TINCIONES ESPECIALES USADAS EN CITOGENTICA

CARIOTIPO BANDAS C.

Resalta los centrmeros de cada cromosoma, tien la heterocromatina constitutiva que se

localiza normalmente cerca de los centrmeros.

CARIOTIPO BANDAS NOR.

Resalta las bandas NOR (Regiones Organizadoras de Ribosomas).

Marca los satlites y tallos de los cromosomas acrocntricos.

Los cromosomas de una clula humana en divisin pueden analizarse fcilmente en
glbulos blancos, especialmente los linfocitos T, que se obtienen fcilmente de la
sangre. Las clulas de otros tejidos como la mdula sea o el lquido amnitico tambin
se pueden cultivar para la llevar a cabo un anlisis citogentico.

Tras varios das de cultivo celular, los cromosomas se fijan, se distribuyen en las
lminas portaobjetos para microscopio y se tien. Los mtodos de teido para los
anlisis de rutina permiten identificar a los cromosomas en forma individual. Las
diferentes patrones de bandas de cada cromosoma revelados por el teido permiten
analizar cada una de las estructuras cromosmicas.

La hibridacin fluorescente in situ (FISH, por sus siglas en ingls) es un proceso que
tie con colores vivos los cromosomas o partes de los cromosomas con molculas
fluorescentes para identificar anomalas cromosmicas (p. ej., inserciones,
eliminaciones, translocaciones y amplificaciones). El proceso FISH se usa con
regularidad para identificar las eliminaciones cromosmicas especficas asociadas con
sndromes peditricos como el sndrome de DiGeorge (la eliminacin o prdida de parte
del cromosoma 22, tambin denominada del22) y algunos tipos de cncer como la
leucemia mielgena crnica (la translocacin de los cromosomas 9 y 22).

Pruebas citogenticas
La caracterizacin de mutaciones en el nivel
cromosmico. Esto permite brindar apoyo al diagnstico
clnico y pronosticar o confirmar anomalas para facilitar
un mejor seguimiento y tratamiento del paciente.

Los anlisis cromosmicos incluyen:

1. Anlisis de cromosomas
sanguneos: Recomendado para parejas con prdidas
recurrentes, padres de un nio con cromosoma
defectuoso, evaluacin de retraso mental, evaluacin de
las causas de la infertilidad o seguimiento de un
cromosoma defectuoso a traves de generaciones en una
familia.

2. Citogentica del cncer: Anlisis recomedado para

la identificacin del cromosoma Filadelfia y, adems ,
otros marcadores genticos asociados con leucemias,
linfomas y otros tipos de cncer.
3. Anlisis cromosmico de productos de
concepcin: Se realizan estudios enfocados en tejidos
que se obtienen luego de la terminacin espontnea o
electiva del embarazo, muerte fetal o muerte perinatal.

4. Anlisis FISH: Anlisis recomendado para determinar

microdeleciones, duplicaciones, translocaciones, entre
otras mutaciones, responsables de algunas enfermedades
genticas, incluyendo el cncer.
http://www.revistabioanalisis.com/arxius/notas/nota2_24.pdf
http://es.slideshare.net/dyleonardoms/citogentica-clnica}
http://es.slideshare.net/gatitamony/citogenetica

La Leucemia Mieloide Crnica (LMC) es el crecimiento rpido de clulas

inmaduras que producen un cierto tipo de glbulo blanco presentes en la
mdula sea, la sangre y otros tejidos corporales. Suele ocurre casi siempre en
adultos de mediana edad y en nios, donde generalmente suele estar asociada
con una anomala cromosmica llamada cromosoma Filadelfia.

Las pruebas citogenticas son de gran utilidad ya que le aportan al profesional

ms informacin sobre la Leucemia Mieloide Crnica que unas simples pruebas
hematolgicas. Esto es de gran relevancia ya que en ellas se examina la
presencia o no del cromosoma Filadelfia, cambio gentico que causa la
patologa. La finalidad de estas pruebas es confirmar un diagnstico de LMC,
examinar las clulas y los cromosomas en busca de determinados cambios y
caractersticas anmalas, determinar en qu fase de la LMC se encuentra el
paciente y ayudar al mdico a preparar un tratamiento eficaz.

