P. G. B.

Primero BGrupo III

NDICE

Contenido..................................................................Pginas

ndice........................................................................................................3

Contenido del trabajo..............................................................................4

Cdigo gentico.......................................................................................7

Composicin molecular de los genes...........................................................8

Secuenciamiento del cdigo gentico.........................................................12

Ingenieria gentica..................................................................................15

Enzimas de restriccin...............................................................................15

Fusin celular.........................................................................................20

Trasplante nuclear y ampliacin gnica....................................................23

Bibliografa.............................................................................................29

1
CONTENIDO DEL TRABAJO

El siguiente trabajo comprende los temas ms importantes que se renen generalmente bajo la denominacin
de biologa molecular. En este campo se han verificado los progresos ms notables de los ltimos aos, sobre
los cuales reside el futuro de muchos aspectos de la biologa molecular. Estos estudios estan ntimamente
relacionados con la gentica molecular, que intenta explicar los fenmenos hereditarios como resultantes de la
funcin de componentes qumicos especficos localizados o formados en los cromosomas. Se ha demostrado,
as, que la informacin gentica es dictada inicialmente por la disposicin de las bases del cido
desoxirribonucleico (ADN), que luego es transcrita a las diferentes molculas del cido ribonucleico
(ARNmensajero, ARN de transferencia y ARN ribosmico) y, finalmente, traducida en diversas protenas y
enzimas especficas.

Primero analizaremos el modo en que la informacin gentica se acumula en el ADN. En el cdigo gentico
cada aminocido es especificado por un grupo de tres nucletidos (codn). El cdigo gentico es universal y
es compartido por todos los organismos vivientes, con muy pocas excepciones conocidas. Las cuatro
diferentes bases nitrogenadas dan lugar a los distintos codones, con estas cuatro bases se forman los diecisis
codones.

Veremos por encima la transcripcin, es decir, el proceso por el cual los genes son copiados en ARN para
producir ARNs mensajeros, los que a su vez codificarn las protenas. El ARN mensajero de los eucariotas es
generalmente producido en forma de grandes molculas precursoras, que luego son procesadas para dar lugar
a ARNs maduros ms cortos.

Por ltimo abarcar los problemas fundamentales de la diferenciacin celular . Esta parte adquiere una
importancia especial en biologa, puesto que en l se exponen los fundamentos recientes sobre la regulacin
de la accin gnica en clulas superiores. Los experimentos de control nuclear ejercido por el citoplasma
demuestran la influencia de ste sobre el ncleo e ilustran, adems, las continuas interrelaciones entre los dos
territorios celulares principales. En los organismos superiores los diversos tejidos tienen clulas especializadas
que expresan genes diferentes. Se analizarn los posibles mecanismos por los cuales se establecen las
primeras diferencias entre las clulas embrionarias.

EL CDIGO GENTICO

Los conceptos de genotipo y fenotipo son bastante conocidos, pero no los son tanto los mecanismos por los
cuales el genotipo se expresa en el fenotipo. Ahora analizaremos la va molecular por medio de la cual un gen
puede producir cambios fenotpicos como los observados por Mendel en sus experimentos con las arvejas.

Se sabe actualmente que el cido desoxirribonucleico (ADN) es el material gentico de las clulas: es decir,
la molcula que lleva la informacin en forma codificada de un molcula a otra y de las clulas parentales a
las filiales. La expresin de un gen se hace mediante su copia en cido ribonucleico (ARN), que a su vez
dirige la sntesis de las protenas especficas, las cuales son la ltima etapa de la informacin gentica. El
ARN representa el material gentico en ciertos virus, los que contienen ARN en vez de ADN. Estos conceptos
fueron resumidos por Crick en la secuencia, que se considera como el dogma central de la biologa
molecular:

El flujo de la informacin presenta, pues, tres etapas:

1.Replicacin de la molcula de ADN y , por lo tanto de la

informacin gentica.

2.Trascripcin de la informacin en molculas de ARN.

2
3.Traduccin de la informacin en protenas ( y enzimas) de una

clula.

Se debe recordar que transcripcin se usa como sinnimo de sntesis

de ARN y traduccin como equivalente de sntesis de protenas.

Como sabemos puede existir una inversin en este diagrama. En los virus que contienen ARN, la
transcripcin puede revertirse por la accin de la transcriptasa invertida, (ARNADN). En cambio, la
traduccin de ARN en protenas es unidireccional y no puede ser invertida. El mecanismo bsico por el cual
se expresa la informacin gentica fue descubierto inicialmente en organismos simples, como

bacterias y virus. El ms usado fue la Escherichia Coli, una bacteria que vive en el intestino del hombre. Se
sabe actualmente que los mismos principios genticos operan en Escherichia Coli y en los animales y plantas
superiores.

