INTRODUCCIN

Los sistemas vivientes se configuran por medio de una variedad enorme de

reacciones bioqumicas, casi en su totalidad mediadas por un conjunto de
catalizadores biolgicos notables denominados enzimas.

Las enzimas son el grupo ms variado y especializado de las protenas, su

funcin es actuar como catalizadores, permitiendo que las reacciones que
trascurren en los seres vivos puedan desarrollarse a un ritmo adecuado, controlan
la velocidad de las reacciones metablicas, haciendo que la energa se libere
lentamente de manera que las reacciones que ocurren no daen las clulas.
Cada una de las miles de reacciones que ocurren en un organismo est
controladas por enzimas diferentes. Las enzimas son sustancias proteicas que no
se consumen en las reacciones que participan, son especficas, lo que significa
que solamente pueden catalizar un tipo de reaccin actuando sobre un sustrato
especifico.

La actividad enzimtica se ve influenciada por diversos factores: temperatura, pH,

concentracin de sales, y algunas enzimas necesitan coenzimas (no son de
naturaleza proteica, son vitaminas, pero al igual que las enzimas no cambian
durante una reaccin). Durante esta prctica se trat de poner en manifiesto
alguno de los factores que afectan la actividad enzimtica.
 OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL

Analizar e interpretar el efecto de diversos factores (accin de la temperatura, pH

entre otros) en la actividad enzimtica de la amilasa salival, la renina y la catalasa
de origen animal y vegetal, teniendo en cuanta las diferentes reacciones que se
producen, al interactuar el sustrato con la enzima correspondiente.

OBJETIVOS ESPECFICOS

Detectar la presencia de la enzima catalasa en un tejido animal y vegetal.

Comprobar que solo bajo ciertas condiciones las enzimas funcionan
pticamente catalizando una reaccin enzimtica con un sustrato.
Interpretar con claridad los mecanismos subyacentes de la accin
enzimtica sobre sustratos especficos.
 MARCO TERICO

Las enzimas son catalizadores especficos y potentes que posibilitan la

coexistencia de un elevado nmero de reacciones qumicas dentro de la clula. En
la mayora de los casos son de naturaleza proteica, pero tambin se conoce
algunas que son RNA. Muy a menudo, los grupos funcionales de la enzima son
complementados con cofactores: iones inorgnicos (metales) o molculas
orgnicas (coenzimas), que contribuyen a ampliar el espectro de mecanismos
posibles. Hay diversos factores qumicos que puedan justificar las altas
velocidades alcanzadas por las enzimas en las condiciones de pH y temperatura
propias de las clulas. La complementariedad de la enzima con la geometra del
estado de transicin de la reaccin es la causa ms notable de su poder cataltico.

Como compuestos catalizadores, las enzimas son especficas. Cada enzima acta
sobre una sustancia especfica denominada sustrato y cataliza exclusivamente
una reaccin. Por ejemplo la sacarosa (azcar de mesa) es el sustrato de la
enzima sacarosa, que cataliza la hidrolisis de la sacarosa para forma glucosa y
fructosa.

Como catalizadores las enzimas aceleran las reacciones qumicas. La molcula de

enzima tridimensional posee un sitio activo, es decir una regin que interacta
con una sustancia qumica especifica. La enzima orienta al sustrato en una
posicin que aumenta la posibilidad de que se produzca una reaccin, la
capacidad de una enzima de acelerar una reaccin sin necesidad de que se
produzca un aumento de la temperatura es esencial para los sistemas vivos
porque un incremento importante de la temperatura destruira las protenas
celulares. Por tanto, la funcin crucial de las enzimas consiste en acelerar las
reacciones bioqumicas a una temperatura compatible con el funcionamiento de la
clula.

