FORMATION BIOLOGIE

MOLECULAIRE
DAKAR Septembre 2006

Organisation et fonctionnement
d'un laboratoire de biologie molculaire

Philippe Gauthier, CBGP-IRD Montpellier philippe.gauthier@ensam.inra.fr

 SOMMAIRE

Organisation et fonctionnement
I- Identification des diffrentes zones de manipulation p3

II- Personnes ressources p3

III- Quelques rgles de base p3

IV- Le soin apport au matriel p4

1- Les micropipettes automatiques p4

2- La balance p7
3- Le thermocycleur p7
4- La centrifugeuse p7
5- Le bain-marie p7
6- Les rfrigrateurs et conglateurs p7
7- La table UV p8
8- La cuve d'lectrophorse p8
9- Le pHmtre p8

V- Les plannings de rservation p8

VI- Gestion des stocks et commandes de consommables p8

VII- Le mnage dans le laboratoire p8

Dmarche qualit
I- Fiabilit p9

II- Traabilit p9

Hygine et scurit
I- Gnralits : les diffrents types de risque p11

1- Risques chimiques p11

a- L'valuation du risque chimique p11
b- La prvention du risque chimique p14
2- Risques physiques p15
a) L'valuation du risque physique p15

1
 b) La prvention du risque physique p16
3- Risques biologiques p16
a) L'valuation du risque biologique p16
b) La prvention du risque biologique p16

II- Les huit rgles de base de la scurit dans un laboratoire p17

de biologie molculaire
1- Stricte sparation des pices vivre et des laboratoires p17
2- Utilisez les moyens de protection individuels et collectifs p17
mis votre disposition
3- Apprenez reconnatre les diffrents risques et respectez les consignes p17
4- Etiquetez ! p17
5- Nettoyez et/ou dcontaminez le poste de travail aprs chaque manipulation p17
6- La gestion des dchets p17
7- En cas d'incident ou d'accident p18
8- Respectez les heures d'ouverture du laboratoire p18

III- Quelques postes de travail risque dans un laboratoire p18

de biologie molculaire

1- Poste de prparation des gels d'agarose p18

2- Poste de coloration, visualisation et dcoupe des bandes d'ADN p18
sur gel d'agarose

2
 Organisation et fonctionnement

I- Identification des diffrentes zones de manipulation

L'organisation physique du laboratoire doit tre pense en fonction des activits et des risques.
On distingue deux grands types d'activits :
- les activits pr-PCR o l'on manipule de l'ADN non amplifi (extraction-
purification, prparation des mix PCR, clonage d'ADN gnomique)
- les activits post-PCR o l'on manipule de l'ADN amplifi (purification de
produits PCR, raction de squence, clonage de produits PCR)
Cette sparation a pour but de rduire les risques de contaminations (l'ADN amplifi tant trs
contaminant pour l'ADN non amplifi). Tout change de matriel entre ces deux zones est
strictement proscrit (tout particulirement les micropipettes qui sont une source importante
de contamination du fait des arosols).
A l'intrieur de ces deux zones, les activits risque (voir la section hygine et scurit)
doivent tre le plus isoles possibles et tre clairement identifies (il faut assurer la formation
et l'information des utilisateurs).

II- Personnes ressources

Pour la bonne marche du laboratoire, il est ncessaire de nommer une personne qui en sera
responsable et qui veillera son bon fonctionnement (la gestion des stocks, les commandes de
consommables, l'entretien des quipements etc.).
Le responsable est en charge de l'organisation et de la gestion du laboratoire. Il dfinit les
rgles de fonctionnement et de gestion financire.
Il tablit les rgles d'hygine et scurit et les fait respecter. Il doit galement mettre en place
une dmarche qualit (rdaction de procdures, mtrologie etc.). Il doit en outre assurer la
formation des nouveaux arrivants.
Pour que cette tche ne soit pas trop lourde, il peut tre pratique de dfinir une liste de
personnes clairement identifies se partageant ces responsabilits.

