les 2 K+ sont librs
lintrieur aprs le retour de
la pompe ltat de repos.

d. Cintique de transport

La diffrence entre les trois types de transports est rvle

par la vitesse de transport de llment en fonction de sa
concentration:

Le transport dun lment est linaire dans le cas

dune diffusion simple.
Dans le cas dun transport facilit, il y a un palier qui
montre lexistence dun tat de saturation.
Dans le cas dun transport actif, le transport ne se
fait quen prsence dune source dnergie.

45
d. Diffrents sens de transport

Les transporteurs passifs et actifs fonctionnent selon trois systmes:

Systme uniport transport dune molcule travers la membrane laide dun transporteur
Systme symport transport simultan de deux substances dans le mme sens (ex. glucose et
Na+)
Systme antiport
transport simultan de deux
substances dans des sens
opposs (ex. Na+/K+).

e. Transport actif secondaire

Le transport facilit peut parfois dpendre dans son fonctionnement dun transport actif
concomitant..

Exemple la cellule pithliale de lintestin

Dans ces cellules, le transport du glucose se fait par des

transporteurs passifs. Mais ce transport ne se fait que si une
pompe sort le sodium de la cellule: cest un transport
actif secondaire.

46
5.3 Echanges par endocytose et exocytose

Ce sont des processus de transport impliquent des

phnomnes de fusion des bicouches lipidiques
membranaires aprs que celles-ci se soient
troitement juxtaposes. Les substances absorbes
(endocytose) ou scrtes (exocytose) sont toujours
squestres (enfermes) par une membrane et ne se
mlangent jamais avec les constituants du
hyaloplasme.

a. Endocytose
Processus par lequel la cellule ingre des liquides, des macromolcules, des particules et parfois mme
dautres cellules dans une vsicule membranaire qui se dtache de la membrane plasmique.
Ces phnomnes prsentent des caractristiques communes:

1) ils impliquent des phnomnes de fusion des bicouches lipidiques membranaires aprs que celles-ci se
soient troitement juxtaposes
2) les substances absorbes ou scrtes sont toujours squestres par une membrane et ne se mlangent
jamais avec les constituants du hyaloplasme. Il existe donc une certaine parent biochimique entre
membranes des vsicules et membrane cytoplasmique.

On distingue deux processus dendocytoses:

la pinocytose (au sens tymologique, la boisson de la cellule), qui est l'ingestion de fluides ou
de macromolcules, au moyen de petites vsicules de diamtre autour de 150 nm.

la phagocytose qui est labsorption de grosses particules ou de cellules, au moyen de vsicules

de diamtre toujours suprieur 250 nm, et pouvant mme atteindre plusieurs m: les
phagosomes (l'alimentation de la cellule).

Il y a une forme de pinocytose non spcifique qui permet dingrer de leau et des soluts sans
concentration: cest la pinocytose en vrac ou pinocytose en phase liquide.

47
Par contre, la pinocytose dpendante de
la clathrine dbute par:

linvagination de disques
paissis de la membrane
plasmique appels puits
recouverts.

Ces zones sont recouverts, sur leur face cytoplasmique par un

rseau de protines hexagonales appel clathrine.
Les protines formant ce rseau sont appeles triskelions.

Cette forme de pinocytose est plus efficace et plus spcifique: les substances transportes sont dabord
reconnues et fixes par des rcepteurs (protines transmembranaires) ce qui permet une concentration du
contenu des vsicules.

b. Phagocytose

Cest lingestion de grosses particules comme des

microorganismes ou des dbris cellulaires dans de grosses
vsicules ou vacuoles appeles phagosomes (>250 nm).
On les trouve dans des cellules spcialises: globules blancs
(macrophages et neutrophiles) qui luttent contre linfection
48
 et contre des cellules snescentes ou endommages et des dbris cellulaires.

Lors de la phagocytose dune bactrie, par exemple, les anticorps se lient la surface des bactries
infectieuses en laissant une rgion expose lextrieur. Ces rgions seront reconnues et lies aux
rcepteurs dans la membrane des macrophages et des neutrophiles.

Cette liaison dclenche la formation de pseudopodes qui engouffrent la particule et fusionnent leur
extrmit ( la manire dune fermeture clair) pour former un phagosome.

b. exocytose
Lexocytose se produit surtout par fusion des vsicules golgiennes avec la membrane plasmique (voir
chapitre le systme endomembranaire: appareil de Golgi).

5. Signalisation
La cellule reoit des signaux de diffrentes natures: molcules chimiques, hormones,
neurotransmetteurs, infection etc On les appelle les molcules informatives .
Il sagit de communication intercellulaire, souvent distance se faisant entre deux types de cellules:
La cellule de transmission synthtise le signal (molcule informative) et le fait sortir, souvent par
exocytose, dans le milieu extracellulaire.
La cellule cible capte le signal grce des rcepteurs sur sa membrane plasmique.
un rcepteur qui est une protine spcifique compose de deux parties:
- rcepteur externe
- partie catalytique interne qui provoque une rponse cellulaire: cest la transduction (rception dun
signal externe et formation dun deuxime signal intracellulaire pour y rpondre).
Exemple: cas de linsuline
Cest une hormone protique (51 aa), hydrophile. Cette hormone est synthtise dans le pancras et agit
49
au niveau du foie et dautres cellules (cellules cibles).
Linsuline (molcule informative) reconnat les cellules cibles grce aux rcepteurs spcifiques de la
membrane plasmique (500 100 000 rcepteurs/cellule).

Le rcepteur hormonal est une protine intrinsque transmembranaire compose de 2 parties:

Une partie externe avec un site spcifique de reconnaissance de lhormone

Une partie interne enzymatique qui provoque une cascade de ractions en rponse linformation
reue. Il peut y avoir une amplification de leffet selon divers mcanismes comme le nombre de
rcepteurs sur la surface
membranaire.

50
 Chapitre 5
Le hyaloplasme

1. Dfinition
Cest la substance fondamentale de la cellule dans laquelle baignent les organites. Il reprsente 50
60% du volume cellulaire.
Le hyaloplasme avec les organites (sans le noyau) constituent le cytoplasme. Il comprend deux parties :
Une solution aqueuse complexe (cytosol).
Un rseau de filaments protiques: le cytosquelette

2. Composition chimique du cytosol

Eau: 70%
Protines: 15-20%
ARNm et ARNt
Divers soluts: sucres solubles, acides amins, nuclotides, composs organiques, ions
pH 7 (cellule animale)
pH 5,5 6 (cellule vgtale)
Le hyaloplasme peut tre solide (sous forme de gel) ou fluide (forme de sol )

Il y a dans le hyaloplasme de certaines cellules des rserves comme des

inclusions de glycogne (hepathocytes) ou des inclusions de lipides (tissu
adipeux, graines olagineuses).
3. Cytosquelette
Le cytoplasme des cellules eucaryotes est sillonn par plusieurs
types de structures fibreuses ou tubulaires qui participent la fois son
architecture et sa dynamique: le cytosquelette.

Il constitue la fois un squelette et une musculature pour la cellule.