Composicin molecular de los genes

Mucho despus que Mendel descubriera que los genes se heredaran en forma de factores separados, las
observaciones citogenticas indicaron que el material gentico estaba localizado en los cromosomas. En 1924,
Feulgen desarroll la conocida reaccin histoqumica y demostr que los cromosomas contienen ADN. Sin
embargo, por mucho tiempo se pens que el material gentico debera ser una protena nuclear. Esto se debi
al hecho de que, teniendo los cidos nucleicos slo cuatro nucletidos, parecan demasiado simples como para
codificar la gran cantidad de protenas.

Los estudios citofotomtricos demostraron que los ncleos contenan una cantidad constante de ADN y esto
llev a pensar en el posible papel del ADN en la herencia. Para entonces, sin embargo, ya se haba demostrado
en microorganismos que el ADN era, en realidad, el material gentico.

En 1928, Griffith encontr que una variedad no patgena de neumococo poda transformarse en una variedad
virulenta, si se inyectaba en ratones juntamente con neumococos patgenos muertos por el calor. Avery y
colaboradores, en 1944, purificaron el factor de transformacin y demostraron que el ADN aislado del
neumococo patgeno era el causante de la transformacin.

En la actualidad se conocen los fenmenos moleculares de la transformacin del neumococo. Se observa que
el ADN liberado de una bacteria es tomado por otra y se recombina con el cromosoma de la clula husped.
En el experimento de Avery, el ADN transferido produce la sntesis del polisacrido de la cpsula, que lo
vuelve virulento.

La capacidad del ADN de transferible de una bacteria a otra es un fenmeno esencial en gentica, ya que hace
posible estudiar la frecuencia de recombinaciones entre diversas mutaciones y construir mapas genticos. La
transformacin permite tambin la moderna tecnologa de la ingeniera gentica por la cual fragmentos
forneos de ADN se unen a plsmados y se incorporan a E. coli.

En la transduccin, fragmentos de ADN se incorporan a un bacterifago y luego son introducidos, junto con
el ADN viral, dentro de la bacteria. En la conjugacin se aparean y recombinan dos bacterias de sexo
diferente. El anlisis de estos y otros mecanismos de recombinacin es empleado extensamente en gentica
molecular, y ha permitido confeccionar mapas genticos muy detallados de los cromosomas bacterianos.

La unidad hereditaria que contiene la informacin para codificar un aminocido es el codn, que est formado
por tres nucletidos (triplete). Esta informacin se transcribe en el ARN mensajero (ARNm), que tienen una

3
secuencia de bases complementarias a la del ADN. Tanto el ADN como el ARNm poseen solo 4 bases
diferentes, mientras que las protenas contienen 20 aminocidos distintos.

MENSAJEROS ARTIFICIALES

El experimento fundamental para resolver el cdigo gentico fue realizado por Nirenberg y Mathei, en 1961.
Estos autores descubrieron que, utilizando polirribonucletidos sintticos como ARNs mensajeros, era posible
estimular la incorporacin de aminocidos en un sistema libre de clulas. El primer ARN utilizado fue el
cido poliuridlico (poli U), que dio como resultado la sntesis de polifenilalanina. Se pudo concluir as que el
codn UUU era capaz de codificar la fenilalanina.

El sistema libre de clulas utilizado fue un extracto de E. coli, en el que las bacterias se rompieron y se saco la
pared celular por centrifugacin.

Este extracto contena ribosomas, ARNt, las enzimas aminoacilsintetasas y otros factores requeridos para la
sntesis, como aminocidos radiactivos, ATP, GTP y el ARNm exgeno ( los ARNm endogenos de la E. coli
son de vida muy corta, se degradan luego de una preincubacin del extracto a 37 C por pocos minutos ).
Adems del poli U, se usaron otros homopolmeros como el poli A ( AAA ), que codific lisina y el poli C (
CCC ) que dio prolina.

El uso de ARNs sintticos y de composicin conocida fue posible gracias al descubrimiento previo de Ochoa
de la enzima polinucletido fosforilasa, que polimeriza nucletidos difosfatos y produce ARNs artificiales,
cuya composicin depende de la proporcin de los distintos nucletidos utilizados.

In vivo, la polinucleotido fosforilasa funciona como una enzima que degrada al ARN polimerasa que usa
nuclesidos trifosfatos como sustrato y requiere ADN como molde ( templado ).

El flujo de la informacin gentica es de la siguiente forma:

La traduccin es unidireccional, pero la transcripcin puede ser invertida (ARN > ADN) por intermedio de
la trascriptasa invertida. La informacin contenida en el ADN y ARN se basa en los 4 nucleotidos y la de
protenas, en los 20 aminocidos, y las clulas son capaces de traducir el cdigo de 4 letras en el de 20.

Los experimentos de Avery con neumococos dieron la primera demostracin de que el ADN es la molcula
que contiene la informacin. Esta puede producir trasformacin de una cepa de neumococo no virulenta.
Tambin es posible incorporar en bacterias trozos de ADN por medio de plsmidos, por trasduccin y
conjugacin.

