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Mmoire
Prsent pour lobtention du diplme de Magister en Microbiologie
Applique et Biotechnologies Microbiennes.
Thme
Soutenu le : 16-01-2011
Devant le jury :
Prsident : BOULAHROUF A. Prof. Univ. Mentouri de Constantine
Rapporteurs : BOUSSEBOUA H. Prof. Univ. Mentouri de Constantine
Examinateurs : ARHAB R. Mc. Univ. Larbi Tbssi De Tbessa
HAMIDECHI A. Mc. Univ. Mentouri de Constantine
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Remerciements
Enfin, je remercie vivement tous mes collgues qui ont contribu la ralisation de ce
mmoire.
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Liste des abrviations
2,4,5-T : Acide 2,4,5-trichlorophnoxyactique.
2,4-D : 2,4-dichlorophnoxyactique.
2,4-DCP : 2,4-dichlorophnol.
4-AAP : 4-aminoantipyrine.
dl : degr de libert.
TS : Tmoin strile.
UE : Union europenne.
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Table des matires
Introduction...10
Synthse bibliographique
1. Eaux uses..12
1.1. Dfinition et origine........12
Les eaux uses urbaines..12
Les eaux uses industrielles....12
1.2. Composition des eaux uses......12
1.2.1. Microorganismes.....12
- Les bactries...13
- Les protozoaires..13
- Les virus...13
- Les helminthes.....14
1.2.2. Matire en suspension ....14
Paramtre de mesure14
- Demande biochimique en oxygne(DBO).....14
- Demande chimique en oxygne (DCO..15
1.3. Pollution des eaux.......15
1.3.1. Elments traces et mtaux....15
1.3.2. Les composes organiques naturels....16
1.3.3. Les xnobiotiques..16
Dgradation des composes organiques xnobiotiques....17
- La biodgradation....17
- Le comtabolisme....18
1.4. Effets des eaux uses sur le milieu rcepteur....18
1.5. Lpuration des eaux uses....18
1.5.1. les prtraitements....19
Le dgrillage.....19
Le dessablage....19
Le dshuilage....19
1.5.2. Les traitements physiques....19
La Dcantation primaire......19
La dcantation secondaire20
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1.5.3. Les traitements biologiques..20
Le traitement par boues actives.....20
lpuration sur lit bactrien......20
Le traitement anarobie....21
1.5.4. Les traitements physico-chimiques......21
1.6. le traitement des eaux uses au niveau de la STEP dIBN ZIAD.....21
1.7. La rutilisation des eaux uses.23
2. Le 2,4-dichlorophnol.....25
2.1. Gnralit..25
2.1.1. Proprits physiques.25
2.1.2. Structure et proprits chimiques du 2,4-dichlorophnol....25
2.2. Processus de production .....25
2.3. Utilisation......25
2.4. Toxicit......26
2.4.1. Toxicit aigue.....26
2.4.2. Toxicit chronique.....26
2.5. Pntration de 2,4-dichlorophnol dans lenvironnement....26
Dans lair......28
Dans leau ....28
Dans le Sol....28
2.6. Devenir de 2,4-dichlorophnol dans lenvironnement..29
Dans lair...29
Dans leau..29
Dans le sol..29
2.7. Bioaccumulation du 2,4-dichlorophnol dans les organismes vivants....30
2.7.1. Plantes........30
2.7.2. Organismes aquatiques.30
2.8. Dgradation 2,4-dichlorophnol........30
2.8.1. Dgradation abiotique......30
2.8.2. Biodgradation......32
Biodgradation arobie....32
Biodgradation anarobie....32
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Matriel et mthodes
1. Prlvement de linoculum....35
2. choix de xnobiotique.....35
3. Milieu de culture.....35
4. technique de production de gaz in vitro....37
5. Prparation des diffrentes concentrations de la molcule.....37
6. Inoculation.......37
7. Tmoins et contrle.....37
8. Incubation, dosages et lectures......39
8.1. Suivi de la concentration de la molcule par dosage colorimtrique..39
8.1.1 Principe...39
8.1.2. Protocole de dosage...39
8.2. Dosage du chlore libre......40
9. Analyse statistique.......40
Rsultats et discussion
1. Qualit des chantillons utiliss pour linoculation...42
2. Cintique de biodgradation du 2,4-dichlorophnol....42
2. 1. Dbut de la biodgradation.....42
2. 2. La fin de la cintique de biodgradation...46
2.3. Effet de linoculum sur la biodgradation......49
2.4. Effet de la concentration de la molcule sur la biodgradation....49
3. Tmoin et contrle...51
4. Libration du chlore....53
5. Variation du pH du milieu......53
Discussion gnrale et conclusion...55
Rfrences.....59
Annexe ......72
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Introduction
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La croissance alarmante de la pollution des eaux par des matires diverses, organiques ou
non : pesticides, dtergents, mtaux lourds et dautres substances toxiques, reprsente un rel
danger pour la flore et la faune aquatiques et cause de srieux problmes lhumanit.
Les phnols sont des composs majeurs de la pollution toxique de lenvironnement o leur
prsence rsulte deaux uses, pralablement pollues par de nombreuses activits domestiques
et industrielles : production dhuile, conversion du charbon, production du papier et autres (1).
Les chlorophnols sont des phnols chlors, communment prsents dans lenvironnement. Ils
sont utiliss comme agents de prservation pour le bois, les fibres vgtales et le cuir, de mme
que comme dsinfectants. La pollution de lenvironnement par les chlorophnols se caractrise
par leur rmanence dans le milieu et leur toxicit leve. Cest en particulier le cas du 2,4-
dichlorophnol (2,4-DCP), polluant chlorophnolique le plus rencontr dans lenvironnement et
inclus depuis fort longtemps dans la liste des polluants majeurs par lAgence de Protection de
lEnvironnement des Etats Unis (UN-EPA) et par lUnion Europenne (UE) (2).
Ltude de la biodgradation du 2,4-DCP dans les eaux uses est essentielle pour
dterminer son potentiel polluant et donc son impact sur lenvironnement. Un grand nombre de
mthodes physiques, chimiques et biologiques sont utilises pour liminer les chlorophnols
partir de sites pollus. Les mthodes physiques et chimiques ont prouv leur efficacit mais elles
peuvent gnrer des sous produits indsirables et sont pnalises par leurs cots. Par contre, les
mthodes biologiques sont gnralement plus efficaces et relativement moins chres.
- 10 -
Synthse bibliographique
- 11 -
1. Les eaux uses :
1.1. Dfinition et origine
Les eaux uses sont toutes des eaux souilles, charges de diffrents lments du fait
qu'elles ont dj t utilises dans une activit domestique ou industrielle. On distingue deux
grandes catgories deaux uses, selon leur origine.
- 12 -
organismes peut tre class en quatre grands groupes : les bactries, les protozoaires, les virus et
les helminthes.