III- Quelques rgles de base

D'une faon gnrale, vous devez :
o respecter les rgles d'hygine et scurit (voir section "Hygine et scurit") pour
votre scurit, celle des personnes travaillant vos cts et celle de l'environnement;
o respecter les autres manipulateurs, ce qui implique de nettoyer les paillasses et de faire
votre vaisselle aprs chaque manipulation, de ranger et de respecter les plannings de
rservation;
o prendre soin du matriel;
o tiqueter correctement ce que vous voulez conserver. L'tiquette doit indiquer : le nom
du prparateur, le nom du produit, sa concentration et sa date de fabrication (ou
d'ouverture, ou de premption);
o ne pas manipuler seul dans le laboratoire les soirs et week-end en dehors des heures
d'ouverture du laboratoire.

3
IV- Le soin apport au matriel
Le matriel de laboratoire cote cher, prenez en soin!
Si vous remarquez un disfonctionnement du matriel ou que vous cassez quelque chose,
signalez-le. Cela permet d'engager les rparations ou de changer le matriel en question au
plus vite.

1- Les micropipettes automatiques

De nombreuses exprimentations dpendent de la justesse du pipetage. Un soin tout
particulier doit donc leur tre apport.

Quelques conseils d'utilisation :

o Evitez de poser les pipettes automatiques plat. Evitez les chocs (cause de
drglement). Rangez les pipettes sur leur portoir entre chaque utilisation.
o Pour ne pas endommager le mcanisme interne de la micropipette, ne forcez jamais le
rglage du volume au-del des limites spcifies par le fabriquant (ne pas pipeter 210
l avec une P200 par exemple, mais utiliser une P1000).
Les plages d'utilisation des micropipettes sont les suivantes :

Modle de pipette Plage d'utilisation

P2 0,1 2 l
P10 0,5 10 l
P20 2 20 l
P100 20 100 l
P200 30 200 l
P1000 200 1000 l

o Vrifiez que vous avez mis un cne au bout de la pipette avant de pipeter, cela vous
vitera de tremper l'embout porte cne dans le liquide pipeter (si, si c'est dj
arriv!).
o Pr-rincez le cne avant le pipetage. Cela permet une plus grande uniformit et
rptabilit de la distribution. Ce pr-rinage est ralis en aspirant avec le cne et en
redistribuant le liquide dans le rcipient d'origine. Il faut le faire chaque changement
de cne et chaque augmentation de volume.
o Lors du prlvement, n'appuyez pas le bout du cne sur le fond du tube.
o N'utilisez pas les pipettes pour prlever des acides forts (HCl, H2SO4 etc.) car les
vapeurs endommagent le piston (corrosion). Cela entrane une perte de justesse du
pipetage. Utilisez plutt des pipettes jetables.
o Nettoyez les pipettes rgulirement (extrieur et intrieur de l'embout porte-cne),
changez les joints quand cela est ncessaire, re-calibrez les ou faites les re-calibrez une
fois par an.
o Respectez les techniques de pipetage en fonction de la nature du liquide :

4

Technique de pipetage direct pour les liquides peu visqueux et non moussants

1) Prparation : Maintenir la pipette automatique verticalement (augmente la justesse du

pipetage), appuyer doucement sur le bouton-poussoir jusqu' la premire bute
(position B).
2) Aspiration : Immerger le cne de 1 5 mm maximum dans le liquide prlever
(augmente la justesse du pipetage), relcher lentement le bouton-poussoir sans -coup
jusqu' la position de repos (position A) (cela permet d'viter une remonte de liquide
dans l'embout porte cne) et attendre 1 seconde de sorte que la totalit du liquide
puisse remonter dans le cne. Retirer le cne du liquide et vrifier qu'aucune
gouttelette ne reste accroche l'extrieur de la pointe, dans le cas contraire appuyer
l'extrmit du cne sur la paroi du rcipient (augmente la justesse du pipetage).
3) Distribution : Positionner la pointe du cne contre la paroi du rcipient en inclinant
lgrement la pipette automatique de 10 45 par rapport la paroi du tube rcepteur.
Appuyer doucement et sans -coup sur le bouton-poussoir jusqu' la premire bute
(position B).
4) Purge : Appuyer ensuite sur le bouton-poussoir jusqu' la deuxime bute (position C)
pour chasser le liquide rsiduel du cne. Retirer la pipette automatique en faisant
glisser l'extrmit du cne le long de la paroi du tube.
5) Repos : Retirer le cne du liquide puis relcher le bouton-poussoir jusqu' la position
de repos (position A). Ejecter le cne.