La hiptesis de un gen, una enzima se representa mejor por la de un gen, una cadena polipeptdica, y esto
puede ilustrarse con las enfermedades hereditarias conocidas como errores del metabolismo. Por ejemplo, la
fenilcetonuria, el albinismo, la galactosemia y el cretinismo son producidos por la ausencia de una de las
protenas (enzima). En la hemoglobina, el cambio de uno solo de los aminocidos puede producir la anemia
falciforme.

El cdigo se lee en grupos de tres nucletidos. Las unidades de informacin son los codones ( tripletes ) que
codifican los aminocidos. El cdigo gentico consiste en 43 = 64 codones, y la longitud del gen est
relacionada con el nmero de aminocidos en la protena ( por ejemplo; 1500 nucletidos o 500 codones para
500 aminocidos ).

El cdigo del ADN se transcribe en molculas complementarias de ARN a partir de una de sus cadenas. La
lectura del cdigo se hace en los ribosomas por medio de una molcula que sirve de adaptador. Este es el
ARN de transferencia que lleva el aminocido.

4
El cdigo gentico fue descifrado mediante el uso de ARNms sintticos de un solo nucletido ( por ejemplo,
polirribouridina ). Tambin se usaron polinucletidos con dos o tres tipos de bases y trinucletidos de
composicin conocida, as como polirribonucletidos con dobletes o tripletes alternados.

De los 64 codones, 3 representan seales de terminacin y 61 codifican los 20 aminocidos. Hay por lo tanto
tripletes sinnimos. Dado que el nmero de ARNts que llevan los anticodones y los aminocidos son menos
de 61, se puede explicar la discrepancia por el movimiento ( wobble ) de la tercera base del anticodn para
aparearse con ms de una base.

El codn inicial es el AUG que codifica la Nformilmetionina en los procariontes. Los codones de
terminacin o sin sentido con UAA, UAG y UGA. El cdigo gentico es universal; es decir, hay un solo
cdigo para todos los organismos vivientes.

SECUENCIAMIENTO DEL ADN Y EL CDIGO GENTICO

El cdigo genrico puede ser tambin descifrado comparando la secuencia de aminocidos de una protena
con la secuencia de nucletidos del gen que la codifica. En los ltimos aos se han desarrollado mtodos que
permiten el rpido secuenciamiento del ADN, lo que ha producido una verdadera revolucin en el mundo de
la biologa molecular. Por estos mtodos se ha podido conocer la secuencia completa del ADN del
bacterifago X 17415, virus que infecta a la E. coli y del SV 4016,17, que ataca a las clulas del mono.

Esto ha llevado a confirmar el codigo gentico y a establecer que todos los codones son usados in vivo.
Adems se obtuvieron resultados inesperados sobre la organizacin de los genes.

CONFIRMACIN DEL CODIGO GENTICO.

Haber descifrado la secuencia del ADN del X y del SV 40, as como la secuencia de algunas protenas, ha
permitido una hermosa confirmacin del cdigo gentico. Se muestran los diferentes codones que usan estos
virus, y de su lectura se puede concluir que los 61 codones son empleados in vivo para codificar los
aminocidos. Aunque todos ellos se utilizan, algunos codones son preferidos. Por ejemplo, el X 174 prefiere
codones con U en la tercera posicin, lo que probablemente refleja el hecho de que el ADN es rico en T.

SECUENCIACIN DEL CODIGO GENTICO.

En la actualidad hay mtodos que permiten el rpido secuenciamiento del ADN, lo que ha generado una nueva
revolucin en biologa molecular. En ste se producen fragmentos de ADN de distinta longitud que empiezan
en puntos fijos y terminan en nucletidos especficos. La lectura se hace en geles de poliacrilamida que
separan los fragmentos de ADN por masa. Con estos mtodos se pudo establecer la secuencia completa del
X 174 y del SV 40.

El ADN del C 174 contiene 5375 nucleotidos, pero 6000 nucletidos hubieran sido necesarios para codificar
las 10 protenas que produce este virus. La discrepancia se explica porque hay superposicin de ciertos genes
y, en consecuencia, algunos segmentos de ADN pueden codificar dos secuencias de aminocidos utilizando
un encuadre diferente de los codones. El gen K del X 174 se superpone con los genes A y C y la secuencia
de nucletidos se lee en las tres posibles fases de traduccin del mensaje.

El conocimiento de la secuencia del ADN en X 174 y SV 40 y de la secuencia de aminocidos de algunas de

las protenas ha permitido una hermosa confirmacin del cdigo gentico. Se encontr que los 61 codones se
usan in vivo, aunque algunos son preferidos.

INGENIERA GENTICA.