- Les bactries : Les bactries sont les microorganismes les plus communment
rencontrs dans les eaux uses. Les eaux uses urbaines contiennent environ 106 107
bactries/100 ml dont la plupart sont des Proteus et des entrobactries, 103 104 des
Streptocoques et de 102 103 des Clostridium. La concentration en bactries pathognes est
trs variable et peut atteindre 104 germes par litre. Parmi pathognes les plus dtectes, les
Salmonelles, dont celles responsables de la typhode, des paratyphodes et des troubles
intestinaux. Les coliformes thermotolrants sont des germes tmoins de contamination
fcale communment utiliss pour contrler la qualit relative d'une eau. (5)
En plus de ces germes les eaux uses d'une station d'puration contient des espces
autochtones considres comme acteurs majeurs des biodgradations telles que :
Pseudomonas, Alcaligenes, Micrococcus, Flavobacterium et dautres. (6)
- Les protozoaires : Au cours de leur cycle vital, les protozoaires passent par une
forme de rsistance, les kystes, qui peuvent tre vhiculs par les eaux rsiduaires. Ces
parasites sont trs persistants. Ainsi, selon les conditions du milieu, ils peuvent survivre
plusieurs semaines, voire mme plusieurs annes (7). Plusieurs protozoaires pathognes ont
t identifis dans les eaux uses (8). Parmi les plus importants du point de vue sanitaire, il
faut citer Entamoeba histolytica, responsable de la dysenterie amibienne, Giardia lamblia
et Cryptosporidium parvum (9). Il est considr que seulement 10 30 kystes forment une
dose suffisante pour causer des troubles sanitaires (7).
- Les virus : Les virus sont des parasites intracellulaires obligatoires qui ne peuvent se
multiplier que dans leur cellule hte. Leur concentration estime dans les eaux uses
urbaines est comprise entre 103 et 104 particules par litre. Leur isolement et leur
dnombrement dans les eaux uses restent difficiles, ce qui conduit vraisemblablement
une sous estimation de leur nombre rel. Les virus entriques sont ceux qui se multiplient
dans le trajet intestinal. Parmi les virus entriques humains les plus nombreux il faut citer
les entrovirus, les rotavirus, les rtrovirus, les adnovirus et le virus de l'Hpatite A. Il
semble que les virus soient plus rsistants dans l'environnement que les bactries, du fait
quau cours de processus de traitement des eaux uses les virus sont plus difficiles
- 13 -
liminer que les bactries classiques couramment utilises comme indicateurs de la qualit
bactriologique des eaux (9).
Les matires en suspension (MES) sont exprimes en mg/l. Ce sont les matires non
dissoutes contenues dans l'eau. Elles comportent la fois des lments minraux et organiques.
La plus grande part des microorganismes pathognes contenus dans les eaux uses, est associe
aux (MES) (11). Elles donnent galement leau une apparence trouble et, souvent, un mauvais
got et une mauvaise odeur. (4). La MES d'une eau use urbaine ne dpasse gure 200-300 mg/l
(6). La teneur des eaux uses en MES sanalyse par le biais de diverses mesures chimiques et
biologiques. Les analyses les plus frquentes sont la demande biochimique en oxygne (DBO) et
la demande chimique en oxygne (DCO).
Paramtres de mesure
- Demande biochimique en oxygne (DBO)
Sa dtermination consiste mesurer la quantit totale de loxygne consomm, par des
processus biochimiques, au cours de l'oxydation des matires organiques dans un
chantillon donn. La DBO a t standardise en DBO5, mesure au bout de 5 jours,
considre comme une priode significative du processus global de biodgradation qui
prend des semaines. Des appareils automatiss, tels que le Micro-Oxymax (Columbus),
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permettent de mesurer la DBO5 ainsi que la production de CO2. Ces mesures sont souvent
utilises pour vrifier le caractre biodgradable d'un compos. Elles permettent aussi
d'avoir indirectement une ide de la contamination organique globale d'un effluent. Une eau
potable doit avoir une DBO5 pratiquement nulle. Les eaux uses urbaines ont une DBO5
pouvant varier de 150 350 mg/L. Des valeurs bien plus leves sont enregistres la
sortie des laiteries, abattoirs, et surtout des distilleries (vinasses), pouvant parfois slever
plus de 30 000 mg/L. (6)
Les sources de mtaux pour les milieux aquatiques sont multiples. On diffrencie
principalement les sources dorigine naturelle et anthropique. Les principaux phnomnes
naturels conduisant la dissmination des mtaux dans les compartiments environnementaux
y compris les milieux aquatiques sont lactivit volcanique et lrosion des roches (14).
En plus des sources naturelles, les milieux aquatiques sont enrichis en mtaux par les activits
humaines. Les mtaux sont utiliss par lhomme comme matriaux mais galement comme
ractifs dans lindustrie (traitement de surface, intermdiaire ractionnel, etc.) et lagriculture
(phytosanitaires). Les activits industrielles, ainsi que le trafic automobile mettent de fines
particules mtalliques dans latmosphre, principalement dans les zones urbaines (15). Les
mtaux ainsi dissmins se dposent dans les divers compartiments environnementaux tels que
les plans deau et les sols. Les mtaux dposs sur les sols peuvent cependant atteindre les cours
deau par ruissellement au cours des vnements pluvieux. En effet les eaux uses urbaines sont
- 15 -
une des principales voies d'apport de mtaux vers les cosystmes aquatiques (16). A l'entre des
stations d'puration, une large partie des mtaux contenue dans les eaux uses se trouve
complexe avec la matire organique dissoute. Les mtaux qui peuvent tre prsents dans les
eaux rsiduaires sont : cadmium (Cd), cuivre (Cu), molybdne (Mo), nickel (Ni) et zinc (Zn)
(17).
Ce sont des composs artificiels, invents par lhomme, diffrents de par leurs structures
chimiques des composs synthtiss par les organismes vivants. On distingue entre autres :
- Des composs inertes, non biodgradables, non toxiques et qui ninteragissent pas avec les
organismes vivants. Ces le cas de la plupart des plastiques.
- Des composs plus ou moins dgradables, pouvant traverser la barrire cellulaire des
organismes vivants, se concentrer le long de la chane alimentaire et causer des dommages
physiologiques considrables, de graves intoxications, voire la mort (19).
Les phnols et leurs drives tels que les chlorophnols (mono-, di-, tri-, ttra- et penta-), les
nitrophnols, les crsols et les dimthylphnols, font partie de cette catgorie des xnobiotiques
plus ou moins dgradables. Ils sont utiliss dans lindustrie des matires plastiques, lindustrie
pharmaceutique ainsi que dans la fabrication de nombreux produits : adhsifs, explosifs, engrais,
gaz dclairage, peinture, caoutchouc, parfums, agents de prservation du bois et des textiles. Ils
servent aussi la fabrication des dtergents, des colorants, des pesticides (notamment les
chlorophnols) (20).
- 16 -
mobilit, plus ou moins limite par leur rtention, et de leur quantit, cette dernire est
dtermine par la dgradation de ces composs.
La dgradation est une transformation chimique des molcules organiques dont le stade
ultime est la minralisation. Ainsi, un compos organique peut subir diverses transformations
physico-chimiques ou biologiques qui se droulent suivant un nombre dtapes plus ou moins
grand. Les transformations abiotiques (non biologiques) qui sont dorigine physico-chimique
conduisent toujours la formation dun ou deux mtabolites mais rarement plusieurs. Les
transformations biologiques conduisent, elles aussi, la formation des mtabolites mais
aboutissent le plus souvent au stade de la minralisation (21).
