Quin hace la luz y por qu?

La bioluminiscencia es la luz visible hecha por los seres vivos. Estas criaturas
son raros en tierra, pero muy comunes en los ocanos. Una lista de algunos de
los muchos tipos diferentes de criaturas bioluminiscentes en el mundo, fi
cacin cado por los diferentes entornos en los que viven, da una idea de la
relativa significacin de la bioluminiscencia en el medio marino, en
comparacin con los de los reinos terrestres y de agua dulce (Tabla 1).

Criaturas bioluminiscentes se producen en todos los ocanos en todas las

profundidades con mayores nmeros que se encuentran en la parte superior
1.000 m del vasto ocano abierto. La prevalencia de la bioluminiscencia aqu
es una consecuencia de las caractersticas visuales nicas de este entorno.
Este es un mundo sin escondites donde la luz solar fi ltrado a travs de las
profundidades disminuye aproximadamente 10 veces por cada 75 m de
descenso hasta que toda la luz visible desaparece por debajo de 1000 m. En
este reino del crepsculo la luz es tenue y azul y altamente direccional por lo
que las nicas criaturas que son visibles son aquellos directamente sobre la
cabeza o las que producen su propia luz con la bioluminiscencia. En este
contexto bioluminiscencia puede ayudar en la supervivencia de un organismo
en tres formas fundamentales:

1. La bioluminiscencia puede ayudar a un alimento para animales fi nd. Al

buscar algo en la oscuridad un ashlight fl es una herramienta muy til y
muchos animales han incorporado en ashlights fl bioluminiscentes. El sh fl
ashlight fi bien llamado es un buen ejemplo (clip de vdeo 1). La
bioluminiscencia tambin puede servir como un seuelo para atraer a sus
presas. El pez vbora fi, Chauliodus sloani, (Figura 1) tiene un seuelo
luminiscente en el extremo de un fi n de rayos modi fi que puede arquear hacia
delante en frente de su boca. En las profundidades oscuras toda la presa ve es
un bocado brillante. Pero cuando se la golpea es empalado rpidamente por los
enormes colmillos que le dan los peces vbora fi su nombre (Figura 2). Estos
colmillos son tan largas que si estuvieran dentro de la boca del pez sera
empalar su propio cerebro.

CORRESPONDENCIA CON

Edith A. Widder

Harbor Branch Oceanographic

Institucin, Fort Pierce, FL 34946, Estados Unidos de Amrica. widder@hboi.edu

Edith A. Widder

Harbor Branch Oceanographic Institution, Fort Pierce, Florida

Bioluminiscencia marina

Por qu tantos animales en el ocano abierto hacen la luz?

Fig. 1 Fig. 2

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2. La bioluminiscencia puede ayudar a atraer a un compaero.

Por ejemplo, mientras que las luces de la mejilla bioluminiscentes en la alta

mar loosejaw peces puede servir para localizar a sus presas en la oscuridad, es
probable que tambin funcionan en la seleccin de pareja, ya que los rganos
de luz de los hombres (Figura 3) son mucho mayores que los de las hembras
( Figura 4).

La estructura de la mandbula de aspecto extrao, de la que el loosejaw recibe

su nombre, permite un gape excepcionalmente amplia para dar cabida a gran
presa. Un habitante de aguas profundas que se conoce generalmente slo de
especmenes muertos criados en redes, era un hecho extremadamente raro
para poder observar este espcimen vivo. Este pez fue criado desde una
profundidad de 600 m utilizando una red con un dispositivo de captura
trmicamente insultado-que se puede cerrar en profundidad. Al mantener los
animales fros que normalmente seran asesinados - literalmente cocidos vivos
- en las aguas clidas superficiales, sobrevivir durante horas o incluso das en
el laboratorio. Debido a que la composicin del cuerpo de este pez es de 92%
de agua, no fue asesinado por la enorme diferencia de presin, lo que sera
letal para cualquier pescado con una vejiga natatoria (ver recuadro).

En los peces loosejaw, Photostomias guernei, los faros son retrctiles. Las luces
de la mejilla de la sh loosejaw fi masculina (Figura 3), son mucho mayores que
los de las hembras. Las figuras 4a y 4b muestran cmo un pez hembra tira el
rgano de luz de nuevo en su cabeza. Sin embargo, al igual que los faros de un
coche, estos rganos de luz pueden ser tambin fl incinera dentro y fuera sin
retraer mecnicamente. As que por qu molestarse? Bueno, al igual que los
faros de un coche, estas luces tienen una capa reflexiva altamente re que
recubre la parte posterior del rgano y ayuda a dirigir la luz hacia el exterior.
Esta superficie brillante est en marcado contraste con su aterciopelado negro,
cuerpo sin escamas y podra inadvertidamente revelar su presencia al
depredador o presa. As que el pez tira los rganos de luz hacia abajo y fuera
de la vista cuando no estn en uso: tanto mejor para mezclar en la oscuridad.

Fig. 3 Fig. 4a Fig. 4b

Vejiga natatoria

Muchos peces seos tienen una vejiga vejiga natatoria o gas que les da una
flotabilidad neutra. Esto ahorra los peces de tener que gastar energa para
evitar que s se hunda. Sin embargo, un sh tales fi solo tiene flotabilidad neutra
en una profundidad determinada. Si el pescado se eleva por encima del nivel
de flotabilidad neutra el resultado puede ser desastroso. A medida que se
reduce la presin del agua, la vejiga natatoria se expande y las ganancias de
peces aument ascensor - por lo tanto, debe mantener nadar hacia abajo o que
seguir aumentando. A fi sh en alta mar que es incapaz de perder el aire de su
vejiga natatoria llegar a la superficie con la vejiga natatoria ampliado que
sobresale de su boca o incluso roto.

