INFLUENCIA DE LA ACTIVIDAD VOLCNICA EN LA ESTRUCTURA

GENTICA DE LA POBLACIN DE ARAAS HAWAIANAS DE

TETRAGNATHA: FRAGMENTACIN, RPIDO CRECIMIENTO DE LA
POBLACIN Y EL POTENCIAL DE EVOLUCIN ACELERADA.

Resumen

La actividad volcnica en la isla de Hawai da como resultado un patrn cclico de

destruccin y fragmentacin del hbitat por lava, seguido por la regeneracin del
hbitat en sustratos recin formados. Si bien este patrn ha sido la hiptesis de
promover la diversificacin de los linajes hawaianos, ha habido pocos intentos de
vincular los procesos geolgicos a los cambios mensurables en la estructura de la
poblacin. Investigamos la estructura gentica de tres especies de araas
hawaianas en bosques fragmentados por un flujo de lava de 150 aos de
antigedad en el volcn Mauna Loa, isla de Hawai: Tetragnatha quasimodo, T.
anuenue y T. brevignatha Especialistas forestales). Para estimar los efectos de
fragmentacin en la subdivisin de la poblacin en cada especie, se examin la
variacin en los genomas mitocondriales y nucleares (secuencias de ADN y
alozimas, respectivamente). La subdivisin de la poblacin fue mayor para los
especialistas forestales que para los generalistas en fragmentos separados por
lava. Los patrones de evolucin de la secuencia de ADNmt tambin revelaron que
los especialistas forestales han experimentado una rpida expansin, mientras
que el generalista ha experimentado un crecimiento poblacional ms gradual. Los
resultados confirman que los patrones de variacin gentica neutral reflejan
patrones de actividad volcnica en algunas especies de Tetragnatha. Nuestro
estudio sugiere adems que la subdivisin y expansin de la poblacin puede
ocurrir a travs de pequeas escalas espaciales y temporales, lo que puede
facilitar la rpida propagacin de nuevos estados de carcter, llevando a la
especiacin como hiptesis por H. L. Carson hace 30 aos.

Introduccin

El archipilago hawaiano es reconocido por algunas de las radiaciones de

especies ms notables del mundo, incluyendo las algarrobas (Tarr & Fleischer
1995), plantas compuestas (Baldwin 1997, Baldwin & Wessa 2000), Drosophila
(Carson y Kaneshiro, 1976), los caracoles terrestres (Thacker & Hadfield 2000,
Holland y Hadfield 2002), los grillos Laupala (Shaw 1996, Shaw y Herlihy 2000) y
las araas Tetragnatha (Gillespie et al. Por lo tanto, no es sorprendente que los
patrones biogeogrficos y los mecanismos subyacentes La especiacin en los
organismos hawaianos ha sido durante mucho tiempo de gran inters para los
investigadores evolucionistas. En la mayora de los casos, los estudios
filogeogrficos han informado de que los patrones de las radiaciones de las
especies hawaianas reflejan la formacin geolgica de la cadena de las islas
hawaianas (Wagner y Funk, 1995; Roderick y Gillespie, 1998; La evidencia
geolgica sugiere que las islas hawaianas se formaron sucesivamente sobre un
"punto caliente" fijo debajo de la placa tectnica del Pacfico que se desplazaba
hacia el noroeste (Wilson 1963). Este hotspot se encuentra actualmente en el
extremo sur de la isla ms joven, la Isla Grande de Hawai. Al moverse hacia el sur
a lo largo de la cadena de la isla se encuentran islas cada vez ms jvenes, y para
muchos linajes hawaianos, ms especies derivadas (Funk & Wagner 1995).
Adems, muchas especies hawaianas contienen usualmente endemismos de un
solo volcn (Carson & Clague 1995). Si el patrn refleja el proceso, entonces el
vnculo entre la diversidad de taxones hawaianos y la geologa de las islas sugiere
que los procesos geolgicos pueden ser factores importantes que promueven la
diversificacin y la especiacin dentro de los linajes hawaianos (Carson y
Templeton, 1984; Roderick y Gillespie 1998). En la Gran Isla de Hawai, estos
procesos geolgicos dinmicos todava estn ocurriendo. La actividad volcnica
en curso ha creado nuevas tierras en el extremo sur de la isla, y el patrn hacia el
sur de los volcanes ms antiguos a los ms jvenes refleja la formacin de la
cadena de la isla en una escala ms pequea. En los ms jvenes y activos de
estos volcanes Big Island, Mauna Loa y Kilauea, los flujos de lava entierran las
superficies a tasas de aproximadamente 40% y 90% por 1000 aos,
respectivamente (Carson et al., 1990). La actividad volcnica en curso ha creado
un mosaico cambiante de hbitats a medida que grandes reas de bosque son
destruidas o fragmentadas en pequeas "islas" de hbitat (llamadas kipuka)
cuando la lava fluye sobre o alrededor de ellas. Despus de un flujo de lava se
enfra el bosque se regenera gradualmente, recibiendo los fundadores de las
reas intactas adyacentes. Se ha estimado que un bosque de dosel maduro y
cerrado se desarrollar en 300 a 3000 aos en nuevos flujos, con diferencias
temporales dependiendo de las condiciones abiticas (por ejemplo, pendiente,
aspecto, altitud y tipo de lava) y factores biticos (por ejemplo, presencia de
especies invasivas; 1995, Clarkson 1998). En consecuencia, las poblaciones de
organismos forestales en las laderas de estos volcanes han sido objeto de
extinciones repetitivas, fragmentacin, eventos fundadores y posterior crecimiento
demogrfico. Sobre la base de los estudios de Drosophila, Carson y sus colegas
plantearon la hiptesis de que una combinacin de la estructura de la
metapopulacin y los efectos fundadores resultantes de la actividad geolgica
sobre los volcanes de escudo de Hawai ha sido importante para crear y mantener
las diferencias genticas entre las poblaciones y en ltima instancia, Y especies
(Carson y Sato, 1969, Carson y Templeton, 1984, Carson, 1990, Carson et al.,
1990). De hecho, el aislamiento de pequeas poblaciones debido a flujos de lava
ha sido invocado en explicaciones de patrones filogenticos en varios linajes
hawaianos (Thornton, 1984; Gillnick et al 1995, DeMeyer 1996). Sin embargo, a
excepcin de la Drosophila hawaiana (Carson & Johnson, 1975, Carson et al.,
1990) no se han estudiado taxones endmicos hawaianos a nivel poblacional a
travs de flujos de lava recientes para determinar la influencia de la actividad
volcnica sobre la estructura gentica de la poblacin . Utilizando informacin de
secuencias de ADN mitocondrial y loci de aloenzimas nucleares, se investig la
estructura gentica de tres especies estrechamente relacionadas de Tetragnatha
hawaiana (Araneae Tetragnathidae) en un pequeo kipuka de bosque aislado por
un flujo de lava de 1855 en las laderas orientales de Mauna Loa. El principal
objetivo de este estudio fue determinar si este reciente evento de fragmentacin
ha conducido a una mayor subdivisin de la poblacin. Adicionalmente,
Utilizaron la informacin genealgica contenida dentro de las secuencias de
ADNmt para reconstruir la historia demogrfica de estas especies, con la
expectativa de que la destruccin anterior del hbitat y la subsiguiente
regeneracin en nuevos sustratos dejaran una firma de expansiones de poblacin
despus de cuellos de botella. Este es el primer estudio para probar
explcitamente la hiptesis de que los procesos geolgicos en los volcanes activos
alterarn la estructura gentica y demogrfica de la poblacin y, por lo tanto,
podran influir en la trayectoria evolutiva de los artrpodos hawaianos.

