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UNIVERSIDAD DE GUADALAJARA

CENTRO UNIVERSITARIO DE LA CINEGA

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS MDICAS Y DE LA VIDA

Manual de Prcticas para

Bioqumica I

(FB 206)

Fecha de Actualizacin 27.11.2008

!
ndice

I. Reglamento General del Laboratorio............................................................................3


II. Seguridad .....................................................................................................................4
III. Comportamiento en el Laboratorio en General ............................................................5
IV. Manejar Sustancias Peligrosas ....................................................................................6
V. Reglamento Interno ......................................................................................................7
VI. Evaluacin de las Prcticas..........................................................................................7
VII. Protocolo ......................................................................................................................8
VIII. Examen ........................................................................................................................8
Prctica No. 1: Buffer y pH ...................................................................................................9
Prctica No. 2: Espectrofotmetro ......................................................................................13
Prctica No. 3: Desnaturalizacin de Enzimas ...................................................................16
Prctica No. 4: Cintica enzimtica ....................................................................................20
Prctica No. 5: Azcares reductores...................................................................................24
Prctica No. 6: cidos grasos insaturados .........................................................................27

-2- !
I. Reglamento General del Laboratorio
El profesor de la prctica deber:
- Estar presente durante todo el desarrollo de la prctica
- Mantener la disciplina de sus estudiantes durante la prctica
Todo el personal que ingrese al laboratorio deber portar el material de proteccin
personal como:
- Bata (blanca, limpia, de algodn y manga larga)
- Pantalones (largos)
- Zapatos cerrados y de piso; preferiblemente de cuero
- Guantes adecuados dependiendo de los reactivos y de las actividades. Con guantes
nunca se toca algo fuera del experimento. Vase a las "IdS Guantes"
- Cubre-bocas, cofias, mascarillas y/o gafas de seguridad en casos necesarios
Adems deber:
- Familiarizarse con la ubicacin de los elementos de seguridad como extintor, puertas
de emergencia, duchas de emergencia, lava-ojos, botiqun de primeros auxilios etc.,
as como los nmeros telefnicos de emergencia
- Sujetar el cabello y no usar gorra
- Traer uas cortas y sin esmalte
- No maquillarse durante el desarrollo de la prctica ni manipular lentes de contacto
- No comer, beber, masticar chicle
- No fumar
- No llevarse objetos a la boca como lpices o dedos
- Lavarse las manos antes de entrar y de salir del laboratorio
Est prohibido portar la indumentaria de proteccin personal fuera del laboratorio
No almacenar alimentos o bebidas para el consumo humano en el laboratorio
Est prohibido el ingreso al laboratorio a personas no autorizadas, p.ej. nios o visitas
Cualquier incidente en el laboratorio reportarlo inmediatamente al responsable
Los estudiantes no podrn salir del laboratorio durante la prctica a menos que sea muy
necesario
Est prohibido bloquear las rutas de evacuacin
Toda sustancia qumica ser etiquetada, clasificada y almacenada de acuerdo a la
normatividad existente (vase "Registro de Sustancias Peligrosas")
Toda sustancia qumica no deber ser eliminada directamente al desage sin antes
consultar las Fichas de Datos de Seguridad (vase "Registro Residuos Peligrosos")
El responsable del laboratorio levantar un reporte cuando no se cumple con lo indicado
en este reglamento

-3- !
II. Seguridad
Para entrar a las prcticas de bioqumica, cada estudiante tiene que conocer y cumplir las
reglas de seguridad en el laboratorio. Informacin sobre el comportamiento en general se
puede encontrar muy detallado en la pgina web
http://radio.cuci.udg.mx/bch/ES/Sicherheit/index.html y breve en los puntos
"III: Comportamiento en el Laboratorio en General" y "IV: Manejar Sustancias Peligrosas"
de este manual.
Tambin es obligatorio para el estudiante de informarse sobre los riesgos potenciales que
provienen de los reactivos y procedimientos que se aplicarn *antes* de que se lleven a
cabo las prcticas. Informacin y documentos de pdf para bajar e imprimir se encuentra
tambin en dicha pgina de internet como el "Registro de Sustancias Peligrosas",
"Instrucciones de Seguridad (IdS)" y "Fichas de Datos de Seguridad" (FDS) para las
sustancias que se utilizarn.

En el caso de no cumplir las reglas de seguridad, el estudiante tiene que salir de la prctica
inmediatamente y se evaluar este prctica con cero puntos. En casos graves (p.ej.
causando accidentes con heridos) y de intencin el estudiante puede ser excluido de las
prcticas para todo el semestre.

