DBO5

CDU: 631.
879
CANCELA A LA
NMX-AA-028-SCFI-2001 NMX-AA-028-1981
SECRETARA DE
ECONOMA
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ANLISIS DE AGUA - DETERMINACIN DE LA DEMANDA

BIOQUMICA DE OXGENO EN AGUAS NATURALES,
RESIDUALES (DBO5) Y RESIDUALES TRATADAS - MTODO DE
PRUEBA (CANCELA A LA NMX-AA-028-1981)
WATER ANALISYS - DETERMINATION OF THE BIOCHEMICAL

OXYGEN DEMAND IN NATURAL, WASTEWATERS (BOD5) AND
WASTEWATERS TREATED - TEST METHOD
0 INTRODUCCIN
Demanda bioqumica de oxgeno (DBO5): Es una estimacin de la cantidad de oxgeno

que requiere una poblacin microbiana heterognea para oxidar la materia orgnica de
una muestra de agua en un periodo de 5 das. El mtodo se basa en medir el oxgeno
consumido por una poblacin microbiana en condiciones en las que se ha inhibido los
procesos fotosintticos de produccin de oxgeno en condiciones que favorecen el
desarrollo de los microorganismos.
1 OBJETIVO Y CAMPO DE APLICACIN
Esta norma mexicana establece el mtodo de anlisis para la determinacin de la

demanda bioqumica de oxgeno (DBO5) en aguas naturales, residuales y residuales
tratadas.
NOTA. Se determina la cantidad de oxgeno utilizada por una poblacin

microbiana heterognea para transformar la materia orgnica, en un
periodo de incubacin de 5 das a 20C.
2 REFERENCIAS
Para la correcta aplicacin de esta norma se deben consultar las siguientes normas
mexicanas vigentes o las que las sustituyan:
NMX-AA-028-SCFI-2001
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NMX-AA-012 SCFI-2001 Anlisis de agua - Determinacin de oxgeno disuelto en

aguas naturales, residuales y residuales tratadas -
Mtodo de prueba.
NMX-AA-100-1987 Calidad del agua Determinacin de cloro total Mtodo

iodomtrico. Declaratoria de vigencia publicada en el
Diairo Oficial de la Federacin del 22 de junio de 1987.
3 PRINCIPIO DEL MTODO
El mtodo se basa en medir la cantidad de oxgeno que requieren los

microorganismos para efectuar la oxidacin de la materia orgnica presente en aguas
naturales y residuales y se determina por la diferencia entre el oxgeno disuelto inicial
y el oxgeno disuelto al cabo de cinco das de incubacin a 20C.
Para la determinacin de oxgeno disuelto (OD) se puede emplear cualquiera de los

dos mtodos establecidos en la norma mexicana NMX-AA-012-SCFI (ver 2
Referencias).
4 DEFINICIONES
Para los propsitos de esta norma se establecen las siguientes definiciones:
4.1 Aguas naturales
El agua cruda, subterrnea y pluvial.
4.2 Aguas residuales
Las aguas de composicin variada provenientes de las descargas de usos

municipales, industriales, comerciales, de servicios, agrcolas, pecuarios, domsticos y
en general de cualquier otro uso.
4.3 Biota
Es un conjunto de organismos vivos tanto de origen vegetal como animal.
4.4 Bitcora
Cuaderno de laboratorio debidamente foliado e identificado, en el cual los analistas

anotan todos los datos de los procedimientos que siguen en el anlisis de una
muestra, as como todas las informaciones pertinentes y relevantes a su trabajo en el
laboratorio.
4.5 Blanco analtico o de reactivos
Agua reactivo o matriz equivalente que no contiene, por adicin deliberada, la

presencia de ningn analito o sustancia por determinar, pero que contiene los mismos
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disolventes, reactivos y se somete al mismo procedimiento analtico que la muestra

problema.
4.6 Calibracin
Conjunto de operaciones que establecen, bajo condiciones especficas, la relacin

entre los valores de una magnitud indicados por un instrumento o sistema de
medicin, o los valores representados por una medida materializada y los valores
correspondientes de la magnitud, realizados por los patrones, efectuando una
correccin del instrumento de medicin para llevarlo a las condiciones iniciales de
funcionamiento.
4.7 Demanda bioqumica de oxgeno (DBO5)
Es una estimacin de la cantidad de oxgeno que requiere una poblacin microbiana

heterognea para oxidar la materia orgnica de una muestra de agua en un periodo de
5 das.
4.8 Descarga
Accin de verter, infiltrar o depositar o inyectar aguas residuales a un cuerpo receptor

en forma continua, intermitente o fortuita, cuando ste es un bien del dominio pblico
de la Nacin.
4.9 Desviacin estndar experimental
Para una serie de n mediciones del mismo mensurando, es la magnitud s que

caracteriza la dispersin de los resultados, dado por la siguiente frmula:
(x
2
i x)
i =1
s=
n 1
En donde xi es el resultado de la i-sima medicin y x es la media aritmtica de los n

resultados considerados.
4.10 Disolucin estndar
Disolucin de concentracin conocida preparada a partir de un patrn primario.
4.11 Disolucin madre
Corresponde a la disolucin de mxima concentracin en un anlisis. Es a partir de

esta disolucin que se preparan las disoluciones de trabajo.
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4.12 Inculo
Es una suspensin de microorganismos vivos que se han adaptado para reproducirse

en un medio especfico.
4.13 Material de referencia
Material o substancia en el cual uno o ms valores de sus propiedades son

suficientemente homogneas y bien definidas, para ser utilizadas para la calibracin
de aparatos, la evaluacin de un mtodo de medicin, o para asignar valores a los
materiales.
4.14 Material de referencia certificado
Material de referencia, acompaado de un certificado, en el cual uno o ms valores de

las propiedades estn certificados por un procedimiento que establece la trazabilidad a
una realizacin exacta de la unidad en la cual se expresan los valores de la propiedad,
y en el que cada valor certificado se acompaa de una incertidumbre con un nivel
declarado de confianza.
4.15 Medicin
Conjunto de operaciones que tiene por objeto determinar el valor de una magnitud.
4.16 Medio aerobio
Es aquel en el cual se desarrollan microorganismos en presencia de oxgeno

molecular.
4.17 Medio anaerobio
Es aquel en el cual se desarrollan microorganismos en ausencia de oxgeno

molecular.
4.18 Mensurando
Magnitud particular sujeta a medicin.
4.19 Muestra compuesta
La que resulta de mezclar un nmero de muestras simples. Para conformar la muestra

compuesta, el volumen de cada una de las muestras simples deber ser proporcional
al caudal de la descarga en el momento de su toma.
4.20 Muestra simple

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La que se tome en el punto de descarga, de manera continua, en da normal de

operacin que refleje cuantitativa y cualitativamente el o los procesos ms
representativos de las actividades que generan la descarga, durante el tiempo
necesario para completar cuando menos, un volumen suficiente para que se lleven a
cabo los anlisis necesarios para conocer su composicin, aforando el caudal
descargado en el sitio y en el momento de muestreo.
4.21 Parmetro
Variable que se utiliza como referencia para determinar la calidad fsica, qumica y
biolgica del agua.
4.22 Patrn (de medicin)
Medida materializada, aparato de medicin o sistema de medicin destinado a definir,

realizar, conservar o reproducir una unidad o uno o varios valores conocidos de una
magnitud para transmitirlos por comparacin a otros instrumentos de medicin.
4.23 Patrn de referencia
Patrn, en general de la ms alta calidad metrolgica disponible en un lugar dado, o

en una organizacin determinada del cual se derivan las mediciones realizadas en
dicho lugar.
4.24 Patrn de trabajo
Patrn que es usado rutinariamente para calibrar o controlar las medidas

materializadas, instrumentos de medicin o los materiales de referencia.
4.25 Patrn nacional
El patrn autorizado para obtener, fijar o contrastar el valor de otros patrones de la

misma magnitud, que sirve de base para la fijacin de los valores de todos los
patrones de la magnitud dada.
4.26 Patrn primario
Patrn que es designado o reconocido ampliamente como un patrn que tiene las ms
altas cualidades metrolgicas y cuyo valor es aceptado sin referencia a otros patrones
de la misma magnitud.
4.27 Patrn secundario
Patrn cuyo valor es establecido por comparacin con un patrn primario de la misma
magnitud.
4.28 Precisin
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Es el grado de concordancia entre resultados analticos individuales cuando el

procedimiento analtico se aplica repetidamente a diferentes alcuotas o porciones de
una muestra homognea. Usualmente se expresa en trminos del intervalo de
confianza o incertidumbre.
s
x = x t /2
n
donde:
x es la media calculada a partir de un mnimo de tres mediciones independientes;

t /2 es el valor de la t de Student para un nivel de significancia del 95 %;
s es la desviacin estndar de la muestra;
n es el nmero de rplicas, y
x es el resultado que incluye el intervalo de confianza.
4.29 Trazabilidad
Propiedad del resultado de una medicin o del valor de un patrn por la cual pueda ser
relacionado a referencias determinadas, generalmente patrones nacionales o
internacionales, por medio de una cadena ininterrumpida de comparaciones teniendo
todas las incertidumbres determinadas.
4.30 Verificacin de la calibracin
Una verificacin peridica de que no han cambiado las condiciones del instrumento en
una forma significativa.
5 REACTIVOS Y PATRONES
Todos los productos qumicos usados en este mtodo deben ser grado reactivo, a
menos que se indique otro grado.
Agua: Debe entenderse agua que cumpla con las siguientes caractersticas:
a) Resistividad, megohm-cm a 25C: 0,2 min.;

b) Conductividad, S/cm a 25C: 5,0 mx., y
c) pH: 5,0 a 8,0.
5.1 Fosfato monobsico de potasio (KH2PO4)

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5.2 Fosfato dibsico de potasio (K2HPO4)
5.3 Fosfato dibsico de sodio heptahidratado (Na2HPO47H2O)
5.4 Cloruro de amonio (NH4Cl)
5.5 Sulfato de magnesio heptahidratado (MgSO47H2O)
5.6 Cloruro de calcio anhidro (CaCl2)
5.7 Cloruro frrico hexahidratado (FeCl36H2O)
5.8 cido sulfrico concentrado (H2SO4)
5.9 Hidrxido de sodio (NaOH)
5.10 Sulfito de sodio (Na2SO3)
5.11 2-cloro-6 (triclorometil) piridina
5.12 Glucosa grado patrn primario (C6H12O6)
5.13 cido glutmico grado patrn primario(C5H9NO4)
5.14 cido clorhdrico (HCl)
5.15 Acido ntrico (HNO3)
5.16 Disolucin amortiguadora de fosfato. Pesar aproximadamente 8,5 g de

fosfato monobsico de potasio (ver inciso 5.1), 21,75 g de fosfato dibsico
de potasio (ver inciso 5.2), 33,4 g de sosfato dibsico de sodio
heptahidratado (ver inciso 5.3) y 1,7 g de cloruro de amonio (ver inciso
5.4), disolver en 500 mL de agua y aforar a 1 L. El pH de la disolucin debe
ser de 7,2. Desechar el reactivo (o cualquiera de los siguientes reactivos)
si hay algn signo de crecimiento biolgico en el frasco de
almacenamiento.
5.17 Disolucin de sulfato de magnesio. Pesar aproximadamente 22,5 g de

sulfato de magnesio heptahidratado (ver inciso 5.5), disolver en agua y
diluir a 1 L.
5.18 Disolucin de cloruro de calcio. Pesar aproximadamente 27,5 g de cloruro

de calcio anhdro (ver inciso 5.6), disolver en agua y diluir a 1 L.
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5.19 Disolucin de cloruro frrico. Pesar aproximadamente 0,25 g de cloruro

frrico hexahidratado (ver inciso 5.7), disolver en agua y diluir a 1 L.
5.20 Disolucin de cido sulfrico (0,1N). Agregar aproximadamente 2,8 mL de

cido sulfrico concentrado (ver inciso 5.8) a 500 mL de agua, mezclar
bien y diluir hasta 1 L.
5.21 Disolucin de hidrxido de sodio (0,1N). Pesar aproximadamente 4,0 g de

hidrxido de sodio (ver inciso 5.9), disolver en agua y diluir a 1 L.
5.22 Disolucin de sulfito de sodio. Pesar aproximadamente 1,575 g de sulfito

de sodio (ver inciso 5.10), disolver en agua y diluir a 1 L. Esta disolucin no
es estable; por lo que debe prepararse diariamente.
5.23 Disolucin patrn de glucosa-cido glutmico. Secar glucosa y cido

glutmico a 103C durante una hora. Pesar aproximadamente y con
precisin 150,0 mg de glucosa (ver inciso 5.12) y 150,0 mg de cido
glutmico (ver inciso 5.13), diluir en agua y aforar a 1 L. Preparar
inmediatamente antes de usarla. Esta disolucin tiene una DBO5 de 198
mg/L.
5.24 Disolucin de cloruro de amonio. Pesar aproximadamente 1,15 g de

cloruro de amonio (ver inciso 5.4) y disolver en 500 mL de agua, ajustar el
pH a 7,2 con disolucin de hidrxido de sodio (ver inciso 5.21) y aforar a
1 L. La disolucin contiene 0,3 mg N/mL.
6 EQUIPO Y MATERIALES
6.1 Equipo
6.1.1 Equipo de aireacin con difusor
6.1.2 Incubador: Controlado por termostato a 20C 1C. Eliminar toda la luz
para evitar la posibilidad de produccin fotosinttica de oxgeno disuelto.
6.1.3 Balanza analtica con precisin de 0,1 mg
6.1.4 Medidor de oxgeno disuelto
6.2 Material
Limpieza del material.
6.2.1 Todo el material usado en la determinacin debe ser exclusivo para este
procedimiento. Para el lavado del material remojar durante 1 h en una
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disolucin de cido sulfrico al 10 % y enjuagar con agua. Los detergentes

con base de amoniaco no deben usarse para la limpieza del material.
6.2.2 Los contenedores de las muestras deben lavarse con disolucin de

detergente no inico, libre de metales, enjuagarse con agua, remojarse
en cido toda la noche y volver a enjuagarse con agua libre de metales.
6.2.3 Para el material de cuarzo, politetrafloroetileno o material de vidrio debe

dejarse remojando de 12 h a 24 h con HNO3 (1:1), HCl (1:1) o con agua
regia (3 partes de HCl concentrado + 1 parte de HNO3 concentrado) a
70oC solo en los casos que presente material adherido, despus debe ser
enjuagado con agua libre de metales.
6.2.4 En los casos de que el material presente grasas, enjuagar con acetona y/o
hexano.
6.2.5 Botellas Winkler de vidrio para incubacin con capacidad de 300 mL de

aforo total y con boca estrecha, reborde y tapn de vidrio esmerilado, de
forma cnica.
6.2.6 Contratapa de politetrafloroetileno u otro material plstico para botella