Mtodos

Tetragnatha hawaiano

El gnero Tetragnatha, las araas que tejen la orbe de la mandbula larga, es de

la distribucin mundial, asociado generalmente con los hbitats ribereos y
litorales. El gnero es conocido por su notable capacidad de dispersin por medio
del globo, que comprende casi todo el plancton de araa area recolectado en alta
mar en el Mar de China (Okuma & Kisimoto 1981). Por lo tanto, tal vez no es de
extraar, el gnero ha colonizado las islas hawaianas ms de una vez (Gillespie et
al., 1994). Sin embargo, en las islas hawaianas, el gnero ha sufrido una radiacin
de especies sustanciales (Simon 1900, Gillespie 1991, Gillespie 1992, Gillespie
1994, Gillespie 2002) y, al igual que muchos taxones hawaianos, las capacidades
de dispersin se consideran muy reducidas: Tetragnatha nativos son endmicos,
la mayora tienen rangos muy limitados dentro de las islas, y no hay evidencia
directa de la dispersin en globo. Los datos moleculares sugieren que las especies
de Tetragnatha han "saltado" la cadena de islas de las islas ms viejas a las ms
jvenes. Adems, algunas especies tienden a estar relacionadas ms
estrechamente dentro de una isla que entre islas, lo que sugiere que la
especiacin ha ocurrido repetidamente dentro de una sola isla, muy
probablemente a travs de cambios en la microhabitat y / o la especializacin de
presas (Gillespie et al. El Tetragnatha hawaiano vara en su uso de hbitat, con
algunas especies ampliamente distribuidas a travs de tipos de hbitats y otras
altamente restringidas (Gillespie 1997). Se eligieron tres especies que co-
ocurrieron en el sistema kipuka de la isla de Hawai: T. brevignatha (Gillespie
1991), T. anuenue (Gillespie 2002) y T. quasimodo (Gillespie 1991). Estas tres
especies pertenecen al 'clade de pierna espinosa' de la Tetragnatha hawaiana, en
la que todos los miembros han abandonado la construccin de la web (Gillespie et
al., 1997). En las encuestas ecolgicas realizadas a travs de los bordes de los
bosques en el sistema kipuka, estas tres especies fueron las nicas
representantes del clado de las patas espinosas encontrado (Vandergast 2002). T.
brevignatha y T. anuenue se restringieron a los interiores de los fragmentos de
bosque restantes, mientras que T. quasimodo residi tanto dentro de los
fragmentos de bosque como en la escasa vegetacin de los flujos de lava
circundantes ms jvenes (Vandergast 2002). Esta diferencia ecolgica nos llev a
predecir que las especies con restricciones forestales (T. brevignatha Y T.
anuenue) podran sufrir reduccin del flujo gentico si la dispersin se inhibe por la
fragmentacin del hbitat, mientras que la especie generalista (T. quasimodo) no
lo hara. Aunque el globo no se puede descartar como un mecanismo de
dispersin en estas tres especies, es poco probable que sea importante para los
especialistas forestales en el paisaje fragmentado kipuka. La vegetacin de
sotobosque de parcelas forestadas es densa, especialmente en los bordes de los
fragmentos. Las personas en globo tienen ms probabilidades de ser atrapadas en
las ramas y permanecer dentro del bosque kipuka que de ser dispersadas a
parches adyacentes. Bonte et al. (2003) encontr similarmente que el
funcionamiento de globo en araas est relacionado negativamente a la
especializacin del habitat en habitat fragmentados. Tambin se sabe que el
Turingia Cursorial hawaiano se desarrolla activamente a lo largo de la vegetacin
(Gillespie et al., 1997), que es probablemente un importante mecanismo de
dispersin en reas de hbitat adecuado contiguo. Para los dos especialistas
forestales, el hbitat adecuado se limita al bosque bajo. Sin embargo, T.
quasimodo tambin se encuentra en la vegetacin mucho ms escasa de los flujos
de lava circundantes (Vandergast 2002). Por lo tanto, se predijo que la dispersin
(y, por tanto, el flujo de genes) se reducira en los especialistas forestales en este
sistema fragmentado. Los estudios genticos han demostrado repetidamente que
las diferencias en las estimaciones del flujo gentico entre especies reflejan las
diferencias reales de dispersin cuando las especies estn estrechamente
relacionadas y se conocen los determinantes ms importantes de la dispersin
(revisado por Bohonak 1999). Por lo tanto, las tres especies de Tetragnatha
elegidas representan un modelo apropiado para investigar los efectos genticos
de la fragmentacin del hbitat.

