PRCTICA No.

1 FACTORES QUE INFLUYEN EN LAS SEPARACIONES

CROMATOGRFICAS

Martnez Balmori Hctor Alejandro GRUPO: 6FM1

OBJETIVO

Analizar la influencia de algunos

factores que afectan las separaciones
cromatogrficas.

RESULTADOS
Figura 2. Efecto del volumen de muestra

VOLUMEN DE MUESTRA

l Ancho de mancha Intensidad del color de la
(mm) mancha

1 3 +++

2 4 ++

4 4.5 +

Tabla 2. Efecto del volumen de muestra en la intensidad del

Figura 1. Cromatogramas con diferencias en la polaridad color de la mancha.
de fase mvil (AcOEt, AcOEt:Hex 1:1, AcOEt:Hex 3:7)

POLARIDAD DEL DISOLVENTE

Disolvente Rf (Rojo de metilo) Rf (Sudn I)

AcOEt. 0.72 0.94

AcOEt:Hex 0.42 0.89 Figura 3. Efecto de la concentracin de la muestra

(1:1)

AcOEt:Hex 0.09 0.73

CONCENTRACIN DE LA MUESTRA
(3:7) g
mL Asimetra
Tabla 1. Efecto de la polaridad del disolvente (Fase Mvil) en
el Rf de la muestra.
1 No

5 S
 polar o de mediana polaridad dado que la
10 S FE es slica gel) y la FE.
Tabla 3. Efecto de la concentracin de la muestra en la
asimetra de la mancha. De acuerdo a la Figura 2 y la Tabla 1 se
observa que al emplear Acetato de
etilo:hexano (1:1), la polaridad del
eluyente disminuye y con esto los valores
de Rf de las muestras empleadas. Al
disminuir la polaridad del eluyente ste
pierde la capacidad de romper las
interacciones entre el analito y la FE, por
lo que el analito no eluye tanto.

De acuerdo a la Figura 3 y la Tabla 1 se

Figura 4.1 y 4.2 Efecto del disolvente (de la muestra) y observa que al emplear Acetato de
presencia de otros analitos en el Rf de la muestra. etilo:hexano (3:7), el eluyente es de baja
polaridad y ya no es capaz de romper las
interacciones entre el analito y la FE, por
lo que el analito es fuertemente retenido
EFECTO DE MATRIZ en la FE y por eso los valores de Rf son
mucho menores a 1. [1, 2, 3]
Disolvente Rf Otros analitos Rf
VOLUMEN DE MUESTRA.
MeCN 0.34 NaCl 0.23
De acuerdo a la Figura 4 y la Tabla 2 se
MeOH 0.36 Sacarosa 0.23
observa que entre el volumen de muestra
H2O 0.39 St 0.21 aplicada y el ancho de la mancha existe
una relacin directamente proporcional,
Tabla 4. Efecto del disolvente (de la muestra) y ya que al no tener un control adecuado
presencia de otros analitos en el Rf de la muestra.
de la aplicacin de la muestra, es decir, la
aplicacin deja de ser puntual, el
dimetro de la mancha aumenta.
Mientras que entre el volumen de
muestra y la intensidad del color de la
ANLISIS DE RESULTADOS mancha la relacin es inversamente
proporcional, la mancha ms grande es
POLARIDAD DEL DISOLVENTE. de un color ms tenue dado que la
muestra se encuentra diluida en un
De acuerdo a la Figura 1 y la Tabla 1 se volumen de disolvente mayor. El valor de
observa que al emplear Acetato de etilo, Rf no cambia debido a que la
que es un disolvente polar, como FM el concentracin de la muestra no cambia y
Rf de las muestras empleadas (Rojo de se trata del mismo analito. [1]
metilo y Sudn I) alcanza valores de casi
1, esto pone de manifiesto que al CONCENTRACIN DE LA
emplear un eluyente polar ste es capaz MUESTRA
de romper las interacciones (dipolo-dipolo
y puentes de Hidrgeno) entre el analito De acuerdo a la Figura 3 y la Tabla 3 se
(que se presume debe ser de carcter observa que conforme aumenta la
concentracin, se ve una marcada
asimetra en la mancha provocando el
fenmeno de coleo (alargamiento de la
mancha), dificultando as la elucin a
travs del sistema cromatogrfico
causando que la interaccin con la fase
estacionaria no sea homognea,
causando manchas de mayor tamao,
que conflicta la lectura del Rf, pues no
se conoce con exactitud el centro de la
mancha. [3]
.
la mancha en los tres casos es distinta,
en el caso del NaCl se presenta una
mayor intensidad en la coloracin, esto
se puede interpretar debido a que es un
compuesto inico capaz de solvatarse en
H2O, ocasionando una competencia por
los sitios activos de la fase estacionaria,
esto manifiesta la presencia de otros
analitos. [4]

