UNIVERSITATEA DIN BUCURESTI

CICLUL 1. LICENTA IN BIOCHIMIE

Biochimie metabolica

B
 1
Catabolismul lipidelor endogene

In adipocite, lipaza hormon sensibila la catecolamine, glucagon, ACTH (cAMP)

ATP E-OH Pi
TAG-triacilgliceroli
PKA PP AGL-acizi grasi liberi

ADP E-O-P H2O

TAG + 3 H2O Glicerol + 3 AGL

In stare de inanitie
E-OH E-O-P AGL degradare pt sinteza de ATP (muschi scheletici,

Acetil CoA cord)

corpi cetonici (ficat) pt alimentare creier
Glicerolul intra in gluconeogeneza
ATP NAD+
Glicerol Glicerol 3-P DHAP Glucoza
 2
-oxidarea acizilor grasi cale catabolica majora

1904 Franz Knoop caini hraniti cu derivati ai acizilor grasi care au in

pozitia un radical fenil in urina se detecteaza fenil acetat - -oxidare

1949 Eugene Kennedy si Albert Lehninger AG sunt oxidati in

mitocondrie

1) Activarea AG are loc in membrana externa a membranei mitocondriale

acid gras CoA sintetaze

R-COOH + ATP + CoASH R-CO~SCoA + AMP + PP

pirofosfataza
2 Pi
 3
2 etape distincte:
R-COOH + ATP R-CO~AMP + PP
R-CO~AMP + CoASH R-CO~SCoA + AMP

Hidroliza PP de catre pirofosfataza confera reactiei 1 un caracter ireversibil!

Exista 3 acil gras CoA sintetaze cu specificitati diferite fata de lungimea

catenei

Transportul acizilor grasi activati in mitocondrie

AG sunt activati pe membrana externa si oxidati in matricea mitocondriala

AG activati (R-CO~SCoA) cu catena lunga nu traverseaza membr.mit.interna
Transportul necesita prezenta unui sistem de transport special:
Carnitina (4-trimetil amino 3-hidroxi-butirat)
Carnitin acil transferaza (CAT)
Transportor (translocaza)
 4

2 izoenzime:
CAT -1 legata la membr mit externa, catalizeaza acilarea carnitinei
CAT-2 din matricea mitocondriala, catalizeaza dezacilarea Acil-carnitinei

Un defect genetic la nivelul CAT sau translocazei, o deficienta in carnitina gasit

la gemeni identici (dureri, crampe musculare din primele zile de viata; durerile
cresc in stare de inanitie, dupa un exercitiu fizic sustinut sau in cazul unei diete
bogate in grasimi). Normale: glicoliza, glicogenoliza, lipoliza TAG. Lipseste acid
gras CoA sintetaza activa fata de AG cu catena medie
 5

CAT 1

CAT 2
 Acyl CoA
H H Dehydrogenase H Reactiile 2-5 au
R-CH2 -C-C-COSCoA R-CH2 -C=C-COSCoA loc in mitocondrii
2
H H H trans-2 -enoyl CoA
FAD FADH2
H2 O R-CH2-CH2-CH2-COSCoA
3
Enoyl CoA Hydratase
L--Hydroxyacyl FADH2
-Ketoacyl CoA
CoA FAD
H H H
Dehydrogenase
R-CH2 -C-C-COSCoA R-CH2 -C-C-COSCoA NAD+ NADH
OH HO H L--Hydroxyacyl CoA
NADH NAD+
+ H+ 4 CoASH CH3CO~SCOA
CoASH
Thiolase
5
R-CH2-COSCoA
R-CH2 -C-SCoA CH3 -C-SCoA
+
O O
Urmeaza o noua runda de -oxidare
CH3 CH2 --CH2 CH2 --CH2 CH2 --CH2 CH2 --CH2 CH2 --CH2 CH2 --CH2 CH2 --CH2 COSCoA

7 cicluri de -oxidare

8 CH3COSCoA + 7 FADH2 + 7 NADH + 7 H+ 6

 Acil gras CoA Dehidrogenaza
7
Echivalentii de reducere de la FADH2 alimenteaza CTEM:

R-CH2-CH2-SCoA E-FAD EFT-FADH2 Fe3+-S QH2

R-CH=CH-SCoA E-FADH2 EFT-FAD Fe2+-S Q

ETF-FAD electron transfering protein

ETF:ubichinona reductaza
Genereaza 2 moli ATP la reoxidare

3 izoenzime: short (4-6 C).; medium (4-14). si long (12-18 C) chain acyl
CoA dehydrogenases
Tetramer A4, MMA 43 kDa, 1 FAD/monomer

Sudden infant death syndrome lipseste medium chain acyl CoA dehydrogenase
 8
Enoil CoA hidrataza transforma stereospecific:

trans-2-enoil L-3-hidroxi- dar si

cis-2-enoil D-3-hidroxi-

3-L-hidroxiacil gras dehidrogenaza Strict specifica pentru L-3-hidroxi-

Intra in CTEM genereaza 3 ATP
Bilant
Palmitat + 7 FAD + 7 NAD+ +7 H2O + 7 CoASH
8 Acetil CoA + 7 FADH2 + 7 NADH

7 3= 21 moli ATP
Ciclul Krebs 8 12= 96 moli ATP
7 2= 14 moli ATP
CTEM
96 + 14 + 21 = 131 moli ATP

Se scad 2 legaturi macroergice consumate in reactia 1 129 moli ATP

= (129 7,3)/2340 100 = 40 %

 9
-oxidarea acizilor grasi nesaturati

Ex.1. -oxidarea acidului palmitoleic 16:1 9cis

10 9

CH3-(CH2)5-CH=CH-(CH2)7-CO~SCoA

3 runde -oxidare

4 5

CH3-(CH2)5-CH=CH-CH2-CO~SCoA
cis-3-enoil SCoA
cis -trans
Enoil CoA izomeraza
Deplare dubla
legatura
4 3

CH3-(CH2)5-CH2-CH=CH-CO~SCoA
trans-2-enoil SCoA -oxidare normala
 10
Ex.2. -oxidarea acidului 18:2 6,9 all cis octadecadienoic

10 9 8 7 6

CH3-(CH2)7-CH=CH-CH2-CH=CH-(CH2)4-CO~SCoA

2 runde -oxidare

3 2

CH3-(CH2)7-CH=CH-CH2-CH=CH-CO~SCoA
Enoil CoA hidrataza

CH3-(CH2)7-CH=CH-CH2-CH-CH2-CO~SCoA
OH
3-D-hidroxi-enoil CoA

Epimeraza

3-L-hidroxi-enoil CoA -oxidare normala

 Cai minore de oxidare a acizilor grasi 11

-oxidarea AG cu numar impar de atomi de carbon

Unele plante, organisme marine exista AG cu nr impar de C sufera -oxidare in

final rezultand propionil CoA care intra in ciclul Krebs.

-oxidarea peroxizomala

Acid gras CoA + O2 acid gras CoA oxidaza (FAD) trans-2-enoil CoA + H2O2

Trans-2-enoil CoA hidrataza 3-L-hidroxi acil CoA dehidrogenaza 3-oxoacil CoA

Enzima difunctionala

3-oxoacil CoA + CoASH -tiolaza peroxizomala

Inactiva fata de AG < 8C

Faciliteaza -oxidarea mitocondriala, principial ca in mitocondrie, dar cu enzime

diferite; fara a fi necesara o translocaza, AG difuzeaza liber in peroxizomi; H2O2
este descompus de catalaza
 -oxidarea la animale 12

Hidroxilare la C, in RE si mitocondrii, implica o oxidaza cu functie

mixta, O2, NADPH si cit P450

CH3-(CH2)n-CH2-COOH CH3-(CH2)n-CH-COOH CH3-(CH2)n-C-COOH

OH O

CH3-(CH2)-COOH + CO2
-oxidarea la plante, seminte germinate

R-CH2-CH2-COOH acid gras peroxidaza R-CH2-CHO + CO2

13-18 C NAD+
H2O2 H2O
NADH
E-FAD
R-CH2-COOH R-CH2-CH2-OH
O2 E-FADH2
Alcool gras
Acid gras Cn-1
plante ceruite
 -oxidarea

Procesul are loc n peroxizomi

CH3(CH2)n -C00H CH2(CH2)n- C00H H00C- (CH2)n- C00H
0H

- apare in RE al multor tesuturi, sub actiunea oxidazei cu funcie mixta care

necesita 02, NADPH si citP45o
se formeaza acid adipic sau acid succinic.

