HIDROLAZE EC: 3

1
 Hidrolaze EC: 3
Enzime care catalizeaz reacii de scindare ale unor legturi covalente ale
substratelor cu participarea unei molecule de ap (scindare hidrolitic).
Molecula de ap se fixeaz la punctul de scindare al substratului i
rezult produi de reacie mai simpli.

A-B + H2O A - OH + B - H

Teoretic, reaciile sunt reversibile

De regul, reaciile inverse de formare a legturilor covalente, se
realizeaz pe alte ci metabolice

Clasificarea hidrolazelor n subclase i sub-subclase se face n funcie de tipul

de legtur covalent pe care o scindeaz: carbon-oxigen, carbon-carbon,
carbon-azot, sulf-azot, carbon-fosfor, etc.

2
 Hidrolaze caracteristici generale

Sunt protein-enzime (deci nu au cofactori), cu centrii activi constituii fie dintr-un

singur aminoacid, fie dintr-o asociere adecvat de aminoacizi.
Centrii activi ai hidrolazelor:
Un aminoacid - Exemplu: - tripsina,
- chimotripsina
- colinesterazele au n centrul activ Ser
- Ribonucleaza i papaina au n centrul activ Cys
Mai muli aminoacizi: pepsina are n centrul activ patru aminoacizi: Ileu,
Val, Asp, Tre
Hidrolazele pot fi activate de ionii metalici
Fosfatazele alcaline, diferite peptidaze, sunt hidrolaze activate de metale (Zn2+).
Reaciile catalizate de hidrolaze se petrec cu modificri energetice minime,
nefiind implicate n obinerea de energie.
Pot s acioneze extracelular, cum este cazul hidrolazelor tractului digestiv, cu rol
n metabolismul nutrientelor.
Acestea realizeaz scindarea moleculelor mari n molecule mici, simple,
absorbabile la nivelul mucoasei intestinale. 3
Hidrolaze care acioneaz asupra legturilor esterice
ESTERAZE (EC 3.1)
Carboxiesterazele (EC 3.1.1) hidrolizeaz esterii acizilor carboxilici

Lipazele (EC: 3.1.1.3) - hidrolizeaz triacilglicerolii elibernd, n trepte

succesive, acizii grai care esterific funciile alcoolice ale glicerolului, =>
diacil-, monoacilgliceroli, sau chiar glicerol i acizii corespunztori. Lipazele se
gsesc n cantiti apreciabile n sucul pancreatic i particip la digestia intestinal a
lipidelor alimentare.
Aciunea lipazelor este
favorizat de ionii de
O calciu, ntruct acizii
grai rezultai din
CH2 O C R1 hidroliz sunt
O transformai n sruri
CH O C R2 + 2 HOH insolubile de calciu.
O n acest mod, echilibrul
Lipaze de reacie este
CH2 O C R3 permanent deplasat n
sensul hidrolizei.
triacilgliceroli
2-Monoacil glicerol + R1-COOH + R3-COOH

4
 Fosfolipazele A1 i A2

acioneaz asupra legturilor I i II ale fosfatidilcolinelor (lecitinelor) scindnd

legturile esterice dintre gruprile hidroxil ale glicerolului i acizii grai R1 i R2
Fosfolipaza A1 (EC: 3.1.1.32) fosfatidilcolin + H2O 2 acil glicerofosfocolin + acid gras

Fosfolipaza A2 (EC 3.1.1.4) fosfatidilcolin + H2O 1-acil-glicerofosfocolin + acid arahidonic

Fosfolipaza A2 Fosfolipaza A1
EC: 3.1.1.4 EC: 3.1.1.32
O
Eicosanoizi
CH2 O C R1 proinflamatorii
O
CH O C R2
O CH3
III IV +
CH2 O P O CH2 CH2 N CH3

OH CH3

5
 Fosfolipidele pot fi degradate sub aciunea fosfolipazelor, care se
gsesc n veninul de arpe (arpe cu clopoei, Cobra); acesta conine
fosfolipaza A2, care hidrolizeaz legtura esteric de la C2

Rezult lizolecitine, care au efect

detersiv i distrug membranele celulare,
inclusiv membranele eritrocitare

6
 3.1.1. Colinesteraze
O
CH2 O C CH3 CH2 OH
+ CH3 Acetilcolinesteraza + CH3 -
+ CH3COO
CH2 N CH3 + HOH CH2 N CH3
CH3 CH3
Acetilcolina Colina

