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In this paper, we describe the isolation and biodegradation activity of microorganisms on low density polyethyl-
ene. The microorganisms were collected from plastic materials with evidence of deterioration from a landfill. The
samples were filtered and selected in a mineral salts medium at pH 5.5 and 7 for bacteria and fungi respectively.
Six strains were isolated, identified as Pseudomonas sp. Hyalodendron sp., Penicillium sp. and Rhodotorula sp.
Microbial activity was evidenced by changes in the infrared spectrum of polyethylene with respect to the polymer
without treatment. Reduction of carbonyl index (83.89% at pH 7 and 4.08% at pH 5.5) and double bonds index
(19.77% at pH 7 and 6.47% at pH 5.5) were observed. Finally we determined the percentage of weight lost
Publicado impreso: 20/10/2010 by the polyethylene subjected to activity of the strains, with a decrease of 5.4% at pH 7 and 4.8% at pH5, 5.
Publicado online: 29/09/2010
Keywords: Spectroscopy, Polyethylene, Plastics, Biodegradation, Polymers.
Cepas
Microorganismo identificado
Aislamiento aisladas
a pH 7,0 MP3a Pseudomonas sp.
% Transmitancia
pH 7,0
MP3b Pseudomonas sp.
MP3a Penicillium sp.
Aislamiento MP3b Rhodotorula sp.
a pH 5,5 MP3c Hyalodendron sp.
MP4d Levadura no identificada
pH 5,5
Tabla 2. Reduccin del ndice del grupo funcional carbonilo y del ndice de terminaciones con dobles, durante el periodo de enriquecimiento
de la muestra de plstico 3.
110 110
Polietileno 105
105
100
100 95
95 90
85 1721,10
90
80 CO
% Transmitancia
1726,17
% T ransmitancia
85
CO 75 T=99,5%
A=0,0021
80 T=97% 70 1371,85
A=0,0132
75 65 C=C
60 T=85,5%
70 1371,77 A=0,0680
55
65 1465,32 C=C 50
T=82%
60 CH2 1465,59
A=0,0861 45
55
T=57%
40 CH2
A=0,2441
35 T=57,5%
50 A=0,2403
30
3000 2000 1000 4000 3000 2000 1000
4000
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el uso de glucosa u otra fuente de carbono, que es suprimida
115 del cultivo mediante pasajes sucesivos en determinados tiempos.
105 Ante esto, inferimos que el empleo de un precursor de creci-
miento en mnimas concentraciones ayudara a proponer el
95
desarrollo de un crecimiento moderado de los microorganismos
85 presentes en la muestra, para que luego estos sean recuperados
% Transmitancia
1727,97
eficazmente en un posterior periodo de seleccin con la fuente de
75
CO carbono en prueba, en este caso el polietileno de baja densidad.
65 T=97,2% 1371,05
Durante la segunda etapa de enriquecimiento, en el cual se
55
A=0,0123 C=C empleo slo MSM + PEBD, se pudo observar el desarrollo de
T=83,5%
45 A=0,0783 micelas y una biopelcula formada en la superficie de las perlas
1465,03 del polmero, lo cual resalt la importancia de esta muestra
35 C H2 para el posterior aislamiento de sus consorcios. El desarrollo de
25
T=57,9% biopelculas o micelas en la superfice del polietileno indicara la
A=0,2373 accin deteriorante o degradativa de microorganismos.
