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Objetivos
1.- Introduccin
Histricamente el trmino espectroscopia se refera slo a la regin visible del espectro,
donde la luz se descompona en sus longitudes de onda originndose espectros que se usaban
para estudiar la estructura de la materia o para anlisis cualitativos o cuantitativos. Con el
paso del tiempo, se ampli el significado para incluir todo el espectro de radiaciones
electromagnticas. Sin embargo en la actualidad, el significado de espectroscopia es ms
amplio an, ya que incluye otros tipos de radiacin como por ejemplo con iones
(espectroscopia de masas), de electrones (espectroscopia de electrones) y ondas de sonido
(espectroscopia acstica).
Cuando la radiacin electromagntica pasa desde el vacio a la superficie de una porcin de
materia, interacta con los tomos y/o molculas del medio. La naturaleza de esta interaccin
depende de las propiedades de la materia y puede dar lugar a la desviacin, transmisin,
absorcin y emisin de la radiacin.
Cuando el fenmeno involucra una desviacin del haz de luz los mtodos se conocen con el
nombre de No espectroscpicos, mientras que en todas las otras interacciones se puede
obtener un espectro y se conocen con el nombre de mtodos Espectroscpicos.
Abordaremos primero los mtodos espectroscpicos de absorcin
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teora ondulatoria clsica con parmetros como velocidad, frecuencia, longitud de onda y
amplitud. La teora ondulatoria para la radiacin electromagntica no explica completamente
los fenmenos asociados con la absorcin o la emisin de energa radiante, para estos
procesos es necesario considerar la energa radiante como un flujo de partculas discretas de
energa llamados fotones o cuantos.
Estos dos conceptos se complementan muy bien (dualidad, onda partcula) y se aplican tanto
al flujo de electrones como al de otras partculas elementales.
Figura 1 Figura 2
Como ya hemos visto, la radiacin electromagntica puede ser descrita como una onda. Los
parmetros que la definen son:
Perodo (p): tiempo necesario para que dos mximos sucesivos de una onda pasen por un
punto.
Longitud de onda ( ) es la distancia lineal entre dos mximos consecutivos de la onda. Se
mide en unidades de distancia: por ejemplo, metros (m) o cualquiera de sus submltiplos,
como el ngstrom (1 = 10-10 m) o los nanometros nm (1 nm = 10-9m).
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Debido a que la velocidad de la luz es constante e igual a c (2,997921010 cm/s), existe una
relacin directa entre la frecuencia y la longitud de onda, ya que dada una longitud de onda
determinada, si sabemos que la onda se desplaza a velocidad c, para saber el nmero de veces
que pasa un mximo por un punto, slo hace falta dividir la velocidad de la luz por la longitud
de onda. Tenemos, por tanto, que:
c
Otra forma de describir la radiacin electromagntica es a travs del nmero de onda ( ), que
est definido como el inverso de la longitud de onda en centmetros. La unidad de es cm-1,
que es el nmero de ondas de una frecuencia dada en el trayecto de 1 cm.
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3. Infrarrojos: son las ondas electromagnticas que emiten los cuerpos calientes. Tienen
diferentes aplicaciones en industria, medicina, etc. Comprenden la zona incluida entre
11011Hz y 41014Hz.
4. Luz visible: incluye una estrecha franja entre 41014Hz y 81014Hz. Corresponde a esta
banda las frecuencias que asociadas a cada color.
6. Rayos X: comprende una gama de frecuencias que incluye desde 11017Hz hasta
11019Hz. Son producidos por los electrones que estn ms fuertemente ligados al tomo.
7. Rayos gamma: estas ondas electromagnticas comprenden las frecuencias incluidas a partir
de 11019Hz. Su origen reside en el ncleo del tomo. Son producidos por numerosas
sustancias radioactivas. Su manipulacin requiere protecciones muy especiales.
4. Absorcin de la radiacin
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M * M calor
Ya que estas diferencias de energa son particulares para cada especie, el estudio de las
frecuencias de radiacin absorbidas proporciona un medio de caracterizar a los constituyentes
de una muestra. Con este fin se representa la absorbancia en funcin de la longitud de onda, a
esta representacin se la llama espectro de absorcin. En general la naturaleza de un espectro
viene influida por varibles como: la complejidad de los niveles energticos, el estado fsico y
entorno de las especcies absorbentes. Sin embargo, las diferencias entre los espectros de
absorcin de tomos y molculas es ms profunda.
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Por ejemplo el espectro de vapor de sodio mostrado en la figura muestra los dos picos agudos
de absorcin en la regin amarilla del espectro visible que son consecuencia de la exitacin
del electrn 3s a los dos estados 3p que difieren muy poco en energa
a b s o r b a n c ia
25
Los espectros de absorcin de las molculas
poliatmicas y en particular en estado lquido, son 20
La energa electrnica representa la energa que proviene de los estados energticos de los
electrones de enlaceLa energa vibracional est asociada con los movimientos de
estiramiento y flexin de los enlaces moleculares.
