EFECTO DE LA MICROINYECCIN DE GABA EN EL PnC SOBRE LAS CRISIS

PROVOCADAS POR PENTILENTETRAZOL EN LA RATA

QUE PARA OBTENER EL TTULO DE

QUMICO FARMACUTICO BILOGO

PRESENTA
MOISS ARISTEO RODRGUEZ DAZ

MXICO, D.F. AO
2012

JURADO ASIGNADO:

PRESIDENTE: IGNACIO CAMACHO ARROYO

VOCAL: MARCO ANTONIO CERBON CERVANTES

SECRETARIO: JOAQUIN MANJARREZ MARMOLEJO

1er. SUPLENTE: OSCAR ARMANDO PREZ MENDEZ

2 SUPLENTE: RUTH BUSTAMANTE GARCA

SITIO DONDE SE DESARROLL EL TEMA:

LABORATORIO DE FISIOLOGA DE LA FORMACIN RETICULAR,

INSTITUTO NACIONAL DE NEUROLOGIA Y NEUROCIRUGIA MANUEL
VELASCO SUREZ

ASESOR DEL TEMA :

DR. JOAQUIN MANJARREZ MARMOLEJO

(nombre y firma)

SUPERVISOR TCNICO (Si lo hay):

(nombre y firma)

SUSTENTANTE (S):

MOISS ARISTEO RODRGUEZ DAZ

(nombre (s) y firma (s) )

DEDICATORIA
 NDICE
Resumen.................. 1

Introduccin.. 2

Antecedentes 4

4
Breve historia de la epilepsia .

6
Definicin de epilepsia y sus causas.
 8
Clasificacin de las crisis epilpticas........
11
Electroencefalograma y epilepsia...
13
Modelos experimentales de crisis epilpticas..
16
Pentilentetrazol..
17
Frmacos antiepilpticos.
20
GABA ...
22
FR y epilepsia....
24
Objetivos
25
Materiales .
26
Metodologa ..........
26
Animales de experimentacin....
26
Ciruga estereotxica .
27
Implementacin de electrodos y cnula gua...
27
Registro electrofisiolgico y microinyeccin
29
Resultados
36
Discusin de resultados
39
Conclusiones ..
40
Bibliografa .
RESUMEN

La Epilepsia es un problema de Salud Pblica, en Mxico su prevalencia es

del 1 al 2%, valores ms elevados que los referidos en la literatura internacional.

Los modelos animales de crisis epilpticas han sido utilizados en el estudio

de la epilepsia, as como en el desarrollo y formulacin de nuevos frmacos
antiepilpticos (FAE).

El objetivo de este trabajo fue valorar el efecto de la microinyeccin de

GABA en el PnC de la rata, sobre las crisis convulsivas inducidas con
pentilentetrazol (PTZ). Se utilizaron ratas Wistar macho de 250-270g. Se implant
en forma unilateral una cnula gua dirigida al ncleo reticularis pontis caudalis
(PnC), 2 electrodos en la corteza motora y uno de tierra para el registro del
electroencefalograma (EEG). Siete das posteriores se realizaron cuatro grupos de
microinyeccin en el PnC de ratas: el primero control, salina amortiguada pH 7.4
0.2L como vehculo. A los otros la microinyeccin unilateral de GABA (24, 48, 96
nmolas), todas las microinyecciones fueron en un volumen de 0.2 L. Se realiz el
registro encefalografico y se evalu la conducta durante 30 minutos post-
microinyeccin. Despus se administr PTZ (70 mg/kg i.p.), se registr la actividad
conductual y electrogrfica durante 90 minutos. Se analizaron los resultados,
latencia a la primera crisis generalizada tnico-clnica (CTCG), porcentaje de
proteccin contra las CTCG y de sobrevivencia. Los datos obtenidos se analizaron
con las pruebas estadsticas: exacta de Fisher y t de Student. La microinyeccin
de 24 y 48 nmolas de GABA en el PnC no modific las CTCG. La dosis de 96
nmolas bloque el 87.5% de las CTCG y se present una sobrevivencia del
87.5% de los animales. Por lo tanto estos datos indican que el PnC es un posible
sitio blanco donde acta el GABA para regular la actividad epilptica en este
modelo.

1
INTRODUCCIN

La Epilepsia es un problema de Salud Pblica, en Mxico su prevalencia es

del 1 al 2%, valores ms elevados que los referidos en la literatura internacional
(Corona, 2007).

La Liga Internacional Contra la Epilepsia (ILAE) y la Organizacin Mundial

de la Salud (OMS), a partir de 1973 definieron a la epilepsia como la afeccin
crnica y recurrente de crisis paroxsticas (crisis epilpticas), desencadenadas por
descargas elctricas anormales que tienen manifestaciones clnicas variadas de
origen multifactorial y que se asocian a trastornos paraclnicos (anormalidades
electroencefalogrficas) que se presentan de manera no provocada (Camacho y
Broissin, 2005; Medina, 2004).