Existen dos tipos de pruebas citogenticas:

Pruebas citogenticas convencionales: a partir de una muestra de

mdula sea o de sangre, lo que se hace es cultivas las clulas y cuando los
cromosomas se individualizan, un especialista en citogentica los puede
examinar.

FISH (Fluorescence In Situ Hybridization): se trata de una prueba mucho

ms sensible a la hora de analizar muestras de sangre o mdula sea ya
 que usa sondas de DNA marcadas para detectar genes o anomalas
cromosmicas, cuando estas sondas se unen a sus zonas especficas la
fluorescencia puede ser vista a travs de un microscopio de fluorescencia.
Gracias a ella, se 0puede incluso llegar a detectar el gen BCR-ABL anmalo
en pacientes en los que no se observan indicios del cromosoma Filadelfia en
las pruebas citogenticas convencionales

Hibridacin por fluorescencia in situ[

Clulas de interfase positivas para una reordenacin de t(9;22).

Hibridacin por fluorescencia in situ significa utilizar sondas marcadas por fluorescencia
para hibridar preparaciones citogenticas de clulas.
Adems de en las preparaciones estndar, la tcnica FISH tambin se puede utilizar en:
Preparacin de muestras
La muestra se trata con una solucin de sal que normalmente
consiste en 2X SSC (sal, citrato de sodio). Despus las
muestras se deshidratan en etanol, y se aade la mezcla de
sondas. La muestra de ADN y la sonda de ADN se
codesnaturalizan por calor y dejando un plazo de al menos 4
horas para la reasociacin. Tras esto, las muestras se lavan
para eliminar el exceso de sondas que no se hayan unido, y
se contratie con 4',6-Diamidino-2-fenylindol (DAPI) o propidio
yodado.
Anlisis[editar]
El anlisis de especmenes de FISH se hace con
microscopios de fluorescencia y los realizan laboratorios
clnicos especializados en citogentica (CLSp(CG)). Para
oncologa en general se apuntan un gran nmero de clulas
interfsicas en orden para descartar bajos niveles de
enfermedades residuales, normalmente entre 200 y 1000
clulas se contabilizan y apuntan. Para problemas congnitos,
se emplean habitualmente unas 20 clulas metafsicas.

Otras tcnicas
Ya hemos mencionado tcnicas de uso habitual en anlisis
citogentico, pero haciendo un resumen de todas ellas y
dividindolas en grupos segn los campos a los que
pertenecen, tenemos:
 Anlisis citogentico: aqu podemos incluir tcnicas como
bandeado G, FISH, CGH (hibridacin genmica comparada)o
el cariotipo multicolor (SKY-FISH y M-FISH). Estas ltimas del
cariotipo multicolor son muy recientes y consisten en marcar
el material gentico de cada cromosoma con uno o varios
fluorocromos, hacindolos as diferenciables. El espectro de
emisin de cada uno es nico y as obtenemos cromosomas
de diversos colores.
Anlisis molecular: la tcnica ms destacable en este caso
es la PCR (reaccin en cadena de la polimerasa). Esta
tcnica se caracteriza por su gran aplicabilidad dado que
amplifica secuencias especficas de ADN o ARN, y multiplica
por ms de 100 el nmero de copias que se puedan obtener
de un fragmento de ADN en concreto, algo muy ventajoso
para cualquier estudio que se realice.