Winkler
6.2.7 Bureta
7 RECOLECCIN, PRESERVACIN Y ALMACENAMIENTO DE

MUESTRAS
7.1 En el caso de aguas naturales debe tomarse un mnimo de 1 L de muestra

en un envase de polietileno o vidrio. En el caso de aguas residuales (DBO5
mayores a 50 mg/L) deben tomarse mnimo 100 mL. Pueden utilizarse
muestras simples o compuestas.
7.2 No se debe agregar ningn preservador a las muestras. Solo deben

conservarse a 4C hasta su anlisis.
7.3 El tiempo mximo de almacenamiento previo al anlisis es de 24 h.
8 CONTROL DE CALIDAD
8.1 Cada laboratorio que utilice este mtodo debe operar un programa de
control de calidad (CC) formal.
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8.2 El laboratorio debe mantener los siguientes registros:
- Los nombres y ttulos de los analistas que ejecutaron los anlisis y el

encargado de control de calidad que verifica los anlisis, y
- Las bitcoras manuscritas del analista y del equipo en los que se
contengan los siguientes datos:
a) Identificacin de la muestra;
b) Fecha del anlisis;
c) Procedimiento cronolgico utilizado;
d) Cantidad de muestra utilizada;
e) Nmero de muestras de control de calidad analizadas;
f) Trazabilidad de las calibraciones de los instrumentos de medicin;
g) Evidencia de la aceptacin o rechazo de los resultados, y
h) Adems el laboratorio debe mantener la informacin original
reportada por los equipos en disquetes o en otros respaldos de
informacin.
De tal forma que permita a un evaluador externo reconstruir cada determinacin

mediante el seguimiento de la informacin desde la recepcin de la muestra hasta el
resultado final.
9 CALIBRACIN
Se debe contar con la calibracin de los equipos y materiales siguientes:
9.1 Material volumtrico
9.2 Balanza analtica
9.3 Medidor de oxgeno disuelto
10 PROCEDIMIENTO
10.1 Preparacin de agua para dilucin

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Colocar el volumen requerido de agua en un frasco y aadir por cada litro de agua
1 mL de cada una de las siguientes disoluciones: disolucin de sulfato de magnesio
(ver inciso 5.17), disolucin de cloruro de calcio (ver inciso 5.18), disolucin de cloruro
frrico (ver inciso 5.19) y disolucin amortiguadora de fosfatos (ver inciso 5.16).
Preparar el agua de dilucin diariamente.
Analizar y almacenar el agua de dilucin como se describe en los incisos 10.2 y 10.3,
de tal forma que siempre tenga a mano agua de calidad garantizada. Antes de usar el
agua de dilucin debe ponerse a una temperatura aproximada de 20C. Saturar con
oxgeno aireando con aire filtrado, libre de materia orgnica durante 1 h por lo menos.
Si la muestra presenta alto contenido de biocidas como cloro o se sabe de su bajo

contenido de materia orgnica, es necesario inocular la muestra.
Si se requiere, sembrar el agua de dilucin como se indica en el inciso 10.4.1.
10.2 Control del agua de dilucin
10.2.1 Utilizar este procedimiento como una comprobacin aproximada de la

calidad del agua de dilucin. Si la disminucin de oxgeno disuelto del agua
excede de 0,2 mg/L, obtener agua de mejor calidad mejorando la
purificacin o usar agua de otra fuente. Alternativamente si se requiere
inhibir la nitrificacin, almacenar el agua de dilucin sembrada en una
habitacin oscura a temperatura ambiente hasta que la captacin de
oxgeno disuelto se haya reducido lo suficiente para cumplir los criterios de
comprobacin del agua de dilucin. No se recomienda su almacenamiento
cuando la DBO5 se va a determinar sin inhibir la nitrificacin ya que
pueden desarrollarse microorganismos nitrificantes durante ese tiempo. Si
el agua de dilucin no ha sido almacenada para mejorar su calidad, aadir
suficiente inculo como para un consumo de OD de 0,05 mg/L a 0,1 mg/L
en cinco das a 20C. Al Incubar en un frasco Winkler lleno de agua de
dilucin durante cinco das a 20C, el consumo no debe ser mayor a 0,2
mg/L y preferiblemente no menor a 0,1 mg/L.
10.3 Control de la glucosa-cido glutmico
Comprobar en cada lote analtico la calidad del agua de dilucin, la efectividad

del inculo y la tcnica analtica mediante determinaciones de la DBO5 en muestras
estndar de concentracin conocida. Utilizar la disolucin de glucosa-cido
glutmico (ver inciso 5.23) como disolucin madre de control. La glucosa tiene una
tasa excepcionalmente alta y variable de oxidacin, pero cuando se utiliza con cido
glutmico, dicha tasa se estabiliza y es similar a la obtenida en muchas aguas
residuales municipales. Alternativamente, si un agua residual particular contiene un
componente principal identificable que contribuya a la DBO5, utilizar este compuesto
en lugar de la glucosa-cido glutmico. Determinar la DBO5 de una disolucin al 2 %
de la disolucin de control patrn de glucosa-cido glutmico utilizando las tcnicas
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expuestas en los incisos 10.4 a 10.10.
10.4 Inculo
10.4.1 Fuente de la siembra
10.4.1.1 Es necesario contar con una poblacin de microorganismos capaces de

oxidar la materia orgnica biodegradable de la muestra. El agua residual
domstica, los efluentes no clorados o sin desinfeccin, los efluentes de
las plantas de tratamiento de desechos biolgicos y las aguas superficiales
que reciben las descargas de aguas residuales que contienen poblaciones
microbianas satisfactorias. Algunas muestras no contienen una poblacin
microbiana suficiente (por ejemplo, algunos residuos industriales no
tratados, residuos desinfectados, residuos de alta temperatura o con
valores de pH extremos).
Para tales residuos, sembrar el agua de dilucin aadiendo una poblacin de

microorganismos. La mejor siembra es la que proviene del efluente de un sistema de
tratamiento biolgico de aguas residuales. Cuando se usa como siembra el efluente de
tratamiento biolgico de sistema de aguas residuales se recomienda la inhibicin de la
nitrificacin. Cuando no se disponga de sta, utilizar el sobrenadante del agua residual
domstica despus de dejarlo reposar a temperatura ambiente durante al menos 1 h,
pero no ms de 36 h. Determinar si la poblacin existente es satisfactoria haciendo la
prueba de la siembra en una muestra para DBO5. El incremento del valor de la DBO5
indica una siembra exitosa.
10.5 Control del inculo
Determinar la DBO5 del material de siembra como para cualquier otra muestra. Esto es
una siembra control. A partir de este valor y de uno conocido de la dilucin del material
de siembra (en el agua de dilucin) determinar el consumo de OD de la siembra. Lo
ideal es hacer disoluciones tales de la siembra que la mayor cantidad de los
resultados presenten una disminucin de al menos el 50 % del OD. La representacin
de la disminucin del OD (mg/L) con respecto a los mililitros de siembra, tiene que ser
una lnea recta cuya pendiente corresponde a la disminucin de OD por mililitro del
inculo. La interseccin del eje de las abscisas (OD) representa el consumo del
oxgeno causado por el agua de dilucin y debe ser inferior a 0,1 mg/L (ver inciso
10.8). Para determinar el consumo de OD de una muestra, se resta el consumo de OD
de la siembra, del consumo de OD total. La captacin de OD total del agua de dilucin
sembrada debe oscilar entre 0,6 mg/L y 1,0 mg/L.
10.6 Pretratamiento de la muestra
10.6.1 Muestras con pH cidos o bsicos
10.6.1.1 Neutralizar las muestras a un pH entre 6,5 y 7,5 con cido sulfrico o
hidrxido de sodio de concentracin tal que la cantidad de reactivo no
diluya la muestra en ms del 0,5 %. El pH del agua de dilucin sembrada
no debe verse afectado por la dilucin de la muestra.
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10.6.2 Muestras que contienen cloro residual
10.6.2.1 Si es posible, evitar las muestras que contengan cloro residual, tomndolas
antes del proceso de cloracin. Si la muestra ha sido clorada pero no hay
residuo detectable de cloro, sembrar el agua de dilucin. Si hay cloro
residual, eliminar el cloro de la muestra y sembrar con inculo (ver inciso
10.4). No se deben analizar las muestras cloradas sin sembrar el agua de
dilucin. En algunas muestras, el cloro desaparece en el lapso de 1 h a 2 h
despus de su exposicin a la luz. Esto suele ocurrir durante el transporte
o la manipulacin de la muestra. Para las muestras en las que el residuo
de cloro no se disipe en un tiempo razonablemente corto, eliminar el cloro
residual aadiendo disolucin de sulfito de sodio.
Determinar el volumen requerido de disolucin de sulfito de sodio cuantificando el

cloro residual total. Aadir a la muestra neutralizada el volumen relativo de la
disolucin de sulfito de sodio determinada por la prueba anterior, mezclar y despus
de 10 min a 20 min, comprobar el cloro residual de la muestra.
10.6.2.2 La determinacin de cloro residual se realiza de acuerdo a lo establecido

en la norma mexicana NMX-AA-100 (ver 2 Referencias).
10.6.3 Muestras sobresaturadas con OD
10.6.3.1 En aguas fras o en aguas donde se produce la fotosntesis (aguas de

embalses), es posible encontrar muestras que contienen ms de 9,0 mg
OD/L a 20C. Para evitar la prdida de oxgeno durante la incubacin de
tales muestras, reducir el OD por saturacin, calentando la muestra
aproximadamente a 20C en frascos parcialmente llenos mientras se
agitan con fuerza o se airean con aire limpio, filtrado y comprimido.
10.6.4 Ajustar la temperatura de la muestra a 20C 1C antes de hacer

diluciones.
10.6.5 Inhibicin de la nitrificacin
10.6.5.1 Si se requiere inhibir la nitrificacin adicionar 3,0 mg de 2-cloro-6

(triclorometil) piridina (ver inciso 5.11) a cada uno de los frascos antes de
recolectar o bien adicionar la cantidad suficiente de agua para tener una
concentracin de 10 mg/L aproximadamente.
10.6.5.2 Entre las muestras que requieren inhibicin de la nitrificacin se incluyen,

los efluentes tratados biolgicamente, las muestras sembradas con
efluentes tratados biolgicamente y las aguas superficiales entre otras.
Debe hacerse la observacin del uso de inhibicin del nitrgeno cuando se
presente el informe de los resultados.
10.7 Tcnica de dilucin
10.7.1 Las diluciones que dan lugar a un OD residual mayor de 1 mg/L y una
captacin de OD de al menos 2 mg/L despus de 5 das de incubacin,
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producen los resultados ms confiables. Hacer varias diluciones (al menos

3) por duplicado de la muestra preparada para obtener una captacin de
OD en dicho intervalo. La experimentacin con una muestra concreta
permite el uso de un nmero menor de diluciones. Un anlisis ms rpido
tal como la DQO, presenta una correlacin aproximada con la DBO5 y sirve
como una gua para seleccionar las diluciones. En ausencia de datos
previos, utilizar las siguientes diluciones: de 0 % a 1 % para los residuos
industriales fuertes, de 1 % a 5 % para las aguas residuales sedimentadas
y crudas, del 5 % al 25 % para el efluente tratado biolgicamente y del 25
% al 100 % para las aguas superficiales contaminadas.
10.7.2 Diluciones preparadas directamente en frascos tipo Winkler. Utilizando una

pipeta volumtrica, aadir el volumen de muestra deseado a frascos
Winkler individuales de 300 mL. Aadir cantidades adecuadas del material
de siembra a los frascos tipo Winkler o al agua de dilucin. Llenar los
frascos con suficiente agua de dilucin, sembrada si es necesario, de
forma que la insercin del tapn desplace todo el aire, sin dejar burbujas.
No realizar diluciones mayores de 1:300 (1 mL de la muestra en un frasco).
Determinar el OD inicial en uno de los frascos de cada una de las
diferentes diluciones. En los frascos de los duplicados de cada una de las
diluciones, Ajustar hermticamente el tapn, poner un sello hidralico y la
contratapa e incubar durante 5 das a 20C.
10.8 Determinacin del OD inicial
10.8.1 Mtodo yodomtrico
La determinacin del OD inicial se realiza por medio del mtodo yodomtrico de azida
modificado, de acuerdo a lo establecido en la norma mexicana NMX-AA-012-SCFI (ver
2 Referencias).
10.8.2 Mtodo electromtrico
La determinacin del OD inicial se realiza por medio del mtodo electromtrico

con electrodo de membrana, de acuerdo a lo establecido en la norma mexicana NMX-
AA-012-SCFI (ver 2 Referencias). Los aceites, grasas o cualquier sustancia que se
adhiera a la membrana puede ser causa de baja respuesta en el electrodo.
10.9 Blanco del agua de dilucin. Emplear un blanco del agua de dilucin como
un control aproximado de la calidad del agua de dilucin no sembrada y de
la limpieza de los frascos de incubacin. Junto con cada lote de muestras,
incubar un frasco de agua de dilucin no sembrada. Determinar el OD
inicial y final como se especifica en los incisos 10.7 y 10.10. El consumo de
OD no debe ser mayor de 0,2 mg/L y preferentemente no menor a 0,1
mg/L.
10.10 Incubacin
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Incubar a 20C 1C las botellas de DBO5 que contengan las muestras con las
diluciones deseadas, los controles de siembra, los blancos de agua de dilucin y el
control de glucosa-cido glutmico. En caso de no contar con contratapas, diariamente
se debe verificar que el sello hidralico est intacto en cada botella incubada, agregar
agua si es necesario.
10.11 Determinacin del OD final
Despus de 5 das de incubacin determinar el OD en las diluciones de la muestra, en

los controles y en los blancos. La medicin del OD debe ser realizada inmediatamente
despus de destapar la botella de Winkler, para evitar la absorcin de oxgeno del aire
por la muestra.
11 CLCULOS
11.1 Calcular la DBO5
11.1.1 Cuando no se utilice inculo ni diluciones:
DBO5 (mg/L) = ODi mg/L - OD5 mg/L
donde:
ODi mg/L es el oxgeno disuelto inicial, y

OD5 mg/L es el oxgeno disuelto al quinto da.
11.1.2 Cuando se emplea una dilucin:
ODi mg/L - OD5 mg/L

DBO5 (mg/L) = ---------------------------------------------------------
% de dilucin expresado en decimales
11.2 Cuando se utiliza inculo
11.2.1 Sin dilucin:
DBO5 (m/L)= (ODi mg/L - OD5 mg/ L) - C1 (B1 - B2 ) (Vt )

C2(Vm)
11.2.2 Con dilucin:

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ECONOMA
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DBO5 (m/L)=[ (ODi mg/L - OD5 mg/ L) - C1 (B1 - B2 ) (Vt )]

C2(Vm) P
donde:
B1 es el OD del inculo antes de la incubacin, en mg/L;