Gnralement, les composs organiques serrent comme source de carbone et dnergie aux
microorganismes, ces derniers peuvent seulement raliser des activits pour lesquelles ils ont un
patrimoine enzymatique assur par une programmation gntique (23). Le succs de ce type de
mtabolisme dpend entre autre de la capacit des composs induire la synthse des enzymes
requises. Ces dernires peuvent se lier des substrats contenant des groupements fonctionnels
xnobiotiques analogues aux substrats naturels, cela dpend du degr de similarit de la structure
entre le compos xnobiotique et le substrat naturel (24). Si le compos xnobiotique est
incapable dinduire lenzyme ncessaire, alors la biodgradation se produira seulement en
prsence de linducteur naturel, et cela peut svrement limiter les applications de la capacit
enzymatique. Dans une situation pareille, la seule faon pour que le microorganisme puisse
dgrader constamment les composs xnobiotiques est lutilisation dune source additionnelle de
carbone ou laction dautres microorganismes dans une culture mixte (25).
- 17 -
-Le comtabolisme : Le comtabolisme est souvent impliqu dans la dgradation de
composs xnobiotiques (26), il est dfini comme la transformation dun substrat ne servant
pas la division cellulaire en prsence obligatoire dun substrat de croissance ou dautres
composs assimilables (27).
Le comtabolisme rsulte du large spectre dactivit des enzymes impliques qui, en plus
de leur fonction normale dans le mtabolisme, sont capables de transformer dautres
composs (28). Dans certaines conditions, si ces systmes enzymatiques sont peu
spcifiques, ils pourront fonctionner gratuitement en modifiant dautres composs qui ne
sont pas impliqus dans le mtabolisme du microorganisme (29). Le caractre essentiel du
comtabolisme, qui peut revtir des formes multiples, est le caractre fortuit de la raction
qui napporte aucun gain identifi, nergtique, nutritionnel (source de carboneetc.), ou
autres, au microorganisme qui le met en uvre (30). Ce processus de dgradation est trs
frquent et beaucoup de microorganismes peuvent y participer. Les champignons sont
particulirement impliqus dans ce type de dgradation, en raison de labondance de leur
systme enzymatique large spectre dactivit (31).
Les eaux uses contiennent des composs chimiques toxiques trs persistants et qui ont une
grande lipophylicit. Parmi ces composs, on peut citer les hydrocarbures polycycliques, les
alkyl-phnols, chlorophnols, phtalates, les pesticides et les rsidus pharmaceutiques actifs.
Certains composs ont un pouvoir de perturber le systme endocrinien tels que les hydrocarbures
polycycliques aromatiques et les alkylphnols (32). En effet plusieurs environnements aquatiques
ont t pollus par ces composs, notamment les mers et les rivires o on observe des mares
noires qui causent la mort des poissons, suite lintoxication due ces composs en plus des
autres substances pharmaceutiques dont les principales sources sont les eaux uses et les rejets
industriels (33). Ainsi, en 1975, le dversement de Cyanure dans la Moselle dtruit 40 tonnes de
poissons, alors que le rejet dans le Rhin dun insecticide entrana la mort de 50% des poissons
(34).
Pour recycler les eaux uses dans le milieu naturel et les rendre propres et scuritaires,
lpuration des eaux uses savre une ncessit primordiale. Elle est effectue au niveau des
- 18 -
stations dpuration (STEP) o les eaux uses subissent des prtraitements, et diffrents types de
traitements : physiques, biologiques et physico-chimiques.
Ils permettent dliminer la fraction la plus grossire, afin de ne pas gner les oprations
ultrieures. Ce sont le dgrillage, le dessablage, le dgraissage galement appel dshuilage.
Le dgrillage
Il sagit dliminer les lments de grandes dimensions qui se trouvent dans leau dgout
brute (chiffons, matires plastiques, etc.) et qui pourraient perturber le fonctionnement
hydraulique de la STEP. Pour ce faire, on intercale une grille, dont les barreaux ont un
cartement de lordre du centimtre (35).
Le dessablage
Aprs le dgrillage, il reste encore dans leau des fragments qui peuvent dcanter
facilement, mais dont la duret et la taille sont relativement importantes, suprieure 0,2 mm de
diamtre, et qui pourraient conduire labrasion de certains lments de la station et
particulirement les pompes, on limine ces matriaux facilement dcantables dans de petits
bassins rectangulaires ou circulaires (35).
Le dshuilage
Les eaux uses urbaines contiennent souvent des matires flottantes qui passent travers
les grilles (huiles, hydrocarbures, dbris de graisse, etc.). Les huiles et hydrocarbures forment
une couche mince en surface et gnent ainsi le processus daration dans le cas des boues
actives, il est donc ncessaire de piger ces substances au niveau du prtraitement par un
dispositif dcrmage.
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La dcantation secondaire
Appele galement clarification, elle intervient aprs le traitement biologique ou chimique,
afin dliminer les flocs issus de ces derniers.
Lors des phases de dcantation, llimination des microorganismes et des micropolluants se fait
principalement par dcantation des MES (sur lesquelles ils sont adsorbs) (36).
Ces traitements consistent une consommation de la matire organique contenue dans les
eaux uses et dune partie des matires nutritives (azote et phosphore) par des microorganismes,
on trouve entre autres :
Cest le plus ancien procd biologique utilis. Des bactries sont cultives sur un substrat
neutre ; de la pierre concasse, du pouzzolane (sable volcanique), du mchefer ou du plastique,
sur lequel On fait passer leffluent. La difficult consiste trouver la bonne vitesse du flux deau,
qui ne doit pas tre trop rapide (pour permettre la dgradation bactrienne) ni trop lent (pour une
bonne vacuation des MES en excs). Une puration sur lit bactrien est plus efficace quun
traitement boues actives car elle limine non seulement les virus et les bactries
(respectivement 30 40 % et 50 95 %) mais aussi les ufs dhelminthes (20 90 %) et les
kystes de protozoaires (83 99 % des kystes dEntamoeba histolytica) (32, 33).
- 20 -
Le traitement anarobie
Dans ce genre de traitement on utilise essentiellement la fosse imhoff ou la fosse double
tage, qui consiste en une consommation des matires organiques par les microorganismes
prsents dans leau en absence dair. Il se produit une fermentation mthanique dans une
premire fosse et on recueille ainsi les eaux pures dans une seconde fosse place sous la
premire pour quelles puissent dcanter, ce traitement est de moins en moins utilis car il est
difficile conduire et son mauvais fonctionnement peut avoir de graves inconvnients (odeurs
nausabondes, risques dexplosion, etc.). En outre les quantits des gaz produites sont trop
faibles pour quon puisse penser les rcuprer (38).
Ils sont gnralement utiliss dans les stations dpuration de grande capacit, ou dans
celles ayant faire face de grandes variations de charge dans lanne (zone touristique). Ils
comportent classiquement deux phases : une phase de coagulation par des sels de fer ou
daluminium, puis une floculation des collodes forms. La sparation du floc a lieu pendant la
phase de clarification (dcantation secondaire). Les procds les plus modernes utilisent du
microsable inject dans leffluent afin dacclrer la dcantation des flocs. On parle alors
dlimination flocs lests (39).
Les traitements physico-chimiques permettent un bon abattement des virus. Cependant, leur
utilisation, et notamment le dosage de sels de fer et daluminium, nest pas toujours bien
optimise, sinon matrise. Il y a donc un risque de surcot li une mauvaise utilisation, voire
un risque environnemental (37).
Les eaux uses de la ville de CONSTANTINE subissent, au niveau de la STEP dIBN ZIAD, des
prtraitements (dgrillage, dessablage, dshuilage), un traitement biologique par boues actives,
puis un traitement physique qui est la dcantation secondaire (clarification).