-4- !
III. Comportamiento en el Laboratorio en General
Usar una bata de algodn, manga larga, abotonada y limpia para
protegernos contra contaminaciones
" para no contaminar el exterior, nunca se utiliza la bata fuera del
laboratorio
" batas sucias traen el peligro de contaminarse uno mismo

Usar zapatos cerrados (no sandalias) y seguros para caminar (sin tacn)
" en verano se puede traer un par de zapatos adicionales adecuados
para el laboratorio

Usar material de seguridad personal (gafas, guantes, etc.), cuando es


indicado

NO fumar
NO comer, beber, maquillarse
NO alcohol u otras drogas
NO mvil/celular

No desarrollar experimentos peligrosos solos en el laboratorio


No correr ni jugar en el laboratorio
No recibir visitas personales en el laboratorio
No dejar bolsas o ropa en el laboratorio
Siempre dejar el laboratorio limpio y ordenado
- su material (quitar escrituras y adhesivos)
- los equipos (p.ej. centrfuga)
- su lugar de trabajo y lugares comunes (p.ej. campana, lavabo)
Avisar:
- situaciones peligrosas
- mal funcionamiento de equipos y/o
- terminacin de reactivos
al Responsable del Laboratorio

Lavarse las manos despus del trabajo y ponerse crema para la piel

-5- !
IV. Manejar Sustancias Peligrosas
Es obligatorio informarse sobre los riesgos especficos de sustancias
peligrosas
" Ver las Fichas de Datos de Seguridad (FDS)
http://www.apacheweb.cuci.udg.mx/bch/ES/Sicherheit/SDB.html
" Ver al Registro de Sustancias Peligrosas
http://www.apacheweb.cuci.udg.mx/bch/ES/Sicherheit/Anweisungen.html

Mujeres embarazadas y madres amamantando


NO pueden trabajar en el laboratorio con sustancias peligrosas

Almacenar:
En recipientes adecuados y en una manera adecuada
Marcado conforme a su contenido
- contenido (sustancia, mezcla, concentracin)
- fecha
- propietario
- smbolo de peligro
No en cantidades grandes
Sustancias que producen polvos, gases, vapores, aerosoles etc txicos,
nocivos, cancergenos, corrosivos o inflamables almacenar en un lugar
ventilado

Nunca almacenar alimentos en el laboratorio


Nunca almacenar reactivos en contenedores de alimentos

Manejar:
No tocar qumicos
Trasvasar mediante un medio aplicable (e.je. embudo)
Nunca poner las tapas boca abajo sobre la mesa
- dejar qumicos sobre la mesa
- traer contaminacin al recipiente
No daar las etiquetas mientras se trasvasa (p.ej. por goteo)
Nunca devolver reactivos en su envase original
- traer contaminacin al recipiente
No llenar recipientes ms del 90% de su capacidad mxima
Cerrar bien los recipientes no usados
Sustancias que producen polvos, gases, vapores o aerosoles txicos,
nocivos, cancergenos, corrosivos o inflamables se maneja en una
campana de extraccin
-6- !
V. Reglamento Interno
El estudiante tiene que entrar preparado a las prcticas, es decir con:
- Ropa adecuada cumpliendo las reglas de seguridad
- Material necesario para llevar a cabo la prctica segn el manual o el anuncio del profesor
- Plan de trabajo/esquema para llevar a cabo la prctica
- Conocer la base terica para entender el objetivo de la prctica.
En el caso de no cumplir algn punto de los anteriores, el estudiante puede ser excluido de
esta prctica y se evaluar con cero puntos.

VI. Evaluacin de las Prcticas


En cada prctica se evaluar al estudiante segn el siguiente esquema:
40 % Comportamiento en el laboratorio (actitud, preparacin, desempeo, limpieza)
30 % Protocolo (siempre individual)
30 % Examen de prcticas

La calificacin final de las prcticas se calcular del promedio de todas las prcticas
ofrecidas, donde cada prctica tiene el mismo peso. Segn la voluntad del profesor el
estudiante puede repetir prcticas ofrecidas, que l no ha llevado cabo; por lo dems se
evaluar una falta de asistencia con cero puntos.

La evaluacin de la materia ser:


Exmenes 65 %
Prcticas 20 %
Tareas 15 %
Se tiene que aprobar la teora (= exmenes + tareas) y las prcticas independientemente
para aprobar la materia.

-7- !
VII. Protocolo
El estudiante tiene que entregar el protocolo de la prctica a ms tardar hasta el inicio de la
siguiente prctica al profesor responsable. El protocolo debe cumplir con los siguientes
puntos:
- Nombre, fecha, curso, tema
- Introduccin pequea en la teora en que se basa la prctica
- Material: - Material (especial) utilizado (sin material estndar como tubo de ensayo, ...)
- Soluciones, reactivos utilizados (pureza, conc. marca si es relevante etc.):
no se refiere a soluciones/reactivos que deberan utilizar!
- Procedimiento: - Pasos que realizaron para llevar a cabo la prctica
no se refiere a que deberan hacer (que sera el mtodo!)
- Resultados: - Tabla, grfica de los resultados primarios (de lectura),
- Clculos y resultados elaborados
- Discusin: - Resultados cumplen con la expectativa (en base de la teora)?
- Qu significan los resultados - para que se puede utilizar este mtodo?
- En el caso de no: discusin de errores
- Bibliografia: Autor1, N1, N2 Autor2 & N3 Autor3 (ao): Ttulo. Revista, Volumen: pginas
http://www.domain-name.de/link/al/documento.pdf

VIII. Examen
El examen de las prcticas deber ser antes de la siguiente prctica, la fecha concreta
deber ser establecida entre el profesor responsable y los estudiantes.
El tema de los exmenes de las prcticas incluye el conocimiento terico-bsico de cada
prctica como se establece en este manual, los principios tericos en que se basan las
reacciones y mecanismos de los experimentos y los clculos necesarios. Los exmenes no
debern tardar ms de 30 min.