Acetilcolinesteraza (EC: 3.1.1.7)

se gsete n eritrocite, fibre nervoase, sinapse, muchi striat
este implicat n transmisia influxului nervos
este activat de ionii de magneziu

Colinesteraza (EC 3.1.1.8) denumit i pseudocolinesteraza

prezent n plasm i n ficat
catalizeaz hidroliza esterilor colinei cu ali acizi organici cum ar fi acidul
butiric i propionic

7
Acetilcolinesteraza, (EC: 3.1.1.7), denumit i acetilcolin hidrolaza, are denumirea
sistematic acetilcolin acetilhidrolaza.
Acetilcolinesteraza se gsete n eritrocite, fibre nervoase, sinapse, muchi striat, i
este activat de ionii de magneziu.
Catalizeaz reacia de hidroliz a acetilcolinei (n sinapsa colinergic), cu formare de
colin liber i acid acetic (adica metabolii inactivi). Acetilcolinesteraza are rol la
nivelul jonciunilor neuromusculare periferice ale SNC. Aceast hidroliz permite
neuronului colinergic s revin n starea de repaus dup ce a fost activat.
n felul acesta se elimin acetilcolina liber din sinaps, proces esenial pentru funcia
muscular.

Dac este inhibat acetilcolinesteraza (de ctre neurotoxine- de exemplu, pesticide

organofosforice) => un exces de acetilcolin n placa neuromuscular => paralizia
muchilor.

Exist maladii neurodegenerative caracterizate prin deficit de sintez de acetilcolin, i

atunci este inhibat reversibil acetilcolinesteraza, ca s nu mai scindeze acetilcolina.

Colinesteraza, (EC 3.1.1.8), denumit i pseudocolinesteraza, are denumirea sistematic

acilcolin acilhidrolaza.
Este prezent n plasm i n ficat i catalizeaz hidroliza esterilor colinei cu ali acizi
organici cum ar fi acidul butiric i propionic. Nu este foarte bine definit rolul su fiziologic.
8
 Mecanismul de aciune al colinesterazei

Enzima are 2 centri activi :

-Unul anionic (leag ionul amoniu)
-Unul esterazic (Ser, His) - se ataeaz
de legtura esteric
Acetilcolina (substrat)

Centrul activ (Ser, His)

9
Inhibitorii colinesterazei molecule farmacologic
active/toxice

Legare covalent inhibiie

ireversibil (derivai organofosforici
insecticide sau n tratamentul
glaucomului)

Inhibiie reversibil edrofoniu

(diagnostic miastenia gravis)

Inhibitorii de colinesteraz sunt

utilizai n diferite domenii
terapeutice, cum ar fi atonia
muscular sau maladia Alzheimer
10
 Hidrolazele esterilor fosforici
Rol important n metabolismul glucidelor, lipidelor, nucleotidelor

FOSFOMONOESTERAZELE (EC: 3.1.3)- sunt hidrolaze ale monoesterilor fosforici

Aceste enzime se mai numesc i fosfomonoesteraze sau fosfataze
O O
fosfataze
R O P OH + HOH R OH + HO P OH
OH OH

Monoester fosforic Alcool Acid fosforic

FOSFODIESTERAZELE (EC 3.1.4) hidrolizeaz esterii n care dou funcii acide ale
acidului fosforic sunt esterificate cu alcooli.
Hidrolazele diesterilor fosforici

O O
fosfodiesteraze
R2 O P OH + H OH R2 O P OH + R1 OH

R1 O OH

Monoester fosforic Alcool

Diester fosforic
11
 FOSFOMONOESTERAZE (EC: 3.1.3)

Exemple de fosfomonoesteraze:
Elibereaza
1. Dup pH-ul optim de aciune: gruparile fosfat
- fosfataza alcalin (EC: 3.1.3.1), are pH optim de aciune de pe multe
8,6 9,4 i este localizat, mai ales, n epiteliul intestinal i renal, tipuri de
precum i n oase; molecule
(nucleotide,
- fosfataza acid (EC: 3.1.3.2), are un pH optim de aciune proteine)
5 5,5 i este localizat mai ales n rinichi, splin, prostat, etc.

