2.

Lista De Sustancias Utilizadas Como Reveladoras Y Los Eluyentes

Utilizados En Cromatografia En Capa Fina

3. Explique El Funcionamiento Del Hplc

La cromatografa lquida de alta resolucin, es en definitiva una cromatografa

en fase lquida en columna a la cual se aplica una sobrepresin que permite
acelerar el proceso de separacin.
Su gran ventaja es la disminucin del tiempo de anlisis, aun incluso en
mezclas muy complejas (productos biolgicos). Adems, permiten el anlisis de
sustancias termolbiles que no podran ser manejadas por vaporizacin en un
cromatgrafo de gases (se descomponen al vaporizarse).
En esencia, la fase mvil lquida (constituida por un disolvente adecuado que
vehicula a la muestra) se bombea a travs de un sistema de separacin
compuesto por un prefiltro y una columna, esta ltima conteniendo la fase
estacionaria, a una elevada presin. Por su distinta interaccin entre las dos
fases, la muestra es retenida con variable intensidad, eluyendo separada de la
columna.
Por ejemplo para el analisis de hemoglobina, la muestra (sangre total-EDTA)
debe ser hemolizada previamente. Adems, el empleo de varios eluyentes
permite la separacin de las distintas fracciones de hemoglobina.
Dichas fracciones son concretamente HbA1a, HbA1b, HbF, HbA1c, HbAo, HbS
y HbC, y de ellas se pueden cuantificar porcentualmente la HbA1c, HbA1, HbF
y HbA2 por absorcin molecular visible mediante un espectrofotmetro
bicromtico (415 nm/500nm).
Esta metodologa puede emplear otras tcnicas de deteccin, adems de la
espectrofotomtrica, como son la refractomtrica, fluoromtrica, polarogrfica,
principalmente.
Tradicionalmente exista, en las columnas empleadas para HbA1c, una
interferencia en dicha fraccin en aquellos pacientes urmicos debida a la
presencia de Carbamil-hemoglobina.