Los modelos animales de crisis epilpticas han sido utilizados en el estudio

de la epilepsia, as como en el desarrollo y formulacin de nuevos frmacos
antiepilpticos (FAE) (Iida et al., 1998; Hansen et al., 2004). Durante los ltimos
aos se han realizado considerables avances en el desarrollo de nuevos modelos
animales de epilepsia, los investigadores sealan que un modelo ideal debe tener
una fenomenologa clnica similar al tipo de crisis que ocurre en los humanos y la
crisis debe estar asociada con una actividad anormal en el electroencefalograma
(EEG). Es importante que el modelo proporcione una respuesta de las crisis a los
frmacos antiepilpticos (FAES) paralela a lo que ocurrira en el humano. En los
ltimos aos, hay un considerable progreso en el tratamiento de la epilepsia,
incluyendo la introduccin de nuevos FAES y las reformulaciones de frmacos
usados en antiguos tratamientos, sin embargo, a pesar de estos avances, existen
pacientes con epilepsia resistente a los tratamientos actuales, por lo que se
buscan terapias dirigidas a la prevencin de la epilepsia, comprensin de los
mecanismos biolgicos de la resistencia farmacolgica para desarrollar nuevos
frmacos e inhibir la progresin de la epilepsia (Coenen et al, 1992; Lscher,
2002).

2
 El acido -amino butrico (GABA) es de gran importancia, tiene un papel
importante en la regulacin de la actividad epilptica inducida en varios modelos
experimentales de crisis epilpticas. Se desconocen los posibles sitios de accin
del GABA en el SNC para el control de la actividad epilptica. Investigaciones han
demostrado que la Formacin Reticular Pontina (FRP) regula las crisis
experimentales provocadas por pentilentetrazol (PTZ). Se ha planteado que el
ncleo reticularis pontis caudalis (PnC), localizado en la FRP, es importante para
la regulacin de las crisis generalizadas por PTZ (Camacho, 1991; Faingold et al,
1995; Manjarrez et al, 2001).

3
ANTECEDENTES

Breve historia de la epilepsia

Hace muchos siglos, la epilepsia era concebida como un padecimiento

mgico, sobrenatural y divino, de ah el problema que representa en las personas
que la padecen, quienes son discriminados. El primer escrito de la epilepsia se
recopil en el Cdigo de Hammurab que perteneci a la cultura babilnica. Fue en
el reinado de Adad-Aplaidina (1067 a 1047 a. c.), donde se compil y edit uno de
los primeros textos de la medicina babilnica llamado "Sakikk" (todas las
enfermedades), en el se describen las caractersticas clnicas del "Antashubba"
que significa en sumerio enfermedad de las cadas (Rubio, 1997).

En la antigua china (siglo VII a. c.), la epilepsia fue considerada de origen

natural. El nio contraa la epilepsia dentro del vientre de la madre cuando esta
sufra un choque emocional. La revolucin o bases en el conocimiento de la
epilepsia y la medicina correspondi a la medicina griega en el siglo V y VI a.c, la
epilepsia (proviene de verbo epilambanein, atacar; el trmino ataque todava en
uso) era causada por el ataque repentino de un dios colrico (diabolus) y su nico
remedio era el exorcismo o la posesin de un dios benfico como Cibeles, Dionisio
o las plegarias hacia los dioses de la salud (Asclepios, Apolo, Panacea). El salto
del pensamiento y las creencias mgicas, al nacimiento del pensamiento cientfico
correspondi a Alcmen de Crotona e Hipcrates. Hipcrates estableci que la
epilepsia era una enfermedad con una causa natural como las dems, tiene su
origen en el cerebro y describi claramente las crisis generalizadas y focales;
consideraba que la flema o pituita (humor fro y hmedo) en excesos penetra en
las venas y cierra el paso al aire que no puede llegar al cerebro, de tal forma que
el hombre no puede tener control sobre s, al igual que de los miembros, las venas
quedan obturadas por la flema y no pueden recibir el aire, dejando sin voz y sin
razonamiento. Los brazos quedan inertes y se agitan de forma convulsiva al estar
detenida la sangre. Los ojos dan vueltas, al obturarse las venas menores y tener

4
pulsaciones. Por la boca se escapa una espuma que sale de los pulmones al no
llegar aire a ellos, espumean y bullen como a punto de morir. El excremento cae
por la violencia del ahogo. El enfermo da patadas si el aire se encuentra encerrado
en estos miembros y no es capaz de salir por causa de la flema. Hipcrates
plantea la teora y lanza un desafi por primera vez a la ciencia (Garca, 2003).

Galeno, 500 aos despus de Hipcrates, aunque reconoci que las

convulsiones tenan origen en el cerebro, tambin afirmaba que el cuerpo jugaba
un papel importante en la epilepsia. Charle Le Pois (1563-1636) fue el primero en
establecer claramente el origen cerebral de todos los tipos de epilepsia (Uribe y
Acevedo, 2010).

Sin embargo, hasta los siglos XIX y XX los avances tecnolgicos establecen
las bases para el estudio cientfico de la epilepsia, as como su definicin y
clasificacin etiolgica (Garca, 2003).

En la dcada de 1840, los investigadores desarrollaron diversos mtodos

para provocar convulsiones en animales de experimentacin y la localizacin de
los sitios de origen. Flourens demostr experimentalmente en palomas que la
corteza cerebral puede ser estimulada por medios mecnicos para obtener
respuestas motoras (Eadie, 2009).

En 1870 John Hughlings Jackson define a la epilepsia como descargas

locales, ocasionales, sbitas, excesivas y rpidas de la sustancia gris, cuyo
resultado es la prdida casi instantnea de la conciencia, movimientos convulsivos
o una combinacin de estos eventos. En 1870, se hizo cada vez ms recurrente la
idea que las convulsiones se producan a nivel de la corteza cerebral. (Camacho y
Broissin, 2005)

Sin embargo, en el ao 1886 Vctor Horsley extirp la corteza adyacente a una

fractura craneal deprimida y cur a un paciente con crisis motoras focales (Kandel,
2002).