Como todos los catalizadores, las enzimas funcionan disminuyendo la energa de

activacin (G) de una reaccin, de forma que se acelera sustancialmente la
tasa de reaccin. Las enzimas no alteran el balance energtico de las reacciones
en que intervienen, ni modifican, por lo tanto, el equilibrio de la reaccin, pero
consiguen acelerar el proceso incluso millones de veces. Una reaccin que se
produce bajo el control de una enzima, o de un catalizador en general, alcanza el
equilibrio mucho ms deprisa que la correspondiente reaccin no catalizada. Al
igual que ocurre con otros catalizadores, las enzimas no son consumidas por las
reacciones que catalizan, ni alteran su equilibrio qumico. Sin embargo, las
enzimas difieren de otros catalizadores por ser ms especficas. Las enzimas
catalizan alrededor de 4.000 reacciones bioqumicas distintas. No todos los
catalizadores bioqumicos son protenas, pues algunas molculas de ARN son
capaces de catalizar reacciones (como la subunidad 16S de los ribosomas en la
que reside la actividad peptidiltransferasa).Tambin cabe nombrar unas molculas
sintticas denominadas enzimas artificiales capaces de catalizar reacciones
qumicas como las enzimas clsicas.

Accin de la amilasa sobre almidn: La amilasa es una hidrolasa que

digiere el glucgeno y el almidn para formar azucares simples. En
fisiologa humana tanto procedente de la saliva como la pancretica son
- amilasas. La ptialina o amilasa salival (es una enzima presente en la
saliva de las personas que acta sobre almidn dando una mezcla de
glucosa y maltosa).

Almidon amilasa Glucosa+ Maltosa

Accin de la renina sobre la casena de la leche: La coagulacin

enzimtica de la leche en la obtencin del queso es un proceso complejo en
el que la casena, principal componente proteico de la leche, es
desnaturalizada por accin de las enzimas del cuajo (renina), precipitando y
formando la cuajada. La casena se encuentra en la leche en forma de
partculas coloidales de fosfocaseinato de calcio. Estas partculas se
encuentran en equilibrio en el seno de la leche como micelas dispersas en
fase liquida. La renina es responsable de la accin proteoltica ejercida
sobre la casena, la renina acta sobre el fosfocaseinato de calcio
rompiendo enlaces peptdicos y transformndolo en fosfoparacasinato de
calcio, lo que provoca la precipitacin y formacin de cogulos.
Accin de la catalasa (origen animal o vegetal) sobre el perxido de
hidrogeno: La catalasa se encuentra en las clulas de tejidos animales y
vegetales. La funcin en los tejidos es necesaria porque durante el
metabolismo celular, se forma una molcula que es toxica que es el
perxido de hidrogeno (agua oxigenada), la catalasa, la descompone en
agua y oxgeno.
La reaccin de la catalasa sobre el perxido de hidrogeno, es la siguiente.

2 H 2 O 2 catalasa 2 H 2 O+O 2

 MATERIALES Y REACTIVOS

MATERIALES:
Pastilla de cuajo, 30mL de leche, crayn graso o maskin tape, guantes
desechables, papa y rbano, trozo de hgado y rin de res , cuchilla de afeitar
nueva, 3 pinzas de tubo de ensayo,12 tubos de ensayos,4 goteros, 4 pipetas
graduadas de 5mL y 1 vidrio de reloj.

REACTIVOS A UTILIZAR:

Solucin de Almidn al 1%
Solucin de Lugol
Reactivo de Benedict
cido Clorhdrico al 10%
Agua oxigenada .
 PROCEDIMIENTOS
1. ACCIN DE LA AMILASA SOBRE EL ALMIDN

2. ACCIN EN ZIMTICA DE LA RENINA SOBRE CASENA DE LA LECHE

Se Disolvieron de En el tubo 1 se En tubo se coloco

pastilla cuajo renina y agrego 5mL de leche 5mL de leche ms
enumerar 3 Tubos de mas renina renina y unas gotas
asayo de ensayo de HCl al 10%

Y En tubo tres se coloco

5ml de leche y renina
calentda
 3. ACTIVIDAD DE LA CATALASA DE TEJIDO VEGETAL SOBRE AGUA
OXIGENADA

Se hicieron varios corte de

higado, rin, papa, znahoria y Luego en otra caja de petri
espinaca y se le agrego de estos cortes se agrego
Peroxido HCl y pexido

Los cortes en caja de petri

diferente se llevo a
calentamiento y se agrego
peroxido

1. ACCIN DE LA RENINA SOBRE CASENA DE LA LECHE

Luego de la determinacin de la actividad enzimtica de la renina cobre la
leche se obtuvieron los siguientes resultados (ver anexo 2).