Posicin de la vejiga natatoria

Backbone

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Bacterias

Dino fl agellates

Radiolarians

Esponjas

Celentreos Scyphozoa (Jelly fi sh);

Hydrozoa: Hidroides, hidromedusas;

Sifonforos;

Anthozoa: abanicos de mar, corales blandos, plumas de mar, pensamientos

mar.

Ctenforos (medusas peine)

Nermerteans (gusanos de la cinta)

Moluscos

Babosas de mar, bivalvos Boring, Cuttle fi sh, calamar,

Calamar vampiro, Octopods

Anlidos

Polychaeta (gusanos de cerdas), gusanos de tubo Pergamino, gusanos, gusanos

de fuego Escala

Artrpodos

Picnognidos (araas de mar), coppodos, ostrcodos (Mar fuego moscas),

Malacostraca, zarigeya camarn,

Los anfpodos, eufusidos (krill), decpodo camarones

Bryozoa (esteras de Mar)

Quetognatos (Flecha gusanos)

Equinodermos

Crinoideos (lirios de mar), holoturias (pepinos de mar),

Asteroides (Star pescado), ofiuroideos (estrellas quebradizas)

MARINA

TERRESTRE

Bacterias

Hongos
Moluscos

Caracoles

Anlidos

Las lombrices de tierra

Artrpodos

Insectos, colmbolos, Fuego moscas, escarabajos Click,

Gusanos ferrocarril, lucirnagas, ciempis,

Los milpis

AGUA FRESCA

Moluscos

Limpet (Latia)

Hemicordados (gusanos bellota)

Cordados

Tunicados: ascidias;

Pirosomas (cilindros de fuego); Larvaceos

Vertebrados

Los tiburones, anchoas, anguilas Gulper, espectro peces,

Slickheads, Shining hombros tubo, Bristlemouths, Hatchet fi sh, sh Viper fi,

Dragon fi sh, Snaggletooth fi sh, Loosejaws, scopelarchidae fi sh, Linterna fi sh,
Morid bacalao, Merluccid merluza, Rat-colas, guardiamarina fi sh, Angler fi sh,
pia fi sh, linterna fi sh, sh Pony fi,

Batera

Mesa 1

Criaturas bioluminiscentes que se encuentran en ambientes marinos, terrestres

y de agua dulce. Una lista ms completa, utilizando la nomenclatura cientfica,
puede encontrarse en la referencia [1]. Phyla estn en negrita. Enlaces a sitios
web con ms informacin estn en azul.

3. La bioluminiscencia puede proteger a un animal de sus depredadores. Por

ejemplo, algunos animales, como el camarn de aguas profundas (Figura 5),
usan su bioluminiscencia para distraer o cegar a un depredador. En este caso,
los camarones en realidad vomita luz en el rostro de su atacante y luego de
vuelta fl ips de distancia en la oscuridad.

Otros animales utilizan su bioluminiscencia a 'gritar' en busca de ayuda. Una

vez que un animal est atrapado en las garras de un depredador su nica
esperanza de escapar puede ser para atraer la atencin de algo ms grande y
ms desagradable que puede atacar y comer todo lo que est comiendo. Haga
clic en la imagen (Figura 6) para ver el 'grito' de esta jalea fi sh. Este
espectculo de luces increble que se conoce como una pantalla 'de alarma
antirrobo.

El camarn de aguas profundas, Acanthephyra purpurea, utiliza la luz para

cegar temporalmente a un depredador, los peces luz, Gonostoma elongatum.
Fig. 5

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Fig. 9

Fig. 7

Fig. 8

Fig. 6

Fig. 10a

La bioluminiscencia desde el vientre del pez linterna, ceratoscopelus

maderensis.

La jalea fi sh en alta mar, Atolla wyvillei. El pez hacha, Argyropelecus af fi nis.

La bioluminiscencia desde el vientre del pez hacha destruye su silueta. Bajo el

agua dispersin de la luz difumina las fuentes individuales en una sola fuente
difusa que coincide perfectamente con el color y la intensidad de la luz del sol
fi ltrado desde arriba. El bristlemouth benttooth, Cyclothone pallida.

Uno de la multitud de peces linterna (mictfidos) que pueblan las

profundidades crepsculo del ocano. Los rganos de luz como joyas en su
vientre y flancos son conocidos como fotforos.
Fig. 10b

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La bioluminiscencia tambin funciona como camuflaje edad. En el crepsculo

profundidades de la silueta de un animal visto contra la tenue luz azul fi ltrado
de arriba es un blanco fcil. Es por esto que muchos depredadores del ocano
abierto, como el pez hacha fi (Figura 7) tienen los ojos vueltos hacia arriba y
una boca hacia arriba. Pero el fi sh hacha de guerra tambin es presa de la
mayor fi sh nadar por debajo de ella, por lo que para hacerse ms difcil de ver,
tiene una silueta y plata lados estrechos. Tambin emite bioluminiscencia de su
vientre que es una combinacin perfecta de color y la intensidad de la luz del
sol fi ltrado desde arriba (Figura 8). Si una nube Baln por encima del sol,
oscurecimiento de la luz solar, el pescado se atena que bioluminiscencia por
lo que sigue para mezclar en el fondo. Este truco, llamado counterillumination,
es algo que tiene que ver para creer. Una prueba de su eficacia es la enorme
cantidad de animales que lo utilizan. Algunos de estos incluyen: la bristlemouth
benttooth (Figura 9), que es el vertebrado ms comn en el planeta; peces
linterna (Figura 10); vbora fi sh (Figura 1), con escamas de dragn fi sh (Figura
11); krill (Figura 12) y calamar (Video clip 3).