5
ENZIMAS DE RESTRICCIN.

Los estudios antes mencionados en los virus X 174 y SV 40 fueron posibles porque sus cromosomas son
muy pequeos y se pueden obtener en forma pura. En cambio, un cromosoma eucaritico contiene una
molcula de ADN muy larga y por lo tanto, mucho ms difcil de estudiar. Este problema pudo ser
solucionado mediante las tcnicas llamadas de ingeniera gentica, que permiten cortar segmentos breves de
ADN y unirlos a plsmidos, que son cromosomas bacterianos muy pequeos. Luego se puede lograr la
replicacin de stos en E. coli. Aunque la ingeniera gentica es un problema esencialmente tecnolgico, se la
debe mencionar aqu por su amplio uso actual y por su amplio uso actual y por las posibles aplicaciones en la
industria y la medicina para la produccin en gran escala de valiosas protenas.

RECONOCIMINTO DE SECUENCIAS ESPECFICAS DEL ADN.

La ingeniera gentica se basa en el uso de endonucleasas de restriccin, enzimas que reconocen secuencias
especificas de nucletidos y cortan el ADN. Hay dos clases principales. La clase I es de enzimas que
reconocen una secuencia especfica, pero que cortan el ADN en sitios especficos, los cuales pueden estar
varios nucletidos ms lejos. Por tal motivo estas endonucleasas no son tiles en ingeniera gentica. En
cambio, las de clase II constituyen una especie de bistur molecular que corta el ADN en sitios especficos y
resultan de mucha utilidad. Hasta el momento se conocen unas 80 enzimas de la clase II.

La denominacin de las diversas endonucleasas de restriccin procede del microorganismo de donde fue
aislada. Por ejemplo, Eco RI es una enzima de E. coli que contiene el plsmido RI ( ste produce resistencia a
drogas ). Las enzimas de restriccin generalmente reconocen una secuencia de 4 a 6 nucletidos.

Las que reconocen 4 nucleotidos producen fragmentos de ADN ms cortos ( unos 250 pares de bases ); los
que reconocen 6 fueron fragmentos ms largos ( alrededor de 4000 pares de bases ). Una caracterstica
importante de estas secuencias es que son simtricas. Por ejemplo:

5' GAA TTC 3'

3' CTT AAG 5'

Se observa que hay un eje de simetra a partir del cual la secuencia se lee lo mismo en ambas cadenas en la
direccin 5' > 3'. Algunas enzimas cortan en el medio y producen un corte neto. En otras el corte hace
posible separar varios nucletidos, lo que permite producir segmentos de ADN de una sola cadena, que
pueden aparearse entre s. Estos extremos, llamados "pegajosos" ( sticky ), son susceptibles de unirse a
cualquier otro fragmento de ADN que hubiese sido cortado por la misma enzima, lo que constituye un
instrumento ideal para la ingeniera gentica.

La mayora de las bacterias tienen endonucleasas de restriccin cuya principal funcin es protegerlas contra
cualquier ADN forneo. Si, por ejemplo, el ADN de la bacteria est naturalmente protegido porque hay
enzimas que lo modifican y lo metilan precisamente en los sitios donde las endonucleasas podran actuar,
hacindolo invulnerable.

El fenmeno de restriccinmodificacin fue descubierto siguiendo el comportamiento de dos cepas de E.

coli frente a la infeccin por bacterifagos. Se encontr que el bacterifago lambda, que crece en E. coli K12,
infecta poco al E. coli B, y viceversa.

Se sabe ahora que el ADN de ambas cepas se metila en sitios diferentes. El descubrimiento de este fenmeno
aparentemente raro de la restriccin al crecimiento de esos bacterifagos llev al descubrimiento de las
enzimas de restriccin, y a una verdadera revolucin en la biologa. Este es un buen ejemplo de que los
efectos benficos de la investigacin cientfica no pueden predecirse de antemano.

6
LOS GENES EUCARITICOS: INTRODUCCIN EN PLSMIDOS Y CLONACIN EN E. COLI.

Las bacterias tienen a veces un pequeo ADN circular el plsmido que se replica en forma autnoma.
Algunos de los plsmidos mejor conocidos son los factores de resistencia a los antibiticos (factores R). En
1973 se pudo demostrar que un fragmento de ADN incorporado in vitro en un plsmido (con ayuda de
endonucleasas de restriccin) poda introducirse en una bacteria y multiplicarse.

El plsmido circular se corta en un solo sitio con una endonucleasa de restriccin. El ADN eucaritico se
corta con la misma enzima, lo que genera terminaciones "pegajosas". Luego ambos ADN se pegan por esos
terminales que tienen bases complementarias y se completa la soldadura con la enzima ADN ligasa. El
plsmido recombinante es luego introducido en E. coli con la simple maniobra de poner a las clulas en una
solucin de cloruro de calcio, que las hace permeables.

Despus se seleccionan las bacterias que llevan el plsmido por el uso de antibiticos. As, si un plsmido
lleva el gen de la resistencia a la tetraciclina, en presencia de este antibitico mueren todas las bacterias que
no lo poseen. Una vez que se obtiene una colonia de E. coli se pueden hacer millones de copias del ADN
eucaritico incorporado en el plsmido. Como todas estas copias provienen de una sola molcula, el
procedimiento se denomina de genes clonados.