51
Trois rseaux sont identifiables au microscope lectronique et en immunofluorescence chez les cellules
animales:

Microfilaments dactine

Microtubules.

Filaments intermdiaires.

Les cellules vgtales sont dpourvues de filaments intermdiaires.

3.1. Microtubules
3.1.1. Structure
Ce sont des structures tubulaires
linaires de 25 nm de diamtre.
Elles apparaissent sous forme de
rails en coupe longitudinale et
sous forme circulaire en coupe
transversale.

Le constituant principal est une protine

globulaire de 50 kDa: la globuline avec 2
sou-units et . Celles-ci constituent
spontanment des filaments linaires appels

52
protofilaments qui, groups cte cte par groupes de 13, constituent la paroi du microtubule.
Les microtubules sont toujours accompagns de protines annexes appels MAPs pour Stabiliser la
structure, organiser des difices complexes (centrioles, cils...) ou associer les microtubules dautres
constituants cellulaires.

3.1.2. Fonctions des microtubules

a. Constitution des Centrioles
Structures cylindriques de 0,5 m de long sur 0,2 de diamtre, constitus de 9 triplets parallles de courts
microtubules, forms chacun de 3 microtubules accols paralllement les uns aux autres et partageant 2
3 protofilaments. Le microtubule le plus interne est
entier et reli au centre par un bras radiaire. Les
centrioles vont
toujours par paires et
sont le plus souvent
situs proximit lun
de lautre en
disposition
perpendiculaire.

b. Constitution des cils et flagelles

Axonme

Fines structures digitiformes de 0,25 m de diamtre),

souples et mobiles, portes par la surface des cellules.

53
Longueur des cils : 5-10m et longueur des flagelles : jusqu 200 m.

Limits par la membrane plasmique et portent en leur centre un systme

complexe de microtubules noy dans le hyaloplasme: cest laxonme.

Laxonme est form de 9 paires de microtubules priphriques ( un

complet et lautre incomplet) et une paire centrale. Deux bras de dynine
partent de chaque doublet vers le doublet voisin. Des ponts tangentiels de
nexine unissent les doublets. Des fibres rayonnantes unissent les doublets
priphriques avec le doublet central.

Corpuscules basaux ou cintosomes

Ce sont des structures rencontres la base des cils et des flagelles. Ils ont
une organisation similaire celle des centrioles.

c. Constitution des faisceaux de division

Au cours de la mitose, le centrosome se duplique en 2 centrosomes fils. Chaque centrosome devient un

ple du fuseau. Le fuseau est constitu de deux types de microtubules: les microtubules polaires et les
microtubules kintochoriens.

54
 c. Transport interne de vsicules et
dorganites

Les microtubules peuvent guider les mouvements de

vsicules, de macromolcules, ou dorganites. Cest un
mouvement polaris . Par exemple, au niveau des
axones, les kinsines sont responsables du transport de
vsicules vers la terminaison nerveuse alors que les
dynines transportent leur chargement vers le corps
cellulaire (extrmit -).

d. Orientation des mouvements

cytoplasmiques et la diffrenciation dune forme cellulaire
Les microtubules et les myofibrilles participent lorientation de lallongement cellulaire lors de la
diffrentiation. Le traitement des cellules par des substances qui perturbent lallongement de ces fibres
bloque lallongement de la cellule.

55
 3.2. Microfilaments dactine
3.2.1. Structure
Ce sont des fibres fines contractiles de 7 8 nm dpaisseur,
constitues dune protine globulaire appele: actine. Elles sont
souvent organises en faisceaux

Ces microfilaments existent dans toutes les cellules eucaryotes

mais particulirement abondantes dans certaines cellules
comme les cellules musculaires (myofilaments) et les microvillosits de lpithlium intestinal. Elles
sont souvent localises dans le cortex (prs de la membrane plasmique) et sont relativement instables
(labiles): elles peuvent sallonger ou se raccourcir assez rapidement.

Ces microfilaments sont associs plusieurs types de protines accessoires qui servent comme :

Les protines de rassemblement

Les protines de stabilisation ou de fragmentation.
Les protines de coiffage

56
 Les myosines

3.2.2. Rles des filaments dactine

Elles servent souvent pour le soutien
hyaloplasmique comme dans les microvillosits de
la cellule intestinale.

Elles agissent aussi dans les mouvements cellulaires:

mouvements amibodes, cyclose dans la cellule vgtale.

57
 3.3. Filaments intermdiaires ou tonofilaments
3.3.1. Structure
Ce sont des fibres de 8 12 nm dpaisseur. Elles sont
constitues de protines fibreuses sous forme de monomres
qui diffrent selon le type cellulaire (6 groupes dont par
exemple, la kratine). Ils existent en particulier dans les cellules
pidermiques (tonofilaments) et les cellules nerveuses
(neurofilaments).
Rle de soutien cytoplasmique, en particulier au niveau des
jonctions intercellulaires comme les desmosomes.

Ces fibres ont un rle de soutien cytoplasmique, en particulier au niveau des jonctions intercellulaires
comme les desmosomes.

4. Activits mtaboliques du hyaloplasme

Le cytosol est un milieu aqueux riche en enzymes et des millions de substrats, ces derniers subissent des
modifications en chane constituant des voies mtaboliques.
58
Exemple dune voie mtabolique importante: la glycolyse.
Cest la dgradation de glucose-6-P pour former deux molcules dacide pyruvique.

4.1. Dfinitions
L ATP (adnosine-tri-phosphate) est la forme dnergie directement utilisable par la cellule. Les deux
derniers phosphates sont relis la molcule par des liaisons riches en nergie. La libration de lnergie
se fait par cette raction catalyse par lATPase :

ATP ADP + P + nergie, sous laction dune enzyme ATPase.

4.2. Co-enzymes transporteurs dH2

Une co-enzyme (molcule non protique) travaille en collaboration avec une enzyme en effectuant une
fonction prcise: ici le transport dH2.

NAD+, NADP+ (nicotinamide-adnine-dinuclotide (P)): formes oxydes, accepteurs dH2

NADH,H+, NADPH,H+ : formes rduites, donneurs dH2.

4.3. Droulement de la glycolyse

Cette voie permet la dgradation du glucose pour la formation dnergie. Elle se droule comme suit :

59
Raction nette:

Glucose + 2 NAD+ + 2 ADP+ 2 Pi 2 pyruvate + 2 NADH, H+ + 2 ATP +2 H2O

Le bilan de la glycolyse est le suivant :

formation dnergie sous forme dATP (2 molcules)

formation dacide pyruvique, substrat de la respiration (2)
formation de NADH+H+ (rducteur) (2)

60
61
 Chapitre 5
Le noyau

1. Organisation gnrale du noyau interphasique

Cest un organite gros, rfringent (renvoie la lumire) et facile colorer. Sa taille varie selon le type de
cellule et son activit. Le rapport nucloplasmique (volume du noyau divis par le volume du
cytoplasme) renseigne sur lactivit cellulaire.