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Prctica No. 1
Buffer y pH
Tipo de prctica: Individual Tiempo de duracin: 2 h

Objetivos
1. Comprobar la presencia de sistemas amortiguadores en lquidos biolgicos.
2. Aprender a preparar soluciones amortiguadoras tiles en la biologa y bioqumica.
3. Calcular el pH y conocer factores que influyen en ste.

Introduccin
Las soluciones amortiguadoras, tambin conocidas como disoluciones buffer o tampn,
son disoluciones que estn compuestas por el in comn de un cido dbil o una base
dbil. El mismo in comn en una sal conjugada, debe estar presente junto con el in
comn del cido o base dbil. Tambin se dice que una solucin es amortiguadora,
reguladora o tampn si la [H+], es decir el pH de una solucin no se ve afectada
significativamente por la adicin de pequeas cantidades o volmenes de cidos y bases.
Siendo que pH no significa otra cosa que potencial de hidrogeniones, un buffer (o
amortiguador) lo que hace es regular el pH. Cuando un buffer es aadido al agua, el primer
cambio que se produce es que el pH del agua se vuelve constante. De esta manera,
cidos o bases (lcalis = bases) adicionales no podrn tener efecto alguno sobre el agua,
ya que sta siempre se estabilizar de inmediato.

Material
Material Cantidad Reactivos Cantidad
Leche de vaca (lo trae el estudiante) 100 m# 0,1 N cido clorhdrico 2 m#
Jugos diferentes (lo trae el estudiante) 100 m# Aqua destillata (A. dest.) 80 m#

Pipetas de 5 m# 2 Equipo
Pipetas de 10 m# 2 Potencimetro 1
Vasos de precipitado de 100 m# 2

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Mtodo
1) Jugo
1.1. Determinar el pH de una muestra de jugo con el potencimetro
1.2. Anotar en el cuadro el valor obtenido

2) Leche de vaca
2.1. Determinar el pH de una muestra de leche de vaca
2.2. Colocar en un vaso de precipitados 2 m# de leche y adicionar 38 m# de A. dest.
2.3. Determinar el pH de esta dilucin
2.4. Anotar en el cuadro el valor obtenido

3) HCl
3.1. Determinar el pH de una solucin de 0,1 N HCl
3.2. Colocar en un vaso de precipitados 2 m# 0,1 N HCl y adicionar 38 ml de A. dest.
3.3. Determinar el pH de esta dilucin
3.4. Anotar en el cuadro el valor obtenido

Resultados
Para la leche el pH terico ser un valor de la literatura y en base a este valor se puede
calcular el pH terico para la leche diluida. Es importante anotar en el protocolo el
"procedimiento" de los clculos y no solo el resultado.

Registro de los resultados obtenidos


Muestra pH determinado pH terico
Jugo
Leche
Leche diluida
0,1 N HCl
0,1 N HCl diluido

Clculos para la determinacin del pH

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Observaciones

Conclusiones

Bibliografa
1. Conn, E.E., P.K. Stumpf, B. George & R.H. Doi (2002): Bioqumica Fundamental. 4. ed.,
Wiley
2. Murray, R.K., D.K Granner & V.W. Rodwell (2007): Bioqumica ilustrada. 17. ed., Manual
Moderno
3. Voet, D. & J.G. Voet (2004) Biochemistry. 3. ed., Wiley

Cuestionario
1. Elabore un diagrama de flujo en el que describa el o los procedimientos utilizados en
esta prctica.
2. Indique los clculos necesarios para la elaboracin de las soluciones utilizadas y
especifique el peso molecular, temperatura de ebullicin, temperatura de fusin, estado
fsico a 25 C y solubilidad de los reactivos utilizados.
3. Indique las propiedades fisicoqumicas del agua.
4. Qu es un cido-base segn Brnstedt?
5. Cmo se calcula el pH? Indique la ecuacin de Henderson-Hasselbalch y como
calcular soluciones buffer.
6. Cul es la diferencia entre mol, molar, molal, normalidad, densidad y porcentaje?
7. Especifique cules son las soluciones buffer comunes en la biologa.

- 11 - !
Mecanismo de Evaluacin
La presente se calificar en una escala del 0 al 100 y el valor obtenido estar en
proporcin con el porcentaje de la evaluacin final (20 % para prcticas), los puntos a
evaluar se listan a continuacin:
Aspecto a evaluar %
Comportamiento 40
Protocolo 30
Examen 30

Medidas de Seguridad y Salud Ocupacional


A la concentracin de 0,1 M de HCl no es una sustancia peligrosa.

Disposicin de Desechos Fsicos, Qumicos y Biolgicos


Se pueden tirar los desechos directamente al desage.

