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CAPTULO DIECIOCHO
Espectroscopa
Raman
uando la radiacin atraviesa un medio
C
transparente, las especies presentes dis-
persan una fraccin del haz en todas
direcciones (seccin 6B.10). La difusin Raman es
resultado del mismo tipo de cambios vibracionales
cuantizados que se asocian con la absorcin
infrarroja. Por tanto, la diferencia de longitud de
onda entre la radiacin visible incidente y la
dispersada corresponde a las longitudes de onda
de la regin del infrarrojo medio. De hecho, en el
caso de una especie determinada, el espectro de
difusin de Raman y el espectro de absorcin
infrarrojo son a menudo muy parecidos entre s.
Como se explica en este captulo, en el caso de
algunos problemas, la espectroscopa en el
infrarrojo es la mejor herramienta, pero en el caso
de otros, la espectroscopa Raman proporciona
informacin ms til.
En todo el captulo, este smbolo indica una
oportunidad para estudiar en lnea. En el sitio
http://latinoamerica.cengage.com /skoog, encontrar
clases interactivas, simulaciones y ejercicios.
http://librosysolucionarios.net
En 1928, el fsico hind C. V. Raman descubri que
la longitud de onda visible de una pequea fraccin de la
radiacin dispersada por ciertas molculas diere de
la del haz incidente y, adems, que los desplazamientos
de la longitud de onda dependen de la estructura qu-
mica de las molculas causantes de la dispersin. Ra-
man fue galardonado con el Premio Nobel de Fsica en
1931 por su descubrimiento y por el estudio sistem-
tico de este fenmeno.1
Aunque hay similitudes impresionantes entre los
espectros Raman y los espectros en el infrarrojo, hay
sucientes diferencias entre las clases de grupos que
son activos en uno u otro para hacer que las tcnicas
sean complementarias y no competitivas. Una ventaja
importante de la espectroscopa Raman reside en que
en esta tcnica el agua es un solvente muy til. Ade-
ms, puesto que las seales por lo general estn en la
regin visible o en el infrarrojo cercano, se pueden uti-
lizar celdas de vidrio o de cuarzo, lo que evita el incon-
veniente de tener que trabajar con ventanas de cloruro
de sodio o de otros materiales inestables en la atms-
fera. A pesar de esas ventajas, la espectroscopa Ra-
man apenas empez a ser utilizada por los qumicos
cuando se pudo disponer de los rayos lser en los aos
sesenta, lo cual facilit la obtencin de espectros. En
los aos recientes la espectroscopa Raman se ha vuel-
to una herramienta de rutina gracias a los rayos lser,
los detectores en serie y la disponibilidad de instru-
mentos modernos comerciales de costo moderado.
18A TEORA DE LA ESPECTROSCOPA
RAMAN
Los espectros Raman se obtienen al irradiar una
muestra con una fuente potente de rayos lser de ra-
diacin monocromtica visible o infrarroja. Durante el
proceso se registra el espectro de la radiacin disper-
sada a un cierto ngulo, casi siempre 90, con ayuda de
un espectrmetro apropiado. Para evitar la uorescen-
cia, las longitudes de onda de la excitacin se eliminan
de una banda de absorcin del analito. El experimento
Raman se ilustr ya en la gura 6.18. Las intensidades
de las lneas Raman son, cuando mucho, un 0.001% de
la intensidad de la fuente. Debido a esto podra pare-
cer ms difcil detectar y medir las bandas Raman que
las bandas vibracionales en el infrarrojo. Sin embar-
go, la radiacin Raman difundida est en las regiones
1Un anlisis ms detallado acerca de la teora y la prctica de la espectros-
copia Raman se encuentra en J. R. Ferraro, K. Nakamoto y C. W. Brown,
Introductory Raman Spectroscopy, 2a. ed., San Diego: Academic Press,
2003; R. L. McCreery, Raman Spectroscopy for Chemical Analysis, Nueva
York: Wiley, 2000; D. P. Strommen en Handbook of Instrumental Analy-
sis, F. A. Settle, ed., cap. 16, Upper Saddle River, NJ: Prentice Hall, 1997;
Analytical Raman Spectroscopy, J. G. Grasseli y B. J. Bulkin, eds., Nueva
York: Wiley, 1991.
481
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482 Captulo 18 Espectroscopa Raman
Stokes Anti-stokes
j
j Eex  hnex
Eex  hnex
h(nex  nv)
v1 hnv v1
v0 v0
a)
PS
Stokes Anti-stokes
n man del tetracloruro de carbono que se obtuvo usando
nex  nv nex nex  nv
b)
FIGURA 18.1 Origen de los espectros Raman. En a) la
radiacin que procede de una fuente y que incide en
la muestra ocasiona dispersin en todas direcciones. La
radiacin incidente causa excitacin, a), hasta un nivel
virtual j y una reemisin posterior de un fotn de energa
baja (izquierda) o alta (a la derecha). El espectro Raman
b) consiste en emisiones de baja frecuencia llamada
difusin de Stokes y emisiones de frecuencia ms alta
denominadas difusin anti-stokes. Por lo regular, el nivel
vibracional fundamental (v  0) est ms altamente
poblado que los niveles de vibracin excitada, de modo
que las lneas de Stokes son ms intensas que las lneas
anti-stokes. La radiacin difundida elsticamente tiene la
misma frecuencia que el haz de excitacin y se denomina
difusin de Rayleigh.
visible y del infrarrojo cercano, para las cuales ya hay
detectores muy sensibles. En la actualidad, las medi-
ciones de los espectros Raman son casi tan fciles de
hacer como las de los espectros en el infrarrojo.
18A.1 Excitacin de los espectros Raman
En la gura 18.1, la muestra es irradiada con un haz
monocromtico de energa hnex. Como la longitud de
onda de la excitacin est muy lejos de una banda
de absorcin, se puede considerar que la excitacin
afecta un estado virtual del nivel energtico j, indicado
mediante la lnea discontinua de la gura 18.1a. Una
molcula en el nivel vibracional fundamental (v  0)
puede absorber un fotn de energa hnex y volver a emi-
tir un fotn de energa h(nex  nv), como se ilustra a la
izquierda en la gura 18.1a. Cuando la radiacin di-
fundida es de frecuencia ms baja que la radiacin de
excitacin se denomina difusin de Stokes. Las mo-
lculas en un estado vibracionalmente excitado (v  1)
pueden difundir tambin radiacin de manera inels-
tica y producir una seal Raman de energa h(nex  nv).
La radiacin difundida de una frecuencia ms alta que
la radiacin de la fuente se llama difusin anti-stokes.
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Asimismo, la dispersin elstica tambin se presenta
con emisin de un fotn de la misma energa que el fo-
tn de excitacin, hnex. La radiacin difundida de la
h(nex  nv)
misma frecuencia que la fuente recibe el nombre de di-
hnv fusin de Rayleigh. Observe que los desplazamientos
de la frecuencia de la radiacin difundida en forma
inelstica (nex  nv)  nex  nv y (nex  nv)  nex  nv
corresponden a la frecuencia de vibracin, nv. El es-
pectro Raman simplicado que corresponde a las tran-
siciones mostradas se proporciona en la gura 18.1b.
En la gura 18.2 se ilustra una parte del espectro Ra-
como fuente un rayo lser de ion argn cuya longitud
de onda es de 488.0 nm. Como es usual en los espectros
Raman, la abscisa de la gura 18.2 es el desplazamien-
to del nmero de onda n, que se dene como la dife-
rencia en nmeros de onda (cm1) entre la radiacin
observada y la de la fuente. Observe que hay tres l-
neas Raman a cada lado de las lneas de Rayleigh, y
que el patrn de desplazamiento es idntico en ambos
lados. Es decir, las lneas Stokes se encuentran en n-
meros de onda que son 218, 314 y 459 cm1 menores
que las lneas Rayleigh, y las lneas anti-stokes apare-
cen a nmeros de onda 218, 314 y 459 cm1, superiores
al nmero de onda de la fuente. Se debe subrayar que
tambin se pueden encontrar lneas adicionales a 762
y 790 cm1. Como las lneas anti-stokes son aprecia-
Rayleigh
459 Stokes Anti-stokes
Intensidad
314
218
218
314 459
500 400 300 200 100 0 100 200 300 400 500
Desplazamiento de Raman, cm1
FIGURA 18.2 Espectro Raman del CCl4, excitado con
una radiacin lser de lex  488 nm ( nex  20 492 cm1).
El nmero que aparece sobre las lneas Raman es el
desplazamiento Raman, n  nex  nv, en cm1. Con
frecuencia, las lneas de Stokes desplazadas tienen
valores positivos y no negativos como se muestra aqu.
(Tomado de J. R. Ferraro, K. Nakamoto, y C. W. Brown,
Introductory Raman Spectroscopy, 2a. ed, San Diego:
Academic Press, 2003. Reimpreso con autorizacin.)
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18A Teora de la espectroscopa Raman 483

3
Estado
2
electrnico
excitado
ms bajo 1

Difusin Difusin
de Rayleigh de Raman
E = hnex E = hnex E
E = hnex
Estados
E
virtuales
E = hnex

Anti-Stokes, E = hnex + E
Stokes, E = hnex E
FIGURA 18.3 Origen de la difusin de
Rayleigh y de Raman.

