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Bacillus licheniformis, es una bacteria Gram positiva, crece a 37-50C y tiende a formar esporas. Se
encuentra comnmente en el suelo y plumas de aves. Es utilizado para:
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- Las proteasas detergentes se fabrican en grandes cantidades en la industria
de los detergentes, esta industria representa ms de un tercio del mercado de
enzimas industriales.
- Bacillus spp produce -PGA (cido gamma poliglutmico), este puede ser
degradado qumicamente o enzimticamente por depolimerasas especficas,
tambin se obtiene como subproducto no deseado de otros procesos.
La produccin de un biopolmero
(pseudoplstico):
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Metodologa: Cepa microbiana y medio de cultivo
Precultivo: El medio de cultivo principal contiene por litro:
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Metodologa
La viscosidad del caldo de fermentacin se midi con un remetro
Physica MCR301. en una gama de velocidades de corte entre 10 y 2000
s-. El anlisis de los datos se realiz con el software RheoPlus / 32 V3.40
(Anton Paar).
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Resultados y Discusin
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Se utiliz sulfato de amonio [(NH4)2SO4], y nitrato de potasio (KNO3), como las
diferentes fuentes de nitrgeno.
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Impacto de la fuente de N2 en la acumulacin de la viscosidad
De a-c, la
fuente de
carbono fue
(NH4)2SO4
De d-f fue
KNO3.
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En la grfica a y d se encuentran las mediciones para OTR, y OD600.
Los cuales tienen sus puntos mximos a las 12 horas, siendo 56 mmol/L*h y 11,
respectivamente, para a. Mientras que en d los puntos mximos se alcanzaron
aproximadamente a las 14 h, siendo 50 mmol/L*h y 12.
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La grfica b y e nos deja ver el comportamiento de la viscosidad, el pH y la
actividad de la proteasa durante el periodo de incubacin de la cepa.
Para ambos casos el pH inicial fue de 8.0 hasta un mnimo de 6.6 en b, y 7.7 en e,
este decremento se debe a la produccin de acetato (Meissner et al., 2015.
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En la misma grfica, podemos observar como mientras en donde se us sulfato
de amonio la viscosidad se increment hasta 30 mPa*s, coincidiendo con el punto
mximo de transferencia de oxgeno y densidad ptica, y decayendo de igual
modo hasta su valor inicial; debido en gran medida a la formacin indeseable del
cido glutmico, reportada para esta cepa (Bajaj & Singhal, 2011).
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Del mismo modo se observaron las actividades enzimticas de proteasas para
ambas fuentes, siendo para sulfato de amonio de 30 U/mL y para nitrato de
potasio de 46 U/mL.
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Para verificar la influencia del amonio y nitrato en la formacin indeseable de -
PGA, se utilizaron cloruro de amonio y nitrato de sodio como fuente de nitrgeno.
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Se compararon con la fuentes de N anteriores, y las cuatro mostraron
crecimiento exponencial de la OTR durante las primeras 13 hr.
Cuando se usa amonio las viscosidades son altas, mientras que con nitrato se
mantienen bajas.
Por tanto se puede concluir que son estos iones los que tienen mayor
relevancia en la formacin indeseable de -PGA.
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La produccin indeseada de -PGA
puede prevenirse usando al nitrato
como fuente de nitrgeno.
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Figura 4. Influencia del control del ph en la acumulacin de viscosidad
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Formacin de mayor biomasa con un mximo de OD600 en 15 y ligeramente
ms formacin de acetato.
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La concentracin de amonio alcanz un mnimo de 132 mmol L-1 a las 18 h
que corresponde con el pH 7.1 mnimo al mismo tiempo, de ah la
concentracin de amonio incremento a 162 mmol L-1 debido al consumo de
cido glutmico liberado de la degradacin de -PGA. (b-c)
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La viscosidad alcanz un mximo de 23 mPa s para pH controlado por
titulacin.
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De los resultados obtenidos puede ser concluido que independientemente del
mtodo de control del pH aplicado, el producto -PGA causante de la
elevacin de la viscosidad es formado cuando el amonio es utilizado como
fuente de nitrgeno mientras que el nitrito previene la formacin de este
producto indeseado.
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Figura 5. Impacto del control del pH y limitacin de oxgeno en la viscosidad
En (a-c) se mantuvo
pH 7 con 2 M NaCL y
2M de HCL
En (d-f) se us buffer
MOPS 0.2M
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En la fermentacin con titulacin como control de pH, no se observ aumento en
la viscosidad (fig 5-b).
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influencia de la limitacin de oxgeno en la viscosidad
Por lo tanto la aplicacin de cultivo por lotes para limitar ya sea el amonio, la
glucosa o ambos debera prevenir la formacin del producto indeseado.
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Conclusin
La cepa de B. licheniformis usada en este estudio es una productora
de proteasa industrial que tambin es capaz de secretar -PGA como
un subproducto no deseado bajo condiciones de fermentacin
estndar.
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Referencia
Meissner L., Kauffmann K., Wengeler T., Mitsunaga H., Fukusaki E. & Bchs J. (2015).
Influence of nitrogen source and pH value on undesired poly(-glutamic acid)
formation of a protease producing Bacillus licheniformis strain. Magazine of J Ind
Microbiol Biotechnol 42:12031215.
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