TUBO COMPONENTES DESCRIPCIN

1 Leche + renina No se observ un cambio significativo, la leche se
cort pero muy lentamente.
2 Leche + renina + Al agregarle HCL y renina se observa que la
HCL 10% actividad de la enzima se acelera, haciendo que la
leche se corte en un periodo de tiempo ms corto
con respecto al tubo 1.
Leche mas renina
3 en calentamiento No se observo reaccin
Cuando la leche se corta, separan el suero y el contenido proteico, generalmente
por la intervencin de un cido el cual se ve por la formacin de un precipitado de
color blanco y un sobrenadante de color amarrillo-verdoso. Con base a todo lo
anterior se logr evidenciar que la actividad enzimtica en los dos tubos fue muy
distinta, en el tubo 1 (Leche + renina) la actividad enzimtico fue lenta con
respecto al tubo 2, esto se debe a que en este ltimo se agreg HCL, el cual acta
sobre la renina en la leche acelerando la actividad enzimtica, haciendo que la
velocidad de reaccin sea ms rpida.El HCl tiene la funcin de variar el pH en la
solucin observndose la formacin del precipitado que nos indica que se est
desarrollando la actividad enzimtica con mayor rendimiento

3.1 ACTIVIDAD DE LA CATALASA DE TEJIDO VEGETAL Y ANIMAL SOBRE

AGUA OXIGENADA

A. Actividad de la catalasa de tejido vegetal sobre Agua Oxigenada.

1. Haga un corte fino de rbano y uno de papa, cuyas dimensiones sean

iguales, colquelos cada uno en diferente vidrio reloj. Agregue tres gotas
de H2O2, Que observa?
R/ se observa un leve burbujeo entre estos vegetales, lo cual significa
Que se est liberando oxigeno del agua.

2. Haga un corte fino de rbano y uno de papa, cuyas dimensiones sean

iguales, colquelos cada uno en diferente vidrio reloj. Agregue tres gotas
HCl, espere 1 minuto y 3 de H2O2. Qu ocurre en la actividad de la
enzima?
R/ Que se modifique su velocidad de reaccin y que sea ms lenta.

B. Actividad de la catalasa de tejidos animales sobre Agua Oxigenada.

1. Hacer un corte fino de tejido heptico y renal, cuyas dimensiones sean

iguales, colquelos sobre diferentes vidrios de reloj, agregue tres gotas
de agua oxigenada Qu deduce?
R/Que en los tejidos animales ah mayor presencia de catalasa, ya que en esta
reaccin se produjo mayor burbujeo cuando se le agrego el Agua Oxigenada.
 2. Haga un corte fino de tejido, heptico y renal, cuyas dimensiones sean
iguales, colquelos sobre diferentes vidrios de reloj, agregue tres gotas
de HCl, espere 1 minutos y agregue 3 ml de agua oxigenada Qu
sucede?
R/ Que no hubo reaccin inmediata, por lo que el HCl reduce la velocidad de la
reaccin sobre los tejidos.

TEJIDO/ESC 0 1 2 3 4 5
ALA
Papa x
Rbano x
Hgado x
Rin x

Catalasa sometida a calentamiento

TEJIDO/ESC 0 1 2 3 4 5
ALA
Papa x
Rbano x
Hgado x
Rin x

INTERPRETACION DE RESULTADOS

Cul es el tejido con mayor actividad y cul es que tiene menor actividad?
R/ el tejido que presento mayor actividad de catalasa en el tejido animal fue el del higado
ya que reacciono ms rpido que el rin, y el tejido vegetal entre la papa y el rbano que
presento menor actividad cataltica, fue el de la papa.