Sitio de estudio
El sistema de kipuka investigado consiste en fragmentos de bosque mesico
rodeados por un flujo de lava de 1855 originado en el Volcn Mauna Loa (Fig. 1,
coordenadas generales del mapa: N 19 37 '40 "y W 155 21' 15"). Nos
enfocamos especficamente en siete pequeos bosques kipuka y cinco puntos de
recoleccin dentro de un rea continuamente boscosa de un kipuka mucho ms
grande. Estos kipuka varan en la edad de aproximadamente 750-1500 aos pb
(basado en la datacin por radiocarbono de sustratos de lava), y estaban muy
probablemente conectados antes del flujo de 1855 que actualmente los rodea
(Lockwood et al., 1988). Las encuestas de campo mostraron que los interiores
kipuka ms pequeos eran similares al interior continuo de los bosques en
trminos de composicin de clima, vegetacin y especies de araas (Vandergast
2002). Los efectos del borde son mnimos, afectando la estructura de la
vegetacin solamente 10-20 m en interiores del bosque. Por lo tanto, es muy
probable que los fragmentos contengan pequeas poblaciones que persistieron
durante el evento de fragmentacin, en lugar de ser recolonizadas despus de
extinciones locales. Tambin asumimos que los niveles de diferenciacin gentica
entre los puntos de recoleccin en el bosque continuo sera similar a la de las
poblaciones actualmente fragmentadas antes de que ocurriera este evento de
fragmentacin.

Fig . 1 Mapa del sitio de estudio en Saddle Road, Isla de Hawai. La localizacin
general del sitio del estudio se marca en el dibujo de la isla de Hawaii. Las reas
boscosas son de color gris oscuro y estn rodeadas por un flujo de lava de 1855
desde el volcn Mauna Loa. Los sitios F1-F7 son pequeos fragmentos de
bosque; Los sitios C1-C5 se encuentran en un gran tramo de bosque continuo.
Los tamaos de la muestra para mtDNA y aloenzimas, respectivamente, son los
siguientes: T. anuenue: F1 (15, 23); F2 (27, 19); F3 (13, 38); F4 (17, 57); F5 (10,
20); F6 (10, 14); F7 (8, 17); C1 (0, 0); C _ {2} (18, 17); {3} (14, 18); C4 (12, 22); C5
(14, 31). T. brevignatha: F1 (14, 17); F2 (16, 14); F3 (11, 15); F _ {4} (0, 0); F5 (6,
7); F6 (0, 0); F7 (0, 0); C1 (8, 7), C _ {2} (15, 17); {3} (12, 21); C _ {4} (13, 20); C5
(16, 19). T. quasimodo: F1 (9, 21); F2 (6, 23); F3 (10, 19); F4 (10, 33); F5 (11, 19);
F6 (9, 13); F7 (9, 12); C1 (6, 6); C _ {2} (9, 16); C _ {3} (9, 16); C4 (10, 19); C5 (8,
4).

Colecciones

Las araas fueron recolectadas durante los meses de abril y mayo de 1997-2000
en cada uno de los siete fragmentos aislados del bosque (F1-F7, Fig. 1) y de cinco
reas dentro del rea de bosque continuo del kipuka grande (C1-C5, Fig. 1) .
Todas las especies se recolectaron de cada sitio de estudio con las siguientes
excepciones: T. brevignatha no se encontr en los fragmentos F6 y F7 y T.
anuenue no se encontr en C1, a pesar del intenso esfuerzo de recoleccin en
estos lugares. Las araas recogidas fueron llevadas de nuevo al laboratorio y
almacenadas a -80C.

Amplificacin y secuenciacin de ADNmt

Las secuencias se recogieron de seis a 27 individuos por poblacin de cada

especie (vase la figura 1). El ADN genmico se aisl de una a tres patas de
araas individuales usando DNEASY Kits de tejidos (Qiagen, Valencia, CA, USA).
Para las muestras de T. brevignatha y T. anuenue se amplific una regin de 708
pares de bases (pb) del gen de la citocromo oxidasa I (COI) mitocondrial utilizando
el par de cebadores universales Lco1490: 5 '-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG
y Hco2198: 5' -TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA (Folmer Et al., 1994). Para
las muestras de T. quasimodo, se utiliz un par de cebadores alternativos
(LCO1628: 5 '-ATAATGTAATTGTTACTGCTCATGC y HCO2396: 5'
-ATTGTAGCTGAGGTAAAATAAGCTCG), diseado en los laboratorios Roderick y
Gillespie, para amplificar una regin de 768 pb del gen COI. Los dos pares de
cebadores amplificaron una regin de superposicin de 570 pb. Utilizando un
termociclador, las amplificaciones fueron las siguientes: 95C durante 2 min; 35
ciclos de 95 C durante 30 s, 55 C durante 30 s y 72 C durante 40 s; 72 C
durante 7 min. Las reacciones de amplificacin consistieron en 2 L de ADN, ADN
polimerasa Ampli Taq 0,5 U (Applied Biosystems), 1,8 m mgCl2, 0,2 m m cada
dNTP y 0,4 m m cada cebador en 25 L de volumen total. Los productos de
reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) se purificaron usando el QIAquick
PCR Purification Kit (Qiagen). Los productos de PCR se secuenciaron en ambas
direcciones usando Big Dye Terminator (Applied Biosystems) y se ejecutaron en
un secuenciador automatizado ABI 377. Las secuencias resultantes se alinearon
manualmente en secuenciador (versin 3.1.1, Gene Codes Corporation). No se
encontraron inserciones o deleciones, y las regiones finales ambiguas se
eliminaron de manera que todos los individuos dentro de cada especie se
analizaron sobre la misma longitud de secuencia. Despus de la alineacin y el
recorte, un segmento de 611 pb se analiz para T. quasimodo, 607 pb para T.
anuenue y 605 pb para T. brevignatha. Los haplotipos nicos se determinaron
usando la versin 1.1 del colapso del programa (Posada 1999).

