TITULO

Efecto in vitro del extracto de myrciaria dubia camu

camu sobre el crecimiento de Helicobacter pylori

NDICE

I. Resumen ----------------------------------------------------------------------- 2
II. Introduccin------------------------------------------------------------------- 2
III. Objetivos ---------------------------------------------------------------------- 5
1. Objetivo General ------------------------------------------------------- 5
2. Objetivos especficos ------------------------------------------------ 5
IV. Hiptesis ---------------------------------------------------------------------- 5
V. Metodologa ------------------------------------------------------------------- 6
1. Tipo y Diseo General del Estudio -------------------------- 6
2. Variables del estudio --------------------------------------------- 6
1.1 Variable Dependiente ---------------------------------------- 6
1.2 Variable Independiente -------------------------------------- 6
1.3 Operacionalizacin de las variables -------------------- 7
3. Material ---------------------------------------------------------------- 7
1.3.1 Material Biolgico --------------------------- 7
1.3.2 Material Fitoqumico Farmacolgico--- 7
4. Procedimiento del Estudio -------------------------------------- 7

VI. Referencias bibliogrficas ------------------------------------------------ 9

I.- RESUMEN
Omar azaa

[Escriba texto] Pgina 1

 (Aqu deben escribir el resumen del protocolo: 200
palabras, con estructura [Introduccin, Objetivos,
Mtodos, Resultados] de preferencia. Sugerimos que
esto lo preparen al final cuando hayan terminado
redactar todo su protocolo)

Palabras clave: Helicobacter pylori, Myrciaria dubia, cncer gstrico.

II.- INTRODUCCION:

Treinta aos han pasado desde que dos australianos Robin Warren y Barry
Marshall descubrieran al Helicobacter pylori en 1982. 1

Helicobacter pylori es considerado como el agente causal de varios trastornos

gastrointestinales en el hombre tales como la gastritis crnica, la lcera
gstrica , lcera duodenal, adenocarcinoma de la parte distal del estmago y el
linfoma de tejido linfoide asociado a mucosa gstrica. 2,3,4

La bacteria (Hp) ha coevolucionado con el ser humano para transmitirse de

persona a persona y colonizar con especial constancia en la cavidad gstrica.
Blazer y Atherton (2004) afirmaban que: La estructura de su poblacin es un
modelo para la ecologa de la flora microbiana local. Es decir un coreografiado
equilibrio entre efectos bacterianos y una respuesta del husped que permite la
persistencia del microbio y la salud del husped pero que confiere riesgo de
obtener enfermedades serias, incluidas lceras ppticas y neoplasias
gstricas.5

En Lima-Per Ms del 90% de las cepas de Helicobacter pylori son CagA+,

que se ha relacionado al incremento del riesgo de desarrollar inflamacin
crnica y cncer gstrico. Su prevalencia vara de pas en pas e incluso dentro
de un mismo pas como se evidencia en varias investigaciones hechas
localmente. Aunque ciertamente disminuye en pases desarrollados. En el pas
por ejemplo en individuos de nivel socio econmico medio y alto, en los ltimos
20 aos ha disminuido de 80% a 50%, mantenindose en un 80% en el nivel
socio econmico bajo. 6, 7,8

[Escriba texto] Pgina 2

La creciente aparicin de la resistencia, toxicidad e interacciones

farmacolgicas de antimicrobianos tradicionales ponen de manifiesto una grave

amenaza para la salud pblica.9, 10,11 Por lo mismo el decrecimiento de la

eficacia del modelo de la triple terapia estndar (TTE) contra Helicobacter

pylori. Mltiples estudios iniciales a nivel mundial demostraron que la eficacia

de esta TTE era del 90% en promedio, lo cual tambin fue encontrado en

nuestro medio; sin embargo, en los ltimos 15 aos, el xito con esta terapia ha

descendido dramticamente llegando de 57% a 73% en terapias de siete das y

de 67% a 79% con terapias de 10 das. El descenso en la eficacia ha sido

atribuido fundamentalmente a la resistencia a la claritromicina y al

metronidazol, que en nuestro medio estn por encima del 15% a 80%

respectivamente. 12, 13,14

La resistencia no es un fenmeno nuevo en un principio se reconoci como una

curiosidad cientfica y luego como una amenaza a la eficacia del tratamiento.

