MARCO TERICO

Enterococcus faecium es una bacteria Gram-positivo, bacteria alfa hemoltica,

algunas cepas de Streptococcus faecium se utilizan como pro biticos en
animales. Es resistente a muchos agentes antimicrobianos de uso comn. Puede
ser comensal en el intestino humano, pero podra ser patgeno, causando
enfermedades como meningitis neonatal.

son clulas esfricas u ovoides que miden de 0,6 a 2,0 x 0,6 a 2,5 m; son cocos
Gram positivos que aparecen en par o en cadenas cortas en medio lquido; son no
capsulados, no forman endosporas; son anaerobios facultativos; poseen
requerimientos nutricionales complejos; son catalasa negativa.

Raras cepas son mviles por la presencia de flagelos. Fermentan una amplia
variedad de carbohidratos con elaboracin de cido lctico sin produccin de gas;
la temperatura ptima de crecimiento es de 37 C.

Toleran altas condiciones de pH: 9,6; usualmente fermentan la lactosa; rara vez
reducen nitratos. El contenido de G + C del ADN es de 37 a 45 mol%. Los
enterococos se encuentran aproximadamente en todos los animales, son flora
normal del tracto gastrointestinal (TGI), tracto genitourinario (TGU), vas
respiratorias superiores, cavidad oral, piel, vagina y uretra femenina. Tambin se
hallan en las superficies del entorno ambiental, en el agua, en la vegetacin,
resultado de la contaminacin por excrementos de animales y en aguas albaales
no tratados. En el humano, la concentracin del enterococo en las heces es de
108 UFC/g. Los factores microbiolgicos y ecolgicos que favorecen la
colonizacin intestinal permanecen an oscuros.

METODOLOGA

TIPO DE INVESTIGACIN
Se realizan dos tipos de investigacin para realizar tal fin:

Investigacin experimental
Investigacin Semi experimental

UNIVERSO DE ESTUDIO

El universo de estudio de la investigacin a realizar corresponde a la inoculacin

de la solucin (agua peptonada y como material de inters el intestino de la vaca)
que sembraremos en dos medios de cultivos, los cuales son:
agar sangre
agar EMB

Tracto intestinal o tripas, en su concepto bsico, es el tubo digestivo de los

seres vivos del reino animal, ya sea considerado en todo o en parte, e
indiferentemente expresado en singular o en plural, integrado, de manera
fundamental, por la faringe, el esfago, el estmago, el intestino delgado y el
intestino grueso.
En su concepto culinario, las tripas son un determinado tipo de despojo comestible
procedente de los estmagos de diversos animales de granja.

LOCALIZACIN

Se realizaran diferentes anlisis en el laboratorio de Microbiologa de alimentos,

pertenecientes al programa de Ingeniera de Alimentos de la Universidad de
Crdoba, sede Berastegui, municipio de Cinaga de oro, departamento de
Crdoba con una temperatura promedio de 29C y 20 m.s.n.m, situada
geogrficamente en las coordenadas 8 40 26 de latitud norte y 75 46 44 de
latitud oeste con respecto al meridiano de Greenwich.

VARIABLE

TIPO NOMBRE NIVEL CLA ESCALA

DE SE
MEDICI
ON
Independie Temperat Intervalo Cuantitati 37 OC
nte ura vo
Independie Medio de Razn Cualitativ --------------
nte cultivo o ----
Independie Tiempo de Intervalo Cuantitati 24h- 36h
MATERIALES
nte incubaci vo
n
Dependient Crecimien Razn Cualitativ --------------
e to o ----
microbian
o
 Balanza analtica Medio tsi(2)
Asas redonda, mechero Medio citrato(2)
Agua peptona Medio indol(2)
Safranina de gram Medio rojo de metilo(2)
Medio agar sangre(2) Medio descarboxilasa(2)
Medio agar nutritivo(2) Medio nitrato(2)
Cristal violeta Medio motilidad y SH2(2)
Lugol, Catalasa(2)
Alcohol acetona Ureasa(2)
Safranina de Gram

MATERIA PRIMA: Intestino de la vaca (tripas)

MTODOS

PROCEDIMIENTO: El procedimiento a seguir para lograr encontrar las
caractersticas principales de Enterococcus faecium:

1. PREPARACIN DE LA MUESTRA: El aislamiento de Enterococcus faecium
se realizara a partir de intestino de vaca (tripas)
Normalmente habitan en el tracto gastrointestinal. Sin embargo, como
patgenos oportunistas, E. faecium puede causar problemas graves.
Se deben tomar 25 gr e introducirlo en 75ml de agua peptonada para
enriquecer la muestra y permitir la proliferacin de la bacteria deseada e
incubarla de 37 C por 24 horas.

