Departamentul de Inginerie Chimic i Biochimic,

Universitatea Politehnica din Bucureti

{ Biotehnologii
conf. dr. ing. Iuliana Jipa
iulia.jipa@yahoo.com

2016 - 2017
Structura cursului:
Capitolul 1 Elemente introductive
Capitolul 2 Microorganisme de importan industrial
Capitolul 3 Materii prime n biotehnologii
Capitolul 4 Consideraii asupra realizrii industriale a proceselor
biochimice
Capitolul 5 Procedee de sterilizare n biotehnologie
Capitolul 6 Fermentaia de regim
Capitolul 7 Reactoare biochimice
Capitolul 8 Separarea i purificarea produselor de biosintez
Capitolul 9 Aplicaii ale biotehnologiei n domeniul proteciei mediului
 Scopul procesrilor ulterioare fermentaiei:
- ndeprtea substanelor strine (impuritile);
- reducerea volumului total, concomitent cu concentrarea produsului util;
- purificarea produsului.

Una din caracteristicile proceselor biochimice l constituie:

- concentraia mic a produsului biosintetizat n substrat;
- labilitatea structural a produsului biosintetizat (n multe cazuri);
ceea ce impune acordarea unei atenii deosebite etapelor de separare i
purificare.

Operaiile de separare i purificare se aleg n funcie de:

- natura, concentraia din substrat, proprietile fizico-chimice, locul de obinere
(extracelular sau intracelular) al produsului
- cantitatea i proprietile substratului care trebuie prelucrat.

Separarea i purificarea produselor reprezint cheia instalaiilor biochimice,

care influeneaz semnificativ economicitatea procesului.

Metodele de separare i purificare, condiiile de operare i utilajele n care se

realizeaz trebuie s asigure o eficien maxim la cheltuieli minime.
Schema general de separare i purificare a metaboliilor din mediile de fermentaie
SEPARAREA BIOMASEI

Filtrarea;
Sedimentarea / decantarea;
Flocularea i flotaia;
Centrifugarea;
Separarea cu membrane.

n scopul mbuntirii operaiei de separare a fazei solide se apeleaz la floculare n primul

rnd pentru a crete dimensiunile particulelor solide.
Centrifugarea se folosete n cazul n care produsul se obine intracelular, n timp ce filtrarea
se folosete n cazul produilor extracelulari.
 SEPARAREA BIOMASEI

FILTRAREA
este operaia cea mai comun de separare a unui sistem eterogen lichid-solid sau
gaz-solid;
const n reinerea particulelor solide aflate n suspensie pe o structur poroas;
alegerea echipamentului adecvat trebuie s in seama de o seri de factori:
proprietile sistemelor disperse ce urmeaz a se separa: - vscozitatea;
- densitatea;
natura fazei solide: - forma i dimensiunile particulelor;
- distribuia granulometric;
- caracteristica de vrac;
raportul solid/lichid;
faza care se recupereaz: - lichid;
- solid;
- ambele;
volumul ce urmeaz s fie separat;
modul de operare: - continuu;
- discontinuu;
necesitatea sau nu a condiiilor aseptice;
necesitatea crerii de suprapresiune sau depresiune pentru a asigura o vitez
adecvat de filtrare.
 SEPARAREA BIOMASEI

FILTRUL PRES
funcionare discontinu;
suprafa mare de filtrare concentrat ntr-un volum de dimensiuni relativ reduse;
operaia de filtrare este accelerat prin trimiterea suspensiei sub presiune de 3-4 at;
precipitatul rmne presat pe pnza filtrant iar filtratul se scurge prin canalele prevzute
n plci

Avantaje:
obinerea unui precipitat cu coninut
mic de umiditate
flexibilitatea condiiilor de operare
suprafa mare de filtrare
posibilitatea protejrii mpotriva
coroziunii
costuri de investiie sczute

Dezavantaje:
manoper voluminoas
uzur rapid a pompelor filtrante
splarea defectuoas a precipitatului
 SEPARAREA BIOMASEI

FILTRUL NUCE
funcionare discontinu
format dintr-un recipient cilindric sau paralelipipedic cu/fr capac
prevzut la baz cu un grtar sau plac poroas pe care se fixeaz pnza filtrant
filtrarea se produce datorit diferenei de presiune create ntre partea superioar i cea
inferioar, care poate rezulta datorit:
- presiunii hidrostatice a lichidului
- pomprii soluiei
- realizrii de vid la partea inferioar

Avantaje:
ndeprtarea avansat a lichidului din
precipitat (desecare avansat);
construcie simpl i exploatare uoar.