Los niveles vibracionales son mucho ms
numerosos que los electrnicos y menos
energticos. La energa rotacional es la energa
asociada los movimientos rotacionales dentro de
una molcula. Los niveles rotaciones son ms
numerosos que los vibracionales. As, para cada
estado electrnico de una molcula existen varios
estados vibracionales posibles y, a su vez, para
cada uno de stos son posibles numerosos estados
rotacionales. Por lo tanto, los espectros moleculares
de la regin ultravioleta-visible, se caracterizan por bandas de absorcin (como se muestra en
la figura) que a menudo abarcan un intervalo considerable de longitudes de onda. El motivo
por el cual las bandas de absorcin suelen ser muy anchas es que muchos niveles
vibracionales y rotacionales distintos se encuentran disponibles en niveles energticos
cercanos. Por lo tanto, una molcula podra absorber fotones en un amplio intervalo de
energas y ser an promovida del estado electrnico fundamental a un estado electrnico
excitado particular.
En la siguiente tabla se indican las regiones del espectro que se utilizan en la qumica
analtica, las transiciones atmicas o moleculares responsables de la absorcin o emisin de
radiacin en cada regin.
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Regiones del
Intervalo de
espectro Tipo de transicin
longitudes de onda
electromagntico
Rayos gamma (R) 0,005 - 1,4 Cambio de las configuraciones nucleares
Rayos X (RX),
ultravioleta (UV), 0,1 - 1800 Cambio de las configuraciones electrnicas
visible
Cambio en las configuraciones rotacionales y
Infrarrojo (IR) 0,780 - 300m
vibracionales
Microondas 0,75 - 3,75 mm Cambio en el entorno molecular
5. Procesos de relajacin
a) fluorescencia (F)
b) fosforescencia (P)
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I0 incide perpendicularmente sobre una solucin de un compuesto qumico que absorbe luz o
cromforo, el compuesto absorber una parte de la radiacin incidente (P0) y dejar pasar el
resto (P).
6.1 Transmitancia
Cuando un haz de potencia radiante P0, incide sobre una muestra de espesor b, debido a la
interaccin entre los fotones y las partculas absorbentes, la potencia radiante del haz
emergente disminuye (P).
En la figura se representa un haz de luz pararlelo antes y despus de haber atravesado una
solucin de una especie absorbente de concentracin c y de espesor b.
Se llama transmitancia, T de la solucin a la relacin entre la cantidad de la radiacin
transmitida por la solucin que lllega al detector una vez que ha atravezado la muestra y la
cantidad de luz que incidi sobre ella y se representa normalmente segn la siguiente
ecuacin:
P
T
P0
A menudo, la transmitancia se expresa como el porcentaje de la luz transmitido
(transmitancia porcentual)
P
%T 100 T 100
P0
La transmitancia nos da una medida fsica de la relacin de potencia incidente y transmitida al
pasar por la muestra. La relacin entre %T y la concentracin no es lineal, pero asume una
relacin logartmica inversa.
Nota: La potencia radiante P se define como la energa por segundo por unidad de rea del
haz de luz.
6.2 Absorbancia
La absorbancia (A) es un concepto ms relacionado con la muestra puesto que nos indica la
cantidad de luz absorbida por la misma, y se define como el logaritmo de 1/T, en
consecuencia:
A = log 1/T = -log T = -log P/ Po.
Cuando la potencia incidente y transmitida son iguales (Po = P), la transmitancia es del 100%
e indica que la muestra no absorbe a una determinada longitud de onda, y A vale log 1 = 0.
La cantidad de luz absorbida depender de la distancia que atraviesa la luz a travs de la solucin
del cromforo y de la concentracin de ste.
Observar que a diferencia de la transmitancia, la absorbancia de una solucin aumenta cuando
mayor es la atenuacin del haz emergente. La importancia de la absorbancia estriba en que es
directamente proporcional a la concentracin de la especie absorbente en la muestra.
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A bC abC
o La absorbancia, A, es adimensional.
o La concentracin de la muestra, C, se suele expresar en moles/litro (M) o en g/litro
o La longitud del camino ptico, b, se expresa en cm.
o La cantidad se llama absortividad molar y sus unidades son litro/mol cm. Cuando
la concentracin es expresada en g/l, debe hablarse de la absortividad a , y sus
unidades son litro/gcm.
A( ) ( ) b C a ( ) b C
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Psolvente P
A log log 0
Psolucin P
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La ley de Lambert-Beer es una ley lmite en el sentido de que se aplica slo cuando la
absorbancia se mide con una radiacin monocromtica. Sin embargo, en instrumentos
analticos de rutina no son prcticas las fuentes verdaderamente monocromticas, como los
lseres. En lugar de ellas, se emplean fuentes continuas policromticas junto con una red o
filtro, que proporcionan una banda de longitudes de onda simtrica y estrecha en torno a la
deseada.