5
 En 1909 fue creada una de las organizaciones ms importantes a nivel
mundial con el fin de ayudar a los epilpticos, nace en el Hospital Bristol de
Budapest el 30 de agosto de 1909 La Liga Internacional contra la Epilepsia, y
as una nueva esperanza en el entendimiento de la epilepsia (Garca, 2003).

Una de las innovaciones mdicas ms importantes en el ao 1912 fue

realizada por Hauptmann, que utiliz por primera vez el fenobarbital como
anticonvulsivo en los tratamientos mdicos. El desarrollo de la
electroencefalografa en 1929, el descubrimiento de la fenitona por Houston
Merritt y Tracey Putnam en 1937. En el cuidado y tratamiento de los pacientes
con epilepsia no es suficiente con las caractersticas fisiolgicas de las crisis, hay
que tener en cuenta los factores psicolgicos y sociales (Kandel, 2002).

Definicin de epilepsia y causas

Desde hace ms de 4,000 aos se ha tratado de definir a la epilepsia con

descripciones clnicas muy semejantes a las nuevas clasificaciones de la
epilepsia, los sndromes epilpticos y las crisis epilpticas (Rubio, 1997).

Es por eso que de acuerdo con la ILAE y la OMS, a partir de 1973 se

defini a la Epilepsia como la afeccin crnica y recurrente de crisis paroxsticas
(crisis epilpticas), desencadenadas por descargas elctricas anormales que
tienen manifestaciones clnicas variadas de origen multifactorial y que se asocian
a trastornos paraclnicos (anormalidades electroencefalogrficas) y que se
presentan de manera no provocada (Camacho y Broissin, 2005; Medina, 2004).

En Mxico, diversos estudios han demostrado que existe cerca de 10 a 20

millones de nacionales con epilepsia. Segn especialistas del Instituto de
Neurologa, cualquier persona puede tener epilepsia: hasta el 10% de la poblacin
presenta en algn momento de su vida alguna crisis epilptica, pero solamente
entre el 1% y el 3% desarrolla epilepsia (Cosso, 2011).

6
 Una crisis epilptica se produce cuando existe una anormalidad en la
actividad elctrica en el cerebro. Existen factores que pueden desencadenar la
aparicin o produccin de una crisis epilptica como son los traumatismos
craneales, los accidentes cerebrovasculares, los tumores, las infecciones
cerebrales, desequilibrio metablico y electroltico (glucosa baja en sangre, baja
en sodio, magnesio o calcio), la reduccin de la medicacin de FAEs, un mal
tratamiento de FAEs, variaciones hormonales, el estrs, la privacin del sueo, la
abstinencia al alcohol u otros sedantes, la administracin de frmacos con
propiedades proconvulsivantes (estimulantes del SNC) como cocana,
anticolinrgicos, casi todos los bloqueadores de la dopamina, antipsicoticos
(clozapina), antidepresivos (bupropin sobre todo), inmunosupresores como la
ciclosporina y los antibiticos como las quinolonas o imipenemcilastatin, aunque
generalmente las crisis epilpticas recurrentes son idiopticas o de causa
desconocida. (Parmet, 2011; Bromfield, 2006).

La actividad epilptica se caracteriza por tres periodos (Nuez et al, 2008):

a. El periodo ictal o ictus, que corresponde a la crisis epilptica per se, es

un evento intermitente y breve que dura desde segundos a minutos y
que presenta un patrn electroencefalogrfico hipersincrnico asociado
a cambios conductuales.

b. El periodo post-ictal, es el que se presenta inmediatamente despus de

la crisis epilptica y cuya duracin vara desde unos minutos hasta das.

c. El periodo inter-ictal, es el transcurrido entre una crisis y otra. Se

desarrollan mecanismos para disminuir la hiperexcitabilidad epilptica e
impedir la aparicin de nuevas crisis.

7
 Incremento y sincronizacin de la actividad elctrica neuronal

ictus

Post-ictal Periodo refractario

Menor susceptibilidad a la
Interictal
aparicin de una nueva crisis

Figura 1. Periodo de actividad elctrica (Nuez et al, 2008)

Un exceso de la actividad de las vas excitadoras en circuitos especficos

puede causar actividad epilptica o, en casos extremos, dao o muerte celular. Se
sugiere que el glutamato y el aspartato participan en la iniciacin, propagacin y
mantenimiento de las crisis epilpticas. As disminucin en la inhibicin mediada
por GABA es la responsable de algunos tipos de epilepsia, ya que GABA es un
inhibidor primario en la regulacin de la actividad epilptica. La mayora de los
FAEs incrementan la neurotransmisin GABArgica siendo esta su base accin
farmacolgica (Nuez et al, 2008).

Clasificacin de las crisis epilpticas

La definicin de la epilepsia contribuy a su clasificacin, debido a que

hasta la fecha no se conoce con exactitud el sitio (sustrato) anatmico y la misma
etiologa, en 1981 la comisin de clasificacin y terminologa de la Liga
internacional contra la epilepsia clasific las crisis epilpticas, conforme a las
necesidades epidemiolgicas o administrativas. Fue hasta el ao 2001 que la Liga
internacional contra la epilepsia propuso una nueva clasificacin (Tabla 1), en la

8
cual se han descrito los sndromes nuevos desde la anterior clasificacin (Zarranz,
2003).