La OMS dice al respecto en su reporte sobre vigilancia global de la resistencia

antimicrobiana (2014): La generacin de nuevos antimicrobianos se est

estancando y son pocos los incentivos para elaborar otros nuevos que permitan

combatir el problema mundial de la resistencia.15 Es por ello que actualmente

se est fomentando la bsqueda de nuevas alternativas teraputicas entre los

productos naturales, las ms estudiadas son las plantas con sus respectivos

frutos, cortezas, races y semillas.16

En el Per, las plantas medicinales representan una herramienta vital de la

medicina tradicional debido a que la flora peruana ofrece posibilidades enormes
de descubrimientos de nuevos compuestos. Se calcula que el Per posee unas
25 000 especies de plantas conocidas con 17 144 especies de plantas con
flores (Angiospermas y Gimnospermas), de las cuales 5 354 son especies
nativas.17

[Escriba texto] Pgina 3

Entre las especies de la Amazonia destaca Myrciaria dubia, o mejor conocida
en nuestro pas como camu-camu. El camu camu es de la familia Myrtaceae y
crece en las orillas de lagos y ros en la selva amaznica. 18 El inters de esta
fruta se ha incrementado recientemente debido a la impresionante cantidad de
vitamina C que contiene, que puede alcanzar hasta 6g/100g de pulpa fresca, lo
que hace que sea una de las fuentes ms ricas de vitamina C en el mundo. 19,20
La actividad antimicrobiana del camu-camu todava no ha sido muy estudiada
sin embargo, en la cscara del camu camu podemos encontrar antocianinas,
flavonoides y compuestos fenlicos totales; los cuales poseen accin
antimicrobiana; estos convierten al camu-camu en un potencial antibitico. 21,22

III.- Objetivos del Estudio

Objetivo General

Determinar si existe inhibicin del crecimiento de Helicobacter pylori

mediante discos de difusin de extracto de Myrciaria dubua Camu camu.

Objetivos Especficos

Medir el halo de inhibicin de crecimiento bacteriano "in vitro" de

cepas aisladas de Helicobacter pylori en los discos a diferentes
concentraciones del extracto de Myrciaria dubia Camu camu.

Comparar los resultados de la determinacin del efecto inhibitorio del

extracto de Myrciaria dubia Camu camu en sus diferentes
concentraciones sobre los cultivos microbianos de Helicobacter pylori.

IV.- Hiptesis del Estudio

La Myrciaria Dubia Camu Camu tiene un efecto antibacteriano contra la cepa

CagA+ de Helicobacter pylori

V.- Metodologa

1.1 Tipo y Diseo General del Estudio

[Escriba texto] Pgina 4

 La presente investigacin se realiz con un diseo de tipo cuasi
experimental, in vitro, prospectivo.

1.2 VARIABLES DE ESTUDIO

1.2.1 VARIABLES INDEPENDIENTES

Concentracin del aceite esencial de Myrciaria dubia camu camu

1.2.2 VARIABLES DEPENDIENTES

Inhibicin del crecimiento bacteriano del extracto de
Myrciaria dubia camu camu.

1.2.3 OPERACIONALIZACIN DE VARIABLES

Variable Definicin Indicadores Escala Categoras

Independiente

Concentracin de Porcentaje del Porcentajes de Nominal 25%

aceite esencial de aceite esencial disolucin del 50%
Myrciaria dubia de Myrciaria aceite esencial 100%
camu camu dubia camu de Myrciaria
camu dubia camu
camu
.