Es un hecho experimental que las desviaciones de la ley de Lambert-Beer que resultan del uso
de un haz policromtico no son apreciables, siempre que la radiacin usada abarque un tramo
espectral dentro del cual el absorbente no presenta grandes cambios en funcin de la longitud
de onda, como se muestra en la figura. La banda A no muestra desviacin, ya que la
absorbancia no vara mucho a lo largo de la banda. La banda B muestra una desviacin
marcada ya que la absorbancia experimenta una variacin significativa en esta regin.
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8. Componentes instrumentales
La mayora de los instrumentos espectroscpicos constan de cinco componentes:
1. Una fuente estable de energa radiante
2. Un selector de longitudes de onda que permite el aislamiento de una regin reducida de
longitudes de onda
3. Uno o ms recipientes con la muestra
4. Un detector de la radiacin o transductor que convierte la energa radiante en una seal
medible (normalmente elctrica)
5. Un procesador y lector de la seal
8.1 Fuentes
Fuente Regin
del espectro (nm)
lmpara de H2 y D2 160-380 Absorcin molecular UV
lmpara de Absorcin molecular
240-2500
W/halgeno UV/visibles/IR cercano
Absorcin molecular visibles/IR
lmpara de W 320-2500
cercano
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Se dice que la luz de una sola longitud de onda es monocromtica. Sin embargo, hay que
aclarar que ningn selector es capaz de producir radiacin monocromtica, sino que la salida
de todos los dispositivos es una franja de longitudes de onda contiguas, llamada banda. Estas
longitudes se distribuyen simtricamente en torno a una longitud de onda central, llamada
nominal.
Para conseguir bandas estrechas de radiacin se usan dos tipos generales de selectores de
longitudes de onda: filtros y monocromadores. Los monocromadores tienen la ventaja de que
se puede escoger de forma continua la longitud de onda de salida dentro de un intervalo
espectral considerable.
8.2.1 Filtros
8.2.2 Monocromadores
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difraccin slo dirige una banda estrecha de longitudes de onda hacia la ranura de salida del
monocromador. Haciendo girar la red de difraccin se permite el paso de diferentes
longitudes de onda a travs de la ranura de salida.
Las ranuras o rendijas desempean un papel importante en la determinacinde la calidad de
un monocromador. En algunos monocromadores las aberturas de las dos ranuras (entrada y
salida) son fijas, pero en otros se pueden variar. La ranura de entrada sirve de fuente de
radiacin, su imagen es enfocada sobre la superficie que contiene a la ranura de salida. Si la
fuente de radiacin emite algunas lineas discretas, aparecern sobre el plano focal de la ranura
de salida una serie de lineas brillantes de forma rectangular, cada una correspondiente a una
determinada longitud de onda. Cada linea particular se puede enfocar en la ranura de salida
rotando al elemento dispersor.
8.3 Detectores
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Ejemplo:
El fototubo consta de un ctodo y un nodo sellados al vaco. El
ctodo est recubierto por un material fotoemisivo (generalmente
de metales alcalinos) que emiten electrones cuando se irradia.
Cuando se aplica un potencial los electrones migran hacia el nodo
produciendo una fotocorriente. El nmero de electrones es
directamente proporcional a la potencia del haz de radiacin.
Los recipientes que contienen la muestra normalmente se llaman celdas o cubetas y deben
estar fabricados de un material transparente en la regin espectral de inters. En la tabla se
listan algunos de los materiales ms empleado:
9. Instrumentos espectroscpicos
Todas las partes mencionadas antes componen los instrumentos empleados en espectroscopia.
Se pueden distinguir dos tipos principales de instrumentos
Se utilizan dos diseos bsicos en los espectrofotmetros utilizados en la regin del UV-
visible: ellos son: simple haz y doble haz.
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En los instrumentos de simple haz la radiacin pasa a travs de una sola solucin a la vez. En
los de doble haz, un haz de radiacin pasa a travs de la solucin problema y otro haz pasa a
travs de la solucin blanco o de referencia.
Para medir la transmitancia en instrumentos de simple haz se deben llevar a cabo los
siguientes pasos:
a) Sin que llegue luz al detector (paso de luz cerrado) se lleva a cero la indicacin del
medidor (o% de transmitancia)
b) Con la solucin blanco o de referencia, se abre el paso de luz y se ajusta el instrumento de
modo que mida 100% de transmitancia.
c) Se coloca la solucin problema y se lee la transmitancia
Estas tres operaciones se den repetir para cada longitud de onda, ya que tanto la salida de la
fuente como la respuesta del detector varan con la longitud de onda. Adems, la absorbancia
del solvente (blanco) puede cambiar con la longitud de onda. La naturaleza secuencial de
estos tres pasos tambin significa que tanto la salida de la fuente como la sensibilidad del
detector deben permanecer constantes durante se desarrollo implicando que el voltaje de la
fuente y del detector deben ser estables.
