Benitez Garca Gariela S.

Tarea: 4 12/febrero/2016.

Mtodos de tincin

Una tincin o coloracin es una tcnica auxiliar utilizada para mejorar el

contraste en la imagen vista al microscopio. Los colorantes son sustancias
que usualmente se utilizan para aumentar la definicin y examinar
poblaciones celulares.

Tipos de tcnicas de tincin

Tinciones simples

Se usa un nico colorante, que siempre es de tipo bsico. Se utilizan

solamente para incrementar el contraste; todas las clulas absorbern el
colorante y quedarn teidas del mismo color. Se fija el espcimen, se
aade el colorante y se deja el tiempo adecuado para que se absorba, se
retira el exceso de colorante y la preparacin ya est lista para ser
observada.

Tinciones diferenciales

Se utilizan para distinguir entre tipos de microorganismos. La tcnica de

tincin diferencial consta de dos etapas: una tincin simple seguida de una
tincin de contraste. En la tincin de contraste se utiliza otro colorante que
tie (y por tanto, revela) las clulas no teidas por el primer colorante. Estas
tinciones son muy utilizadas en microbiologa.

Tinciones especficas

Se utilizan para incrementar el contraste en las clulas microbianas y

revelan estructuras particulares, entre las que se incluyen en los flagelos y
las cpsulas.

Tincin adecuada

En su forma ms simple, el verdadero proceso de tincin puede implicar la

inmersin de la muestra en la solucin colorante, seguido del aclarado que
es un lavado para eliminar el exceso de colorante y la observacin. Muchos
tintes, sin embargo, requieren del uso de un mordiente. Cuando la solucin
de colorante en exceso se elimina durante el aclarado, la tincin
mordentada permanece.

Tincin negativa

Un mtodo sencillo de tincin para bacterias, que adems es un claro caso

de cromofobia y que por lo tanto funciona aun cuando los mtodos de
tincin positiva fallan, es la tincin negativa. Esto puede ser conseguido
simplemente extendiendo la muestra en un portaobjetos y aplicando
directamente sobre ella una gota de nigrosina o tinta china y cubriendo
luego la muestra humedecida con un cubreobjetos. Luego de esto, los
microorganismos pueden ser observados fcilmente por medio de
microscopa en campo claro como inclusiones claras muy bien contrastadas
contra el medio oscuro que las rodea.
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Tincin indirecta

Se denomina de este modo a las tinciones que hacen uso de un mordiente.

Un mordiente habitual es el cido tnico.

Tincin directa

Hablamos de tincin directa cuando el colorante interacciona directamente

con el sustrato, sin otro tratamiento previo.

Tincin Gram.

La tincin de Gram es uno de los mtodos de tincin ms importantes en el

laboratorio bacteriolgico. Su utilidad en la prctica de referencias a la
morfologa celular bacteriana (cocos, bacilos, positivos, negativos, etc.) se
basan justamente en la tincin de GRAM

1. Se tie el espcimen con el primer colorante, cristal violeta.

2. Se aade el mordiente, yodo.

3. Se aplica el agente decolorante, normalmente una solucin de acetona o

etanol. En este momento, las bacterias Gram negativas pierden su tincin
violeta, pero las Gram positivas retienen el colorante.

4. Como colorante de contraste se aade safranina, que tie de rosa las

bacterias Gram negativas, previamente decoloradas; mientras que a las
bacterias Gram positivas les proporciona un color violeta ms intenso.

Una tincin cido-alcohol resistente se realiza segn los siguientes pasos:

1. Tincin primaria con fucsina bsica, que tie todas las clulas de rojo.

2. Calentamiento suave de la preparacin para facilitar la penetracin del

colorante en el interior de la clula.

3. Decoloracin con una solucin de cido clorhdrico en etanol. Este

decolorante elimina la fucsina de todas las clulas excepto de las micro
bacterias, que la retienen debido a su superficie crea.

4. Coloracin de contraste con azul de metileno. Se tien de azul todas las

clulas previamente decoloradas, lo que facilita la diferenciacin entre las
clulas de Mycobacterum, an teidas de rojo, v las clulas restantes del
espcimen.

Tincin rodamina-auramina.

Los cidos miclicos de las paredes celulares de las micobacterias poseen

afinidad para los fluorocromos auramina y rodamina. Estos colorantes se
fijan a las bacterias, que aparecen de color amarillo o naranja brillante
contra un fondo verdoso. El permanganato de potasio, empleado como
contraste, evita la fluorescencia inespecfica. Todos los microorganismos
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cido-alcohol resistentes, incluyendo los esporozoaros parsitos, se tien

con estos colorantes.

Un aspecto importante de la coloracin rodamina-auramiria es que luego los

frotis pueden ser reteidos con la coloracin de Ziehl-Neelsen o Kinyoun
directamente sobre la tincin con el fluorocromo, si se elimina antes el
aceite de inmersin. De esta forma, los resultados positivos pueden ser
confirmados con las coloraciones tradicionales, que adems permiten la
diferenciacin morfolgica.

Tincin naranja de acridina.

El fluorocromo naranja de acridina se une al cido nucleico ya sea en su

forma nativa o desnaturalizada. En algunas preparaciones de naranja de
acridina, el color de la fluorescencia puede variar, dependiendo del pH y de
la concentracin. El naranja de acridina ha sido empleado como colorante
vital, que da una fluorescencia verde si el microorganismo est vivo y roja si
est muerto. De todos modos, como el colorante se intercala en el cido
nucleico, el germen viable se inactivar poco tiempo despus de la tincin.

Colorantes: La mayora de los colorantes son compuestos orgnicos que

tienen alguna afinidad especfica por los materiales celulares. Muchos
colorantes utilizados con frecuencia son molculas cargadas positivamente
(cationes) y se combinan con intensidad con los constituyentes celulares
cargados negativamente, tales como los cidos nucleicos y los polisacridos
cidos.

Azul de metileno: El azul de metileno se utiliza para teir clulas animales,

para hacer ms visibles sus ncleos. Es tambin utilizado para teir los
extendidos de sangre para ser utilizados en citologa y como colorante vital
en el recuento de reticulocitos.

Azul Nilo: Tie los ncleos de color azul. Tambin puede ser utilizado para
teir clulas vivas.

Cristal violeta: El cristal violeta, al ser combinado con un mordiente

adecuado, tie las paredes celulares de color prpura. El cristal violeta es un
componente importante en la coloracin de Gram.

Eosina: La eosina se utiliza ms frecuentemente como contra coloracin de

la hematoxilina, impartiendo un color que va del rosado al rojo al material
citoplasmtico, membrana celular, y algunas estructuras extracelulares.
Adems imparte un fuerte color rojo a los eritrocitos. La eosina puede ser
utilizada tambin en algunas variantes de la coloracin de Gram, y en
muchos otros protocolos de tincin.

Safranina: La safranina es un colorante nuclear. Colorea los ncleos

celulares de rojo, y se utiliza principalmente como contra coloracin.
Tambin puede ser utilizada para darle una coloracin amarilla al colgeno.
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Verde de metilo; El verde de metilo se utiliza frecuentemente en

microscopia de campo claro, para teir la cromatina de las clulas y facilitar
as su visualizacin.

Bibliografia:

http://microbiologia3bequipo5.blogspot.mx/2014/10/metodos-y-tecnicas-de-
tincion.html