Une fois traites, les eaux sont vacues par le canal de sortie pour rejoindre leur milieu
rcepteur qui est le oued RHUMEL.
- 21 -
Volume moyen journalier des eaux uses recycles (m3/j)
Figure 1 : Volume moyen journalier des eaux uses recycles en quelques pays. (42)
- 22 -
1.7. La rutilisation des eaux uses
Les nutriments se trouvent en grande quantit dans les eaux uses, et constituent un
paramtre de qualit important pour la valorisation de ces eaux en agriculture (40). Les lments
les plus frquents dans les eaux uses sont l'azote, le phosphore et parfois le potassium, le zinc, le
bore et le soufre. Ces lments se trouvent en quantits apprciables, mais en proportions trs
variables que ce soit, dans les eaux uses pures ou brutes. Une lame de 100 mm d'eau
rsiduaire traite peut apporter l'hectare de terre agricole : de 16 62 kg d'azote, de 2 69 kg de
potassium, de 4 24 kg de phosphore, de 18 208 kg de calcium, de 9 100 kg de magnsium,
de 27 182 kg de sodium (36).
Pendant les dernires annes, la rutilisation des eaux uses a connu un dveloppement trs
rapide avec une croissance des volumes deaux uses rutilises de lordre de 10 29 % par an,
en Europe, aux tats Unis et en Chine, et jusqu 41 % en Australie. Le volume journalier actuel
des eaux uses rutilises atteint le chiffre impressionnant de 1,5-1,7 millions de m3 par jour dans
plusieurs pays, comme par exemple la Californie, la Floride, le Mexique et la Chine (41).
Lampleur de la valorisation des eaux uses dans diffrents pays du monde est illustre dans la
figure 1.
- 23 -
Tableau1 : proprits physico-chimiques du 2,4-DCP
- 24 -
2. Le 2,4-dichlorophnol :
2.1. Gnralit
2.1.1. Proprits physiques
2.3. Utilisation
- 25 -
2.4. Toxicit
Le 2,4-dichlorophnol pntre dans le corps humain par inhalation de ses arosols, par
ingestion et mme travers la peau (57).
Par voie orale, le 2,4-dichlorophnol est trs rapidement absorb par le tractus gastro-intestinal,
du fait de sa forte solubilit lipidique et sa faible ionisation au pH physiologique. Une fois
absorb il saccumule principalement au niveau du foie et des reins. 80% 90% du
2,4-dichlorophnol peut tre limins sous forme de glucuronates ou de sulfates par les urines.
Par ailleurs il a t montr que le caractre lipophile du 2,4-dichlorophnol lui permet de se lier
de manire rversible lalbumine srique humaine (43).
Une solution de 2,4-DCP est aisment absorb par la peau et le contact avec de grandes
concentrations peut tre mortel (79). Les symptmes les plus frquents lexposition aigue,
accidentelle ou volontaire, au 2,4-DCP sont des convulsions, une ataxie, une diminution de la
temprature corporelle et des maux de tte (43). Par inhalation, la sensation de brlure
saccompagne dune toux avec irritation de la gorge. Lors de lingestion du 2,4-DCP des
douleurs abdominales intenses sont aussi frquemment ressenties (59).
Le 2,4-DCP peut tre prsent naturellement dans lenvironnement, cest une substance
activit hormonale (61) ou antibactrienne (62), naturellement produite par certains
microorganismes comme Penicillium sp (63).
- 26 -
Figure 3. Transformation du 2,4-D en 2,4-DCP (73).
- 27 -
Les chlorophnols y compris le 2,4-dichlorophnol, entrent aussi dans lenvironnement
travers un usage direct (domestique ou industriel) (64), renversement accidentel et/ou comme
produits de dgradation dautres composs. Cependant, ils sont communment dtects dans le
sol, les sdiments, les eaux de surfaces et les eaux uses (65).
Dans lair
Les dcharges industrielles constituent la source principale de pollution des eaux par les
monochlorophnols et les dichlorophnols (70). Le 2,4-DCP est prsent dans les effluents des
industries de production du fer, des composs lectriques, des quipements photographiques
(60), cokerie, de la distillation du bois, des industries pharmaceutique et textiles, de tannerie, des
raffineries ptrolire (71) et par la production de 2,4-D. Le 2,4-DCP est aussi gnr comme sous
produit pendant la dsinfection des eaux par chloration (66).
Dans le sol
Aprs utilisation des herbicides dans les sites agricoles, le 2,4-DCP est le produit majeur de
transformation du 2,4-D par photolyse solaire et/ou par les activits microbiennes dans les sols
(72).
Le 2,4-DCP se forme par oxydation de la chane latrale de lherbicide 2,4-D (figure3). Il peut
aussi tre prsent comme impuret dans la formulation de certains herbicides (74),
particulirement le 2,4-D, 2,4,5-T et le lindane (75). Le 2,4-DCP saccumule dans le sol par
lapport des eaux uses pollues qui les contaminent lors de leur rutilisation en irrigation (64).
Il est aussi prsent dans les lixivats, riches en composs organiques chlors, issus de
- 28 -
lenfouissement des dchets municipaux solides (76). En gnral, la concentration des
chlorophnols dans les sols contamins schelonnent entre 0,1 et 10mg/kg (77).
Dans lair
Dans leau
Dans les milieux aquatiques, les chlorophnols existent sous forme dissocie et non
dissocie. Ces formes dpendent du pH du milieu et des proprits physiques et chimiques des
molcules (65). Lorsquil atteint les eaux de surfaces, le 2,4-dichlorophnol a une forte tendance
sadsorber sur les particules en suspension (43). La phase demeurant libre dans leau se
volatilise dans latmosphre. La volatilisation de 2,4-DCP partir deau est faible, donc elle ne
constitue pas un processus majeur dans sa disparition des eaux de surfaces (55).
Dans le sol
Lorsquil est prsent dans le sol, le 2,4-DCP a une mobilit faible ou modre. Compte
tenu de sa constante de Henry (0.4) la volatilisation de 2,4-dichlorophnol partir de sols
humides constitue un processus de transfert important. Pour les mmes raisons, la volatilisation
partir dun sol sec est relativement faible (43). Ladsorption sur les particules de sol est
gouverne par le pourcentage dions oxyds et par le pH (ladsorption diminue lorsque le pH
augmente) (78).
Dans les sols alcalins, le 2,4-dichlorophnol est prsent sous forme principalement ionise donc
dissocie, ce qui rduit son adsorption. A linverse, dans des sols acides ladsorption sera plus
leve, ce qui limite sa mobilit et affecte sa biodisponibilit (47).
- 29 -
2.7. Bioaccumulation du 2,4-dichlorophnol dans les organismes vivants
2.7.1. Plantes
2.8. Dgradation
2.8.1. Dgradation abiotique
Les chlorophnols, y compris le 2,4-DCP, peuvent tre dgrads par plusieurs processus
abiotique tels que la photodgradation ou lhydrolyse. La photodgradation rsulte dune
photolyse directe (la dcomposition par la lumire) ; Cest un phnomne de surface qui na de
lampleur quau niveau des eaux peu profondes et des zones ensoleilles, ou bien de la raction
du 2,4-DCP avec loxygne et les radicaux hydroxyles (82, 83). Lhydrolyse semble ne pas avoir
un effet significatif sur la dgradation du 2,4-DCP, cela est d au manque de groups
fonctionnels hydrolysables (84).