Les principales structures du noyau interphasique sont:

lenveloppe nuclaire: cest une double membrane

en continuit avec le rticulum endoplasmique. Elle est
interrompue par endroits par des passages appels pores
nuclaires.
Les pores ne sont pas de simples trous. Cest une structure
organise comprenant environ 500 protines disposes
selon une symtrie dordre 8. Elle comprend un anneau
cytoplasmique li des filaments, un anneau
intermdiaire et un anneau nuclaire associ un
panier.
Ces pores servent rguler les changes entre le
cytoplasme et le noyau.
La face interne de lenveloppe nuclaire est tapisse
par une couche protique filamenteuse de 10 20
nm dpaisseur : la lamina. Elle donne au noyau sa
forme et sert aussi reconstituer lenveloppe
nuclaire aprs la mitose.
le nucloplasme: cest la substance
fondamentale du noyau forme par une matrice glatineuse contenant des ions, des protines, des
enzymes et des nuclotides. Elle assure une continuit entre
les divers constituants molculaires du noyau. les nucloles
la chromatine : cest la forme sous laquelle se
prsente le matriel gntique pendant linterphase. Elle
comprend une forme trs condense inactive appele
htrochromatine et une forme lche et diffuse appele
euchromatine. La structure de la chromatine sera dveloppe
dans le prochain paragraphe.

62
 Le nuclole est une structure
dense, bien individualise et de forme sphrique. Il nest pas entour dune membrane lipidique.

Au microscope lectronique, le nuclole montre

plusieurs structures formes de 3 zones :

un centre fibrillaire correspondant aux

organisateurs nuclolaires qui expriment les
ARNr ;
une zone fibrillaire dense qui correspond la
partie active du nuclole contenant les ARN.
Une zone granulaire constitue de particules de
15 25 nm. Cest la zone de stockage des
pr-ribosomes.

Le rle des nucloles est la formation des ribosomes.

Les gnes appels organisateurs nuclolaires ralisent la transcription dune partie des ARNr qui
sassocient avec dautres ARN et avec des protines (issues
du cytoplasme) pour former les prribosomes qui se
sciendent en petite et grosse sous-unit.

63
2. Organisation du matriel gntique de la cellule
2.1. Structure de lADN
La structure de la molcule dADN a t tablie en 1953 par Crick et Watson qui ont eu le prix nobel.

Cest une molcule

forme de deux longues
chanes de nuclotides
(double brin) enroules
en double hlice gauche.

Chaque brin est constitu de prcurseurs appels nuclotides.

Chaque nuclotide est constitu dun acide phosphorique, dun dsoxyribose

(sucre) et dune base azote.

Il existe quatre types de bases azotes :

ladnine (A), la thymine (T), la
guanine (G) et la cytosine (C).

La succession des nuclotides au niveau dun

brin dADN varie au sein de la mme molcule et
entre les molcules de diffrents individus et

64
diffrentes espces : on parle de squence dADN. Cette squence constitue une information gntique
crite avec un alphabet 4 lettres.

Les deux chanes de nuclotides sont relies au niveau des bases azotes. Ladnine est toujours associe
la thymine (A-T), la cytosine est associe la guanine (G-C) : on dit que les deux chanes sont
complmentaires.

Les brins sont polariss il y a une extrmit 3 et une extrmit 5. Dans une molcule dADN,
lextrmit 3 est en face de lextrmit 5 de lautre brin : les deux brins sont antiparallles.

LADN dun individu donn est divis en diffrentes parties chacune gouvernant un caractre donn. Ces
fragments sont appels gnes.

Les diffrentes versions du mme gne issues gnralement de mutations sont appeles allles.

65
 2.2. Organisation du matriel gntique chez les eucaryotes : de la
chromatine aux chromosomes
LADN des cellules eucaryotes se combine avec des protines basiques appeles
histones pour former des structures appeles nuclosomes. Ces structures
contiennent 4 paires de particules protiques histones (H2A, H2B, H3 et H4)
entoures deux fois par le filament dADN dune longueur de 60 paires de base
(pB). Entre les nuclosomes, il y a une partie internuclosomique associe une
histone H1. Cette fibre nuclosomique condense lADN de 6 7 fois.
La fibre nuclosomique se condense par la suite en une fibre plus paisse dite fibre de 30 nm. Ce mode de
condensation divise encore la communaut scientifique. Il existe deux modles
plausibles :
Le modle solnode : les nuclosomes se
condensent en hlice raison de six par tour et
tous parallles laxe de lhlice. La structure
est stabilise par H1.
Le modle en zigzag avec hlice double dpart:
cest la succession de petites units condenses
en tetranuclosomes en zigzag.
Il y a des donnes exprimentales qui semblent suggrer
que le modle solnode concerne la chromatine au repos et lautre concerne la
chromatine active.
La fibre de 30 nm condense aussi lADN de 6 7 fois.
La fibre de 30 nm subit des niveaux de condensation suprieurs permettant le
passage de ltat de chromatine la ltat de
chromosomique visible pendant des mitoses. Ainsi,
la fibre forme dabord des boucles appeles
microconvules. Ces boucles condensent encore
lADN denviron 10 fois.
Le passage ultime de la chromatine condense au
chromosome se fait par le regroupement des boucles
en rosettes et leur ancrage une charpente centrale
du chromosome forme de protines non histones.
Cette tape permet de condenser lADN denviron 20 fois.
Ce processus permet de passer dune longueur totale de 1,90 m pour lADN
humain une longueur de 220 m correspondant la longueur totale des
chromosomes. Cest une condensation denviron 8000 fois.

66
3. Transmission de linformation gntique : mitose et
miose
Le matriel gntique est un ensemble dinstructions qui
doivent tre transmises la descendance. Cette transmission
ncessite dabord la cration de copies supplmentaires pour
que les cellules disposent chacune de sa copie. On appelle ce
processus la rplication.

3.1. Rplication de lADN

La rplication seffectue par l'ADN polymrase qui carte
progressivement les deux brins de la molcule d'ADN (yeux
de rplication) et permet des nuclotides libres, prsents dans le noyau de se fixer chacun en face de la
base azote du nuclotide qui lui est complmentaire. Ainsi, chaque brin dADN sert de matrice pour la
synthse dun nouveau brin.
La rplication dbute divers endroits de la molcule et progresse en sens inverse, formant des yeux de
rplication . La rplication est acheve lorsque les yeux se rejoignent.

Chaque nouvelle molcule comprend un brin nouveau et un brin ancien : la rplication est
semi-conservative.

3.2. Le droulement de la mitose

La mitose est un processus continu, mais on peut y distinguer 5 tapes difficiles dlimiter.
3.2.1. Prophase
Les chromosomes commencent se condenser sindividualiser. Lenveloppe nuclaire et le nuclole
disparaissent. Un fuseau achromatique, constitu de microtubules apparat entre les deux ples.
3.2.2. La mtaphase
Les chromosomes, au maximum de leur condensation, se positionnent l'quateur du fuseau pour former
plaque quatoriale .
3.2.3. L'anaphase
Le fuseau tire sur les deux chromatides qui se sparent et migrent vers les ples de la cellule.