Muchos animales utilizan la bioluminiscencia para ms de un propsito. Este

blackdragon fi sh (Melanostomias bartonbeani) (Figura 13), por ejemplo, tiene
un fl ashlight lado de cada ojo que puede utilizar para buscar compaeros de
presa o de seal, tiene un barbo mentn que se puede utilizar como un
seuelo, tiene luz rganos dispuestos a lo largo de su vientre que se puede
utilizar para ocultar su silueta y tiene cuerpos luminosos incrustados en la
dermis gelatinosos y entre el fi n rayos que se puede utilizar para una pantalla
de alarma, que se puede ver si hace clic en la imagen de la peces (Video clip
4).

Fig. 12

Como la mayora de eufusidos, Meganyctiphanes norvegica tiene fotforos

que utiliza counterillumination (imagen inferior) para.
Fig. 11

El pez dragn escamoso, Stomias brevibarbatus, produce bioluminiscencia de

fotforos dispuestos a lo largo de su vientre y de un barbo barbilla que utiliza
como reclamo.

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Cmo hacen la luz?

Cmo los seres vivos hacen luz sin quemar? Lo hacen a travs de una
reaccin qumica altamente e fi cacia que implica una enzima llamada
luciferasa y luciferina sustrato llamada. Diferentes animales producen muy
diferentes versiones de estos productos qumicos (Figura 14).

Por ejemplo, fi re fl luciferina y se ensambla a partir de los aminocidos,

tirosina y cistena, mientras que las bacterias luminiscentes utilizan una
reducida ribo fl avin fosfato (FMNH2) y dino fl agellates utilizar un tetrapyrol,
que est relacionada con la clorofila. Estas muy diferentes qumicas son
indicativas del hecho de que la bioluminiscencia ha evolucionado
independientemente muchas veces diferentes durante la historia evolutiva. De
hecho bioluminiscencia es un gran ejemplo de evolucin convergente, donde
los personajes similares evolucionan independientemente en respuesta a las
fuerzas selectivas similares. En el caso de bioluminiscencia la presin selectiva
se basa en la necesidad de sobrevivir en ambientes con poca luz.

Adems de muchos productos qumicos diferentes, tambin hay muchas

maneras diferentes de activacin de esos productos qumicos. Por ejemplo, en
dino fl agellates la luciferina y luciferasa se almacenan en orgnulos llamados
scintillons y, cuando la membrana de la clula est estirada o distorsionada, los
iones de hidrgeno se precipitan en el desencadenamiento de un destello. Por
otro lado en medusas el ion que desencadena el fl ash es calcio en lugar de
hidrgeno. De hecho fotoprotenas regulada por calcio (complejos estables de
luciferina y luciferasa) extrado de medusas han demostrado ser enormemente
valiosa en la investigacin sobre el papel de calcio como un mensajero
intracelular.

Fig. 13

Fig. 14

Las estructuras qumicas de diferentes luciferinas entre ellos el de la lombriz de

tierra, Diplocardia, la lapa de agua dulce, Latia y el Refly mar fi (ostrcodos),
Vargula, son muy diferentes.

Una cosa que todos estos diferentes productos qumicos tienen en comn es
que deben reaccionar con el oxgeno para producir luz. Esta reaccin de
oxidacin crea una molcula en un estado excitado. Cuando la molcula vuelve
a un nivel de energa ms baja que cede energa en forma de un fotn de luz
visible.

El pescado sin escamas de dragn, Melanostomias bartonbeani, tiene un

impresionante arsenal de rganos de luz, que son llamados a la accin cuando
el pescado est luchando en las garras de un depredador. Haga clic en la
imagen para ver este fi sh nadar como se ve con luz blanca y despus
bioluminescing como se ha visto con las luces apagadas.

Dino fl agellateFire mosca

HO

N
S

OAMP

H NH HN

CO2

CO2

NO

VargulaCoelenterate

NH

OH

HO
O

NN

NN

NH

NH

N NH

NH2

Latia

OCHO

Diplocardia

CHO

NH

O
Bacterias

NH

CH2 (CHOH) 3 CH2 O

P OH

OH

NH

HN

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Uno de tales fotoprotena es aequorina, que se extrajo de la jalea fi sh

Aequorea victoria. Tambin extraen de este mismo medusas es la empresa ms
famosa protena fluorescente verde o GFP (Figura 15). GFP es una protena
accesoria que acepta la energa de una reaccin bioluminiscente y re-emite
como luz de una longitud de onda ms larga. Esta protena ha demostrado ser
muy valiosa para los ingenieros genticos que lo utilizan como un ensayo para
la expresin de protenas y funcin. Con la colocacin del gen de la GFP a otros
genes, pueden decir cuando y donde dichos genes se expresan mediante el
seguimiento de cundo y dnde fluorescencia verde aparece en la celda.