Alozimas

Basndose en un cribado inicial de 21 sistemas enzimticos, se utiliz

electroforesis en gel de acetato para puntuar loci polimrficos presuntivos en ocho
sistemas enzimticos a partir de muestras tomadas de las mismas localizaciones
que se obtuvieron secuencias de COI (Figura 1). Se trataron de gliceraldehdo-3-
fosfato deshidrogenasa (G3PDH, EC 1.2.1.12), 6-fosfogluconato deshidrogenasa
(6PGDH, EC 1.1.1.44), glucosa-6-fosfato isomerasa (PGI, EC 5.3.1.9),
fosfoglucomutasa (PGM, EC 5.4.2.2), aspartato amino transferasa (AAT, EC
2.6.1.1), adenilato quinasa (APK, EC 2.7.4.3), malato deshidrogenasa (MDH, EC
1.1.1.37) e isocitrato deshidrogenasa (IDH, EC 1.1.1.42). Los geles se aplicaron a
180 C durante 35 y 60 minutos (dependiendo del sistema enzimtico) a 4 C, y
se tieron para visualizar los productos proteicos siguiendo protocolos publicados
(Hebert y Beaton 1993). Los loci de las aloenzimas se puntuaron por separado
para cada especie y se calcularon las frecuencias de los alelos de la poblacin.

Anlisis El conocimiento de la historia geolgica del sitio de estudio y las

diferencias ecolgicas entre las tres araas condujo a tres hiptesis sobre los
cambios demogrficos pasados y la estructura actual de la poblacin. En primer
lugar, la fragmentacin reciente por lava conducir a una mayor estructura
gentica de la poblacin entre fragmentos aislados, en comparacin con las
poblaciones en bosque continuo. En segundo lugar, las poblaciones de
especialistas en bosques restringidos son ms divergentes a travs de flujos de
lava recientes que las especies generalistas, que se encuentra casi en todas
partes. Finalmente, los episodios previos de fragmentacin
La posterior regeneracin del hbitat dejar una firma gentica de expansin de la
poblacin despus de los cuellos de botella.

El flujo de lava impide el flujo de genes?

La primera hiptesis se prob con tres enfoques. En primer lugar, se realizaron

pruebas de 2 exactas para la diferenciacin de la poblacin para todos los
marcadores genticos (Raymond & Rousset 1995) y como sugieren Excoffier et al.
(1992), se prob la hiptesis nula de ninguna estructura de poblacin de mtDNA
usando 10 000 permutaciones del estadstico de prueba de amova en arlequin
versin 2.0 (Schneider et al., 2000). En segundo lugar, dentro de cada especie, se
compararon los intervalos de confianza del 95% para el estadstico de
diferenciacin gentica entre las poblaciones separadas por lava (F1-F7) a
entre los puntos de recoleccin forestal (C1-C5). Weir y Cockerham (1984) , una
estimacin de Wright F ST, se calcul para allozimas sobre todos los loci
polimrficos con el programa tfpga (Miller 1993). Las estimaciones de basado en
mtDNA se determinaron en arlequn. Para las alozimas, los intervalos de confianza
(95%) se obtuvieron mediante 10 000 repeticiones bootstrap sobre loci. Debido a
que las secuencias de ADNmt constituyen un locus nico enlazado, se obtuvieron
intervalos de confianza del 95% para \ theta a partir de ADNmt mediante el
envejecimiento sobre poblaciones (siguiendo Weir 1990). Finalmente, la primera
hiptesis se prob utilizando anlisis de "aislamiento por distancia" (Slatkin 1993).
Para ambos conjuntos de marcadores, pairwise linearized FST (Rousset 1997) se
estim entre todos los pares de la poblacin y trazado contra la logtransformed
distancia geogrfica. Se determinaron correlaciones significativas entre las
matrices de distancia gentica y geogrfica con las pruebas de Mantel. Para
examinar los efectos de la lava sobre la estructura gentica, tambin creamos una
"matriz de fragmentacin" binaria con valores de 1 para pares de poblaciones
separados por lava y 0 para los separados por bosque. Luego se utilizaron
pruebas parciales de Mantel (Legendre y Legendre 1983) para evaluar la
correlacin entre distancia gentica y distancia geogrfica despus de controlar la
fragmentacin y, a la inversa, la correlacin de distancia gentica con
fragmentacin mientras controlaba la distancia geogrfica. Los anlisis de
'aislamiento por distancia' se realizaron en el programa ibd versin 1.5 (Bohonak
2002). La subdivisin de la poblacin para el ADNmt se cuantifica a menudo
utilizando estadsticas tales como ST (Excoffier et al., 1992), que toman en
cuenta el nmero de mutaciones entre alelos, o se analizan con mtodos basados
genealgicamente tales como anlisis de clados anidados (NCA). Optamos por no
utilizar estos mtodos porque en menos de 150 aos despus de la
fragmentacin, es poco probable que las nuevas mutaciones hayan alcanzado
frecuencias detectables. As, las relaciones genealgicas entre haplotipos
reflejarn la estructura de la poblacin antes del evento de fragmentacin, en lugar
de despus. La relacin del haplotipo no se volver informativa hasta que nuevos
alelos hayan aparecido en cada kipuka despus de un tiempo mucho ms largo.
Consistente con esto, los conjuntos preliminares de NCA encontrados.