Estado 2
electrnico
fundamental 1
E
0

blemente menos intensas que las correspondientes l-
neas Stokes, slo se usa la parte Stokes de un espectro.
Adems, la abscisa de la grca lleva simplemente el
rtulo de nmero de onda n, cm1 en lugar de des-
plazamiento del nmero de onda n. Vale la pena
hacer notar que la uorescencia podra interferir de
manera importante en la observacin del desplaza-
miento de Stokes pero no en el anti-stokes. Por tanto,
en muestras uorescentes, las seales anti-stokes a ve-
ces son ms tiles a pesar de su menor intensidad.
Es importante tener en cuenta que la magnitud de
los desplazamientos Raman es independiente de la lon-
gitud de onda de excitacin. Por consiguiente, se ob-
servan desplazamientos Raman idnticos a los que se
muestran en la gura 18.2 para el tetracloruro de car-
bono sin importar que la excitacin se realice con un
lser de ion argn (488.0) o con uno de helio-nen
(632.8).
Supercialmente, los desplazamientos de Stokes y
Raman de energas inferiores (longitudes de onda ms
largas) son similares a los desplazamientos de Stokes
que se tienen en la uorescencia molecular (vase sec-
cin 6C.6). Sin embargo, como ya se ver, los espectros
Raman y los de uorescencia se producen a partir de
procesos esencialmente distintos.
18A.2 Mecanismos de la difusin
de Raman y de Rayleigh
En la espectroscopa Raman, la excitacin espectral se
realiza de ordinario con radiacin cuya longitud de
onda est muy alejada de la de las bandas de absorcin
del analito. El diagrama de niveles de energa de la
gura 18.1a se ampla en la gura 18.3 y proporciona
un panorama de las fuentes de difusin de Raman y de
Rayleigh. La echa gruesa de la izquierda representa
el cambio de energa de la molcula cuando interaccio-
na con un fotn procedente de la fuente. El aumento
de energa es igual a la energa del fotn hnex. Es im-
portante saber que el proceso que se indica no est
cuantizado y, por tanto, en funcin de la frecuencia de
la radiacin de la fuente, la energa de la molcula

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484 Captulo 18 Espectroscopa Raman
puede tomar cualquiera de los valores innitos o esta-
dos virtuales entre el estado fundamental y el primer
estado electrnico excitado, es decir, el ms bajo, que
se muestra en la parte superior del diagrama. La se-
gunda echa ms na, tambin a la izquierda, muestra
el tipo de cambio que ocurrira si la molcula alcanza-
da por el fotn estuviera en el primer nivel vibracional
del estado electrnico fundamental. A temperatura
ambiente, la fraccin de molculas que se encuentran
en este estado es pequea. Por consiguiente, como se
indica por la anchura de las echas, la probabilidad de
que ocurra este proceso es muy baja.
Las echas centrales representan los cambios que
originan la difusin de Rayleigh. De nuevo, el cambio
ms probable lo indica una echa ms gruesa. Observe
que no se pierde energa en la difusin de Rayleigh.
Como consecuencia, se dice que las colisiones que tie-
nen lugar entre el fotn y la molcula son elsticas.
Por ltimo, los cambios de energa que producen la
emisin Stokes y la anti-stokes se representan a la de-
recha. Las dos dieren de la radiacin de Rayleigh en
frecuencias correspondientes a E, la energa del
primer nivel vibracional del estado fundamental hnv.
Tenga en cuenta que si el enlace fuera activo en el in-
frarrojo, la energa de su absorcin sera tambin E.
Por tanto, el desplazamiento de la frecuencia de Raman y
la frecuencia de absorcin en el infrarrojo son idnticos.
Observe tambin que las poblaciones relativas de
los dos estados de energa superiores son tales que la
emisin Stokes se ve mucho ms favorecida que la an-
ti-stokes. Adems, es mucho ms probable que ocurra
la difusin de Rayleigh que la dispersin Raman por-
que el fenmeno ms probable es la transferencia
de energa a molculas en el estado fundamental y la
reemisin al retornar stas al estado fundamental. Por
ltimo, se debe hacer notar que la relacin entre las in-
tensidades anti-stokes y Stokes aumenta con la tem-
peratura porque, en estas circunstancias, es mayor la
fraccin de molculas que est en el primer estado vi-
bracionalmente excitado.
18A.3 Modelo ondulatorio de la difusin
de Raman y de Rayleigh
Suponga que un haz de radiacin con una frecuencia
nex incide sobre una solucin de un analito. El campo
elctrico E de esta radiacin se puede representar me-
diante la ecuacin
E  E0 cos(2pnext) (18.1)
donde E0 es la amplitud de la onda. Cuando el campo
elctrico de la radiacin interacta con la nube elec-
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trnica de un enlace del analito, se induce un momento
dipolar m en el enlace, que viene dado por
m  aE  aE0 cos(2pnext) (18.2)
donde a es una constante de proporcionalidad que se
denomina polarizabilidad del enlace. Esta constante
es una medida de la deformabilidad del enlace cuando
se encuentra en un campo elctrico.
La polarizabilidad a vara en funcin de la distancia
entre los ncleos de acuerdo con la ecuacin
0a
a  a0  1r  req 2 a b (18.3)
0r
donde a0 es la polarizabilidad del enlace a una dis-
tancia internuclear de equilibrio req y r es la separacin
internuclear en un instante dado. El cambio en la se-
paracin internuclear vara con la frecuencia de la vi-
bracin nv segn
r  req  rm cos(2pnv t) (18.4)
donde rm es la separacin internuclear mxima en
relacin con la posicin de equilibrio.
Al sustituir la ecuacin 18.4 en la 18.3 se obtiene
0a
a  a0  a b r cos12pnv t2 (18.5)
0r m
Entonces es posible obtener una expresin para el mo-
mento dipolar m sustituyendo la ecuacin 18.5 en la
18.2. Por consiguiente,
m  a0 E0 cos12pnex t2
0a
 E0 rm a b cos12pnv t2 cos12pnex t2 (18.6)
0r
Si se aplica la identidad trigonomtrica para el pro-
ducto de dos cosenos
cos x cos y  3cos1x  y2  cos1x  y 2 4/2
se obtiene, a partir de la ecuacin 18.6
m  a0E0 cos12pnext 2
0a
rm a b cos3 2p1nex  nv 2t 4
E0

2 0r
0a
r a b cos3 2p1nex  nv 2t 4
E0
 (18.7)
2 m 0r
El primer trmino en esta ecuacin representa la di-
fusin de Rayleigh, que tiene lugar en la frecuencia de
excitacin nex. El segundo y el tercer trminos de la
ecuacin 18.7 corresponden, respectivamente, a las fre-
cuencias Stokes y anti-stokes de nex  nv y de nex  nv.
En este caso, la frecuencia de excitacin ha sido mo-
dulada por la frecuencia vibracional del enlace. Es im-
portante resaltar que las reglas de seleccin de la
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18A Teora de la espectroscopa Raman 485