5

Technique de pipetage invers pour les liquides visqueux et/ou moussants
(glycrol, triton, tween 20, etc.)

1) Prparation : Maintenir la pipette automatique verticalement (augmente la justesse

du pipetage), appuyer doucement sur le bouton-poussoir jusqu' la deuxime bute
(position C).
2) Aspiration : Immerger le cne de 1 5 mm maximum dans le liquide prlever
(augmente la justesse du pipetage), relcher lentement le bouton-poussoir sans -coup
jusqu' la position de repos (position A) (cela permet d'viter une remonte de liquide
dans l'embout porte-cne) et attendre 1 seconde de sorte que la totalit du liquide
puisse remonter dans le cne. Retirer le cne du liquide et vrifier qu'aucune
gouttelette ne reste accroche l'extrieur de la pointe, dans le cas contraire appuyer
l'extrmit du cne sur la paroi du rcipient (augmente la justesse du pipetage).
3) Distribution : Positionner la pointe du cne contre la paroi du rcipient en inclinant
lgrement la pipette automatique de 10 45 par rapport la paroi du tube rcepteur.
Appuyer doucement et sans -coup sur le bouton-poussoir jusqu' la premire bute
(position B). Attendre 1 seconde.
4) R-aspiration : Si le cne doit tre rutilis pour une nouvelle aspiration du mme
liquide, maintenir le bouton-poussoir dans la mme position intermdiaire (position B)
et recommencer partir de l'tape 2.
5) Purge complte : Si le cne ne doit pas tre rutilis, appuyer le bouton-poussoir
jusqu' la deuxime bute (position C) au dessus du rcipient pour dchets. Ejecter le
cne.

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 2- La balance
Comme les pipettes automatique, elle ne doit pas tre utilise en dehors des limites spcifies
par le fabricant (problme de drglement donc de justesse de la pese). Nettoyez la balance
et la paillasse autour aprs utilisation.

3- Le thermocycleur
Lors de la programmation, entrez une temprature de 10C et non de 4C en fin de
programme, cela permet d'augmenter la dure de vie de la machine. De la mme faon, il est
prfrable de ne pas dmarrer une PCR le vendredi soir, pour viter que le thermocycleur
reste en marche tout le week-end. Faites les contrler une fois par an par une socit de
maintenance.

4- La centrifugeuse
La partie la plus fragile d'une centrifugeuse est l'axe du rotor. Pour ne pas le fausser, il faut
imprativement quilibrer le rotor, c'est--dire rpartir les tubes de faon homogne de part et
d'autre de l'axe central (en partant du principe que tous les tubes ont le mme poids, sinon les
peser et les associer deux deux de mme poids de part et d'autre de l'axe de rotation).
Quelques exemples pour un rotor 24 tubes :

Dans la dernire configuration (5 tubes), il faut en ajouter un sixime de mme poids (en
rouge sur le schma).
Certaines centrifugeuses (de marque Eppendorf par exemple) possdent un couvercle qui
s'ajuste directement sur le rotor : n'oubliez pas de le mettre avant de dmarrer la
centrifugation.
Pensez galement laisser le couvercle des centrifugeuses ouvert quand elles sont teintes
pour viter la condensation et l'apparition de moisissures (surtout les centrifugeuses
rfrigres).

5- Le bain-marie
Pensez ajustez le niveau d'eau avant utilisation. Pensez couvrir la cuve pour viter
l'vaporation (surtout pour les incubations sur la nuit) car certains bains-marie n'ont pas de
systme de scurit et continuent chauffer mme sans eau. Ceci a t la cause de plusieurs
incendies dans diffrents laboratoires. Changez l'eau de la cuve quand le besoin s'en fait sentir
(eau trouble, dpts sur le fond).

6- Les rfrigrateurs et conglateurs

Vrifiez que les rfrigrateurs et conglateurs sont bien referms. Ne stockez pas inutilement
et pensez jeter ce qui n'est plus utile. Etiquetez de faon lisible ce que vous mettez dans les
rfrigrateurs et conglateurs (nom, nom du projet ou de l'encadrant, date, contenu, etc.).

