Sunteți pe pagina 1din 4

DOZAREA ZAHAROZA/D-GLUCOZA/D-FRUCTOZA DIN PROBE ALIMENTARE

Principiu
Concentraia de D-glucoz este determinat nainte de indroliza enzimatic a zaharozei; D-fructoza este
determinat dup determinarea D-fructozei.
Determinarea D-glucozei nainte de reacia de invertire
La pH 7,6 enzima hexokinaz (HK) acatalizeaz fosforilarea D-glucozei de ctre ATP cu formarea simultan de
ADP:
HK
(1). D-glucoza + ATP
G-6-P +ADP

n prezena enzimei glucozo-6-fosfat dehidrogenaza(G6P-DH), G-6-P este oxidat de NADP la D-gluconat 6-


fosfat cu formarea NADPH.
G6P-DH
(2) G-6-P + NADP+
D-gluconat 6-fosfat + NADPH +H+

Cantitatea de NADPH format este stoechiometric cu cantitatea de D-glucoz. Determinarea are la baz
formarea NADPH care este determinat prin citirea absorbanei la 340 nm, 334 nm, 365 nm.
Determinarea D-furcotzei nainte de invertire
Hexokinaza catalizeaz fosforilarea D-fructozei la D-frzctozo 6-fosfat cu ajutorul ATP:
HK
(3) D-fructoza + ATP
F-6-P +ADP
La terminarea reaciei 3, F-6-P este transformat n G-6-P de ctre fosfoglucoizomeraz (PGI).
(4). F-6-P PGI G-6-P.
G-6-P reac-ioneaz din nou cu NADPH cu foamrrea de D-gluconat 6-fosfat i NADPH (reacia 2). Cantitatea
de NADPH format este stoechiometric cu cantitatea de D-fructoz.
Invertirea enzimatic
La pH 4,6 zaharoza este hidrolizat de ctre enzima -fructozidaz (invertaz) la D-glucoz i D-fructoz.
-fructozidaz
(5). Zaharoz + H2O
D-Glucoz + D-fructoz
Determinarea D-glucozei rezultate dup invertire se face conform principiului prezentat mai sus. Coninututl de
zaharoz este determinat pe baza concentraiilor de glucoz nainte i dup invertire.

PREGATIREA PROBELOR
1. Determinarea zaharozei, D-glucozei, D-fructozei din sucuri de fructe i buturi similare

1
Se filtreaz probele tulburi (alternativ se limpezete cu reactiv Carrez) i se dilueaz pentru a atinge o
concentraie de 0,1 1,5 g/l. Proba diluat poate fi folosit pentru analiza probei dac este colorat. Numai
probele forte puternic colorate sunt folosite nediluate datorit coninutului sczut de zaharoz+D-glucoz+D-
fructoz.
n acst caz se face dup cum urmeaz:
Se amestec 10 ml suc cu aproximativ 0,1 g PVPP sau poliamid, se agit 1 minut i se filtreaz. Se folosete
soluia limpede, uor colorat.
2. Determinarea zaharozei, D-glucozei, D-fructozei din bere
Pentru ndeprtarea acdilui carbonic se agit 5 10 ml bere timp de 30 s cu o baghet de ticl. Se filtreaz. Se
folosete filtratul pentru analiz.
3. Determinarea zaharozei, D-glucozei, D-fructozei din lape condensat ndulcit
Se cntrete 1 g ntr-un balon de 100 ml i se adaug 60 ml ap i se incubeaz 15 minute la 70 C; se agit din
cnd n cnd. Pentru limpezire, se adaug 5 ml soluie Carrez I, 5 ml soluie Carrz II, 10 ml NaOH (0,1 M). Se
amestec dupp fiecare adugare. Se aduce la temperatura camerei, se aduce la semn cu ap, se amestec i se
filtreaz. Se folosete amestecul limpede, posibil puin tulbure care rezult. Se dilueaz confrom tabelului de
diluie dac este necesar.
4. Determinarea zaharozei, D-glucozei, D-fructozei din gem i ngheat
Se omogenizeaz 10 g prob ntr-un mixer. Se cntresc. Se cntresc 0,5 g omogenat ntr-un balon de 100 ml,
se amestec i se agit. Se completeaz la semn cu ap i se filtreaz. Se arunc primii 5 ml de filtrat. Se
folosete filtratul limpede, posibil uor opalescent care rezult. Se dilueaz dac este necesar.
5. Determinarea zaharozei, D-glucozei, D-fructozei din cartofi
Se omogenizeaz 50 g cartofi curai cu 50 ml ap ntr-un omogenizato timp de 3 minute. Se transfer
coninutul ntr-un vas de 250 ml. Se umple pn la 150 ml cu ap. Se adaug succesiv 5 ml soluie Carrez I, 5
ml soluie Carrz II, 10 ml NaOH (0,1 M). Se amestec dupp fiecare adugare. Se transfer ntr-un balon de 250
ml , se cltete cu ap. Se adaug 0,3 ml n-octanol i se agit pn cnd dispare spuma. Se aduce la semn cu ap
i se amestec i se filtreaz.
Se folosete soluia uor glbuie unoeri galben-verde cu v=0,100 0,200 ml dac este necesar, imediat pentru
analiz.