B2 es el OD del inculo despus de la incubacin, en mg/L;
C1 es el volumen de inculo en la muestra;
C2 es el volumen de inculo en el inculo control;
Vt es el volumen total del frasco Winkler, y
Vm es el volumen de muestra sembrada.
11.3 Expresar los resultados como CDBO5 s se inhibe la nitrificacin.
11.4 Reportar los resultados en mg/L de DBO5 con dos cifras significativas con
la presicin (media, desviacin estndar) correspondiente.
12 INTERFERENCIAS
12.1 El pH cido o alcalino
12.2 Cloro residual
12.3 Nitritos: Es la interferencia ms comn en las muestras de DBO5

incubadas. Para eliminarla ver inciso 10.6.5.
12.4 Sustancias inorgnicas y orgnicas reductoras.
13 SEGURIDAD
13.1 No ha sido determinada la carcinogenicidad de todos los reactivos, por lo

que cada sustancia qumica debe tratarse como peligro potencial a la
salud. La exposicin a estas sustancias debe reducirse al menor nivel
posible. Se sugiere que el laboratorio realice inspecciones de higiene
ocupacional de cada reactivo a los que pueda estar expuesto el analista y
que dichos resultados estn a su disposicin.
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ECONOMA
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13.2 Este mtodo puede no mencionar todas las precauciones de seguridad

asociadas con su uso. El laboratorio es responsable de mantener un
ambiente de trabajo seguro y un archivo de las normas de seguridad
respecto a la exposicin y manejo seguro de las substancias qumicas
especificadas en ste mtodo. Debe tenerse un archivo de referencia de
las hojas de informacin de seguridad el cual debe estar disponible a todo
el personal involucrado en estos anlisis.
13.3 Cuando se trabaje con cualquiera de los compuestos qumicos descritos

en este mtodo, debe usar todo el tiempo equipo de seguridad, tal como:
batas, guantes de ltex y lentes de seguridad.
13.4 La preparacin de todos los reactivos usados en este mtodo debe

efectuarse bajo una campana de extraccin. Consulte las hojas de
seguridad sobre manipulacin y disposicin de stos.
13.5 El cido sulfrico es un compuesto qumico debe manejarse con extremo

cuidado. El adicionar cido sulfrico concentrado al agua produce una
fuerte reaccin exotrmica por lo cual esto debe realizarse muy lentamente
con agitacin y enfriamiento externo.
14 MANEJO DE RESIDUOS
Es responsabilidad del laboratorio cumplir con todos los reglamentos federales,

estatales y locales referentes al manejo de residuos, particularmente las reglas de
identificacin, almacenamiento y disposicin de residuos peligrosos.
14.1 Cada laboratorio debe contemplar dentro de su programa de control de

calidad el destino final de los residuos generados durante la determinacin.
14.2 Los desechos cidos se deben neutralizar para su posterior desecho.
14.3 Todas las muestras que cumplan con la norma de descarga al

alcantarillado pueden ser descargadas en el mismo.
15 BIBLIOGRAFA
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SECRETARA DE
ECONOMA
DGN
NOM-001-ECOL-1996 Que establece los lmites mximos permisibles de

contaminantes en las descargas de aguas
residuales en aguas y bienes nacionales,
publicada en el Diario Oficial de la Federacin el 6
de enero de 1997.
NOM-008-SCFI-1993 Sistema General de Unidades de Medida,

publicada en el Diario Oficial de la Federacin el
14 de octubre de 1993.
NMX-AA-003-1980 Aguas residuales - Muestreo. Declaratoria de

vigencia publicada en el Diario Oficial de la
Federacin el 25 de marzo de 1980.
NMX-AA-014-1980 Cuerpos receptores - Muestreo. Declaratoria de

Federacin el 5 de septiembre de 1980.
NMX-AA-089/1-1986 Proteccin al ambiente - Calidad del agua -

Vocabulario - Parte 1. Declaratoria de vigencia
15 de julio de 1986.

Vocabulario. Parte 2. Declaratoria de vigencia
24 de marzo de 1992.
NMX-AA-108-1992 Calidad del agua - Determinacin de cloro libre y

cloro total - Mtodo volumtrico de la DPD ferrosa.
Declaratoria de vigencia publicada en el Diario
Oficial de la Federacin el 24 de marzo de 1992.
PROY-NMX-AA-115-SCFI-2001 Anlisis de agua - Criterios generales para el

control de la calidad de resultados analticos.
Aviso de consulta pblica publicado en el Diario
Oficial de la Federacin el 2 de noviembre de
1999.
PROY-NMX-AA-116-SCFI-2001 Anlisis de agua - Gua de solicitud para la

presentacin de mtodos alternos. Aviso de
consulta pblica publicado en el Diario Oficial de
la Federacin el 2 de noviembre de 1999.
AWWA Mtodo-5210 B Biochemical Oxigen Demand (BOD), Standard

Methods for Examination of Water and
Wastewater, American Public Health Association
(APHA), American Water Works Association
19/20
SECRETARA DE
ECONOMA
DGN
(AWWA), Water Pollution Control Federation

(WPCF), 19a Ed.
Criterios Ecolgicos de Calidad del Agua, publicados en el Diario Oficial de la

Federacin el 13 de diciembre de 1989.
Sawyer, C.N. y P.L. McCarty, Chemistry for Environmental Engineering, McGraw-Hill

Tokio, 1978.
16 CONCORDANCIA CON NORMAS INTERNACIONALES
Esta norma mexicana no es equivalente a ninguna norma internacional por no existir

referencia alguna al momento de su elaboracin.
MXICO D.F., A
EL DIRECTOR GENERAL DE NORMAS.
MIGUEL AGUILAR ROMO
JADS/AFO/DLR/MRG.
ANLISIS DE AGUA - DETERMINACIN DE LA DEMANDA

BIOQUMICA DE OXGENO EN AGUAS NATURALES,
RESIDUALES (DBO5) Y RESIDUALES TRATADAS - MTODO DE
PRUEBA (CANCELA A LA NMX-AA-028-1981)
WATER ANALISYS - DETERMINATION OF THE BIOCHEMICAL

OXYGEN DEMAND IN NATURAL, WASTEWATERS (BOD5) AND
WASTEWATERS TREATED - TEST METHOD
SECRETARA DE
ECONOMA
DGN
PREFACIO
En la elaboracin de la presente norma mexicana participaron las siguientes empresas

e instituciones:
- CASA ROCAS, S.A. DE C.V.
- CENTRO DE SERVICIOS QUMICOS DE AGUASCALIENTES
- CENTRO NACIONAL DE METROLOGA
- COMISIN ESTATAL DE AGUA Y SANEAMIENTO
- COMISIN FEDERAL DE ELECTRICIDAD
- COMISIN NACIONAL DEL AGUA
- COMIT TCNICO DE NORMALIZACIN NACIONAL DE PROTECCIN

AL AMBIENTE
- CORPORACIN MEXICANA DE INVESTIGACIN EN MATERIALES
- FISHER SCIENTIFIC MEXICANA, S.A. DE C.V.
- GOBIERNO DEL DISTRITO FEDERAL

Direccin General de Construccin y Operacin Hidrulica;
Direccin General de Normatividad y Apoyo Tcnico.
- INSTITUTO MEXICANO DEL PETRLEO
- INSTITUTO NACIONAL DE ECOLOGA

SECRETARA DE
ECONOMA
DGN
- INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas.
- INSTITUTO TECNOLGICO Y DE ESTUDIOS SUPERIORES

Campus Monterrey.
- LABORATORIO DE ECOLOGA INDUSTRIAL, S.A. DE C.V.
- LABORATORIO DE PEMEX PERFORACIN Y MANTENIMIENTO DE

POZOS
- LABORATORIO DE QUMICA DEL MEDIO E INDUSTRIAL, S.A. DE C.V.
- LABORATORIO IDECA, S.A. DE C.V.
- LABORATORIO QUMICO INDUSTRIAL, S.A. DE C.V.
- LABORATORIOS ABC QUMICA, INVESTIGACIN Y ANLISIS, S.A. DE

C.V.
- MERCK- MXICO, S.A. DE C.V.
- NOVAMANN, S.A. DE C.V.

Laboratorio Control Qumico.
- PERKIN ELMER DE MXICO, S.A. DE C.V.
- PETROQUMICA CANGREJERA, S.A. DE C.V.
- PETROQUMICA MORELOS, S.A. DE C.V.
- PETROQUMICA PAJARITOS, S.A. DE C.V.
- PROTECCIN AMBIENTAL Y ECOLOGA, S.A. DE C.V.

SECRETARA DE
ECONOMA
DGN
- SECRETARA DE MEDIO AMBIENTE Y RECURSOS NATURALES

Instituto Mexicano de Tecnologa del Agua.
- SECRETARA DE SALUD
- SERVICIOS AMBIENTALES MULTIPLES E INGENIERA, S.A. DE C.V.
- SERVICIOS DE INGENIERA Y CONSULTORA AMBIENTAL, S.A. DE

C.V.
- SISTEMA INTERMUNICIPAL DE AGUA POTABLE Y ALCANTARILLADO
- UNIVERSIDAD AUTNOMA DEL ESTADO DE MXICO
- UNIVERSIDAD AUTNOMA METROPOLITANA

Unidad Azcapotzalco.
- UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO

Facultad de Qumica;
Instituto de Geofsica;
Instituto de Ingeniera.
- VARIAN, S.A. DE C.V.
NDICE DEL CONTENIDO
Nmero del captulo Pgina

SECRETARA DE
ECONOMA
DGN
0 Introduccin 1
1 Objetivo y campo de aplicacin 1
2 Referencias 2
3 Principio del mtodo 2
4 Definiciones 2
5 Reactivos y patrones 7
6 Equipo y materiales 9
7 Recoleccin, preservacin y almacenamiento de muestras 10
8 Control de calidad 10
9 Calibracin 11
10 Procedimiento 11
11 Clculos 16
12 Interferencias 17
13 Seguridad 17
14 Manejo de residuos 18
15 Bibliografa 19
16 Concordancia con normas internacionales 20

SECRETARIA DE COMERCIO
FOMENTO INDUSTRIAL
NORMA MEXICANA
NMX-AA-071-1981
ANALISIS DE AGUA-DETERMINACION DE PLAGUICIDAS

ORGANOCLORADOS.-METODO DE CROMATOGRAFIA DE
GASES
ANALYSIS OF WATER-DETERMINATION OF ORGANOCHLORINE

PESTICIDES GAS CHROMATOGRAPHY METHOD
DIRECCION GENERAL DE NORMAS

NMX-AA-71-1981
PREFACIO
En la elaboracin de esta norma participaron los siguientes organismos e instituciones:
- SECRETARIA DE AGRICULTURA Y RECURSOS HIDRAULICOS.-

Direccin General de Proteccin y Ordenacin Ecolgica.
- SECRETARIA DE SALUBRIDAD Y ASISTENCIA.-

Departamento de Vigilancia de Aguas Receptoras.
- COMISION FEDERAL DE ELECTRICIDAD.- Laboratorio.
- LABORATORIOS NACIONALES DE FOMENTO INDUSTRIAL.-

Departamento de Contaminacin.
- FERTILIZANTES MEXICANOS, S.A.- Subgerencia de Investigacin.
- INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL.- Centro de Investigacin y de

Estudios Avanzados del Instituto Politcnico Nacional.- Laboratorio de
Toxicologa Analtica y Qumica Ambiental.- Departamento de Farmacologa.
NMX-AA-71-1981
ANALISIS DE AGUA-DETERMINACION DE PLAGUICIDAS

ORGANOCLORADOS.-METODO DE CROMATOGRAFIA DE GASES
ANALYSIS OF WATER-DETERMINATION OF ORGANOCHLORINE

PESTICIDES GAS CHROMATOGRAPHY METHOD
1 OBJETIVO Y CAMPO DE APLICACION
La presente Norma Oficial Mexicana establece el mtodo para la determinacin de

plaguicidas organoclorados por cromatografa de gases en aguas naturales y residuales.
2 REFERENCIAS
Esta Norma se complementa con las Normas Mexicanas en vigor:
NOM-AA-003 Aguas residuales.- Muestreo.
NOM-AA-014 Cuerpos receptores.- Muestreo.
NOM-BB-014 Clasificacin y tamaos nominales para utensilios de vidrio

usados en el laboratorio.
NOM-Z-001 Sistema general de unidades de medida.- Sistema (SI) de

unidades.
NOM-K-370 Plaguicidas.- Clasificacin toxicloga.
3 RESUMEN DEL METODO
El mtodo consiste en la extraccin por particin con un solo disolvente orgnico, de los
plaguicidas presentes en el agua y su posterior separacin y purificacin por
cromatografa en columna. Finalmente su cualificacin y cuantificacin se hace por
cromatografa gas - lquido usando un detector de captura de electrones.
4 DEFINICIONES
Para los efectos de esta norma se establecen las siguientes definiciones:
4.1 Plaga
Es cualquier tipo de vida animal o vegetal (insecto, roedor, nemtodo, hongo, maleza,
etc.), que afecta la salud y/o bienestar del hombre e impide el mayor aprovechamiento
de los animales y plantas que le son tiles.
NMX-AA-71-1981
4.2 Plaguicidas
Cualquier sustancia o mezcla de sustancias que se destine a destruir, controlar, evitar,

atenuar o repeler la accin de cualquier plaga.
4.3 plaguicidas organoclorado
Compuesto qumico de estructura molecular orgnica variable que contiene cloro.
4.4 Disolvente grado plaguicida
Un disolvente orgnico se considera grado plaguicida o nanogrado, si el cromatograma

obtenido en un cromatgrafo gas - lquido con detector de captura de electrones, al
concentrarse cien veces no presenta picos.
5 REACTIVOS
Los reactivos que a continuacin se mencionan deben ser grado plaguicida menos que
se indique otra cosa. Cuando se hable de agua se debe entender agua destilada. Su
manejo debe realizarse en materiales de vidrio.
5.1 Hexano (C6H14)
5.2 Eter de petrleo punto de ebullicin 303 K - 333 K (30 0C 60 0C)
5.3 Benceno (C6H6)
5.4 Cloroformo (CH3Cl)
5.5 Acetona (CH3 - CO - CH3)
5.6 Cloruro de metileno (CH2Cl2)
5.7 Iso-octano (C8H18)
5.8 Heptano (C7H16)
5.9 Tolueno (C6H5CH3)
5.10 Florisil para cromatografa en columna malla 60/100.
5.11 Sulfato de sodio granular y anhdro (Na2SO4) grado analtico.
5.12 Agua grado plaguicida (ver inciso 9.3.2).
5.13 Plaguicidas organoclorados (98% al 100% de pureza).
5.13.1 Lindano ( - HCH)

NMX-AA-71-1981
5.13.2 Lindano ( - HCH)
5.13.3 Hepatocloro.
5.13.4 Epxido de heptacloro.
5.13.5 Dieldrin.
5.13.6 Endrin.
5.13.7 Dicloro difenil etano (DDE).
5.13.8 DDD TDE.
5.13.9 Keltano o dicofol.
5.13.10 Metoxicloro.
5.13.11 Toxafeno.
6 PREPARACION DE LOS PATRONES DE PLAGUICIDAS