Qu tienen en comn y en qu se diferencian?

R/ tienen en comn que todos presentan actividad cataltica cuando esta reacciona con el
perxido de hidrogeno (H2O2), y se diferencian que en los tejidos animales es ms rpida
la reaccin de la catalasa sobre el H2O2 , Rompiendo los puentes Hidrogeno-Oxigeno
liberando agua (H2O) y Oxigeno (O2), presentando mayor burbujeo que en los tejidos
vegetales.

Cuando es agregado a heridas produce burbujas. Qu indica esto?

R/esto indica que en el tejido donde se encuentra la herida hay presencia de oxgeno,
actuando la catalasa como catalizador de la reaccin sobre el perxido. En conclusin el
burbujeo que brota sobre la herida no es ms que oxigeno saliendo del agua.
En base a sus observaciones Que puede concluir acerca de cmo afecta a la
actividad enzimtica el tiempo, la concentracin y la temperatura?
R/ el tiempo es un intervalo que tarda en actuar la enzima sobre el sustrato. A mayor
concentracin de enzimas menor tiempo durara en actuar la reaccin y a menor
concentracin mayor tiempo tardara en actuar la enzima sobre el sustrato. En conclusin
el tiempo es inversamente proporcional a la concentracin. La temperatura afecta a la
actividad enzimtica en que si una enzima se somete a altas y/o bajas temperaturas esta
se desnaturaliza perdiendo sus propiedades protenicas.

ACCIN DE LA AMILASA SOBRE EL ALMIDN

Anlisis de resultados:

Partimos de los tubos de ensayo A y B para realizar todas nuestras pruebas, en

el tubo A haba saliva en estado puro, y en el tubo B haba saliva acidulada
(HCL).

- Tubo A: De este tubo agregamos 2 y 10 gotas de saliva respectivamente

en los tubos de ensayo 1 y 2, seguido agregamos 4mL de almidn y por
ultimo aadimos 3 gotas de lugol, como en estos tubos la saliva estaba
en estado puro, la enzima amilasa estaba activa. El resultado para esta
prueba con glucol fue negativo, lo cual era lo esperado debido a que el
glucol se usa para identificar almidn, y como la enzima amilasa se
encontraba activa en estos tubos 1 y 2, esta desdobl la molcula de
almidn convirtindola en un azcar reductor (mayor concentracin en
el tubo 1).
 - Tubo B: De este tubo agregamos 2 y 10 gotas de saliva respectivamente
en los tubos de ensayo 3 y 4, seguido agregamos 4mL de almidn y por
ultimo aadimos 3 gotas de lugol, como en estos tubos la saliva no
estaba en estado puro, sino acidulada, la enzima amilasa no estaba
activa, al no estar activa la enzima no habra ningn efecto sobre el
almidn y era de esperarse que el resultado de la prueba con glucol
fuera positivo, lo cual ocurri.

Luego, dividimos los tubos 1-4 en los tubos 5-8 respectivamente. De las
pruebas hechas en los tubos 1-4, quedaron los siguientes resultados: en los
tubos 1 y 2 la enzima amilasa realiz el proceso glucoltico y tenemos
presencia de azucares reductoras. En los tubos 3 y 4, al no estar activa la
enzima no hubo ningn proceso enzimtico y sigue siendo almidn.

- Tubos 5 y 6: Estos tubos tienen el producto obtenido del tubo 1 y 2

respectivamente. A estos tubos se les aadieron 3mL de reactivo de
benedict, como en estos tubos se formaron azucares reductoras (accin
enzimtica de la amilasa sobre el almidn), era de esperarse que el
resultado de la prueba fuera positivo, lo cual fue lo que ocurri, esto se
pudo evidenciar por el color obtenido despus del bao de Mara (rojizo y
verdoso, segn la concentracin, mayor en 5).