Le 2,4-DCP peut tre dgrad aussi par photocatalyse en prsence dun photocatalyseur comme
le dioxyde de titanium (Tio2) et le loxyde de zinc (ZnO). Sehili et al (85) ont trouv que
lirradiation dune solution aqueuse de 2,4-DCP (2 mol/l) avec une lampe fluorescente en
prsence de ZnO (2g/l) gnre des sous-produits de la dgradation du 2,4-DCP qui sont : le
chlorohydroquinone, le 4-chlorocatechol, le 4,6-dichlororesorcinol et le 3,5-dichlorocatechol.
- 30 -
Figure 4. Voie propose pour la dgradation du 2,4-dichlorophnol. 1, chlorophnols
hydroxylase, 2, chlorocatchol 1,2-dioxygnase, 3, chloromuconate cycloisomerase, 4,
dienelactone hydrolase, 5, maleylacetate rductase, 6, 3-oxoadipate thiolase. (91)
- 31 -
2.8.2. Biodgradation
Biodgradation arobie
En arobiose, les chlorophnols sont d'abord convertis en leurs chlorocatchols respectifs. Ces
derniers sont considrs comme mtabolites cls dans la dgradation de plusieurs composs
aromatiques (86). Aprs la transformation des chlorophnols, le clivage du cycle aromatique peut
avoir lieu. Il existe deux voies de clivage : la voie mta (appele aussi clivage extradiol du cycle
aromatique) et la voie ortho (appele aussi clivage intradiol du cycle aromatique) (73).
Les composs aromatiques simples tels que le phnol et le benzne sont typiquement dgrads
selon la voie mta tandis que les chlorophnols sont gnralement dgrads selon la voie ortho
(86, 87). Deux types dortho clivage existent : lortho clivage type 1 et lortho clivage type 2
modifi, spcifique la dgradation des composs aromatiques chlors via le chlorocatchol (73,
88).
Biodgradation anarobie
Plusieurs composs aromatiques chlors rsistent au mtabolisme microbien arobie car les
atomes du chlore bloquent lattaque de loxygnase. Mais, ces composs halogns peuvent tre
dshalogns par des microorganismes anarobie (92, 93).
- 32 -
En anarobiose, la biotransformation de la plupart des composs aromatiques halogns est
initie par une dshalognation rductive. Llimination de substituant halogn savre
ncessaire avant le clivage du cycle aromatique (94, 73). Ainsi, la biodgradation anarobie des
chlorophnols se fait par dchloration rductive au cours de laquelle latome de chlore est
remplac par un hydrogne. Les microorganismes anarobies utilisent les chlorophnols comme
accepteurs terminaux dlectrons, cest pour quoi la dchloration rductive est inhibe par la
prsence dautres accepteurs dlectrons comme le sulfate, le nitrate, loxygne et le dioxyde de
carbone (95).
Dans le cas du 2,4-DCP Les produits majeurs de sa dgradation anarobie sont le 4-chlorophnol
et le phnol. Mais une biodgradation plus avance peut engendrer la production de mthane et
de dioxyde de carbone (50, 96).
- 33 -
Matriel et mthodes
- 34 -
1. Prlvement de linoculum
Linoculum est constitu du microbiote total des eaux uses de la ville de CONSTANTINE.
Deux prlvements sont effectus laide dun prleveur automatique, lun partir du canal
dentre de la station dpuration dIBN ZIAD qui collecte lensemble des eaux uses de la ville,
et lautre partir du canal de sortie travers lequel les eaux uses sont vacues aprs leurs
traitements.
Le premier chantillon est prlev le matin 8h 15 min partir du canal dentre, ses
proprits physico-chimiques sont les suivantes : pH : 7,84, T : 22,2C, Dbit : 225L/s,
Conductivit : 1655s/cm, MES : 157 mg/L, DBO5 : 140 mg/L, DCO : 320 mg/L.
.
Le deuxime chantillon est prlev 8h30 min partir du canal de sortie, il a les
proprits physico-chimiques suivantes : pH : 7,55, T : 21,3C, Dbit : 225L/s, Conductivit :
1623 s/cm, MES : 8mg/L, DBO5 : 7mg/L, DCO : 11mg/L.
Les deux chantillons sont prlevs dans des flacons en verre striles, il sont ensuite
transports dans une glacire maintenue 4C jusquau laboratoire (97), o il sont analyss et
utiliss pour inoculer les fermenteurs ds leur arrive.
2. choix de xnobiotique
La molcule retenue pour cette tude est le 2,4-dichlorophenol, elle est reconnue par sa
toxicit et sa persistance dans les milieux. La molcule utilise comme substrat dtude a un
degr de puret de 99 %.
3. Milieu de culture
- 35 -
Figure 5. Dispositif du travail
- 36 -
4. technique de production de gaz in vitro
Les cultures sont ralises dans des fermenteurs miniaturiss formant un systme clos et
permettant de piger le gaz ventuellement produit suite la minralisation du substrat. Il sagit
de flacons en verre de 500 ml de capacit, ferms par des bouchons en polyester dans lesquels
des aiguilles de seringues striles sont introduites pour capturer dans ces dernires le gaz
fermentaire ventuellement produit. (figure5).
6. Inoculation
Les deux chantillons sont utiliss, ds leur arrive, pour inoculer les fermenteurs contenant
les diffrentes concentrations du 2,4-DCP, Trois rptition sont ralises pour chaque
concentration et pour chaque chantillon.
7. Tmoins et contrle
Un tmoin strile o le 2,4-DCP est introduit sans le microbiote des eaux, pour la vrification de
la prsence dune ventuelle dgradation abiotique.
Un tmoin (blanc) est inocul par le microbiote des eaux uses en absence du 2,4-DCP
- 37 -
Figure 6 : Raction au 4-aminoantipyrine.
- 38 -
8. Incubation, dosages et lectures
Les flacons sont incubs lobscurit une temprature de 30C en mode statique (sans
agitation). La mesure du pH et le dosage de la molcule sont raliss au cours des premires
heures (4h et 8h) et des premiers jours (1er, 2me, 3me, 4me et 7me) ainsi quaprs 14 et 28 jours
dincubation. Le dosage des ions chlorure libres est effectu t = 0, 7, 14, et 28 jours (101). Le
dplacement ventuel des pistons est surveill durant toute la priode dincubation pour mesurer
les gaz ventuellement produits dans les fermenteurs
8.1.1 Principe
Cette mthode est dusage courant pour la dtermination colorimtrique des phnols dans
divers matriaux en raison de sa sensibilit, sa rapidit, labsence dtapes laborieuses et son cot
peu lev (103). Les composs phnoliques, y compris le 2,4-DCP, ragissent avec le 4-AAP en
prsence de potassium hexacyanoferrate (K3Fe (CN)6) comme oxydant dans des conditions
alcalines et donnent un complexe color en rose (figure 6) prsentant un maximum dabsorbance
510 nm (104, 105).
- 39 -
-Incubation temprature ambiante pendant 15min.
- Lecture de labsorbance la longueur donde = 510 nm.