ORGANOCLORADOS
NOTA 1: Usar guantes desechables de hule o plstico y mascarilla al preparar

todos los patrones analticos ya que al contacto con la piel, ingestin o
inhalacin de los plaguicidas concentrados puede causar trastornos
graves o la muerte.
6.1 Determinar la masa de 25 mg del patrn en la microbalanza analtica y

aforar a 25 cm 3 con iso-octano como disolvente, esta solucin da una concentracin de
1 x 10-3 g/ cm, tomar 1 cm de esta solucin y aforar a 100 cm con el mismo
disolvente, en esta dilucin se tiene una concentracin de 1 x 10-5 g/ cm.
NOTA 2: El iso-octano tiene un punto de ebullicin cercano a 373 K (100 0C) lo

cual reduce la evaporacin en los matraces de las soluciones de
plaguicidas que continuamente se estn abriendo.
6.2 De esta ultima solucin (6.1) tomar 1 cm y aforar a 50 cm con hexano

para obtener una concentracin de 2 x 10-7 g/ cm. Finalmente preparar una dilucin de
2 x 10-8 g/ cm tomando 1 cm de la dilucin y aforndola a 10 cm con hexano.
NOTA 3: Tanto los patrones de plaguicidas como las mezclas de stas, se deben
conservar en un congelador a 258 K (-15 0C). Estas soluciones slo son tiles durante 6
meses.
NMX-AA-71-1981
7 MATERIALES Y EQUIPO
7.1 Material
Todo el material de vidrio que se emplee en la determinacin de residuos de plaguicidas

se debe lavar como se indica a continuacin:
Lavar el material de vidrio con agua y detergente neutro, enjuagarlo con abundante agua
de la llave y sumergirlo en mezcla crmica para eliminar las impurezas orgnicas.
Enjuagar sucesivamente con agua de la llave, con agua destilada y acetona grado
analtico, secar en un horno a 403 K (130 0C).
El material as lavado se tapa con papel aluminio y se guarda hasta el momento de su

uso.
NOTA 4: Todo el material inmediatamente antes de usarse, debe enjuagarse con

acetona y hexano grado plaguicida.
7.1.1 Material comn de laboratorio.
7.1.2 Botellas de vidrio para muestreo con capacidad de un dm y con tapn

con contratapa de tefln.
7.1.3 Embudos de separacin con capacidad de 2 dm, con llave de tefln.
7.1.4 Columna cromatogrfica de 19 mm de dimetro interior, 40 cm de

longitud y con llave de tefln.
7.1.5 Microjeringas de 10 dm de capacidad para cromatgrafo de gases.
7.1.6 Pipetas pasteur o transfer.
7.1.7 Tubos de centrfuga graduados de 15 cm con tapn esmerilado.
7.1.8 Micro esptula de acero inoxidable.
7.1.9 Frascos Winkler.
7.1.10 Rollo de parafilm.
7.2 Equipo
7.2.1 Cromatgrafo de gases equipado con:
7.2.1.1 Detector de captura de electrones (tritio o nickel 63).
7.2.1.2 Registrador con diferentes velocidades compatible con el detector y

equipo electrnico.
NMX-AA-71-1981
7.2.1.3 Columna cromatogrfica para cromatgrafo gas-lquido, de vidrio, de

180 cm de longitud por 4 mm de dimetro interior.
7.2.1.4 Lnea de la fase mvil o (gas acarreador) con un cartucho de secado con
tamiz molecular de 4 A.
7.2.2 Evaporador rotatorio.
7.2.3 Microbalanza analtica con una precisin de 0.01 mg.
7.2.4 Mufla con control de temperatura.
7.2.5 Refrigerador con congelacin a una temperatura de 253 K (-20 0C).
8 MUESTREO
El muestreo se efecta, segn sea el caso, como se indica en las normas NOM-AA-003
NOM-AA-014 en vigor.
8.1 Muestrear con un recipiente de vidrio de un dm con tapn con

contratapa de tefln. La muestra se toma nicamente en la superficie del cuerpo receptor
que se v a analizar. En caso de muestras de aguas profundas se debe utilizar para el
muestreo frascos Winkler.
8.2 Conservar las muestras durante el transporte a 277 K (4 0C).
8.3 Conservar las muestras en refrigeracin a la misma temperatura.
9 PURIFICACION DE LOS REACTIVOS
9.1 Florisil
9.1.1 Activacin del florisil
Determinar la masa de 500 g de florisil, transferirlos a un vaso de precipitados y

adicionar lentamente la suficiente agua desionizada para cubrirlos, dejar reposar la
suspensin 5 minutos y homogeneizar con movimientos circulares.
Filtrar a travs de un embudo Bckner acoplado a un kitazato sin vaco; enjuagar 4

veces ms con agua desionizada y finalmente succionar con ayuda de vaco el agua que
quede. Transferir el florisil hmedo a cpsulas de porcelana y calentar durante 2 h en
una mufla a 923 K (650 0C). Despus colocarlo en charolas pyrex y calentar durante 18
h a 383 K (110 0C). Finalmente, transferir el florisil a frascos de vidrio mbar, sellar con
parafilm y almacenar a temperatura ambiente.
NMX-AA-71-1981
9.1.2 Desactivacin del florisil
Determinar la masa de 100 g de florisil activado, en un matraz baln de 300 cm con

boca esmerilada 24/40, adicionar 3 cm de agua grado plaguicida gota a gota,
distribuyndola en la superficie del florisil uniformemente. Despus, homogeneizar con
la ayuda del evaporador rotatorio durante 15 minutos a temperatura y presin ambiente.
Transferir el florisil desactivado a un frasco de vidrio mbar y sellar con parafilm.
NOTA 5: Preparse la desactivacin del florisil inmediatamente antes de usarse. El

florisil desactivado as preparado est en condiciones de usarse durante una semana
nicamente.
9.2 Sulfato de sodio
Determinar la masa de 300 g de sulfato de sodio, transferirlos a cpsulas de porcelana y

calentar a 933 K (660 0C) en una mufla durante 48 horas. Enfriar en una estufa a 383 K
(110 0C), transferir a frascos de vidrio mbar, sellar con parafilm y almacenar a
temperatura ambiente.
9.3 Disolventes
9.3.1 Prueba de pureza
A 100 cm del disolvente que se desea probar, aadir 4 gotas de iso-octano y concentrar
a 1 cm con ayuda del evaporador rotatorio. En el caso de la acetona, cloroformo,
cloruro de metileno, tolueno y benceno se deben llevar a sequedad y aadir
aproximadamente 1 cm de hexano. Posteriormente inyectar en el cromatgrafo de 3 a 5
dm de las porciones obtenidas, segn se indica en el inciso 11.
NOTA 6. Un buen disolvente es aquel que al inyectar de 3 a 5 dm da un

cromatograma con cero de interferencias usando el detector de captura de electrones.
9.3.2 Agua grado plaguicida
Colocar 1 dm de agua en un embudo de separacin de 2 dm y agregar 100 cm de

cloroformo, agitar durante 5 minutos para llevar a cabo la extraccin de las impurezas.
Dejar reposar hasta que se separen las fases y eliminar la fase orgnica. Aadir 100 cm
de benceno, agitar vigorosamente durante 5 minutos, dejar reposar y eliminar la fase
orgnica. Finalmente agregar 100 cm de hexano, agitar 5 minutos y dejar separar las
fases. Transferir el agua as purificada a un frasco de vidrio previamente lavado como se
indica en el inciso 7.1 y desechar el hexano.
NMX-AA-71-1981
10 PREPARACION DE LAS MUESTRAS
10.1 Para el control del mtodo de extraccin y purificacin se efecta en

iguales condiciones y simultneamente tres muestras: un blanco, un duplicado y una
muestra de concentracin conocida de plaguicidas organoclorados. As mismo preparar
un estandar de recuperacin colocando en un tubo de centrfuga graduado de 15 cm la
misma cantidad de solucin de plaguicidas organoclorados que se usa en la preparacin
de la muestra de concentracin conocida. Guardar este tubo en el congelador a 253 K (-
20 0C) hasta la terminacin de la preparacin de las muestras y en ese momento llevarlo
al mismo volumen de la muestra de concentracin conocida de plaguicidas
organoclorados.
10.2 Extraccin
10.2.1 Medir en una probeta un dm de la muestra y transferirla a un embudo de

separacin de 2 dm.
10.2.2 Agregar 100 cm de hexano y agitar vigorosamente al embudo durante 3

minutos, dejar reposar hasta que se separen las fases. Si se forma una emulsin aadir 5
cm de una solucin saturada de sulfato de sodio.
10.2.3 Drenar la fase acuosa a la probeta empleada para medir la muestra.
10.2.4 Pasar la fase orgnica a travs de una columna que contenga una capa de 5 cm
de altura de sulfato de sodio pretratado (9.2) recibir la fase orgnica en un matraz de
fondo redondo de 500 cm.
10.2.5 Transferir nuevamente el agua de la probeta al embudo de separacin,

repetir desde el inciso 10.2 con porciones de 50 cm de hexano dos veces y colectar los
extractos de hexano en el matraz de 500 cm.
10.2.6 Concentrar lentamente los extractos obtenidos de 1 a 2 cm con ayuda de

vaco en un evaporador rotatorio.
10.3 Purificacin
10.3.1 En una columna cromatogrfica (7.1.4) colocar un tapn de lana de vidrio en el

fondo y enjuagar con acetona y hexano, aadir 2 cm de altura desulfato de sodio
pretratado golpeando ligeramente la columna para tener una superficie uniforme.
Siguiendo el mismo procedimiento agregar 15 g de florisil desactivado al 3% y en la
parte superior aadir nuevamente 2.5 cm de altura de sulfato de sodio pretratado.
10.3.2 Con una pipeta Pasteur transferir cuantitativamente el concentrado

(10.2.6) a la columna preparada en 10.3.1 de la siguiente manera:
10.3.2.1 Pasar el contenido de un recipiente a otro usando una pipeta Pasteur.
10.3.2.2 Enjuagar el primer recipiente con 2 cm de hexano y transferir al segundo

recipiente. Repetir esta operacin por tres veces ms.
NMX-AA-71-1981
10.3.2.3 Esperar a que el disolvente baje a 1 mm de la superficie de la capa

superior del sulfato entre cada enjuague.
NOTA 7: Nunca permitir que la columna se seque.
10.3.2.4 Enseguida del ltimo lavado eluir el extracto que se encuentra en la

columna con 200 cm de una mezcla benceno-hexano (1:1). Dejar escurrir el disolvente
por la pared de la columna para que no se altere la superficie del sulfato de sodio y
recoger el eluato en un matraz baln de 500 cm con boca esmerilada 24/40.
10.3.2.5 Concentrar lentamente el eluato hasta aproximadamente 1 cm con ayuda

de vaco en un evaporador rotatorio.
10.3.2.6 Transferir el concentrado anterior cuantitativamente, como se menciona en

los incisos 10.3.2.1 a 10.3.2.2, a un tubo de centrfuga graduado de 15 cm hasta
completar un volumen de 10 cm.
11 PROCEDIMIENTO
El anlisis cromatogrfico consiste en identificar los plaguicidas organoclorados

presentes en la muestra problema de acuerdo a su tiempo de retencin. Se inyectan en el
cromatgrafo alternadamente de 2 a 3 dm de las muestras a analizar y los patrones
individuales de los plaguicidas bajo las condiciones de operacin adecuadas al tipo de
aparato con el que se este trabajando.
11.1 Cualificacin
Inyectar primero el blanco, el estndar de recuperacin y la muestra de concentracin

conocida de plaguicidas organoclorados, enseguida, inyectar en forma alternada las
muestras problema y los patrones individuales de los plaguicidas cuando menos en dos
columnas cromatogrficas de empaque con polaridad diferente para identificar con
seguridad los compuestos organoclorados que tienen cada una de las muestras.
11.2 Cuantificacin
La cuantificacin se efecta usando cualquiera de las dos columnas cromatogrficas

empleadas en el inciso 11.1. As, simultneamente se confirma la identidad de cada
plaguicida. La cuantificacin se hace relacionando las alturas de los picos de las
muestras con las alturas de los picos de las soluciones patrn utilizando la siguiente
frmula:
mg Am Vie . Ce . X ATm
--- = ------- . -------------------------- . -------- .10-6
dm Ae Vim . Vm Ate
En donde:
Am = Altura del pico de la muestra, en cm

NMX-AA-71-1981
Ae = Altura del pico del patrn, en cm
Vie = Volumen inyectado del patrn, en dm
Vim= Volumen inyectado de la muestra, en dm
Ce = Concentracin del patrn, en g/ cm
X= Volumen de dilucin de la muestra extrada, en cm
Vm = Volumen inicial de la muestra, en cm
ATm = Atenuacin del amplificador en la muestra
ATe = Atenuacin del amplificador en el patrn
106 = Constante para transformar de g/ cm a mg/ dm
Cuando se trabaja a una misma atenuacin no es necesario poner estos factores en la

frmula.
12 INFORME
Debe incluir lo siguiente:
- Identificacin completa de la muestra
- Referencia a este mtodo de prueba
- Plaguicidas organoclorados, en cm g/ dm
- Fecha de la prueba.
13 BIBLIOGRAFIA
- Analytical Methods Manual.- 1979.
- Inland Waters Directorate.- Water Quality Branch.- Ottawa Canada.
- Standard Methods for Examination of Water and Wastewater.- Amaerican

Public Health Association (APHA), American Water Works Association
(AWWA), Water pollution Control Federation (WPCF).- 14th Edition.
NMX-AA-71-1981
No concuerda con ninguna por no existir norma internacional sobre el tema.
.Mxico, D.F., Enero 28, 1981
EL DIRECTOR GENERAL
DR. ROMAN SERRA CASTAOS

SECRETARIA DE COMERCIO
FOMENTO INDUSTRIAL
NORMA MEXICANA
NMX-AA-053-1981
ANALISIS DE AGUAS - DETERMINACION DE MATERIA

EXTRACTABLE CON CLOROFORMO
ANALYSIS OF WATER - DETERMINATION OF EXTRACTABLE -

MATTER WITH CHLOROFORM
DIRECCION GENERAL DE NORMAS

NMX-AA-053-1981
PREFACIO
En la elaboracin de esta Norma participaron los siguientes organismos e instituciones:
- SECRETARIA DE SALUBRIDAD Y ASISTENCIA.-

Subsecretara de Mejoramiento del Ambiente.-
Direccin de Saneamiento del Agua.
- SECRETARIA DE AGRICULTURA Y RECURSOS HIDRAULICOS.-

Centro de Investigacin y Entrenamiento para Controlar la Calidad del Agua.
- COMISION FEDERAL DE ELECTRICIDAD.

Laboratorio.
- FERTILIZANTES DE MEXICO, S.A. DE C.V.