2. Glucozo-6-fosfataza (EC: 3.1.3.9)

Implicat n homeostazia glucozei
O

CH2 O P OH 6 CH2OH
5
O
O OH + H2 O
OH + Pi
OH 4
2
1
glucozo-6-fosfataza
OH 3
OH
OH OH OH
OH
-D-Glucoz
Glucoz 6-fosfat
12
 FOSFODIESTERAZE (EC: 3.1.4)
Exemple de fosfodiesteraze:
Fosfolipaza C (EC 3.1.4.3) fosfatidilcolin + H2O 1,2 diacil glicerol + colin fosfat

Fosfolipaza D (EC 3.1.4.4) fosfatidilcolin + H2O colin + acizi fosfatidici

II
O
CH2 O C R1 fosfolipaza D EC 3.1.4.4
O
I
CH O C R2
O CH3
III IV +
CH2 O P O CH2 CH2 N CH3

OH CH3
fosfolipaza C
EC 3.1.4.3

Prezente att intracelular ct i n sucurile digestive,

particip la digestia lecitinelor din alimente

13
 Hidrolaze care acioneaz asupra legturilor glicozidice
GLICOZIDAZE (EC 3.2)

Glicozidazele (EC 3.2) catalizeaz reacia de scindare hidrolitic a legturilor

glucozidice din structura homopolizaharidelor (homoglicani - amidon,
glicogen) sau a oligozaharidelor (di-, tri-, tera-, penta-zaharide).
Aceste reacii pot fi considerate reacii de transfer ale unor resturi glucozil
pe molecula de ap ca acceptor.
Se pot subclasifica n hidrolaze ale compuilor O-glicozilai, N-glicozilai,
S-glicozilai.

14
 Subclasa GLICOZIDAZE (EC 3.2)
Sub-subclasa hidrolaze ale compuilor O-glicozilai
Homopolizaharidaze = amilaze
-amilaza (EC: 3.2.1.1), denumirea sistematic -1,4-glucan-4-glucan hidrolaza
scindeaz numai legturile 1-4 glicozidice, nu i pe cele 1-6
rezult compui intermediari de hidroliz numii dextrine. Dextrinele puse n
libertate sub aciunea amilazei devin substrate pentru aceeai enzim; degradarea
hidrolitic merge pn la maltoz (dizaharid)
se gsete n saliv, i produce scindarea moleculei de amidon provenit
din alimente, n cavitatea bucal

-amilaza (EC: 3.2.1.1), cu denumirea sistematic -1,4-glucan-malto hidrolaza

secretat de pancreas i are rolul de a continua digestia amidonului i a
glicogenului la nivel intestinal.
hidrolizeaz numai legturile 1-4 glicozidice marginale, terminale (aflate la
capetele nealdehidice ale lanurilor de amiloz), rezultnd direct maltoz (fr ca
hidroliza s mai treac prin stadiul intermediar de dextrine)

15
 GLICOZIDAZE
Homopolizaharidaze = amilaze
- amilaz
CH2-OH CH2-OH 6CH -OH
2
5
O O O
OH 1 4 OH 1 4 OH 1
2
O O O
3 O
OH OH OH
Enzima R
CH2-OH CH2-OH CH2-OH 6 CH2 CH2-OH
O O O 5 O O
OH OH OH 4 OH 1 OH
1 2
O O O O 3
O
OH
OH OH OH OH OH
- amilaz capt
reductor

Aciunea amilazelor asupra moleculei de amidon

Amilazele acioneaz asupra polizaharidului pe principiul atacului multiplu.

Odat format complexul enzim-substrat, enzima poate hidroliza unele legturi n mod
succesiv nainte ca enzima s fie din nou liber.
16
 GLICOZIDAZE
Oligozaharidaze

zaharaza (EC: 3.2.1.26). denumit i sucraza, are denumirea sistematic

-D-fructofuranozid fructohidrolaza
Scindeaz zaharoza (sucroza) ntr-o molecul de glucoz i una de fructoz.

6
CH2-OH
5
Se cunosc dou zaharaze care
O acioneaz asupra zaharozei:
4 OH 1 - D glucoz
-glucozidaz cu rspndire
OH preponderent n regnul
HO animal, care acioneaz asupra
O
6 Zaharaz legturilor - glicozidice,
HO-H2C (EC: 3.2.1.26)
O pH optim 7
5 HO 2 -D fructoz -fructozidaza (invertaz)
4 1 (microorganisme), care
CH2-OH
acioneaz asupra legturilor -
3
OH
glicozidice, pH optim 4,5
Sucroz (D glucoz-- 1,2--fructoz)
17
 GLICOZIDAZE
Oligozaharidaze
Acidul hialuronic = polizaharid alctuit din uniti repetitive de dizaharid format din acid
glucuronic i N-acetilglucozamin legate prin legturi 1,3 -glicozidice.