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Prctica No. 2
Espectrofotmetro
Tipo de prctica: Grupo de 3 personas Tiempo de duracin: 2 h

Objetivo
Conocer el fundamento del espectrofotmetro para determinar la absorcin y
concentracin de una sustancia en solucin.

Introduccin
Este instrumento tiene la capacidad de proyectar un haz de luz monocromtica a travs de
una muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida por dicha muestra. Esto permite
dar informacin sobre la naturaleza de la sustancia en la muestra y tambin indicar
indirectamente que cantidad de la sustancia que nos interesa est presente en dicha
muestra. El color de las sustancias se debe a que estas absorben ciertas longitudes de
onda de la luz blanca que incide sobre ellas y slo vemos aquellas longitudes de onda que
no fueron absorbidas.

Material
Material Cantidad Reactivos Cantidad
Celdas de plstico 2 Solucin. madre de FeCl3 (5,0 g/#) $ 20 m#
Pipetas 1 y 2 m# 5 Aqua destillata (A. dest.)
Tubos de ensayo 4 1 muestra de FeCl3 de concentracin 5 m#
Equipo desconocida
Espectrofotmetro 1

Mtodo
1. Preparar un banco de diluciones (1:1, 1:2, 1:5, 1:10, 1:20) de la solucin madre
2. Calibrar el espectrofotmetro a = 640 nm contra A. dest.
3. Determinar la absorbancia de cada solucin a = 640 nm
4. Determinar la absorbancia de la muestra a = 640 nm

Resultados
Calcular una regresin lineal por los estndares (banco de dilucin)
Calcular en base a esto la concentracin de la muestra

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Diluciones 1:1 (Soln madre) 1:2 1:5 1:10 1:20
Conc. g/#
Abs (640 nm)

Absorbancia muestra:
Concentracin muestra:

Observaciones

Conclusiones

Bibliografa
1. Skoog, D.A., D.M. West, F.J. Holler & S.R. Crouch (2005): Fundamentos de qumica
analtica. 8. ed. Editorial Thomson
2. Voet, D. & J.G. Voet (2004) Biochemistry. 3. ed., Wiley

Cuestionario
1. Elabore un diagrama de flujo en el que describa el o los procedimientos utilizados en
esta prctica.
2. Indique los clculos necesarios para la elaboracin de las soluciones utilizadas y
especifique el peso molecular, temperatura de ebullicin, temperatura de fusin, estado
fsico a 25 C y solubilidad de los reactivos utilizados.
3. Indique detalladamente el principio del espectrofotmetro.
4. Cules son los tipos de espectrofotmetro que existen?
5. Cul es la Ley de Lambert-Beer?
6. Cul es la diferencia entre extincin, absorcin y transmisin?
7. Qu es la regresin lineal y para que nos sirve?

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Mecanismo de Evaluacin
La presente se calificar en una escala del 0 al 100 y el valor obtenido estar en
proporcin con el porcentaje de la evaluacin final (20 % para prcticas), los puntos a
evaluar se listan a continuacin:
Aspecto a evaluar %
Comportamiento 40
Protocolo 30
Examen 30

Medidas de Seguridad y Salud Ocupacional


El FeCl3 es nocivo por ingestin. Irrita la piel. Riesgo de lesiones oculares graves.
En contacto con los ojos, lavar con abundante agua manteniendo los prpados abiertos
(mnimo 10 min.). Llamar al oftalmlogo.
En ingestin, beber abundante agua y evitar vmito. Llamar al mdico.
Tras inhalacin, tomar aire fresco.
En contacto con la piel, lavar con agua. Eliminar ropa contaminada.

Proteccin Personal
Proteccin de las manos: Guantes de caucho butlico o PVC
Proteccin de los ojos: Gafas protectoras y/o con proteccin del rostro

Disposicin de Desechos Fsicos, Qumicos y Biolgicos


Los desechos se depositan al contenedor de sales de metales pesados.

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Prctica No. 3
Desnaturalizacin de Enzimas
Tipo de prctica: Individual Tiempo de duracin: 2 h

Objetivo
Demostrar como el calor y/o pH pueden influir en la estructura terciara de una enzima, as
como su funcionalidad.

Introduccin
Cada clula y cada tejido tienen su actividad propia, lo que provoca continuos cambios en
su estado bioqumico, en la base de la cual estn las enzimas, que tienen el poder de
catalizar, facilitar y agilizar determinados procesos sintticos y analticos. La temperatura
Influye en la actividad de las enzimas. El punto ptimo es aquel que representa el mximo
de actividad. A temperaturas bajas las enzimas se hallan "muy rgidas" y cuando se supera
un valor considerable (mayor de 50 C) la actividad cae bruscamente porque, como
protena, la enzima se desnaturaliza.
El pH puede afectar de varias maneras:
El centro activo puede contener aminocidos con grupos ionizados que pueden variar
con el pH
La ionizacin de aminocidos que no estn en el centro activo puede provocar
modificaciones en la conformacin de la enzima
El sustrato puede verse afectado por las variaciones del pH