Subgerencia de Investigacin.
- LABORATORIOS NACIONALES DE FOMENTO INDUSTRIAL.-

Departamento de Contaminacin.
NMX-AA-053-1981
ANALISIS DE AGUAS - DETERMINACION DE MATERIA

EXTRACTABLE CON CLOROFORMO
ANALYSIS OF WATER - DETERMINATION OF EXTRACTABLE -

MATTER WITH CHLOROFORM
1 OBJETIVO
Esta Norma establece el mtodo gravimtrico para la determinacin de materia orgnica

susceptible de ser extrada con cloroformo.
2 CAMPO DE APLICACION
Este mtodo es aplicable en aguas residuales y naturales (superficiales y marinas).
3 PRINCIPIO
El mtodo se basa en la solubilidad diferencial que presentan algunos compuestos

orgnicos presentes en el agua hacia un disolvente polar, como es el caso del
cloroformo. Este se pone en ntimo contacto con la muestra para extraer la materia
orgnica la cual es cuantificable gravimtricamente.
4 REFERENCIAS
Esta Norma se complementa con las Normas Oficiales Mexicanas en vigor siguientes:
NMX-AA-3 Aguas residuales.- Muestreo.
NMX-AA-14 Cuerpos receptores.- Muestreo.
NMX-BB-14 Clasificacin y tamaos nominales para utensilios de vidrio

usados en laboratorio.
NMX-Z-1 Sistema general de unidades.- Sistema (SI) de unidades.
5 DEFINICIONES
Extractables con cloroformo: fraccin orgnica soluble en cloroformo que comprende

aceites pesados, grasas, trazas de fenoles, polmeros naturales y sintticos, resinas
(asfaltenos y carbenos) y productos de descomposicin del tanino (cido tnico).
NMX-AA-053-1981
6 REACTIVOS
Los reactivos que a continuacin se mencionan deben ser grado analtico, cuando se
hable de agua se debe entender agua destilada y/o desionizada.
6.1 Cloroformo (CHCl3)
6.2 Acido Clorhdrico (HCl) 1:1
7 APARATOS
7.1 Embudo de separacin de 1000 cm provisto de vlvulas de tefln.
7.2 Papel filtro Whatman No. 1
7.3 Parrilla elctrica con control de temperatura
7.4 Balanza analtica con sensibilidad de 0.1 mg
7.5 Estufa
7.6 Material comn de laboratorio
8 PREPARACION Y CONSERVACION DE LA MUESTRA
8.1 Las muestras deben colectarse en recipientes de vidrio y pueden conservarse

hasta por 24 horas, mantenindolas en refrigeracin a 277 K (4C)
9 PROCEDIMIENTO
9.1 Tomar 800 cm de la muestra y transferir a un embudo de separacin de 1000

cm (Ver Apndice 12.1)
9.2 Agregar HCl 1:1, hasta tener el pH en un mbito de 3 a 4.
9.3 Adicionar 40 cm de cloroformo y tapar el embudo perfectamente. Agitar

vigorosamente durante 5 minutos, destapando peridicamente el embudo para aliviar la
presin interna.
9.4 Dejar reposar el tiempo necesario para la separacin de las fases (Ver Apndice
12.2).
9.5 Drenar la fase orgnica a un embudo de tallo corto, sobre el cual se coloca el
papel filtro.
9.6 Recibir el filtrado en un vaso de precipitados de 200 cm, previamente puesto a

masa constante.
NMX-AA-053-1981
9.7 Agregar otros 20 cm de cloroformo al embudo de separacin y repetir los pasos

descritos de 9.3 a 9.6.
9.8 Lavar el papel filtro con dos porciones de cloroformo de 10 cm cada una,
colectndolas con los extractos filtrados.
9.9 En una parrilla elctrica evaporar paulatinamente el extracto a 313 K (405C) -

333 K (605C) hasta tener un volumen de 5 a 10 cm.
9.10 Secar el extracto en una estufa a 378 K 2 K (105 2C) durante una hora.
9.11 Enfriar en un desecador durante 20 minutos y determinar la masa.
10 PRUEBA TESTIGO
Medir 80 cm de cloroformo, transferir a un vaso de precipitados de 200 cm

previamente secado y puesto a masa constante, y proceder como se describe de 9.9 a
9.11 con el objeto de determinar su residuo.
11 CALCULOS
La concentracin de materia extractable con cloroformo se calcula con la siguiente

frmula:
B-C
A= x 100
V
en donde:
A= materia extractable con cloroformo, en mg/dm
B= diferencia de masa del recipiente con el residuo de la muestra, menos el

recipiente vaco, en mg.
C= diferencia de masa del recipiente con el residuo del testigo, menos el recipiente
vaco, en mg.
V= volumen de la muestra, en cm.
12 APENDICE
12.1 En caso de muestras que presenten bajo contenido de extractables con el

cloroformo, se recomienda tomar el doble de la muestra y de los reactivos o en su
defecto repetir el procedimiento con volmenes de 800 cm tantas veces como sea
necesario acumulando los extractos para obtener una determinacin gravimetrica
confiable.
NMX-AA-053-1981
12.2 Si se forman emulsiones mas o menos estables que impidan la correcta

separacin de las fases, se pueden eliminar introduciendo por la parte superior del
embudo, una varilla de vidrio provista de un "gendarme" y agitando cuidadosamente.
13 BIBLIOGRAFIA
13.1 Annual Book of ASTM Standards. American Society for Testing and Materials.
Part 23, Water Philadelphia Pa, 1972, 190
13.2 Rodier J. Analysis of Water. Ist. Edition. John Wiley and Sons. New York, N.Y.
1975. 325-326.
No concuerda con ninguna Norma Internacional por no existir sobre el tema.
Mxico, D.F., Junio 19, 1980
EL DIRECTOR GENERAL
DR. ROMAN SERRA CASTAOS.
Fecha de aprobacin y publicacin: Julio 10, 1981

CDU: 62.001.4:543.3:547.56
CANCELA A LAS
NMX-AA-050-SCFI-2001 NMX-AA-050-1981
SECRETARA DE
ECONOMA
ANLISIS DE AGUA - DETERMINACIN DE FENOLES

TOTALES EN AGUAS NATURALES, POTABLES, RESIDUALES
Y RESIDUALES TRATADAS - MTODO DE PRUEBA (CANCELA
A LA NMX-AA-050-1981)
WATER ANALISIS - DETERMINATION OF TOTAL PHENOLS IN

NATURAL, DRINKING, WASTEWATERS AND WASTEWATERS
TREATED - TEST METHOD
0 INTRODUCCIN
Los fenoles, definidos como hidroxiderivados del benceno y sus ncleos condensados,
pueden estar presentes en las aguas residuales domsticas e industriales
(desinfectantes, fungicidas, germicidas y conservadores), en las aguas naturales y en
los suministros de agua potable. La cloracin de tales aguas pueden producir
clorofenoles olorosos, que producen mal sabor y que son carcinognicos. Los
procesos de eliminacin de los fenoles en el tratamiento del agua incluyen la
supercloracin, tratamiento con dixido de cloro o cloramina, la ozonizacin y
adsorcin con carbn activado. Para poder realizar de manera adecuada esta
eliminacin, el prevenir problemas y daos a los ecosistemas, as como de evitar los
riesgos a la salud humana es muy importante el conocer cuantitativamente la
presencia de stos.
Esta norma mexicana establece el mtodo para la determinacin de fenoles totales en

aguas naturales, residuales y residuales tratadas.
2/19
SECRETARA DE
ECONOMA
El mtodo esta basado en la destilacin de los fenoles y la subsecuente reaccin de

estos con 4-aminoantipirina a un pH de 10 0.1 en presencia de ferricianuro de
potasio, formando compuestos de un color amarillo intenso a rojo, los cuales son
extrados de la disolucin acuosa con cloroformo midiendo su absorbancia a una
longitud de onda de 460 nm o bien leer directamente el complejo formado a 510 nm.
Este mtodo cubre intervalos de concentracin de 0,001mg/L a 0,250 mg/L y

0,5 mg/L.
3 DEFINICIONES
Para los propsitos de esta norma se establecen las siguientes definiciones:
3.1 Aguas naturales
Se define como agua natural el agua cruda, subterrnea, de lluvia, de tormenta,

residual y superficial.

municipales, industriales, comerciales, agrcolas, pecuarias, domsticos y similares,
as como la mezcla de ellas.
3.3 Anlisis de blanco analtico
Es el someter una alcuota de agua reactivo a todo el proceso de anlisis por el cual
pasa una muestra real. Los laboratorios deben realizar los anlisis de blancos para
corregir la seal de fondo del sistema de medicin. El anlisis de blancos se realizar
en forma peridica o con cada lote de muestras segn lo requiera el mtodo.
3.4 Bitcora

laboratorio. Es a partir de dichas bitcoras que los inspectores pueden reconstruir el
proceso de anlisis de una muestra tiempo despus de que se llev a cabo.
3.5 Blanco
3/19
SECRETARA DE
ECONOMA
Agua reactivo o matriz equivalente a la que no se le aplica ninguna parte del

procedimiento analtico y sirve para evaluar la seal de fondo.

problema.
3.7 Calibracin

funcionamiento.
3.8 Descarga
Accin de verter, infiltrar o depositar o inyectar aguas residuales a un cuerpo receptor

de la Nacin.

caracteriza la dispersin de los resultados, dado por la frmula:
Ax
C (g/m ) =
B
N L Cx
En donde xi es el resultado de la i-sima medicin y x es la media aritmtica de los n
resultados considerados.

4/19
SECRETARA DE
ECONOMA

3.12 Exactitud
Proximidad de concordancia entre el resultado de una medicin y un valor verdadero

del mensurando.
3.13 Lmite de cuantificacin del instrumento
Concentracin mnima del analito en una muestra y que puede ser determinada con
precisin y exactitud aceptables bajo las condiciones de operacin establecidas.
3.14 Lmite de deteccin del instrumento
Concentracin mnima del analito en una muestra y que puede ser cuantificada con
precisin y exactitud aceptables bajo las condiciones de operacin establecidas en el
instrumento.
3.15 Lmite de cuantificacin del mtodo (LCM)
Es la menor concentracin de un analito o sustancia en una muestra que puede ser

cuantificada con precisin y exactitud aceptables bajo las condiciones en que se lleva
a cabo el mtodo.
3.16 Lmite de deteccin del mtodo (LDM)
Es la mnima concentracin de un analito o sustancia en una muestra, la cual puede

ser detectada pero no necesariamente cuantificada bajo las condiciones en que se
lleva a cabo el mtodo.
Material o substancia en el cual uno o mas valores de sus propiedades son

materiales.

las propiedades estn certificados por un procedimiento que establece la trazabilidad a
una realizacin exacta de la unidad en la cual se expresan los valores de la propiedad,
y en el que cada valor certificado se acompaa de una incertidumbre con un nivel
declarado de confianza.
5/19
SECRETARA DE
ECONOMA
3.19 Medicin
3.20 Mensurando

compuesta, el volumen de cada una de las muestras simples deber ser proporcional
al caudal de la descarga en el momento de su toma.
3.22 Muestra simple

3.23 Parmetro
Variable que se utiliza como referencia para determinar la calidad del agua.
Material de referencia, instrumento de medicin, medida materializada o sistema de

medicin destinado a definir, realizar, conservar o reproducir una unidad o uno o
ms valores de una magnitud para utilizarse como referencia.
3.25 Patrn nacional (de medicin)
Patrn reconocido por una decisin nacional en un pas, que sirve de base para
asignar valores a otros patrones de la magnitud concerniente.
3.26 Patrn primario
Patrn que es designado o reconocido ampliamente como un patrn que tiene las ms
altas cualidades metrolgicas y cuyo valor es aceptado sin referencia a otros patrones
de la misma magnitud.

6/19
SECRETARA DE
ECONOMA
magnitud.

dicho lugar.

3.30 Precisin

confianza o incertidumbre:
s
x = x t /2
n
donde:
x es la media calculada a partir de un mnimo de tres mediciones
independientes;
3.31 Trazabilidad

7/19
SECRETARA DE
ECONOMA
4.1 Equipo
4.1.1 Balanza analtica con precisin de 0,1 mg
4.1.2 Equipo de destilacin. Debe ser completamente de vidrio de borosilicato, y

constar de un matraz para destilacin de 1 L con un condensador tipo
Graham o equivalente.
4.1.3 Potencimetro de laboratorio con sus respectivos electrodos para medicin

de pH.
4.1.4 Espectrofotmetro disponible para utilizarse de 190 a 900 nm equipado

con celdas de 1 cm de paso ptico de luz.
4.2 Materiales
Todo el material volumtrico utilizado en este procedimiento debe ser de clase A con
certificado o en su caso debe estar calibrado.
4.2.1 Papel filtro. Usar un papel filtro cualitativo y Sulfato de Sodio anhidro para
los extractos de Cloroformo filtrables.
4.2.2 Embudos de separacin. Deben ser de 1 L, tipo Squibb, con llaves de

cierre de TPF.
Todos los productos qumicos usados en este mtodo deben ser grado reactivo
analtico, a menos que se indique otro grado.
Agua: Debe entenderse agua que cumpla con las siguientes caractersticas: a)
Resistividad, megohm-cm a 25C: 0,2 min.; b) Conductividad, S/cm a 25C: 5,0 Mx.
y c) pH: 5,0 a 8,0.
En el caso de la preparacin de estndares en que se use fenol el agua debe estar

previamente hervida y enfriada a temperatura ambiente.
8/19
SECRETARA DE
ECONOMA
5.1 Fenol (C6H60)
5.2 Bromato de potasio (KBrO3)
5.3 Bromuro de potasio (KBr)
5.4 cido clorhdrico concentrado (HCl)
5.5 Cloruro de amonio (NH4Cl).
5.6 Sulfato de cobre pentahidratado (CuSO4.5H2O)
5.7 4-aminoantipirina
5.8 Ferricianuro de potasio [K3Fe(CN)6]
5.9 Cloroformo (CHCl3)
5.10 Tiosulfato de sodio pentahidratado (Na2S2O35H2O)
5.11 Hidrxido de sodio (NaOH)
5.12 Biyodato de potasio [KH(IO3) 2]
5.13 Almidn soluble
5.14 Sulfato de sodio anhidro (Na2SO4)
5.15 Yoduro de potasio (KI)
5.16 cido fosfrico (H3PO4)
5.17 Naranja de metilo
5.18 cido sulfrico concentrado (H2SO4)
5.19 Cloruro de sodio (NaCl)
5.20 cido saliclico (C8H8O2)
5.21 Amoniaco concentrado NH3
5.22 Disolucin patrn de fenol (1g/L). Pesar aproximadamente y con precisin

1,00 g de fenol (ver inciso 5.1) y diluir con agua a 1 L. Valorar como se
indica en los incisos 5.22.1 y 5.22.2. Esta disolucin es txica, manipular
con extremo cuidado. Pesar el fenol en un pesafiltro como sigue: pesar el
9/19
SECRETARA DE
ECONOMA
pesafiltro con tapa en la balanza analtica sacar con cuidado el pesafiltro

abrir y depositar la cantidad de fenol necesaria para lograr el peso
deseado, tapar de nuevo el pesafiltro y pesar de nuevo.
5.22.1 Aadir 50,0 mL de la disolucin patrn de fenol (ver inciso 5.22) y 10,0 mL
de la disolucin de bromato-bromuro (ver inciso 5.25) a 100 mL de agua en
un matraz cnico de tapn de cristal de 500 mL. Inmediatamente aadir
5,0 mL de cido clorhdrico concentrado (ver inciso 5.4) y agitar
suavemente. Si el color marrn del bromo libre no persiste, agregar
porciones de 10,0 mL de disolucin de bromato-bromuro hasta que lo
haga. Tapar el matraz y dejar reposar en obscuridad durante 10 min;
posteriormente aadir aproximadamente y con precisin 1 g de yoduro de
potasio (ver inciso 5.15). Valorar con disolucin de tiosulfato de sodio (ver
inciso 5.26), agregando como indicador la disolucin de Almidn (ver inciso
5.27). Suelen requerirse cuatro porciones de 10 mL de disolucin bromato-
bromuro si la disolucin patrn de fenol contiene 1,0 g de Fenol por litro.
5.22.2 Preparar un blanco exactamente de la misma manera, utilizar agua y 10,0

mL de disolucin de bromato-bromuro (ver inciso 5.25). Valorar el blanco
con disolucin de tiosulfato de sodio 0,025M (ver inciso 5.26), utilizar como
indicador la disolucin de almidn (ver inciso 5.27).
Utilizar la siguiente ecuacin para el clculo de la valoracin de la disolucin patrn de

fenol
mg/L de fenol = 7,842 [(AxB)- C]
donde:
A son los mL de la disolucin de tiosulfato de sodio usado para el blanco;