2. ENRIQUECIMIENTO DE LA MUESTRA: AL finalizar el perodo de incubacin
se debe inocular a una proporcin 1:10 en un caldo nutritivo, posteriormente
debe incubarse a 37 C durante 24 horas.

3. SIEMBRA EN MEDIOS SLIDOS: Al finalizar el perodo de incubacin se
sembrarn microorganismos tomando inculos del caldo nutritivo en 2 medios
de cultivo, los cuales son 2 cajas de Agar sangre y 2 cajas de Agar EMB. Agar
sangre medio para propsitos generales, para el aislamiento y cultivo de
numerosos microorganismos, con la adicin de sangre, el medio es til tanto
para el aislamiento y cultivo de microorganismos aerobios y anaerobios
nutricionalmente exigentes a partir de una gran variedad de muestras, como
para la observacin de reacciones de hemlisis.El medio EMB ayuda a la
diferenciacin entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y
aquellos que son incapaces de hacerlo, est dada por los indicadores eosina y
azul de metileno; stos ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias
Gram positivas. y permiten el crecimiento del microorganismo (segn teora
relacionada), de los cuales, cada caja de los dos medios ser incubado a 37C
durante 24 horas.

SIEMBRA N 1.
Se realizara en el Agar EMB: las colonias en este medio presentan un
caracterstico brillo metlico. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro
oscuro con periferia azulada o rosada, mientras que las que no lo hacen son
incoloras. Enterococcus faecium crece en este medio como colonias
puntiformes y transparentes, el inoculo se tomara del caldo nutritivo a una
temperatura de incubacin de 37C durante 24h y se realizara una siembra
 por agotamiento o francs, es la ms utilizada, porque favorece el aislamiento
de colonias y observacin de las caractersticas del cultivo bacteriano.

SIEMBRA N2.
Se realizara en el agar sangre: El agar sangre aporta muchos factores de
enriquecimiento. Se usa tambin para ver la capacidad hemoltica de los
microorganismos patgenos (que es un factor de virulencia). Observando los
halos hemolticos alrededor de las colonias, hemolisis de Streptococcus,
izquierda: alfa hemolisis (hemolisis parcial)
alfa: halos verdosos (reduccin de la hemoglobina de los glbulos rojos a
metahemoglobina en el medio)
beta: halos incoloros (hemolisis total)
gamma: inexistencia de halos (sin hemolisis)
El inoculo se tomara del caldo nutritivo a una temperatura de incubacin de
37 C durante 24h y se realizara una siembra por agotamiento o francs.

IDENTIFICACIN MORFOLGICA: Posteriormente se realizar la tincin
de Gram para la identificacin morfolgica de Enterococcus faecium. Se
visualizaron cocos en pares o en cadenas Gram positivos (color morado),
sugerentes de pertenecer al Gnero Enterococcus.

4. PRUEBAS BIOQUMICAS: Para la identificacin de Enterococcus faecium
se realizarn las siguientes pruebas bioqumicas:

PRUEBA DE TSI Y KIA: Determina la capacidad de la bacteria de atacar un
carbohidratos especifico, incorporado en medio de crecimiento bsico, con
produccin o no de gases, junto con la posible formacin de sulfuros
( indicador de pH: rojo de fenol).

PRUEBA DE INDOL: Determina la capacidad de una bacteria de desdoblar el
indol de la molcula de triptofano.

PRUEBA DE MOTILIDAD Y H2S: Observar la movilidad del microorganismo,
gracias a la baja concentracin de agar, lo cual nos indica la presencia de
flagelos. Por otro lado se puede determinar si se ha liberado H 2S por la
accin enzimtico de los aminocidos que contienen azufre produciendo una
reaccin visible de color negro.

DESCARBOXILASA: Mide la capacidad enzimtica de un organismo para
descarboxilar un aminocido para formar una amina, con la consiguiente
alcalinidad, tambin se observa formacin de H 2S. En este medio (LIA) se
evala la lisina Descarboxilasa (LD), los microorganismos LD+ transforman la
lisina en cadaverina, amina que en medio cido provoca el viraje del indicador
prpura de bromocresol; los LD- fermentadores de glucosa producirn otro
viraje.
 NITRATO: Est prueba permite determinar la capacidad de un organismo de
reducir el nitrato en nitritos o en nitrgeno libre.