Dezavantaje:
manoper voluminoas n special la descrcare i
splare;
splare defectuoas (posibilitatea apariiei de
fisuri n precipitat).
 SEPARAREA BIOMASEI

FILTRUL CELULAR CU DISCURI ORIZONTAL SAU VERTICAL

poate fi operat ca filtru de presiune sau de vid;
constructiv se poate realiza ca una sau ambele fee ale discurilor s fie acoperite de mediu
pe parcursul filtrrii discurile sunt statice dar pot fi rotite la final, facilitnd evacuarea
lichidului.

Filtrul celular cu discuri vertical

Filtrul celular cu discuri orizontal
 SEPARAREA BIOMASEI

FILTRE ROTATIVE CU TAMBUR

funcioneaz cu vid;
folosesc n special la filtrarea maselor celulare;
asigur suprafa mare de filtrare si posibilitatea de splare si desecare a miceliului pe filtru.

Filtru celular Oliver: 1-tamburul filtrului, 2-celule, 3-pnz filtrant,

4-tuburi de legtur ntre celule, 5-arbore, 6-conduct pentru alimentarea suspensiei, 7-cuit pentru
desprinderea precipitatului, 8-cuv, 9-agitator pendular, 10-conduct pentru apa de splare
 SEPARAREA BIOMASEI

FILTRE ROTATIVE CU TAMBUR

funcionare continu;
funcioneaz cu vid;
folosesc n special la filtrarea maselor celulare;
asigur: suprafa mare de filtrare;
posibilitatea de splare a miceliului pe filtru;
- este format dintr-un tambur rotativ compus din doi cilindrii orizontali coaxiali;
- cilindrul exterior este perforat i acoperit cu material filtrant;
- spaiul dintre cilindrii este mprit n 10-12 celule etane, fiecare funcionnd succesiv i
independent ca filtru nuce;
- legtura dintre celule i conductele de vid (sau presiune, cu aer comprimat) se realizeaz
prin intermediul capului de distribuie iar ndeprtarea precipitatului de pe tambur se
face cu ajutorul unui cuit rzuitor;
- suprafaa tamburului este mprit n mai multe zone ce au roluri diferite:
- de filtrare;
- de uscare;
- de ndeprtare a precipitatului;
- tamburul are un grad diferit de scufundare n suspensia ce se filtreaz.
 SEPARAREA BIOMASEI

Sedimentarea/Decantarea:

- este operaia de separare a fazelor unui

amestec eterogen prin aciunea
difereniat a unui cmp de fore
(gravitaional, centrifugal) asupra
fazelor de densiti diferite;
- fora motoare: diferena de densitate
ntre faze;
- dup cum faza dispers are densitate
mai mic sau mai mare dect faza
continu (aici apa), particulele se depun
sau se ridic la suprafaa fazei continue.

- se vor aduga soluii de chimicale cu rol

de coagulare / floculare pentru
mbuntirea performanelor de separare
solid / lichid.
 SEPARAREA BIOMASEI

Sedimentarea/Decantarea: Factori de influen:

Grupa de factori Factorul de influen

Factori referitori la - concentraia fazelor (raportul solid lichid);
suspensie - cantitatea (debitul) suspensiei;
- vrsta suspensiei (din momentul formri ei);
- temperatura suspensiei;
Factori referitori la - natura fazei lichide;
faza lichid - densitatea fazei lichide;
- viscozitatea;
- concentraia de electrolii;
Factori referitori la - natura fazei solide;
faza solid - densitatea;
- granulometria i structura particulelor (granular, coloidal, mixt, etc.);
- tendina de aglomerare;
Factori referitori la - viteza de sedimentare a particulelor solide, curba de sedimentare;
operaia de separare - durata sedimentrii;
- concentraia i tipul adaosurilor utilizate;
- regimul de operare (continuu, discontinuu sau mixt);
- modul de evacuare al sedimentului (nmolul);
- tipul echipamentului utilizat.
Factori referitori la - concentraia fazei solide n nmol / decantat;
produsele rezultate - concentraia fazei lichide n nmol / decantat;
 SEPARAREA BIOMASEI