B son los mL de la disolucin de bromato-bromuro utilizada por la muestra
dividida entre 10, y
C son los mL de la disolucin de tiosulfato de sodio usado para la muestra.
5.23 Disolucin intermedia de fenol (10 g/mL mg/ L). Diluir 10,0 mL de la
disolucin patrn de fenol (ver inciso 5.22) en agua hasta 1 L; 1,0 mL
contiene aproximadamente 10,0 g de Fenol. Preparar diariamente.
5.24 Disolucin de trabajo de fenol (1 g/mL). Diluir 50,0 mL de disolucin

intermedia de fenol (ver inciso 5.23) hasta 500 mL con agua reactivo; 1,0
mL contiene aproximadamente 1,0 g de fenol. Preparar 2 h antes de su
uso.
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SECRETARA DE
ECONOMA
5.25 Disolucin de bromato-bromuro. Pesar aproximadamente y con precisin

2,784 g de bromato de potasio (ver inciso 5.2) y diluir en agua, aadir 10 g
de bromuro de potasio (ver inciso 5.3), diluir a 1 L.
5.26 Disolucin valorante de tiosulfato de sodio (0,025M). Pesar

aproximadamente y con precisin 6,205 g de tiosulfato de sodio
pentahidratado (ver inciso 5.10) en agua. Aadir 0,4 g de hidrxido de
sodio (ver inciso 5.11) y diluir a 1 L. Valorar con disolucin de biyodato de
potasio (ver inciso 5.26.1). P
5.26.1 Disolucin estndar de biyodato de potasio (0,002 1 M). Pesar

aproximadamente y con precisin 812,4 mg de biyodato de potasio (ver
inciso 5.12) y aforar a 1 L de agua.
5.26.2 Valoracin. Pesar aproximadamente y con precisin 2,0 g de yoduro de

potasio (ver inciso 5.15), libre de yodato y disolver en un matraz
Erlenmeyer con 150 mL de agua. Agregar 1,0 mL de una disolucin de
cido sulfrico 6N (ver inciso 5.32) o unas gotas de cido sulfrico
concentrado (ver inciso 5.18) y 20,0 mL de la disolucin estndar de
biyodato (ver inciso 5.26.1). Diluir a 200 mL y valorar el yodo liberado con
la disolucin de tiosulfato (ver inciso 5.26), agregando como indicador la
disolucin de almidn (ver inciso 5.27) hacia el final de la titulacin, hasta
alcanzar un color paja plido, continuar con la valoracin hasta
desaparecer el color azul. Cuando las disoluciones son de igual
concentracin, se requieren de 20,0 mL de la disolucin de tiosulfato de
sodio (0,025M).
5.27 Disolucin indicadora de almidn (2 % P/V). Pesar aproximadamente y

con precisin 2,0 g de almidn soluble (ver inciso 5.13) y 0,2 g de
cido saliclico (ver inciso 5.20), como conservador, y disolver en 100 mL
de agua caliente.
5.28 Disolucin de cloruro de amonio. Pesar aproximadamente y con precisin

50 g de cloruro de amonio (ver inciso 5.5), disolver y diluir a 1 L.
5.29 Disolucin de 4-aminoantipirina (2% P/V). Pesar aproximadamente y con

precisin 2,0 g de 4-aminoantipirina (ver inciso 5.7) y disolver en 100 mL
de agua. Preparar diariamente.
5.30 Disolucin de ferricianuro de potasio (8 % P/V). Pesar aproximadamente y

con precisin 8,0 g de ferricianuro de potasio (ver inciso 5.8) y disolver en
100 mL de agua. Filtrar si es necesario. Almacenar en un frasco de vidrio
mbar. Preparar cada semana.
11/19
SECRETARA DE
ECONOMA
5.31 Disolucin de cido fosfrico (1:10). Diluir 10,0 mL de cido fosfrico (ver
inciso 5.16) en 100 mL de agua .
5.32 Disolucin de cido sulfrico (aproximadamente 6N). Diluir

aproximadamente 167,27 mL de cido sulfrico concentrado (ver inciso
5.18) en 1 L de agua.
5.33 Disolucin de hidrxido de sodio (2,5N). Pesar aproximadamente y con

precisin 10 g de hidrxido de sodio (ver inciso 5.11) y disolver en 100 mL
de agua .
5.34 Disolucin de cido sulfrico (aproximadamente 1N). Diluir

aproximadamente 27,9 mL de cido sulfrico concentrado (ver inciso 5.18)
en 1 L de agua.
5.35 Disolucin de cobre. Pesar aproximadamente y con precisin 100 g de

sulfato de cobre pentahidratado (ver inciso 5.6) y disolver en 1 L de agua.
5.36 Indicador de naranja de metilo. Pesar aproximadamente y con precisin

0,5 g de naranja de metilo (ver inciso 5.17) y disolver en 1 L de agua.
5.37 Disolucin de amoniaco 0,5 N. Diluir 35 mL de amoniaco concentrado (ver

inciso 5.21) en 1 L de agua.

MUESTRAS
6.1 Debe tomarse un mnimo de 2 L de muestra en un envase de vidrio o

polietileno. Pueden utilizarse muestras compuestas o simples.
6.2 Si las muestras no se analizan en un perodo de 4 h despus de la toma,

acidificar la muestra con 2 mL de cido sulfrico concentrado (ver inciso
5.18) por L de muestra y 5 mL de la disolucin de Cobre (ver inciso 5.35).
6.3 Determinar la presencia de agentes oxidantes. En caso de existir su

presencia, eliminarlos mediante la adicin de sulfato ferroso (FeSO4) o
arsenito de sodio (NaAs2O3) en exceso.
6.4 Mantener en refrigeracin a 4C hasta su anlisis.
6.5 El tiempo mximo de almacenamiento previo al anlisis es de 28 das.
12/19
SECRETARA DE
ECONOMA
- Los nombres y ttulos de los analistas que ejecutaron los anlisis y el encargado
de control de calidad que verific los anlisis, y
- Las bitcoras manuscritas del analista y del equipo en los que se contengan los
siguientes datos:
h) Adems el laboratorio debe mantener la informacin original reportada por los
equipos en disquetes o en otros respaldos de informacin.

resultado final.
7.3 Cada vez que se adquiera nuevo material volumtrico debe de realizarse la
verificacin de la calibracin de ste tomando una muestra representativa
del lote adquirido.
8 CALIBRACIN
Se debe contar con un registro de la calibracin de los equipos y materiales

siguientes:
8.2 Balanza analtica.
8.3 Espectrofotmetro. Calibrar el equipo de acuerdo a las instrucciones

especficas del fabricante.
8.4 Curva de calibracin. Preparar un blanco de reactivos de 500 mL de agua

y cuatro diluciones de Fenol de 500 mL entre 5 y 50 g de Fenol.
13/19
SECRETARA DE
ECONOMA
9 PROCEDIMIENTO
9.1 Destilacin
9.1.1 Tomar una alcuota de 500 mL de la muestra, ajustar el pH a un valor

aproximado de 4 con la disolucin de cido fosfrico (ver inciso 5.31)
utilizando para ello el indicador de naranja de metilo o el potencimetro y
colocar en el aparato de destilacin. Omitir la etapa de adicin de cido
fosfrico y ajustar el pH a 4 con hidrxido de sodio 2,5N (ver inciso 5.33), si
la muestra se conserv como se describe en la ver inciso 7.2.
9.1.2 Destilar 450 mL, detener la destilacin y cuando la muestra deje de hervir,
adicionar 50 mL de agua caliente al matraz de destilacin. Continuar
destilando hasta recoger un total de 500 mL de destilado.
9.1.3 Una destilacin debe ser suficiente para purificar la muestra de una forma
adecuada. Sin embargo, en ocasiones el destilado es turbio. Si esto
sucede, acidificar con disolucin de cido fosfrico (ver inciso 5.31) y
destilar de nuevo segn las especificaciones de la ver inciso 9.1.2. Si el
segundo destilado sigue siendo turbio, utilizar el proceso de extraccin que
se describe a continuacin:
9.1.4 Extraer una fraccin de 500 mL de la muestra original como sigue: Aadir 4
gotas de indicador naranja de metilo (ver inciso 5.36) y llevar ste a su
forma cida por medio de una disolucin de cido sulfrico
aproximadamente 1N (ver inciso 5.34). Pasar a un embudo de separacin
de 1 L y aadir 150 g de cloruro de sodio (ver inciso 5.19). Agitar con cinco
fracciones sucesivas de cloroformo (ver inciso 5.9), empleando 40 mL en la
primera y 25 mL en las sucesivas. Pasar la fase de Cloroformo a un
segundo embudo de separacin y agitar con tres fracciones sucesivas de
hidrxido de sodio 2,5 N (ver inciso 5.33), utilizando 4,0 mL en la primera y
3,0 mL en cada una de las siguientes. Combinar los extractos alcalinos,
calentar en bao mara hasta que el cloroformo haya sido evaporado,
enfriar y diluir hasta 500 mL con agua. Proceder con la destilacin como se
ha descrito en las secciones 9.1.2 y 9.1.3.
9.1.5 Colocar 500 mL de destilado o una porcin adecuada que no contenga

ms de 50 g de fenol, y diluir hasta 500 mL.
9.2 Mtodo extraccin con cloroformo
9.2.1 Tratar la muestra, el blanco de reactivos y los estndares como sigue:

Aadir 10,0 mL de disolucin de cloruro de amonio (ver inciso 5.28) y
ajustar inmediatamente el pH a 10 0,2 con disolucin de hidrxido de
sodio (ver inciso 5.33). Transferir a un embudo de separacin de 1 L,
aadir 3,0 mL de disolucin de 4-aminoantipirina (ver inciso 5.29), mezclar
bien, posteriormente agregar 3,0 mL de disolucin de ferricianuro de
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ECONOMA
potasio (ver inciso 5.30), mezclar perfectamente y dejar que se desarrolle

el color durante 15 min. La disolucin debe tener un color amarillo claro.
9.2.2 Extraer inmediatamente con cloroformo (ver inciso 5.9) utilizando 20 mL de

ste, para las celdas con paso ptico de luz de 1 a 5 cm, y 40 mL para una
celda de paso ptico de luz de 10 cm. Agitar el embudo de separacin al
menos 10 veces y dejar que el cloroformo se ubique nuevamente en el
fondo del embudo, filtrar el extracto de cloroformo a travs de un papel
filtro y embudo de filtracin de vidrio que contenga una capa de 5 g de
sulfato de sodio anhidro (ver inciso 5.14) a un matraz aforado de 25 mL.
Aforar el matraz con cloroformo (no hay que lavar los papeles filtro ni los
embudos con cloroformo). Es posible usar diclorometano en lugar de
cloroformo especialmente si se forma una emulsin cuando la disolucin
de cloroformo es extrada con hidrxido de sodio (ver inciso 9.1.4).
9.2.3 Medir la absorbancia a 460 nm de las disoluciones, muestras y blancos,

realizar la grfica de absorbancia vs g de fenol en 500 ml.
9.3 Mtodo directo espectrofotomtrico
9.3.1 Dividir la muestra en dos porciones iguales y realizar el anlisis por

triplicado para cada porcin. Para muestras con concentraciones de
Fenoles mayores a 0,5 mg/L, seguir las siguientes instrucciones:
9.3.2 Tomar 100 mL de destilado o una alcuota adecuada que no contenga ms

de 0,5 mg de fenol, y diluir a 100 mL. Preparar un blanco de agua de 100
mL tambin y una serie de estndares de fenol de 100 mL que contengan
0, 100, 200, 300, 400 y 500 g de fenol.
9.3.3 Tratar las muestras, blanco y estndares como sigue: Aadir 2,5 mL de la
disolucin de amoniaco 0,5N (ver inciso 5.37). Adicionar 1,0 mL de la
disolucin de 4-aminoantipirina (ver inciso 5.29), mezclar bien y aadir 1,0
mL de la disolucin de ferricianuro de potasio (ver inciso 5.30) y mezclar.
9.3.4 Despus de 15 min transferir a la celda y leer la absorbancia de las

muestras, estndares y blanco a 510 nm, y realizar la curva de calibracin.
9.3.5 Hacer una grfica con los valores de la curva de calibracin.
9.3.6 Calcular la concentracin de la muestra por medio de la ecuacin obtenida

de la curva de calibracin y que es representada por la siguiente ecuacin:
Y = mX + b
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donde:
m es la pendiente;
b es la ordenada al origen;
Y es la absorbancia, y
X son los g fenol.
10 CLCULOS
10.1 Para calcular la concentracin de fenoles utilizar la siguiente ecuacin:
Ecuacin 1
g fenol/mL = (A / B)
donde:
A son los g de fenol en la muestra determinado de la curva de calibracin, y