Adems de los plsmidos, se ha usado tambin el bacterifago lambda para propagar los genes de E. coli.

La ingeniera gentica abre la posibilidad de usar bacterias para producir protenas de importancia mdica,
como insulina y hormona de crecimiento humana. Otra posibilidad es la de introducir genes fijadores de
nitrgeno en las bacterias que viven en las races de plantas no leguminosas, eliminando as el uso de
fertillizantes nitrogenados.

Hasta ahora se han clonado muchos genes eucariticos en E. coli, pero las protenas producidas no parecen
haberse expresado en una forma correcta. Esto se debe, seguramente, a la necesidad de promotores
procariticos ( es decir, los sitios donde se inicia la accin de la ARN polimerasa ), as como de sitios de
unin para los ribosomas. Esta problema puede resolverse clonando los genes eucariticos dentro de genes
bacterianos bien caracterizados. Por ejemplo, se ha podido insertar el gen de la hormona somatostina dentro
del gen de la galactosidasa, que es parte del opern lactosa.

De esa manera se pudo obtener una hormona biolgicamente activa usando al promotor y el sitio de unin al
ribosoma del gen de la galactosidasa. Tambin ha sido posible clonar genes dentro del gen que codifica la
penicilinasa, ya que esta enzima es secretada fuera de la clula. As se pudo insertar el gen de la insulina y
obtener una protena que tiene a la vez la secuencia de la insulina y la penicilinasa. Luego se purific la
insulina directamente a partir del medio.

La ingeniera gentica es muy valiosa para comprender cmo son controlados los genes en los organismos
eucariticos. En los ovocitos de Xenopus es posible inyectar genes en el ncleo y obtener su transcripcin y
tambin la traduccin en las protenas.

INGENIERA GENTICA

Las tcnicas de ingeniera gentica estn basadas en el uso de endonucleasas de restriccin de origen
bacteriano. Estas enzimas reconocen secuencias especficas de nucletidos en el ADN y lo cortan en esos
sitios. Algunas endonucleasas producen extremos "pegajosos" que se unen a segmentos de ADN eucaritico
cortados con la misma enzima. La funcin normal de la endonucleasa bacteriana es la de proteger a la bacteria
de la invasin de ADN forneo. El ADN resiste la accin de las enzimas por un proceso de
restriccinmodificacin en el cual se produce la metilacin de las secuencias especficas del ADN.

7
Las tcnicas de ingeniera gentica permiten el clonado de genes mendiante su insercin en plsmidos o en el
bacterifago lambda.

Los plsmidos son pequeos crculos de ADN que se replican el forma autnoma, muchos de los cuales llevan
genes que causan la resistencia a los antibiticos. El plsmido, que lleva el gen eucaritico, se introduce en la
E. coli y la bacteria es seleccionada por su resistencia al antibitico. As se pueden obtener colonias en las
cuales el gen se ha copiado millones de veces. Estas tcnicas abren la posibilidad de la produccin de
protenas de importancia mdica ( como insulina y hormona de crecimiento humanas). Sin embargo, la
expresin de genes eucariticos en E. coli se dificulta por la necesidad de tener promotores y sitios de unin
ribosmica procariticos. Tambin se pueden expresar genes clonados inyectndolos en el ncleo de ovocitos.

FUSIN CELULAR

Los anticuerpos son molculas de protena capaces de reconecer y unirse especficamente a un antgeno
extrao. Cuando un animal es inyectado con una molcula que el organismo reconoce como ajena (una
protena o polisacrido complejo), al cabo de varios das se producen anticuerpos especficos que pueden
interaccionar con ese antgeno. En el suero sanguneo del animal as inmunizado aparecen diversos
anticuerpos que reconocen distintas partes de una molcula (o varias molculas, si es inyectada ms de una).

Los individuos de una misma especie pueden tener diferentes respuestas inmunolgicas, de manera que un
mismo antgeno es capaz de producir en cada uno un anticuerpo distinto. Este es un problema de gran
importancia en medicina porque, por ejemplo, el xito o fracaso de un transplante de rgano depender de si
el dador y el paciente que lo recibe presentan o no los mismos anticuerpos de histocompatibilidad, en la
superficie celular. Se comprende pues la necesidad de tener anticuerpos que puedan ser usados para el
diagnostico en forma exacta. En la actualidad, mediante la tcnica de fusin celular se han podido crear lneas
celulares que producen un slo tipo de anticuerpo y en cantidades ilimitadas.

Los anticuerpos son generados por los linfocitos, que, cuando los elaboran en gran cantidad, se transforman
en plasmocitos. Es fundamental que cada clula productora de anticuerpos da origen a un solo tipo de
anticuerpo.