Le chlore inorganique ventuellement libr est mesur par une mthode turbidimtrique
de la manire suivante : aprs centrifugation de lchantillon prlev, 1 ml de HNO3 (2mol/l) et
0.5 ml de solution de nitrate dargent prpare (annexe1) son ajouts 10 ml du surnageant de
lchantillon doser. Aprs agitation et incubation pendant 5 10 minutes lobscurit, les
densits optiques sont lues 365 nm (106)
9. Analyse statistique
- 40 -
Rsultats et discussion
- 41 -
1. Qualit des chantillons utiliss pour linoculation
La vrification de la prsence ventuelle des ions chlorure libres est galement ralise, elle se
rvle aussi positive, avec des concentrations initiales de : 6,7mg/L et 6,38mg/L, respectivement
pour le premier et le second chantillon.
Nos chantillons sont utiliss tels quils sont, c'est--dire sans acclimatation ni enrichissement de
leur microbiote, pour tudier une biodgradation refltant celle du milieu naturel pris
globalement et dans ses conditions naturelles dactivit ;
- 42 -
Figure 7. Diffrence de la cintique de dgradation du 2,4-DCP (50mg/l) dans leffluent
dentre, leffluent de sortie et le tmoin strile
- 43 -
une priode dadaptation du microbiote au nouveau substrat, ce qui est une situation commune.
La dure de cette priode est variable en fonction des espces et des concentrations de compos
phnolique (56). Plusieurs auteurs constatent que des concentrations leves de 2,4-DCP
prolongent la phase de latence (108, 109). Cette phase de latence semble ncessaire pour la
synthse des enzymes requises pour la biodgradation du 2,4-DCP.
Le catabolisme arobie des chlorophnols et des phnols en gnral est toujours initi par
leur hydroxylation (110), lenzyme qui intervient dans cette premire tape de biodgradation est
la phnol hydroxylase. Cette dernire est une enzyme intracellulaire dune spcificit largie, elle
peut tre donc induite par dautres composs apparents au phnol (111).
Dans notre tude la phase de latence est de 24 heures pour le microbiote de leffluent de sortie,
pour lensemble des concentrations du milieu en substrat. Elle est presque la mme que celle
constate par certains auteurs et qui atteint les 27 heures pour des boues actives cultives une
concentration de 100 mg/l du 2,4-DCP (112) et relativement courte par rapport dautres auteurs
travaillant avec des souches pures, elle atteint dans ce cas les 5 jours pour la biodgradation de 2-
chlorophnol par une souche de Rhodococcus erythropolis M1 (113). Cette diffrence indique
une synergie entre diffrentes populations du microbiote aquatique et probablement une
mtabolisation complexe. Cependant, la phase de latence pour leffluent dentre est un peu plus
prolonge et atteint les 48 heures, ce prolongement pourrait tre expliqu par la diffrence de la
quantit de matires en suspension dans leffluent dentre (157mg/l) et de sortie (8mg/l), ainsi
que la diffrence entre les DBO5 des deux effluents, qui sont 140 mg/l et 7 mg/l respectivement
pour leffluent dentre et de sortie. C'est--dire que la microflore de leffluent dentre a
commenc par la dgradation de la MES biodgradable plus aisment mtabolisable et abondante
dans lchantillon, avant de synthtiser les enzymes ncessaires la biodgradation de substrats
moins accessibles, tels que le 2,4-DCP.
Certains auteurs, pour rduire la phase de latence, procdent une activation des
microorganismes par aration pendant 24 heures (114), donc en plus de la DBO5 et de la quantit
de MES, la diffrence de temps entre les deux phases de latence peut tre aussi explique par
lactivation du microbiote de leffluent de sortie du fait de son passage travers le bassin
daration de la STEP, cette phase enrichissant considrablement sa teneur en oxygne dissous.
En plus, il faut tenir compte de ladaptation et de la capacit du microbiote
- 44 -
Figure 9. Diffrence de la cintique de dgradation du 2,4-DCP (150mg/l) dans leffluent
dentre, leffluent de sortie et le tmoin strile
- 45 -
de leffluent de sortie dgrader des composs phnoliques au niveau de la STEP, chose qui est
confirme par la diminution de concentration des composs phnoliques dans leffluent de sortie
par rapport celle apporte par leffluent dentre.
Aprs cette priode qui semble correspondre la phase exponentielle de la croissance des
microorganismes, ce qui est confirm par lapparition dun trouble microbien significatif dans
tous les fermenteurs, le rythme de la biodgradation commence se ralentir et la vitesse de
biodgradation devient de plus en plus faible. Les vitesse moyennes de la biodgradation des
diffrentes concentrations de la molcule sont de : 0,108 mg/h et 0,085 mg/h, entre t = 96 heures
et t = 7 jours, et durant la deuxime semaine dincubation sont de : 0,04 mg/h pour leffluent
dentre et 0 ,03 mg/h pour leffluent de sortie.
- 46 -
Couleur initiale
Couleur jaune
- 47 -
Paralllement, lapparition dune couleur jaune, qui a t rapporte par certains auteurs
suite la dgradation des composs chloroaromatiques (117, 118), est note dans tous les
fermenteurs inoculs (figure 11). Cette couleur est probablement le rsultat dune polymrisation
par auto-oxydation du 3-chlorocatchol qui est un substrat intermdiaire du mta-clivage du 2,4-
DCP par lenzyme mta-pyrocatchase. Une fois le 3-chlorocatchol form, il saccumule dans le
milieu de culture et peut gnrer son tour un halognure dacyle qui est considr comme un
compos trs toxique qui ragit avec lenzyme en provoquant une inactivation suicide (119).
Dautre part, aucun changement de couleur nest constat dans le tmoin strile, ce qui indique
que la coloration du milieu en jaune est due a une activit microbienne, donc enzymatique, et
cest ce qui nous confirme notre interprtation prcdente de nos rsultats en ce domaine.
- 48 -
2.3. Effet de linoculum sur la biodgradation
La biodgradation du substrat par les deux inoculums ne suit pas le mme profil, pour
lensemble des diffrentes concentrations. Ds les premires heures dincubation, on note une
diffrence dans la dure des phases de latence. Aprs ces phases initiales, la cintique de
biodgradation suit un rythme diffrent pour chaque inoculum (figure 7 10). Lanalyse
statistique de la variance (annexe 4) montre quil existe une diffrence significative (p<0,05)
dans la biodgradation entre les deux effluents durant toute la priode dincubation.
Cela est confirm par lanalyse statistique de la variance (annexe 5) qui montre que leffet de la
dose est significatif aussi (p<0,05) durant toute la priode dincubation.
- 49 -
Figure 12. Libration du chlore 50mg/l dans le T.S., leffluent dentre et leffluent de sortie
Figure 13. Libration du chlore 100mg/l dans le T.S., leffluent dentre et leffluent de sortie
- 50 -
3. Tmoin et contrle
Dans les fermenteurs non inoculs et striliss, une perte de 31,76 %, 31,87 %, 31,26 % et
31,33%, respectivement pour les concentrations de 50, 100, 150 et 200 mg/l du 2,4-DCP, est
enregistre aprs les 28 jours dincubation. Cette perte abiotique est note ds les premiers
intervalles de dosage et suit un profil graduel (figure 7 10).