difusin Raman requieren que la polarizabilidad vare
durante la vibracin; es decir, 0a/0r en la ecuacin 18.7
debe ser mayor que cero para que aparezcan lneas
Raman. Las reglas de la seleccin tambin pronostican
que las lneas Raman que corresponden a los modos
fundamentales de vibracin se presentan con n 
1. Al igual que con la espectroscopa en el infrarro-
jo, surgen transiciones de sobretonos ms dbiles en
n  2.
Ya se hizo notar que en el caso de un enlace deter-
minado, el desplazamiento de energa observado en un
experimento Raman debera ser idntico a la energa
de sus bandas de absorcin en el infrarrojo, siempre
que los modos de vibracin sean activos tanto en el in-
frarrojo como en la difusin Raman. En la gura 18.4
se ilustra la semejanza de los dos tipos de espectros; se
puede comprobar que existen varias bandas con valo-
res idnticos de n y n en los dos compuestos. No obs-
tante, tambin hay que destacar que las intensidades
de las bandas correspondientes son a menudo muy dis-
tintas. Adems, ciertos picos que se observan en uno
de los espectros estn ausentes en el otro.
No es sorprendente encontrar diferencias entre un
espectro Raman y uno infrarrojo si se considera que
los mecanismos bsicos, aunque dependen de los mis-
Clase interactiva: aprenda ms acerca de los
espectros Raman e infrarrojo.
mos modos vibracionales, surgen de procesos que son
diferentes desde el punto de vista mecnico. La absor-
cin en el infrarrojo requiere que haya un cambio en el
momento dipolar o en la distribucin de carga durante
la vibracin. Slo as la radiacin de la misma frecuen-
cia puede interactuar con la molcula e impulsarla a un
estado vibracional excitado. Por el contrario, la di-
fusin necesita una distorsin momentnea de los
electrones distribuidos alrededor de un enlace de la
molcula, seguida por la reemisin de la radiacin
cuando el enlace vuelve a su estado normal. En esta
forma distorsionada, la molcula est temporalmente
polarizada, es decir, produce de manera momentnea
un dipolo inducido que desaparece cuando hay rela-
jacin y reemisin. Debido a esta diferencia funda-
mental en el mecanismo, la actividad Raman de un
modo vibracional determinado puede diferir marca-
damente de su actividad en el infrarrojo. Por ejemplo,
una molcula homonuclear, como el nitrgeno, el cloro
o el hidrgeno, no tiene momento dipolar ni en la posi-
cin de equilibrio, ni cuando la vibracin de tensin
hace que cambie la distancia entre los dos ncleos. Por
consiguiente, no puede haber absorcin de la radia-
cin infrarroja con frecuencia igual a la de vibracin.
Por otra parte, la polarizabilidad del enlace entre los
dos tomos de estas molculas vara peridicamente
en fase con las vibraciones de tensin y llega al m-
ximo cuando la separacin es mxima, y al mnimo

10 100
IR
Intensidad de Raman

8 80

Transmisin IR
CH3
6 60

4 H 3C CH3 40
Mesitileno
2 20
Raman
0 0
4000 3500 3000 2500 2000 1800 1600 1400 1200 1000 800 600 400 200 0

10 100
IR
Intensidad de Raman

8 80
Transmisin IR

6 60

4 40
Indeno
2 20
Raman
0 0
4000 3500 3000 2500 2000 1800 1600 1400 1200 1000 800 600 400 200 0
 o bien,  (cm1)

FIGURA 18.4 Comparacin de espectros Raman e infrarrojo para mesitileno e indeno.

(Cortesa de Perkin-Elmer Corp., Norwalk, CT.)

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486 Captulo 18 Espectroscopa Raman
cuando el acercamiento es el mayor posible. Por ello se
obtiene un desplazamiento Raman cuya frecuencia
corresponde a la del modo vibracional.
Es interesante comparar las actividades en el infra-
rrojo y en Raman de modos vibracionales acoplados,
como los descritos antes (seccin 16A.5) para la mo-
lcula de dixido de carbono. En el modo simtrico no
ocurre ningn cambio en el momento dipolar cuando
los dos tomos de oxgeno se alejan o se aproximan al
tomo de carbono central y, por tanto, este modo de
vibracin es inactivo en el infrarrojo. Sin embargo, la
polarizabilidad oscila en fase con la vibracin porque
la distorsin de los enlaces es ms fcil cuando se alar-
gan y ms difcil cuando se acortan. Este modo de vi-
bracin se asocia con la actividad Raman.
En cambio, el momento dipolar del dixido de car-
bono ucta en fase con el modo de vibracin asim-
trico. Por tanto, se produce una banda de absorcin en
el infrarrojo en este modo de vibracin. Por otra parte,
como la polarizabilidad de uno de los enlaces aumenta
al alargarse, la polarizabilidad del otro disminuye, lo
cual no ocasiona ningn cambio neto en la polarizabi-
lidad molecular. Por consiguiente, la vibracin de ten-
sin asimtrica no tiene actividad Raman. En lo que se
reere a molculas con un centro de simetra, como el
CO2, ninguna transicin activa en el infrarrojo tiene
algo en comn con las transiciones activas en Raman.
A menudo, esto se conoce como principio de exclusin
mutua.
Con frecuencia, como en los ejemplos anteriores,
partes de los espectros Raman e infrarrojo son com-
plementarias, y cada una se asocia con un conjunto dis-
tinto de modos de vibracin dentro de una molcula.
En los casos de molculas que no son centrosimtricas,
muchos de los modos de vibracin pueden ser activos
tanto en Raman como en el infrarrojo. Tal es el caso de
todos los modos de vibracin del dixido de azufre,
que produce bandas en ambos. Sin embargo, las inten-
sidades de las bandas son diferentes porque la proba-
bilidad de las transiciones es distinta para los dos
mecanismos. Muchas veces, los espectros Raman son
ms sencillos que los espectros infrarrojos, porque es
raro que haya sobretonos y bandas de combinacin.
18A.4 Intensidad de las bandas
Raman normales
La intensidad o potencia de una banda Raman normal
depende de forma compleja de la polarizabilidad de la
molcula, la intensidad de la fuente y la concentracin
del grupo activo, adems de otros factores. Cuando no
hay absorcin, la potencia de la emisin Raman au-
menta con la cuarta potencia de la frecuencia de la
fuente. No obstante, pocas veces puede aprovecharse
esta ventaja debido a la probabilidad de que la radia-
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cin ultravioleta origine una fotodescomposicin del
analito.
Las intensidades Raman suelen ser directamente
proporcionales a la concentracin de la especie activa.
Desde este punto de vista, la espectroscopa Raman se
parece ms a la uorescencia que a la absorcin, en la
cual la relacin entre la intensidad y la concentracin
es logartmica.
18A.5 Relaciones de despolarizacin Raman
Adems de la informacin relacionada con la fre-
cuencia y la intensidad, las mediciones Raman pro-
porcionan una variable ms que a veces es til para
determinar las estructuras moleculares, a saber, la re-
lacin de despolarizacin.2 En este caso, es importante
distinguir con cuidado entre los trminos polarizabili-
dad y polarizacin. El primer trmino describe una
propiedad molecular que tiene que ver con la defor-
mabilidad de un enlace. En cambio, la polarizacin es
una propiedad del haz de radiacin y describe el plano
en el que vibra la radiacin.
Cuando se obtienen los espectros Raman mediante
una radiacin polarizada en un plano, como cuando
se utiliza una fuente lser, se observa que la radiacin
dispersada est polarizada en distintas direcciones, lo
cual depende del tipo de vibracin responsable de la
difusin. La naturaleza de este efecto se ilustra en
la gura 18.5, en este caso la radiacin procedente de
una fuente lser est polarizada en el plano yz. Parte
de la radiacin dispersada resultante est polarizada
paralelamente al haz original, es decir, en el plano xz;
la intensidad de esta radiacin se simboliza por el sub-
ndice ||. El resto del haz dispersado est polarizado en
el plano xy que es perpendicular a la polarizacin del
haz original; la intensidad de esta radiacin, polarizada
perpendicularmente, se indica con el subndice . La
relacin de despolarizacin p se dene como
I
p (18.8)
I||
Desde el punto de vista experimental, la relacin de
despolarizacin se obtiene insertando una lmina Po-
laroid u otro polarizador entre la muestra y el mono-
cromador. Los espectros se obtienen cuando el eje de
la lmina est orientado paralelamente primero al
plano xz y luego al plano xy, tal como se indica en la
gura 18.5.
La relacin de despolarizacin depende de la si-
metra de las vibraciones causantes de la difusin. Por
ejemplo, la banda del tetracloruro de carbono a 459
cm1 (gura 18.2) proviene de una vibracin de res-
piracin totalmente simtrica que involucra el movi-
2 D. P. Strommen, J. Chem. Educ., 1992, 69, p. 803.
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18B Instrumentos 487

Polarizador
perpendicular
z

Muestra I
y Radiacin
I|| dispersada
parcialmente
x despolarizada

Radiacin Polarizador
polarizada paralelo
del lser

I
Relacin de despolarizacin = p =
I||

FIGURA 18.5 Despolarizacin resultante de la difusin Raman.