Los linfocitos no se multiplican en cultivo de tejidos, pero C. Milstein desarroll una tcnica por la cual es
posible propagar indefinidamente una lnea celular, partiendo de una clula nica mediante la fusin con una
clula tumoral.

Vamos a ver como podemos obtener los llamados anticuerpos monoclonales. Al principio se inmuniza un
ratn con el antgeno deseado; luego se extraen los linfocitos del bazo y se los fusiona mediante el virus
Sendai a una linea celular del ratn derivada de plasmocitos tumorales (estos tumores se denominan mielomas
porque invaden la mdula sea). La clula del mieloma lleva una mutacin en el enzima
hipoxantinaguanina fosforiltransferasa por la cual es incapaz de crecer en medio de HAT, como ya
sabemos; en cambio, el hbrido resultante s puede hacerlo y los clones que secretan el anticuerpo deseado son
susceptibles de ser identificados y puestos a crecer.

La fusin con la clula tumoral vuelve inmortal al linfocito del bazo del ratn, que desde entonces crece
indefinidamente in vitro. Tambin pueden pueden ser implantados en ratones y ser mantenidos mediante
trasplantes seriados de los tumores. Como todas las clulas derivarn de un nico linfocito, los anticuerpos
que se producen sern monoclonales y de alta pureza.

Los anticuerpos monoclonales antivirales se usan para el diagnstico de algunas enfermedades virales o para
el tratamiento de la rabia. Otros anticuerpos se usan en bioqumica clnica y muy especialmente para clasificar
todos los antgenos humanos de histocompatibilidad.

8
Los anticuerpos monoclonales representan un adems un buen ejemplo de que no es posible predecir de
antemano las aplicaciones prcticas de la ciencia. El estudio de la fusin celular, que al principio se desarroll
como un captulo especializado de la biologa celular para atacar el problema de las relaciones entre ncleo y
citoplasma, ha llegado a producir instrumentos inmunolgicos de gran importancia prctica para la
humanidad.

INTERACCIONES NUCLEOCITOPLASMTICAS.

El problema fundamental de la diferenciacin celular es el de dilucidar el mecanismo por el cual un huevo

aparentemente sin estructura da origen a un embrin con muchos tejidos especializados. La diferenciacin
celular es un cambio persistente que implica la sntesis preferente de protenas especficas ( por ejemplo ,
hemoglobina, gama globulina ) por clulas especializadas ( eritrocitos, plasmocitos ). Estos cambios implican
un complejo mecanismo de regulacin, que es distinto del que ocurre en las bacterias. La diferenciacin
celular puede ser inducida por estmulos, pero persiste luego en ausencia de stos. Hay un perodo de
determinacin en el cual la capacidad de diferenciarse est ya establecida. Este es el caso de los discos
imaginales de Drosophila, que solo se diferencian durante la metamorfosis de la larva y que cuando son
trasplantados en el adulto permanecen en un estado indiferenciado, pero determinado.

En las clulas eucariticas la interaccin nucleocitoplasma es continua. El alga Acetabularia es muy

apropiada porque el ncleo se halla en un extremo, el rizoide, que se puede cortar fcilmente. Diversos
experimentos demuestran que sustancias nucleares ( ARNms estables ) difunden en el citoplasma y controlan
la morfognesis del capuchn.

La fusin celular con el virus Sendai permite la produccin de heterocariones. Si se fusionan eritrocitos que
han dejado de sintetizar ARN y ADN con clulas HeLa, la sntesis de ARN puede reactivarse y hasta se puede
replicar el ADN. La reactivacin se debe probablemente a la entrada de protenas desde el citoplasma. Por
accin de la citocalasina B es posible obtener carioplastos y citoplastos, y luego reconstituir clulas por
fusin entre ncleos y citoplasmas de clulas diferentes.

Los huevos de ranas ( Xeropus ) son muy tiles, ya que se pueden trasplantar ncleos somticos diferentes. Si
se implantan en un ovocito en crecimiento, el metabolismo de ARN del ncleo implantado se activa. En los
huevos los ncleos pueden replicar el ADN. Por lo tanto, la sntesis de los cidos nucleicos depende del
citoplasma del husped.

El citoplasma del ovocito es capaz de reprogramar la expresin de los genes en los ncleos trasplantados,
como se demuestra inyectando ncleos de rin de Xeropus en ovocitos de Pleurodeles. Con estos
experimentos se estableci que la activacin y la inactivacin de los genes son selectivas.

MECANISMOS MOLECULARES DE LA DIFERENCIACIN CELULAR.

Veamos que las clulas especializadas contienen la misma clase y el mismo nmero de genes y que, por lo
tanto, las diferencias entre ellas son el resultado de la distinta velocidad de expresin de los genes.
Llegaremos a la conclusin de que la diferenciacin celular probablemente se controle a nivel de la
transcripcin.

El genoma permanece constante. Trasplante nuclear.