No hay asociaciones geogrficas significativas concordantes con la fragmentacin

de ningn clado en ninguna especie (Vandergast 2002).
La fragmentacin afecta ms a los especialistas forestales que al generalista?
Para probar la segunda hiptesis, se compararon los intervalos de confianza del
95% para entre las tres especies para ambos tipos de marcadores genticos.
Las expansiones de la poblacin han dejado firmas genticas distintas? Debido a
que el evento de fragmentacin fue reciente, esperbamos que las relaciones
genealgicas entre los haplotipos de ADNmt reflejaran los procesos de la
poblacin antes del flujo de lava de 1855. La informacin sobre la historia de una
especie en particular puede deducirse de su estructura genealgica. Por ejemplo,
se puede deducir el crecimiento demogrfico pasado si las ramas ms basales de
la genealoga muestreada son relativamente cortas en comparacin con las
esperadas en una poblacin de tamao estable (Kuhner et al., 1998). Debido a
que el ADN mtDNA preliminar sugiri que las poblaciones de kipuka eran
panmicticas antes del evento de fragmentacin ms reciente (vase ms arriba),
todas las secuencias muestreadas de cada especie se trataron como una
"poblacin" nica para las pruebas de la tercera hiptesis. Utilizamos dos mtodos
para explorar la historia demogrfica de cada especie. En primer lugar, se
estimaron los tamaos efectivos de la poblacin a escala de mutacin ( = Ne) y
las tasas de crecimiento poblacional (g) a partir de secuencias muestreadas
siguiendo un algoritmo de bsqueda de mxima verosimilitud en la versin de
fluctuacin del programa 1.4 (Kuhner et al., 1998). En segundo lugar, adaptamos
el mtodo de diagrama de horizonte de Strimmer y Pybus (2001) para investigar la
forma de la curva de crecimiento de la poblacin a travs del tiempo. Estas
estimaciones se obtuvieron en dos etapas independientes: 1) estimacin
filogentica de los rboles genticos bajo el supuesto de un reloj molecular y 2)
estimacin coalescente del cambio en el tamao de la poblacin a travs del
tiempo basado en los rboles filogenticos obtenidos. Los conjuntos de rboles
filogenticos se generaron utilizando un mtodo de bsqueda Bayesiano. Las
bsquedas se realizaron en mr bayes 2.0 (Huelsenbeck & Ronquist 2001)
utilizando un modelo GTR + I (Rodrguez et al., 1990), y la aplicacin de un reloj
molecular. Cada bsqueda comenz a partir de un rbol al azar y corri por 2 mil
generaciones, el muestreo cada 1000 generacin. Los primeros 200 ciclos (10%)
fueron descartados como quemaduras, y los restantes 1800 rboles retenidos. Las
bsquedas se repitieron dos veces ms para confirmar la estacionariedad. De los
5400 rboles resultantes en la distribucin estacionaria, 100 rboles fueron
seleccionados al azar para el anlisis demogrfico (archivos de rboles
disponibles a peticin). La historia demogrfica se visualiz utilizando una
adaptacin del mtodo de diagrama de horizonte generalizado (Strimmer & Pybus
2001), que utiliza el coalescente para estimar Ne hacia atrs a travs del tiempo
(medido en sustituciones de nucletidos por sitio). El mtodo da como resultado
una estimacin de la historia demogrfica de una poblacin basada en el patrn
de ramificacin y la profundidad de la genealoga subyacente. Las parcelas del
horizonte generalizadas se estimaron en el programa genie 3.0 (Pybus & Rambaut
2002) y se replicaron en cada uno de los 100 rboles seleccionados al azar. Para
cada paso de tiempo se calcul la media y el intervalo de confianza del 95%
alrededor de Ne y estos se representaron en funcin del nmero de sustituciones
por sitio. Las parcelas se compararon visualmente entre las especies.

Resultados
Variacin de la secuencia de COI Se detectaron cuarenta y cinco haplotipos
nicos en T. quasimodo, se encontraron 30 haplotipos en T. anuenue y se
encontraron 27 haplotipos en T. brevignatha. El nmero de sitios polimrficos, el
nmero de transiciones y transversiones y la distancia media pairwise entre
haplotipos se presentan para cada especie en la Tabla 1. Todas las secuencias de
haplotipos fueron sometidos a GenBank bajo los siguientes N de acceso:
AY530430-AY530531. Las relaciones entre haplotipos dentro de cada especie se
muestran como redes en la Fig. 2.