En las bacterias bioluminiscentes produccin de luz es continua, que est en

contraste con la mayora de los otros sistemas luminosos donde la emisin de
luz es discontinua y regulada por control neural o endocrino. Hay algunos
animales que han desarrollado relaciones simbiticas con bacterias
bioluminiscentes. El fl ashlight fi sh se ve en el clip de vdeo 1, por ejemplo,
tiene un gran rgano de luz debajo de cada ojo donde las bacterias
bioluminiscentes crecen en un ambiente rico en nutrientes proporcionados por
los peces. El parpadear aparente de estas luces, se ve en el video, es
producida por un colgajo de piel que las diapositivas de peces sobre el rgano
de luz para bloquear la emisin de luz de bacterias. Otros animales que hacen
uso de bacterias simbiontes incluyen pescador pescado que utilizan seuelos
luminosos llenos de bacterias bioluminiscentes (Figura 16) y calamares como
los sepiolida hawaianas, scolopes Euprymna que utilizan la bioluminiscencia
bacteriana para counterillumination. Los genes clonados a partir de bacterias
bioluminiscentes han demostrado ser tiles para los ingenieros genticos como
genes indicadores que se pueden conectar a otros genes y bacterias
bioluminiscentes tambin se utilizan en bioensayos para detectar
contaminantes y toxinas.

Fig. 16

El pez pescador fi Oneirodes sp. tiene un seuelo en forma elaborada, llamado

un esca, que est lleno de bacterias bioluminiscentes.

Fig. 15

La protena verde fluorescente fl (GFP) de la fi jalea sh Aequorea victoria. Los

datos para este modelo de ordenador se obtuvo de la Protein Data Bank,
cdigo de identificacin 1EMB. Ver referencia [2].

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Hecho bioluminiscente y ficcin

Hay una gran cantidad de informacin errnea sobre la bioluminiscencia.

Desafortunadamente muchos de estos errores se han repetido tantas veces
que estn empezando a ser aceptado como verdad.

La bioluminiscencia no es la misma que la fosforescencia

Aunque Steinbeck, Hemingway e incluso Darwin se refirieron a la

"fosforescencia del mar" se trata de una obra literaria en lugar de un cient fi co
descripcin. La fosforescencia es la emisin retardada de la luz de una fuente
que ha sido excitado por la luz. Los ejemplos incluyen que brillan en la
oscuridad-pinturas y juguetes.

La bioluminiscencia no es la misma que la fluorescencia

Al igual que con la fosforescencia emisin de luz es estimulada por la luz no por
una reaccin qumica. Con la longitud de onda de fluorescencia de excitacin
es siempre ms corto, es decir, una energa ms alta, que la longitud de onda
de emisin y la emisin cesa tan pronto como la fuente de excitacin se apaga.
Parte de esta confusin puede haber surgido porque algunos, pero no todos,
son luciferinas fluorescente y algunos transmitir su energa de excitacin a lo
largo de fluorescente protenas como las buenas prcticas agrarias (Figura 15).

La bioluminiscencia no es la misma que la iridiscencia

Los hermosos colores del arco iris visto en las filas ctene de medusas peine
(Figura 17) se confunde a menudo bioluminiscencia. Este error se ve agravada
por el hecho de que la bioluminiscencia en ctenforos se origina con frecuencia
de largo de las filas ctene (Figura 18). Sin embargo, como regla general, si el
nivel de iluminacin es lo suficientemente alto para ver iridiscencia, entonces
es probablemente demasiado brillante para ver la bioluminiscencia.

Todo bioluminiscencia no es bacteriana

Esta falacia muy comn probablemente se debe al hecho de que la mayora de
las exposiciones de acuarios de bioluminiscencia incluyen fl peces ashlight. El
nmero real de animales que usan la bioluminiscencia bacteriana es pequeo
comparado con el nmero total que sintetizan su propia luz produccin de
productos qumicos.

No todas las medusas peine son bioluminiscentes

En la naturaleza no parece haber al menos una excepcin a cada regla. En este

caso, la excepcin es Pleurobrachia.

Informa que el tiburn 'Megamouth'

Megachasma pelagios es bioluminiscente son probablemente errnea.

Descripciones de la mandbula superior y el paladar como "notablemente
iridiscente" aparentemente fueron responsables de las especulaciones de una
boca luminosa para atraer a sus presas. Sin embargo, no hay evidencia real
para la bioluminiscencia en este tiburn y el hecho de que es un filtro-fi
alimentador hace que el uso propuesto de la bioluminiscencia para atraer la
presa poco probable. Hay, sin embargo, otros tiburones que son
bioluminiscentes (ver Tabla 1).

Fig. 17 Fig. 18

La iridiscencia en ctenforos como esta especie Euplokamis se confunde a

menudo bioluminiscencia.

La bioluminiscencia en el ctenophore Euplokamis se origina en la regin de las

filas de peine.

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Referencias

1 Herring, PJ (1987) la distribucin sistemtica de bioluminiscencia en los

organismos vivos. Diario de bioluminiscencia y quimioluminiscencia 1, 147-163.

2 Brejc, K. et al. (1997) base estructural de la doble excitacin y

fotoisomerizacin del Victoria protena verde fluorescente de Aequorea. Actas
de la Academia Nacional de Ciencias, EE.UU. 94, 2306.