Flocularea i flotaia:
Operaia de antrenare a particulelor aflate n suspensie cu ajutorul unor bule de gaz (aer, azot,
etc.). Bulele se ataeaz de particulele solide, iar fora arhimedic a sistemului format este
suficient de mare pentru a cauza ridicarea particulelor spre suprafa. Particulele ce plutesc la
suprafa sub form de spum sunt apoi ndeprtate.

n epurarea apelor uzate flotaia se utilizeaz pentru ndeprtarea avansat a particulelor solide,
uleiurilor, hidrocarburilor, etc., chiar cu dimensiuni mici sau greu sedimentabile.

Reprezentare schematic a unui sistem de separare prin flotaie cu aer

 SEPARAREA BIOMASEI

Flocularea i flotaia:

Factori ce stau la baza proiectrii sistemelor de separare prin flotaie:

raportul gaz solid:
sarcina hidraulic:
adaosul de polimeri:
cantitatea de solide (ncrcarea):
- reprezint masa de solide pe or i unitatea de suprafa;

Exemplu: ngroarea nmolului biologic

- se obine spum cu 3 5 % s.u.;
- valorile tipice pentru ncrcare sunt 2 5 kg/h/m2;
- adaosul de polimeri permite creterea ncrcrii cu 50 100 %;
- valoare peste 10 kg/h/m2 produc deficiene operaionale;
- performana de ndeprtare a solidelor este de 98 99 %.
SEPARAREA BIOMASEI

Filtrarea;
Sedimentarea / decantarea;
Flocularea i flotaia;
Centrifugarea;
Separarea cu membrane.

n scopul mbuntirii operaiei de separare a fazei solide se apeleaz la floculare n primul

rnd pentru a crete dimensiunile particulelor solide.
Centrifugarea se folosete n cazul n care produsul se obine intracelular, n timp ce filtrarea
se folosete n cazul produilor extracelulari.
 SEPARAREA BIOMASEI

Centrifugarea:

este esenial atunci cnd:

- filtrarea se realizeaz cu dificultate i are durat mare (suspensii greu filtrabile);
- celulele sau alte materiale aflate n suspensie trebuie s se obin n stare ct mai
deshidratat;
- este necesar separarea continu i n condiii igienice avansate;
- nu se admit pierderi de lichid n precipitat;

se caracterizeaz prin:
- intensitate variabil datorit modificrii vitezei i distribuiei fa de axa de rotaie;
- direcie radial a cmpului de fore;

factorii care influeneaz viteza de sedimentare n cmp centrifugal sunt:

- viteza unghiular de rotaie;
- diferena de densitate dintre celule i faza lichid;
- diametrul (dimensiunea) celulelor;
- vscozitatea fazei lichide.
 SEPARAREA BIOMASEI

Centrifugarea:
Centrifuga cu camere
ideal pentru separarea suspensiilor cu pn la
5 % faz solid, cu dimensiuni ale particulelor
de 0,1 200 m;
particulele cele mai mici se colecteaz n
camerele exterioare unde sunt supuse unor
fore foarte mari;
manoper laborioas.

Centrifuga cu talere

separarea de emulsii, drojdii etc.

suspensia se alimenteaz central,
sufer o prim separare n tambur i
separarea se definitiveaz n spaiul
dintre talere
 SEPARAREA BIOMASEI

Centrifugarea: Centrifuga elicoidal orizontal

utilizat la separarea continu a
materialelor;
suspensia este alimentat printr-o conduct
central;
faza solid ce se depune pe perei este
raclat de ctre nucleul rotitor i dirijat
spre captul conic, a crui pant faciliteaz
i desecarea (eliminarea lichidului).