Una prueba rigurosa de que durante la diferenciacin embrionaria no hay prdida de informacin gentica
provino de los clsicos experimentos de trasplante nuclear de J.B. Gurdon.

Fueron irradiados huevos de Xenopus con luz ultravioleta para destruir el ncleo y luego se los inyect con
ncleos somticos. Se vio que los ncleos de una clula intestinal completamente diferenciada eran capaces de

9
mantener el desarrollo normal de ranas hasta la edad adulta, las cuales resultaron frtiles. Esto demuestra que
las clulas intestinales conservan todos los genes requeridos para completar el ciclo vital de una rana.
Adems, del mismo intestino de una rana se pueden obtener clones de gemelos idnticos.

Tambin se logr el desarrollo de renacuajos usando otros tejidos adultos, como clulas de la piel y linfocitos.
Todos estos resultados demostraron que los genes necesarios para codificar los diversos tejidos del embrin
no se hallaban inactivados en los ncleos dadores.

En clulas vegetales se lleg a la misma conclusin. Por ejemplo, se pudo conseguir una planta completa a
partir de una clula cultivada de la zanahoria.

La amplificacin gnica no implica la diferenciacin.

Otra posibilidad de que un gen pudiese activarse en forma diferencial sera si aumentara el nmero de copias.
Esto es lo que se denomina amplificacin gnica, y vimos lo que ocurre con los genes ribosmicos en los
ovocitos de anfibios e insectos. Por ejemplo, en Xenopus, los 900 genes ribosmicos (ncleo diploide) pueden
amplificarse hasta alcanzar 2.000.000 de copias, que se reparten en unos 1000 nuclolos del ovocito. Tenemos
el caso del ADN en ciertos puffs de los cromosomas politnicos de Rhyncosciara angelae.

Hay que tener en cuenta, sin embargo, que en ambos casos este ADN amplificando no se trasmite a las nuevas
generaciones puesto que las clulas de las glndulas salivares donde estn los cromosomas politnicos mueren
durante la metamorfosis y el ADNr del ovocito no pasa al embrin.

Otros genes que producen grandes cantidades de protena (por ejemplo, la globina de reticulocitos) se
encuentran, sin embargo, en una copia nica por genoma haploide en todos los tejidos. En otras palabras, un
solo par de genes activados pueden dar origen a toda la globina de un eritrocito (90 % de las protenas totales).
Por lo tanto, el fenmeno de amplificacin gnica no est muy extendido.

LA TRADUCCIN NO EXPLICA LA DIFERENCIACIN

Hemos visto que durante el desarrollo y en el adulto el genomio permanece constante. Por lo tanto, las
diferencias entre las diversas clulas solo puede explicarse sobre la base de la expresin diferencial de los
genes. Esto podria obtenerse por un cambio en la transcripcin (Sntesis y procesamiento de los ARNs) o en la
traduccin (sntesis de protenas). Otra posibilidad seria que existieran mecanismos por los cuales algunos
ARNs mensajeros que tradujeran en ciertas clulas, pero no en otras. Sin embargo los experimentos con
ARNms inyectados en ovocitos de xenopos permiten desechar esta posibilidad.

Se demuestra que si se inyecta ARNm de globina de conejo en un ovocito de xenopos, ste traduce en
globina. Se ha podido demostrar que gran nmero de ARNs mensajeros de origen animal y vegetal (ARNm
para inmunoglobina, tiroglobulina, interferon, colgeno, protenas del virus del mosaico de tabaco) se
traducen en los ovucitos. Por tanto, stos no tienen la posibilidad de excluir la traduccin de ningn ARNm.

El ARNm de globina es muy estable y puede continuar traducindose durante semanas. Esta traduccin es
muy eficiente, ya que cada molcula de ARNm puede llegar a dar 100.000 molculas de globina. Los ovocitos
traducen el ARNm en forma mucho ms eficiente que cualquier sistema libre de clulas y, por lo tanto, se han
utilizado ampliamente para experimentos con ARNm. Aunque en los homogeneizados de Xenopus hay
ribonucleasas que pueden degradar el ARNm, en el ovocito vivo ste no se degrada. Esto permite seguir la
traduccin ms fcilmente mediante el anlisis bioqumico.

Se podra argir que como el ovocito no es una clula especializada traduce los diversos ARNs mensajeros,
pero que esto no ocurrira en la clula especializada. Se inyecto ARNm de globina en huevos fecundados, que
llegaron a desarrollarse hasta el estadio de renacuajo. Luego fueron disecados en un fragmento axial (que

10
contiene msculos, sistema nervioso y notocordio) y en otra porcin que ocntiene muchos tejidos, incluso las
clulas productoras de elementos sanguneos. Con aminocidos marcados se pudo seguir la sntesis de globina
de conejo en ambos fragmentos.

A pesar de que el segmento axial carece de tejido hemopoytico, se encontr que poda sintetizar globina en la
misma proporcin que el resto del renacuajo. Esto demostr que las clulas deferenciadas (msculos,
neuronas, notocorda) son capaces tambin de traducir ARN heterlogo.