13
UNIVERSITATEA DIN BUCURESTI

CICLUL 1. LICENTA IN BIOCHIMIE

Biochimie metabolica

A
 Corpii cetonici

Acetoacetatul, 3-hidroxibutiratul, acetona

Echivalenti energetici ai acizilor grasi, dar solubili in apa
Sintetizati in matricea mitocondriala ficat si rinichi
(intr-un grad mai mic)
Surse de energie pentru cord, muschi scheletici, creier
in stare de inanitie (lipsa de glucoza)

1
2
3
 Reglari metabolice in diabet si inanitie

Acizi grasi Corpi cetonici

1 2

Acetil CoA c.Krebs

Pir dehidrogenaza 5

Oxalacetat
Piruvat
Pir carboxilaza

glicoliza 3
Glucoza

activare
inhibitie
4
5
Reactie totala

2 CH3-CO~SCoA + H2O

2 CoASH

CH3-CO-CH2-COOH
acetoacetat

6
2 izoenzime -tiolaza una implicata in -oxidare
alta implicata in cetogeneza

2 izoenzime HMG-CoA sintaza in ficat

- una in mitocondrie sinteza corpilor cetonici
- una in citosol sinteza colesterolului

-hidroxi butirat dehidrogenaza

- asociata cu membrana interna a mitocondriei

Raportul [-HO-butirat]/[acetoacetat] = [NADH]/[NAD+]

din sangele care paraseste ficatul mitocondrial

7
 HEPATOCIT 8

Mitocondrie
Acizi grasi
-OXIDARE
SINTEZA CORPI CETONICI
-HO-butirat ` Acetoacetat ` HMG-CoA ` Acetoacetil CoA ` Acetil CoA

Ciclul Krebs

Citosol
SINTEZA COLESTEROL GLUCONEOGENEZA
Glucoza
Colesterol ` HMG-CoA ` Acetoacetil CoA ` Acetil CoA AmAcizi
SINTEZA AC GRASI Acizi grasi ` Malonil CoA
 9
Concept vechi corpii cetonici sunt deseuri metabolice

Concept actual corpii cetonici sunt combustibili metabolici, solubili

in apa, trec bariera sange-creier, au valoare energetic
similara acizilor grasi
-produsi in special de ficat, difuzeaza in sange, trans-
portati la tesuturi extra-hepatice, utilizati de creier
in lipsa glucozei (inanitie) si a insulinei (diabet)

Ficatul nu poate utiliza corpii cetonici, nu are CoA transferaza !

Acetoacetat CoA transferaza Acetoacetil CoA -tiolaza 2 AcetilCoA! Krebs

succinil CoA succinat ATP

GDP + P succinil CoA sintetaza GTP + CoASH ciclul Krebs

 13
1) Carboxilarea acetil CoA catalizata de acetil CoA carboxilaza

CH3-CO~SCoA + HCO3 + ATP OOC-CH2-CO~SCoA + ADP +P

La E.coli
1.Biotin carboxilaza
2.Transcarbomilaza
3.Proteina carrier a biotinei

E-biotina + HCO3 +ATP!

