Sesin IV.

MTODOS ESPECTROSCPICOS.
Prof. Mara King.
 La absorcin de radiacin electromagntica provoca que las
partculas integrantes de un material (tomos, iones o molculas)
pasen del estado fundamental a uno o ms estados excitados de
superior energa.

La emisin de radiacin electromagntica se origina

cuando partculas excitadas (tomos, iones, molculas) se relajan a
niveles de menor contenido energtico, cediendo el exceso de
energa en forma de fotones.

La radiacin absorbida o emitida se puede caracterizar

adecuadamente mediante espectros.
 EN QU SE BASA LA ESPECTROSCOPA
ATMICA?
Es la absorcin, emisin y/o fluorescencia de radiacin,
electromagntica por las partculas atmicas.

QU REGIONES DEL ESPECTRO PROPORCIONAN DATOS

ATMICOS ESPECTRALES?

Regin del UV-Visible.

Regin de Rayos X.
 CMO SE OBTIENEN LOS ESPECTROS ATMICOS DEL
UV-VISIBLE?
Atomizando las muestras: las molculas constituyentes
se descomponen y se convierten en partculas gaseosas
elementales.
Los espectros obtenidos estn constituidos por una
cantidad limitada de lneas discretas de caractersticas
de cada elemento.
 CULES SON LAS VENTAJAS DE LOS MTODOS ANALTICOS
BASADOS EN LA ESPECTROSCOPA ATMICA?

Son especficos.
Amplio rango de aplicacin.
Excelente sensibilidad (ppb).
Rapidez y conveniencia.
Cmo obtenemos los espectros pticos atmicos?
Los componentes de la muestra deben convertirse en tomos o
iones en estado gaseoso, que pueden determinarse mediante
medios espectrales de emisin, absorcin, fluorescencia o masa:
ATOMIZACIN.
 Mtodos Instrumentales de Anlisis.
Estn basados en la medida de propiedades qumicas y
fsicas de los analitos con fines cualitativos y
cuantitativos.
La medida se realiza en un instrumento apropiado.
 Mtodos pticos de anlisis
Mtodos que miden alguna propiedad de la radiacin electromagntica
emitida por la materia o que interacciona con ella

Clasificacin
Mtodos espectroscpicos: Existe intercambio de energa entre la
radiacin electromagntica y la materia
Mtodos de absorcin: Miden la disminucin de la potencia de la
radiacin electromagntica debida a la absorcin que se produce en su
interaccin con el analito
Mtodos de emisin: Miden la radiacin electromagntica emitida
cuando el analito es excitado por energa trmica, elctrica o radiante
Mtodos no espectroscpicos: Se producen cambios en la direccin o
en las propiedades fsicas de la radiacin electromagntica:
Dispersin
Refraccin
Difraccin
Rotacin ptica
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 La radiacin electromagntica

La radiacin electromagntica es una forma de energa que

se transmite por el espacio a gran velocidad sin soporte de
materia.

La radiacin electromagntica puede describirse segn:

La teora ondulatoria: formada por ondas sinusoidales

La teora corpuscular: flujo de partculas o corpsculos

de energa llamados fotones

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 Teora ondulatoria . Parmetros ondulatorios
La radiacin electromagntica (REM) se representa como ondas
consistentes en campos elctricos y magnticos que estn en fase y que
oscilan sinusoidalmente de manera perpendicular entre s y respecto a la
direccin de propagacin
Parmetros ondulatorios
Campo elctrico y Longitud de onda

Amplitud A

La potencia P: es la energa del haz que llega

Campo magntico z Direccin x a un rea dada por segundo

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Teora corpuscular. Propiedades corpusculares de la radiacin electromagntica
La radiacin electromagntica es considerada como paquetes discretos de
energa llamados fotones o cuantos.
Dualidad onda-partcula:
Un fotn es una partcula de radiacin electromagntica con masa cero y energa
E proporcional a la frecuencia de la radiacin
La energa de un fotn: E = h
E = energa del cuanto de radiacin: Cal mol-1
= frecuencia de la radiacin : hertzio (Hz) = ciclos s-1
h = constante de Planck = 6,624 10-27 erg s
Velocidad de la luz : v = m = 10-6 m
Velocidad de la luz en el vaco: c = 3,00 1010 cm s-1 nm = 10-9 m
= 10-10 m
Energa de un fotn :E = h = h c /
Cuando aumenta, disminuye la energa y frecuencia del fotn
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 Espectro electromagntico

Abarca un intervalo muy amplio de

longitudes de onda o energas.

Segn su recibe diferentes

nombres.

La luz visible, que es la nica

perceptible por el ojo humano,
representa solamente una
pequea parte del espectro, desde
350-380 a 750-780 nm.

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 Absorcin de radiacin electromagntica

Absorcin: proceso por el cual una especie, en un medio

transparente, capta selectivamente ciertas frecuencias de la
radiacin electromagntica.
El fotn absorbido hace pasar a la especie de su estado
fundamental a un estado excitado de energa M*:
M + h M*
Tras un corto perodo de tiempo, aproximadamente 10-8 a 10-9 s,
se pierde la energa de excitacin, generalmente en forma de
calor, y la especie M vuelve a su estado fundamental:
M* M + calor
Los mtodos de absorcin tienen la ventaja de producir poca o
ninguna alteracin en el sistema estudiado.