miento simultneo de los cuatro tomos de cloro, que 18B.1 Fuentes

forman un tetraedro, hacia el tomo de carbono cen-
tral o bien alejndose de l. La relacin de despola-
rizacin es 0.005, lo que indica una despolarizacin
mnima. Por eso se dice que la lnea a 459 cm1 est po-
larizada. En cambio, las bandas del tetracloruro de
carbono a 218 y 314 cm1, que provienen de vibracio-
nes no simtricas, presentan relaciones de despola-
rizacin de casi 0.75. De acuerdo con la teora de la
difusin es posible demostrar que la despolarizacin
mxima para las vibraciones no simtricas es de 6/7, y
para las vibraciones simtricas la relacin es siempre
menor a este valor. Por tanto, la razn de despolari-
zacin es til para correlacionar las lneas Raman con
los modos de vibracin.
18B INSTRUMENTOS
Los instrumentos para la espectroscopa Raman mo-
derna constan de una fuente lser, un sistema para ilu-
minar la muestra y un espectrmetro apropiado, como
se ilustra en la gura 18.6.3 Sin embargo, las caracte-
rsticas de funcionamiento de estos componentes son
ms rigurosos que para los espectrmetros molecu-
lares que ya se describieron debido a la inherente de-
bilidad de la seal de difusin de Raman comparada
con la seal producida por la difusin de Rayleigh.
3Si desea un panorama de los instrumentos adecuados para Raman, vase
C. M. Harris, Anal. Chem., 2003, 75, p. 75A y 2002, 74, p. 433A.
Las fuentes utilizadas en la espectrometra Raman
moderna son casi siempre rayos lser porque su alta in-
tensidad es necesaria para producir difusin Raman lo
sucientemente intensa como para poderse medir con
una relacin seal-ruido razonable. En la tabla 18.1 se
enumeran cinco de los rayos lser ms utilizados en la
espectroscopa Raman. Como la intensidad de la dis-
persin Raman vara con la cuarta potencia de la fre-
cuencia, las fuentes de ion argn y criptn, que emiten
en la regin azul y verde del espectro, tienen esta ven-
Celda de
la muestra Selector
de longitud Transductor de
la radiacin
de onda
Sistema
de datos
de la
computadora
Fuente del
rayo lser
FIGURA 18.6 Diagrama de bloques de un espectrmetro
Raman. La radiacin de rayo lser se dirige hacia la celda
de la muestra. La difusin Raman se mide por lo regular
en ngulos rectos para evitar ver la fuente de radiacin. Un
selector de longitud de onda asla la regin del espectro
deseada. El transductor convierte la seal Raman en una
seal elctrica proporcional que es procesada mediante el
sistema de datos de la computadora.

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SKOOG_CAP_18_4tas 3/25/08 9:02 AM Page 488

488 Captulo 18 Espectroscopa Raman

TABLA 18.1 Algunas fuentes lser comunes en gunos solventes son capaces de absorber la radiacin
espectroscopa Raman. Raman incidente o dispersada. Por consiguiente, se re-
quiere ms de una fuente o varias fuentes de longi-
Tipo de lser Longitud de onda, nm tudes de onda mltiples.
Ion argn 488.0 o bien 514.5 18B.2 Sistema de iluminacin de la muestra
Ion criptn 530.9 o bien 647.1
La manipulacin de las muestras en espectroscopa
Helio-nen 632.8
Raman es ms sencilla que en espectroscopa en el in-
De diodos 785 o bien 830
frarrojo porque se puede usar vidrio para las ventanas,
Nd-YAG 1064
las lentes y otros componentes pticos, en lugar de los
haluros cristalinos que resultan ms frgiles y me-
taja sobre las otras fuentes de la tabla. Por ejemplo, la nos estables en la atmsfera. Adems, la fuente lser
lnea del ion argn a 488 nm proporciona lneas Ra- se puede enfocar con facilidad sobre una zona peque-
man que son casi tres veces ms intensas que las que a de la muestra y la radiacin emitida tambin se
produce la fuente helio/nen, para la misma potencia puede enfocar de manera ecaz sobre la rendija de en-
de entrada. No obstante, estas fuentes de longitud de trada o salida de un espectrmetro. El resultado es que
onda corta tienen la capacidad de ocasionar uores- se pueden examinar muestras muy pequeas. De he-
cencia importante, as como fotodescomposicin de la cho, un portamuestras comn para muestras lquidas
muestra. no absorbentes es un capilar ordinario como los que
Las dos ltimas fuentes de la tabla, que emiten ra- se usan para medir el punto de fusin del vidrio.
diacin del infrarrojo cercano, se usan cada vez ms Muestras gaseosas
como fuentes de excitacin porque presentan dos ven-
Por lo regular, los gases estn contenidos en recipien-
tajas importantes sobre los rayos lser de longitud de
tes de vidrio de 1 a 2 cm de dimetro y de casi 1 mm de
onda ms corta. La primera es que pueden funcionar a
espesor. Tambin se puede introducir el gas en tubos
potencias muy superiores (hasta 50 W), sin ocasionar
capilares pequeos y luego sellarlos. En el caso de dis-
fotodescomposicin de la muestra. La segunda es que
persores dbiles se puede utilizar un aparato externo de
carecen de energa suciente para poblar una cantidad
importante de estados electrnicos energticos capa-
ces de producir uorescencia en la mayora de las mo-
lculas. Por tanto, la uorescencia es en general mucho
menos intensa o inexistente con estos rayos lser. El
rayo lser de Nd-YAG (siglas en ingls de granate de A
aluminio e itrio impuricado con iones de neodimio),
que se usa en los espectrmetros Raman de transforma-
da de Fourier es particularmente efectivo para elimi-
nar la uorescencia. Las dos lneas del lser de diodos
en serie a 782 y 830 nm tambin reducen en gran me-
dida la uorescencia en la mayora de los casos.
En la gura 18.7 se ilustra un ejemplo en el que la
fuente de Nd-YAG elimina por completo la uores-
cencia de fondo. La curva superior se obtuvo con un
equipo Raman ordinario que utiliza la lnea a 514.5 nm
del lser de ion argn para la excitacin. Se trata de
una muestra de antraceno, y la mayor parte de la seal B
registrada procede de la uorescencia del compuesto.
La curva inferior gris procede de la misma muestra, 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500
pero se registr con un espectrmetro de transforma- Desplazamiento Raman, cm1
da de Fourier equipado con un lser de Nd-YAG que FIGURA 18.7 Espectros del antraceno tomados con un
emite a 1064 nm. Observe la ausencia total de uores- instrumento Raman ordinario con una fuente de rayo lser
cencia en la seal de fondo. de ion argn a 514.5 nm en (A) y con un instrumento
La longitud de onda de excitacin se debe escoger Raman de transformada de Fourier con una fuente Nd-
con todo cuidado en la espectrometra Raman. No YAG a 1064 nm en (B). (Tomado con autorizacin de B.
slo la fotodescomposicin y la uorescencia repre- Chase, Anal. Chem., 1987, 59, p. 881A. Figura 5, p. 888A.
sentan problemas, sino que las muestras con color y al- Copyright 1987 American Chemical Society.)