Hialuronidaza (EC: 3.2.1.35) este o depolimeraz a acidului hialuronic.

Acioneaz asupra legturilor 1,4 -glicozidice ce se stabilesc ntre unitile dizaharidice.
Datorit aciunii
depolimerizante a 6
hialuronidazei, n esuturi COOH CH2-OH
pot ptrunde substane O O
O 5 O
xenobiotice cum sunt Hialuronidaza 4 OH 4
EC: 3.2.1.35 1
medicamentele, precum 3
i bacterii patogene. 3 2 OH
OH NH
O
COOH CH2-OH H3C C O
O O O legtur
4 OH 1,4 - glicozidic
1 3
1
O
OH
OH
NH
Permeabilizarea
esutului
legtur H3C C O
1,3 - glicozidic conjunctiv 18
Hidrolaze care acioneaz asupra legturilor peptidice
PEPTIDAZE (EC 3.4)
Peptidazele sunt enzime care scindeaz hidrolitic legturile
peptidice rezultate din condensrile aminoacizilor.
Pentru hidroliza complet a proteinelor n aminoacizi liberi este
nevoie de aciunea combinat a mai multor enzime proteolitice cu
specificiti diferite.
n literatur se mai ntlnete i denumirea de proteinaze sau
proteaze, tot cu rol de hidroliz a legturilor peptidice.
Acionez n tractul gastrointestinal precum i intracelular.
Sunt clasificate n endopeptidaze i exopeptidaze, n funcie de
poziia legturilor peptidice a cror scindare o catalizeaz.

19
Mecanismele de aciune ale enzimelor proteolitice

20
Pepsina (EC: 3.4.23.1)
aspartil-endopeptidaz
Hidrolizeaz numai legturile peptidice realizate ntre un aminoacid aromatic
(fenilalanin, tirozin) i un aminoacid dicarboxilic (de ex. acid glutamic)
secretat de glandele fundice ale stomacului sub form inactiv de pepsinogen.
acioneaz n stomac, n cursul digestiei
reprezint primul atac al enzimelor digestive asupra substanelor proteice
pH-ul su optim de aciune este 1,2 2
Pepsinogenul se transform n pepsin activ sub aciunea HCl din sucul gastric
(secretat de celulele parietale ale stomacului), precum i autocatalitic, sub aciunea
urmelor de pepsin.

Zimogen inactiv: pepsinogen Enzima activ: pepsina

pH < 5

Centrul
activ

Pepsinogen Pepsin
42 000 Daltoni 34 000 Daltoni

21
Exemple de endopeptidaze
Tripsina (EC: 3.4.21.4)

serin endopeptidaz - are serin n centrul su catalitic

scindeaz legturile peptidice realizate ntre un aminoacid bazic,
diaminomonocarboxilic (lizin, arginin) i un aminoacid aromatic (tirozin, fenilalanin)
secretat de pancreasul exocrin sub form inactiv de tripsinogen.
Activarea sa se face autocatalitic, sub influena urmelor de tripsin, la pH 7 9,
sau sub aciunea enterokinazei (EC: 3.4.21.9) din mucoasa intestinal, la pH 5,2 6
Are loc scindarea unui hexapeptid terminal cu structura
Val-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys
pH-ul su optim de aciune este 7 9
n intestin tripsina hidrolizeaz numai proteinele denaturate, dup ce au fost parial
digerate de pepsin
22
Exemple de endopeptidaze
Chimotripsina (EC: 3.4.21.1)
rupe legturile peptidice la care particip aminoacizi aromatici, i scindeaz
proteinele pn la fragmente compuse din 6 8 aminoacizi.
secretat tot de pancreasul exocrin sub form de chimotripsinogen inactiv
Are loc formarea unor familii de chimotripsine: , , , , al cror centru
catalitic conine serin.
Att tripsina ct i chimotripsina fac parte din grupul proteazelor care conin
aminoacidul serina n centrul lor catalitic (Ser-195), deci sunt serin proteaze.
Serina mpreun cu un rest de histidin i de acid aspartic (His-57 i Asp-102)
realizeaz un atac nucleofil asupra legturii peptidice