CONCLUSIONES.
EFECTO MATRIZ
En un sistema cromatogrfico
Efecto de la naturaleza del disolvente
donde la FE es de naturaleza polar
de la muestra.
si se emplea un eluyente polar
ste rompe las interacciones entre
De acuerdo a la Figura 4.1 y Tabla 4 se
el analito y la FE, y arrastra al
observa que la polaridad de los
analito.
disolventes utilizados (CH3CN, MeOH,
H2O) para solubilizar la muestra aumenta
En un sistema cromatogrfico
de forma gradual, y el analito (rojo de
donde la FE es de naturaleza polar
metilo) al ser un compuesto de mediana
si se emplea un eluyente no polar
polaridad presenta mayor interaccion con
ste no rompe las interacciones
el CH3CN, es decir, una mayor solubilidad
entre el analito y la FE, y no
en ste favoreciendo una elucin con
arrastra al analito.
mayor eficiencia. En comparacin con el
MeOH y H2O estos presentan una mayor
Si el volumen de muestra aplicada
polaridad, provocando la menor
aumenta se presenta
solubilidad del analito, interfiriendo en la
ensanchamiento de las manchas,
interaccin con la fase estacionaria,
el Rf no cambia.
resultando en una menor coloracin de la
mancha, debido a la menor polaridad y A mayor volumen de muestra
disolucin del analito, dificultando as su
aplicada la coloracin de la
lectura. [4]
mancha disminuye.
Presencia de otros analitos.
Si la concentracin de la muestra
es excesiva se produce coleo y
De acuerdo a la Figura 4.2 y a la Tabla 4
esto puede modificar el valor de
se observa que el analito (rojo de metilo)
Rf.
fue sometido a distintos disolventes (H 2O,
sacarosa en H2O y NaCl en H2O), el
El disolvente de la muestra debe
primer analito es tomado como estndar,
solubilizarla por completo y ser
ya que no cuenta con algn otro
voltil.
componente (a diferencia de los
siguientes dos casos) que pueda
Analitos que posean un Rf similar
repercutir en las propiedades de la
al de la muestra competirn con
mancha, a pesar de presentar Rf
ella por los mismos sitios activos.
similares se observa que la coloracin de
REFERENCIAS. Expresa el grado de separacin que se
puede obtener en un sistema
1. Dominguez, Xorge Alejandro. 1975. cromatogrfico para dos componentes
Cromatografa en Papel y en Capa Delgada.
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Sitio web: distribucin de un soluto entre dos fases
3. http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/M. distintas.
Cromatogrficos_6700.pdf Fecha de consulta:
18/02/17
4. http://www.mncn.csic.es/docs/repositorio/es_E
Asimetra de pico.
S/investigacion/cromatografia/principios_de_cr
omatografia.pdf Fecha de consulta: 18/02/17 Para los picos gaussianos, el factor de
asimetra es igual a 1, si los picos
CUESTIONARIO. presentan cola, se asigna a As valor
positivo, y cuando los picos presentan
A. Defina brevemente los siguientes distorsin frontal, se le asigna valor
trminos. negativo.
Tipos de interacciones Efecto de matriz.
moleculares.
Efecto de todos los componentes de la
*Puentes de Hidrgeno. Enlace que se muestra distintos al analito de inters.
establece entre molculas capaces de
generar cargas parciales, se forman por
tomos de Hidrgeno localizados entre
tomos electronegativos. Cuando un B) Investiga dos aplicaciones de la
tomo de Hidrgeno est unido cromatografa en capa fina en el rea
covalentemente, a un tomo farmacutica.
electronegativo, asume una densidad (d)
de carga positiva, debido a la elevada *Control de calidad de la materia prima y
electronegatividad del tomo vecino. Esta del producto terminado, presencia de
deficiencia parcial en electrones, hace a impurezas.
los tomos de Hidrgeno susceptibles de
atraccin por los electrones no *Purificacin de mezclas.
compartidos en los tomos
electronegativos. C) Investiga los mecanismos de
separacin cromatogrfica en capa fina.
*Dipolo-dipolo. Consiste en la atraccin
electrosttica entre el extremo positivo de *Adsorcin: Retardo por interacciones
una molcula polar y el negativo de otra. (dipolo-dipolo o puentes de Hidrgeno)
de la superficie polar de la fase
*Fuerzas de dispersin. Fuerzas de tipo estacionaria (slica gel, almina, etc.) con
intermolecular. Dichas fuerzas tienen partes polares del analito.
lugar entre molculas de tipo no polar,
donde pueden encontrarse dipolos. *Particin: Retardo por interacciones
(fuerzas de dispersin) de la cadena
Resolucin. apolar de la fase estacionaria (C8, C18,
etc.) con partes apolares del analito.
*Intercambio inico: Retardo por
interacciones electrostticas entre la fase
estacionaria (resina de intercambio
catinico o aninico) y el analito (iones o
sustancias ionizables). [3,4]