6. Determinarea zaharozei, D-glucozei, D-fructozei din tutun


Se cntresc 0,30 g tutun uscat ntr-un balon de 100 ml, se adaug 70 ml ap i se agit timp de 1 h. Se aduce la
semn cu ap, se amestec i se filtreaz.
ntr-un balon de 25 ml se adaug 1,25 ml soluie Carrz I, 1,25 ml soluie Carrz II , 10 ml NaOH (0,1 M) i se
amestec din nou. Se aduce la semn cu ap, se amestec i se filtreaz. Se folosete filtraul ,diluat dac este
necesar, pentru analiz.
rn pentru a putea determina erorile grosiere i pentru a vedea dac proba conine sau nu substane interferente.
Reactiile au loc direct in cuvele de quart conform tabelului de mai jos:

2
Pipetare Blank Prob Blank D-glucoz/D-
zaharoz frcutoz
Prob D-glucoz/D-
fructoza Prob
zaharoz
Soluie 1 200 L 200L - -
Prob - 100L - 100 L

Se amestec, se incubeaz 15 minute la 20 25 C timp de 5 minute la 37 C nainte de


pipetare soluia trebuie nclzit la la 37 C.
Soluie 2 1000L 1000 L 1000 L 1000 L
Ap bidist. 1800 L 1700 L 2000 L 1900 L
Se amestec, se citesc absrobanele dup aprox. 3 minute A1. Se ncepe reacia prin
adugarea de:
Suspensia 3 20L 20L 20L 20L
Se amestec, se ateapt pn la terminarea reaciei (10 15 minute), se citesc absorbanele
A2.
Dac reacia nu s-a terminat n 15 minute, se continu citirea sbrobanelor din dou n 2
minute pn cnd se onserv o cretere constant.
Suspensie 4 - - 20L 20L
Se amestec, se citesc absrobanele soluiilor dup 10 15 minute (A3).

Dac absorbana A2crete constant, se extrapoleaz valoarea ei la momentul adugrii suspensiei 3 (HK/G6P-
DH).
Se calculeaz diferenele de absorbane, (A2 A1) att pentru pentru blank ct i pentru prob. Se scade
diferena obinut pentru blank din diferena obinut pentru prob corespunztoare i se obine A.
A=(A2 A1)prob - (A2 A1)blank
AD-glucoz total AD-glucoz= Azaharoz
AD-glucoz total (din proba de zaharoz)
AD-glucoz (din proba D-glucoz)
Diferenele de absorban obinute trebuiesc s fie cel puin 0.100 uniti absorban pentru a obine rezultate
precise.

3
Pentru D-fructoz
Se determin diferena de absroban, (A3 A2) att pentru blank ct i pentru prob (prob D-glucoz/prob D-
fructoz). Se scade diferena de absorban pentru blank din diferena de absorban pentru prob. Se obine
AD-fructoz.

Calculul rezultatelor
Conform ecuaiei generale pentru calculul concentraiei:
c = V * MW / * d * v *1000 * A [g/l],
Unde,
V = volumul final [ml]
v = volumul probei [ml]
MW = masa molecular a susbtanei care trebuie analizat [g/mol]
d = calea optic [cm]
= coeficient de exctincie al NADH la
340 nm= 6.3[l x mmol -1x cm-1]
365 nm = 3,4 [l x mmol -1x cm-1]
334 nm = 6.18. [l x mmol -1x cm-1]
Pentru zaharoz:
c=10,34/ * Azaharoz [g zaharoz/l soluie prob]
Pentru D-glucoz:
c=5,441/ * AD-glucoz [g D-gluoz/l soluie prob]
Pentru D-fructoz:
c=5,477/ * AED-fructoz [g D-fructoz/l soluie prob]
Dac proba a fost diluat, atunci rezultatele trebuiec nmulite cu factorul de diluie F.
Pentru probe solide i semisolide care au fost cntrite pentru analiz, rezultatul se calculeaz pe baza cantitii
de prob.
Coninutzaharoz= c zahroz / cantitateprob*100 (g/100 g)
ConinutD-glucoz= c D-glucoz / cantitateprob*100 (g/100 g)
ConinutD-fructoz = c D-fructoz / cantitateprob*100 (g/100 g)