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 Absorcin de radiacin electromagntica

Absorcin: proceso por el cual una especie, en un medio

transparente, capta selectivamente ciertas frecuencias de la
radiacin electromagntica.
El fotn absorbido hace pasar a la especie de su estado
fundamental a un estado excitado de energa M*:
M + h M*
Tras un corto perodo de tiempo, aproximadamente 10-8 a 10-9 s,
se pierde la energa de excitacin, generalmente en forma de
calor, y la especie M vuelve a su estado fundamental:
M* M + calor
Los mtodos de absorcin tienen la ventaja de producir poca o
ninguna alteracin en el sistema estudiado.

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 Fundamento de la Espectrofotometra de Absorcin UV-visible

Mtodo instrumental ptico basado en la medida directa de la

absorcin de radiacin electromagntica UV-Visible, por las
molculas del analito contenido en la muestra.

La regin ultravioleta comprende entre 10 y 400 nm y la

regin visible comprende entre 350 y 750 nm.

Las radiaciones UV y visible tienen en comn el hecho de

que la absorcin de ambas regiones por molculas, provoca
la excitacin de e- de enlace a niveles de E superiores.

Los picos de absorcin pueden correlacionarse con los tipos

de enlaces de la especie absorbente, base de su aplicacin
cualitativa
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 Fundamento de la Espectrofotometra de Absorcin UV-visible

Un analito molecular tiene la capacidad de absorber ciertas

longitudes de onda caractersticas de la radiacin
electromagntica UV-Visible.
En este proceso, la radiacin es transferida temporalmente a la
molcula y, como consecuencia, disminuye la intensidad de la
radiacin.

La aplicacin cuantitativa de la espectroscopa de absorcin

UV-Vis se basa en la medida, a una fija, de la A de una
disolucin del analito contenida en una cubeta transparente de
camino ptico b cm.

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 Fundamento de la Espectrofotometra de Absorcin UV-visible

Espectros de absorcin
Un espectro de absorcin es una
representacin grfica de la
absorbancia de un analito (o de otra
magnitud equivalente) en funcin de la

Absorbancia A
longitud de onda de la radiacin (o de
otro parmetro relacionado con la
energa de la radiacin utilizada).

El mximo de absorbancia obtenido max nm

en el espectro de absorcin de un
analito, nos dar la longitud de onda
que proporciona la mayor sensibilidad
posible, y por tanto ser la que se
utilizar en el anlisis
espectrofotomtrico de dicho analito.
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 Fundamento de la Espectrofotometra de Absorcin UV-visible

Teora del color

La sensacin de color se produce cuando disminuye
apreciablemente una o ms zonas de la regin visible.
Si el ojo recibe luz de todas las de la regin visible el efecto es
luz blanca.
El color aparente siempre es el color complementario del que ha
sido eliminado.
Los colores complementarios son tiles para predecir la de
absorcin de los compuestos coloreados: una disolucin
amarilla, absorber luz azul 450-480 nm, para analizarla
debemos usar luz con esta seleccionada con el monocromador
o bien usar un filtro azul, que transmite esta luz azul.
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 Fundamento de la Espectrofotometra de Absorcin UV-visible

complementario
(nm) Color absorbido (nm) Color observado
380-420 violeta 520 - 550 amarillo-verde
420 - 440 azul-violeta 550 - 580 amarillo
440 - 470 azul 580 - 620 anaranjado
470 - 500 verde-azul 620 - 680 rojo
500 - 520 verde 680 - 780 prpura
520 - 550 amarillo-verde 380 - 420 violeta
550 - 580 amarillo 420 - 440 azul-violeta
580 - 620 anaranjado 440 - 470 azul
620 - 680 rojo 470 - 500 verde-azul
680 - 780 prpura 500 - 520 verde
Una disolucin se observa de color azul cuando se ilumina con luz policromtica, porque absorbe
580-620 nm (anaranjado) y transmite o deja pasar 440-470 nm (azul)
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 3. Fundamento de la Espectrofotometra de Absorcin UV-
visible
Sus electrones ms exteriores o electrones de enlace
Especie pueden ser elevados a niveles de E ms altos al incidir
absorbente sobre ellas una radiacin electromagntica apropiada
Grupo atmico presente en una molcula que lleva
asociada una banda de absorcin electromagntica:
C=C; C=O; C=N.
Grupo
Especies con grupos funcionales con enlaces .
cromforo Grupos cromforos dobles y triples enlaces.
Bandas en el UV cercano y visible.
Etileno, carbonilo, ster, amida, nitro

Grupos que no producen por s mismos bandas de

Grupo absorcin, pero intensifican la de los grupos
auxocromo cromforos: C-Br; C-OH

Bandas de Responsables del color de muchos iones y compuestos de

campo ligando metales de transicin que poseen orbitales d y f
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Instrumentacin

Componentes bsicos de los espectrofotmetros

Fuente de Dispositivo de
Selector Cubeta Detector
energa lectura
de muestra
radiante