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Errores instrumentales
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ACTIVIDADES DE LABORATORIO
1.2. Fundamento del mtodo: La determinacin de P en soluciones en las que este elemento
se encuentra como ortofosfato, puede realizarse en forma espectrofotomtrica, previa
formacin de un complejo coloreado con el molibdato de amonio, en medio cido (H2SO4) y
en presencia de reductores como el cloruro estaoso o cido ascrbico. Este mtodo posee un
nivel de deteccin muy bajo, pudiendo realizarse determinaciones en muestras conteniendo
hasta 7 g de P por litro.
1.3. Reactivos
Solucion patrn de fsforo 50 mg/L
Reactivo A: Solucin de molibdato de amonio 2,5% m/v en H2SO4 10 N
Reactivo B: Reactivo cloruro estaoso 2,5% en glicerol.
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Problemas
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Problemas adicionales
1. Usar los datos de la tabla para calcular los valores que faltan. Siempre que sea necesario
suponer que el peso molecular del analito es 250.
b (cm)
A T% a (l/g cm) (l/molcm) ppm
camino M (mol/l)
absorbancia transmitancia absortividad absortividad (mg/l)
ptico
molar
0.416 1.40 1.2510-4
45.50 2.10 8.1510-3
1.424 0.1370 0.996
19.60 5.42103 2.510-4
3.46103 2.50 3.33
1.241103 0.125 7.7710-4
48.30 0.25 6.72
76.30 0.0631 1.10
6.54 9.82102 8.6410-3
0.842 7.73103 2.00
Rta.:
b (cm)
A T% a (l/g cm) (l/molcm) ppm
camino M (mol/l)
absorbancia transmitancia absortividad absortividad (mg/l)
ptico
molar
38,37 9,508 2377 31,25
0,342 0,0799 19,98 2037,5
3,76 34,28 0,0417 10435
0,707 21,71 0,521 62,5
0,115 76,79 13,94 1,3310-5
0,1205 75,76 4,96 194,25
0,316 188,09 46989 2,6910-5
0,117 15,78 6,7410-3 1685,6
1,184 3,94 0,139
14,38 30,92 7.73103 5,4510-5 13,62
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Cuestionario
1. Cules son las caractersticas de la radiacin electromagntica?
2. Representar y definir los parmetros ondulatorios de la radiacin electromagntica.
3. Cmo estn relacionados la energa y la longitud de onda?
4. A qu se llama radiacin monocromtica?
5. La radiacin ultravioleta es de mayor o menor energa que la infrarroja?
6. Qu ocurre cuando una molcula absorbe radiacin electromagntica?
7. Cules son los principales mecanismos de desactivacin de una molcula?
8. Qu ocurre con la potencia de la luz P0 cuando incide sobre un cuerpo o sobre una
solucin absorbente?
9. Enuncie y explique la ley de Lambert-Beer
10. Cules son las limitaciones de la ley de Lambert-Beer?
11. A qu se denomina transmitancia (T) o transmisin de una solucin?
12. A qu se denomina absorbancia de una solucin?
13. Qu expresin matemtica relaciona la transmitancia y la absorbancia?
14. Qu entiende por absortividad () y la absortividad molar (a)?
15. A qu se llama espectro de absorcin?
16. Qu representa un espectro de absorcin?
17. Cmo estn compuestos los instrumentos empleados en la espectrofotometra?
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ESPECTROSCOPIA ATMICA
Objetivos
Comprender los fundamentos de la espectroscopia de emisin
atmica
Entender los procesos que ocurren en la llama
Aplicaciones en el campo agronmico y forestal
1. Introduccin
Mientras que la mayora de las tcnicas espectroscpicas se utilizan para el estudio y
caracterizacin de molculas o iones en su entorno cristalino, la espectroscopa de emisin y
absorcin atmica se usa casi exclusivamente para el anlisis de tomos. Por consiguiente,
la tcnica resulta casi insuperable como mtodo de anlisis elemental de metales. En
principio, la espectroscopa de emisin puede utilizarse para la identificacin y para la
determinacin cuantitativa de todos los elementos de la tabla peridica.
Cuando la transicin se produce desde el estado fundamental hasta un estado excitado del
tomo mediante la absorcin de radiacin de una determinada frecuencia (caracterstica para
cada tomo), estamos en el caso de las tcnicas de absorcin. En el caso en que los tomos se
encuentren previamente a un estado excitado y se mida la intensidad de la radiacin emitida a
la frecuencia caracterstica correspondiente a la transicin desde el estado excitado al estado
fundamental, hablamos de tcnicas espectrofotomtricas de emisin.
El estudio espectroscpico de tomos o iones elementales como el Na0, K0, Fe+, Mg+, Al+,
slo puede hacerse en fase gaseosa. Por lo tanto, en la espectroscopia atmica las muestras se
vaporizan a muy altas temperaturas y las concentraciones de los tomos se determinan
midiendo ya sea la absorcin o la emisin a las longitudes de onda caractersticas. Debido a su
alta sensibilidad y la facilidad con las que muchas muestras pueden analizarse, la
espectroscopia atmica ha llegado a ser una de las principales herramientas de la qumica
analtica. Es comn determinar cualitativa y cuantitativamente alrededor de 70 elementos. La
sensibilidad es del orden de las partes por milln (ppm) a partes por billn (ppb). Son mtodos
rpidos, muy selectivos y el instrumental puede ser desde muy sencillo hasta muy complejo.