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M1
M2
a)
L1
Rayo
L2 lser
L1
Rayo
lser
b)
d)
FIGURA 18.8 Sistemas de iluminacin para la muestra en la espectrometra Raman. En a) Se ilustra una celda
para gas con espejos externos para pasar el rayo lser a travs de la muestra varias veces. b) Las celdas para
lquidos pueden ser capilares. c) O celdas cilndricas. d) Los slidos se pueden estudiar en la forma de polvos
comprimidos en capilares o como pastillas de KBr.
pasos mltiples con espejos que se muestra en la gura
18.8a. La difusin Raman resultante perpendicular al
tubo de la muestra y al haz lser de excitacin se en-
foca luego en la rendija de entrada del espectrmetro
mediante una lente potente (L2 en la gura).
Muestras lquidas
Los lquidos pueden estar contenidos en ampollas, tu-
bos de vidrio o capilares sellados. En la gura 18.8b y
c se muestran dos de los diversos sistemas para ilumi-
nar lquidos. En la gura 18.8b se ilustra una celda
capilar. Los capilares pueden medir de 0.5 a 0.1 mm de
dimetro y 1 mm de largo. Los espectros de volmenes
de muestra en nanolitros se pueden obtener mediante
celdas capilares. Una celda capilar grande, como la
que se ilustra en la gura 18.8c se utiliza si se desea re-
ducir el calentamiento local, sobre todo en las mues-
tras absorbentes. El rayo lser se enfoca en una zona
cercana a la pared para reducir al mnimo la absorcin
del rayo incidente. Con frecuencia se consigue una re-
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18B Instrumentos 489
Rendija
L2
L2
L1
Muestra en KBr
Rayo
lser
c)
KBr
duccin mayor del calentamiento local si se hace girar
la muestra.
La ventaja principal en cuanto a la manipulacin
de la muestra en espectroscopa Raman comparada
con la espectroscopa en el infrarrojo es que el agua es
un dispersor Raman dbil que absorbe fuertemente la
radiacin infrarroja. Por ello, las soluciones acuosas se
pueden estudiar por espectroscopa Raman, pero con
muchas dicultades en el infrarrojo. Esta ventaja es
particularmente importante para los sistemas biol-
gicos e inorgnicos y para los estudios relacionados
con la contaminacin del agua.
Muestras slidas
A menudo, los espectros Raman de muestras slidas
se obtienen al llenar una pequea cavidad o un capilar
con la muestra namente pulverizada. Por lo general,
los polmeros se pueden examinar directamente sin
tratamiento previo de la muestra. En algunos casos se
utilizan pastillas de KBr similares a las que se usan en
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490 Captulo 18 Espectroscopa Raman
Fibra de
emisin
Fibra de excitacin Monocromador
a)
Microscopio Muestra
Sonda
Fibras de
Rayo entrada
lser b) Fibras de
recoleccin
A la rendija del
monocromador
c)
FIGURA 18.9 Espectrmetro Raman con sonda de bra
ptica. En a) el objetivo de un microscopio enfoca la
radiacin lser en las bras de excitacin que transportan
el rayo hasta la muestra. La difusin Raman es
recolectada por las bras de emisin y transportada hasta
la rendija de entrada de un monocromador o hasta la
entrada de un interfermetro. Un transductor de
radiacin, como un tubo fotomultiplicador, transforma la
intensidad de la luz difundida en una corriente
proporcional o en una relacin de pulsos; b) vista del
extremo de la sonda; c) vista del extremo de las bras de
recoleccin en la rendija de entrada del monocromador.
Los crculos sombreados representan la bra de entrada
y los crculos sin sombrear, las bras de recoleccin.
(Adaptacin de R. L. McCreery, M. Fleischmann y P.
Hendra, Anal. Chem., 1983, 55, p. 146. Figura 1, p. 147.
Copyright 1983 American Chemical Society.)
la espectroscopa en el infrarrojo, como se muestra
en la gura 18.8d. La mezcla con KBr tiene la aptitud
de reducir la descomposicin de la muestra producida
por el calentamiento local.
Muestreo con bra ptica
Una de las ventajas importantes de la espectrometra
Raman es que utiliza radiacin visible o infrarroja cer-
cana que puede transmitirse a travs de una distancia
considerable (tanto como 100 m o ms) por medio de
bra ptica. En la gura 18.9 se muestra el esquema
de un instrumento Raman caracterstico para el mues-
treo que usa una sonda de bra ptica. En este caso, se
usa la lente del objetivo de un microscopio para enfo-
C. Se us una fuente de rayo
car el haz de excitacin lser sobre un extremo de una
bra de excitacin de un conjunto de ellas. Estas bras
llevan la radiacin de excitacin a la muestra y pueden
estar sumergidas en muestras lquidas o ser usadas
para iluminar slidos. Una segunda bra o haz de -
bras recolecta la dispersin Raman y la transporta a la
rendija de entrada del espectrmetro. En la actualidad
Transductor
se dispone de diversos instrumentos comerciales equi-
pados con dichas sondas.
El espectro Raman que se presenta en la gura
18.10 ilustra de qu manera se puede utilizar una son-
da de bra ptica para supervisar procesos qumicos.
En este caso, la sonda de bra ptica se us para vigi-
lar la cristalizacin de gota colgante de la aprotinina
(un inhibidor de la proteasa llamada serina) y (NH4)2
SO4 en solucin acuosa. Las bandas Raman fueron
atribuidas tanto a la protena como a la sal. Mediante
tcnicas quimiomtricas se correlacionaron los cam-
bios en el espectro durante la cristalizacin con el
Al objetivo
del microscopio
agotamiento tanto de la protena como de la sal. Los
autores fueron capaces de determinar con exactitud la
supersaturacin de la aprotinina aplicando esta tcnica.
Las sondas de bra ptica estn demostrando ser
muy tiles para obtener espectros Raman en lugares
alejados del sitio donde se halla la muestra. Entre los
ejemplos estn los ambientes hostiles, como reacto-
res peligrosos o sales fundidas, muestras biolgicas,
como tejidos o paredes de las arterias, y muestras am-
bientales, como agua subterrnea o de mar.
Microsondas Raman
Un accesorio de gran aceptacin para los espectrme-
tros Raman es la microsonda Raman. Los primeros in-
tentos en la microscopa Raman se realizaron en los
aos setenta. En la actualidad, varias compaas fabri-
can accesorios para microsondas. En stos, la muestra
se coloca en el portaobjetos de un microscopio don-
de se le ilumina con luz visible. Despus de seleccionar
la zona que se desea ver y de ajustar el foco, la lm-
para de iluminacin se desactiva y el rayo lser de ex-
1.0E08
Intensidad relativa
8.0E07
6.0E07
4.0E07
2.0E07
0.0E00
3200 2700 2200 1700 1200 700 200
Desplazamiento de Raman, cm1
FIGURA 18.10 Espectro Raman de una solucin acuosa
que contiene aprotinina (100 mg/mL) y (NH4)2SO4 (1.0 M)
en una solucin amortiguadora de acetato de sodio
50 mM a un pH de 4.5 y 24
lser de diodo a 785 nm con un detector con dispositivo
de acoplamiento de carga. (Tomado de R. E. Tamagawa,
E. A. Miranda y K. A. Berglund, Cryst. Growth Des., 2002,
2, p. 511. Figura 1, p. 512. Copyright 2002 American
Chemical Society.)
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SKOOG_CAP_18_4tas 3/25/08 9:02 AM Page 491
Fibra de
excitacin
PB
Lser de
Sonda para
la muestra
RB
Muestra
Red
DAC
citacin se dirige hacia la muestra. Con los equipos
pticos modernos, la microsonda Raman puede con-
seguir espectros de alta calidad sin preparacin de la
muestra, en cantidades de picogramos y con una re-
solucin espacial de 1 m.
18B.3 Espectrmetros Raman
Hasta comienzos de los aos ochenta, los espectr-
metros Raman tenan diseos semejantes y utilizaban
el mismo tipo de componentes que los instrumentos
dispersivos ultravioleta-visible clsicos descritos en la
seccin 13D.3. Casi todos empleaban sistemas de do-
ble red para minimizar la radiacin parsita y la difu-
sin de Rayleigh que llegaba al transductor. Como
transductores se utilizaban fotomultiplicadores. En la
actualidad, la mayora de los espectrmetros Raman
que se comercializan son instrumentos de transforma-
da de Fourier con transductores de germanio enfria-
dos o instrumentos multicanal con dispositivos de
acoplamiento de carga.
Dispositivos y transductores para seleccionar
la longitud de onda
En la espectroscopa Raman se requiere un dispositivo
de alta calidad para seleccionar la longitud de onda
con el n de separar las lneas Raman, relativamente
dbiles, de la intensa radiacin difundida de Rayleigh.
Los espectrmetros Raman dispersivos tradicionales
estaban equipados con monocromadores de doble y
hasta triple red con este objetivo. En los aos recien-
tes, los ltros de interferencia hologrcos, llamados
ltros de ranura o de muesca, y las redes hologrcas
han mejorado a tal grado que han eliminado en la