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 7- La table UV
Eteignez les tables UV aprs visualisation d'un gel d'agarose color au BET. Nettoyez la
surface de la table UV avec de l'eau, surtout pas avec de l'alcool !

8- La cuve d'lectrophorse
Ne laissez pas les sels s'accumuler sur les lectrodes de la cuve d'lectrophorse. Cela
provoque un mauvais ajustement du couvercle qui empche le contact de se faire, donc le
courant lectrique de passer et par consquent la migration dans le gel ne se fait pas.
Un petit nettoyage de temps en temps ne leur fait pas de mal et permet de changer le tampon
de migration (TBE). Dans le cas des cuves Mupid le tampon de migration doit tre utilis
une concentration de 0,5x (une concentration suprieure en sels entrane des dgagements de
chaleur qui endommage ce type de cuve). Ne remplissez pas les cuves Mupid au-del de la
marque interne, sinon des fuites se produisent par capillarit.
Ne coulez pas les gels avec de l'agarose trop chaud, cela dforme les moules. Un bon repre
est que vous pouvez couler les gels quand vous pouvez tenir la bouteille d'agarose chaud sans
le gant de cuisine et sans vous brler.

9- Le pHmtre
Le pHmtre doit tre talonn avant d'effectuer vos mesures. Pour ce faire, rincez
pralablement l'lectrode l'aide d'une pissette d'eau osmose puis utilisez les solutions
commercialesd'talonnage. Attention, il faut rincer l'lectrode l'eau osmose entre chaque
solution d'talonnage, ainsi qu'avant et aprs vos mesures de pH. Une fois les mesures
termines, immergez l'lectrode dans la solution de KCl 3M.

V- Les plannings de rservation

Des plannings de rservation existent pour certains postes. Vous devrez vous inscrire pour
pouvoir les utiliser. Ne rservez pas plus que ncessaire et si vous avez du retard, pensez
prvenir la personne suivante sur le planning.

VI- Gestion des stocks et commandes de consommables

Etablissez une liste prcise de tous les produits et consommables plastiques dont vous avez
besoin. Assurez vous que tous ces consommables sont disponibles en stock. N'attendez pas
que le stock soit puis avant de commander, d'autant plus que les dlais de livraison peuvent
tre parfois important.

VII- Le mnage dans le laboratoire

A chaque fois que vous manipulez, pensez :
o vider les poubelles de paillasse. Attention, les dchets dangereux doivent tre jets
dans des poubelles spcifiques (voir section "Hygine et scurit");
o ranger (pipettes, botes de pointes et pots de tubes, bacs en polystyrne etc.) et nettoyer
les paillasses aprs vos manipulations;
o faire votre vaisselle, ce n'est pas la peine qu'elle s'accumule dans les viers;
En dehors de ces recommandations quotidiennes, un tour de mnage peut tre organis
rgulirement (une fois par mois par exemple). Ne stockez pas inutilement des encombrants
(cartons, polystyrne...) dans le laboratoire.

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 Dmarche qualit

La dmarche qualit dsigne un ensemble de rgles et d'actions qui permettent d'assurer la

fiabilit et la traabilit des rsultats exprimentaux

I- Fiabilit
La fiabilit (justesse) concerne les quipements d'exprimentation (micropipettes, balances,
thermocycleur, pHmtre etc.) qui peuvent avoir une influence sur la qualit des rsultats. La
qualit des quipements conditionne en effet la qualit du rsultat final.
Les sources d'erreurs peuvent provenir :
- du manipulateur (mauvaise utilisation de l'quipement);
- de l'quipement lui-mme (drglage).
Il est donc essentiel d'utiliser correctement le matriel (en se rfrant aux consignes du
fabriquant par exemple), de former les utilisateur et d'entretenir rgulirement l'quipement
(nettoyage, talonnage).
Quelques recommandations :
- mettez des notices explicatives (consignes d'utilisation) disposition des
utilisateurs pour chaque quipement;
- rdigez des protocoles qui seront utilis par tous (homognisation des
exprimentations);
- prvoyez des tmoins ngatifs et positifs lors des exprimentations, de faon
vrifier l'absence de contaminations par exemple. Cela vous permettra de valider
vos rsultats;
- de faon s'assurer de la justesse des quipements, des tests peuvent tre effectus
intervalles rguliers ( dfinir en fonction de l'quipement et de sa frquence
d'utilisation). Cela peut consister par exemple effectuer une pese sur une
balance l'aide d'un poids talon, ou prlever des volumes l'aide d'une
micropipette;
- faites contrler les quipements une fois par an par une socit spcialise qui se
chargera de les re-calibrer.