23
 ENDOPEPTIDAZE cu aciune la nivel sistemic
Trombina (EC 3.4.21.5)
fibrinogenaz, este o serin- endopeptidaz
scindeaz selectiv legturile de tip arginin-glicin din fibrinogen, pentru a forma
fibrin, elibernd fibrinopeptidele A i B, importante n procesul de coagulare
se formeaz de la protrombin (factorul II al coagulrii), avnd activitate omoloag cu
chimotripsina

Renina (EC: 3.4.23.15)

denumit i angiotensinogenaz este o aspartil-endopeptidaz.
n organismul uman se formeaz de la prorenin n plasm i rinichi.
Acioneaz asupra angiotensinogenului, pe care l transform n angiotensin cu
aciune vasoconstrictoare.

Enzima de conversie a angiotensinei (ACE, EC 3.4.15.1.)

denumit i peptidil-dipeptidaza A, este o glicoprotein dependent de Zn2+ i
de Cl- care transform angiotensina I n angiotensin II (elibernd un dipeptid
carboxiterminal) cu aciune vasoconstrictoare.

24
 ENDOPEPTIDAZE cu aciune la nivel sistemic
alfa-globuline plasmatice

Angiotensinogen
Kininogen
Renina
(aspartil-proteaza renala) Kalicreina

Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe-His-Leu
Angiotensina I
Enzima de conversie a Bradikinina
angiotensinei (ACE)

Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe + His-Leu
Angiotensina II

Actiune vasoconstrictoare directa Efect hipotensiv

Efect hipertensiv Stimuleaza sistemul nervos simpatic
Induce senzatia de sete (ingestie apa)
Stimuleaza sinteza de aldosteron
Stimuleaza sinteza de hormon
antidiuretic (retentie hidrica) 25
 EC 3.6. HIDROLAZE CARE ACIONEAZ ASUPRA LEGTURILOR ANHIDRIDICE
ALE ACIZILOR

Pirofosfataza anorganic (PP-aza, EC: 3.6.1.1), cu denumirea sistematic : pirofosfat

fosfohidrolaza
Hidrolizeaz pirofosfatul la dou molecule de ortofosfat.
O O

HO P O P PP-aza
OH + HOH 2 H3PO4
OH OH
Pirofosfat

Adenozintrifosfataza (EC: 3.6.1.3), denumit ATP-aza sau ATP monofosfataz, are

denumirea sistematic : ATP-fosfohidrolaza.
Hidrolizeaz ATP la ADP i Pi (fosfat anorganic), cu eliberarea a 30,54 kJ/mol (7,3 kcal).
NH2
ATP-aza N
ATP + HOH ADP + Pi + 7,3 kcal N
adenina
N
O N
O O

HO P~O P~O P O CH2

O
OH OH OH
riboza
26
ATP (adenozin trifosfat) OH OH
EC: 4. LIAZE

27
 EC: 4. LIAZE
Liazele sunt enzime care catalizeaz reacii de scindare nehidrolitic (clivare
simpl sau cu oxidare) a unor legturi chimice din molecula substratului.
Clasificarea liazelor n subclase i sub-subclase se face n funcie de tipul de
legtur covalent pe care o scindeaz: carbon-carbon, carbon-oxigen, carbon-
azot, sulf-azot, carbon-fosfor.
4. Liaze
4.1. Liaze carbon-carbon
4.1.1. Carboxi-liaze
4.1.2. Aldehid-liaze
4.1.3. Oxo-acid liaze
4.1.99. Alte liaze carbon-carbon
4.2. Liaze carbon-oxigen
4.2.1. Hidro-liaze
4.2.2.Liaze care acioneaz asupra polizaharidelor
4.2.99. Alte liaze carbon-oxigen
4.3. Liaze carbon-azot
4.3.1. Amoniac-liaze
4.3.2. Amidino-liaze
4.3.3. Amino-liaze
4.3.4. Alte liaze carbon-azot
4.4. Liaze carbon-sulf
4.5. Liaze carbon-halogen
4.6. Liaze carbon/fosfor
4.99. Alte liaze 28
 COFACTORII LIAZELOR CARBON-CARBON (C-C) (EC 4.1)
Decarboxilaze ale cetoacizilor, enzime dependente de tiaminpirofosfat (TPP)
Decarboxilaze ale aminoacizilor, enzime dependente de piridoxal fosfat (PLP)

Exemple de reacii catalizate de LIAZE:

Aldehid-liaze (EC 4.1.2)
Fructozo-1,6-bisfosfat aldolaza (EC: 4.1.2.13) denumit i aldolaz, are
denumirea sistematic: fructoz 1,6-bisfosfat D-gliceraldehid-3-fosfat liaz
O

CH2 O P OH
O
C O OH
CH2 O P OH HC O
HO CH fructozo 1,6 bisfosfat
C O OH + HC OH O
aldolaza
HC OH EC 4.1.2.13
CH2-OH CH2 O P OH
HC OH O
dihidroxiaceton fosfat OH
CH2 O P OH gliceraldehid fosfat
OH

fructozo 1,6 bisfosfat n glicoliz

29
 Liaze fosfor-oxigen (EC 4.6)
Aceste enzime se mai numesc nucleotidil-ciclaze i catalizeaz, n general,
eliminarea pirofosfatului din moleculele de nucleozid trifosfat.

Adenilat ciclaza (EC 4.6.1.1), denuimit i 3,5 AMP ciclic sintetaz, are
denumirea sistematic ATP pirofosfat liaz (cu ciclizare).
adenilat ciclaza
ATP 3',5'-AMP ciclic + pirofosfat

NH2
NH2
O
N
HO P OH N N
N
O N
N N
P N
HO OH adenilat ciclaza
EC 4.6.1.1
5'
O
O CH2 + PPi
HO P O CH2 O
O
O
3'

O P O OH
OH OH
OH
adenozin trifosfat (ATP) AMP ciclic 30
EC 5. IZOMERAZE

31
 EC 5. IZOMERAZE
Izomerazele sunt enzime care catalizeaz diferite reacii de rearanjri
interne n molecula substratului (modificri structurale).
Clasificarea izomerazelor n subclase i sub-subclase
5. Izomeraze
5.1. Racemaze i epimeraze
5.1.1. Care acioneaz asupra aminoacizilor i a derivailor acestora
5.1.2. Care acioneaz asupra hidroxiacizilor i a derivailor acestora
5.1.3. Care acioneaz asupra glucidelor i a derivailor acestora
5.1.99. Care acioneaz asupra altor compui
5.2. Izomeraze cis-trans
5.3. Oxidoreductaze intramoleculare
5.3.1. Care fac interconversia aldoze i cetoze
5.3.2. Care fac interconversia grupelor ceto- i enol-
5.3.3. Mutarea legturilor C = C
5.3.4. Mutarea legturilor S S
5.3.99. Alte oxidoreductaze intramoleculare
5.4. Transferaze intramoleculare (mutaze)
5.4.1. Care transfer grupri acil
5.4.2. Fosfotransferaze (fosfomutaze)
5.4.3. Care transfer grupri amino
5.4.99. Care transfer alte grupri
5.5. Liaze intramoleculare
5.99. Alte izomeraze
32
 RACEMAZE I EPIMERAZE (EC 5.1)

Racemazele aminoacizilor (EC 5.1.1)

Catalizeaz interconversia formelor D i L ale unui substrat.
Reacii importante pentru metabolismul celular, n conversia din forma D n forma L
a aminoacizilor ce ptrund n organism prin intermediul nutrimentelor
Organismul utilizeaz numai forma L a moleculelor respective.
sunt piridoxal fosfat (PLP)-dependente

PLP
L-aminoacid D-aminoacid

CH3 CH3
PLP
HC NH2 alanin racemaza H2N CH
(EC 5.1.1.1)
COOH COOH
D--alanin L--alanin
33
 IZOMERAZE CIS-TRANS (EC 5.2)
Aceste enzime rearanjeaz geometria moleculei la nivelul dublei legturi.

Exemplu:
Retinal izomeraza (EC 5.2.1.3) sau all-trans-retinal 11-cis-trans-izomeraza
Aceast transformare reversibil este implicat n mecanismul vederii.