Las crisis epilpticas afectan generalmente la vista, el habla o el

movimiento, y pueden afectar solo parte del cerebro (crisis epilptica parcial) o
todo el cerebro (crisis epilptica generalizada). La duracin de las crisis epilpticas
vara generalmente de algunos segundos a minutos, causando o no prdida del
conocimiento. Algunas personas experimentan el aura epilptica, que es la
sensacin de que estn a punto de tener una crisis epilptica. La actividad
convulsiva vara entre las personas con epilepsia (Parmet, 2011).

Las dos principales categoras de la clasificacin de las crisis epilpticas por

La Liga internacional contra la Epilepsia (ILAE) en el ao 1981; la epilepsia por
convulsiones parciales y convulsiones generalizadas. Para esta clasificacin en
especfico las convulsiones parciales (focales) comienzan en una zona del
cerebro. Las crisis parciales se dividen en parciales simples (sin alteracin de la
conciencia) y complejas (con alteracin de la conciencia). Las convulsiones
parciales simples sin sntomas motores son denominadas auras. Las
convulsiones generalizadas conceptualmente implican todo el cerebro al mismo
tiempo. Los tipos individuales de crisis generalizadas son la ausencia, mioclnicas,
tnico-clnicas, tnicas, atnico, y los sntomas clnicos (Nina et al, 2009).

9
 Clasificacin de las crisis epilpticas por la ILAE 2001.

I. Crisis autolimitadas
Crisis generalizadas
Tnico-clnicas
Clnicas
Tnicas
Mioclnicas
Ausencias tpicas
Ausencias atpicas
Mioclonia de los parpados (con o sin ausencias)
Mioclonia negativa
Atnicas

Crisis Focales
Sensitivas o sensoriales (elementales o de experiencia)
Motoras (con varios subtipos)
Gelsticas
Hemiclnicas
Secundariamente generalizadas

II. Crisis continuas

Estado de mal epilptico generalizado
Tonico-clnico
Clnico
Ausencias
Tnico
Mioclnico

Estado de mal epilptico focal

Epilepsia parcial continua de Kojevnikov
Aura continua
Lmbico
Hemiconvulsivo con hemiparesia

III. Estmulos precipitantes de las crisis reflejas

Visual
Cognitivo
Musical
Comer
Prxico
Somatosensitivo
Propioceptivo
Lectura
Agua caliente
Sobresalto
Tabla 1. Resumen de la propuesta de Clasificacin de las crisis epilpticas por ILAE 2001, (Zarranz, 2003)

10
Electroencefalograma y Epilepsia

La electroencefalografa, ha estado ntimamente involucrada en las

investigaciones sobre la epilepsia desde su invencin y desarrollo por Berger hace
80 aos. El electroencefalograma (EEG) ha demostrado ser una valiosa
herramienta en el estudio de las condiciones cuyos efectos se manifiestan en la
actividad elctrica del cerebro. Aunque muchas otras tcnicas de investigacin han
sido utilizadas en los problemas de la clnica, incluyendo varios tipos de imgenes
sofisticadas, el EEG sigue siendo fundamental para la investigacin, diagnstico y
manejo clnico de pacientes con epilepsia y tambin en la comprensin fisiolgica
de los procesos cerebrales (Buteneers, 2011; Nicolaou, 2012; Herman, 2011).

Las crisis epilpticas se definen como la manifestacin clnica de la

excesiva actividad e hipersincrnica de las neuronas en la corteza cerebral y
representa un mal funcionamiento del sistema nervioso central. Por lo tanto, la
bsqueda de los precursores y los predictores de un ataque es de suma
relevancia clnica e incluso nos puede guiar a una comprensin ms profunda de
los mecanismos generadores de la convulsin. El electroencefalograma (EEG)
puede ser considerado como una serie de tiempo, de fluctuaciones de voltaje en
forma de onda, que son generadas principalmente por los potenciales
postsinpticos de un gran nmero de neuronas sincronizadas (Moser, 1999).

La diferencia de potencial elctrico entre dos electrodos de registro genera

una onda o una secuencia de ondas que representa la actividad del EEG. La
forma de las ondas normalmente se clasifica en funcin de varias caractersticas
importantes, como es la morfologa, la repeticin, la frecuencia, amplitud, el campo
de la distribucin. El EEG se clasifica en cuatro bandas de acuerdo a la frecuencia

11
de la actividad en: delta (0 a 4/segundo o 0 a 4 Hz), theta (4-8/s o 4-8 Hz), alfa (8-
13/s o 8-13 Hz) y beta (>13/s o >13 Hz) (Minecan, 2010).

El EEG de las crisis parciales es muy diferente al de las crisis generalizadas

(Watanabe 2010). Las convulsiones parciales se caracterizan por presentar punta-
onda rtmicas o, a veces, una frecuencia de la actividad theta ictal (Dalmaschio,
2011). Las crisis tnico-clnicas generalizadas, presentan un cambio inicial en el
EEG durante un ataque, este puede ser una desincronizacin de bajo voltaje,
seguido de una actividad rtmica aserrada de 15-25 Hz, una desaceleracin lenta
de la frecuencia, por lo general para terminar en picos (o poliespigas) y ondas
lentas. Despus de la crisis, el fondo del EEG se aplana y se retarda con relacin
a la lnea de base durante varios minutos. (Fisher, 1989).