3.2.4. La tlophase
Les chromatides se disposent en deux lots polaires et commencent se dcondenser, l'enveloppe
nuclaire se forme autour de chaque lot de chromosomes et achve ainsi la formation des deux noyaux
fils, le fuseau mitotique disparat.
67
 3.2.5. Cytodirse
Cest le partage du cytoplasme aboutissant la sparation finale des deux cellules filles.
Chez les animaux, la cytodirse s'effectue par un simple tranglement du cytoplasme dans la rgion
quatoriale de la cellule.
chez les vgtaux, cette sparation est plus complexe et fait intervenir des vsicules golgiennes charges
en substances paritales qui se disposent lquateur de la cellule pour former une paroi au moment o le
membranes qui les entourent constituent les nouvelles membranes.

68
69
 3.3. Mitose et cycle cellulaire
Les cellules qui se divisent rgulirement prsentent un ensemble dactivits structurales et mtaboliques
qui leur permettent de prparer et de raliser la mitose. Ces
transformations qui se succdent de manire rptitive sont
appeles cycle cellulaire. Sa dure est, en gnral entre 20 et
24 h.

Les tapes du cycle cellulaire peuvent tre aisment suivies

travers lestimation de la quantit dADN cellulaire un
moment donn.

Phase G1 (environ 8h) : priode qui suit la mitose et

se caractrise par une quantit minimale dADN et
des synthses actives permettant la croissance
cellulaire.

Phase S (environ 8h) : priode de rplication de

lADN en 2 chromatides atteste par une
augmentation progressive vers le doublement de la
quantit dADN.

Phase G2: (environ 8h) : les cellules contiennent une

quantit dADN double avec production denzymes
et de facteurs de rgulation indispensables la
mitose. La fin de cette phase G2 est marque par la
phosphorylation de nombreuses protines.

Phase M (1 2 h): priode de division proprement dite et de partage gal du matriel hrditaire
entre les 2 cellules filles issues dune division.

70
 3.4. Chromosome mtaphasique et caryotype
Pendant la mtaphase, les chromosomes atteignent leur condensation
maximale et sont disposs sur un seul plan (plaque quatoriale). Leur
visibilit est maximale ce stade et apparaissent ddoubls en deux
chromatides. Ils prsentent un certain nombre de caractristiques
structurales :
Le centromre ou constriction primaire : tranglements prsents au
niveau de tous les chromosomes. Cest le dernier point de contact
entre les chromatides avant leur sparation. Il comprend un complexe
de microtubules appel chintochore.
La constriction secondaire : tranglements prsents sur certains
chromosomes qui correspondent lemplacement habituel des
organisateurs nuclolaires au repos pendant la mitose.
Les tlomres : Ce sont des squences dADN particulires formes
de nombreuses rptitions de courtes squences (GGGTA chez
lHomme) et situes aux extrmits des chromosomes. Elles sont
impliques dans la
stabilisation et la protection
des extrmits
chromosomiques. Leur
longueur se raccourcit aprs
chaque division ce qui laisse
penser quils jouent un rle de
mesure du temps comme un
sablier).

A partir de lobservation de la plaque

mtaphasique, on peut reproduire les chromosomes et les prsenter de manire organise : cest le
caryotype.

Lexamen du caryotype montre que le nombre et la morphologie des chromosomes sont stables
chez une espce donne (2n = 46 chez lHomme) et tous les chromosomes sont prsents par paires :
on parle de chromosomes homologues.

Selon la position du centromre, on distingue 3 types de chromosomes:

Les chromosomes acrocentriques: le centromre divise le chromosome. en 2 bras ingaux.
Les chromosomes mtacentriques: le centromre divise le chromosome en 2 bras gaux.
Les chromosomes tlocentriques: le centromre est en position terminale.

71
 3.5. La miose
La miose est une division complexe qui se droule dans les cellules de la ligne germinale (cellules
mres des gamtes).
Les cellules somatiques comprennent, en gnral, des chromosomes par paires ou chromosomes
homologues. LHomme, par exemple, possde 23 paires de chromosomes (2n = 46). On dit que les
cellules somatiques sont diplodes. Par contre, les gamtes (spermatozodes et ovules chez lHomme)
doivent possder uniquement 23 chromosomes, on dit quelles sont haplodes. Ltat diplode est
restaur lors de la fusion entre les gamtes mles et femelles ou fcondation.

La miose comprend 2 tapes:

Une premire division rductionnelle pendant laquelle le nombre de chromosomes est rduit de
moiti
Une deuxime division dite quationnelle qui ressemble troitement la mitose.
Chacune de ces divisions comprend plusieurs tapes et sous tapes :
72
Prophase I: cest une phase la fois importante et complexe. Elle est subdivise en 5 tapes.
Leptotne : cest le dbut de condensation des chromosomes qui commencent sindividualiser.
Zygotne : les chromosomes homologues sapparient c'est--dire se rapprochent par un
processus appel synapsis aboutissant la formation du complexe synaptonmal. Ils se croisent
certains endroits formant des chiasmas.

Pachytne : les chromosomes continuent leur condensation formant des ttrades.

Diplotne : les chromosomes scartent lgrement et restent attachs au niveau des chiasmas.
Diacinse : les chromatides sont fortement contracts et commencent rejoindre lquateur de la
cellule.
Mtaphase I : les bivalents se disposent en plaques quatoriales avec formation du fuseau achromatique
et disparition de la membrane nuclaire et des nucloles.
Anaphase I : les chromosomes homologues se sparent et migrent vers les ples. La rupture des chiasmas
aboutit lchange de morceaux de chromosomes entre les chromosomes homologues.
Tlophase I : formation de noyaux fils haplodes.
Prophase 2: Disparition de lenveloppe nuclaire et Formation du fuseau achromatique.
Mtaphase 2: Les chromatides se placent au centre de la plaque quatoriale.
Anaphase 2 : sparation des chromatides qui migrent vers les ples opposs.
Tlophase 2 E: Formation de 4 cellules haplodes rsultant des 2 divisions chromatiques.

Consquences de la miose :
Formation de cellules gamtiques haplodes.
Rpartition indpendante des chromosomes dorigine paternelle et maternelle : brassage
interchromosomique.
Echange de fragments de chromosomes ce qui modifie lordre des allles sur le chromosome :
brassage intrachromosomique.

73
4. Expression de linformation gntique: synthse de protines
4.1. Rappel de la structure des protines
Une protine est un ensemble dacides amins relis entre
eux par une liaison peptidique entre la fonction COOH
dun acide amin et L fonction NH2 de lacide amin
suivant. Les protines diffrent la fois par le nombre
dacides amins et par leur enchainement ou leur
squence.
Dans une protine, on peut trouver plusieurs chaines
peptidiques. La protine peut aussi comprendre une
partie non peptidique.
Il a t prouv par ltude de mutants quil y a une
colinarit entre la squence du gne et la squence de
la protine. Linformation porte par le gne (ADN)
consiste en une squence prcise de nuclotides qui
indique lenchainement des acides amins au niveau de la
protine.