Material
Material Cantidad Reactivos Cantidad
Trozo de hgado fresco (lo 1 Agua oxigenada (H2O2, 5 %) (lo 15 m#
trae el estudiante) trae el estudiante) %
Tubos de ensayo de 15 m# 2 1 M HCl $ 5 m#
Pinza para tubo de ensayo 1 1 M NaOH $ 5 m#
Mechero 1 Aqua destillata (A. dest.)
Gradilla 1
Pipetas de 5 m# 2
Bistur o navaja 1

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Mtodo
1) Normal
1.1. Colocar en un tubo de ensayo unos trocitos de hgado
1.2. Aadir 5 m# de agua oxigenada
1.3. Anotar y explicar las observaciones

2) Temperatura
2.1. Colocar en un tubo de ensayo unos trocitos de hgado
2.2. Aadir 5 m# de A. dest. y hervir la muestra durante 5 min
2.3. Retirar el agua sobrante
2.4. Aadir 5 ml agua oxigenada
2.5. Anotar y explicar las observaciones

3) pH
3.1. Colocar en un tubo de ensayo unos trocitos de hgado
3.2. Aadir 5 m# 1 M HCl e incubar a temperatura ambiente la muestra durante 5 min
(mezclndola)
3.3. Retirar el cido sobrante (neutralizndolo con unos 5 ml 1 M NaOH)
3.4. Aadir 5 m# agua oxigenada
3.5. Anotar y explicar las observaciones

Resultados

Normal Temperatura pH

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Observaciones

Conclusiones

Bibliografa
1. Conn, E.E., P.K. Stumpf, B. George & R.H. Doi (2002): Bioqumica Fundamental. 4. ed.,
Wiley
2. Murray, R.K., D.K Granner & V.W. Rodwell (2007): Bioqumica ilustrada. 17. ed., Manual
Moderno
3. Voet, D. & J.G. Voet (2004) Biochemistry. 3. ed., Wiley

Cuestionario
1. Elabore un diagrama de flujo en el que describa el o los procedimientos utilizados en
esta prctica.
2. Indique los clculos necesarios para la elaboracin de las soluciones utilizadas y
especifique el peso molecular, temperatura de ebullicin, temperatura de fusin, estado
fsico a 25 C y solubilidad de los reactivos utilizados.
3. Diferencie entre las estructuras de protenas 1a, 2a, 3a y 4a.
4. Qu otros factores favorecen a la desnaturalizacin de las enzimas?

Mecanismo de Evaluacin
La presente se calificar en una escala del 0 al 100 y el valor obtenido estar en
proporcin con el porcentaje de la evaluacin final (20 % para prcticas), los puntos a
evaluar se listan a continuacin:
Aspecto a evaluar %
Comportamiento 40
Protocolo 30
Examen 30

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Medidas de Seguridad y Salud Ocupacional
En el manejo del hgado, no se requiere medidas de seguridad especiales. Durante el corte
del hgado con las tijeras no se debe cortar sus dedos. Al hervir las muestras, la boca de
los tubos debe estar dirigida al contrario de la persona por si el burbujeo al hervir es fuerte.
Para evitar que se derrame el lquido en el tubo al hervir, se recomienda que el tubo tenga
3
/4 partes de espacio libre.
El HCl provoca quemaduras e irrita las vas respiratorias puesto que es una sustancia muy
corrosiva y se tiene que usar guantes de caucho nitrilo. En caso de perdida del
conocimiento nunca dar a beber ni provocar el vomito. Si se inhala, trasladar a la persona
al aire libre. En caso de que persista el malestar, pedir atencin mdica. Si se tiene
contacto con la piel lavar abundantemente con agua. Quitarse las ropas contaminadas. En
caso de contacto con los ojos, lavar abundantemente con agua manteniendo los parpados
abiertos. Pedir atencin mdica. Si se llega a ingerir, beber abundante agua. Evitar el
vmito. Pedir atencin mdica. En contacto con metales puede formarse hidrgeno
gaseoso.
NaOH es corrosivo y se tiene que usar guantes de caucho butlico. En caso de derrame
neutralice con carbonato hidrogenado, para situaciones en las que entre en contacto con
piel y ojos enjuagar con abundante agua y llamar al servicio mdico de emergencias.

Disposicin de Desechos Fsicos, Qumicos y Biolgicos


En este caso la neutralizacin del HCl se realiza con 1 M NaOH. Una vez neutralizado los
desechos se pueden tirar al desage. Si existen residuos de hgado, se depositan en una
bolsa de plstico, se cierra bien y se tira en la basura.

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Prctica No. 4
Cintica enzimtica
Tipo de prctica: Grupo de 3 estudiantes Tiempo de duracin: 2 h

Objetivo
Aprender el funcionamiento y la influencia en la velocidad de reaccin de las enzimas, que
tienen una posicin central en el metabolismo de los seres vivos.