Les chlorophnols, y compris le 2,4-DCP, peuvent tre dgrads par plusieurs processus
abiotique, tels que : loxydation, lhydrolyse et la photolyse. Dans nos conditions, la photolyse
est certainement limite car nos chantillons ne sont exposs la lumire du laboratoire que
durant leurs phases de manipulations et de mesures. Quant lhydrolyse et loxydation leur
effet pourrait aussi tre limit dans nos conditions. En effet, la liaison covalente dun substituant
sur le noyau aromatique est trs rsistante lhydrolyse cause de la densit de charge ngative
de ce dernier. De plus, lhydrolyse et loxydation des chlorophnols engendrent une coupure de
la liaison C-Cl, donc une libration de chlore dans le milieu. Or aucune libration de chlore nest
note dans les tmoins striles durant toute la priode dincubation (figure12 15). Dautre part
lhydrolyse semble ne pas avoir un effet significatif sur la dgradation du 2,4-DCP, cela pourrait
rsulter du manque de groupements fonctionnels hydrolysables (84). De ce fait, la
probabilit de leffet de loxydation et de lhydrolyse est probablement
limite sinon limine, alors que dautres processus de dgradation abiotique
ne sont pas exclure.
4. Libration du chlore
Le dosage de chlore libre dans le milieu donne une indication sur le niveau de la
biodgradation de la molcule. La minralisation du 2,4-DCP est signale par une libration
stoechiomtrique de chlore, du CO2 et de leau dans le milieu
- 51 -
Figure 14. Libration du chlore 150mg/l dans le T.S., leffluent dentre et leffluent de sortie
Figure 15. Libration du chlore 200mg/l dans le T.S., leffluent dentre et leffluent de sortie.
- 52 -
Les figures 12, 13, 14 et 15 rendent compte des concentrations dions chlore librs durant
la priode dincubation. A la fin de cette dernire, seulement 10,07 %, 8,23 %, 6,95 % et 5,12 %,
du chlore total sont librs respectivement pour les concentrations de 50, 100, 150 et 200 mg/l du
2,4-DCP, pour leffluent dentre. Cependant, des pourcentages de 8,65 %, 6,67 %, 6,13 % et
4,28 %, respectivement pour les mmes concentrations, sont enregistrs pour leffluent de sortie.
La libration non stoechiomtrique des ions chlorure au cours de la biodgradation de la
molcule prouve sa dgradation incomplte. Au fait, les rsultats obtenus dmontrent que la
molcule nest pas minralise mais probablement seulement biotransforme en mtabolites
intermdiaires chlors ou non, ultrieurement polymriss et visualiss par lapparition dans le
milieu dune coloration jaune caractristique du phnomne. Aucune libration de chlore nest
enregistre pour les tmoins striles de la molcule, ce qui limine, l aussi, toute minralisation
par un mcanisme abiotique. La libration de chlore est donc le rsultat de laction des
microorganismes sur notre molcule.
5. Variation du pH du milieu
La biodgradation est accompagne par une lgre variation du pH. La quantit des ions
chlorure librs au cours par la biodgradation est faible et par consquent la formation dacide
chlorhydrique (HCl) dans le milieu lest aussi, ce qui explique la faible baisse du pH dans les
fermenteurs inoculs. Cette volution est pratiquement nulle dans le tmoin strile (annexe 7).
Quel que soit lchantillon considr, aucune production de gaz nest enregistre sur toute
la priode dincubation par la technique de rcupration des gaz en seringues, pour toutes les
concentrations. Ce rsultat corrobore nos conclusions prcdentes et confirme pleinement
labsence de toute minralisation du substrat dans tous nos essais.
- 53 -
Discussion gnrale
et conclusion
- 54 -
Notre travail avait pour objet ltude de la biodgradation de diffrentes concentrations de
2,4-DCP par le microbiote total des eaux uses de la ville de CONSTANTINE, recueilli en
amont et en aval de la station dpuration dIbn Ziad, au niveau de son canal dentre et de son
canal de sortie. Les chantillons deaux uses sont utiliss pour inoculer un milieu minimum
adquat o le 2,4-DCP est la seule source de carbone et dnergie des concentrations initiales
de 50, 100, 150 et 200 mg/L. Les cultures, de type batch, sont menes en arobiose dans des
fermenteurs miniaturiss. Ils sont incubs 30C, en mode statique, pendant une priode
dincubation de 28 jours. Ltude intgre le suivi de divers paramtres de culture dont les
mesures sont cintiques et concernent la fois lvaluation de la dgradation biotique et de la
biodgradation du substrat.
Les rsultats globaux montrent que le 2,4-DCP est dgrad aussi bien par le microbiote
dentre que par le microbiote de sortie de la station dIbn Ziad. Les mesures cintiques de la
biodgradation du 2,4-DCP indiquent une diffrence dans le rythme et le pourcentage de sa
mtabolisation, constate ds la phase de latence et continuelle jusqu la fin de lincubation,
mais diffremment pour le microbiote des deux effluents, comme le confirme la variance o
leffet inoculum se rvle significatif (p<0,05). Cette diffrence pourrait sexpliquer de diverses
manires non tablies, dont une diffrence qualitative de charge microbienne des deux types
deffluents qui ont une nature diffrencie par le traitement.
- 55 -
100, 150 et 200 mg/l du 2,4-DCP. Des rsidus significatifs persistent donc dans les fermenteurs
inoculs par leffluent dentre. Alors que dans les fermenteurs inoculs par leffluent de sortie,
on note la persistance de 42,52 %, 58,1 %, 61,82 % et 66,36 % du substrat pour les mmes
concentrations initiales respectives.
Le dosage du chlore libr au cours de la biodgradation donne aussi une indication sur le
niveau de la biodgradation du substrat. La minralisation du 2,4-dichlorophnol est signale par
une libration stoechiomtrique de chlore, de CO2 et deau dans le milieu. Dans notre tude la
libration non stoechiomtrique des ions chlorure au cours de la biodgradation du substrat
prouve sa dgradation incomplte. En fait, les rsultats obtenus dmontrent que la molcule nest
pas minralise mais probablement biotransformes en drivs mtaboliques intermdiaires,
chlors ou non.
Aucune production de gaz nest enregistre sur toute la priode dincubation par la
technique de rcupration de gaz en seringues, quel que soit lchantillon et la concentration de
substrat considrs, pour toutes les concentrations et pour les deux effluents. Ce qui confirme
clairement quaucune minralisation du substrat ne se produit et corrobore le profil de libration
du chlore.
Une perte abiotique de substrat est releve dans les fermenteurs striles et non inoculs,
aprs les 28 jours dincubation. Elle est relativement identique, variant entre de 31,26 % et 31,87
%, quelle que soit la concentration du milieu en 2,4-DCP. Cette perte abiotique est note ds les
premiers intervalles de dosage et suit un profil graduel. La diffrence entre les deux processus de
dgradation (biotique et abiotique) est significative (p<0,05).
Notre travail montre le rle prpondrant que jouent les microorganismes dans la
dtoxification des milieux naturels pollus par le 2,4-DCP qui est aussi sensible aux processus
physico-chimique de dgradation abiotique. En perspective, on peut prvoir comme tudes
complmentaires notre travail :
- 56 -
La ralisation de cultures continues dans des fermenteurs qui assurent un
approvisionnement continu en oxygne.
- 57 -
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- 70 -
Annexe
- 71 -
Annexe 1 : prparation de solution de nitrate dargent
- 4,25 g AgNO3, 1 ml HNO3 (65%), et 0,05 g NaCl sont dissous dans 100 ml deau distille.
- chauffage 80C sous agitation, jusqu lapparition dun prcipit de couleur grise.