Pueden identificarse tres clases diferentes de procesos que permiten alcanzar el estado
excitado del tomo o ion previo a la emisin
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Como slo se verifican transiciones definidas entre los diferentes niveles atmicos, y cada una
de estas transiciones les corresponde una energa caracterstica (E = h) y por lo tanto una
longitud de onda especfica y dado que algunas transiciones son ms probables que otras, las
intensidades de las lneas de emisin son diferentes. Cuanto mayor sea la energa suministrada
por la fuente de excitacin, ms alto ser el nivel electrnico al cual se exciten los electrones
y menores sern las longitudes de onda de la luz emitida. Por consiguiente, al aumentar la
energa de la fuente de radiacin, se
observar un mayor nmero de lneas
espectrales, especialmente a longitudes de
onda cortas. En el diagrama se muestran las
principales transiciones electrnicas
correspondientes a los tomos de sodio y
potasio, el nmero que aparece sobre la
lnea que une los distintos niveles
electrnicos es la longitud de onda
correspondiente a cada transicin. El trazo
ms grueso corresponde a la transicin ms
probable.
Recordemos
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3.1 Aplicaciones
La fotometra de llama, es muy til en los anlisis de rutina de los metales alcalinos, alcalino-
trreos, que son los ms fcilmente excitables y cuya determinacin por otros mtodos es por
lo general complicada, por ejemplo la determinacin de sodio en agua.
La mayor dificultad que ofrece este mtodo est originada por el gran nmero de variables
que influyen en la intensidad de la radiacin, exigiendo, por lo tanto, un control cuidadoso de
las mismas para lograr una buena reproducibilidad y obligando al empleo de soluciones
patrones del elemento a determinar, por lo cual no constituye un mtodo de anlisis absoluto.
La correlacin entre la intensidad de la seal y la concentracin del elemento emisor en una
solucin permita la utilizacin de este fenmeno con fines cuantitativos.
Sealemisin = k C
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La temperatura provista por la combustin del gas natural y aire es la ms baja, pero es
suficiente para excitar a los metales alcalinos y alcalino trreos. Para obtener los espectros de
emisin de los metales pesados (Fe, Cu, Ni, etc,) se necesitan temperaturas entre 2500 a 3100
C que se consiguen empleando oxgeno u xido nitroso como oxidantes.
Para una mezcla determinada, la temperatura tambin depende de la relacin de caudales
entre combustible y comburente con que se alimenta la llama,
alcanzndose su mximo valor cuando esa relacin corresponde a la
estequiometra de la combustin (experimentalmente puede
observarse cuando se han formado correctamente los conos en el
mechero).
En la figura se muestra el perfil de temperatura de una llama. La
mxima temperatura est localizada algo por encima del cono
interior. Es importante que durante el anlisis se enfoque siempre la
misma zona de la llama sobre el sistema ptico de medida para no
perder reproducibilidad.
Los radicales presentes en la descomposicin de los gases de la
llama producen sus propios espectros de emisin, los cuales pueden
superponerse al espectro de emisin del analito. Si esto ocurre, la
concentracin del analito ser mayor que la real.
3.3 Equipamiento
Los instrumentos que se emplean tienen partes comunes con los de las otras tcnicas
espectroscpicas: monocromadores, filtros, detectores, pero difieren en el recipiente que
contiene la muestra que en esta tcnica es la llama.
Los componentes bsicos de un espectrmetro de llama son:
a. Reguladores de presin de combustible y comburente: controlan la presin y el caudal
de cada componente de la mezcla gaseosa
b. Sistema atomizador: lo constituyen el sistema nebulizador (donde se produce la
pulverizacin) y el mechero
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c. Sistema ptico: selecciona y asla una porcin del espectro, la que resultar ms o
menos ancha segn el tipo de sistema utilizado (filtro o monocromador)
d. Sistema detector medidor: es el dispositivo que transforma la radiacin en energa
elctrica susceptible de medicin en un galvanmetro adecuado
Los procesos que ocurren en la llama cuando se introduce la solucin con el elemento motivo
del anlisis (analito) pueden describirse en varias etapas:
1. Introduccin y pulverizacin
2. Evaporacin del solvente, se evapora el agua u otros solventes dejando como residuo
pequeas partculas de sal seca
3. Fusin y evaporacin de la sal del analito (la sal pasa al estado gaseoso)
4. Disociacin en vapor atmico (las molculas gaseosas, o una parte de ellas, se disocian
progresivamente dando lugar a tomos neutros o radicales) Estos tomos neutros son las
especies absorbentes
5. El vapor atmico puede seguir alguno de los siguientes procesos:
a. excitacin
b. ionizacin y eventual excitacin del in
c. asociacin molecular y o formacin de xidos refractarios (esto reduce la poblacin de
los tomos neutros en las llamas y constituye las llamadas interferencias qumicas que
se presentan en los mtodos de anlisis que utilizan llamas)
6. Emisin (en lneas o en bandas, segn la especie responsable de la radiacin)
Tomando como ejemplo la determinacin de sodio en agua, los procesos mencionados pueden
representarse mediante las siguientes secuencias:
(1) ( 2) ( 3)
NaCl (acuoso) NaCl (roco o nebulizado) NaCl (slido)
( 4)
NaCl ( vapor) 5 ) E
Na( vapor) Cl2 ( vapor) ( ( 6)
Na Na h
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I- Instrumentales
II- Interferencias
I-Factores instrumentales: son los que dependen de las caractersticas del instrumento y de
los parmetros controlables tales como: el tipo de mechero, la forma y el tamao de la llama,
la presin del comburente y el combustible, etc... En la prctica se ajustan las variables
operacionales de modo de obtener la mxima seal de una solucin del analito y se
mantienen constantes durante todo el proceso analtico.