Introduccin
Las enzimas son catalizadores de naturaleza protenica que regulan la velocidad a la cual
se realizan los procesos fisiolgicos, producidos por los organismos vivos. En los sistemas
biolgicos constituyen las bases de las complejas y variadas reacciones que caracterizan
los fenmenos vitales. La fijacin de la energa solar y la sntesis de sustancias
alimenticias llevadas a cabo por los vegetales dependen de las enzimas presentes en las
plantas. Los animales, a su vez, estn dotados de las enzimas que les permiten
aprovechar los alimentos con fines energticos o estructurales; las del metabolismo interno
y de la vida de relacin, como la locomocin, la excitabilidad, la irritabilidad, la divisin
celular, la reproduccin, etc., estn regidas por la actividad de innumerables enzimas
responsables de que las reacciones se lleven a cabo en condiciones favorables para el
individuo, sin liberaciones bruscas de energa a temperaturas fijas en un medio de pH,
concentracin salina, entre otras, prcticamente constante.
Las enzimas producidas por los organismos vivos habitualmente solo catalizan un tipo de
reaccin o solo una reaccin determinada; la especificidad de las enzimas es tan marcada
que en general actan exclusivamente sobre sustancias que tienen una configuracin
precisa.

Material
Material Cantidad Reactivos Cantidad
Pipetas, perilla 3 Saliva (ayuno: estudiante no debe 2 m#
comer por lo menos 2 h antes)
Tubos de ensayo de 10 Lugol: 1 g I2, 2 g KI en 300 ml de Aqua 5 m#
15 m# destillata (A. dest.) filtrado
Celda de plstico 1 Solucin de almidn (100 mg/m#) 1 m#
Equipo
Espectrofotmetro 1

- 20 - !
Mtodo
1. Pipetar segn el siguiente esquema en un tubo de ensayo:
- 2500 # Agua
- 300 # Lugol
- 100 # Saliva
2. Determinar E0 (660 nm): blanco
- 100 # almidn (diferentes concentraciones segn la Tabla 1)
3. Mezclar rpido (tubo de ensayo)
4. Pasar a una celda de plstico y
5. Determinar E660 por 1-2 min cada 10 s
6. Despus por 3-4 min cada 15 s (o hasta que no haya ms E660 significativo)
7. Cada concentracin se determina por duplicado

Resultados
Calcule la velocidad inicial de la reaccin para cada concentracin de sustrato.
Dibuje una grfica de Michaelis-Menten.
Estima por la grfica de Michaelis-Menten el KM y vmax.
Calcule por la ecuacin de Lineweaver-Burk el KM y vmax.

Tabla 1. Preparacin y mediciones de las diferentes concentraciones de almidn


1 1
No. Vol alm. [#] Vol H2O [#] conc. alm. v0 /c (alm) /v
-1
[mg/m#] [E/min] [M ] [min/E]
0 0 3000
1 300 2700
3 600 2400
5 900 2100
7 1200 1800
9 1500 1500
11 2300 700
13 3000 0

- 21 - !
Observaciones

Conclusiones

Bibliografa
1. Champe, P.C., R.A. Harvey & D.R. Ferrier (2005): Bioqumica. 3. ed. McGraw Hill
2. Conn, E.E., P.K. Stumpf, B. George & R.H. Doi (2002): Bioqumica Fundamental. 4. ed.,
Wiley
3. Lodish, H., A. Berk, P. Matsudaira, C.A. Kaiser, M. Krieger, M.P. Scott, S.L. Zipkursky &
J. Darnell (2005): Biologa celular y molecular. 5. ed. Mdica Panamericana
4. Voet, D. & J.G. Voet (2004) Biochemistry. 3. ed., Wiley
5. Skoog, D.A., D.M. West, F.J. Holler & S.R. Crouch (2005): Fundamentos de qumica
analtica. 8. ed. Editorial Thomson

Cuestionario
1. Elabore un diagrama de flujo en el que describa el o los procedimientos utilizados en
esta prctica.
2. Indique los clculos necesarios para la elaboracin de las soluciones utilizadas y
especifique el peso molecular, temperatura de ebullicin, temperatura de fusin, estado
fsico a 25 C y solubilidad de los reactivos utilizados.
3. Describir la ecuacin de Michaelis-Menten para calcular v y KM, y tambin la ecuacin
de Lineweaver-Burk.
4. Cmo puede la enzima bajar la entalpa (energa) de activacin?
5. Describir el significado de catlisis, actividad cataltica, catal, Kcat y KM.

- 22 - !
Mecanismo de Evaluacin
La presente se calificar en una escala del 0 al 100 y el valor obtenido estar en
proporcin con el porcentaje de la evaluacin final (20 % para prcticas), los puntos a
evaluar se listan a continuacin:
Aspecto a evaluar %
Comportamiento 40
Protocolo 30
Examen 30

Medidas de Seguridad y Salud Ocupacional


La concentracin de yodo utilizada en esta prctica es similar a utilizada para
desinfectantes. Por lo tanto las soluciones en esta prctica no son txicas. Sin embargo, se
recomienda utilizar guantes para evitar colorear la piel por el yodo.

Disposicin de Desechos Fsicos, Qumicos y Biolgicos


Los desechos lquidos se pueden tirar al desage.