Variabilidad alozimtica

En total, se resolvieron ocho loci polimrficos para T. quasimodo (PGI, PGM, AAT,
APK, IDH, IDHf, MDH y G3PDH) con un intervalo de dos a cuatro alelos por locus.
Seis locos polimrficos fueron resueltos para T. anuenue (PGI, PGM, AAT, IDHs,
IDHf, 6PGDH) con entre dos y siete alelos por locus. Se resolvieron siete loci
polimrficos para T. brevignatha (PGI, PGM, AAT, IDHs, IDHf, MDH, 6PGDH) con
entre dos y cuatro alelos por locus.
Fig. 2 Redes de haplotipos para las tres especies. Las redes se crearon usando un
algoritmo de parsimonia mximo en el programa tcs versin 1.13 (Clement et al.,
2000). Los haplotipos muestreados estn numerados y los haplotipos que faltan se
muestran como puntos negros y barras. Los haplotipos y clados conectados con
lneas discontinuas no pudieron conectarse con una probabilidad del 95% en tcs, y
estn conectados a sus haplotipos ms estrechamente relacionados basados en
una matriz de diferencias absolutas en pares. Los crculos ms grandes
representan haplotipos ms comunes.
No se detectaron salidas del equilibrio de Hardy-Weinberg en ningn locus para
ninguna poblacin. Las frecuencias de los alelos para cada locus y poblacin se
proporcionan en los Apndices I-III.
Hiptesis

Cada una de las tres hiptesis sobre la estructura actual de la poblacin y la

historia demogrfica del pasado fue apoyada por una o ms pruebas estadsticas.
Los resultados se describen en detalle a continuacin y se resumen en la Tabla 2.

(1) El flujo de lava evita el flujo de genes? Para las secuencias de ADNmt, se
midi la estructura estadsticamente significativa de la poblacin entre las
poblaciones separadas por lava tanto para T. anuenue como para T. brevignatha
(amova; Tabla 3). Pruebas exactas para la diferenciacin de la poblacin apoy
este resultado para los loci aloenzima tambin. Por el contrario, entre las
poblaciones separadas por bosque, ambos especialistas forestales mostraron
estimaciones muy bajas de que no eran significativamente diferentes de cero en
el ADNmt o en las aloenzimas. En T. anuenue, los intervalos de confianza del 95%
alrededor del derivado del ADNmt no se superponan, apoyando
significativamente la diferenciacin poblacional en las poblaciones de lava que en
las poblaciones forestales (Tabla 3), pero las diferencias no eran significativas para
las allozimas (vase Interpretando FST en condiciones de no equilibrio 'Abajo). Un
examen similar de los intervalos de confianza alrededor de en T. brevignatha no
diferenci entre lava y poblaciones forestales en cualquiera de los dos; Sin
embargo, las diferencias entre estos tipos de hbitat se revelaron en el aislamiento
mediante anlisis de distancia. En comparaciones pairwise basadas en mtDNA y
alozimas de T. brevignatha, encontramos una correlacin significativa entre la
distancia gentica y geogrfica cuando se corrigi la fragmentacin, y un efecto
significativo de la fragmentacin cuando se corrige la distancia geogrfica (Fig. 3,
Tabla 4]. En contraste, la distancia gentica y geogrfica no se relacion
estadsticamente con las poblaciones de bosques o lava de T. anuenue y T.
quasimodo para ninguno de los dos marcadores (Fig. 3, Tabla 4).
Fig. 3 Parcelas de FST linealizado por pares (FST / 1 - FST, basado en mtDNA o
aloenzimas) por distancia geogrfica para todas las especies. La distancia
geogrfica es log-transformada. Los crculos negros abiertos representan pares de
poblacin separados por lava y los pares de poblaciones separados por el bosque
estn en crculos cerrados.

Tabla 3 Resumen de las estadsticas F (estimadas como , Weir y Cockerham

1984) para todas las especies para las poblaciones separadas por el bosque y la
lava, respectivamente. Para secuencias de ADNmt, la importancia evaluada a
partir de 10 000 permutaciones de la estadstica de prueba de amova
implementada en arlequn y los intervalos de confianza del 95% se obtuvieron
midiendo a travs de poblaciones (Weir 1990). Para las alozimas, los intervalos de
confianza del 95% se obtuvieron mediante bootstrapping (10 000 repeticiones)
sobre loci.
(2) La fragmentacin afecta ms a los especialistas forestales que al generalista?
En ambas especies especializadas forestales, se midi la estructura poblacional
significativa en poblaciones separadas por lava. Por el contrario, las poblaciones
fragmentadas del generalista T. quasimodo no se diferenciaron. En T. anuenue, los
intervalos de confianza del 95% alrededor de derivados del ADNmt para las
poblaciones de lava no se superponan con los estimados para T. quasimodo, lo
que daba apoyo limitado a esta hiptesis (Tabla 3). Sin embargo, no hay indicacin
de mayor estructura poblacional en poblaciones de lava de T. brevignatha en
comparacin con T. quasimodo, basndose nicamente en los intervalos de
confianza. En general, estos patrones sugieren que T. anuenue y T. brevignatha
han experimentado algn nivel de subdivisin de la poblacin debido a la
fragmentacin del hbitat, mientras que las poblaciones de T. quasimodo parecen
haber permanecido panmictic.

(3) Las expansiones de poblacin han dejado firmas genticas distintas?

Estimaciones de mxima probabilidad del crecimiento de la poblacin

Obtenidos de fluctuado fueron positivos en todas las especies (Tabla 5). Los
grficos de Sky line corroboraron estos resultados (Fig. 4). Las tres especies
parecen haber sufrido el crecimiento demogrfico pasado, con algunas diferencias
aparentes en el momento de ese crecimiento. Basndose en las parcelas del
horizonte con pendientes ms pronunciadas que se originaron ms recientemente
en el pasado, T. anuenue y T. brevignatha parecen haber experimentado
expansiones de poblacin relativamente recientes y rpidas (Fig. 4A, B). En
contraste, el crecimiento de la poblacin en el quasimodo de Tetragnatha ha sido
ms moderado a travs del tiempo, como es evidente por una pendiente ms
gradual (Figura 4C).