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seal de sodio
condiciones instrumentales, incluyendo la presin del
gas, la proporcin de oxidante, etc. Con el solvente
puro se ajusta el cero de la escala y con el patrn ms
concentrado se lleva a 100% de seal. Luego se
registran las intensidades relativas de emisin de los
patrones restantes y se grafican en funcin de la
concentracin del analito.
concentracin de sodio
b- Mtodo de adicin de patrn
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ACTIVIDADES DE LABORATORIO
Determinacin del contenido de sodio en una muestra de agua
El sodio es uno de los seis elementos en orden de abundancia en la naturaleza y est presente
en las aguas naturales. El nivel puede variar entre 1ppm a 500ppm. Las concentraciones
relativamente altas de sodio se encuentran en aguas salobres. La determinacin de la relacin
de sodio al contenido de cationes totales es importante en la agricultura. Los suelos
permeables pueden daarse por una alta relacin de sodio.
Trazas de sodio pueden ser determinadas empleando fotometra de llama a una longitud de
onda de 589 nm. La intensidad de la luz emitida a esa longitud de onda es proporcional a la
concentracin de sodio
Las interferencias posibles:
1- grandes cantidades de sulfatos, bicarbonatos
2- potasio si se encuentra en una relacin potasio/sodio > 5:1
3- calcio si se encuentra en una relacin calcio/sodio > 10:1
Procedimiento:
1- Preparar 500,00 ml de una solucin madre de NaCl de 100,00 ppm en Na.
2- Patrones para la curva de calibracin de Na
Se utilizarn patrones de 2,00; 4,00; 8,00 y 10,00 ppm de Na+. Las mismas se prepararn
tomando el volumen correspondiente de la solucin madre anterior y llevndolo a 100,00 ml.
3- Medida:
a) encender el equipo
b) Colocar el filtro para sodio
c) Abrir el paso de gas
d) encender la llama
e) abrir el paso de aire
f) regula el caudal de aire y gas hasta observar los conos azules en el mechero
g) con agua bidestilada ajustar el cero
h) con la solucin patrn ms concentrada llevar la seal a 100%
i) registrar la lectura de las soluciones patrn. Antes de cada solucin colocar
agua bidestilada en el capilar para limpiar todo el conducto.
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Cuestionario y problemas
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La Figura muestra un diagrama parcial de los niveles de energa para una molcula
fotoluminiscente. La lnea horizontal So representa la energa del estado fundamental de la
molcula, el cual normalmente es un estado singulete (S0), en este nivel electrnico al igual
que en los otros estados excitados se encuentran asociados varios niveles vibracionales de la
molcula. A temperatura ambiente la energa electrnica de prcticamente todas las molculas
es So (todas las molculas se hallan en el estado de menor energa). S1 y S2 corresponden
respectivamente al primero y segundo estado singulete excitado. El de la derecha T1
corresponde al primer estado triplete excitado. Hay que sealar que el estado triplete es menos
energtico que el correspondiente estado excitado singulete (S1).
Normalmente, el tiempo de vida media de una especie excitada es breve porque hay diversas
formas en las cuales un tomo o una molcula excitada liberan su exceso de energa y se
relajan a su estado fundamental. Dos de las ms importantes de estos mecanismos son la
relajacin no radiativa y la relajacin fluorescente. La relajacin no radiativa comprende la
relajacin vibracional (entre estados vibracionales del mismo nivel energtico) y conversin
interna (entre niveles excitados diferentes)
La relajacin vibracional , sealada por las flechas onduladas cortas entre los niveles de
energa vibracionales, tiene lugar durante las colisiones entre molculas excitadas y las
molculas del solvente. Durante estas colisiones el exceso de energa vibracional se transfiere
a las molculas del solvente. La ganancia de energa vibracional del solvente se refleja en un
ligero incremento de la temperatura del medio. La relajacin vibracional es un proceso tan
eficiente que el tiempo de vida promedio de un estado vibracional excitado es de 10-15 s
aproximadamente.