II- Traabilit
Le manipulateur doit assurer la traabilit des donnes qu'il produit Cela va de
l'chantillonnage sur le terrain jusqu' l'obtention des donnes molculaires, en passant par
tous les produits qu'il utilisera.
L'un des principaux outils de traabilit de l'exprimentateur est le cahier de laboratoire : il
doit y consigner toutes les manipulations ralises, avec la date, les conditions exprimentales
ainsi que les rsultats obtenus. Les exprimentations qui ne marchent pas doivent tre
galement inscrites dans le cahier de laboratoire, ainsi que les paramtres qui seront modifis
par la suite. Le cahier de laboratoire sert archiver les rsultats, ce qui permet de rapidement
les retrouver
De la mme manire, toutes les modifications apportes un protocole exprimental doit tre
crites en prenant bien soin de conserver le protocole d'origine.

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Quelques recommandations :
- remplissez votre cahier de laboratoire quotidiennement;
- tiquetez correctement et lisiblement tout ce que vous conservez en prcisant votre
nom, la date, le nom du produit ou de l'chantillon, sa concentration, sa date de
premption etc.;
- conservez vos produits ou chantillons dans un lieu adapt, en prenant soin de
noter cet emplacement dans le cahier de laboratoire;
- grez vos stocks (date d'entre de nouveau produits, quantit, date d'utilisation
etc.). Cela peut concerner aussi bien vos chantillons que les produits chimiques
ou que les dchets toxiques;

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 Hygine et scurit

I- Gnralits : les diffrents types de risque

1- Risques chimiques
Les risques associs un produit chimique donn dpendent de sa nature et de ses proprits
physico-chimiques, des moyens de protection mis en uvre et de la dure d'exposition. C'est
sur les deux derniers critres que l'on peut jouer : c'est--dire utiliser des moyens de protection
adquats et limiter au maximum le temps d'exposition.

a- L'valuation du risque chimique

Les informations concernant les dangers d'un produit chimique donn sont disponibles sur
l'tiquette du flacon et sur sa fiche de donnes de scurit.
L'tiquette regroupe les informations suivantes :
o le nom du produit et son n CAS qui permettent de se rfrer la fiche de donnes de
scurit.
o les symboles de danger :

o les phrases de risque R (R1 R68) et les phrases de prudence S (S1 S64) :

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12
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Parmi les produits chimiques, certains sont classs comme tant cancrognes et/ou
mutagnes et/ou toxiques pour la reproduction (CMR). Des phrases de risque R particulires
sont associes chacune des 3 catgories de produits CMR :

Les catgories, notes de 1 3, correspondent au degr de toxicit avr ou suppos :

o Catgorie 1 : substances que l'on sait tre CMR pour l'homme.
o Catgorie 2 : substances devant tre assimiles des substances CMR pour l'homme.
Cette prsomption est gnralement fonde sur des tudes appropries menes long
terme sur l'animal.
o Catgorie 3 : substances proccupantes pour l'homme en raison d'effets CMR
possibles, mais pour lesquelles les informations issues d'tudes sur les animaux sont
insuffisantes pour classer ces substances dans la deuxime catgorie.
L'tiquette, prsente sur tout flacon, est donc une source importante d'informations
concernant la scurit. En cas de reconditionnement dans un nouveau flacon (aliquote par
exemple), il est donc important de reporter sur celui-ci les informations suivantes : nom, date,
concentration, et conditions de stockage.
Avant d'introduire un nouveau produit chimique dans le laboratoire, informez vous sur les
risques lis son utilisation.
La deuxime source d'informations sur un produit chimique est la fiche de donnes de
scurit. Elle reprend les informations de l'tiquette mais donne galement des informations
sur les effets du produit sur l'organisme (toxicit aigue et/ou chronique) et la dmarche
suivre en cas de contamination. Ces fiches peuvent tre obtenues auprs des fournisseurs ou
sur Internet.