LA DIFERENCIACIN SE CONTROLA A NIVEL DE LA TRASCRIPCIN.

La posibilidad de que la expresin de los genes ste regulada a nivel de la sntesis de ARN fue avalada por
diversas evidencias. El ejemplo ms claro es el de los cromosomas politnicos, en los que la trascripcin se
manifiesta en forma de puffs.

Vimos que los puffs varan en los diversos tejidos y que se modifican por accin de la hormona ecdisona.

Los estudios de hibridizacin molecular demostraron que en una clula solo se expresa una fraccin de la
totalidad de los genes. Ademas, diferentes conjuntos de genes se transcriben en cada una de las clulas
especializadas.

Una parte de los genes que se trascriben son propios del tejido, pero hay otros que son compartidos y que
representan los genes que mantienen la estructura celular y que se necesitan para que la clula pueda
sobrevivir. Pertenecen a este grupo las protenas de membrana, las protenas ribosmicas y mitocondriales, las
enzimas glucolticas, etc... Los genes no compartidos son los que codifican las protenas de las clulas
especializadas; por ejemplo: hemoglobina en el eritrocito y ovoalbmina en el oviducto, queratina en la piel.

MECANISMOS DE DIFERENCIACIN CELULAR.

Durante la diferenciacin celular el genomio permanece constante, es decir que no hay perdida de informacin
gentica. Trasplantando un ncleo diploide de intestino en un huevo de Xenopus privado de su ncleo, se
puede tener el desarrollo normal de esta rana. Si el genomio permanece constante, la diferenciacin celular
debe corresponder a una exppresin diferencial de los genes (trascripcin o traduccin).

Los experimentos en los que se inyect ARNm en los ovocitos demuestran que ste puede ser teraducido
correctamente. A partir de un ARNm de globina llegan a formarse 100.000 moleculas de globina. Tambin
otros ARNs mensajeros de origen animal o vegetal pueden traducirse en el ovocito.

La sntesis de protena est sujeta a un control cuantitativo, pero no cualitativo. Por ejemplo, en los huevos de
erizo de mar la sntesis de protena aumenta 10 veces por la acumulacin de ARNs mensajeros.Que la
expresin gnica se regula a nivel de la trascripcin, se compueba en los cromosomas politnicos con la
aparicin de puffs especificos en distintos tejidos.

En cualquier clula solo 510 % de los genes estructurales se trascriben. Algunos de ellos son comunes a
todas las clulas y sirven para el mantenimiento de su estructura (por ejemplo: los que codifican protenas de
membranas, ribosomas, mitocondrias, etc...). Otros genes solo se activan en clulas diferenciadas (como loos
genes para la ovoalbmina, queratina, hemoglobina, etc...).

Por medio de la trascriptassa invertida se puede producir ADN complementario (ADNc) a partir del ARNm.
Luego el ADNc se usa para medir, por hibridizacin, la cantidad de un ARNm determinado. En estos genes,
aunque son nicos, hay un aumento grande de la velocidad de trascripcin.

El mecanismo que regula la trascripcin es poco conocido en los eucariontes, qunque algn progreso se ga

11
alcanzado mediante la inyeccin de ADN en el ncleo del ovocito. De esta manera, el ADN puede ser
trascrito y traducido correctamente.

En el huevo hay determinantes citoplasmticos que tienen localizaciones especiales. Al distribuirse en forma
desigual entre las clulas, pueden influir sobre la diferenciacin celular durante el desarrollo temprano del
embrin. En el curso de la ovognesis de los anfibios los ovocitos acumulan muchas molculas y organelas
que sern usadas en el desarrollo.

Entre las molculas se hallan los determinantes citoplsmicos, como el plasma germinal, que se localiza el
polo vegetativo e induce la formacin de clulas germinales.

En los adultos es posible que los mismos principios acten en la diferenciacin celular. Por ejemplo, si los
determinantes se dividen de manera desigual entre dos clulas, una se diferencia y la otra permanece en forma
blstica.

A medida que el desarrollo embrionario progresa, las interacciones celulares se vuelven ms importantes. Esto
es lo que sucede con la induccin del sistema nervioso por el notocordio, del cristalino por la vescula ptica,
etc.., lo que se debe a la difusin intercelular de sustancias. El caso del hongo Dictiostelium es muy
interesante, porque en l se ha identificado el AMPc como el mensajero que aporta una informacin
posicional. Este hace que las clulas aisladas puedan converger para formar un organismo multicelular.

Bibliografa

consultada

"Biologa Celular y Molecular" Pags. 433451 y 522539

De RobertisEd. El Ateneo 1981

"Biologa C.O.U." Pags. 395457 Vicente Dualde

Ed. Ecir1988

"Maravillas del Saber"Pags. 3949 Javier Snchez

Almazn Credsa1983

12