Tambin puede ocurrir el relajamiento no radiante entre el nivel vibracional inferior de un
estado electrnico excitado y el nivel vibracional superior de otro estado electrnico. Este tipo
de relajacin es llamado conversin interna.
En la figura se ilustran otros procesos de relajacin: la fluorescencia y la fluorescencia.
La florescencia se puede observar cuando las molculas electrnicamente excitadas se relajan
desde el primer estado vibracional del estado excitado a cualquiera de los niveles
vibracionales de estado fundamental. Mientras que para observar la fosforescencia, luego de
la excitacin debe existir un cruce intersistemas (entre dos estados excitados S1y T1) llevando
a la molcula a un estado excitado de menor energa y desde ese estado la molcula emite un
fotn de fosforescencia.
Recordemos que el camino ms probable hacia el estado fundamental es aquel que minimiza
el tiempo de vida media del estado excitado. Por tanto, si la desactivacin por fluorescencia es
rpida con respecto a los procesos sin radiacin, se observa tal emisin. Por otro lado, si un
camino sin radiacin tiene una constante de velocidad favorable, la fluorescencia no tiene
lugar o es menos intensa.
La fluorescencia y fosforescencia estn limitadas a un nmero relativamente pequeo de
sistemas o molculas que incorporan caractersticas estructurales y ambientales que hacen que
la velocidad de los procesos de desactivacin sin radiacin se reduzcan hasta el punto que la
reaccin de emisin puede competir cinticamente.
Una vez que la especie ha sido excitada a niveles energticos superiores, la desactivacin o
prdida de la energa en exceso se puede efectuar a travs de diferentes procesos, el camino
ms probable hacia el estado fundamental es aquel que minimiza el tiempo de vida del estado
excitado (es decir el tiempo en que permanece la molcula en el estado excitado).
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Sfluorescencia = kfluorescencia C
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molecular. Algunas de las especies que pueden ser analizadas por fluorescencia son las
siguientes:
Cuestionario
1. Cul es el fundamento de los mtodos de fluorescencia y fosforescencia?
2. En qu se diferencian los dos mtodos anteriores con la quimioluminiscencia?
3. En qu se diferencian la fluorescencia de la fluorescencia?
4. Cules son las ventajas de los mtodos fotoluminiscentes respectos de os mtodos de
absorcin?
5. Cules son las partes que constituyen un instrumento empleado en las mediciones de
fluorescencia?
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MTODOS NO ESPECTROSCPICOS
1. Introduccin
2. Turbidimetra
Cuando una solucin turbia, esto es, una suspensin de partculas slidas en un lquido, se
interpone en la trayectoria de la luz, la potencia radiante que llega al detector es menor que la
que llegara si se tratara de un lquido transparente (no absorbente). Esta reduccin es el
resultado de la dispersin causada por reflexin y refraccin en las partculas suspendidas. La
luz se dispersa en todas direcciones y por consiguiente el poder de radiacin del haz que llega
al detector disminuye de modo considerable. Una determinacin turbidimtrica se efecta de
la misma forma que las medidas espectrofotomtricas de absorcin y el resultado puede
expresarse en unidades de absorbancia. Anlogamente a la ley de Beer, es posible obtener
una relacin entre la absorbancia y la concentracin del material suspendido.
Sin embargo, esta expresin (A = k C) slo es aplicable para un grado de turbidez bajo y
longitudes de camino ptico cortas, pues la relacin entre el nmero, el tamao y la cantidad
de luz dispersada es bastante compleja. Debido a esto, las curvas de calibracin de las
determinaciones turbidimtricas estn lejos de ser lineales.
Es sencillo comprender que, para una cierta cantidad de material suspendido en un
determinado volumen de un lquido, la dispersin causada por efectos de reflexin aumenta al
disminuir el tamao de partcula. Este razonamiento slo resulta vlido para un cierto tamao
de partcula, por debajo del cual no ocurre reflexin alguna. Recordemos que un cuerpo puede
reflejar la luz nicamente cuando su tamao es al menos la mitad de la longitud de onda de la
luz incidente. Por lo tanto, la luz azul se dispersa en mayor grado que la amarilla o la roja, por
lo que proporciona una sensibilidad ms alta en la turbidimetra. Estos hechos, aunados al
conocimiento de que rara vez se obtiene un tamao de partcula uniforme, sugieren que la
situacin es bastante compleja.
Generalmente es difcil ajustar las condiciones de una determinacin turbidimtrica, de tal
manera que el tamao de partcula sea reproducible. Algunos factores de mayor influencia son
la forma, el orden y la velocidad de mezclado de los reactantes, la agitacin, la temperatura, la
presencia o ausencia de electrolitos inertes y las concentraciones de las soluciones. Las
partculas grandes son indeseables pues causan heterogeneidades al sedimentarse.