B son los mL de la muestra original.
10.2 Reportar los resultados en mg/L de fenol, con la precisin correspondiente.
11 INTERFERENCIAS
11.1 Las bacterias que descomponen los fenoles, son una fuente importante de
interferencias, las cuales se eliminan al preservar adecuadamente las
muestras.
11.2 Para la mayora de las muestras se requiere una destilacin preliminar,

para remover las interferencias. Algunas aguas residuales altamente
contaminadas pueden requerir tcnicas especializadas para eliminar
interferencias y para la recuperacin cuantitativa de los compuestos
fenlicos.
11.3 Agentes oxidantes: Los agentes oxidantes tales como el cloro, deben
removerse inmediatamente despus del muestreo mediante la adicin de
sulfato ferroso o arsenito de sodio en exceso. Si los agentes oxidantes no
son removidos, los compuestos fenlicos podran oxidarse parcialmente.
Un exceso de sulfato ferroso o arsenito de sodio, no interfiere ya que estos
son removidos por el procedimiento de destilacin.
11.4 Los sulfuros son eliminados por acidificacin de la muestra con cido
sulfrico a un pH menor de 4 y una breve aireacin por medio de agitacin,
16/19
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ECONOMA
los compuestos que se eliminan con esta acidificacin son el cido

sulfhdrico (H2S) y el bixido de azufre (SO2).
11.5 La presencia de aceites y alquitrn pueden ser eliminados por una

extraccin alcalina ajustando el pH entre 12 y 12,5 con hidrxido de sodio.
Extraer los aceites y el alquitrn de la solucin acuosa con 50 mL de
cloroformo (CHCl3). Remover el exceso de cloroformo de la fase acuosa,
calentando en un bao mara antes de proceder con la etapa de
destilacin.
12 SEGURIDAD
12.1 No ha sido determinada la carcinogenicidad de todos los reactivos con

precisin. Por lo que cada sustancia qumica debe tratarse como peligro
potencial a la salud. La exposicin a estas sustancias debe reducirse al
menor nivel posible.
12.2 Este mtodo puede no mencionar todas las normas de seguridad

ambiente de trabajo seguro y un archivo de las medidas de seguridad
especificadas en ste mtodo. Debe tenerse en un archivo de referencia
de las hojas de informacin de seguridad el cual debe estar disponible a
todo el personal involucrado en estos anlisis.
12.3 Los cidos y bases concentradas empleados en este mtodo pueden

causar severas quemaduras e irritaciones en la piel, por lo que debe
utilizarse ropa protectora tal como: Batas, guantes y lentes de seguridad
cuando se manejan otras sustancias qumicas.
12.4 Cuando se use el equipo de destilacin, deben emplearse guantes

aislantes de calor para evitar quemaduras durante el manejo del material
caliente.
12.5 El Fenol es una sustancia txica, manipular con extremo cuidado.
12.6 El laboratorio debe contar con una buena ventilacin.
12.7 El cloroformo (CHCl3) es txico y se sospecha que puede ser un

carcinognico, evitar su ingestin, inhalacin o adsorcin a travs de la
piel. Cuando se utilice Cloroformo hacerlo dentro de una campana de
extraccin de manera que los vapores de Cloroformo producidos durante el
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SECRETARA DE
ECONOMA
anlisis se dispersen, adems de emplear una mascarilla con filtros

especiales para compuestos orgnicos.
Es la responsabilidad del laboratorio cumplir con todos los reglamentos federales,

estatales y locales referente al manejo de residuos, particularmente las reglas de
13.1 Cada laboratorio debe contemplar dentro de su Programa de Control de

Calidad el destino final de los residuos generados durante la
determinacin.
13.2 Los desechos cidos se deben neutralizar para su posterior desecho.
13.3 Las muestras lquidas que contengan fenoles y los disolventes clorados
deben envasarse en recipientes hermticos, almacenar temporalmente
tomando todas las precauciones necesarias y despus enviarlas al
confinamiento de residuos peligrosos.
13.4 Todas las muestras que cumplan con la norma de descarga a

alcantarillado pueden descargarse en el mismo sistema.
14 BIBLIOGRAFA

de enero de 1997.



18/19
SECRETARA DE
ECONOMA

NMX-AA-115-SCFI-2001 Anlisis de agua - Criterios generales para el

Oficial de la Federacin el 17 de abril de 2001.
NMX-AA-116-SCFI-2001 Anlisis de agua - Gua de solicitud para la

presentacin de mtodos alternos. Declaratoria de
Federacin el 17 de abril de 2001.
D 1783 Standard Test Methods for Phenolic Compounds in Water, American Society
for Testing and Materials, USA, ASTM Committee on Standards, Philadelphia PA,
Diciembre de 1991, pp 129-135.
5530 C Chloroform Extraction Method, American Public Health Association,

Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, USA, APHA,
Washington, DC 20005, 19th Edition 1995, pp. 5-36 - 5-38.
Method 9065 Phenolics (Spectrophotometric, Manual 4-AAP with Distillation),

Enviromental Protection Agency, Methods for Chemical Analysis of Water and
Wastes, Environmental Monitoring and Support Laboratory, Office of Research and
Development, Cincinnati, Ohio, 1986, 1-7 pp.
Criterios Ecolgicos de Calidad del Agua publicados en el Diario Oficial de la

Federacin el 13 de diciembre de 1989.

MXICO D.F., A
DIRECTOR GENERAL DE NORMAS
MIGUEL AGUILAR ROMO

19/19
SECRETARA DE
ECONOMA
JADS/AFO/DLR/MRG
ANLISIS DE AGUA - DETERMINACIN DE FENOLES

TOTALES EN AGUAS NATURALES, POTABLES, RESIDUALES
Y RESIDUALES TRATADAS - MTODO DE PRUEBA (CANCELA
A LA NMX-AA-050-1981)
WATER ANALISIS - DETERMINATION OF TOTAL PHENOLS IN

NATURAL, DRINKING, WASTEWATERS AND WASTEWATERS
TREATED - TEST METHOD
SECRETARA DE
ECONOMA
PREFACIO

e instituciones:

AL AMBIENTE


SECRETARA DE
ECONOMA


Campus Monterrey.

POZOS

C.V.
- MERCK- MXICO, S.A. DE C.V.


SECRETARA DE
ECONOMA


C.V.


Facultad de Qumica;
NDICE DEL CONTENIDO

SECRETARA DE
ECONOMA
0 Introduccin 1
3 Definiciones 2
8 Calibracin 13
9 Procedimiento 13
10 Clculos 15
12 Seguridad 17
14 Bibliografa 18

CDU: 628.162
SECRETARA DE
ECONOMA
ANLISIS DE AGUA - DETERMINACIN DE HIDROCARBUROS

TOTALES DEL PETRLEO (HTPs) EN AGUAS NATURALES,
POTABLES, RESIDUALES Y RESIDUALES TRATADAS -
MTODO DE PRUEBA
WATER ANALYSIS - DETERMINATION OF TOTAL PETROLEUM

HYDROCARBONS (TPH) IN NATURAL, DRINKING, WASTEWATERS
AND WASTEWATERS TREATED- TEST METHOD
0 INTRODUCCIN
La determinacin de compuestos orgnicos de origen del petrleo es de suma

importancia en aguas residuales y naturales por su efecto de disminuir el contenido de
oxgeno en el agua. Asimismo disminuyen la tensin superficial del agua, por lo que
se afecta a los ecosistemas.
El mtodo permite la determinacin de estos compuestos empleando un proceso de

extraccin seguida de una determinacin espectroscpica.
Esta norma mexicana especifica un mtodo de prueba para la determinacin de

hidrocarburos totales de petrleo (HTPs) en aguas naturales, potables, residuales y
residuales tratadas.
El intervalo de trabajo del mtodo es de 0,1 mg/L a 40 mg/L y puede ser extendido por
dilucin del extracto de la muestra.
2/15
SECRETARA DE
ECONOMA
El mtodo se basa en la extraccin de los compuestos orgnicos no polares de la

muestra, principalmente hidrocarburos de origen del petrleo por su afinidad al
tetracloruro de carbono. Los hidrocarburos disueltos en el tetracloruro de carbono se
determinan cuantitativamente por comparacin de la absorbancia leda a un nmero
de onda de 2 930 cm-1 (correspondiente a la regin media infrarroja del espectro
electromagntico), con una curva de calibracin preparada con tres tipos de
hidrocarburos.
3 DEFINICIONES
Para los efectos de esta norma se establecen las siguientes definiciones:
3.1 Aguas naturales
Se define como agua natural el agua cruda, subterrnea, de lluvia, de tormenta,

residual y superficial.
3.2 Aguas potables
Para uso y consumo humano: Aquella que no contiene contaminantes objetables ya

sean qumicos o agentes infecciosos y que no causa efectos nocivos al ser humano.

municipales, industriales, comerciales, agrcolas, pecuarias, domsticos y similares,
as como la mezcla de ellas.
3.4 Anlisis de blanco analtico
Es el someter una alcuota de agua reactivo a todo el proceso de anlisis por el cual
pasa una muestra real. Los laboratorios deben realizar los anlisis de blancos para
corregir la seal de fondo del sistema de medicin. El anlisis de blancos se debe
realizar en forma peridica o con cada lote de muestras segn lo requiera el mtodo.
3.5 Anlisis de matrices fortificadas
A una alcuota de una muestra se le aaden los analitos de inters a muestras reales
y la muestra as fortificada se somete a todo el proceso de anlisis que sigue una
muestra normal. Del resultado obtenido para la matriz fortificada se pueden evaluar la
eficiencia de recobro del mtodo y el desempeo del laboratorio en este mtodo y con
ese tipo de muestra.
3/15
SECRETARA DE
ECONOMA
3.6 Bitcora

laboratorio. Es a partir de dichas bitcoras que los inspectores pueden reconstruir el
proceso de anlisis de una muestra tiempo despus de que se lleva a cabo.
3.7 Blanco
Agua reactivo o matriz equivalente a la que no se le aplica ninguna parte del

procedimiento analtico y sirve para evaluar la seal de fondo.

problema.
3.9 Calibracin

funcionamiento.
3.10 Descarga
Accin de verter, infiltrar, depositar o inyectar aguas residuales a un cuerpo receptor

de la Nacin.

caracteriza la dispersin de los resultados, dado por la frmula:
(x
i =1
i x) 2
s=
n 1
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SECRETARA DE
ECONOMA
donde:
xi es el resultado de la i-sima medicin, y

x es la media aritmtica de los n resultados considerados.

3.14 Exactitud
Proximidad de concordancia entre el resultado de una medicin y un valor verdadero

del mensurando.
3.15 Hidrocarburos totales del petrleo (HTPs)
Son los compuestos orgnicos que son extrados de la muestra con tetracloruro de
carbono, no son adsorbidos en slica gel y absorben energa de un nmero de onda
de 2 930 cm-1.
3.16 Lmite de cuantificacin del instrumento
Concentracin mnima del analito en una muestra y que puede ser cuantificada con
precisin y exactitud aceptables bajo las condiciones de operacin establecidas en el
instrumento.
3.17 Lmite de deteccin del instrumento
Concentracin mnima del analito en una muestra, la cual puede ser detectada pero no
necesariamente cuantificada bajo las condiciones de operacin establecidas en el
instrumento.
3.18 Lmite de cuantificacin del mtodo (LCM)
Es la menor concentracin de un analito o sustancia en una muestra que puede ser

cuantificada con precisin y exactitud aceptables bajo las condiciones en que se lleva
a cabo el mtodo.
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SECRETARA DE
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3.19 Lmite de deteccin del mtodo (LDM)
Es la mnima concentracin de un analito o sustancia en una muestra, la cual puede

ser detectada pero no necesariamente cuantificada bajo las condiciones en que se
lleva a cabo el mtodo.
3.20 Medicin
3.21 Mensurando
Material o substancia en el cual uno o ms valores de sus propiedades son

materiales.

las propiedades estn certificados por un procedimiento que establece la trazabilidad
a una realizacin exacta de la unidad en la cual se expresan los valores de la
propiedad, y en el que cada valor certificado se acompaa de una incertidumbre con
un nivel declarado de confianza.

compuesta, el volumen de cada una de las muestras simples debe ser proporcional al
caudal de la descarga en el momento de su toma.
3.25 Muestra simple

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SECRETARA DE
ECONOMA
3.26 Parmetro
Variable que se utiliza como referencia para determinar la calidad del agua.
Material de referencia, instrumento de medicin, medida materializada o sistema de

medicin destinado a definir, realizar, conservar o reproducir una unidad o uno o ms
valores de una magnitud para utilizarse como referencia.
3.28 Patrn nacional (de medicin)
Patrn reconocido por una decisin nacional en un pas, que sirve de base para
asignar valores a otros patrones de la magnitud concerniente.
3.29 Patrn primario
Patrn que es designado o reconocido ampliamente como un patrn que tiene las
ms altas cualidades metrolgicas y cuyo valor es aceptado sin referencia a otros
patrones de la misma magnitud.
magnitud.

dicho lugar.

3.33 Precisin

confianza o incertidumbre:
7/15
SECRETARA DE
ECONOMA
s
x = x t /2
n
donde:
x es la media calculada a partir de un mnimo de tres mediciones

independientes;
3.34 Trazabilidad
Slo se mencionan los equipos y materiales que son de relevancia para el presente
mtodo.
4.1 Equipo
4.1.1 Espectrofotmetro de infrarrojo disponible para utilizarse en un intervalo

de longitud de onda de 3 000 cm -1 a 2 700 cm -1 .
4.1.2 Parrilla de agitacin magntica.
4.1.3 Balanza analtica con precisin de 0,1 mg.
4.2 Materiales
Todo el material volumtrico utilizado en este mtodo debe ser de clase A con
certificado, o en su caso, debe estar calibrado.
8/15
SECRETARA DE
ECONOMA
4.2.1 Par de celdas de cuarzo, con paso ptico de luz de 1 mm, 5mm, 10 mm,
50 mm y 100 mm.
4.2.2 Embudo de separacin de 2 L, con llave de tefln.
4.2.3 Frasco de vidrio de boca ancha de 1 L de capacidad con tapa de tefln.
4.2.4 Papel filtro nmero 40 o equivalente.
4.2.5 Barras de agitacin magntica de tefln.
4.2.6 Probeta de vidrio de 1 L de capacidad graduada.
Todos los productos qumicos usados en este mtodo deben ser grado reactivo, a
menos que se indique otro grado.
Agua: Debe entenderse agua que cumpla con las siguientes caractersticas:
a) Resistividad: megohm-cm a 25C: 0,2 min;

b) Conductividad: S/cm a 25C: 5 mx, y
c) pH: 5,0 a 8,0
5.1 cido clorhdrico concentrado (HCl)
5.2 Clorobenceno (C6H5Cl)
5.3 n-hexadecano (C16H34)
5.4 Isooctano (C8H18)
5.5 Slica gel, malla 60-200, grado 950, con un contenido de 1 % - 2 % de

agua y densidad 0,5 g/mL: Secar 100 g de slica gel a una temperatura de
130C hasta eliminar completamente la humedad; posteriormente,
transferir a un desecador y colocar un frasco destapado junto a ella
conteniendo 2 g de agua para que la slica gel adsorba la humedad, tapar
el desecador y dejar reposar durante toda la noche.
5.6 Sulfato de sodio anhdro (Na2SO4)
5.7 Tetracloruro de carbono grado espectroscpico (CCl4) libre de

interferencias mayores a 0,05 mg/L de HTPs.
9/15
SECRETARA DE
ECONOMA
NOTA.- Debido a que el tetracloruro de carbono es un disolvente que es

carcingeno y ataca la capa de ozono de la estratsfera, se estn
buscando disolventes alternativos para utilizarse en este mtodo.
Cualquier modificacin al disolvente debe estudiarse con un anlisis
comparativo para cada matriz analizada, respecto a la capacidad de
extraccin de los diferentes disolventes y las sustancias a extraer. Como
normalmente se utiliza este mtodo para cuantificar hidrocarburos como
gasolina, diesel o petrleo crudo, debe estandarizarse cualquier otro
disolvente que se quiera utilizar, con al menos la mezcla de estos tres
hidrocarburos.
5.8 Disolucin de cido clorhdrico (1:1). Mezclar volmenes iguales de cido

clorhdrico concentrado y agua.
5.9 Mezcla Patrn de referencia. Tomar alcuotas de 15 mL de n-hexadecano

(ver inciso 5.3), 15 mL de isooctano (ver inciso 5.4) y 10 mL de
clorobenceno (ver inciso 5.2) y colocar en un frasco de vidrio de 50 mL
con tapa de tefln. Mantener el frasco bien tapado y en refrigeracin para
evitar la alteracin de la mezcla.
5.10 Disolucin madre (5 000 mg/L). Tomar una alcuota de 0,5 mL de la

mezcla de referencia (ver inciso 5.9). Colocar en un matraz volumtrico de
100 mL previamente tarado, tapar inmediatamente y pesar. Aforar al
volumen con tetracloruro de carbono. Calcular la concentracin de la
disolucin por medio de la razn del peso de la mezcla entre el volumen
de aforo, la cual debe ser de aproximadamente 5 000 mg/L.
5.11 Disoluciones estndares. Una vez calculada la concentracin de la

disolucin madre (ver inciso 5.10), tomar alcuotas apropiadas de sta en
matraces volumtricos de 100,0 mL de acuerdo a la celda que va a
utilizarse y aforar con tetracloruro de carbono. Calcular la concentracin
de los estndares a partir de la disolucin madre (ver inciso 5.10).