prctica la necesidad de monocromadores de redes
mltiples. En efecto, en la mayora de los instrumentos
Clase interactiva: aprenda ms acerca de los
instrumentos Raman.
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18B Instrumentos 491
diodos
FIGURA 18.11 Espectrmetro Raman de bra
ptica con espectrgrafo y detector con
dispositivo de acoplamiento de carga (DAC).
El ltro pasabanda (PB) se utiliza para aislar una
sola lnea del rayo lser. El ltro de rechazo de
banda (RB) reduce al mnimo la radiacin
difundida de Rayleigh.
dispersivos comerciales se puede encontrar la combi-
nacin de un ltro de muesca y un monocromador de
red de alta calidad.
Los instrumentos con monocromadores invaria-
blemente contienen tubos fotomultiplicadores como
transductores debido a las seales tan dbiles que mi-
den. La mayora de los espectrmetros tambin estn
equipados con sistemas que cuentan los fotones para
medir la intensidad Raman. Puesto que el conteo de
fotones es inherentemente una tcnica digital, dichos
sistemas se instalan con facilidad en los sistemas de
datos de las computadoras modernas.
Muchos de los instrumentos Raman ms recientes
han reemplazado los monocromadores de salida de
una sola longitud de onda con un espectrgrafo y un
detector en red. Los fotodiodos en serie fueron el
primer detector que se utiliz; facilitan la recoleccin
simultnea de espectros de Raman completos. Los fo-
todiodos en serie se usan junto con un intensicador
de imgenes para amplicar la dbil seal Raman.
En tiempo reciente, los dispositivos de transferen-
cia de carga, como los dispositivos de acoplamiento
de carga y de inyeccin de carga, se han utilizado en los
espectrmetros Raman. La gura 18.11 ilustra un es-
pectrmetro Raman de bra ptica que usa un dis-
positivo de acoplamiento de carga como detector
multicanal. En este caso, ltros pasabanda y de recha-
zo de banda (o de muesca) de alta calidad proporcio-
nan un buen rechazo de la luz parsita. El dispositivo
de acoplamiento de carga puede ser bidimensional o,
en algunos casos, lineal.
Espectrmetros Raman de transformada
de Fourier
El instrumento Raman de transformada de Fourier
est equipado con un interfermetro de Michelson,
similar al que se usa en los espectrmetros IR de trans-
formada de Fourier, y con un rayo lser Nd-YAG de
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492 Captulo 18 Espectroscopa Raman
Espejo de
enfoque
FIGURA 18.12 Esquema ptico de un
instrumento Raman de transformada de
Fourier. La radiacin del rayo lser atraviesa
la muestra y luego el interfermetro, que
consta de un divisor de haces y los espejos
jo y mvil. La seal de salida del
interfermetro se ltra rigurosamente para
eliminar la radiacin lser parsita y la
difusin de Rayleigh. Despus de atravesar
los ltros, la radiacin se enfoca sobre un
detector de Ge enfriado.
onda continua, como se muestra en la gura 18.12. El
uso de una fuente de 1064 nm (1.064 m) elimina vir-
tualmente la uorescencia o la fotodescomposicin de
las muestras. Por tanto, los colorantes y otros com-
puestos uorescentes pueden ser estudiados con los
instrumentos Raman de transformada de Fourier. s-
tos tambin proporcionan una precisin mucho mejor
de la frecuencia comparados con los instrumentos or-
dinarios, lo cual facilita las sustracciones de espectros
y las mediciones de alta resolucin.
Una desventaja del espectrmetro Raman de trans-
formada de Fourier es que el agua absorbe en la regin
de 1000 nm, lo cual puede anular la ventaja del instru-
mento de ser capaz de usar soluciones acuosas. Asi-
mismo, los ltros pticos, como se muestra en la gura
18.12, son una necesidad. La luz parsita procedente
del rayo lser se tiene que eliminar porque tiene la ca-
pacidad de saturar a muchos transductores. La lnea
de difusin de Rayleigh es a menudo seis rdenes de
magnitud mayor que las lneas Raman del desplaza-
miento de Stokes, y la intensidad de dicha lnea se
tiene que reducir al mnimo antes de que choque con
el transductor. Para este objetivo se usan ltros de
muesca hologrcos y de otros tipos. Puesto que la di-
fusin de Raman procedente de un rayo lser Nd-YAG
puede ocurrir a longitudes de onda tan largas como
1700 nm, no se usan fotomultiplicadores ni muchos de
los detectores en serie. En cambio, la mayora de los
instrumentos Raman de transformada de Fourier es-
tn equipados con dispositivos fotoconductores de In-
GaAs y Ge como transductores. Dichos dispositivos
funcionan casi siempre a temperaturas criognicas.
El espectrmetro Raman de transformada de
Fourier tienen muchas ventajas nicas. No obstante,
las limitaciones mencionadas antes signican que los
instrumentos Raman dispersivos se utilizarn amplia-
mente durante un tiempo.
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Interfermetro de Michelson
Espejo
fijo
Muestra
Detector de Ge Divisor del haz Lentes
Espejo
enfriado con N2
lquido mvil
Espejo de
recoleccin
Filtros parablico
dielctricos
Lser de
Nd-YAG
con filtro
de lnea
Filtro espacial
18C APLICACIONES DE LA
ESPECTROSCOPA RAMAN
La espectroscopa Raman se aplica en el anlisis cua-
litativo y cuantitativo de sistemas inorgnicos, orgni-
cos y biolgicos.4
18C.1 Espectros Raman de especies
inorgnicas
A menudo la tcnica Raman es superior a la espectros-
copa de infrarrojo para la investigacin de sistemas
inorgnicos, debido a que se pueden utilizar soluciones
acuosas.5 Adems, las energas de vibracin de los en-
laces metal-ligando se encuentran por lo general entre
100 y 700 cm1, una regin del infrarrojo que es difcil
de estudiar experimentalmente. Estas vibraciones son
a menudo activas en Raman, y las lneas con valores
n en este intervalo se observan con facilidad. Los es-
tudios Raman son fuentes de informacin potencial-
mente tiles respecto a la composicin, estructura y
estabilidad de los compuestos de coordinacin. Por
ejemplo, numerosos complejos de halgenos y halo-
genoides presentan espectros Raman y, por consi-
guiente, son susceptibles de investigarse mediante esta
tcnica. Los enlaces metal-oxgeno tambin son acti-
vos en Raman. Se han obtenido los espectros Ra-
man de especies como VO34, Al(OH)4, Si(OH)62, y
Sn(OH)62. Los estudios Raman han sido tiles en la
determinacin de las probables estructuras de stas y
otras especies similares. Por ejemplo, en soluciones de
cido perclrico el vanadio (IV) parece estar presente
como VO2(aq) y no como V(OH)22(aq). Los estu-
dios de las soluciones de cido brico indican que el
anin formado por la disociacin del cido es el ion
4 Vase Analytical Raman Spectroscopy, J. G. Grasselli y B. J. Bulkin, eds.,
Nueva York: Wiley, 1991.
5 Vase K. Nakamoto, Infrared and Raman Spectra of Inorganic and Co-
ordination Compounds, 5a. ed., Nueva York: Wiley, 1996.
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tetradrico B(OH)4 y no el H2BO3. Se han calculado
las constantes de disociacin de cidos fuertes como el
H2SO4, HNO3, H2SeO4 y H5IO6 a partir de mediciones
con espectroscopa Raman. Parece probable que, en el
futuro, se ver un uso an ms amplio de la espec-
troscopia Raman para la comprobacin terica y los
estudios estructurales de sistemas inorgnicos.
18C.2 Espectros Raman de especies orgnicas
Los espectros Raman son semejantes a los espectros
de infrarrojo en cuanto a que presentan regiones ti-
les para la deteccin de grupos funcionales y regiones
de huella dactilar que permiten identicar compues-
tos especcos. Daimay y sus colaboradores publica-
ron un trabajo muy completo sobre las frecuencias
Raman de grupos funcionales.6
Los espectros Raman proporcionan ms informa-
cin acerca de ciertos tipos de compuestos orgnicos
que los correspondientes espectros de infrarrojo. Por
ejemplo, la vibracin de tensin del doble enlace en las
olenas produce una absorcin dbil en el infrarrojo y
a veces no se puede detectar. Por otra parte, la banda
Raman que, como la banda en el infrarrojo, se pre-
senta aproximadamente a 1600 cm1 es intensa y su
posicin depende de la naturaleza de los sustituyentes
y de su forma. Por consiguiente, los estudios de espec-
troscopa Raman son apropiados para proporcionar
informacin til acerca de los grupos funcionales ole-
fnicos, los cuales podran no manifestarse en los es-
pectros de infrarrojo. Lo mismo se puede decir de los
derivados cicloparafnicos; estos compuestos tienen
una banda Raman caracterstica en la regin de 700 a
1200 cm1 que se atribuye a una vibracin de respira-
cin en la que los ncleos se mueven de manera sim-
trica hacia dentro y hacia fuera respecto al centro del
