Limitaciones de la ley de Lambert-Beer

Esta ley permite establecer una relacin lineal entre absorbancia y concentraciones de
una especie absorbente a una temperatura dada. La representacin de absorbancia frente
a concentracin es una recta que pasa por el origen. Sin embargo, se encuentran
frecuentes desviaciones con relacin a la proporcionalidad directa entre absorbancias y
concentraciones que limitan la aplicacin de la ley. Las principales causas son:
La concentracin. Slo es aplicable a disoluciones diluidas (menor 10-2 M); en
disoluciones concentradas la distancia entre partculas absorbentes es tan pequea que
se produce una modificacin en la distribucin de cargas de las mismas, lo que se traduce
en una alteracin en la capacidad de absorcin a una longitud de onda determinada. Este
efecto se puede eliminar mediante dilucin.
La interaccin entre el soluto y la radiacin debida a mecanismos diferentes a la
absorcin pero que producen alteraciones en la intensidad de la luz, tales como la
dispersin, reflexin, la fluorescencia, etc.
Utilizacin de radiacin no monocromtica, puesto que la ley est definida para
radiaciones con una sola longitud de onda. Sin embargo, si la calidad del equipo no es
buena, se obtienen bandas de radiaciones con un estrecho intervalo de longitudes de
onda.
Falta de uniformidad de la muestra o especie absorbente, o presencia de impurezas.
Desviaciones qumicas, debidas a reacciones del absorbente con el disolvente.

Detectores
Espectrmetro UV-Vis/NIR Jasco V-670, de doble haz, que cubre el rango de longitudes
de onda de 190 a 2700 nm.
El equipo dispone de un monocromador nico con doble red, una para la regin UV-Vis
(1200 surcos/mm) y otra para la regin NIR (300 surcos/mm).
Los detectores son un tubo fotomultiplicador para la regin UV-Vis y un detector de PbS
para la regin NIR. El cambio, tanto de los detectores como de las redes, se efecta de
forma automtica a una longitud de onda fijada por el usuario entre 750 y 900 nm. Las
fuentes utilizadas son una lmpara de deuterio (190 a 350 nm) y una lmpara halgena
(330 a 2700 nm).
Control de luz espuria accidental
La luz espuria accidental o errtica es toda luz que llega al detector sin haber atravesado
la muestra cuya absorbancia se quiere medir, pudiendo ser de la misma o de diferente
longitud de onda que la seleccionada. Se puede ver esquemticamente en figura 4.

La luz espuria se mide en porcentaje de transmitancia y es importante que

dicho porcentaje sea bajo. De lo contrario, se pueden producir desviaciones de
la linealidad instrumental, dado que llega al detector ms luz de la que
debera. El porcentaje mximo aceptado de luz espuria es del 1 %. Los
mtodos para detectar la luz espuria accidental incluyen filtros o soluciones
que son opacos en los rangos habituales de trabajo. As se puede utilizar una
cubeta de obstruccin de paso de luz (que es una cubeta pintada de negro o
sea un cuerpo negro) o bien una solucin hiperconcentrada de colorante. En
todos los casos se leer la transmitancia contra una cubeta con agua, a la
seleccionada dentro del visible. El valor ledo representa directamente el % de
luz espuria accidental. Adems de la luz espuria accidental existe la luz espuria
parsita, que es la radiacin electromagntica de longitud de onda distinta a la
seleccionada con el selector de que llega al detector, pasando o no por la
muestra. Es decir es luz de distinta (luz de distinto color) que la nominal.
Como consecuencia de ello, hay un aumento no deseado de transmitancia (o,
una disminucin de la absorbancia), dado que la luz espuria parsita no es
absorbida por la solucin en la misma proporcin que la nominal. Como este
fenmeno es ms frecuente en los extremos del espectro visible, es comn
utilizar para su deteccin paranitrofenol, que es un colorante que tiene su pico
de absorcin en uno de los extremos del visible (405 nm) donde se supone que
la luz parsita se observa en mayor proporcin. Este control de luz parsita
debe hacerse con una solucin hiperconcentrada en una zona de mxima
sensibilidad y el detector debe recibir luz, o sea que la solucin contenida en el
tubo debe permitir el pasaje de luz. Por ello no puede emplearse un cuerpo
opaco (cubeta negra) pues obstruira el pasaje de luz al detector de cualquier
tipo de luz espuria (parsita o accidental). La luz parsita est relacionada con
fallas en el sistema de monocromacin, especialmente cuando se utilizan redes
de difraccin donde la calidad de la misma puede variar segn su construccin.
Este control debe realizarse trimestralmente.