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Prctica No. 5
Azcares reductores
Tipo de prctica: Grupo de 3 estudiantes Tiempo de duracin: 2 h

Objetivo
Familiarizarse con las propiedades qumicas de los azcares determinando los azcares
reductores por la reaccin de Fehling.

Introduccin
Los azcares reductores son aquellos que presentan un carbono libre en su estructura y
pueden reducir, en determinadas condiciones, a las sales cpricas. El ensayo de Fehling
se funda en el poder reductor del grupo carbonilo de un aldehdo. ste se oxida a cido y
reduce la sal de cobre (II) en medio alcalino a xido de cobre (I), que forma un precipitado
de color rojo. Un aspecto importante de esta reaccin es que la forma aldehdo puede
detectarse fcilmente aunque exista en muy pequea cantidad. Si un azcar reduce el licor
de Fehling a xido de cobre (I) rojo, se dice que es un azcar reductor. Al reaccionar con
monosacridos, se torna verdoso; si lo hace con disacridos, toma el color del ladrillo.

Material
Fehling I: 0,93 g CuSO4 en 100 m# Aqua destillata (A. dest.)
Fehling II: 36,4 g Na-K-tartrato + 12 g NaOH en 100 m# A. dest. $

Material Cantidad Reactivos Cantidad


Pipetas, perilla 3 Reactivo de Fehling I 10 m#
Tubos de ensayo de 15 m# 10 Reactivo de Fehling II $ 10 m#
Soln. glucosa (1 g/10 m#) 0,5 m#
Soln. fructosa (1 g/10 m#) 0,5 m#
Equipo Soln. sacarosa (1 g/10 m#) 0,5 m#
Bao Mara (100 C) 1 Soln. almidn (1 g/10 m#) 0,5 m#

Mtodo
1. Poner en cada uno de 5 tubos 2 m# de reactivo de Fehling I
2. Aadir en cada tubo 2 m# de reactivo de Fehling II y mezclarlo
3. Aadir 3 gotas de A. dest. en tubo 1, soln. glucosa en tubo 2, soln. fructosa en tubo 3,
soln. sacarosa en tubo 4 y soln. almidn en tubo 5
4. Calentar por 3 min en un Bao Mara a 100 C
5. Enfriarlo lentamente
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Resultados

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5

Observaciones

Conclusiones

Bibliografa
1. Ganong, W.F. (2006): Fisiologa Mdica. 20. ed. Manual Moderno
2. Guyton, A.C. & J.E. Hall (2006): Tratado de Fisiologa Mdica. 11. ed. Elsevier
3. Murray, R.K., D.K Granner & V.W. Rodwell (2007): Bioqumica ilustrada. 17. ed., Manual
Moderno
4. Voet, D. & J.G. Voet (2004) Biochemistry. 3. ed., Wiley

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Cuestionario
1. Elabore un diagrama de flujo en el que describa el o los procedimientos utilizados en
esta prctica.
2. Indique los clculos necesarios para la elaboracin de las soluciones utilizadas y
especifique el peso molecular, temperatura de ebullicin, temperatura de fusin, estado
fsico a 25 C y solubilidad de los reactivos utilizados.
3. Describir carbohidratos, aldosas, cetosas, triosas, tetrosas, pentosas, hexosas.
4. Cules son las estructuras de carbohidratos relevantes en la biologa?
5. Qu son los ismeros: enantimeros, diasteremeros, epmeros, anmeros?
6. Explique anillo interno: hemiacetal, hemicetal, mutarrotacin, proyeccin Fischer y
Haworth.
7. Describa reacciones de oxidacin y reduccin: alditol, cido aldnico, cido urnico,
lactona, cido aldridos.
8. Explique el enlace glucosdico (N y O) y disacridos relevantes en la biologa.

Mecanismo de Evaluacin
La presente se calificar en una escala del 0 al 100 y el valor obtenido estar en
proporcin con el porcentaje de la evaluacin final (20 % para prcticas), los puntos a
evaluar se listan a continuacin:
Aspecto a evaluar %
Comportamiento 40
Protocolo 30
Examen 30

Medidas de Seguridad y Salud Ocupacional


El CuSO4 puede producir irritaciones en ojos y piel en personas predispuestas. Lvese
inmediatamente con agua abundante. Usar guantes y gafas de seguridad. Contamina al
medio ambiente por ser bioacumulativo y no es intrnsecamente biodegradable por lo que
no se debe tirar al alcantarillado.

Disposicin de Desechos Fsicos, Qumicos y Biolgicos


Todos los desechos que contengan CuSO4 (como aquellos tubos que contengan el
reactivo de Fehling I), se depositan al contenedor de sales de metales pesados.

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Prctica No. 6
cidos grasos insaturados
Tipo de prctica: individual Tiempo de duracin: 2 h

Objetivo
Conocer las caractersticas fsico-qumicas de diferentes lpidos.