4.2. Structure des ARN

LARN se distingue de lADN par 3 caractristiques : simple brin,
porte luracile au lieu de la thymine et le ribose la place du
dsoxyribose.
Il y a 3 types dARN :
- LARN message : simple brin linaire
- LARN ribosomal.
- LARN de transfert repli en forme de trfle et portant un
acide amin et un triplet caractristique lanti-codon

4.3. La transcription de lADN en ARN

La synthse dbute par la synthse dune copie du gne sous forme dune
molcule dARN appel ARN messager.

Les ARN sont des acides nucliques comme lADN mais ils diffrent par 3
caractristiques: ils ont un seul brin, possdent le ribose au lieu du
dsoxyribose. La thymine est remplace par luracile.
ARN messager est synthtis par complmentarit avec lun des brins de
l'ADN utilis comme matrice. Ce processus est appel transcription. Le
schma suivant rsume ses principales tapes :

74
75
LARNm obtenu a une squence complmentaire par rapport au brin dADN transcrit et identique par
rapport au brin non transcrit part T qui est remplac par U.
Un mme gne est transcrit simultanment en
plusieurs ARNm. Les ARNm synthtiss se
dtachent de l'ADN et migrent dans le
cytoplasme par les pores de l'enveloppe
nuclaire.

L'ARNm est une copie phmre du gne

(dure de vie de quelques minutes).

Chez les procaryotes, la transcription permet de former directement un ARN messager immdiatement
utilisable pour ltape suivante. Par contre, chez les eucaryotes, la transcription forme un ARN dit
prmessager. Cet ARN comprend des tronons qui persisteront dans le futur ARNm, ce sont les exons et
des tronons qui seront limins appels introns.

Lors dun processus appel pissage, les introns sont coups et limins et les exons sont raccords entre
eux pour former lARN messager.

76
Un mme ARN prmessager peut subir un pissage diffrent suivant plusieurs facteurs comme le type de
cellule ou le moment de la transcription. Certains exons peuvent ou non tre retenus. La consquence est
quun mme gne peut donner plusieurs protines diffrentes. De ce fait, la diversit des protines
(protome) dun organisme donn dpasse largement le nombre de ses gnes: on parle dpissage
alternatif.

4.4. La traduction
La traduction est la synthse de chanes peptidiques au niveau du cytoplasme selon le message port par
lARNm issu de la transcription.

4.4.1. Le systme de correspondance : code gntique

La relation entre squence de
nuclotides et la squence dacides
ncessite un systme de
correspondance entre les deux
langages.

Il nest pas possible de faire

correspondre un nuclotide avec un
acide amin parce quil ny a que
77
quatre nuclotides pour 20 acides amins. La correspondance entre un doublet de nuclotides avec un
seul acide amin nest pas non plus possible du moment quil nexiste que 42 = 16 doublets possibles

Il faut donc trois nuclotides pour dsigner les 20 acides amins. Le problme est quil existe 4 3 = 64
triplets possibles. Donc, la plupart des acides amins sont cods par plusieurs triplets ou codons.

Ce systme de correspondance entre triplets nuclotidiques et acides amins est appel: code gntique.

Le code gntique prsente les caractristiques suivantes :

Il est redondant (ou dgnr) : certains acides amins sont cods par plusieurs codons.

Il est univoque : chaque codon ne code que pour un seul acide amin.

Il est universel : le code gntique est le mme pour tous les tres vivants (animaux, vgtaux et
bactries). Cette universalit est en faveur d'une origine commune toutes les espces.

Il existe mathmatiquement 64 triplets de nuclotides diffrents. Parmi les 64 codons possibles dont trois
codons ne correspondent aucun acide amin : ce sont des codons STOP.

La traduction se fait au niveau de petits organites cytoplasmiques appels

ribosomes. Ce sont des particules formes de deux sous units: la grande et la
petite. Ces ribosomes parcourent lARNm triplet par triplet et chaque triplet
fait appel un acide amin.

4.4.2. Les ribosomes

Organites hyaloplasmiques de taille voisine de 20 nm. Dcrits pour la 1re
fois en 1950 sous le nom de grains de Palade ( du nom de Georges Palade qui
les a dcouverts). Ils sont soit libres, soit accols aux membranes du
rticulum endoplasmique.

Les ribosomes sont constitus de 2 sous-units de tailles diffrentes, la petite

et la grosse sous-unit qui peuvent se dtacher. Ils sont constitus dARN
(65%) et de protines (35%).

Il y a des diffrences entre les ribosomes des procaryotes et des eucaryotes :

78
Procaryotes: ,coef sed70S

Eucaryotes: coef sed 80S.

4.4.3. Droulement de la traduction

Pendant la traduction, linformation porte par lARNm est traduite en une squence prcise dacides
amins (AA) pour constituer une protine. Cest un processus qui se droule au niveau des ribosomes qui
sassocient avec lARNm pour lire le message et lui faire correspondre les acides amins selon le code
gntique.

La traduction fait
intervenir aussi des
ARN particuliers dits
ARNt. Cest une
molcule
monocatnaire replie
en forme de trfle.
Elle comprend deux
sites importants : un
rsidu adnine
lextrmit 3 sur
lequel se fixe un acide
amin de manire
covalente et un triplet de nuclotides particulier appel anticodon qui peut reconnaitre et se fixer sur le
codon correspondant sur lARNm. LARNt est donc ladaptateur qui associe un triplet de lARNm avec
lacide amin correspondant selon le code gntique.

La synthse dune chane peptidique se fait en 3 tapes: linitiation, llongation et la terminaison. Le

schma suivant rsume les principaux vnements :

79
80
81
82
83
84
85
 Chapitre 7
Les systmes de conversion de lnergie

1. La mitochondrie
1.1. Structure
Cest un organite en forme de btonnet (1 4 m de longueur ; 0,3 0,7 m de diamtre). Il est entour
par une double membrane :

Une membrane externe de 60

dpaisseur, forme de trois feuillets,
60% protines/ 40% lipides

Une membrane interne de 60

dpaisseur plus riche en protines
(80%) et impermable la
diffusion de H+ (protons).

Un espace intermembranaire
denviron 100 de largeur spare
les deux membranes.

La membrane interne a une surface plus

grande par rapport lexterne. Elle forme des replis vers lintrieur appels crtes mitochondriales et qui
sont gnralement perpendiculaires au grand axe de la mitochondrie. La surface des crtes du ct de la
matrice est tapisse de sphres de 90 de diamtre qui sont relies la crte par un pdoncule : il
sagit dATP synthase qui catalyse la synthse dATP.

Lintrieur de la mitochondrie est occup par une substance fondamentale appele matrice. Elle
comprend de leau, des sels minraux, diffrentes molcules organiques et des enzymes. On distingue
aussi des granules denses de 300 environ (accumulations de cations).

La matrice comprend aussi une molcule dADN de forme circulaire (ADNmt) et des mitoribosomes. La
mitochondrie synthtise certaines de ses propres protines (environ 20%). Mais reste dpendante de
86
lADN nuclaire pour la synthse de la plupart de ces protines : On dit que la mitochondrie est un
organite semi-autonome.