Frecuentemente se aaden coloides protectores del tipo de la goma arbiga o de la gelatina
para reducir la floculacin y la sedimentacin. En las determinaciones turbidimtricas se
aceptan exactitudes y precisiones bajas a cambio de rapidez y simplicidad
El equipo que se emplea en estas determinaciones se denomina turbidmetro. Los
componentes y la distribucin de los mismos es igual a la de espectrofotmetro de absorcin,
de hecho cualquier espectrofotmetro puede funcionar como turbidmetro. Aunque es
deseable contar con un haz de luz monocromtico, no es un factor indispensable.
En la figura se muestra un turbidmetro para medidas rpidas en campo y un turbidmetro
convencional
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Estudios tericos y experimentales han mostrado que soluciones diluidas de diferentes tipos
de bacterias, independientemente del tamao celular, tienen casi la misma absorbancia por
unidad de concentracin de peso seco. Esto quiere decir que, en soluciones diluidas, la
absorbancia es directamente proporcional al peso seco, independientemente del tamao
celular del microorganismo. Sin embargo, se encuentran absorbancias muy diferentes por
partcula o por UFC (Unidad Formadora de Colonia) cuando los tamaos de las clulas
bacterianas son diferentes. Por esta razn, para estimar el nmero de microorganismos totales
o el nmero de microorganismos viables de una suspensin bacteriana debe realizarse una
"curva de calibracin" con cada tipo de microorganismo, slo de esta forma es posible
relacionar Absorbancia con el nmero de microorganismos totales
Peso seco: Concentracin celular bacteriana expresada en unidades de peso seco (g/ml-
mg/ml).
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La relacin directa entre la absorbancia y el peso seco slo se aplica para suspensiones
diluidas de bacterias. Estas suspensiones no deben tener una absorbancia mayor a 0.3, ya que
valores mayores producen desviaciones de la ley de Beer. Sin embargo, el inconveniente de
utilizar suspensiones diluidas puede involucrar un mayor error de pipeteo y menor
sensibilidad por el bajo nivel de absorcin.
La determinacin de sulfato en aguas puede llevarse a cabo por turbidimetra. En esta tcnica
se trata la muestra con suficiente cantidad de cloruro de bario de modo que el sulfato presente
en la muestra precipite como sulfato de bario insoluble, de color blanco. La reaccin es la
siguiente:
Luego se agrega a la solucin un estabilizante que impida la decantacin del precipitado del
medio lquido en el cual se encuentra por su mayor densidad y permita mantener las partculas
de sulfato de bario uniformemente distribuidas en el recipiente. En estas condiciones si se
hace incidir un haz de luz sobre la muestra se producir una dispersin del haz. La
disminucin de la radiacin que llega al detector debida a la dispersin estar directamente
relacionada a la concentracin de sulfato en la muestra. Al igual que en las determinaciones
espectrofotomtricas, debe construirse una curva de calibracin empleando soluciones patrn
de concentracin conocida de sulfato.
3. Nefelometra
La nefelometra es un procedimiento analtico que se basa en la dispersin de la radiacin que
atraviesan las partculas de materia. Cuando la luz atraviesa un medio transparente en el que
existe una suspensin de partculas slidas, se dispersa en todas direcciones y como
consecuencia se observa turbia. La dispersin no supone la prdida neta de potencia radiante,
solo es afectada la direccin de la propagacin, porque la intensidad de la radiacin es la
misma en cualquier ngulo. La intensidad depende de: el nmero de partculas suspendidas,
su tamao, su forma, los ndices refractivos de la partcula y del medio dispersante, y la
longitud de onda de la radiacin dispersada
El instrumento empleado es un nefelmetro. Los componentes principales son muy similares
a los del instrumental empleado en las mediciones especpectrofluorimtricas. El detector
generalmente forma un ngulo de 90 con el haz incidente.
La mayor parte de los requerimientos sealados para la turbidimetra se aplican tambin en la
nefelometra y las dificultades que se presentan son similares. Las curvas de calibracin estn
lejos de ser lineales, a menos que la sustancia a determinar est presente en concentraciones
muy bajas. Una determinacin nefelomtrica de cantidades pequeas de una especie,
normalmente produce mejores resultados que la correspondiente tcnica turbidimtrica, pues
la medicin de una baja intensidad de luz es ms exacta y precisa que la medida de una
pequea variacin de la intensidad de una luz intensa.
Sin embargo esta ventaja no suele ser suficiente para justificar la adquisicin de un
instrumento especial. Por consiguiente la tcnica no tiene un papel preponderante en las
determinaciones de rutina, aunque es de gran importancia para la evaluacin del tamao y de
la forma de las macromolculas y para la determinacin de sus pesos moleculares.
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Cuestionario
1. Cul es el fundamento de las mediciones turbidimtricas y nefelomtricas?
2. En qu se diferencian cada una de ellas?
3. Qu equipos pueden utilizarse en una determinacin turbidimtrica?
4. Qu equipos pueden emplearse en una determinacin nefelomtrica?
BIBLIOGRAFIA
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