Variable Definicin Indicadores Escala Categoras

Dependiente

Inhibicin del Inhibicin del Tamao del halo Razn 0-25mm

crecimiento crecimiento de de inhibicin
bacteriano. Helicobacter pylori formado alrededor
debido a la del disco
actividad del aceite embebido con
esencial de aceite esencial de
Myrciaria dubia Myrciaria dubia
camu camu camu camu
.

[Escriba texto] Pgina 5

 1.3 Material KRISTIAN PAZ

1.3.2 Material Biolgico

(Fundamentar el porqu del animal de experimentacin seleccionado, en base
fisiolgica, de anatoma comparada, etc)

Se obtuvieron 1 cepa de Helicobacter pylori proporcionada

por el Laboratorio de Investigaciones (LID) en
Enfermedades Infecciosas de la Facultad de Ciencias de la
UPCH (Universidad Peruana Cayetano Heredia).

1.3.3 Material Fitoqumico Farmacolgico

(Especificar para el material fitoquimico lugar de procedencia, caractersticas
del clima, momento de recoleccin, identificacin taxonmica, etc. Para
material farmacolgico, presentacin, laboratorio y cualidades qumicas)

Frutos de Myrciaria dubia, procedentes del departamento

de Ucayali, provincia de Coronel Portillo, distrito de
Pucallpa y sern identificados en Museo de Historia
Natural de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos
(UNMSM).

1.4 Procedimiento JUNIOR ---

La obtencin del extracto etanlico de la cscara de Myrciaria dubia

se realizar en el laboratorio de la facultad de Farmacia de la
Universidad Nacional Mayor de San Marcos con la ayuda de un
especialista en farmacognosia

Tratamiento del material vegetal:

1. Lavado de muestra: los frutos seleccionados de Myrciaria
dubia se lavarn con agua destilada, seguido de una
desinfeccin utilizando hipoclorito de sodio a una
concentracin de 200ppm durante 5 minutos. Posteriormente

[Escriba texto] Pgina 6

 se realizar el enjuague de la planta con abundante agua
destilada estril para retirar los residuos del hipoclorito. Una
vez lavados los frutos se proceder a pelarlos para obtener la
cscara.
2. Secado: Las cscaras del fruto de Myrciaria dubia se
colocarn sobre papel Kraft y se llevarn a ser secadas,
primero a temperatura ambiente por 24 horas y luego en una
estufa a una temperatura de 40C. Se realizar la
determinacin del peso para lograr valores constantes.
3. Pulverizacin: Una vez secadas las cscaras del fruto
Myrciaria dubia se pulverizarn con ayuda de un mortero.
4. Tamizaje: El material obtenido de la pulverizacin se pasar a
travs de un proceso de tamizaje.
5. Almacenamiento: El polvo obtenido de las cscaras del fruto
Myrciaria dubia obtenidas se guardar en frascos previamente
rotulados.23
Preparacin del extracto etanlico de Myrciaria dubia

1. Se pesar 20g de cscara previamente pulverizada y tamizada.

Luego se humectarn con 30mL de etanol de 96G.L., se colocar
en un recipiente y se mezclar con cantidades suficientes de
arena lavada.
2. Posteriormente se verter en un cartucho de papel filtro y se
colocar en un extractor del equipo de Soxhlet y se extraer con
150mL de etanol de 70 G.L. a una temperatura de 60C a 80 C
durante 8 horas, y el producto ser filtrado 3 veces con papel
Whatman N41, 4 y 2 respectivamente, para obtener un extracto
purificado y libre de grmenes.
3. La solucin resultante ser llevada a secar en una cmara de
secado al vaco a una presin baja y a una temperatura de 40C,
luego se pesar el residuo en refrigeracin a 2C en un frasco de
vidrio estril. De este residuo seco se prepararn las
concentraciones de 25%, 50%, 75% y 100% disueltas en etanol
de 70G.L. respectivamente
4. Para la preparacin de la concentracin del 25% se aadir el
residuo seco en una proporcin de 25g de residuo seco en 100 ml
de etanol, determinando una concentracin de 250mg/ml, para la
concentracin del 50% se aadir 50g de residuo seco en 100ml
de etanol determinando una concentracin de 500 mg/ml y as
sucesivamente hasta la concentracin del 100%.
5. Finalmente se realizar la separacin por concentraciones en
frascos, previamente rotulados y esterilizados en autoclave por
15min a 121C y a 15 libras de presin. Dichas diluciones se
conservarn a una temperatura de 4C para su posterior uso. 24