1.2. Principale activit mtabolique : la respiration cellulaire

Il sagit dun ensemble de ractions de dgradation de la matire permettant la cellule de produire de
lnergie (ATP) avec absorption dO2 et dgagement de CO2. On peut la diviser en trois tapes qui
fonctionnent simultanment.
Premire tape: oxydation des substrats ou cycle de Krebs
Cest un ensemble de ractions en
forme de cycle se droulant dans la
matrice. Il est aliment principalement
par le pyruvate ou lacetyl-CoA et se
droulant au niveau de la matrice
mitochondriale.
La matire organique subit des
oxydations par se font par perte dH2
(dshydrognation) pour former des
+
NADH,H et des FADH2 tout en se
dgageant sous forme de CO2.
Le bilan de loxydation de lacide
pyruvique et dun Cycle de Krebs est le
suivant:
4 NADH,H+
1 FADH2
1 GTP

Deuxime tape: chane respiratoire

Cest une voie mtabolique de droulant au niveau de la membrane interne de la mitochondrie. Les
enzymes impliques dans cette voie constituent trois grands complexes intgrs dans la membrane et
spars par deux facteurs mobiles :

87
Les trois complexes sont :

Complexe NADH dshydrognase : gros complexe form de 22 chanes protiques.

Complexe cytochrome b-c 1 : protines comprenant un atome de fer ou de cuivre comme
transporteur dlectrons.
Complexe cytochrome oxydase

La chane respiratoire dbute par la dshydrognation du NADH,H+ par le complexe NADH

dshydrognase dans la membrane interne mitochondriale :

-
NADH,H+ NAD+ + 2H+ + 2 e-

Les lectrons seront transports le long de la chane respiratoire travers les diffrents complexes jusqu
laccepteur final qui est loxygne alors que Les protons H+ sont pomps vers lespace
intermembranaire.

2H+ + 2e- + O2 H2 O

Troisime tape: formation dATP: phosphorylation oxydative

Lors du transport dlectrons travers chacun des trois complexes enzymatiques respiratoires, une chute
importante de lnergie est enregistre qui est utilise pour le pompage de protons (H+) de la matrice vers
lespace intermembranaire.

88
Ce transport actif de protons met en place un
gradient lectrochimique de protons travers la
membrane interne : lespace intermembranaire est
plus concentr en H+ (gradient chimique) et plus
(+) (gradient lectrique) que ne lest la matrice qui a
une concentration moindre en protons, donc une
charge plus (-). Ce gradient favorise le retour des H+
dans la matrice travers les canaux protons au
niveau des sphres (ATP synthase) lies la
membrane interne et donnant sur la matrice.

LATP synthase utilise lnergie du flux protonique

pour synthtiser lATP partir dADP et Pi dans la
matrice. ADP + Pi + nergie ATP

Cest la phosphorylation oxydative puisque lnergie provient des H2 des substrats par oxydation

Bilan gnral de la respiration

A complter en cours

89
2. Le Chloroplaste
2.1. Structure et caractristiques
Cest un organite de forme: lenticulaire de 3-10 m de diamtre et 1-2 m dpaisseur et de couleur
verte sous microscope optique cause de sa richesse en chlorophylle.
Lultrastructure du chloroplaste montre quil est
entour de deux membranes sans pigments (60
dpaisseur; protines 60%/ lipides 40%).
La membrane interne est invagine vers
lintrieur pour former des thylacodes, sacs
membranaires aplatis et clos, disposs
paralllement au grand axe du chloroplaste et
riches en pigments. Il y a 2 types de thylacodes:
-thylacodes du stroma trs allongs
-thylacodes des granums, petits de forme
discode, empils entre les thylacodes du
stroma
La membrane des thylacodes porte sur sa face
interne des-sphres identiques celles de la
mitochondrie du ct du stroma (ATP synthase).
La couleur verte de ces membranes est due la
prsence de complexes de pigments intgrs appels photosystmes.
Les thylacodes baignent dans une substance
fondamentale appele Stroma. Elle comprend de
leau, des ions et diffrentes molcules organiques
dont des enzymes.
Le chloroplaste comprend aussi un gnome (ADNct)
et des plastoribosomes : cest un organite
semi-autonome.

90
 2.2. Activit mtabolique du chloroplaste : la photosynthse
2.2.1. Dfinition de la photosynthse
La photosynthse est la synthse de molcules organiques partir du CO2 en utilisant la lumire comme
source dnergie.
- La photosynthse saccompagne dchanges gazeux : CO2 est absorb et O2 est dgag.
2.2.2. Les pigments photosynthtiques
La capture de la lumire pour la photosynthse ncessite la prsence de substances colores capables
dabsorber la lumire appeles pigments
photosynthtiques. Il y a des pigments
principaux reprsents par les
Chlorophylles (a et b) et des pigments
accessoires (carotnodes et
phycobellines).
Les chlorophylles ont un ple hydrophile
contenant un atome de Mg et un ple
hydrophobe: le phytol (chane carbone
20 C). Leur spectre dabsorption
comprend 2 pics respectivement 650
nm (rouge) et 450 nm (bleu).
Les carotnodes sont des pigments liposolubles jaunes-oranges forms dune chane carbone avec des
cycles aux deux extrmits. Son pic dabsorption est 500nm (vert).
Tous ces pigments sont groups dans des complexes appels photosystmes : Ces derniers sont de deux
types : PSI et PSII.
2.2.3. Capture de lnergie lumineuse : la phase claire
Lnergie lumineuse est capte par pigments photosynthtiques. Labsorption dun photon par la
molcule provoque la dlocalisation dun lectron de son orbite vers lorbite suprieure : on dit que la
molcule est excite. Lnergie de lexcitation est libre nouveau de trois manires : mission de
lumire ou de chaleur, transfert de lexcitation par rsonnance et enfin ionisation par mission de
llectron.

Le photosystme est
form dantennes
collectrices qui
91
absorbent la lumire pour la transfrer de molcule
molcule, et un centre ractionnel form de chlorophylle a qui
ralise lionisation considr comme un acte photochimique.
La phase claire dbute par cet acte photochimique o la
molcule de chlorophylle a perd un lectron qui est transfr
diffrents accepteurs selon ce quon appelle un schma en Z.
La chlorophylle rcupre son lectron par la raction de
photolyse de leau
: H2O 2H+ + 2e- + O2
Le schma en Z
permet la formation
de lATP la rduction
dun NADPH2 :
lnergie lumineuse
est transforme en
nergie chimique.
Comment se fait la
synthse de lATP ?
Au cours du transfert
des lectrons ; les
protons sont pomps
vers lintrieur du thylacode ce qui cre
un gradient de pH qui active lATP
synthase : cest la photophosphorylation.

92
 2.2.4. Rduction du CO2 : phase sombre
Cette phase a lieu dans le stroma
utilise les produits de la phase
claire sont ncessaires pour la
synthse des glucides : cest le
cycle de Calvin.
Le CO2 est intgr dans une
molcule organique par
lenzyme la plus abondante chez
les vgtaux qui est la Rubisco.
Ce CO2 est ensuite rduit grce
au NADPH2 et lATP pour le
transformer en glucide.

