UHPLC.

La cromatografa lquida es una tcnica analtica de separacin ampliamente

utilizada gracias a sus caractersticas de sensibilidad, fcil adaptacin a
determinaciones cuantitativas exactas y aplicabilidad a sustancias que son de
primordial inters en la industria y en muchos campos de la ciencia como los
aminocidos, protenas, cidos nucleicos, carbohidratos, frmacos, antibiticos,
especies inorgnicas, etc. La cromatografa lquida convencional se llevaba a cabo
en columnas de vidrio con dimetros de 1 a 5 cm y longitudes de 50 a 500 cm y
con un dimetro de partcula de fase estacionaria de 150 a 200 m, no obstante
los tiempos de separacin eran largos y a menudo alcanzaban varias horas. A
finales de los aos noventa, se encontr que era posible aumentar la eficacia de la
columna al disminuir el tamao de las partculas de relleno y as se desarrollo la
cromatografa liquida de alta eficacia (HPLC) donde se emplearon rellenos de
tamao de partcula de 3 a 10 m y se requiri instrumentacin sofisticada para
trabajar a altas presiones, por encima de 6000 psi. (Skoog et al., 2005).

Actualmente, se dispone de una tcnica mejorada de HPLC, la UPLC (Ultra

Performance Liquid Chromatography) que conserva los principios de la misma,
pero que se caracteriza por su qumica de partculas con dimetro menor a 2 m y,
por operar a presiones de hasta 15.000 psi (Armenta et al., 2008), lo que permite
reducciones significativas en los tiempos de anlisis y en el consumo de solventes
as, como incrementos en la velocidad, sensibilidad y resolucin (Tawakkul, et al.
2010) (Swartz, 2005).

La muestra se mezcla con el solvente para ser llevada a una columna donde se da
la separacin de los componentes presentes en tal muestra.

Los componentes bsicos de un sistema de UHPLC son:

depsitos de disolventes.
desgasificadores de disolventes
bombas de ultra alta presin de fase mvil
mezclador de disolventes
inyector de vlvula de muestra
columna analtica
detector
sistema de adquisicin de datos
el depsito de residuos.
El flujo de disolvente a travs de un sistema de UHPLC comienza en los depsitos
de solventes, donde se encuentran los solventes que sern utilizados para el
anlisis. Este es impulsado por las bombas despus de su desgasificacin.

El siguiente componente es el inyector de muestra, tambin conocido como la

vlvula de inyeccin. Esta cuenta un bucle de muestra de tamao adecuado para
el anlisis, inyecta tapones de muestra en la va de flujo. Para evitar daos en la
columna debido a la presencia de partculas es importante que se utilice un filtro
de muestra o un filtro de pre columna.

Despus de la inyeccin de la muestra, en la columna se realiza la separacin de

los componentes de la muestra encontrndose en la fase estacionaria pudiendo
ser esta la fase Normal o fase reversa.

Posteriormente, los componentes separados pasan a travs de un detector antes

de que pasen en el depsito de residuos.

Tipos de detectores.

incluyen absorbancia ptica

de fluorescencia
espectrometra de masas.

Diferencias entre HPLC YUHPLC

Las bombas van a tener una presin ms alta lo que hace que el flujo sea
mayor.
el tiempo es menor, lo que hace que esta tcnica sea muy eficiente.
El tamao de la partculas sera menor, el de la columna menor y el de la
inyeccin de muestra tambin.
Referencias.

https://www.idex-hs.com/education-and-tools/educational-materials/hplc-
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