La EEG es una herramienta importante en el diagnstico, la lateralizacin y

la localizacin de convulsiones del lbulo temporal (Mohammed, 2010).

Las convulsiones inducidas por PTZ muestran trenes rpidos de descargas

en espiga y, posteriormente, una onda lenta aparece en el EEG. Se presume que
la medicin de cambios en el EEG proporcionar nueva informacin (Watanabe
2010).

Existen tres tipos de neuronas en la corteza cerebral que son

consideradas la base de la actividad elctrica de la electroencefalografa. El
primer tipo son las clulas piramidales cuyos axones se proyectan desde la
corteza cerebral a otras areas del cerebro y la mdula espinal, son neuronas
excitadoras, su principal neurotransmisor es el glutamato y se considera que
este tipo de clulas son las que proveen la mayor parte del registro EEG. El
segundo tipo de clulas en la corteza cerebral son las interneuronas
estrelladas cuyos axones se extienden verticalmente en el plano de la columna
cortical, obtienen sus potenciales de accin desde el tlamo y los transmiten a
otras interneuronas o a las clulas piramidales. El tercer tipo son las clulas en

12
cesto, orientadas horizontalmente hacia sus axones y estos se encuentran
enroscados en su soma, su principal neurotransmisor es el GABA (Cloix, 2009).

Modelos experimentales de crisis epilpticas

Anteriormente se consideraba como un modelo animal a todo aquel que

tena un tipo de crisis similar en su manifestacin clnica a los que se presentan en
los seres humanos y la crisis deba ser asociada con la actividad anormal en el
EEG, una correspondencia con respecto a la edad de inicio de la crisis deba estar
presente y la respuesta de la crisis a los frmacos antiepilpticos tena que
mostrar un paralelismo con la epilepsia en el hombre (Coenen et al, 1992).

Actualmente, un modelo animal es considerado vlido cuando es capaz de

reproducir una serie de caractersticas clnicas de forma total o parcial, la cual
puede ser transferida a los seres humanos u otras especies animales. La alta
prevalencia de la epilepsia, as como la ausencia de un tratamiento antiepilptico
eficaz, requiere de ms estudios y el establecimiento de modelos de animales que
nos permitan comprender las bases fisiopatolgicas, mecanismos e identificar
tratamientos efectivos (Garca, 2010).

Los modelos animales de epilepsia son fundamentales en la comprensin

de aspectos fisiolgicos y de comportamiento asociados con la epilepsia humana y
su relacin con las sustancias antiepilpticas (Banach, 2011).

En la epilepsia generalizada, los modelos animales son necesarios para la

evaluacin de la actividad electrofisiolgica invasiva utilizando EEG. Por ejemplo
el babuino ofrece un modelo natural de la epilepsia fotosensible, idioptica
generalizada (IGE), con mioclnicas y convulsiones tnico clnicas generalizadas
que se producen espontneamente o pueden ser provocados por la estimulacin
luminosa intermitente EEG (kos, 2012).

13
 Existen modelos de crisis aguda y crnica. Los modelos de crisis aguda son
inducidos por la administracin de sustancias convulsivas o estimulacin elctrica;
Los crnicos requieren ms cuidado, por el trabajo y el costo econmico,
proporcionan informacin para el estudio de los cambios que ocurren entre el
periodo de dao cerebral y desarrollo de la epilepsia en curso. Con ambos tipos de
modelos se pueden reproducir crisis parciales y generalizadas, sin embargo, ya
que la epilepsia se caracteriza por la aparicin de crisis recurrentes en el tiempo,
slo los modelos que reproducen esta condicin son considerados como modelos
vlidos de epilepsia. (Fisher, 1989; Garca, 2010).

Existen al menos tres categoras aceptadas para clasificar a los modelos

experimentales de epilepsia (tabla 2):
a) La duracin del protocolo para inducir las crisis epilpticas (agudas y
crnicas)
b) La causa de la actividad epilptica (por sustancias qumicas, estmulos
fsicos, alteraciones metablicas, o mutaciones genticas)
c) El tipo de actividad epilptica que se genera como podran ser focales o
generalizadas; corticales o lmbicos; clnicas o tnicas; estado epilptico;
etc. (Zavala et al, 2011).