4000 3000 2000 1000 El FTIR corresponde a una alternativa rpida y de costo
moderado para evaluar la accin degradativa de algn agente
Wavenumbers (cm-1) sobre los polmeros sintticos (Lucas et al. 2008), mediante la
Figura 3. Anlisis FTIR del PEBD despus de 2 meses incubacin cuantificacin de la reduccin de los ndices de grupos funcio-
con el consorcio MP3 a pH 5,5. nales caractersticos del PEBD. El espectro infra-rojo (IR) se
analiza separando dos zonas referenciales; la primera es llamada
a 1700-1735 cm-1) y C=C (cercano a 1340-1410 cm-1), y la la regin de los grupos funcionales que va de 1200 a 3600 cm-1 y
absorbancia del pico de CH2 (cercano a 1465). la segunda denominada regin de huella digital que se despliega
Se obtuvo una reduccin de 5,4% del peso total de polietileno desde 600 a 1200 cm-1; esta ltima es una zona muy especfica,
bajo la accin del consorcio conformado solo por bacterias donde los picos son invariantes para un polmero, a menos
(pH 7,0). El porcentaje de peso perdido obtenido mediante el que este haya sufrido el efecto de algn agente qumico, fsico
empleo de las levaduras y los hongos aislados fue de 4,8% (pH o biolgico (Gulmine 2002). Es por esto que, por una simple
5,5), que si bien es menor, es un resultado significativo para las superposicin de los espectros podemos observar el efecto de los
condiciones en las que se desarroll la prueba. microorganismos sobre el polietileno tanto a pH 7,0 y pH 5,5. El
espectro IR denota cuantitativamente la reduccin de los ndices
Las pruebas realizadas utilizaron una nica fuente de carbono de carbonilo (C-O) y de las terminaciones con doble enlace
durante todo el periodo de incubacin, principal caracterstica (C=C). Durante el proceso de degradacin, el grupo funcional
de toda prueba de biodegradacin. Esto se aplic desde la carbonilo es liberado por accin de la luz UV y rpidamente
pre-seleccin de las cepas para realizar el aislamiento. Para el asimilado como fuente de energa por los microorganismos, que
primer cultivo de enriquecimiento decidimos emplear adems a su vez podra permitir la mayor degradacin de la estructura
de la fuente de carbono, un porcentaje muy pequeo (0,02%) principal de la molcula del polietileno, tambin compuesta por
de extracto de levadura en el medio; ya que anteriormente fue cadenas de enlaces dobles. Es por esto que la reduccin del ndice
probado con buenos resultados, aunque otros autores consideran de carbonilo obtenida en los cultivos a pH 7,0 guarda relacin
con la disminucin del ndice de terminaciones C=C, aunque Burgess-Cassler A., S.H. Imam & J.M. Gould 1991. High-Molec-
en esto tambin est involucrado el tipo de microorganismos ular-Weight Amylase Activities from Bacteria Degrading
presentes en el cultivo. Starch-Plastic Films. Applied And Environmental Micro-
biology 57:612-614.
Los gneros identificados en los consorcios del cultivo para Gulmine J.V., P.R. Janissek, H.M. Heise, et al. 2002. Polyethylene
MP3, son microorganismos mencionados en trabajos relaciona- characterization by FTIR. Polymer Testing 21 : 557563.
dos con biodegradacin y biodeterioro de plsticos; as tenemos a Hadad D., S. Geresh & A. Sivan 2005. Biodegradation of polyeth-
diferentes especies Pseudomonas, que son capaces de ejercer activi- ylene by the thermophilic bacterium Brevibacillus borstel-
dad degradativa sobre polmeros como el poliuretano (Howard ensis. Journal of Applied Microbiology 98: 10931100.
Howard G.T. 2002. Biodegradation of polyurethane: a review. Inter-
2002) y el cloruro de polivinilo, entre otras molculas, como el
national Biodeterioration & Biodegradation 49: 245 252.
polietilen-glicol (Obradors & Aguilar 1991), que tambin son Imam S.H. & Gould J.M. 1990. Adhesion of an Amylolytic Arthro-
presa de la versatilidad metablica de esta cepa (Wasserbauer et bacter sp. To Starch-Containing Plastic Films. Applied and
al. 1990). Diferentes especies de Bacillus son capaces de producir Environmental Microbiology 56: 872-876
una exoenzima que afecta al acetato de celulosa, material em- Ishigaki T., W. Sugano, M. Ike, et al. 2000. Enzymatic degradation
pleado para los revelados de Rayos X en medicina (Ishigaki et al. of cellulose acetate plastic by novel degrading bacterium
2000). Especies de Penicillium muestran su actividad degradativa Bacillus sp. S2055. Journal of Bioscience and Bioengineer-
sobre polietileno en asociacin con Bacillus sp. (Seneviratne et ing 90(4): 400-405.
al. 2006). Tambin han sido reportado biodeterioro ejercido por Johnson K. E., A.L. Pometto III & Z.L. Nikolov 1993. Degradation
of degradable starch-polyethylene plastics in a compost
algas, y otras especies de microorganismos como Sphingomonas
environment. Applied And Environmental Microbiology
sp., Arthrobacter sp. (Imam & Gould 1990), Streptomyces sp. 59: 1155-1161.