b- La prvention du risque chimique

Elle passe par le respect des bonnes pratiques de laboratoire :
o choisir le produit le moins dangereux et limiter les transvasements;

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 o s'assurer que l'affichage des rgles de scurit et des procdures d'urgence est bien
jour et connu des manipulateurs;
o travailler dans un local convenablement ventil;
o ne pas fumer, boire, manger, se maquiller dans les lieux o l'on manipule;
o ne jamais pipeter un liquide la bouche;
o ne jamais porter ses mains ou tout autre objet (stylo par exemple) la bouche;
o ne pas vouloir identifier un produit par son odeur;
o ne pas tenter de faire des mlanges inconnus qui peuvent tre incompatibles, surtout
lors de la collecte des dchets;
o travailler avec des appareillages et des moyens de protection en bon tat;
o stocker les produits dans des rfrigrateurs/conglateurs scuriss.

Il faut galement utiliser les moyens de protection individuels et collectifs :

o la blouse en coton qui doit tre ferme;
o les lunettes et masques de protection;
o les gants rsistants aux produits manipuls (latex, nitrile ou vinyle);

Les produits chimiques doivent tre entreposs dans des locaux amnags cet effet
(ventilation, isolement, bacs de rtention).
Les dchets doivent tre collects par catgorie et entreposs dans des locaux adapts avant
d'tre enlevs par une entreprise agre.

2- Risques physiques

a- L'valuation du risque physique

Dans ce document, les risques sont valus par rapport aux dommages qu'ils peuvent causer
aux personnes.

Les risques peuvent tre de diffrentes natures :

o asphyxie - sources : manipulation d'azote liquide dans un local mal ventil, incendie;
o lectrocution - sources : incendie d'origine lectrique, appareillage ou installation
lectrique mal entretenus, etc.;
o brlures - sources : incendie, lectricit, bec benzne, rayonnements non ionisants
(infrarouges, UV), rayonnement laser, autoclave, produits chimiques, basses
tempratures (ex. : azote liquide), etc.;
o altrations gntiques/cancer sources : rayonnements ionisants (matires
radioactives), rayonnements non ionisants (UV);
o lsions divers (plaies, hmorragies, contusions, fractures, etc.) - sources : chute, chute
d'objets, explosion (ex. : quipement sous pression tels que les autoclaves ou les
bonbonnes de gaz, produits chimiques), bruit (ex. : sonicateur);
o coupures et piqres - sources : scalpels, aiguilles, pipettes Pasteur. Attention, des
risques chimiques et biologiques peuvent y tre souvent associs.

Diffrents pictogrammes de signalisation permettent d'identifier les causes potentielles de

risques physiques :

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 b- La prvention du risque physique
La varit des risques physiques tant importante, nous ne donnerons ici qu'une liste non
exhaustive de recommandations :
o apprenez reconnatre les diffrents pictogrammes et respectez les consignes;
o respectez les rgles de stockage (ex. : produits inflammables dans armoire anti-feu et
anti-dflagrante). N'entreposez pas inutilement des matires inflammables (ex. :
carton);
o la plupart du temps, les risques correspondent des zones accs rglement. N'y
pntrez pas si vous n'avez rien y faire ou si vous n'avez pas reu une formation ou
une information spcifique (ex : radioactivit);
o utilisez les moyens de protection spcifiques mis votre disposition (casque anti-bruit,
lunettes et casque de protection, gants pour les hautes et basses tempratures, etc.);
o respectez les consignes d'utilisation des appareillages;
o ne dmontez pas des appareillages en panne (faire appel socit de maintenance et
rparation);
o ne transportez pas manuellement des objets trop lourds ou encombrants.