Centrifuga tubular (supercentrifuga)

realizeaz separri avansate nu numai de sisteme eterogene
lichid-solid, dar i lichid-lichid sau lichid-lichid-solid;
se rotete cu vitez mare (8000-45000 rpm);
faza solid se depune pe pereii tubului central n timp ce faza
lichid se separ n lichid dens i uor, care se capteaz separate.
Avantaje:
- realizarea unor fore centrifugale mari;
- realizarea unei desecri avansate.
Dezavantaje:
- capacitate limitat pentru faza solid;
- scderea eficienei separrii pe msura reumplerii.
 SEPARAREA BIOMASEI

Microfiltrarea:
este operaia de separare cu membrane a: soluiilor coloidale, suspensiilor de
particule de dimensiuni cuprinse ntre 0,2 i 10m (virusuri, bacterii, drojdii);
membranele de microfiltrare sunt n general materiale polimerice cu structur
cristalin;
n funcie de modul n care se rein particulele din suspensie se disting:
- filtrarea de suprafa: utilizeaza membrane cu diametrul porilor mai mic dect
diametrul particulelor;
- filtrarea n adncime: prin membran cu diametrul porilor mai mare dect
diametrul particulelor solide;
prin material filtrant cu o structur fibroas sau granular cu
interstiii de dimensiuni mai mari dect diametrul
particulelor.

Ultrafiltrarea:
este operaia de separare cu membrane a: soluiilor coloidale, suspensiilor de particule
de dimensiuni cuprinse ntre 0,02 0,2 m (inclusiv virusuri);
se aplic n procesele de tratare i epurara a apei pentru separarea nmolului biologic,
ndeprtarea impuritilor (inclusiv microorganisme).
Distrugerea membranei celulare
Se impune pentru eliberarea metaboliilor intracelulari, sau n cazul separrii unor
substane celulare (enzime, proteine).

Principalele metode se mpart n:

metode fizico-mecanice
mcinare umed
- suspensia de celule este supus unei
presiuni n interiorul unei valve
unidirecionale i traverseaz un canal ngust
dup care are loc o detent datorit lrgirii
seciunii de curgere;
- se lucreaz la presiuni mari i n multe cazuri este necesar recircularea materialului
pentru a obine o distrugere de maxim 90%;
- pentru a preveni pierderea din activitatea enzimatic datorit nclzirii suspensiei pe
traseu, se impune rcirea acesteia la temperaturi de 0 4C.
Distrugerea membranei celulare
metode fizico-mecanice

macinare uscat
- extrudarea sub presiune a microorganismelor ngheate la -25C printr-un orificiu
foarte mic pentru obinerea de enzime sau de membrane celulare;
- distrugerea peretelui celular se datoreaz efortului combinat al forfecrii lichide
prin curgere printr-un orificiu ngust i prezena cristalelor de ghea;
- se poate realiza o distrugere de 90 % a membranelor celulare la o singur procesare.

cicluri repetate de nghe-dezghe

- aplicate unei paste de celule microbiene cu formarea de cristale de ghea, urmat
de topire cu distrugerea ntr-o oarecare msur a membranelor celulare;
- procedeu lent, cu eliberare limitat a materialului intracelular;
- se folosete n combinaie cu alte tehnici.
Distrugerea membranei celulare
metode chimice:
tratare cu soluii alcaline produce hidroliza materialului peretelui celular;
tratare cu soluii de detergeni degradeaz lipoproteinele membranei celulare;
metode chimice:
metode enzimatice utilizare de enzime care provoac hidroliza unor legturi specifice n peretele celular;
oc osmotic modificarea brusc a concentraiei saline, care provoac distrugerea unor tipuri de celule.

pentru a se putea alege procedeul de separare adecvat, este necesar cunoaterea:

- proprietilor fizico-chimice ale metaboliilor:
solubilitatea - n soluii apoase de electrolii sau ap;
- n solveni polari, nepolari sau slab polari;
stabilitatea n soluie, funcie de: - pH, temperatur;
- efectul soluiilor tampon;
- prezena solvenilor organici;
- efectul liofilizrii.
stabilitatea n stare solid: - efectul temperaturii;
- efectul oxigenului i a umiditii;
proprietile fizico-chimice n soluie:
- posibilitate de adsorbie;
- migrare n cmp electric;
- sedimentare la (ultra)centrifugare;
- stabilitate la aciunea unor enzime sau ageni chimici.
- comportrii acestora n anumite condiii de mediu ambiant.
 SEPARAREA PRODUSELOR UTILE / PRODUILOR UTILI

Extracia cu solveni
operaie de separare a unuia sau mai multor componeni utili din amestecuri lichide omogene sau
solide, bazat pe diferena de solubilitate a componenilor ntr-unul sau mai muli dizolvani
corespunztor alei;
cuprinde etapele:
a. contactarea fazelor (mediu solvent);
b. separarea fazelor;
c. recupararea solventului.
Criterii de selecie a solvenilor:
- selectivitate, descris de coeficientul de repartiie;
- proprieti fizice (,) care s permit dispersarea uoar a fazelor;
- posibilitate de recuperare-recirculare;
- sigurana n exploatare;
- accesibilitate i cost redus.
solvent

rafinat

amestec

extract
 SEPARAREA PRODUSELOR UTILE / PRODUILOR UTILI

Extracia reactiv
- solubilizarea se realizeaz ca urmare a unei reacii chimice cu agentul de
extracie;
- extractanii: compui chimici organici cu structuri voluminoase, solubili, de
regul, n faz organic, capabili s reacioneze cu metaboliii i s formeze
compui solubili la rndul lor n faz organic.

Extracia cu fluide supercritice, tehnica permite:

- evitarea degradrii produselor extrase datorit condiiilor specifice de
operare;
- eficien sporit datorit proprietilor fizice (de solvatare, densitate,
viscozitate) deosebite;
- realizarea unei extracii complete i rapide cu o separare facil a fazei
extrase;
- cel mai folosit fluid n extractiile supercritice este dioxidul de carbon,
utilizat pe scar larg in industria alimentar, chimic, biotehnologie etc.).
SEPARAREA PRODUSELOR UTILE / PRODUILOR UTILI
 SEPARAREA PRODUSELOR UTILE / PRODUILOR UTILI

Adsorbia
procesul prin care unul sau mai muli componeni ai unui mediu omogen sunt reinui pe
un adsorbant (structur solid);
- este o operaie de separare datorit selectivitii adsorbantului, fracionnd amestecul
iniial n efluent i reinut pe solid;
- reinutul pe solid se ndeprteaz prin desorbie:
- nedestructiv: cu vapori supranclzii, cu aer cald sau prin nclzire sau
detent;
- destructiv: calcinare.

alegerea adsorbanilor se face n funcie de:

- suprafaa specific: raportul dintre suprafaa real de contact i masa solidului.
- capacitate de adsorbie: proprietatea unui adsorbant de a reine pe suprafaa sa o cantitate
determinat de substane adsorbit.

tipuri de adsorbani:
- crbune activ, crbune de oase, silicagel, pmnturi decolorante, alumin (Al2O3),
magnezie activ (MgO 90%, MgCO3 10 %).
 SEPARAREA PRODUSELOR UTILE / PRODUILOR UTILI

Schimbul ionic
face parte din categoria reaciilor de dublu schimb care au loc n sisteme eterogene: L S
(soluie de electrolit schimbtor de ioni) sau L L (soluie de electrolit schimbtor de
ioni lichid).
- ionii din soluia de electrolit nlocuiesc ionii de acelai tip din structura molecular a
schimbtorului de ioni;
- funcie de natura ionilor schimbtorii se clasific n:
cationii RH sau RNa:
- anorganici naturali sau sintetici: aluminosilicai, zeolii;
- crbuni fosili: turb, lignit, sulfonai;
- cationii pe baz de lignin, celuloz;
- rini - fenolice sau poliesterice sulfonate;
- carboxilice;
anionii ROH: rini aminice, melaminice.