MUESTRAS
6.1 Debe colectarse un volumen de 2 L de muestra en un frasco de vidrio de

boca ancha con tapa de tefln. Como pueden ocurrir prdidas de
hidrocarburos totales del petrleo por el equipo de muestreo, no se
permite la colecta de una muestra compuesta y no deben tomarse
alcuotas de la muestra para realizar otro tipo de anlisis, porque se ocupa
la muestra entera para este anlisis.
10/15
SECRETARA DE
ECONOMA
6.2 Un retraso entre el muestreo y el anlisis mayor de 4 h, requiere que el

total de la muestra sea preservada por la adicin de cido clorhdrico
(1:1) hasta llevar a sta a un valor de pH < 2. Un retraso mayor de 48 h
requiere refrigeracin para la preservacin de las muestras a 4C.
6.3 El tiempo mximo de almacenamiento previo al anlisis es de 28 das.
- Los nombres y ttulos de los analistas que ejecutaron los anlisis y el

encargado de control de calidad que verific los anlisis.
- Las bitcoras manuscritas del analista y del equipo en los que se
contengan los siguientes datos:
h) Adems el laboratorio debe mantener la informacin original reportada
por los equipos en disquetes o en otros respaldos de informacin.

resultado final.
7.3 Cada vez que se adquiera nuevo material volumtrico debe de realizarse la
verificacin de la calibracin de ste tomando una muestra representativa
del lote adquirido.
8 CALIBRACIN
Se debe contar con un registro de la calibracin de los equipos y materiales

siguientes:
11/15
SECRETARA DE
ECONOMA
8.2 Balanza analtica.
8.3 Espectrofotmetro de infrarrojo: Calibrar de acuerdo a las instrucciones del

fabricante. Asegurarse que se obtenga respuesta adecuada alrededor de
los 2 930 cm-1 de nmero de onda.
9 PROCEDIMIENTO
9.1 Medir el volumen total de la muestra en una probeta de 1 L. Si la muestra

no fue acidificada en el momento del muestreo, adicionar 5 mL de HCl
(1:1) (ver inciso 5.8). Mezclar la muestra, y asegurarse que el pH 2,
adicionar ms cido si es necesario.
9.2 Transferir la muestra a un embudo de separacin de 2 L.
9.3 Adicionar 30 mL de tetracloruro de carbono (ver inciso 5.7) al frasco que

contiene la muestra y girar para enjuagar los lados del mismo. Transferir el
disolvente al embudo de separacin.
9.4 Extraer por agitacin vigorosa durante 5 min. Dejar en reposo para permitir
la separacin de las fases.
9.5 Filtrar la fase orgnica a travs de un embudo de filtracin que contenga

papel filtro previamente humedecido en tetracloruro de carbono a un
matraz volumtrico de 100 mL.
El equilibrio en una emulsin que tarda en separarse, puede romperse agregando

alrededor de 1 g de sulfato de sodio anhidro (ver inciso 5.6) en el cono del papel filtro
y drenando lentamente la emulsin a travs de la sal de sulfato de sodio. Si se
requiere, se puede agregar una porcin adicional de 1 g del sulfato de sodio anhidro al
cono.
9.6 Repetir dos veces ms con porciones de 30 mL de disolvente nuevo (ver

incisos 9.3 a 9.5), combinando los tres extractos orgnicos dentro del
mismo matraz volumtrico.
9.7 Enjuagar el papel filtro, el embudo y el extremo del embudo de separacin

con un total de 5 mL a 10 mL de tetracloruro de carbono, colectar el
disolvente de lavado en el matraz volumtrico del inciso 9.6. Aforar a 100
mL con tetracloruro de carbono.
12/15
SECRETARA DE
ECONOMA
9.8 Desechar alrededor de 5 mL a 10 mL de disolucin del matraz volumtrico

(ver inciso 9.7). Adicionar 3 g de slica gel (ver inciso 5.5) y una barra de
agitacin, tapar el matraz volumtrico y agitar la disolucin por un mnimo
de 5 min con ayuda de un agitador magntico.
9.9 Seleccionar los estndares de trabajo y las celdas apropiadas de acuerdo

con los intervalos de concentracin que se espera de las muestras. No es
necesaria la adicin de slica gel a los estndares. Leer la absorbancia
directamente de cada disolucin estndar en 2 930 cm-1. Realizar una
curva de calibracin de absorbancia vs concentracin en mg/L de
hidrocarburos totales del petrleo, usando tetracloruro de carbono como
referencia.
TABLA 1.- Aproximacin de intervalos de concentracin mg/L de los

estndares de trabajo con respecto a la celda ptica utilizada
Paso ptico de luz Intervalo de

concentracin
10 mm 60-500 mg/L
50 mm 10-90 mg/L
100 mm 5-40 mg/L
9.10 Despus de que la slica gel se ha asentado en la muestra extrada, filtrar

el extracto y llenar una celda con el extracto y leer la absorbancia de la
extraccin. Si la absorbancia excede los lmites mximos de la curva,
preparar una dilucin apropiada.
Si la capacidad adsorbente de la slica gel se hubiera excedido, puede probarse en

este punto por medio de la adicin de otros 3 g de slica gel al extracto y la repeticin
del tratamiento y determinacin (ver incisos 9.1 a 9.10).
10 CLCULOS
10.1 Calcular los hidrocarburos de petrleo en la muestra usando la siguiente

frmula:
Ecuacin 1: mg/L de hidrocarburos totales del petrleo = (R x V x D) / M
donde:
13/15
SECRETARA DE
ECONOMA
R es la concentracin obtenida de la curva de calibracin en mg/L;

V es el volumen de tetracloruro de carbono usado para la extraccin en mL;
M es el volumen de muestra en mL, y
D es el factor de dilucin.
10.2 Reportar todos los valores obtenidos en unidades de mg/L con la precisin
correspondiente.
11 INTERFERENCIAS
11.1 El tetracloruro de carbono disuelve no solamente los HTPs, sino tambin

algunas sustancias como azufre elemental, tintes, polmeros, grasas y
aceites de origen animal y vegetal. Por lo que es necesario usar material
de vidrio para el muestreo.
11.2 Existen prdidas de algunos compuestos voltiles.
11.3 Existen prdidas por la adsorcin de la slica gel de algunos componentes

tales como compuestos aromticos, hidrocarburos clorados, sulfurados y/o
nitrogenados.
11.4 Los cidos grasos y las grasas vegetales y animales interfieren en el

anlisis, por lo que se tratan de eliminar con la utilizacin de la slica gel.
12 SEGURIDAD
12.1 La preparacin de todos los reactivos usados en este mtodo debe

efectuarse bajo una campana de extraccin. Consulte las hojas de
seguridad sobre manipulacin y disposicin de stos.
12.2 No se ha determinado la carcinogenicidad de todos los reactivos, por lo

que cada sustancia qumica debe tratarse como peligro potencial a la
salud. La exposicin a estas sustancias debe reducirse al menor nivel
posible.
12.3 Este mtodo puede no mencionar todas las normas de seguridad

ambiente de trabajo seguro y un archivo de las medidas de seguridad
especificadas en este mtodo. Debe tenerse en un archivo de referencia
las hojas de informacin de seguridad, el cual debe estar disponible a todo
el personal involucrado en estos anlisis.
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SECRETARA DE
ECONOMA
12.4 Cuando se trabaje con cualquiera de los productos qumicos descritos en

este mtodo, debe usarse equipo de seguridad, tal como: batas, guantes
de ltex y lentes de seguridad.
Es la responsabilidad del laboratorio cumplir con todos los reglamentos federales,

estatales y locales referente al manejo de residuos, particularmente las reglas de
13.1 Cada laboratorio debe contemplar dentro de su programa de control de

calidad (CC) el destino final de los residuos generados durante la
determinacin.
13.2 Las muestras lquidas, extractos y disoluciones que contengan como

disolvente al tetracloruro de carbono deben envasarse en recipientes
hermticos, almacenar temporalmente tomando todas las precauciones
necesarias y despus enviarlas al confinamiento de residuos peligrosos.
13.3 Todas las muestras que cumplan con la norma de descarga a

alcantarillado pueden ser descargadas en el mismo sistema.
14 BIBLIOGRAFA

de enero de 1997.



15/15
SECRETARA DE
ECONOMA

NMX-AA-115-SCFI-2001 Anlisis de agua - Criterios generales para el

Oficial de la Federacin el 17 de abril de 2001.
NMX-AA-116-SCFI-2001 Anlisis de agua - Gua de solicitud para la

presentacin de mtodos alternos. Declaratoria de
Federacin el 17 de abril de 2001.
Mtodo 418.1 Total Petroleum Hydrocarbons Recoverable, Methods for Chemical

Analysis of Water and Wastes, Environmental Monitoring and Support Laboratory,
Office of Research and Development, Cincinnati, Ohio, 1983, pp 5-7.
Mtodo 5520 F Hydrocarbons. Standard Methods for the Examination of Water and
Wastewater, USA, American Public Health Association (APHA), Washington, DC
20005, 19th Edition 1995, pp 5-35.

MXICO D.F., A
DIRECTOR GENERAL DE NORMAS
MIGUEL AGUILAR ROMO
JADS/AFO/DLR/MRG
ANLISIS DE AGUA - DETERMINACIN DE HIDROCARBUROS

TOTALES DEL PETRLEO (HTPs) EN AGUAS NATURALES,
POTABLES, RESIDUALES Y RESIDUALES TRATADAS -
MTODO DE PRUEBA
WATER ANALYSIS - DETERMINATION OF TOTAL PETROLEUM

HYDROCARBONS (TPH) IN NATURAL, DRINKING, WASTEWATERS
AND WASTEWATERS TREATED - TEST METHOD
SECRETARA DE
ECONOMA
PREFACIO

e instituciones:

AL AMBIENTE


SECRETARA DE
ECONOMA


Campus Monterrey

POZOS

C.V.
- MERCK-MXICO, S.A. DE C.V.


SECRETARA DE
ECONOMA


C.V.


Facultad de Qumica;

SECRETARA DE
ECONOMA
NDICE DEL CONTENIDO
0 Introduccin 1
3 Definiciones 2
8 Calibracin 10
9 Procedimiento 11
10 Clculos 12
12 Seguridad 13
14 Bibliografa 14
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CDU: 631.

ANLISIS DE AGUA - DETERMINACIN DE LA DEMANDA

WATER ANALISYS - DETERMINATION OF THE BIOCHEMICAL

Demanda bioqumica de oxgeno (DBO5): Es una estimacin de la cantidad de oxgeno

1 OBJETIVO Y CAMPO DE APLICACIN

Esta norma mexicana establece el mtodo de anlisis para la determinacin de la

NOTA. Se determina la cantidad de oxgeno utilizada por una poblacin

NMX-AA-012 SCFI-2001 Anlisis de agua - Determinacin de oxgeno disuelto en

NMX-AA-100-1987 Calidad del agua Determinacin de cloro total Mtodo

3 PRINCIPIO DEL MTODO

El mtodo se basa en medir la cantidad de oxgeno que requieren los

Para la determinacin de oxgeno disuelto (OD) se puede emplear cualquiera de los

Para los propsitos de esta norma se establecen las siguientes definiciones:

4.1 Aguas naturales

El agua cruda, subterrnea y pluvial.

4.2 Aguas residuales

Las aguas de composicin variada provenientes de las descargas de usos

Es un conjunto de organismos vivos tanto de origen vegetal como animal.

Cuaderno de laboratorio debidamente foliado e identificado, en el cual los analistas

4.5 Blanco analtico o de reactivos

Agua reactivo o matriz equivalente que no contiene, por adicin deliberada, la

disolventes, reactivos y se somete al mismo procedimiento analtico que la muestra

Conjunto de operaciones que establecen, bajo condiciones especficas, la relacin

4.7 Demanda bioqumica de oxgeno (DBO5)

Es una estimacin de la cantidad de oxgeno que requiere una poblacin microbiana

Accin de verter, infiltrar o depositar o inyectar aguas residuales a un cuerpo receptor

4.9 Desviacin estndar experimental

Para una serie de n mediciones del mismo mensurando, es la magnitud s que

En donde xi es el resultado de la i-sima medicin y x es la media aritmtica de los n

4.10 Disolucin estndar

Disolucin de concentracin conocida preparada a partir de un patrn primario.

4.11 Disolucin madre

Corresponde a la disolucin de mxima concentracin en un anlisis. Es a partir de

Es una suspensin de microorganismos vivos que se han adaptado para reproducirse

4.13 Material de referencia

Material o substancia en el cual uno o ms valores de sus propiedades son

4.14 Material de referencia certificado

Material de referencia, acompaado de un certificado, en el cual uno o ms valores de

4.16 Medio aerobio

Es aquel en el cual se desarrollan microorganismos en presencia de oxgeno

4.17 Medio anaerobio

Es aquel en el cual se desarrollan microorganismos en ausencia de oxgeno

Magnitud particular sujeta a medicin.

4.19 Muestra compuesta

La que resulta de mezclar un nmero de muestras simples. Para conformar la muestra

4.20 Muestra simple

La que se tome en el punto de descarga, de manera continua, en da normal de

4.22 Patrn (de medicin)

Medida materializada, aparato de medicin o sistema de medicin destinado a definir,

4.23 Patrn de referencia

Patrn, en general de la ms alta calidad metrolgica disponible en un lugar dado, o

4.24 Patrn de trabajo

Patrn que es usado rutinariamente para calibrar o controlar las medidas

4.25 Patrn nacional

El patrn autorizado para obtener, fijar o contrastar el valor de otros patrones de la

4.26 Patrn primario

4.27 Patrn secundario

Es el grado de concordancia entre resultados analticos individuales cuando el

x es la media calculada a partir de un mnimo de tres mediciones independientes;

4.30 Verificacin de la calibracin

a) Resistividad, megohm-cm a 25C: 0,2 min.;

5.1 Fosfato monobsico de potasio (KH2PO4)

5.2 Fosfato dibsico de potasio (K2HPO4)

5.3 Fosfato dibsico de sodio heptahidratado (Na2HPO47H2O)