- Tubos 7 y 8: Estos tubos tienen el producto obtenido del tubo 3 y 4

respectivamente. A estos tubos se les aadieron 3mL de reactivo de
benedict, como en estos tubos no se formaron azucares reductoras (la
enzima amilasa estaba inactiva), era de esperarse que el resultado de la
prueba fuera negativo, lo cual fue lo que ocurri, esto se pudo evidenciar
por el color obtenido despus del bao de Mara, el cual es el color de
hidrolisis de almidn.
PREGUNTAS COMPLEMETARIAS

1. qu cambios pueden sufrir en relacin a la estructura qumica y el

nmero inicial de molculas, el sustrato y la enzima en una reaccin
enzimtica?

Los cambios que pueden sufrir el sustrato y la enzima en relacin a la estructura

qumica y el nmero inicial de molculas en una reaccin enzimtica son, respecto
a la estructura qumica en cuanto al sustrato esta va a cambiar ya que a medida
que avanza la reaccin este se va transformando en un producto totalmente
diferente al sustrato y el numero de molculas depende en gran parte del tipo de
enzima, ya que hay enzimas que pueden agregar un grupo qumico al sustrato
para convertirlo en producto, otras le quitan un grupo qumico al sustrato para dar
un nuevo producto, otras enzimas solamente cambian la estructura del sustrato sin
alterar su nmero de tomos, por otro lado, la enzima en cuanto a estructura
qumica y numero de molculas permanece constante, ya que esta no participa en
la reaccin sino que actua como catalizador del sistema.

2. si usted hace reaccionar la amilasa con el almidn y espera hasta que

termine la reaccin cmo comprobara que la enzima no ha sufrido
alteracin cataltica?

Para comprobar que la enzima no ha sufrido ninguna alteracin cataltica se puede

realizar una prueba colorimtrica utilizando la prueba de biuret la cual es
caractersticas para la determinacin de protenas siendo en este caso la amilasa
la enzima (donde las enzimas son protenas).

la entrada de sustrato, al contrario, un efector negativo modificar la estructura de

la protena de forma que el sustrato no pueda unirse al sitio activo de esta.

3. cite cinco ejemplos de enzimas con sus sustratos respectivos

Adolasa: participa en la ruptura de la fructosa 1,6 di fosfato en 2

triosas fosforiladas la pdha (fosfodihidroxiacetona) y
pgal(fosfogliceraldehdo)

Amilasa salival: pancretica, intestinal, participa en la lisis del

almidn(polisacrido) en maltosa(disacrido)

Lactasa: participa en la lisis de la lactosa en glucosa y galactosa

Pepsina: participa en la digestin qumica de las protenas en poli

pptidos o cadenas

Catalasa: participa en la lisis del h2o2(perxido de hidrgeno)

CONCLUSIONES

Con la realizacin de cada uno de los procedimientos detallados en este informe

para el estudio de la actividad enzimtica, se logr reconocer y analizar los
mecanismos asociados al proceso en el cual acta una enzima sobre un sustrato,
mediante la aplicacin de los conocimientos adquiridos de manera terica y el
anlisis de pruebas cualitativas descritas anteriormente. Tambin se llev a cabo
el reconocimiento de la importancia de las enzimas en diferentes procesos
biolgicos (como lo es el metabolismo en plantas y animales), los factores que
modifican su actividad y algunos ejemplos de stas con sus respectivos sustratos.
se logr evidencias como las enzimas con capaces de actuar sobre muchas
sustancia y desfragmentarlas para que nuestro organismo pueda llegar a absorber
nutrientes que se encuentren en estas.

Por lo tanto se comprob cun importante son las enzimas en los seres vivos
conocimiento, adems de conocer algunas de las caractersticas ms importantes
de las enzimas y los factores que pueden influir para que estas acten como la
temperatura, pH entre otros factores.

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