3. Comparaison entre les deux types de phosphorylations

Voir cours

93
 Chapitre 8
Les systmes endoembranaires

1. . Ultrastructure
1.1. Reticulum endoplasmique
Cest un ensemble complexe de membranes
dlimitant des cavits closes ou citernes et
comportant 2 faces: la face hyaloplasmique
tourne vers le cytosol.et la face luminale:
tourne vers la lumire des citernes.
Le Reticulum endoplasmique existe sous 2
formes : : le RE rugueux ou granulaire ou
ergastoplasme qui porte des ribosomes sur sa
face hyaloplasmique (face externe) et le RE
lisse ou agranulaire (R.E.L) qui ne porte pas
de ribosomes. Il peut tre en continuit avec
le R.E.R.
Les deux systmes sont en continuit.

94
 1.2. Appareil de Golgi
Cest un ensemble de
structures membranaires
appeles
Le dictyosome. se prsente
sous laspect dune pile de
saccules aplatis empils les
uns sur les autres et sont
spars par une mince bande
de hyaloplasme de 200 .
dpaisseur avec des vsicules
troitement associes. Il est
constitu de membranes lisses
(sans ribosomes) de 60 75
dpaisseur qui dlimitent des
cavits aplaties ou saccules.
LAG prsente 3
compartiments, contenant
chacun au moins 2 saccules ou citernes :
Un compartiment cis, tourn du ct du RER avec lequel il tablit des interrelations par des
vsicules de transition. Il correspond la face de formation ou face externe.
Un compartiment mdian qui comporte quelques saccules rgulirement empils.
Un compartiment trans, prolong le plus souvent par de trs nombreuses vsicules. Il correspond
la face de maturation ou face interne.

95
2. Rles physiologiques
2.1. Mtabolisme des lipides
Les membranes du rticulum possdent tout lquipement enzymatique ncessaire pour faire de
nombreuses ractions du mtabolisme des lipides.
La biosynthse des phospholipides pour le renouvellement des membranes. La synthse se fait
par longation et dsaturation partir dacides gras simples prsents dans le hyaloplasme.
La biosynthse des triglycrides est effectue par le R.E.L. Par ex: des cellules situes sous la
peau (adipocytes) et dont la fonction est de stocker des lipides possdent un R.E.L abondant.
La biosynthse du cholestrol seffectue surtout dans les hpatocytes o un important REL est
dvelopp.
La synthse des hormones strodes partir du cholestrol (testostrone, progestrone, cortisone)
a lieu aussi au niveau du R.E.L.

2.2. Synthse, routage et modificatons posttraductionnelles

2.2.1. Transfert de chanes polypeptidiques dans les cavits du RE: thorie du
peptide-signal
Les ribosomes attachs aux membranes du rticulum endoplasmique synthtisent des protines qui, au
cours de leur longation, ne restent pas dans le hyaloplasme mais sont dirigs vers diffrentes autres
destinations.

Les chanes polypeptidiques transfres dans les cavits du RE sont caractrises par lexistence dune
squence hydrophobe situe en dbut de chane appele squence-signal ou peptide-signal.

96
 Cette squence apparat en premier et attire une particule SRP se trouvant dans le cytoplasme.qui
se fixe sur la squence et sur le site P du ribose bloquant ainsi provisoirement la synthse.
La SRP se fixe sur un rcepteur de la particule SRP qui se trouve sur la membrane du RER et qui
permet la fixation du ribosome sur cette membrane.
Ds que le complexe ribosome + particule SRP se fixent sur le rcepteur de la SRP, la
squence-signal va sassocier des protines de la membrane et les rapprocher les unes des autres
pour former un tunnel. Ces protines du tunnel sont galement les rcepteurs spcifiques sur
lesquels vont sattacher la grosse sous-unit, 60S du ribosome.
Au fur et mesure que le peptide est synthtis, il traverse le tunnel et passe dans la cavit. La
squence-signal est alors excise par une enzyme: la signal-peptidase (hydrolase).
Lors de la terminaison (fin de la synthse protique), le polypeptide dpourvu de son
peptide-signal est libr dans la cavit du R.E.R.
Le ribosome se dtache de la membrane et de lARNm.
Ntant plus tenues par la grosse sous-unit 60S, les protines du tunnel diffusent dans la
bicouche lipidique et se sparent les unes des autres, ce qui entrane la disparition du tunnel.
Les protines synthtises peuvent avoir plusieurs destines en fonction des signaux de routage quils
portent : membranes ; protines secrtes, enzymes des lysosomes et autres.

97
 2.2.2. Glycosylations
Ce sont des ractions enzymatiques qui seffectuent dans les membranes du rticulum endoplasmique.
Ces ractions, catalyses par des enzymes membranaires spcifiques appeles:les glycosyl-transfrases,
consistent en laddition doligosaccharides une protine ou un lipide formant une glycoprotine ou un
glycolipide.
Elles commencent dans le R.E.R et se poursuivent dans le dictyosome o les molcules formes (les
glycoprotines et glycolipides) peuvent subir des modifications.

2.2.2.1. La N-glycosylation
Au niveau du RE, une seule espce doligosaccharide, constitue de N-actylglucosamine, de mannose et
de glucose, est ajoute la majorit des protines synthtises.
Loligosaccharide ajout
est normalement li un
lipide membranaire, le
dolichol.
Laddition de
loligosaccharide se fait au
niveau du groupement
amine (NH2) de
lAsparagine de la protine
synthtise do le nom de
N-glycosylation.
La protine subit une premire modification par liminationn de quelques motifs glucidiques avant de
quitter le rticulum puis elle peut subir des modifications similaires dans lappareil de Golgi.

2.2.2.2. La O-glycosylation
Ces glycosylations seffectuent uniquement au niveau de lappareil de Golgi. La protine, synthtise au
niveau du rticulum rugueux, reoit des glucides au niveau de loxygne de certains acides amins
comme la lysine et la thronine chez les animaux ou lhydroxyproline chez les animaux. Ces
glycosylations mnent soit des protines faibles quantits de glucides appeles glycoprotines ou des
protines fortes quantits de glucides appeles protoglycanes.

98
 2.2.3. Tri des protines
Aprs leur synthse, les protines sont transfres dans les cavits du RER. Certaines peuvent rester dans
le rticulum si elles sont spcifiques. Les autres sont transportes dans les cavits de lappareil de Golgi
par les vsicules de transition. A ce niveau, les protines subissent beaucoup de modifications
posttraductionnelles puis elles sortent de ce compartiment par bourgeonnement de vsicules. Chaque
cellule porte un signal de routage et dadressage qui dtermine sa destination. Ces protines ont trois
destines possibles :
Les vsicules qui
subissent lexocytose
contribuent au
renouvellement de la
membrane travers le
contour de la vsicule qui
fusionne avec la
membrane et apporte
une zone neuve.
Scrtion des protines
lextrieur de la cellule.
Ces scrtions sont de
deux catgories : des
scrtions continues ou
constitutives et des
scrtions contrles qui
se font suit des signaus reus par les cellules. Dans ce dernier cas, les vsicules sont
enveloppes de clathrine.
Formation des lysosomes qui restent dans la cellule.