Discusin

Subdivisin de la poblacin como resultado de la fragmentacin del hbitat Las

especies con altos niveles de diferenciacin de la poblacin entre fragmentos de
bosques podran ser restringidas como resultado de
Tabla 4 Resultados de las pruebas de Mantel para la correlacin matricial entre
distancias genticas y geogrficas, y pruebas parciales de Mantel para la
correlacin matricial entre distancia gentica, distancia geogrfica y matriz de
indicadores de fragmentacin (ibd versin 1.6; Bohonak 2002). Importancia
evaluada con 20000 aleatorizaciones de la matriz
Fig. 4 parcelas de Skyline para T. anuenue (A), T. brevignatha (B) y T. quasimodo
(C). Las lneas negras representan las estimaciones de crecimiento poblacional
promedio de 100 parcelas del horizonte basadas en estimaciones genealgicas
seleccionadas al azar, movindose hacia atrs a travs del tiempo; Los intervalos
de confianza del 95% alrededor de la media se muestran en gris. Plot formas
sugieren crecimiento reciente y sbito en T. anuenue y T. brevignatha y un
crecimiento ms lento, ms estable en T. Quasimodo.

Tabla 5 Estimaciones de mxima verosimilitud simultnea y desviaciones estndar

para la diversidad de nucletidos ( = e, suponiendo Nm = Nf) y tasa de
crecimiento poblacional (g) de cada especie segn se estima en la fluctuacin del
programa. Los parmetros iniciales para cada anlisis utilizaron frecuencias de
base empricas, relaciones de transicin / transversin emprica, estimacin de
Watterson (1975) de y g = 1

Fragmentacin, o pueden tener distribuciones parciales y restringidas, incluso en

condiciones no fragmentadas. Comparando los niveles de diferenciacin gentica
entre los fragmentos a aquellos a travs de distancias similares de hbitat
forestado continuamente, hemos presentado evidencia de que la fragmentacin
del hbitat es el probable factor causal creciente subdivisin de la poblacin en T.
anuenue y T. brevignatha. Para los marcadores genticos que representan los
genomas mitocondriales y nucleares, la divergencia significativa se midi entre las
poblaciones separadas por lava, pero no entre las poblaciones adyacentes
separados por el bosque. Ms importante an, las poblaciones de lava de T.
anuenue fueron significativamente ms diferenciadas que las poblaciones
forestales de ADNmt. Finalmente, en ambos conjuntos de marcadores, T.
brevignatha mostr evidencia de aislamiento gentico creciente con distancia para
poblaciones separadas por lava; Sin embargo, en las poblaciones separadas por
el bosque, la diferenciacin gentica era despreciable independientemente de la
distancia. Estas diferencias son an ms sorprendentes cuando se comparan con
el habitat generalista, T. quasimodo, en el que no se detect ninguna subdivisin
de la poblacin entre los grupos de hbitat para ninguno de los dos marcadores.
Los estudios ecolgicos de las distribuciones de especies en condiciones
fragmentadas han demostrado en general que las especies con diferentes
requerimientos de hbitat y rasgos de historia de vida responden de manera
diferente a la fragmentacin del hbitat (Fahrig y Grez, 1996; Kolozsvary & Swihart
1999).

Los estudios ecolgicos de las distribuciones de especies en condiciones

fragmentadas han demostrado en general que las especies con diferentes
requerimientos de hbitat y rasgos de historia de vida responden de manera
diferente a la fragmentacin del hbitat (Fahrig y Grez, 1996; Kolozsvary & Swihart
1999). Especies con poblaciones pequeas y necesidades de hbitat
especializadas tienden a disminuir mientras que las especies generalistas y
oportunistas pueden no ser afectadas o prosperar (Lynam 1997, Gasger et al.,
1999, Bolger et al., 2000). Esta diferencia puede deberse a una mayor reduccin
del hbitat adecuado para los especialistas ya una mayor reduccin de la
conectividad entre las poblaciones si los especialistas no pueden dispersarse a
travs del hbitat circundante. Nuestros resultados genticos en el sistema kipuka
apoyan este ltimo punto; La fragmentacin interrumpi la continuidad gentica de
los especialistas forestales, pero no afect al generalista.

Interpretacin de FST en condiciones de no equilibrio

Tanto en T. anuenue como en T. brevignatha, los resultados de secuencias de

ADNmt son ms indicativos de un efecto de fragmentacin que los resultados
basados en loci de aloenzimas. Interpretamos el desajuste entre los marcadores
mitocondriales y nucleares para indicar que las poblaciones de araas en el kipuka
aislado del bosque an no han alcanzado un equilibrio gentico entre la deriva y el
flujo gnico (Bohonak & Roderick 2001). Con un tamao efectivo de la poblacin
un cuarto de la de los genes nucleares, mtDNA se espera que el enfoque de
equilibrio ms rpidamente, explicando las estimaciones ms altas y ms
significativas de FST derivado de mtDNA. Una explicacin alternativa de este
patrn es que los hombres T. anuenue y T. brevignatha pueden moverse entre los
fragmentos con ms frecuencia que las hembras. En observaciones detalladas de
estos y de los tetragnatidos cursores relacionados, no ha habido indicacin de
movimientos o dispersin sexuales. As, las condiciones de no equilibrio
proporcionan una explicacin ms probable. En consecuencia, puede ser
engaoso interpretar cuantitativamente la FST en trminos del nmero de
migrantes por generacin (Bossart y Prowell, 1998; Whitlock & McCauley 1999).
Sin embargo, los patrones cualitativamente diferentes que se encuentran en los
hbitats fragmentados versus no fragmentados y entre especies especializadas y
especializadas demuestran que la fragmentacin ha alterado la estructura
gentica de los dos especialistas forestales.