anillo. La posicin de la banda disminuye en forma
continua desde 1190 cm1 para el ciclopropano hasta
700 cm1 para el ciclooctano; por tanto, la espectros-
copia Raman constituye una excelente herramienta
para estimar el tamao del anillo en las paranas ccli-
cas. La banda en el infrarrojo asociada con esta vibra-
cin es dbil o inexistente.
18C.3 Aplicaciones biolgicas
de la espectroscopa Raman
La espectroscopa Raman se aplica ampliamente en
el estudio de sistemas biolgicos.7 Entre las ventajas de
6 L. Daimay, N. B. Colthup, W. G. Fately y J. G. Grasselli, The Handbook
of Infrared and Raman Characteristic Frequencies of Organic Molecules,
Nueva York: Academic Press, 1991.
7 Vase J. R. Ferraro, K. Nakamoto y C. W. Brown, Introductory Raman
Spectroscopy, 2a. ed., San Diego: Academic Press, 2003, cap. 6; Infrared
and Raman Spectroscopy of Biological Materials, H. U. Gremlich y B. Yan,
eds., Nueva York: Marcel Dekker, 2001; Biological Applications of Raman
Spectroscopy, T. G. Spiro, ed., vol. 1-3, Nueva York: Wiley, 1987-1988.
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18D Otros tipos de espectroscopa Raman 493
esta tcnica estn el tamao pequeo de muestra que
se requiere, la mnima interferencia del agua, los de-
talles del espectro y la sensibilidad respecto a los fac-
tores conformacionales y del entorno.
18C.4 Aplicaciones cuantitativas
Los espectros Raman tienden a mostrar menos amon-
tonamiento de bandas que los espectros infrarrojos.
Como consecuencia, es menos probable el traslape de
picos en las mezclas, y las medidas cuantitativas son
ms sencillas. Adems, los portamuestras en Raman
no estn sujetos al ataque de la humedad y las peque-
as cantidades de agua presentes en la muestra no in-
tereren. A pesar de estas ventajas, la espectroscopa
Raman apenas ha sido explotada en el anlisis cuanti-
tativo. El uso creciente de la espectroscopa Raman se
debe a la disponibilidad de instrumentos Raman ruti-
narios baratos.
Como los haces lser se pueden enfocar con mucha
precisin, es posible efectuar anlisis cuantitativos de
muestras muy pequeas. La microsonda Raman se usa
en la determinacin de analitos en clulas bacterianas
aisladas, componentes en partculas individuales de
humo y cenizas en suspensin, y especies en incrusta-
ciones microscpicas en minerales. Las supercies han
sido examinadas al sintonizar el instrumento en un
modo de vibracin dado. Esto resulta en una imagen
de las regiones sobre una supercie en las que est pre-
sente un enlace particular o un grupo funcional.
La microsonda Raman desempe un papel deci-
sivo en la autenticacin de unos documentos presu-
miblemente antiguos como el mapa de Vinland (vase
el Anlisis instrumental en accin que est al nal
de la seccin 3). En el caso del mapa, la microscopa
Raman demostr de manera concluyente la presen-
cia de TiO2 en la tinta.
18D OTROS TIPOS DE ESPECTROSCOPA
RAMAN
Con el desarrollo de los rayos lser sintonizables, a
principios de los aos setenta surgieron varios mto-
dos nuevos de espectroscopa Raman. A continuacin
se tratan brevemente las aplicaciones de algunas de es-
tas tcnicas.
18D.1 Espectroscopa Raman de resonancia
La dispersin Raman de resonancia hace referencia a
un fenmeno en el cual las intensidades de las lneas
Raman son realzadas en gran manera al excitarlas con
longitudes de onda que se aproximan mucho a la
banda de absorcin electrnica de un analito.8 En es-
8Para una breve revisin vase T. G. Spiro y R. S. Czernuszewicz en Phys-
ical Methods in Bioinorganic Chemistry, L. Que, ed., Sausalito, CA: Uni-
versity Science Books, 2000; S. A. Asher, Anal. Chem., 1993, 65, p. 59A.
SKOOG_CAP_18_4tas 3/25/08 9:02 AM Page 494
494 Captulo 18 Espectroscopa Raman
tas circunstancias, las magnitudes de las lneas Raman
asociadas con las vibraciones ms simtricas aumentan
en un factor de 10 2 a 10 6. Por consiguiente, se han po-
dido obtener espectros Raman de resonancia con con-
centraciones tan bajas de analito como 108 M. Estos
niveles de sensibilidad contrastan con los estudios Ra-
man normales, los cuales se limitan de ordinario a con-
centraciones mayores que 0.1 M. Adems, puesto que
el aumento de la resonancia se limita a las bandas Ra-
man asociadas con el cromforo, por lo regular, los es-
pectros Raman de resonancia son muy selectivos.
La gura 18.13a ilustra los cambios de energa cau-
santes de la dispersin Raman de resonancia. Esta
gura diere del diagrama de energa correspondiente
a la dispersin Raman normal (gura 18.3) en que el
electrn es impulsado a un estado electrnico excitado
seguido por una relajacin inmediata al nivel vibra-
cional del estado electrnico fundamental. Como se
muestra en la gura, la dispersin Raman de resonan-
cia diere de la uorescencia (gura 18.13b) en que la
relajacin al estado fundamental no est precedida de
una relajacin hacia el nivel vibracional ms bajo del
estado electrnico excitado. Las escalas de tiempo
para los dos fenmenos son tambin bastante diferen-
tes, la relajacin Raman ocurre en menos de 1014 s; en
cambio, la emisin uorescente tiene lugar entre 106
a 1010 s.
La intensidad de las lneas en un experimento Ra-
man de resonancia aumenta con rapidez cuando la
longitud de onda de excitacin se aproxima a la lon-
gitud de onda de la banda de absorcin electrnica.
Por consiguiente, se necesita un lser sintonizable para
conseguir el mayor incremento de seal en un inter-
valo ancho de mximos de absorcin. Con una ra-
diacin lser intensa, la descomposicin de la muestra
se puede convertir en un gran problema porque las
bandas de absorcin electrnica se producen con fre-
cuencia en la regin ultravioleta. Para evitar este pro-
blema, es una prctica normal desplazar la muestra de
forma circular por delante del haz enfocado del lser.
Para hacer circular la muestra hay dos maneras: bom-
bear la solucin o el lquido a travs de un capilar ins-
talado en el compartimiento de la muestra o girar una
celda cilndrica que contiene la muestra a travs del
rayo lser. De esta manera, slo una pequea fraccin
de la muestra es irradiada en un instante dado, y as se
reduce al mnimo su calentamiento y descomposicin.
Tal vez la aplicacin ms importante de la espectros-
copia Raman de resonancia es el estudio de molculas
biolgicas en condiciones siolgicamente importan-
tes; es decir, en presencia de agua y a concentraciones
de bajas a moderadas. Por ejemplo, la tcnica se utiliza
para determinar el estado de oxidacin y el espn de
los tomos de hierro en la hemoglobina y el citocromo c.
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nex ns n ex n fl
nr
Raman de resonancia Fluorescencia
a) b)
FIGURA 18.13 Diagrama de energa para a) la difusin
Raman de resonancia y b) la emisin uorescente. La
relajacin no radiante se indica con echas onduladas.
En el caso de la resonancia Raman, el electrn excitado
se relaja de inmediato a un nivel de vibracin del estado
electrnico fundamental al ceder un fotn de Stokes ns.
En la uorescencia, la relajacin hasta el nivel de
vibracin ms bajo del estado electrnico excitado ocurre
antes de la emisin. La difusin Raman de resonancia es
casi instantnea, y las bandas espectrales son muy
angostas. En general, la emisin de uorescencia tiene
lugar en la escala de tiempo de nanosegundos. Los
espectros de uorescencia son casi siempre anchos
debido a los diversos estados vibracionales.
En estas molculas, las bandas Raman de resonancia
se deben nicamente a los modos de vibracin del cro-
mforo tetrapirrol. Ninguna de las otras bandas asocia-
das con la protena se acenta y, por tanto, stas no
intereren en las concentraciones que se utilizan nor-
malmente.
La espectrometra Raman de resonancia con reso-
lucin en el tiempo es una tcnica que facilita la re-
coleccin de espectros Raman de molculas en estado
excitado. Se utiliza para estudiar los intermediarios en
las reacciones enzimticas, los espectros de los esta-
dos excitados de los carotenoides, las etapas ultrarrpi-
das de transferencia de electrones y una variedad de
otros procesos biolgicos y bioinorgnicos.9 Los m-
todos de discriminacin en el tiempo se aplican para
superar una de las principales limitaciones de la espec-
troscopa Raman de resonancia, a saber, la interferen-
cia causada por la uorescencia del propio analito o
de otras especies presentes en la muestra.
9J. R. Kincaid y K. Czarnecki en Comprehensive Coordination Chemistry
II, J. A. McCleverty y T. J. Meyer, eds., Oxford: Elsevier, 2004.
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Preguntas y problemas 495

