Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Introducere
Activitatea celulelor corpului uman poate fi asemnat cu activitatea
unei fabrici chimice. Doar civa dintre miile de compui necesari activitii
corpului nostru sunt obinui direct din alimentaie. Majoritatea acestora sunt
sintetizai n celule, ceea ce nseamn c sute de reacii chimice au loc n
celule n fiecare minut al vieii noastre.
Aproape toate aceste reacii sunt catalizate de ctre enzime, molecule
proteice care mresc viteza reaciilor chimice fr a suferi vreo modificare.
Fr enzime, viaa aa cum este tiut de noi nu poate fi trit.
Ca toi catalizatorii, enzimele nu influeneaz echilibrul chimic al reaciei.
Aceasta nseamn c enzimele nu pot determina desfurarea unei reacii
dac aceasta nu este posibil i n absena lor. Enzimele determin doar
creterea vitezei de reacie. Catalizatorii biologici, inclusiv enzimele, sunt
remarcabili din dou puncte de vedere:
sunt deosebit de eficieni - pot determina o cretere a vitezei de
reacie de 109 pn la 1020 ori.
sunt foarte specifici.
Puterea de cataliz a unei enzime se poate observa ntr-un exemplu familiar
tuturor: descompunerea apei oxigenate cu formare de ap i oxigen conform
ecuaiei reaciei chimice :
2H2O2 2 H2O + O2
Reacia, dei puternic favorizat termodinamic, este foarte lent n lipsa
unui catalizator. Din acest motiv se poate achiziiona o sticl de ap oxigenat i
se poate pstra mult timp fr ca aceasta s se descompun. Dac, ns, se va
aduga ion feric (de ex. FeCl3) se va constata c viteza de reacie crete de
aproximativ 1000 de ori; de asemenea, hemoglobina, o protein ce conine fier
determin o cretere semnificativ a vitezei de descompunere. Astfel, dac se
pune ap oxigenat pe un deget tiat se va observa imediat punerea n libertate
a oxigenului, reacia fiind de 1 million de ori mai rapid dect n cazul absenei
catalizatorului. Exist ns i cazuri cnd se pot atinge viteze de reacie mult mai
mari. De exemplu catalaza, o enzim coninut de multe celule, mrete
viteza de descompunere a apei oxigenate de 1 miliard de ori. Prezena
acesteia n organismele vii se datoreaz faptului c n unele reacii celulare
se produce apa oxigenat, un periculos agent oxidant i deci este necesar
producerea catalazei pentru descopunerea acesteia. Exemplele menionate
arat c viteza de reacie depinde semnificativ de prezena catalizatorului
precum i de natura acestuia.
Peroxidaza, o enzim frecvent ntlnit n plante, reduce H2O2 la ap.
Un tip de peroxidaz se gsete i n eritrocite, celule foarte sensibile la
acumularea de ap oxigenat.
Determinarea activitii catalazei prezint o deosebit importan n
analiza laptelui. n mod normal, laptele nu trebuie s manifeste o activitate
catalazic. Dac n lapte este depistat aceast enzim, exist indicaii
asupra prezenei leucocitelor, care provin de la unele maladii de secreie sau
ale ugerului. Activitatea catalazic din laptele pasteurizat reprezint i un
indiciu c acest proces a fost efectuat defectuos deoarece exist nc forme
vegetative care conin catalaz.
Principiul metodei
Metoda este bazat pe faptul c bicromatul de potasiu, n mediu de
acid acetic, este redus de apa oxigenat la acetat cromic, care poate fi
determinat colorimetric la lungimea de und de 570 nm. Deoarece bicromatul
nu absoarbe n aceast regiune, prezena acestuia n mediul de reacie nu
interfer la determinarea colorimetric a acetatului cromic.
Preparatul de catalaz este lsat s acioneze aupra H2O2 o perioad
fix de timp, dup care reacia este stopat cu un amestec de bicromat-acid
acetic glacial. Cantitatea de H2O2 rmas dup stoparea reaciei enzimatice
este determinat n urma msurtorii spectrofotometrice.
Reactivi i soluii
(1) Reactiv bicromat-acid acetic glacial, se prepar prin amestecarea
unei pri de K2Cr2O7 soluie 5%, cu trei pri de acid acetic glacial;
(2) Soluie tampon K2HPO4-KH2PO4 0,01 M, pH 7 ;
(3) Soluie H2O2 0,08 M, obinut prin pipetarea a 0,88 mL perhidrol
(soluie 30%) i diluarea cu soluie tampon (2), pn la 100 mL;
(4) Soluie H2O2 0,16M, preparat n soluia tampon (2);
(5) Preparat enzimatic.
Mod de lucru
Construirea curbei etalon. Din soluia stoc (3), avnd concentraia de 80
moli H2O2/mL, se fac diluii conform Tabelului1.
Tabelul 1
mL soluie (2) mL soluie (3) moli H2O2/mL
1,0 0 0
0,9 0,1 8
0,8 0,2 16
0,7 0,3 24
0,6 0,4 32
0,5 0,5 40
0,4 0,6 48
0,3 0,7 56
0,2 0,8 64
0,1 0,9 72
0 1,0 80
La 1 mL soluie H2O2 diluat conform tabelului, se adaug 2 mL reactiv
bicromat (1). Probele se incubeaz la fierbere timp de 10 minute, se rcesc sub
jet de ap i se colorimetreaz la 570 nm, fa de ap distilat.