[Escriba texto] Pgina 7

 Procedimiento del cultivo Y antibiograma con discos de difusin
MILTON Hurtado

DESDE QUE SE RECOGE LA BACTERIA EN CAYETANO HEREDIA,

PONER LAS BACTERIAS EN AGAR , CON EL METODO DE RITO
SERPA , TB LO DE LOS DISCOS DE DIFUSIN . EL TIPO DE AGAR
Q USAMOS , ( EST EN EL FB EL AGAR QUE COMPRO DICKSON)

TODO EN WORD LISTO PARA IMPRIMIR

OCHOA

Poblacin: describir la poblacin en la cual se realiz el

estudio.
Unidad de anlisis.
Criterios de seleccin: especificar criterios de
inclusin, exclusin y eliminacin con los que se filtr a
los participantes en el estudio.
Muestra y muestreo: especificar si se trabaj con todo
el universo o nicamente con una muestra; en cuyo
caso deber describir el clculo del tamao muestral y
tipo de muestreo empleado. Describir tambin si los
resultados del estudio son extrapolables a la poblacin
general empleada o a otra poblacin y cumpliendo con
qu caractersticas.

1 Aspectos ticos RAMIREZ

(Mencionen las aprobaciones ticas o institucionales,

as como normativas internacionales.)

especificar el comit de tica que evalu y autoriz la

realizacin del proyecto. En caso que el protocolo no haya
pasado por un comit de tica, especificar el motivo.

[Escriba texto] Pgina 8

 2 Procesamiento y anlisis estadstico vicky

especificar cmo se realiz el anlisis estadstico, qu pruebas utiliz y para

qu variables. Describir el paquete estadstico utilizado, la versin y cul fue
el nivel de confianza y significancia utilizado.

1 Resultados vicky

2 Discusines revel

3 Conclusines revel

4 Anexos ..roger

VI.- Referencias Bibliogrficas:

1. The Nobel Prize in Physiology or Medicine 2005 awarded to Barry J.

Marshall and J. Robin Warren "for their discovery of the bacterium
Helicobacter pylori and its role in gastritis and peptic ulcer disease".
2. J. Robin Warren, Barry Marshall. Unidentified curved bacilli on gastric
epithelium in active chronic gastritis. The Lancet. 1983 321: 1273-1275
3. Eslick, GD, Lim, LL, Byles, JE, et al. Association of Helicobacter pylori
infection with gastric carcinoma: A meta-analysis. Am J Gastroenterol 1999;
94:2373
4. Vikram Kate, Nanda K. Maroju, N. Ananthakrishnan. Helicobacter pylori
infection and upper gastrointestinal disorders. Gastroenterol Res Pract.
2013: 896209, 3 pages
5. Martin J. Blaser, John C. Atherton Helicobacter pylori persistence: biology
and disease. J Clin Invest. 2004 113(3): 321-333
6. Daniel Mendoza, Phabiola Herrera, Robert H. Gilman, Julio Lanfranco
et al. Variation in the prevalence of gastric cncer in Peru. Int. J.
Cancer 2008 123: 414-420
7. Ramrez-Ramos A, watanabe-Yamamoto J, Takano-Morn J, et al.
Decrease in prevalence of peptic ulcer and gastric adenocarcinoma at the