Otras lecturas

Herring, PJ (1977) La bioluminiscencia en los organismos marinos. Naturaleza

267, 788 a 793.

Herring, PJ (ed) (1978) La bioluminiscencia en accin. Londres: Academic Press.

Herring, P.J. y Widder, E.A. (2001) Plancton: la produccin de luz en los

organismos marinos, mecanismos y funciones. En la Enciclopedia de Ciencias
Ocenicas. Londres: Academic Press.
http://www.unibo.it/isbc/Files/BC_PlanktonNekton.htm

Widder, E.A. (1997) La bioluminiscencia - Arrojar luz sobre los patrones de

distribucin del plancton. Tecnologa mar. Marzo de 1997, pp. 33-39.

Widder, E.A. (1998) El libro para colorear bioluminiscencia. Harbor Branch

Oceanographic Institution, Fort Pierce, Florida.
http://www.store.yahoo.com/hboigiftstore/biolcolbook.html

Widder, E.A. (1999) La bioluminiscencia. En los mecanismos adaptativos en la

ecologa de la visin (eds Archer, SN et al.), Pgs. 555 a 581. Leiden: Editores
Acadmicos Kluwer.
Widder, E.A. (en prensa) bioluminiscencia y el entorno visual pelgicos. Marina
y de agua dulce de Comportamiento y Fisiologa.

Grabacin de vdeo

Bioluminiscencia marina: luces secretas en el mar.

26 min video educativo. Producido, dirigido y escrito por el Dr. Edith

Widder y Brian Cousin (2000) Harbor Branch Oceanographic

Institucin, Fort Pierce, Florida.Winner del Premio Carrete Plata 2001 en Media
Excelencia. Para ms detalles sobre cmo obtener esta grabacin, consulte:
http://www.store.yahoo.com/hboigiftstore/marbiolsecli.html

Sitios Web

HBOI - Ms sobre bioluminiscencia http://www.biolum.org/

Pgina bioluminiscencia marina http://lifesci.ucsb.edu/~biolum/

Oceanogrfica Naval o fi cina (NAVOCEANO)

http://www.navo.navy.mil/biolum/blwebpge.htm

Pgina bioluminiscencia Scripps http://siobiolum.ucsd.edu/Biolum_intro.html

Derechos de autor

Adems de la figura 13, en la que el derecho de autor est en manos de T.

Smoyer / HBOI de 1999, los derechos de autor sobre todas las fotografas en
este documento es propiedad de Edith Widder / HBOI, 1999.
Articulo 2

Bruce R. Branchini

Introduccin

La bioluminiscencia es un proceso encantador en el que los organismos vivos

convierten la energa qumica en luz. Con la excepcin interesante de los
fotoprotenas ver Espectroscopia y estructura, en

la mayora de los sistemas de bioluminiscencia de luz resultados de la

oxidacin de un sustrato orgnico, un luciferina, catalizada por una enzima
llamada una luciferasa. En la naturaleza, hay una increble diversidad de
organismos que emiten luz incluyendo bacterias, hongos, crustceos,
moluscos, peces e insectos. Mientras que los bioqumicas especficas de
bioluminiscencia son diversas, todos incluyen una reaccin mediada por
enzima entre el oxgeno molecular y un sustrato orgnico. Es probable tambin
que todos los procesos de bioluminiscencia implican la formacin y ruptura de
un perxido de anillo de cuatro miembros o un hidroperxido lineal. Una visin
general de los aspectos qumicos y mecnicos de un proceso de
bioluminiscencia importante, la de los escarabajos bioluminiscentes, se
presenta aqu.

Figura 1. El norteamericano lucirnaga Photinus pyralis.

En representacin de unas 3.000 especies de escarabajos luminosa
Coeleoptera, tres familias:

los verdaderos lucirnagas, haga clic escarabajos y lucirnagas. Desde hace

aproximadamente 50 aos, con el trabajo pionero de cientficos de la
Universidad Johns Hopkins William McElroy, Emil Blanco y Howard Seliger,
investigacin bsica, principalmente centrado en el norteamericano comn
lucirnaga Photinus pyralis Figura 1, se ha progresado hacia una muy buena
comprensin de cmo la luz es producido por

lucirnagas. Se prev que la disponibilidad de dos estructuras cristalinas

luciferasa Photinus pyralis avanzar la comprensin actual de las relaciones
estructura-funcin clave que dan cuenta de la emisin catalizada por enzimas
eficiente de la luz en la lucirnaga. A su vez, las perspectivas son brillantes
para la aplicacin continuada de la bioluminiscencia lucirnaga a la ya
impresionante lista de mtodos mdicos y farmacuticos, incluyendo el
monitoreo de luminiscencia in vivo y el seguimiento de expresin y regulacin
gnica

Las reacciones bioqumicas de bioluminiscencia

-2-

Firefly bioluminiscencia es un proceso de mltiples pasos que se describe en

las Ecuaciones 1 a 3 se muestra en la figura

3. Luc representa luciferasa de lucirnaga, el ATP es la bioqumica adenosina

fuente de energa universal

trifosfato, PPi es pirofosfato inorgnico, y las estructuras que corresponden a

las otras abreviaturas se muestran abajo. En el primer paso Eq. 1, luciferasa de
lucirnaga convierte D-luciferina

en el correspondiente luciferilo ciclasa unido a la enzima. La luciferasa de

lucirnaga tiene extraordinaria especificidad para este nucletido trifosfato. El
ciclasa es el verdadero sustrato de la qumica oxidativa subsiguiente. De
hecho, D-LH2-AMP producido sintticamente reacciona con el oxgeno en
presencia de la luciferasa para producir emisin de luz idntica a la obtenida
con el sustratos naturales D-luciferina y Mg-ATP.