Citogentica molecular[editar]
Consiste en la combinacin de biologa molecular y
citogentica. Por lo general, esto incluye la utilizacin de una
serie de tcnicas del estilo de hibridacin por fluorescencia in
situ (FISH), en la cual las muestras de ADN estn marcadas
con diferentes colorantes que emiten fluorescencia para as
poder visualizar mejor las regiones especficas del genoma
que se quiera. La FISH tambin puede emplearse para
observar directamente los cromosomas metafsicos o los
ncleos interfsicos. A parte, se puede tomar un mtodo
indirecto en el que el genoma completo es evaluado en
cuanto a cambios en el nmero de copias utilizando un
cariotipo virtual. Los cariotipos virtuales se generan a partir de
matrices compuestas de miles de millones de muestras, y se
usan herramientas computacionales con el fin de hacer una
simulacin por ordenador del genoma.

La FISH es una tecnologa que utiliza sondas de DNA

marcadas con un fluorforo para detectar o confirmar
anomalas gnicas o cromosmicas que generalmente estn
ms all de la capacidad de resolucin de la citogentica de
rutina. En primer lugar, la muestra de DNA (cromosomas
metafsicos o ncleos en interfase) se desnaturaliza,
proceso que separa las hebras complementarias de la
estructura bicatenaria en doble hlice del DNA. A la muestra
desnaturalizada se le aade entonces la sonda de inters, que
se asociar al DNA de la muestra en el sitio diana, en el
proceso denominado hibridacin, donde se vuelve a formar
una doble hlice. La sonda est unida covalentemente
(marcada) con un fluorforo, que emite una seal observable
mediante un microscopio de fluorescencia; as la muestra de
DNA se puede clasificar segn la presencia o ausencia de la
seal, lo que desvela la presencia o ausencia de la secuencia
diana en el DNA cromosmico.

FISH de metafase

La FISH puede usarse sobre clulas en metafase para

detectar microdeleciones especficas ms all de la capacidad
de resolucin de la citogentica de rutina, o para identificar
material extra de origen desconocido. Puede tambin ser de
ayuda en casos donde es difcil determinar mediante la
citogentica de rutina si un cromosoma tiene una delecin
simple o si est implicado en una reorganizacin sutil o
compleja. Adems, la FISH de metafase puede detectar
algunos de los reordenamientos especficos que se observan
en ciertos tipos de cncer.

El nmero de sndromes de microdelecin diagnosticados

por FISH est aumentando con rapidez. La sensibilidad de
estos ensayos es en todos los casos mejor que la de la
citogentica de rutina, pero depende del sndrome en
concreto. En algunos, la sonda es especfica para el gen
defectuoso, como en el sndrome de Williams, donde el 96%
de los pacientes con diagnstico confirmado poseen una
delecin en el gen de la elastina. En otros sndromes como el
de Prader-Willi/Angelman, la etiologa es heterognea y las
microdeleciones slo existen en una parte de los casos
(60%).

Algunos sndromes de microdelecin diagnosticables

mediante FISH

Sndrome del
Sndrome de Kallman
maullido (cri-du-chat)
Sndrome de Miller-
Sndrome de Williams
Dieker
Sndrome de Smith- Sndrome de Wolf-
Magenis Hirschhorn
Deficiencia de esteroide- Sndrome de Prader-
sulfatasa Willi/Angelman
Sndrome de DiGeorge, velocardiofacial (VCFS), CATCH
 22 o de Shprintzen

FISH de interfase

La FISH se puede usar sobre clulas en interfase para

determinar el nmero de copias de uno o varios cromosomas,
as como para detectar algunas reorganizaciones especficas
que son caractersticas de ciertos tipos de cncer. La ventaja
principal de la FISH de interfase es que se puede realizar muy
rpidamente si es preciso, normalmente en 24 horas, porque
no requiere cultivo para la proliferacin de las clulas.

Un buen ejemplo es el ensayo de aneuploida, que se

realiza sobre clulas del fluido amnitico cuando hay una
fuerte indicacin clnica de una de las trisomas ms comunes.
Se desnaturalizan los ncleos de la muestra, se hibridan con
sondas especficas para los cromosomas 13, 18, 21, X e Y, y
los resultados estn disponibles habitualmente en 24 horas.
La prueba de aneuploida suele incluir tambin una
citogentica de rutina para confirmar los resultados o detectar
cualquier

anomala no detectada por la FISH de interfase.