Calculul rezultatelor
Utiliznd curba de etalonare i pe baza valorilor extinciilor obinute se
determin concentraia apei oxigenate n moli H2O2 consumai/ 1 mL
preparat enzimatic.
Constanta de vitez monomolecular k pentru descompunerea H2O2,
sub aciunea catalazei, se determin grafic i analitic utiliznd ecuaia
cinetic pentru o reacie de ordinul 1 :
1 S
k = log 0
t S
unde S0 este concentraia iniial de H2O2, iar S este concentraia de peroxid
dup t minute.
Se compar rezultatele obinute prin cele dou metode.
tiind c o unitate de activitate enzimatic corespunde la formarea a 1
mol de produs pe minut, se evalueaz activitatea enzimatic a catalazei.
Introducere
Una dintre cele mai importante preocupri ale cercettorilor din multe
ri, n domeniul proteciei mediului, este aceea legat de scurgerile sau
deversrile n mediul nconjurtor a unor variate clase de poluani organici.
Muli dintre aceti compui figureaz deja n topul listei Ageniei de Protecia
Mediului din SUA, fiind considerai cei mai importani poluani oraganici, din
cauza potenialului lor cancerigen, hepatotoxic i mutagenic. Unii dintre
acetia, cum sunt compuii bifenilici policlorurai, hidrocarburile policiclice
aromatice i esterii ftalici sunt rezultatul activitilor industriale, n timp ce
pesticidele organoclorurate, ierbicidele, fungicidele i insecticidele provin din
agricultur.
Pentru determinarea coninutului de substane poluante din probele de
mediu se folosesc instrumente moderne de analiz (n special cromatografe)
de mare selectivitate i sensibilitate. Prepararea probelor joac un rol
important n cadrul metodelor de analiz cromatografic i de aceea
reprezint problema cheie a analizelor; n general, pregtirea probelor este
cea mai laborioas i ndelungat etap a ntregii proceduri analitice.
Concentraiile mici (ng/L-g/L) de poluani organici nevolatili din ap i
complexitatea matricilor de mediu necesit aplicarea unor proceduri specifice
de prelucrare a probelor nainte de efectuarea oricrei evaluri a polurii apei
prin tehnici cromatografice. Rolul etapei de prelucrare este acela de
concentrare a probei, de izolare a substanei de analizat i de purificare a
matricei prin ndeprtarea, ct mai mult posibil, a compuilor de interferen.
Tehnicile utilizate cel mai frecvent pentru pregtirea probelor apoase
sunt extracia lichid-lichid (LLE) i extracia n faz solid (SPE). Evaluarea
sistematic a diferitelor metode de extracie, aplicabile mai multor clase de
poluani organici din ap, este important n descoperirea procedurilor de
pregtire eficient a probelor.
Ca i multe alte substane poluante, hidrocarburile poliaromatice (PAH)
pot fi determinate folosind metodele cromatografice. O bun separare
cromatografic este condiionat de o foarte corect etap de izolare,
concentrare i purificare a probei.
Scopul lucrrii
n aceast lucrare se urmrete determinarea hidrocarburilor
poliaromatice din probe contaminate de sol i/sau ape, prin diferite metode de
extracie: n baia cu ultrasunete, cu extractor Soxhlet, n faz solid (SPE) i
n sistem lichid lichid, urmate de analiza extractelor prin cromatografie (gaz
cromatografie sau HPLC).
Mod de lucru
Pentru trasarea curbei de etalonare se utilizeaz soluii cu un coninut
de 6 PAH-uri: naftalin (N), acenaften (AN) acenaftilen (ANE), fenantren (F),
antracen (A), piren (P), cu concentraii de 100 ppb, 50 ppb and 5 ppb n
diclorometan (DCM), respectiv n metanol (MeOH). Standardul intern utilizat
este n-heptadecanul.
Scopul lucrrii
Aspecte teoretice
dx
=k(a x)(b x)
dt
unde:
a = concentraia iniial a acetonei;
b = concentraia iniial a acidului;
x = conversia corespunztoare timpului t.
Ecuaia cinetic integrat va avea forma:
1 a(b x )
k= ln
t (b a ) b(a x )
Mod de lucru
A) Se calculeaz a i b.
B) Se determin x n funcie de volumele de titrare.
C) Se calculeaz constanta de vitez
a) din ecuaia cinetic
b) grafic
RAPORT DE ACTIVITATE
Kc = (2)
c A .c B
1 2
Mod de lucru
Tabel 1
Nr. Co2+ , V [mL] SCN- ,V [mL] Solvent [mL]
1 1 0 5,0
2 1 5,0 0
3 1 4,0 1
4 1 3,5 1,5
5 1 3,0 2,0
6 1 2,5 2,5
7 1 2,0 3,0
8 1 1,5 3,5
RAPORT DE ACTIVITATE
Aspecte teoretice
T2
T1
T1>T2>T3 lg k
c lgc
Fig. 1 Fig. 2
Figura 2 permite confirmarea modelului Freundlich i determinarea
constantelor de adsorbie k i n din date experimentale: lg k este ordonata la
origine i n =1/tg .
Mod de lucru
V [mL] p-nitrofenol 5 10 15 20 30 50
V [mL] ap 45 40 35 30 20 -
RAPORT DE ACTIVITATE
Nr. prob 1 2 3 4 5 6
c0 [mol/L]
cf [mol/L]
[mol/g]