1 E-carboxi-biotina + ADP + P1

2
E-carboxi-biotina +acetil CoA!
Malonil CoA + E-biotina
Urmatoarele reactii au loc sub actiunea complexului AG sintazei 14

2.Formarea acetil SACP catalizata de acetil transacilaza (E1)

Acetil~SCoA + ACP-SH Acetil~SACP + CoASH

3.Formarea malonil SACP catalizata de malonil transacilaza (E2)

Malonil~SCoA + ACP-SH Malonil~SACP + CoASH

4. Condensarea acetil si malonil SACP 3-oxoacil ACP sintaza (E3)

CH3-CO~SACP + OOC-CH2-CO~SACP CH3-CO-CH2-CO~SACP

Acetil SACP Malonil SACP 3-oxoacil (acetoacetil) ACP
+ CO2 + ACP-SH

5. Reducerea 3-oxoacil ACP 3-oxoacil ACP reductaza (E4)

CH3-CO-CH2-CO~SACP + NADPH CH3-CH(OH)-CH2-CO~SACP +NADP+

3-D-hidroxiacil ACP
 15
6. Dezhidratare - 3-D-hidroxiacil ACP dehidraza (E5)

CH3-CH(OH)-CH2-CO~SACP CH3-CH=CH-CO~SACP
2-trans-enoil (crotonil) ACP

7. Reducerea - 2-trans-enoil ACP reductaza (E6)

CH3-CH=CH-CO~SACP + NADPH CH3-CH2-CH2-CO~SACP+NADP+

Reactiile 3-7 se repeta de 6 ori

Acetil SACP + 7 Malonil SACP + 14 NADPH+14H+ Palmitoil SACP +

+7CO2 + 14 NADP+

8. Hidroliza palmitoil SACP palmitoil tioesteraza (E7)

Palmitoil SACP + H2O Palmitat + ACP-SH

 16
Reactie totala:

8 Acetil CoA + 7 ATP + 14 NADPH+14 H+ Palmitat + 8 CoASH +

7 (ADP+Pi) + 14 NADP+

Complexul acid gras sintazei

Drojdie Mamifere
2400 kDa 260 kDa
66 2
Catena : ACP, E3, E4 Fiecare catena pliata in
Catena : E1, E2, E5, E6 3 domenii

Unitatea de intrare a substratelor si de condensare: E1, E2, E3

Unitatea de reducere: E4, E5, E6, ACP
Unitatea de eliberare a palmitatului
 17
E6 E7
E5 E4
E1
E2
E3
 18

Gr. Fosfopante-
tenil 20
flexibila
contacteaza
toate situsurile
active si toate
substratele
 19
Substratele sintezei acizilor grasi

ATP
CO2

8 moli Acetil CoA 8 moli Acetil CoA

8 moli NADPH
6 moli NADPH provin din suntul pentozo fosfatilor
 Reglarea sintezei acizilor grasi 20

Palmitoil
CoA
activa Inactiva
E-OH E-P
Partial activa

a) Reglarea la nivelul acetil CoA carboxilazei

 21
Acetil CoA Malonil CoA
+ -

Citrat Glucagon,epinefrina,
insulina AMP, palmitoil CoA

Fosforilarea E-OH catalizata de o protein kinaza diferita de PKA

Inanitie Glucagon, epinefrina PKA fosforileaza si inhiba

PPP-2A E-P inactiva nu are loc sinteza AG

Insulina fosforileaza PPP-2A la alt situs o activeaza E-OH

stimuleaza sinteza AG

Exista multi modulatori alosterici

 b) Intrarea acil CoA in matricea mitocondriala 22

-oxidare sinteza
citosol
R-COOH Acetil CoA

R-CO-SCoA Malonil CoA

Membrana interna CAT 1 -

R-CO-SCoA c
mitocondrie
[NADPH] mari inhiba 3-HO-D-acil
dehidrogenaza
[acetil CoA] mari inhiba -tiolaza
d

Control long term animale infometate, cu o dieta bogata in glucide, cu o dieta

saraca in lipide creste nivelul acetil CoA carboxilazei si a acid gras sintazei
23
 24
Elongarea si nesaturarea acizilor grasi

Produsul acid gras sintazei acidul palmitic

Sinteza AG mai lungi, la eucariote are loc in RE (major) si in mitocondrii

In RE enzime separate donorul de unitati cu 2 C malonil CoA reactii

similare cu cele din citosol
 Desaturarea acizilor grasi se realizeaza prin intermediul unei
CTE desaturante:

Diferite combinatii de reactii de alungire si nesaturare pot genera o

varietate de acizi grasi nesaturati

25