(Lee et al. 1990), Brevibacillus sp. (Hadad et al. 2005) y Fla- Koutny M., P. Amato, M. Muchova, et al. 2009. Soil bacterial strains
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vobacterium sp. (Koutny 2009). A esta lista, nuestro trabajo able to grow on the surface of oxidized polyethylene film
reporta Hyalodendron sp. containing prooxidant additives. International Biodeterio-
ration & Biodegradation 63: 354357.
La actividad microbiana sobre los plsticos est dada por Lee B., A.L. Pometto III, A. Fratzke, et al. 1990. Biodegradation
una accin enzimtica, muchos autores proponen que la misma of degradable plastic polyethylene by Phanerochaete
enzima iniciadora de la degradacin de hidrocarburos (alcano and Streptomyces species. Applied And Environmental
monoxigenasa) es la responsable del ataque microbiano sobre la Microbiology 57: 678-685.
superficie de los polmeros sintticos (Seneviratne 2006). Lucas N., C. Bienaime, C. Belloy , et al. 2008. Polymer biodegra-
dation: Mechanisms and estimation techniques. Chemo-
Cabe recalcar que la recuperacin de una cepa en un consor- sphere 73: 429442
cio de degradacin, no necesariamente indica que esta es capaz Martins S. M. & J.C. Marconato 2006. Polmeros Biodegradveis
de mineralizar por s sola el polmero en su plenitud. Se han uma Soluo Parcial Para Diminuir a Quantidade Dos
realizado estudios que indican que la presencia de hongos en Resduos Plsticos. Quim. Nova 29(4): 811-816.
este tipo de consorcios, genera la posibilidad de una duda en Obradors N. & J. Aguilar 1991. Efficient Biodegradation of High-
cuanto a su capacidad degradativa; y es que son tan verstiles Molecular-Weight Polyethylene Glycols by Pure Cultures
bioqumicamente, que podran estar tomando como fuente of Pseudomonas stutzeri. Applied And Environmental
Microbiology 57 (8): 2383-2388
de carbono, los productos de degradacin de las dems cepas
Orhan Y., J. Hrenovi & H. Bykgngr. 2004. Biodegradation
integrantes del consorcio, por lo cual, sera importante la elabo- of Plastic Compost bags under controlled soil conditions.
racin de pruebas de biodegradacin individualizadas para cada Acta Chim. Slov. 51: 579588.
microorganismo encontrado. Pometto III A.L., B. Lee & K.E. Johnson 1992. Production of
Agradecimientos an Extracellular Polyethylene-Degrading Enzyme(s)by
Streptomyces Species. Applied And Environmental Mi-
Los autores agradecemos al Dr. Pedro Castellanos, por la crobiology 58:731-733.
ayuda en la identificacin de los hongos. Scott G. 1990. Photo-biodegradable Plastics: Their Role in the
Protection of the Environment. Polymer Degradation and
Literatura citada
Stability 29: 135-154.
Allsopp M., A. Walters, D. Santillo, et al. 2007. Contaminacin Seneviratne G., N. S. Tennakoon, M. L. M. A. W. Weerasekara et al
por plsticos en los ocanos del mundo. GreenPeace.< 2006. Polyethylene biodegradation by a developed Peni-
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contaminaci-n-por-plasticos-en.pdf> (access: 16/01/2010) Wasserbauer R., M. Beranovti & D. Vancurovk 1990.Biodegradation
Bonhommea S., A. Cuerb, A.M. Delortb, et al. 2003 Environmental of polyethylene soils by bacterial and liver homogenates.
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