18D.2 Espectroscopa Raman de supercie 18D.3 Espectroscopa Raman no lineal

aumentada
La espectroscopa Raman de supercie aumentada10
supone la obtencin de espectros Raman, a la manera
usual, de muestras que se adsorben sobre la supercie
de partculas metlicas coloidales, casi siempre plata,
oro o cobre; o bien, sobre supercies rugosas de trozos
de estos metales. Por razones que apenas se empiezan
a entender, al menos semicuantitativamente, las lneas
Raman de la molcula adsorbida se intensican a me-
nudo en un factor de 10 3 a 10 6. Cuando el incremento
de supercie se combina con la tcnica de resonancia
aumentada, que se trat en la seccin anterior, el in-
cremento neto de la intensidad de la seal es ms o
menos el producto de la intensidad producida por cada
una de las tcnicas. En consecuencia, se han llegado
a conseguir lmites de deteccin del orden de 109 a
1012 M.
Se han utilizado varias tcnicas para la manipula-
cin de la muestra en la espectroscopa de supercie
aumentada. En una de ellas se suspenden partculas de
plata u oro coloidal en una solucin diluida, casi siem-
pre acuosa, de la muestra. A continuacin, la solucin
se mantiene en reposo o se hace uir por un tubo de
vidrio estrecho mientras se le excita con un haz lser.
En otro de los mtodos se deposita una delgada
pelcula de partculas metlicas coloidales sobre una
placa de vidrio y se aaden una o dos gotas de solucin
de la muestra sobre la pelcula. Luego se obtiene el es-
pectro Raman en la forma usual. Otra posibilidad es
depositar electrolticamente la muestra sobre un elec-
trodo metlico rugoso que despus se retira de la so-
lucin y se expone a la fuente de excitacin lser.
En la seccin 7B.3 se seal que muchos rayos lser
son bastante intensos para producir cantidades sig-
nicativas de radiacin no lineal. Durante los aos
setenta y ochenta se perfeccionaron muchas tcnicas
Raman que dependen de la polarizacin inducida por
intensidades de campo de segundo orden y de rdenes
superiores. Estas tcnicas se conocen como mtodos
Raman no lineales.11 Entre estos mtodos se pueden
mencionar dispersin Raman estimulada, efecto hiper-
Raman, ganancia Raman estimulada, espectroscopa Ra-
man inversa, espectroscopa Raman anti-stokes coherente
y espectroscopa Raman Stokes coherente. El ms uti-
lizado de estos mtodos es la espectroscopa Raman
anti-stokes coherente.
Las tcnicas no lineales se utilizan para superar al-
gunos de los inconvenientes de la espectroscopa
Raman ordinaria, entre ellos, su baja eciencia, su li-
mitacin a las regiones visible y del ultravioleta cer-
cano, as como su susceptibilidad a la interferencia de
la uorescencia. La principal desventaja de los mto-
dos no lineales es que tienden a ser especcos para el
analito y, a menudo, requieren varios rayos lser sin-
tonizables distintos que se puedan aplicar a distintas
especies. Hasta ahora, ninguno de los mtodos no li-
neales ha encontrado muchas aplicaciones entre los
no especialistas. No obstante, muchos de estos mto-
dos se muestran promisorios. Como ya hay rayos lser
ms baratos y tiles, los mtodos Raman no lineales,
sobre todo la espectroscopa Raman anti-stokes cohe-
rente, se tienen que utilizar ms.

Vase M. J. Weaver, S. Zou y H. Y. Chan, Anal. Chem., 2000, 72,

10 Vase J. R. Ferraro, K. Nakamoto y C. W. Brown, Introductory Raman
11

pp. 38A-47A. American Chemical Society. Spectroscopy, 2a. ed., San Diego: Academic Press, 2003, pp. 194-202.

PREGUNTAS Y PROBLEMAS

*Las respuestas de los problemas marcados con un asterisco se proporcionan al nal del
libro.
Los problemas que contienen este smbolo se resuelven mejor con hojas de clculo.
18.1 Qu es un estado virtual?
18.2 Por qu la relacin entre las intensidades anti-stokes y Stokes aumenta con la
temperatura de la muestra?
*18.3 A qu longitudes de onda, en nanmetros, apareceran las lneas de Raman
Stokes y anti-stokes del tetracloruro de carbono ( n  218, 314, 459, 762 y 790
cm1) si la fuente fuera
a) un lser de helio/nen (632.8 nm)?
b) un lser de iones argn (488.0 nm)?

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496 Captulo 18 Espectroscopa Raman

*18.4 Suponga que las fuentes empleadas en el problema 18.3 tienen la misma potencia.
a) Compare las intensidades relativas de las lneas Raman del CCl4 que se obtie-
nen cuando se usa cada una de las fuentes de excitacin. b) Si las intensidades se
registran con un sistema monocromador-fotomultiplicador caracterstico, por
qu los cocientes de intensidad medidos dieren de los calculados en el inciso a)?
*18.5 Para los estados vibracionales, la ecuacin de Boltzmann se puede escribir como

 exp1E /kT 2
N1
N0
donde N0 y N1 son las poblaciones en los estados de menor y mayor energa, res-
pectivamente, E es la diferencia de energa entre dichos estados, k es la constan-
te de Boltzmann y T es la temperatura en kelvin.
Calcule las relaciones entre las intensidades de las lneas anti-stokes y
Stokes para el CCl4 a las temperaturas de 20C y 40C a a) 218 cm1; b) 459 cm1;
c) 790 cm1.
18.6 Las siguientes preguntas se relacionan con las fuentes de rayo lser en la espec-
troscopa Raman.
a) En qu condiciones sera preferible el rayo lser de helio/nen al rayo lser
del ion argn?
b) En qu condiciones sera preferible el rayo lser de diodo al rayo lser del
ion argn o de helio/nen?
c) Por qu se evita utilizar fuentes que emiten radiacin ultravioleta?
*18.7 Los siguientes datos Raman se obtuvieron para el CHCl3 con el polarizador
del espectrofotmetro 1) paralelo al plano de polarizacin del lser y 2) a 90
respecto al plano de la fuente.

Intensidades relativas

N, cm1 (1) I|| (2) I

a) 760 0.60 0.46

b) 660 8.4 0.1
c) 357 7.9 0.6
d) 258 4.2 3.2

Calcule la razn de despolarizacin e indique qu lneas Raman estn polarizadas.

18.8 Analice las ventajas y las desventajas de los espectrmetros Raman de transfor-
mada de Fourier respecto a los instrumentos Raman dispersivos ordinarios.

Problema de reto
18.9 Las preguntas siguientes tratan sobre las similitudes y diferencias entre la espec-
trometra IR y la espectrometra Raman.
a) Cules son los requisitos para que un modo de vibracin en una molcula
muestre absorcin IR? Cules son los requisitos para que un modo vibra-
cional sea activo en la regin Raman? Por qu son diferentes estas condi-
ciones? En qu condiciones los modos vibracionales estn activos tanto en
Raman como en IR? En qu circunstancias los modos vibracionales estarn
activos en Raman pero no en IR y viceversa?
b) Considere la molcula cloroacetonitrilo (ClCH2CN). Cuntos modos de vi-
bracin debe tener esta molcula? Por qu se podran observar menos ban-
das Raman que las esperadas?

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Preguntas y problemas 497

c) El cloroacetonitrilo muestra una banda Raman intensa a 2200 cm1 debido

al modo de tensin C N. La absorcin IR correspondiente es muy dbil o
inexistente. Al comparar los espectros en la regin de 2200 cm1, a qu
conclusin llega usted respecto al modo de tensin de C N en el
cloroacetonitrilo?
d) Compare la espectrometra IR y la Raman respecto al aspecto ptico, mate-
riales de la celda, manejo de la muestra, compatibilidad del solvente y aplica-
bilidad en diversos tipos de muestras.
e) Compare las fuentes y los transductores que se utilizan en los espectrmetros
Raman con los que se usan en los instrumentos IR de transformada de
Fourier. Considere para sus comparaciones tanto los espectrmetros Raman
de transformada de Fourier como los Raman dispersivos.
f ) Compare la espectrometra IR y Raman respecto a la utilidad cualitativa, los
lmites de deteccin, el anlisis cuantitativo y la complejidad instrumental.

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