Aplicaii n biotehnologie
purificare acid lactic, sucuri de fructe;

separarea streptomicinei pe sulfocationii puternic acizi i eluarea cu soluie de acid

sulfuric sulfat de streptomicin.
 SEPARAREA PRODUSELOR UTILE / PRODUILOR UTILI

Purificri cu membrane
Avantaje:
o posibilitatea separrii continue;
o condiii simple de operare;
o posibilitatea cuplrii cu procedeele tradiionale;
o costuri reduse de investiie i operare.

Cele mai utilizate n domeniul biotehnologiei sunt:

o microfiltrarea;
o ultrafiltrarea;
o electrodializa.

Electrodializa
- permite modificarea compoziiei sau concentraiei soluiei unor compui ionizabili prin
migrarea selectiv a ionilor sub aciunea cmpului electric.
- membranele de electrodializ trebuie s posede grupe ionizabile (membrane
schimbtoare de ioni)
- intensificarea fluxului de substan prin membran: suprapunerea peste diferena de
concentraie (c) a unei diferene de potenial datorat cmpului electric (U)
 SEPARAREA PRODUSELOR UTILE / PRODUILOR UTILI

Purificri cu membrane
Procesul de Tipul membranei Fora motoare Mecanism de Aplicaii
membran separare
Microfiltrare (MF) Simetric, Presiune Curgere capilar Filtrare steril,
microporoas hidrostatic i adsorbie limpezire
(0,2 5 m) (0,1 2 bar)
Ultrafiltrare (UF) Asimetric, Presiune Curgere capilar Separarea soluiilor de
microporoas hidrostatic macromolecule,
(0,02 0,2 m) (1 10 bar) polizaharide, virusuri
Nanofiltrare (NF) Asimetric, Presiune Curgere capilar, Separarea soluiilor de
nanoporoas hidrostatic difuzie i for molecule, mono-, di-,
(< 0,002 m) (5 35 bar) electrostatic oligozaharide, anioni
polivaleni
Osmoza invers (OI) Asimetric, Presiune Difuzie i for Separarea soluiilor de
nanoporoas hidrostatic electrostatic aminoacizi, proteine, ioni
(< 0,002 m) (15 150 bar)
Electrodializa (ED) Cationice i Potenial chimic Schimb de ndeprtarea ionilor din
anionice sarcin soluie
Membrane lichide Lichid Potenial chimic Solubilizare, Separarea ionilor i a
difuzie cu speciilor biologice
transportor
 SEPARAREA PRODUSELOR UTILE / PRODUILOR UTILI

Separri i purificri cromatografice

tehnica cromatografic se utilizeaz la izolarea i purificarea unor metabolii:
- este de fapt o adsorbie-desorbie selectiv a unor substane prezente ntr-o soluie,
care se realizeaz la trecerea soluiei prin coloana cromatografic;
- funcie de mecanismul prin care compuii se rein selectiv pe umplutur
cromatografic, tehnicile cromatografice se pot clasifica n:
cromatografie de adsorbie

- bazat pe adsorbia fizic prin legturi slabe de tip Van der Waals;
cromatografie de schimb ionic

- proces reversibil de schimb ionic ntre faza lichid respectiv cea solid;
- nu este nsoit de modificri structurale radicale ale fazei solide;
cromatografia de permeaie de gel

- separ moleculele pe baza dimensiunilor lor; moleculele de dimensiuni mici ptrund

n structura gelului iar la eluie, moleculele de dimensiuni mari vor fi cele care vor fi
eliminate la nceput;
cromatografia de afinitate

- tehnic de separare cu multiple aplicaii, putnd fi utilizat la separarea i purificarea

majoritii moleculelor biologice pe baza funciunii sau structurii lor chimice;
- tehnica se bazeaz pe interaciunile specifice dintre materialele biologice i suportul
cromatografic;
- s-a utilizat la nceput la izolarea i purificarea proteinelor, enzimelor, dar s-a
extins i pentru diferite substane de diagnosticare, anticorpi, acizi nucleici.
 SEPARAREA PRODUSELOR UTILE / PRODUILOR UTILI

Separri i purificri cromatografice

Reprezentarea schematic a unui

sistem de separare cromatografic la scar
mare