CITRATO: Determina si una bacteria es capaz de utilizar el citrato como
nica fuente de carbono para el metabolismo provocando alcalinidad. La
utilizacin de cidos orgnicos y sus sales como fuente de carbono produce
carbonatos alcalinos en nueva degradacin.
RM-VP: En el medio de cultivo, la pluripeptona aporta los nutrientes necesarios
para el desarrollo bacteriano y la glucosa es el hidrato de carbono fermentable.
La glucosa puede ser metabolizada por los microorganismos, a travs de
distintas vas metablicas. Segn la va utilizada, se originarn productos
finales cidos (cido lctico, cido actico, cido frmico), o productos finales
neutros (acetil metil carbinol).
Esta diferencia en el metabolismo bacteriano, podra ser reconocida por la
adicin de un indicador como rojo de metilo, para revelar la presencia de
productos cidos, y por la adicin de alfa naftol e hidrxido de potasio para
evidenciar la presencia de productos finales neutros.
Voges y Proskauer, describieron una coloracin rojiza que apareca
despus de adicionar hidrxido de potasio a los cultivos de ciertos
microorganismos en medio con glucosa. Esta coloracin se debe a la oxidacin
del acetilmetil carbinol a diacetilo el cual reacciona con la peptona del medio
para dar un color rojo.
CATALASA: La catalasa es una enzima que descompone al perxido de
hidrgeno en oxgeno y agua, esta enzima es similar a la estructura de la
hemoglobina. Excluyendo al gnero Streptococcus y algunos otros la mayora
de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas tienen catalasa.

UREASA: Este medio de cultivo, formulado por Rustigian y Stuart, presenta
bajo contenido de nutrientes y alta capacidad buffer. Aquellas bacterias que
poseen la enzima ureasa, pueden utilizar el nitrogeno proveniente de la urea, la
hidrolizan, liberando amonaco y dixido de carbono. Estos productos
metablicos alcalinizan el medio, haciendo virar el indicador rojo fenol del
amarillo al rojo. Para organismos que hidrolizan la urea lentamente, es
recomendable usar el medio de Christensen

5. ANLISIS DE RESULTADOS: Se realizarn los anlisis respectivos de las

pruebas realizadas y se podr deducir que las caractersticas experimentales
son similares a las tericas, por ende se obtuvo el xito del aislamiento.

PROCEDIMIENTO PARA OBTENCIN Y PREPARACIN DE LA

MUESTRA

TRIPAS (25 g) COLOCAR 75 ml de agua peptonada


37 C/24
INCUBAR horas

Asa redonda TOMAR Inoculo de la sln tripa

con agua peptonada

COLOCAR Caldo

INCUBAR 37C

Inoculo del
Asa redonda TOMAR
caldo nutritivo

Agar sangre
SEMBRAR
Agar EMB

INCUBAR 37C

CARACTERISTICAS
OBSERVAR MORFOLOGICAS

KIA TSI-INDOL

REALIZAR
Motilidad Y H2S-
citrato
PRUEBAS

nitrato-catalasa-

CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES

MA
MAY
RZ ABRIL
O
O


Actividades 22 1 2 2 2 2 2
8 15

Proyecto

Entrega de

materiales a
utilizar
Preparacin de

la muestra
Enriquecimient

o de la
muestra
Siembra por

mtodo de
agotamiento
Observacin
de los
resultados
obtenidos en la
siembra
Pruebas

bioqumicas
Observacin
de los
resultados de
las pruebas
bioqumicas.
Entrega de

artculo.
Sustentacin

del artculo.










AISLAMIENTO DE LA BACTERIA Streptococcus faecium








Integrantes:
ANA TERESA CARABALLO







Profesora:
M. Sc. YENIS IVETH PASTRANA PUCHE











UNIVERSIDAD DE CRDOBA
FACULTAD DE INGENIERAS
PROGRAMA INGENIERA DE ALIMENTOS
ASIGNATURA MICROBIOLOGA GENERAL
BERASTEGUI CRDOBA
2017




BIBLIOGRAFA

1. http://www.actaodontologica.com/ediciones/2009/1/enterococ
cus_faecium_dientes_fracaso_tratamiento_endodontico.asp
2. http://www.scielo.sa.cr/scielo.php?
script=sci_arttext&pid=S1017-85461998000100004
3. http://bvs.sld.cu/revistas/hie/vol51_1_13/hie10113.htm
4. http://www.bd.com/resource.aspx?IDX=20558
5. https://es.wikipedia.org/wiki/Tripas