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L'ENZYME
I. BUT ET PRINCIPE :
Le DNS (3,5- dinitrosalicylique) en prsence de sucres
rducteurs dveloppe un produit rduit de couleur brune en
milieu basique.
La technique du DNS est un moyen de dtermination de la
teneur en sucres rducteurs libres prsents dans les
chantillons doser.
II. RSUM :
I. MATRIEL ET RACTIFS :
a. MATRIEL :
Pour linvertase :
Pipette
Fioles jauges
Becher
Centrifugeuse
Mortier et pilon
L'ENZYME
bain marie 30c
Tubes numrots
Pipetes
a. RACTIFS
Pour linvertase :
La levure de boulangerie
Tolune/ thanol.
Ractif au DNS
I. METHODE :
a) MODE OPRATION :
Dans un mortier, suspendre 20 g de levure de boulangerie
dans 10 ml de tampon rfrigr de citrate de sodium 10
Mm (pH = 6).
COMPTE-RENDU DE TP EXTRACTION DE
L'ENZYME
On ajoute ensuite et en ordre les solutions rfrigres
suivantes :
10 ml du la mme tampon citrate.
0.5 ml du mlange de tolune/thanol.
Transvaser le contenu du mortier dans un tube
centrifuger. Boucher le tube et agiter vigoureusement au
vortex.
Centrifuger 15 min 3000 rpm .
Verser lentement le surnageant, lgrement ambr, dans
une fiole jauge 50 ml et complter avec du tampon citrate
Ph=6.
L'ENZYME
Enfin, on mesure la densit des tubes 0 5 laide dun
spectrophotomtre 540 nm.
b) RSULTA :
Afin de calculer le nombre de moles des sucres rducteurs, on
utilise la relation suivant :
n=
CV
Exemple pour le tube N1 : on c= 5 x 10^(-3) , v=0.1 ml
n=cv = 5 x 10^(-3) x 0.1 x 10^(-3) =0 .5 mol
on prsence les rsultats obtenu dans ce tableau :
Tube 0 1 2 3 4 5
Nombre 0 0.5 1 2 3 4
de
micromol
es
De sucre
rducteu
rs
DO 0 0,126 0,248 0 ,491 0,780 1,201
L'ENZYME
1.4
1.2
DO(N) 1.2
1
0.78
0.8
DO
0.6 0.49
0.4
0.25
0.2 0.13
0
0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5
L'ENZYME
L'ENZYME
multiples sont trs utilises dans les laboratoires partout dans
le monde.
Cette mthode est trs bnfique car elle nous permet de
raliser lexprience dans des conditions faciles en termes de
pH et de temprature, par elle ne peut tre utilise en cas de
dosage dun mlange complexe de glucides rducteurs.
II. CONCLUSION :
Aprs avoir chauff les tubes 100 C , on remarque que la
couleur des tues N6 et N7 qui contenait linvertase et du DNS
est jaune, ce qui prouve les deux solutions ne sont pas
contamins par des sucres rducteur et quils ont pures