UNIVERSIDAD DE CUENCA

FACULTAD DE CIENCIAS MDICAS

LABORATORIO CLNICO

INMUNOLOGA

LCDA. CAROLA CRDENAS

SEXTO SEMESTRE

ANTI LA

ADRIANA QUEZADA

JOS RAMN

CUENCA, 12 DE ENERO DEL 2017

 ANTI LA

Prueba til para La deteccin de anticuerpos, evaluacin y pronstico del sndrome de Sjgren y
pacientes con LES; adems de las distintas enfermedades reumticas. (2)

Significacin Clnica

SS-B/La es uno de los antgenos nucleares extrables (ENAs), los cuales son frecuentes en casos
de enfermedades del tejido conectivo tales como: Lupus eritematosos sistmico, enfermedad
mixta del tejido conectivo, sndrome de Sjogren, esclerodermia, polimiositis. Los anticuerpos
contra SSB/La suelen encontrarse en pacientes con el Sndrome de Sjogren y LES. (3)

Fundamento

Los anticuerpos anti-SSB(La) del suero se unen al antgeno adsorbido a la superficie de los
pocillos de la microplaca. Se incuba con un anticuerpo anti-IgG humanas conjugado con
peroxidasa. Finalmente, se aade el cromgeno 3.3',5.5'-tetrametillbencidina (TMB) con H2O2,
sustrato que da lugar a un producto soluble de color amarillo. La reaccin enzimtica se detiene
con cido sulfrico y la formacin de producto se mide a 450 nm. La concentracin de
anticuerpos en la muestra es proporcional a la absorbancia del producto en la reaccin1. (4)

Tipo de Muestra

Suero o plasma recogidos mediante procedimientos estndar. Estable una semana a 2-8C.

Diluir las muestras 1/100 en Diluyente de Muestra (B) antes del ensayo.(1)

Procedimiento (1)

1. Atemperar los componentes del kit a temperatura ambiente.

2. Abrir las bolsas de la microplaca (M) y sacar la cantidad necesaria de pocillos a utilizar

3. Pipetear 100 L de cada uno de los controles y muestras diluidas en distintos pocillos.
Pipetear 100 L de Diluyente de Muestra (B) en un pocillo para el blanco.

4. Incubar los pocillos durante 30 minutos en cmara hmeda a temperatura ambiente.

5. Aspirar el lquido y lavar los pocillos con 300 L de Tampn de Lavado durante unos 10
segundos 4 veces

6. Pipetear 100 L de Conjugado (D) en cada uno de los pocillos.

7. Incubar los pocillos como en el paso 4.

8. Lavar como en el paso 5.

9. Pipetear 100 L de Sustrato (E) en cada uno de los pocillos.

10. Incubar los pocillos durante 10 minutos a temperatura ambiente en cmara hmeda.

11. Pipetear 100 L de Solucin de Paro (F) en cada uno de los pocillos (Nota 4).

12. Medir la absorbancia del contenido de cada pocillo a 450 nm empleando el pocillo del blanco
para el ajuste del cero. El color es estable durante al menos 30 minutos.

BIBLIOGRAFIA

1. 44750c-CE.PDF - 44750c.pdf [Internet]. [citado 12 de enero de 2017]. Disponible en:

http://www.biosimex.com.mx/pdf/insertos/INMUNIDAD/44750c.pdf

2. Butler JE. Enzyme-Linked Immunosorbent Assay. In: Howard GC ed.Methods in

Nonradioactive Detection. Appleton & Lange, 1993.

3. Young DS. Effects of drugs on clinical laboratory tests, 3th ed. AACC Press, 1997

4. Tzioufas AG and Moutsopoulos HM. Clinical significance of autoantibodies to Ro/SSA and

La/SSB. In: van Venrooij WJ and MainiRN eds. Manual of Biological Markers of Diseases.
Kluwer AcademicPublishers, 1996.