Como ecuaciones 2 y 3 indican, las funciones enzima luciferasa como un mono-

oxigenasa, aunque lo hace de una manera muy inusual sin la aparente
implicacin de un metal o cofactor. De alguna manera que no ha sido
determinado todava, los residuos de aminocidos de luciferasa son reclutados
para promover la adicin de oxgeno molecular para la luciferina, que luego se
transforma en un estado excitado electrnica oxiluciferina molcula y dixido
de carbono, conteniendo cada uno un tomo de oxgeno del oxgeno molecular.
Visibles resultados de emisin de luz de la rpida prdida de energa de la
molcula oxiluciferina estado excitado a travs de una va de fluorescencia. El
muy alto rendimiento cuntico para este proceso en solucin alcalina, casi
cada uno reaccion LH2 molcula emite un fotn refleja no slo

maquinaria cataltica eficiente, sino tambin un ambiente muy favorable para

la desintegracin radiativa de un estado electrnico excitado.

Las reacciones bioqumicas de bioluminiscencia

-3-

Figura 3. Ecuaciones y estructuras que ilustran las reacciones catalizadas por la

luciferasa de lucirnaga Luc.

El smbolo * indica un estado electrnico excitado.

Adems de las reacciones que conducen a la emisin de luz, luciferasa de

lucirnaga tambin cataliza la formacin in vitro de la ciclasa de
dehydroluciferin L-AMP Eq. 4, que no puede reaccionar adicionalmente y

potentemente inhibe la actividad de la enzima. Por lo tanto, la luciferasa exhibe

dos funciones enzimticas distintas: como una sintetasa en la formacin de un
ciclasa acilo, y como mono-oxigenasa.

Adems, bajo ciertas condiciones LH2-AMP, formado de acuerdo con la Ec. 1,

puede ser oxidado por la luciferasa para producir bajos niveles de L-AMP.
Posteriormente, luciferasa cataliza la transferencia de la fraccin de AMP a
partir de L-AMP a ATP produccin de tetrafosfato de diadenosina. Estas
transformaciones qumicas indican que la luciferasa de lucirnaga tambin
puede funcionar como una ligasa. Adems, la coenzima A puede inhibir esta
funcin ligasa y modular la cintica de emisin de luz habituales, aunque el
cofactor no es un sustrato requerido. Coenzima A se sabe que estimula la
produccin de luz, posiblemente, mediante la promocin de la liberacin de
oxiluciferina producto de luciferasa permitiendo que la enzima reaccione de
nuevo.

-4-

Generalmente Aceptados Mecanismo de bioluminiscencia

Los detalles mecanicistas generalmente aceptados del proceso general de la

bioluminiscencia de lucirnaga se presentan en mayor detalle a continuacin la
Figura 4.

Figura 4. mecanismo detallado de la bioluminiscencia lucirnaga incluyendo

varias propuestas para explicar la variacin en el color. El smbolo * indica un
estado electrnico excitado.

Tras la formacin de la adenilato de luciferilo unido a la enzima etapa a, un

protn se abstrae

desde el C-4 de carbono de la ciclasa por un residuo de aminocido de la

cadena lateral bsica de paso luciferasa

b. A continuacin, el oxgeno molecular se aade a la etapa de anin recin

formado c; y un electrnicamente

estado excitado oxiluciferina molcula y dixido de carbono se producen a

partir de una etapa e altamente

dioxetanone intermedio reactivo paso d. De acuerdo con el mecanismo original

basado
predominantemente en estudios de modelos del P. pyralis enzima, la emisin
de luz roja max 615 nm,

que se observa a pH 6,0, los resultados de la forma ceto del emisor. A pH 8, el

amarillo-verde familiarizado emisin de luz max 560 nm se produce a partir de
la forma dianin del enolato

estado excitado oxiluciferina por un enzimtica asistida presunta paso

tautomerizacin f. En naturaleza,

-5-

luciferasas de escarabajo muestran varios colores de luz de Max Green ~ 540

nm a max rojo ~ 635

nm. Datos experimentales recientes obtenidos con un anlogo de luciferina de

lucirnaga es coherente con el ceto

forma de oxiluciferina solo ser capaz de producir todos los colores de la

bioluminiscencia lucirnaga. Posiblemente, luciferasa modula el color de
emisin mediante la alteracin de la carga deslocalizacin basada en la
resonancia del estado excitado como se muestra en la Ec. 5.

Alternativamente, utilizando clculos orbitales moleculares como la base,

McCapra ha propuesto que todos los colores luminiscentes que van del verde al
rojo se generan a partir de transferencia de carga intramolecular estados
excitados retorcidos TICT de la forma ceto de oxiluciferina Figura 4.
Posiblemente, los cambios en

estructura terciaria de la luciferasa podran modular el color al afectar a la

estabilizacin de los confrmeros oxiluciferina formados por rotacin alrededor
de la unin C2-C2 '.