[Escriba texto] Pgina 9

 Policlnico Peruanao Japons, Lima, Per, between the years 1985 and
2002. Analysis of 31,446 patients. Acta Gastroenterol Latinoam, 2006;
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8. Ramrez Ramos Alberto, Chinga A. Erick, Mendoza R. Daniel, Leey C.
Julio, Segovia C. Maria Cristina, Otoya Csar. Variacin de la prevalencia
del H. Pylori en el Per. Perodo (1985- 2002), Revista De
Gastroenterologa Del Per 2003; 23:92-98.
9. World Health Organization. World Health Assembly (fifty-first). Emerging
and othercomunicable diseases: antimicrobial resistance. WHA51.17.1998.
agenda tem 21.3
10. World Health Organization. WHO global principles for the containent of
antimicrobial resistance in animals intended for food. 2000.
WHO/CDC/CSR/APH/200.4.
11. World Health Organization. WHO reporto n infectious diseases: Removing
obstacles to healthy development. Geneva. 1999. WHO/CDS/99.1.
12. E. Robert Greenberg et al. 14-day triple, 5-day concomitant, and 10-day
sequential therapies for Helicobacter pylori infection in seven Latin
American sites: a randomised trial. The Lancet 2011, 378, 9790: 507-514
13. Luiz Edmundo Mazzoleni, Carlos Fernando Francesconi, Guillerme Becker
Sander Mass eradication of Helicobacter pylori: feasible and advisable?
The Lancet. 2011. 378. 9790: 462-464
14. R.H. Hunt, S.d. Xiao, F. Megraud; R. Leon Barua, et al. Helicobacter pylori
in developing countries. World gastroenterology organisation Global
guideline WGO global guidelines. J. Gastrontestin liver Dis. 2011. 20(3).
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surveillance 2014.
16. Brack A. Diccionario Enciclopdico de plantas tiles del Per. Centro Bartolom de las
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17. Diana Flores Uso historico: camu camu. Perubiodiverso; Lima 2010.
18. W.M.N. do. Nascimento, O.D. Ribeiro, O.M. Rodrigues Junior, J.E.U. de
Carvalho. Fisiologia de la germinacin en accesiones de Camu- camu, VIII
simposio internacional de recursos genticos de america latina y el caribe
SIRGEALC. 2011
19. Grupo comunidades. BIO4.2-B Ingenieria Proyecto Camu Camu-Augusto
Montes Loreto y Ucayali. 2009
20. Victor Sotero Solis, Luz Silva Doza, Dora Garcia de Sotero, Sixto Iman
Correa, Evaluacion de la actividad antioxidante de la pulpa, cascara y
semilla del fruto de camu camu. Rev Soc Quim Per. 2009 75(3)
21. Juan Edson Villanueva Tiburcio, Luis Alberto Condezo Hoyos, Eduardo
Ramirez Asquieri. Antocianinas, cido ascrbico, polifenoles totales y
actividad antioxidante de la cascara de camu camu (Myrciaria dubia
(H.B.K) McVaugh. Cienc. Tecnol. Aliment. Campinas 2010 30(supl 1). 151-
160

[Escriba texto] Pgina 10

22. Zanatta CF et al. Determination of Anthocyanins from Camu-camu
(Myrciaria dubia) by HPLC-PDA, HPLC-MS and NMR. Journal of Agricultor
and food Chemistry 2005, 49(11): 5165-70
23. Miranda M. metodos de analisis de drogas y extractos. Instituto de
farmacia y alimentos. Universidad Habana de Cuba. 2002
24. Castillo C. Claudia. Efecto inhibitorio in vitro de Myrciaria dubia camu-
camu sobre Staphylococcus aureus y Candida albicans. [Tesis]. Trujillo:
Universidad Nacional de Trujillo, Facultad de Medicina, 2013.

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