3- Risques biologiques

a- L'valuation du risque biologique

Les risques biologiques sont difficiles valuer compte tenu du fait que les animaux capturs
sur le terrain sont potentiellement infects par divers parasites (nmatodes, virus, bactries)
et qu'on ne connat pas a priori les risques pour l'homme. Quoiqu'il en soit, il est impratif de
respecter certaines rgles prventives.

b- La prvention du risque biologique

16
 o les quipements de protection
Ils doivent tre obligatoirement utiliss afin de limiter les risques de transmission de maladie
des animaux l'homme. Ils comprennent : la blouse, les gants, les lunettes de protection et le
masque;
o manipulation dans un local adapt, isol du reste du laboratoire
En effet, il est prfrable que les prlvements soient raliss l'extrieur du laboratoire de
biologie molculaire. Les dchets contamins doivent tre jets dans des poubelles adaptes :
botes-tirelires pour les aiguilles et objets coupants, incinrateur pour les dchets biologiques.

II- Les huit rgles de base de la scurit dans un laboratoire de biologie

molculaire
1- Stricte sparation des pices vivre et des laboratoires
Respectez l'interdiction de fumer, de manger, de boire dans les laboratoires, ou de stocker de
la nourriture dans les rfrigrateurs et conglateurs de ces pices.
Enlevez votre blouse et vos gants avant d'entrer dans un bureau ou d'aller la caftria, en
salle de runion, au secrtariat, la documentation. Enlevez vos gants pour rpondre au
tlphone, utiliser un clavier d'ordinateur, ouvrir les portes, etc.
Evitez galement de vous passez les mains sur le visage si vous portez des gants, et ne mettez
pas la bouche les stylos qui vous servent dans le laboratoire.

2- Utilisez les moyens de protection individuels et collectifs mis votre disposition

Ce sont les blouses, les gants, les lunettes et les casques de protection (anti-UV).

3- Apprenez reconnatre les diffrents risques et respectez les consignes

Apprenez identifier les diffrents risques partir du balisage (tiquettes des produits,
affiches etc.) et tenez en compte! Chacun doit rester vigilant et responsable vis--vis de
l'utilisation des produits et appareillages.

4- Etiquetez !
Tout chantillon, produit, rsultat de manipulation, dchet, etc., doit tre correctement
tiquet. L'tiquette permet didentifier le produit et dviter tout malentendu et toute erreur
de manipulation, surtout si le flacon contenant le produit n'est pas celui d'origine.
Informations utiles devant figurer sur l'tiquette : nom du produits, nom de la personne
l'ayant prpar, date d'ouverture ou de fabrication, condition de stockage, concentration.

5- Nettoyez et/ou dcontaminez le poste de travail aprs chaque manipulation

Pensez aux personnes qui vont l'utiliser aprs vous! Les postes de travail doivent toujours tre
laisss propres et complets : lavage des paillasses leau de javel, poubelles vides, jeux de
pipettes complets, boites de cnes disponibles.

6- La gestion des produits dangereux

Ne stockez pas des solvants inflammables (ex. : alcool) dans les rfrigrateurs qui ne sont pas
scuriss. Les vapeurs pourraient s'enflammer en cas d'tincelle.

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Ne jetez pas de produits chimiques dangereux dans les viers, ni d'objets contamins par ces
produits (gants, papier, tubes etc.) dans les poubelles "normales". Il existe des poubelles
spciales pour les dchets liquides ou solides : phnol, chloroforme, BET, formamide, etc.

7- En cas d'incident ou d'accident

En cas de projection de liquide dangereux, ou potentiellement dangereux (sang de rongeur par
exemple) sur le corps ou dans l'il, lavez abondamment l'eau pendant 15 minutes au
minimum.
En cas d'ingestion de produit dangereux, ne faites pas vomir et ne donnez pas boire la
personne. Renseignez vous sur la nature du produit, sa quantit, sa concentration, les
circonstances de l'accident, les mlanges ventuels etc. de faon pouvoir en informer le
responsable hygine et scurit;
Dans tous les cas, informez immdiatement le responsable hygine et scurit, mme si cela
ne parat pas grave sur le moment.

8- Informez et formez les nouveaux arrivants

Ne laissez jamais les nouveaux arrivants sans encadrement lors de leurs premires
manipulations. Expliquez leur les rgles de fonctionnement du laboratoire et formez les aux
techniques en leur prcisant toutes les rgles de scurit.