Formacin estado excitado electrnica

Se requiere una cantidad relativamente grande de energa de excitacin para
producir luz visible, en el orden de 40 a 70 kcal. El dioxetanone intermedio
clave se muestra en la secuencia de reaccin anterior y en la figura

5, a continuacin, contiene tanto una tensa cuatro anillos de miembro y un

vnculo dbil OO perxido. los

la escisin del anillo de dioxetanone de alta energa es capaz de liberar

suficiente energa como resultado de la baja energa de activacin necesaria
para escindir el enlace de perxido y el alivio de la tensin del anillo inherentes
a la estructura.

Figura 5. Qumicamente inici mecanismo de intercambio CIEEL de electrones

para la formacin de

oxiluciferina estado excitado en bioluminiscencia lucirnaga.

-6-

En la lucirnaga, la energa liberada se dirige de manera muy eficiente en la

produccin de un estado electrnicamente excitado de la oxiluciferina producto
bioluminiscencia. Relajacin rpida subsiguiente del estado excitado al estado
fundamental es entonces acompaada por la emisin de un fotn de luz. Una
visin mecanicista detallada de este proceso se denomina CIEEL Qumicamente
Iniciada

Electron Cambio luminiscencia mecanismo de la Figura 5. En la

bioluminiscencia de lucirnaga,

la transferencia de electrones intramolecular de la porcin heterocclica de la

molcula a la dioxetanone produce un par inico radical y el anin radical de
dixido de carbono. A continuacin, el traslado de regreso de un electrn a
partir del anin radical de dixido de carbono a la forma radical de los
resultados de oxiluciferina en la formacin de oxiluciferina electrnicamente
excitado y dixido de carbono. El mecanismo CIEEL puede ocurrir en otros
sistemas bioluminiscentes, as como la lucirnaga.
Luciferasa de lucirnaga Estructura y mecanicistas Funciones

La clonacin y secuenciacin de la luciferasa y similares enzimas de P. pyralis

desde aproximadamente quince otras especies de escarabajos han revelado
que estas luciferasas estn estrechamente relacionados con una gran familia
de protenas no bioluminiscentes que catalizan reacciones de ATP con sustratos
de carboxilato para formar

acil-adenilatos. La formacin de la enzima unida LH2-AMP y L-AMP ecuaciones.

1y4

ilustra la qumica comn a este gran grupo de enzimas. Este grupo de

protenas comparte un motivo de identificacin
198SerSerGlySerThrGlyLeuProLysGly207 en luciferasa y se ha denominado

el / familia de enzimas que forman tioster-acil-ciclasa. La superfamilia de

enzimas incluye: una

variedad de acilo: ligasas CoA reductasa; la acil-ciclasa de formacin de

dominios de complejos de enzimas implicadas en la sntesis no ribosomal de
antibiticos, pptidos y polictidos; las luciferasas; y varios

otros tipos de enzimas. La mayora de estas enzimas generan tioster por

ejemplo, de productos intermedios o productos coenzima A partir de la
correspondiente acil-adenilatos formados inicialmente, y estas reacciones son
similares a uno sugiri para tener en cuenta el efecto estimulador de la
coenzima A sobre la actividad de luciferasa.

El P. pyralis estructura cristalina luciferasa Figura 6, la primera estructura de un

miembro de la / tioster de formacin de familia de la enzima acil-ciclasa,
revel una arquitectura molecular nica

consiste en un gran residuos del dominio N-terminales 1-436 y un dominio C-

terminal pequea
los residuos 440 hasta 550. La estructura se resolvi sin sustratos o productos
contenidos as que no era

posible determinar qu residuos de amino participado en el proceso de

bioluminiscencia cido. Sin embargo, basndose en un anlisis de las
posiciones de varios residuos conservados estrictamente entre un grupo de
enzimas que comparten la funcin de adenilacin, se propuso una ubicacin
general del sitio activo de la luciferasa.

Diagrama de cinta Figura 6. de la luciferasa de lucirnaga Luc

estructura. Las grandes aminocidos dominio N-terminal 1-436

est conectado a la C-terminal de dominio amino menor

cidos 440-550 muestra en amarillo a travs de un corto bisagra

pptido de Conti, francos y ladrillo. 1996 Estructura 4,

287-298

-7-

A continuacin, la estructura cristalina de un segundo miembro de la familia de

formacin de ciclasa, la subunidad de activacin de fenilalanina de la sintetasa
gramicidina 1 PheA en un complejo con

fenilalanina, iones Mg y AMP, se inform. El sitio activo de PheA se determin

que en la interfase de los dos dominios, que eran muy similares en tamao y
forma a los dominios correspondientes de la luciferasa. En la estructura PheA,
sin embargo, el dominio C-terminal se hizo girar 94 y era 5 ms cerca del
dominio N-terminal que en la estructura de la luciferasa.
A partir de las dos estructuras cristalinas disponibles, se utilizaron tcnicas de
modelizacin molecular para producir un modelo de trabajo potencial del sitio
activo de la luciferasa que contiene sustratos luciferina y Mg-ATP. El modelo
producido en nuestro laboratorio se muestra en la Figura 7.

Este modelo ha sido muy til en el diseo racional de los estudios luciferasa
estructura-funcin basada en la mutagnesis dirigida, entre ellos varios
relacionados con la determinacin del color de la bioluminiscencia y la
caracterizacin del sitio de unin luciferina.

