Sunteți pe pagina 1din 5

Masterand : Hanganu Denisia Iuliana

Biologie Medicala, Anul II

ELECTROFOREZA

- Metoda de analiza calitativa a proteinelor -

Electroforeza este o metoda de separare a proteinelor din ser sau urina, ce permite
separarea in camp electric a proteinelor serice in 5 fractiuni ( albumina, alfa 1, alfa 2, beta, gama
globuline) la pH 9.2 sau in 6 fractiuni, cu subimpartirea grupului beta ( albumina, alfa 1, alfa 2,
beta 1, beta 2, gama globuline) la un pH de 8.5.

Albumina este produsa in ficat si reprezinta aproape 60% din proteinele din sange,
globulinile constituind restul de 40%. In afara imunoglobulinelor si a catorva proteine
complementare, majoritatea globulinelor sunt produse in ficat.

Analiza electroforezei este utilizata pentru a identifica prezenta sau absenta proteinelor
anormale, a proteinelor monoclonale- producerea excesiva a imunoglobulinei specific si pentru a
determina cand diferite grupe de proteine au valorile crescute sau scazute in ser.

Electroforeza proteinelor si cea cu imunofixare sunt utile in determinarea, diagnosticul si


monitorizarea cursului si tratamentului unor afectiuni asociate cu proteinele anormale.
Proteinele, in mod normal nu sunt excretate in urina, iar cand se prezinta in cantitati prea mari
poate indica existenta unor probleme renale si/ sau producerea anormala de proteine.

In functie de sistemul de migrare exista doua tipuri de electroforeza:

- Electroforeza libera- migrare in faza lichida;


- Electroforeza in zona- migrare in faza solida.

Electroforeza de zona este tipul cel mai folosit in laborator, efectuandu-se pe urmatoarele
mediu suport:

- Hartie de filtru Whatman;


- Gel de agaroza;
- Amidon;
- Acetat de celuloza.

Electroforeza pe gel de agaroza


Tehnica: consta in depunerea catorva microlitri de ser pe un suport pe suprafata caruia
este aplicat un gel de agaroza, cu pH 8.6. La acest pH, proteinele sunt sub forma de anioni( ioni
negativi) , avand tendinta sa migreze spre anod.

Se folosesc diverse aparate care prezinta doua sectoare: unul pentru migrarea proteinelor
si celalalt pentru relevarea migrarii prin colorarea gelului in care a avut loc migrarea. Gelul se
aseaza in camp electric in cuva de migrare. Se acopera cuva, pentru inchiderea circuitului, si se
aplica un curent de 100 V, timp de 20 minute.

Fig. 1 Aparat electroforeze Elf 200

Dupa migrare, gelul de imerseaza in solutie de fixare ( alcool etilic 96%+ acid acetic +
apa distilata), timp de 15 minute , in pozitie vertical. Se usuca apoi gelul cu un current de aer de
800C. Dupa uscarea complete, se imerseaza in solutie de colorare amidoblanck, 10 minute, apoi
se decoloreaza, se spala si se usuca. Vizualizarea se face cu ajutorul unui densitometru.
Electroforeza furnizeaza valori procentuale ale celor cinci fractii proteice, concentratia
absoluta a acestora calculandu-se in functie de nivelul proteinelor serice totale.

Dupa incarcatura electrica si masa molecularam fractiunile proteice migreaza diferit, cel
mai departe migreaza albuminele, urmate apoi de alfa 1 globulinele, alfa 2 globulinele, beta
globulinele si gama globulinele.

Euproteinemie se numeste situatia normala in care nivelul fractiilor proteice separate


prin electroforeza inregistreaza valori fiziologice, situate in limite nromale.

Disproteinemiile sunt modificari in nivelul fractiilor proteice, cele mai frecvente


constand in scaderea serumalbuminelor si cresterea globulinelor. Disproteinemiile interesand
globulinele sunt foarte des intalnite, cresterile pot fi globale sau intereseaza doar anumite
fractiuni.

Variatiile fractiunilor proteice serice:

Albumina

Nivel scazut in: - insuficienta aportului albuminelor in alimentatie ( malnutritie cronica severa)

- Diminuarea sintezei : insuficienta hepatica( ciroze, hepatite) si inflamatii;


- Pierderea lor accentuate pe cale urinara( sindrom nefrotic) digestive( gastroenteropatie
exudativa) sau cutanata( arsuri);
- Hipercatabolism: sindroame inflamatorii severe, endocrinopatii diverse( tireotoxiciza,
sindrom Cushing)
- Analbuminemie congenital.

Nivelul crescut este de regula fara semnificatie patologica importanta, aparand frecvent la
pacientii cu hemoconcentratie locala sau sistemica sau la cei carora li se administreaza albumina
in perfuzie.

Alfa 1 Globuline

Nivel scazut: - hipertiroidism,

-boli severe ala ficatului,

-hemoliza

Nivel crescut:- boli renale,

-boli inflamatoare acute sau cronice ( poliartrita reumatoida, boli cu complexe immune
circulante)

Beta Globulinele

Nivel scazut: - malnutritie,

- insuficienta hepatica, ciroza,


- scaderea fractiunii C3 a complementului, asociata cu o scadere a fractiunii beta 2.

Nivel crescut: - hipercolesterolemie, dislipidemii

- anemie feripriva
- sindrom Cushing, sindrom nefrotic;
- gamapatii monoclonale;
- Hepatite toxice, ciroza.

Gama Globulinele

Nivel scazut: - anumite disfunctionalitati imunogenetice si deficient imuna secundara;

Nivel crescut: a) policlonar in: afectiuni inflamatoare cronice (artrita reumatoida, colagenoze,
parazitoze, infectii bacteriene);

b) monoclonal in: macroglobulinemie, mielom multiplu, alte gamapatii.

Estomparea sau absenta benzii gama sugereaza un deficit imun( hipo- sau agamaglobulinemie).

Electroforeza proteinelor se efectueaza asadar cand se doreste investigarea nu doar a


nivelului total al proteinelor serice, ci si vizualizarea fractiilor acestora, mai ales in contextual
unor simptome asociate ( dureri articulare, oboseala, fracture, infectii repetate) ce pot sugera boli
mieloproliferative cu productie de proteine anormale ( paraproteine) . De asemenea, cunoasterea
nivelului fractiilor proteice din ser poate adduce elemente importante in diagnosticul unor
maladii care asociaza cu cresteri sau reduceri semnificative ala nivelului unora dintre acestea.

Bibliografie

1. Laborator clinic- biochimie, Autor: Natalia Mitrica- Kondi, Ed. Medicala


2. Corelatii clinice in interpretare parametrilor biochimici, Autor: Liliana Foia, Ed. Junimea, An
2010, Iasi.