Muestra

Monocromador Detector
Fuente de
radiacin
Luz Luz
compuesta monocromtica I

I0 b

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5. Instrumentacin
Selector de
Caractersticas

longitud de onda de mxima transmisin

ancho de banda efectivo

Monocromadores de prisma
Filtros de corte
Monocromadores de red
Filtros de absorcin
Filtros de interferencia

Fotmetros Espectrofotmetros
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Instrumentacin

Cubetas

Caractersticas

Absorcin mnima a la longitud de onda de trabajo

Colocar con caras transparentes perpendiculares a la direccin del haz incidente

Slice Vidrio o plstico

Ultravioleta Visible

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Instrumentacin
Detectores

Su funcin es convertir la respuesta del instrumento en una seal medible.

Caractersticas

deben responder a un amplio rango de longitudes de onda

deben dar respuesta rpida
deben ser sensibles a bajos niveles de radiacin
deben producir seal elctrica fcilmente amplificable
la seal debe ser proporcional a la potencia radiante

Fototubos Fotomultiplicadores Fotodiodoarray

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Instrumentacin

Espectrofotmetros

Haz sencillo

Fuente de Sistema Cubeta de Registrador

radiacin selector de Fotodetector Amplificador o PC
muestra

Cubeta de
referencia

Doble haz
Cubeta de Fotocelda 1
muestra
Fuente de Sistema Amplificador Registrador
selector de diferencial o PC
radiacin
Cubeta de
Fotocelda 2
referencia
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Aplicaciones analticas

La espectrofotometra de absorcin molecular se puede aplicar tanto al anlisis

cualititativo como cuantitativo.

Anlisis cualitativo: los espectros de la muestra se comparan con los de los

correspondientes estndares, con el fin de identificar las bandas de absorcin
coincidentes. Este tipo de anlisis es ms frecuente en UV e IR para identificar
compuestos orgnicos y ms rara vez se utiliza en Vis.

Anlisis cuantitativo: est basado en la ley de Lambert-Beer en el intervalo de

concentraciones de cumplimiento de la ley.
Se establece la curva de calibrado usando estndares y la absorbancia de la
muestra de concentracin desconocida se remite a la curva (a veces basta con un
solo estndar).
En espectrofotometra Vis, el analito se suele incorporar a una especie compleja
que presente bandas de absorcin intensas.
Siempre que sea posible se debe medir la absorbancia a max
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Aplicaciones analticas

Caractersticas de los mtodos espectrofotomtricos

Amplia aplicabilidad: Anlisis orgnico e inorgnico
Elevada sensibilidad: los lmites deteccin de 10-4 a 10-5 M.
Selectividad de moderada a alta.
Buena exactitud: errores de concentracin 1-5% o incluso menores.
Facilidad y comodidad en las medidas espectrofotomtricas.
Se prestan a una fcil automatizacin.

Campo de aplicacin
Especies absorbentes: compuestos orgnicos que contengan grupos
cromforos y especies inorgnicas como son los metales de transicin.
Especies no absorbentes: los analitos reaccionan con un reactivo para
producir un compuesto absorbente.
27
Aplicaciones analticas

Calibracin con patrones de concentracin conocida

A ( = 508 nm)
A
muestra

Analito en la
muestra

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 INSTRUMENTACIN PARA ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIN UV-VIS

ESPECTROFOTMETROS
* Instrumento empleado para medir la absorbancia que utiliza un selector
monocromtico para seleccionar la longitud de onda.

* Puede usarse en la regin UV, Vis e IR.

* Pueden ser de un solo haz o de doble haz.

 ESPECIES ABSORBENTES

A) Absorcin por compuestos orgnicos

Dos tipos de e- son responsables de que las molculas absorban radiacin
UV-Vis:
- e- compartidos que participan directamente en la formacin de enlaces y
que estn asociados a ms de un tomo.
- e- externos no compartidos, localizados preferentemente entorno a
tomos como O, S, N y halgenos.(e situados en orbitales no enlazantes
n)
a la que absorbe una molcula depende de la fuerza con que
retiene a sus distintos e-.

Enlaces sencillos C-C o C-H: de la regin del UV de vaco (<180 nm)

Enlaces dobles o triples: de la regin del UV
Compuestos orgnicos que contienen S, Br y I: absorben en la regin UV
n orbitales no enlazantes presentes en compuestos con heteroatomos de O, S y
halgenos.
 0.80
Etinilestradiol (26 mg/L)

Absorbancia
0.60 Gestodeno (5.4 mg/L)
Levonorgestrel (7.2 mg/L)
0.40

0.20

0.00
220.0 240.0 260.0 280.0 300.0

OH
Longitud de onda (nm) CH3
CH3 C CH OH
CH2 C CH

CH3
OH
CH2 C CH
HO
O
ETINILESTRADIOL (ETE) LEVONORGESTREL (LEV)

O
GESTODENO (GTD)
NaSO3 N=N COONa

HO

SO3Na

Tartracina (E-102)

OH

NaSO3 N=N

SO3Na

A. Anaranjado (E-110)