III- Quelques postes de travail risque dans un laboratoire de biologie

molculaire

1- Poste de prparation des gels d'agarose

Risques physiques : brlures dues l'agarose bouillant la sortie du micro-onde.
Protections : blouse, gants, gants pais, respectez les recommandations ci-aprs.

Recommandations :
o pour ne pas vous brler, utilisez les gants pais (type gants de cuisine) pour sortir la
bouteille d'agarose bouillant du micro-onde;
o laisser refroidir l'agarose une temprature d'environ 40C (vous devez pouvoir tenir
la bouteille la main) avant de couler les gels.

Gestion des dchets :

Ne jetez pas les restes d'agarose dans l'vier, a le bouche !

2- Poste de coloration, visualisation et dcoupe des bandes d'ADN sur gel d'agarose
Risques chimiques : BET (T+ trs toxique, CMR), loading buffer (T toxique, CMR).

Attention : produits CMR !

Le BET est tiquet, en fonction des fiches de donnes de scurit de diffrents
fournisseur, R 40 (effet cancrogne suspect - preuves insuffisantes) et/ou R46 (peut
causer des altrations gntiques hrditaires) et/ou R68 (possibilit d'effets irrversibles).
Le BET est dtermin comme mutagne par les experts du groupe OHB de l'INRA.
Le loading buffer contient de la formamide qui est tiquet R61 (risque pendant la
grossesse d'effets nfastes pour l'enfant).

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Protections : blouse et sur-blouse, gants nitrile, respectez les recommandations ci-aprs.
Risques physiques : brlure de la peau et surtout des yeux aux UV, coupure avec les lames de
scalpel.
Protections : blouse et sur-blouse, gants nitrile, casque anti-UV, respectez les
recommandations ci-aprs.

Recommandations :
o utilisez des gants nitrile pour manipuler le BET car il passe travers les gants latex;
o quand vous dposez votre gel pour coloration dans le bain BET, faites attention de ne
pas clabousser la paillasse et remettez le couvercle systmatiquement sur le bain;
o ne mettez jamais les mains dans le bain pour rcuprer votre gel (mme avec les
gants), des ustensiles sont votre disposition pour le faire;
o si la coloration du gel au BET vous semble insuffisante aprs 15 20 minutes de bain,
ne touchez pas au bain mais demandez au permanent responsable de s'en occuper (voir
liste des personnes ressource p.6);
o visualisation d'un gel l'aide du systme BioPrint : il existe une scurit qui coupe les
UV quand vous ouvrez la porte si cl du panneau de contrle de l'clairage est en
position 0. Attention si cl est en position 1, les UV restent allums quand vous ouvrez
la porte, il faut alors porter un casque de protection;
o pour visualiser un gel l'aide de la table UV, baissez toujours la vitre sur la table avant
dallumer les UV et teignez-les avant de la relever. Si vous avez besoin de dcouper
votre gel, UV allums et vitre leve, vous devez imprativement porter le casque de
protection anti-UV. N'oubliez sous aucun prtexte de rabattre la vitre ou de porter le
casque anti-UV quand vous regardez ou dcoupez le gel d'agarose sur la table UV,
vous risqueriez de graves brlures aux yeux. Les gants tant souills au BET lors de la
manipulation du gel, manipulez toujours le casque par la partie extrieure pour viter
de contaminer l'intrieur (ct visage).
o En fin de manipulation, nettoyez la vitre de la plaque UV avec de l'eau uniquement
(surtout pas d'alcool !).

Gestions des dchets :

o les dchets solides souills par le BET (gel d'agarose, gants, papier) sont jeter dans la
poubelle dchets BET solide (seau blanc);
o ne jetez aucun liquide contenant du BET (TBE ou TAE des cuves d'lectrophorse,
liquide de coloration BET, eau de la cuvette de rinage du gel) l'vier. Ces liquides
doivent tre vids dans le grand bidon rserv cet usage, sous la paillasse, l'aide de
l'entonnoir;
o les lames de scalpel usages, utilises pour la dcoupe de gel, doivent tre jetes dans
bote-tirelire;

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