Introduccin
Los lpidos son biomolculas muy diversas; unos estn formados por cadenas alifticas
saturadas o insaturadas, en general lineales, pero algunos tienen anillos (aromticos).
Algunos son flexibles, mientras que otros son rgidos o semiflexibles hasta alcanzar casi
una total flexibilidad molecular; algunos comparten carbonos libres y otros forman puentes
de hidrgeno. En el uso coloquial, a los lpidos se les llama incorrectamente grasas,
aunque las grasas son slo un tipo de lpidos procedentes de animales. Los lpidos
cumplen funciones diversas en los entre ellas la de reserva energtica (triacilglicridos), la
estructural (fosfolpidos de las bicapas) y la reguladora (esteroides). Los cidos grasos son
las unidades bsicas de los lpidos saponificables y consisten en molculas formadas por
una larga cadena hidrocarbonada con 12 a 22 tomos de carbono y un grupo terminal. La
presencia de dobles enlaces en el cido graso reduce el punto de fusin. Los cidos
grasos se dividen en saturados (sin presencia de dobles enlaces) e insaturados (uno o
ms dobles enlaces).

Material
Material Cantidad Reactivos Cantidad
Lipidos de diferentes fuentes (aceites, 4 NaOH, 20 % $ 2 m#
mantequilla, manteca, margarina): trae el
estudiante
Esptula chica 1 cido actico, 5 % $ 8 m#
Mechero de Bunsen 1 Almidn 1g
Tubos de ensayo de 15 m# 4 Lugol 3 gotas
Pipetas de 2 y 10 m# 4

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Mtodo
1) Saponificacin
1.1 Colocar 2 m# o 2 g de aceite y 2 m# de NaOH al 20 %
1.2 Hervir suavemente (de forma controlada) y agitar durante algunos minutos
(aproximadamente 2 min)
1.3 Dejar reposar y aparecern dos o tres capas
a) Superior (puede no aparecer): aceite que no ha reaccionado
b) Intermedia semislida de jabn
c) Inferior: glicerol disuelta en el agua

2) cidos grasos insaturados


2.1. Poner 2 m# de un lpido en un tubo de ensayo
2.2. Aadir 7,5 m# cido actico
2.3. Aadir unas 3 gotas de Lugol y mezclar bien
2.4. Incubarlo unos 7 min a 70 C
2.5. Aadir media esptula de polvo de almidn y mezclar bien

Resultados

Observaciones

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Conclusiones

Bibliografa
1. Ganong, W.F. (2006): Fisiologa Mdica. 20. ed. Manual Moderno
2. Lodish, H., A. Berk, P. Matsudaira, C.A. Kaiser, M. Krieger, M.P. Scott, S.L. Zipkursky &
J. Darnell (2005): Biologa celular y molecular. 5. ed. Mdica Panamericana
3. Mathews, C.K., K.E. van Holde & K.G. Ahern (2002): Bioqumica. 3. ed. Pearson
Addison Wesley

Cuestionario
1. Elabore un diagrama de flujo en el que describa el o los procedimientos utilizados en
esta prctica.
2. Indique los clculos necesarios para la elaboracin de las soluciones utilizadas y
especifique el peso molecular, temperatura de ebullicin, temperatura de fusin, estado
fsico a 25 C y solubilidad de los reactivos utilizados.
3. Explique dos ejemplos de estructuras y funciones de las diferentes clases de lpidos.
4. Describa la estructura de la membrana y sistemas de transporte.
5. Cules son los cidos grasos esenciales, por qu y para qu se necesitan?

Mecanismo de Evaluacin
La presente se calificar en una escala del 0 al 100 y el valor obtenido estar en
proporcin con el porcentaje de la evaluacin final (20 % para prcticas), los puntos a
evaluar se listan a continuacin:
Aspecto a evaluar %
Comportamiento 40
Protocolo 30
Examen 30

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Medidas de Seguridad y Salud Ocupacional
Al hervir las muestras, la boca de los tubos debe estar dirigida al contrario de la persona
por si el burbujeo al hervir es fuerte. Para evitar que se derrame el lquido en el tubo al
hervir, se recomienda que el tubo tenga 3/4 partes de espacio libre.
cido actico es una sustancia corrosiva y se tiene que usar guantes de neopreno. En
caso de perdida del conocimiento nunca dar a beber ni provocar el vomito. Si se inhala,
trasladar a la persona al aire libre. En caso de que persista el malestar, pedir atencin
mdica. Si se tiene contacto con la piel lavar abundantemente con agua. Quitarse las
ropas contaminadas. En caso de contacto con los ojos, lavar abundantemente con agua
manteniendo los parpados abiertos. Pedir atencin mdica. Si se llega a ingerir, beber
abundante agua. Evitar el vmito. Pedir atencin mdica.
NaOH es corrosivo y se tiene que usar guantes de caucho butlico. En caso de derrame
neutralice con carbonato hidrogenado, para situaciones en las que entre en contacto con
piel y ojos enjuagar con abundante agua y llamar al servicio mdico de emergencias.

Disposicion de Desechos Fsicos, Qumicos y Biolgicos


En este caso la neutralizacin del NaOH se realiza con HCl. Una vez neutralizado los
desechos se puede tirar al desage. La concentracin del cido actico utilizada en esta
prctica (5 %) no es txica, sin embargo puede neutralizarse con carbonato hidrogenado
para posteriormente tirarlo al desage.

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