2.3. La dtoxication
La membrane du rticulum endoplasmique lisse contient des enzymes qui catalysent une srie de
ractions de dtoxication des substances liposolubles et des composs dangereux produits par le

99
mtabolisme (drogues, mdicaments et autres) Ces ractions de dtoxication sont catalyses par les
cytochromes P450.

2.4. Synthse de polysaccharides et formation de la paroi squelettique.

A la fin de la tlophase, des vsicules golgiennes se
positionnent lquateur de la cellule et commencent et
commencent fusionner. Leur membrane constitue des
partiee de membranes plasmiques permettant sparer les
cellules filles. Le contenu apporte les matriaux
ncessaires a constitution de la paroi (polysaccharides
de type pectines et hmicelluloses ; protines
enzymatiques). La cellulose est par la suite forme
directement au niveau de la paroi. Ces processus
permettent la sparation des deux cellules filles.

100
3. Les lysosomes
3.1. Structure
Ce sont des vsicules qui renferment un mlange dhydrolases (enzymes digestives) formes par fusion
de vsicules golgiennes.
Ils sont associs la digestion intracellulaire dlments absorbs par les cellules grce lendocytose.
Ils peuvent aussi tre impliqus dans des cas beaucoup plus rares de digestion extracellulaire par
mission denzymes de dgradation vers lextrieur pour dgrader des substrats et absorber des produits
de la dgradation par endocytose.
Ce sont des vsicules limites par une membrane simple et lisse de 7,5nm dpaisseur et 0,5 m de
diamtre, parfois
plusieurs ms. Le
contenu de la lumire,
amorphe ou granulaire,
est en gnral trs
htrogne.
Les lysosomes
contiennent plus de 50
d enzymes: Protases,
nuclases,
glycosidases, lipases, phosphatases... Ce sont des hydrolases,
capables de dgrader la plupart des composs organiques connus,
et dont lactivit optimale se situe des Ph entre 6 et 8.
Ils sont impliqus dans des fonctions de digestion de substrats
varis dorigine intra ou extracellulaire.
La membrane des lysosomes doit tre rsistante aux enzymes
contenues dans la lumire, afin de protger le cytoplasme de
lattaque de ces dernires :
Elle contient une protine fonctionnant comme une pompe
protons ( H+) ATP dpendante. Cette pompe doit
permettre le passage des ions H+ de faon maintenir un
pH acide.

101
 Elle est plus permable aux composs hydrophiles que la plupart des membraness cellulaires
internes.
Elle contient de nombreuses protines porteuses, ce qui facilite la diffusion des divers
mtabolites.
Elle doit permettre la sortie vers le cytosol des produits rsultant de la digestion effectue
lintrieur du lysosome,ce qui implique la prsence de permases.
Elle prsente une capacit rsister aux attaques enzymatiques. Les mcanismes ne sont pas
encore connus, mais il semble que la membrane du lysosome soit protge de lintrieur par un
revtement glycoprotique qui forme un vritable manteau protecteur.
Quand une vsicule contenant des nutriments et forme par endocytose fusionne avec un lysosome I aire,
il y a constitution dun lysosome II aire .
3.2. Rles physiologiques
On distingue 2 types de digestion intracellulaire lautophagie ou digestion de substrats dorigine interne
et lhtrophagie ou digestion de substrats dorigine externe.

3.2.1. Rle dans la digestion intracellulaire

3.2.1.1. Lautophagie
Elle consiste dans la digestion par les
lysosomes, de matriel internes aux
cellules elles-mmes. Elle se caractrise
par la prsence de gros lysosomes II
aires remplis de dbris dorganites et qui
sont en cours de digestion. On parle de
vacuoles autophagiques ou
autophagosomes Elle permet la
destruction de vieux organites et
lautodestruction des cellules mortes.
Elle contribue au renouvellement
constant des organites et au recyclage de
la matire vivante.

102
 3.2.1.2. Lhtrophagie
Elle est associe aux fonctions de nutrition et de protection contre des organismes extrieurs.
Ex: Globules blancs = macrophages spcialiss dans la dfense de notre organisme.
Lorsque la bactrie est prsente dans le milieu, le macrophage met dans la direction de celle-ci des
pseudopodes(fines bandes de cytoplasme) qui lenveloppe.
Les pseudopodes se rejoignent, et la bactrie est alors enferme dans une vsicule d endocytose de
grande taille appele phagosome ou vacuole de phagocytose.
Une autre tape va consister dans la rencontre de plusieurs lysosomes I aires avec le phagosome et aprs
fusion membranaire, le contenu enzymatique de ces lysosomes est dcharg dans la lumire de ce
dernier.
On obtient un phagolysosome ou lysosome IIaire , au sein duquel les hydrolases acides vont digrer les
substrats absorbs ( la bactrie capture).
Dans ce cas, les lysosomes jouent un rle dans la dfense de lorganisme par digestion des corps
trangers.

3.2.2. Rle dans la digestion extracellulaire

Cest lmission denzymes de dgradation vers lextrieur pour dgrader des substrats et absorber des
produits de la dgradation par endocytose.

103
4. Les Peroxysomes
4.1. Dfinition et caractristiques
Ce sont des sortes de vsicules de forme: en gnral
sphrique, avec un diamtre allant de 0,2 1,5 m. Ils se
forment par linvagination de vsicules partir du RE
rugueux. Ils sont Limits par 1 seule membrane de 60
dpaisseur. (70 % protines et 30 % lipides) Ils sont
disperss dans le hyaloplasme et sont parfois associs
dautres organites (chloroplastes, mitochondries) ou
inclusions cytoplasmiques (globules lipidiques).

Le peroxysomes renferment une matrice granuleuse avec souvent des inclusions structure cristalline de
nature protique.

4.2. Fonctions des peroxysomes

4.2.1. Chez les animaux
Les peroxyysomes renferment 2 grandes familles
denzymes : les oxydases: qui catalysent loxydation de
substrats partir dO2 molculaire avec production de H2O2.
Et les catalases:qui dcomposent H2O2 produite par les
oxydases, H2O2 et qui est toxique pour les cellules.

R1H2 + O2 R1 + H2O2

R2H2 + H2O2 R2 + H2O

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Chez les vertbrs, le catabolisme de ladnine et de la guanineconduit la formation dure et dacide
glyoxylique (poissons et amphibiens) et dacide urique ( Homme et les oiseaux) les enzymes qui
catalysent ces ractions sont des flavoprotines localises dans la matrice des peroxysomes.

Le mtabolisme des lipides ou oxydation des acides gras se droule dans la matrice des peroxysomes et
celle des mitochondries.

4.2.2. Chez les vgtaux

Dans les peroxysomes des graines olagineuses en
germination, lactyl-coA produit par la -oxydation
alimente le cycle glyoxylique en se condensant avec lacide
oxaloactique d une part et lacide glyoxylique d autre part
permettant la noglucogens (production de glucides partir
des lipides.

La photorespiration est une voie parasite de la

photosynthse pendant le jour. Elle consomme loxygne et dgage le CO2 (comme la respiration) mais
sans production dnergie. La photorespiration commence dans les chloroplastes. Un produit
intermdiaire est transport des chloroplastes vers les peroxysomes pour tre ensuite modifi
chimiquement.

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