14
 Tipo Agente Causante Tipo de Actividad Epilptica Tipo Protocolo Edad de las
Agente Pro- Generada (Duracin) Ratas o animales
Epilptico de exp.
cido kanico Crisis parciales complejas Agudo, crnico Adultas y en
secundariamente generalizadas, desarrollo
status epilepticus
Crisis parciales complejas Agudo, crnico Adultas y en
Pilocarpina secundariamente generalizadas, desarrollo
status epilepticus
Crisis clnico-tnicas Agudo Adultas y en
generalizadas desarrollo
Pentilentetrazol Crisis parciales complejas Crnico Adultas
secundariamente generalizadas (kindling
qumico)
Glutamato monosdico Crisis tnico-clnicas Agudo En desarrollo
generalizadas Crnico
Fluoroetil Crisis clnico-tnicas Agudo En desarrollo
generalizadas
Qumico Toxina tetnica Crisis secundariamente Crnico Adultas y en
generalizadas desarrollo
Penicilina Crisis Parcial simple Agudo Adultas
Bicuculina Crisis Parcial simple Agudo Adultas
Picrotoxina Crisis Parcial simple Agudo Adultas
Estricnina Crisis Parcial simple Agudo Adultas
Colinrgicos Crisis Parcial simple Agudo Adultas
No colinergicos Crisis Parcial simple Agudo Adultas
Fsico Kindling elctrico Crisis parciales complejas Crnico Adultas y en
secundariamente generalizadas desarrollo
Generacin de Crisis parciales complejas o Agudo En desarrollo
postdescargas corticales crisis mioclnicas
Electrochoques Crisis mioclnicas Agudo Adultas y en
Crisis tnico-clnicas desarrollo
Cobalto (Implantacin de Crisis Parcial simple Crnico Adultas
metales)
Zinc (Implantacin de Crisis Parcial simple Crnico Adultas
metales)
Hierro (Implantacin de Crisis Parcial simple Crnico Adultas
metales)
Hidrxido de aluminio Crisis Parcial simple Crnico Adultas
(Implantacin de metales)
Estimulacin elctrica aguda Crisis Parcial simple Agudo Adultas
Hipertermia Crisis parciales complejas Agudo En desarrollo
secundariamente generalizadas Crnico
Hipoxia Crisis clnico-tnicas Agudo En desarrollo
Gentico Ratas genticamente
propensas a crisis de *Descargas
ausencia GAERS (Genetic electrogrficas
Absence Epilepsy Rat from tipo espiga Jvenes (1
Strasbourg) Crisis de ausencia onda mes de edad) y
Ratas genticamente espontneas adultas
propensas a crisis de
ausencia WAG/Rij (Wistar

15
 Absence Glaxo rat)

Ratas Genticamente Crisis convulsivas primaria o Sonido Adultas

Propensas a la Epilepsia secundariamente generalizadas
GEPR (Genetically (clnicas/tnico-clnicas)
Epilepsy-Prone Rats)
Babuino fotosensible Crisis tnico-clnicas Luz Adultos

Tabla 2. Modelos experimentales de epilepsia en ratas (Fisher, 1989; Zavala et al, 2011)

PTZ

Pentilentetrazol, 1,5-Pentametilentetrazol, 6,7,8,9-Tetrahidro-5H-

tetrazol[1,5-a]azepina o Cardiazol (PTZ), es un derivado del tetrazol con
acciones convulsivantes en rata, el gato y en los primates (Figura 2). El PTZ
inicialmente produce sacudidas mioclnicas, las cuales pueden ser sostenidas y
desarrolla crisis generalizadas tnico-clnicas. En los registros
electroencefalograficos aparecen espigas o poliespigas. (Castellanos 1995;
Velisek et al, 1992).

Figura 2. Estructura qumica del pentilentetrazol. (Sigma-Aldrich)

A finales de 1940 y principios de 1950, varios artculos describen las

propiedades quimioconvulsivantes del pentilentetrazol (PTZ), por ejemplo, en el
modelo de umbral de las crisis con PTZ, en la evaluacin de las propiedades
anticonvulsivantes de los frmacos antiepilpticos (FAE) y de otros como el
modelo de crisis de electroshock mximo. Se ha utilizado para identificar la
mayora de los antiepilpticos en el tratamiento de las crisis epilpticas, por lo que
el PTZ es utilizado comnmente para estudiar la excitabilidad del cerebro en la

16
rata, atraviesa fcilmente la barrera hematoencefalica. (Hansen et al, 2004;
Klioueva et al, 2001).

El PTZ provoca dos diferentes tipos de convulsiones motoras en los

roedores adultos: la primera que es predominantemente clnica, y la segunda que
es generalizada. La administracin de PTZ en roedores a dosis de 60 a 100
mg/kg, intraperitonial (i.p) o subcutnea (s.c) conduce a sacudidas mioclnicas,
clnicas y la extensin tnica. Sin embargo, la administracin repetida de PTZ a
dosis subumbral inferior (20 a 40 mg / kg, ip) puede inducir fenmeno kindling. Sus
efectos se pueden observar a los 30 min posteriores a su administracin, su
tiempo de vida media es de aproximadamente 3.8 h mantenindose constante la
concentracin intracerebral hasta 2 h despus de la primera crisis (Dhir, 2012;
Velisek, 1992; Manjarrez, 1997).

Uno de los mecanismos de aceptacin general por el cual se cree que el

PTZ ejerce su accin es al actuar como un antagonista del complejo receptor
GABAA en el sitio picrotoxina (Hansen et al, 2004). Los receptores GABAA son
predominantes en la inhibicin de los receptores de neurotransmisores en el
sistema nervioso central (SNC) de vertebrados. Existen trabajos que demuestran
que el PTZ y la picrotoxina interactan con la superposicin, pero en distintos
dominios del receptor de GABAA. (Huang et al, 2001; L. Hansen et al, 2004).

Frmacos antiepilpticos

Se ha estimado que aproximadamente el 20% de los pacientes con

epilepsia que us la primera generacin de FAES (fenobarbital, fenitona,
carbamazepina, valproato de sodio y diazepam), estos no fueron capaces de
controlar adecuadamente las crisis. Actualmente los FAES disponibles, como el
valproato, lamotrigina y el topiramato controlan las crisis en un 60-70%. El xito
del tratamiento para la epilepsia requiere la seleccin del medicamento correcto, la
dosis ptima y el cumplimiento satisfactorio del paciente. El incorrecto

17
cumplimiento o incumplimiento del tratamiento ha sido considerado uno de los
principales motivos de fracaso del tratamiento de la epilepsia (Naz et al, 2012;
Beghi, 2012).