Evidencia para la expansin de la poblacin Las estimaciones del crecimiento

de la poblacin y las parcelas del horizonte indicaron que las tres especies han
experimentado expansiones recientes. Las formas contrastantes de las curvas de
crecimiento del grfico del horizonte sugieren adems que la expansin de la
poblacin ha sido ms reciente y rpida en los dos especialistas forestales que en
el hbitat generalista. Estas firmas de expansin de la poblacin pueden reflejar
procesos histricos en poblaciones kipuka. Nuestro sitio de estudio en la vertiente
oriental de Mauna Loa ha estado sujeto a un ciclo continuo de destruccin y
fragmentacin del hbitat por los flujos de lava y posterior rebrote forestal
(Lockwood et al., 1988). Los estudios ecolgicos sobre el desarrollo de los
ecosistemas en estos flujos orientales de Mauna Loa han estimado que un bosque
maduro de canopy cerrado con un sotobosque de helecho arbreo (necesario para
apoyar poblaciones de T. anuenue y T. brevignatha) puede tomar entre varios
De cientos a varios miles de aos para desarrollarse sobre flujos estriles
(Kitayama et al., 1995; Aplet et al., 1998). Es probable que los flujos de lava
pasados hayan llevado a poblaciones fragmentadas como las que se observan
ahora, seguidas por la expansin de la poblacin cuando los individuos
recolonizan las reas donde los bosques se han regenerado. El patrn ms
estable de crecimiento de la poblacin en T. quasimodo se espera, dada su
capacidad de sobrevivir en una gama ms amplia de sustratos de hbitat, lo que
permite a esta especie colonizar flujos mucho ms jvenes. Est claro que los
procesos volcnicos en esta isla han dejado la distinta firma gentica de la
expansin de la poblacin en estos linajes.

Enlaces potenciales a la especiacin en Hawaiian Tetragnatha

Este estudio demostr que los procesos geolgicos en los volcanes activos han
alterado la estructura gentica de la poblacin y la demografa de algunos
tetragnatidos hawaianos. Las poblaciones parecen haber crecido de tamao, y en
dos especies, la subdivisin gentica ha aumentado debido al flujo de lava ms
reciente. Estas firmas genticas son concordantes con la historia geolgica del
flujo de lava, la fragmentacin del bosque y la regeneracin en el Volcn Mauna
Loa. Aunque estas fluctuaciones demogrficas son similares a las condiciones
bajo las cuales se ha propuesto la hiptesis de que los modelos de especiacin
del fundador-flush actan (Carson & Templeton 1984), si este ciclo facilita la
propagacin de nuevos estados de carcter o rasgos bajo seleccin, queda por
determinar Tetragnatha . Los estudios tericos proporcionan una idea de la
influencia potencial de tales cambios demogrficos. Por ejemplo, en poblaciones
pequeas, la deriva gentica al azar es la fuerza evolutiva predominante, los
abrumadores niveles dbiles de seleccin (Slatkin 1996). Por el contrario, las
simulaciones que comparan las poblaciones en expansin y estables sugieren que
el rpido crecimiento de la poblacin aumenta mucho el papel que puede jugar la
seleccin (Slatkin 1996, Otto & Whitlock 1997). En consecuencia, los patrones
cclicos de contraccin y crecimiento de la poblacin podran facilitar la fijacin de
estados caractersticos beneficiosos que podran haber estado presentes
inicialmente en frecuencias muy bajas (Slatkin 1996). Si bien este evento an no
ha sido documentado en el Tetragnatha hawaiano, los datos filogenticos y
ecolgicos actuales sugieren que los cambios adaptativos en la microhabitat y la
especializacin de presas han sido factores importantes que condujeron a una
rpida especiacin en el grupo (Gillespie et al., 1997; Oxford & Gillespie 2001 ). En
cada una de las islas ms antiguas (excepto Hawaii), las especies dentro del clado
de piernas espinosas han sufrido una extensa diversificacin dentro de la isla,
asociada con cambios adaptativos y la adopcin de roles ecolgicos especficos
(Gillespie 2004). La edad de la joven isla de Hawai puede ser insuficiente para
permitir la especiacin a travs de cambios adaptativos. La mayora de las
especies en Hawai han colonizado desde la siguiente isla ms antigua, Maui. Sin
embargo, los patrones revelados en este estudio proporcionan una visin
demogrfica de cmo la diversificacin a travs de cambios adaptativos puede ser
iniciado en este grupo. Curiosamente, T. quasimodo es la nica especie en el
clado de piernas espinosas que est muy extendida, encontrndose en todas las
islas de Oahu a Hawai. La falta de diversificacin en esta especie puede ser el
resultado de su estilo de vida generalista y la falta de subdivisin de la poblacin.

Conclusiones

Carson y sus colegas plantearon la hiptesis de que los patrones de flujo de lava
podran ser importantes en el proceso de especiacin de los linajes hawaianos
hace casi 30 aos (Carson y Johnson, 1975). Estudios de la Drosophila hawaiana
confirmaron que los cambios en el nivel de la poblacin ocurrieron incluso en
pequeas escalas geogrficas debido a fragmentacin y eventos fundadores a
travs de flujos de edades variables (Carson et al., 1990). A pesar del debate
ideolgico que sigui (Barton & Charlesworth 1984, Carson y Templeton 1984,
Charlesworth 1997), ha habido pocos o ninguno de los intentos de recopilar apoyo
emprico para la teora de Carson en otros taxones hawaianos. Hemos presentado
evidencia de que las poblaciones de ciertas especies Tetragnatha hawaianas
estn sujetas a subdivisin gentica aumentada debido a la fragmentacin por
lava, y contienen una firma gentica concordante con la expansin de la poblacin
pasada. Este estudio facilitar investigaciones adicionales sobre la contribucin de
los procesos poblacionales a la formacin y difusin de rasgos adaptativos y la
formacin de especies en el grupo. Es de esperar que el apoyo a mecanismos
similares de diversificacin en Drosophila y Tetragnatha motivar estudios de
taxones hawaianos adicionales y centrar mayor atencin en los procesos a nivel
de poblacin que ocurren a travs de los flujos de lava.