Figura 7. Diagrama de estreo que muestra el sustrato sitios sugeridos por el

modelado molecular de la luciferasa con LH2 y tomos de carbono de la ATP
vinculante son verdes en ambos y Mg 2 + iones que no se muestra. los

modelo fue creado a partir de la estructura de rayos x luciferasa 1LCI, y el ion

metilamonio marcado K529 se utiliza para representar las posibles
interacciones de la cadena lateral de Lys529. Rastros

a travs de los -carbons de regiones Val217-His221, His244-Thr252, His310-

Leu319 y Arg337-Gly355 se muestran como bobinas de color prpura. Los
-carbons de Gly246, Ser314 y cadena lateral

grupo, Gly315, Gly316 y Gly341 se muestra de color gris, pero no estn

etiquetados. La cadena principal

grupos carbonilo tomos de oxgeno son de color rojo de Gly339 y Thr352

tambin se muestran. Este diagrama

se gener usando el programa MOLSCRIPT.

Mutacin sistemtica de residuos de aminocidos de quince luciferasa y

estudios bioqumicos de las protenas mutantes resultantes ha producido datos
que avalen la vista del sitio lucirnaga luciferina de unin se muestra en el
diagrama de estreo a continuacin en la Figura 8.

-8-
. Stereo diagrama que muestra los residuos dentro de 5 de LH2 en el
luciferaseFigure putativo 8

sitio de unin del sustrato sugerido por el modelado molecular de Luc con LH2
y ATP no se muestra y Mg2 + ion no se muestra. El modelo fue creado
comenzando con la estructura de rayos X Luc 1LCI,

y el ion metilamonio marcado K529 se utiliza para representar las posibles

interacciones de la

Lys529 cadena lateral. Las huellas a travs de los -carbons de regiones V217-
F219, H244-T252, I312-P318 y R337-P353 se muestran como bobinas de color
prpura. Este diagrama se gener usando el programa MOLSCRIPT.

Con base en estudios de mutaciones de las luciferasas y enzimas en el ciclasa

formadoras superfamilia acilo relacionados, un posible mecanismo para la
formacin de la luciferasa catalizada de adenilatos NCA. 1

y 4 se presenta en la Figura 9.

Figura 9. Representacin esquemtica de enlaces de hidrgeno entre Luc y

sustratos luciferina verde, violeta ATP y Mg2 + predijeron mediante modelado

molecular. Interacciones potenciales entre los sustratos y los tomos en las
proximidades ~ 2 a ~ 4 se indican. por

principales tomos mc cadena, slo aquellos

interactuando con sustratos estn incluidos. El ion metilamonio se utiliza para

representar las posibles interacciones de la cadena lateral de Lys529. Las
flechas azules curvas representan el ataque nuclefilo del carboxilato de
luciferina en la -Fsforo de ATP y la formacin correspondiente del intermedio
pentavalente.
-9-

Residuos luciferasa Arg218, Phe247, Ser347 y Ala348 se muestran haciendo

interacciones H-bonos con luciferina, fijando su posicin en el sitio activo. El
anillo de adenina de ATP se mantiene en su lugar por interacciones a Gly339,
Tyr340, Gly341 y Ala317, mientras que el carboxilato de cadena lateral de
Asp422 es H unido a los grupos hidroxilo de ribosa. Los residuos Ser199 y
Lys206, altamente conservadas en todo el ciclasa acilo formando superfamilia
se muestra quelantes la parte y fosfato de ATP. El residuo clave en el proceso
cataltico principal responsable de la reduccin de la energa del estado de
transicin es Lys529, que probablemente est asistido por Thr343. El grupo
amonio cadena lateral de Lys529 primero se muestra la orientacin de
luciferina y ATP para una reaccin bimolecular productivo. Las flechas curvadas
muestran un tomo de oxgeno in carboxilato de luciferina llevar a cabo un
ataque nucleoflico en el tomo de fsforo del fosfato de ATP. Se forma un
estado de transicin pentavalente que probablemente se estabiliza mediante
interacciones electrostticas con el ion de amonio de Lys529 y las interacciones
H-unin con el grupo hidroxilo de la cadena lateral de Thr343. La estabilizacin
de protenas del estado de transicin representa para la catlisis de la reaccin
adenilacin.

Adems, los residuos de secuencia de firma Ser199 y Lys206 probablemente

eliminar los PPi dejando

grupo que el producto se forma ciclasa Figura 10.

Figura 10. Representacin esquemtica de la posible funcin de la secuencia de

firma residuos Ser199 y

Lys206 en la eliminacin de pirofosfato inorgnico PPi durante la formacin de

lucferyl-ciclasa. Las flechas curvadas representan el flujo de electrones que

conducen a la reforma del doble enlace fsforo-oxgeno y la liberacin de PPi.

Desafortunadamente, los detalles mecanicistas relativas de luciferasa de la

estructura de su funcin como una NCA oxidasa. 2 y 3 estn an bien
entendido. No aparece, sin embargo, que un motivo estructural
identificado en la superfamilia de acil-ciclasa formando, 340YGLTE344 en
luciferasa, juega un

papel importante en la catlisis de estas reacciones que conducen a la emisin

de luz en la lucirnaga. La investigacin contina como objetivo desarrollar una
explicacin detallada de cmo el lucirnaga oxida su sustrato para procesar las
luces familiares muchos asocian con las noches de verano calientes hermosas.

- 10 -

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