Aunque los FAES ya son vastos y contina su expansin, una

desconsolada realidad mdica es la resistencia a los medicamentos de cerca de
un tercio de los pacientes epilpticos. La mayora de los que no responden a la
monoterapia con el primer FAE siguen sin estar controlados con todos los otros
FAES, solos o en combinacin. Por otra parte, la introduccin de nuevos frmacos
realmente no ha mejorado el control de las crisis (Margineanu, 2012).

El uso de antiepilpticos especficos se basa en diferentes factores,

incluyendo la edad del paciente, sexo, sndromes epilpticos y las enfermedades
comrbidas. Los mecanismos de accin, efectos adversos, interacciones con otros
medicamentos y la dosis ptima de cada uno tambin son consideraciones
importantes que contribuyen al equilibrio de la eficacia y los efectos adversos en el
manejo de FAES (Hsieh, 2009).

Las evidencias indican que, en la epilepsia los circuitos cerebrales

inhibitorios, que dependen principalmente de la sealizacin a travs de los
receptores GABAA, no presentan un correcto funcionamiento. Por lo tanto, el
bloqueo farmacolgico de los receptores GABA promueve la generacin de
convulsiones en animales y en humanos, mientras que los frmacos que mejoran
la funcin del receptor de GABA, como las benzodiazepinas, son eficaces para
tratar las convulsiones (Loup, 2006).

Los FAES protegen contra las convulsiones a travs de interacciones con

una variedad de clulas dianas. Las acciones de estos se clasifican en tres
grandes grupos: (1) la modulacin de los canales inicos dependientes de voltaje
(principalmente sodio y de calcio), (2) efectos sobre los sistemas GABArgicos,
mediados por la inhibicin sinptica por los receptores GABA, y (3) la inhibicin de
la excitacin sinptica mediada por receptores ionotrpicos de glutamato. La

18
accin fundamental de los FAES que actan sobre los canales de sodio
dependientes de voltaje, tales como fenitona, carbamazepina y lamotrigina es la
de reducir los potenciales de accin dependientes de la liberacin de glutamato,
que depende de la alta frecuencia de disparos prolongados como ocurre durante
las descargas epilpticas. El bloqueo del canal de sodio dependiente de voltaje
puede reducir la propagacin de potenciales de accin desde el soma hacia las
dendritas y as reducir la amplificacin dendrtica de los potenciales sinpticos. En
conjunto, estas son acciones para impedir la propagacin de la actividad
epileptiforme (Rogawski et al, 2006).

Otros anticonvulsivos como la Gabapentina que consiste en una molcula

de GABA ligada de manera covalente a un anillo ciclohexano lipfilo, actan como
agonistas de GABA, y su alta liposolubilidad facilita su transferencia a travs de la
barrera hematoenceflica. La Gabapentina inhibe la extensin tnica de los
cuartos traseros en el modelo de convulsiones clnicas inducidas por PTZ, es
eficaz contra las convulsiones parciales. Puede favorecer la liberacin no vesicular
de GABA por medio de un mecanismo que se entiende poco y se une a una
protena en membranas corticales con una secuencia de aminocidos idntica a la
de la subnunidad 2 del canal de Ca 2+ del tipo L sensible a voltaje. La
Gabapentina no afecta las corrientes de Ca 2+ de los canales de Ca2+ tipo T, N, o L
de clulas de los ganglios de la raz dorsal. Otro ejemplo como la tiagabina se
utiliza para tratar crisis parciales en adultos, inhibe el transportador del GABA,
GAT-1 y, as, reduce la captacin de GABA hacia neuronas y neuroglia. En
neuronas CA1 del hipocampo, incrementa la duracin de corrientes sinpticas
inhibidoras (McNamara et al, 2010).

Es importante reconocer que an queda mucho por aprender, y es preciso

aadir una cuarta categora de los mecanismos de FAE: la modulacin de la
liberacin sinptica, particularmente de glutamato, a travs de acciones directas
sobre la maquinaria de liberacin, ejemplo la Gabapentina, pregabalina,
levetiracetam (Rogawski et al, 2006).

19
GABA

Las convulsiones estn controladas en casi el 70% de los pacientes con

epilepsia, en su mayora por la regulacin farmacolgica de canales inicos de
membrana, o de la transmision GABArgica y glutamatrgica (Nassiri et al, 2008;
Naseer et al, 2009).
Se ha propuesto que una reduccin de la actividad GABArgica y / o un
aumento de la actividad glutamatrgica, desempean un papel importante en la
epileptognesis. Los antiepilpticos actuales tienen su actividad en los receptores
gabargicos y canales voltaje-dependientes (Dalmaschio, 2011).

El Acido Gama Aminobutrico (GABA) es uno de los neurotransmisores

inhibidores ms importantes en el sistema nervioso central (SNC). Ms de un
tercio de las neuronas del cerebro utilizan GABA para la comunicacin sinptica.
Se estima que la concentracin de este es 200-1000 veces ms alta que la
concentracin de otros neurotransmisores (Figura 3). El sistema GABArgico, est
implicado en los mecanismos patolgicos de muchas enfermedades del SNC, por
ejemplo la epilepsia. La deficiencia en la concentracin de GABA puede resultar
en epilepsia. Por lo tanto, mejorando la funcin de inhibicin de neuronas
GABArgicas (potenciar las transmisiones GABArgicas, es decir, un aumento de
la sntesis de GABA, bloqueo del transportador GAT-1 y la inhibicin de sinptica
de la recaptura de GABA, la inhibicin de GABA aminotransferasa o que afecten a
los receptores del complejo GABAA son factores importante para controlar las
convulsiones (Kubacka et al, 2006).