- La solution est utilise aprs filtration.
- 72 -
Annexe 3 : Courbe talon de lion chlorure
Concentration du 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
chlorure (mg/l)
Absorbance 0.049 0.089 0.139 0.192 0.233 0.263 0.307 0.343 0.380 0.413
365nm
- 73 -
Annexe 4 : ANOVA pour leffet de linoculum sur la biodgradation du 2,4-DCP diffrents
intervalles de temps dincubation.
T = 48 heures
dl MC dl MC F P
Effet Effet Effet Erreur Erreur
Inoculum 1 135,3750 16 4,430279 30,55676 0,00046
T = 72 heures
dl MC dl MC F P
Effet Effet Effet Erreur Erreur
Inoculum 1 28,2970 16 3,012038 9,39463 0,027237
T = 96 heures
dl MC dl MC F P
Effet Effet Effet Erreur Erreur
Inoculum 1 34,6320 16 5,011066 6,91111 0,018237
T = 7jours
dl MC dl MC F P
Effet Effet Effet Erreur Erreur
Inoculum 1 138,4801 16 1,876621 73,7923 0,000000
T = 14 jours
dl MC dl MC F P
Effet Effet Effet Erreur Erreur
Inoculum 1 248,1337 16 3,786854 65,5250 0,000000
T = 28 jours
dl MC dl MC F P
Effet Effet Effet Erreur Erreur
Inoculum 1 259,9758 16 1,216854 213,6454 0,000000
(dl) : Degr de libert, (MC) : Somme des carrs moyens, (F) : Statistique du test Fischer,
(P) :Probabilit attache la valeur de Fischer.
- 74 -
Annexe 5 : ANOVA pour leffet de la dose sur la biodgradation du 2,4-DCP diffrents
intervalles de temps dincubation.
T = 48 heures
dl MC dl MC F P
Effet Effet Effet Erreur Erreur
Dose 3 194,3478 16 4,430279 43,86807 0,000000
T = 72 heures
dl MC dl MC F P
Effet Effet Effet Erreur Erreur
Dose 3 204,3907 16 3,012038 67,85794 0,000000
T = 96 heures
dl MC dl MC F P
Effet Effet Effet Erreur Erreur
Dose 3 322,9554 16 5,011066 64,44843 0,000000
T = 7jours
dl MC dl MC F P
Effet Effet Effet Erreur Erreur
Dose 3 388,3912 16 1,876621 206,9631 0,000000
T = 14 jours
dl MC dl MC F P
Effet Effet Effet Erreur Erreur
Dose 3 601,2314 16 3,786854 158,7680 0,000000
T = 28 jours
dl MC dl MC F P
Effet Effet Effet Erreur Erreur
Dose 3 789,2813 16 1,216854 648,6243 0,000000
(dl) : Degr de libert, (MC) : Somme des carrs moyens, (F) : Statistique du test Fisher,
(P) :Probabilit attache la valeur de Fischer.
- 75 -
Annexe 6 : Test de Student (t) pour la comparaison de la dgradation biotique et abiotique la
fin dincubation
BD 42,8 23,84
DA 31,58 0,54
11,22 1,9869 0,00002
- 76 -
Annexe 7 : Courbe des variations du pH
- 77 -
Figure18. Variation de pH concentration de 150mg/l dans le T.S., leffluent dentre
et leffluent de sortie
- 78 -
Annexe 8 : Les rsultats de mesures des concentrations de la molcule.
[C]\Temps 4 8 24 48 72 96 7j 14 28j
50 50 48,14 43,8 42,72 37,58 31,2 26,5 21,26 18,1
100 99,78 99,22 97,56 94,33 80,92 71,1 60,23 49,66 43,7
150 149,7 146,1 135,95 128,66 113,98 103,22 95,7 90,23 86,72
200 200,05 197,33 193,05 184,98 156,95 148,1 139,88 133,7 130,12
[C]\Temps 4 8 24 48 72 96 7j 14 28j
150 149,8 145,98 135,33 123,1 114,22 105,95 99,86 96,3 92,72
200 199,97 197,42 192,2 179,03 164,33 153,6 146,06 139,2 132,72
[C]\Temps 4 8 24 48 72 96 7j 14 28j
100 100,32 99,26 97,02 94,12 89,94 86,12 80,23 72,86 68,13
150 149,72 145,98 135,2 128,7 123,05 119,97 113,92 108,86 102,96
200 199,93 197,26 192,12 184,76 177,92 171,2 157,21 145,96 137,33
Les rsultats mentionns dans les tableaux sont des moyennes de trois rptitions.
- 79 -
.
pH\Temps 4 8 24 48 72 96 7j 14 28j
150 7,17 7,17 7,17 7,18 7,15 7,12 7,07 6,99 6,96
pH\Temps 4 8 24 48 72 96 7j 14 28j
50 7,17 7,17 7,18 7,16 7,14 7,12 7,07 7,04 6,99
100 7,18 7,18 7,18 7,17 7,15 7,11 7,09 7,03 6,99
150 7,18 7,18 7,17 7,16 7,15 7,11 7,08 7,03 6,98
200 7,17 7,17 7,18 7,16 7,14 7,12 7,07 7,04 6,99
pH\Temps 4 8 24 48 72 96 7j 14 28j
50 7,17 7,18 7,18 7,17 7,17 7,18 7,18 7,17 7,17
100 7,18 7,18 7,17 7,18 7,18 7,18 7,17 7,18 7,17
150 7,18 7,18 7,19 7,18 7,18 7,19 7,18 7,17 7,18
200 7,17 7,18 7,18 7,17 7,17 7,18 7,18 7,17 7,17
Les rsultats mentionns dans les tableaux sont aussi des moyennes de trois rptitions.
- 80 -
Abstract
The kinetics of biological breakdown of the 2,4-dichlorophnol by the microbiote of the effluent
of entry generates a phase of 48 hours latency and percentages of biological breakdown at the
end of incubation of:63,8%, 56,3%, 42,18% and 34,94%, respectively for the initial
concentrations of:50, 100, 150, 200mg/l.While the kinetics of biological breakdown of the 2,4-
dichlorophenol by the microbiote of the effluent of exit generates a phase of 24 hours latency
with percentages of biological breakdown of:57,48%, 41,9%, 38,18% and 33,64% for the same
respective concentrations and the same duration of incubation. The inoculum effect and the effect
proportion substrate, during the biological breakdown, is significant (p<0,05).An abiotic
degradation is also noted, with a percentage which does not reach the 32% for the whole of the
concentrations. However, the difference between the biological breakdown and abiotic
degradation are very significant (p<0,05). No production of gas is recorded in the whole of the
fermentors, whereas the nonstoehiometric release of ions chloride is very weak during the
biological breakdown of the 2,4-dichlorophenol.These two elements indicate that its biological
breakdown is incomplete.
- 82 -
2.4:
2.4
. .
28 30
.
2.4
42.18 56.3 63.8 34.94 150 100 50 200
57.48
38.18 41.9 33.64 .
.
: 2.4 .
- 83 -
Nom : BELAHMADI Date de soutenance : 16/01/2011
Prnom : MOHAMED SEDDIK OUSSAMA
Titre : Etude de la biodgradation de 2,4-dichlorophnol par le microbiote des effluents
dentre et de sortie de la station dpuration des eaux uses dibn Ziad
Rsum
Membre de jury :