20
 Figura 3. Estructura qumica del cido -aminobutirico (Jorgensen, 2005).

GABA acta principalmente sobre los receptores GABA A que estn

acoplados a los canales Cl - activados por ligandos. Los receptores GABA son el
blanco para una variedad de frmacos que mejoran el tratamiento de
enfermedades tales como la epilepsia, la ansiedad, trastornos del sueo y
adiccin. En el cerebro de rata adulta, la activacin de los receptores GABA
aumentan la permeabilidad de la membrana neuronal para Cl -, lo que conduce a
hiperpolarizacin y disminucin de la excitabilidad de las neuronas (Figura 4). En
el cerebro inmaduro, la activacin del receptor conduce a la despolarizacin de las
neuronas. En las ratas adultas, un importante factor desencadenante de la
generacin de crisis es una alteracin de la funcin del receptor GABA (Laurn,
2007).

21
 Figura 4. Los receptores de GABA contienen dos sitios de fijacin para GABA y varios sitios
donde se unen los frmacos que modulan estos sitios (Purves, 2001).

El progreso en el conocimiento acerca de la funcin de GABA en el SNC ha

creado la base para la bsqueda de agentes, que pueden ser tiles en el
tratamiento de la epilepsia. Una serie de anlogos de GABA se han desarrollado y
utilizado teraputicamente. Dado que el GABA no era un buen candidato para ser
un frmaco antiepilptico debido a que no penetra la barrera hematoenceflica,
actualmente se ha propuesto realizar una ciclacin de GABA para generar una
molcula que sea capaz de penetrar en el cerebro y actuar all de manera similar a
ella. Un ejemplo es un derivado cclico del GABA, el piracetam, es la base para el
nuevo grupo de medicamentos llamados frmacos nootrpicos. Sin embargo, el
piracetam no influye o interviene en la transmisin GABArgica. El piracetam no
es efectivo para las convulsiones inducidas por PTZ, su anlogo el levetiracetam
se ha utilizado con xito en pacientes con epilepsia mioclnica (Kubacka et al,
2006).

22
Formacin Reticular y Epilepsia

Agregar cita de S.aqu y en la BBG

El trmino de formacin reticular (FR) fue adoptado por los primeros

investigadores en esta rea para distinguir lo que parecan como neuronas
interconectadas de forma difusa en el tegmento del tallo cerebral distinta en
comparacin con la anatoma de los ncleos asociados a los nervios craneales.
Esta caracterstica de la formacin reticular sugiri que estaba mal organizada y
solo efectuaba funciones primitivas. Sin embargo, algunos investigadores,
especialmente Cajal, que realiz la organizacin y especificidad de la formacin
reticular, ubicndola en el tallo cerebral. A pesara del trabajo de Cajal, la formacin
reticular era de poco inters hasta que los trabajos de Moruzzi y Magoun en los
aos 1940 a 1950 demostraron que el mantenimiento de la conciencia y la
vigilancia depende de la entrada de las vas sensoriales que atraviesa la FR al
tlamo y corteza cerebral (Trauring, 2008)
La FR es una estructura heterognea difusa en el ncleo central tegmental
del tallo cerebral, se extiende desde la mdula a mesencfalo, est implicada en el
desarrollo de convulsiones, en el control del ciclo sueo-vigilia, tiene un papel
importante en la habituacin y la sensibilizacin de las respuestas a los estmulos
sensoriales repetitivos (Groves et al., 1972; Faingold, 1978).
Actualmente la mayora de las investigaciones indican que los subgrupos de
neuronas reticulares y terminales nerviosas poseen transmisores y pptidos, como
la serotonina, noradrenalina, acetilcolina, dopamina, glutamato, GABA, y
encefalina, lo que sugiere que las funciones de la FR tambin dependen de
complejas interacciones neuroqumicas (Trauring, 2008). Con respecto a GABA
puede actuar como un neurotransmisor en la formacin reticular Pontina, que
participa en la regulacin del ciclo sueo-vigilia (Camacho et al., 1991).
La FR juega un papel importante en el desarrollo de convulsiones, se ha
observado que alteraciones en los potenciales sensoriales evocados, en ciertas
formas de epilepsia humana. Adems, una gran variedad de modelos de crisis

23
animales, incluyendo los modelos con FAE estn asociados con una mejora de los
potenciales sensoriales evocados, por lo que la mejora en la respuesta es a la vez
temprana y amplia. Esta mejora es un indicativo de un mecanismo general de la
induccin de convulsiones (Faingold, 1978). Las investigaciones han demostrado
que la formacin reticular Pontina (FRP) participa en la generacin y el
mantenimiento de estados epilpticos. En el caso de la FRP de la rata, el
glutamato y el aspartato estn implicados en la epilepsia, sus efectos estn
mediados por subtipos de receptores, pero la N-metil-D-aspartato (NMDA) ha sido
el ms estudiado de todos y su participacin en las crisis est documentada. Por
ejemplo La participacin de los receptores para NMDA en el ncleo reticularis
pontis caudalis (PnC) en la generacin y mantenimiento de las convulsiones solo
ha sido estudiado en modelos genticos de ataques audiognicos que producen
extensin tnica de miembros posteriores (Manjarrez et al, 2001).

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