CHO

all-trans-retinal

retinal izomeraza

11

CHO
11-cis-retinal 34
EC. 6 LIGAZE

35
 EC. 6 LIGAZE
Ligazele sunt enzime care catalizeaz formarea unei molecule mari prin
combinarea a dou molecule mai simple, cu crearea de legturi covalente.
Ligazele catalizeaz deci reacii de biosintez care au loc pe seama energiei
furnizate de obicei de ATP.
Pentru enzimele din aceast clas se folosete i denumirea de sintaze sau
sintetaze.
Se cunosc n prezent numai cofactorii ligazelor carbon-carbon : biotina i
filochinonele (vitamina K1).
Clasificarea ligazelor n subclase i sub-subclase
6. Ligaze
6.1. Ligaze care formeaz legturi carbon-oxigen
6.1.1. Ligaze care formeaz aminoacil-ARNt i compui nrudii
6.2. Ligaze care formeaz legturi carbon-sulf
6.2.1. Ligaze acid-tiol
6.3. Ligaze care formeaz legturi carbon-azot
6.3.1. Ligaze acid-amoniu (sau amin) (amid sintetaze)
6.3.2. Ligaze acid-aminoacid (peptid sintetaze)
6.3.3. Ciclo-ligaze
6.3.4. Alte ligaze carbon-azot
6.3.5. Ligaze carbon-azot cu glutamin ca donor de N-amid
6.4. Ligaze care formeaz legturi carbon-carbon
6.5. Ligaze care formeaz legturi de esteri fosforici 36
 LIGAZE CE FORMEAZ LEGTURI CARBON-AZOT (C-N)
(EC 6.3)
Glutamin sintetaza (EC 6.3.1.2), sau glutamat amoniac ligaza, are
denumirea sistematic : L-glutamat : amoniac ligaza (ADP formator).
O
C
COOH NH2
glutamin sintetaza CH2
CH2
EC: 6.3.1.2
CH2 + ADP + Pi
CH2 + NH3 + ATP
H2N CH
H2N CH
COOH
COOH
acid L-glutamic L-glutamina

Reacie este implicat n detoxifierea amoniacului n organism prin

transformarea sa n glutamin.
37
LIGAZE CE FORMEAZ LEGTURI CARBON-AZOT (C-N)
(EC 6.3)
Glutation sintetaza (EC: 6.3.2.3), denumit i glutation sintaz, are denumirea
sistematic : -L-glutamil-L-cisteinil : glicin ligaza (ADP formatoare).

acid L-glutamic + L-Cistein + Glicin + ATP

-L-Glutamat-cisteinil-
glicin-ligaza

O C NH CH C NH CH2 COOH

CH2 CH2
+ ADP + Pi
CH2 SH

H2N CH

COOH
Glutation redus (GSH)
Glutation
(-Glutamil-cisteinil-glicin, GSH) 38
COFACTORII LIGAZELOR CE FORMEAZ
LEGTURI CARBON-CARBON (C-C)
CARBOXILIGAZE (EC 6.4)

Biotina
Vitaminele K

39
 Biotin-protein enzime (EC 6.4.1)
Biotin enzimele sunt proteine enzimatice care au n structur biotina, o
vitamin din complexul B.
Aceasta ndeplinete rolul de coenzim transportoare de CO2 n cursul
proceselor de carboxilare, fiind i factor de cretere pentru
microorganisme i levuri.
Enzimele cu biotin sunt inhibate de unele glicoproteine din albuul de
ou, cum este cazul avidinei.

nucleu O
imidazolic
HN NH
H2 H2
nucleu HC CH
C C
tiofen H2C C
H C C COOH
S H2 H2
acid valerianic
40
 Mecanismul de aciune al biotin-protein enzimelor
O Apoenzima
C
HN NH
HC CH HN
H2 H2
H2C C C C N CH2 CH2 CH2 CH2 CH
S H C C C H
H2 H2 Rest de lizin din C O
O proteina enzimatic
Biotin-enzima

CO 2 ATP

O Biotin-carboxilaza
O ADP+Pi Apoenzima
C C
N NH
HO
HC CH HN
H2 H2
H2C C C C N CH2 CH2 CH2 CH2 CH
S H C C C H
H2 H2 C O
O Rest de lizin din
proteina enzimatic
biotin carboxyl carrier Carboxibiotin-enzima

protein ("CO2" activ)

41
 LIGAZE CE FORMEAZ LEGTURI CARBON-CARBON (C-C).
CARBOXILIGAZE (EC 6.4)
Enzime care realizeaz carboxilarea unor compui organici;
Cofactorii acestor enzime sunt biotina i vitamina K1.

1. Exemple de carboxilaze dependente de biotin:

Piruvat carboxilaza (EC: 6.4.1.1), sau piruvat carboxiligaza
COOH
2+
Mn
CH2
Biotin-enzim
H3C C COOH + "CO2" + ATP
C O
O Ci celulare de
acid piruvic ADP+Pi COOH biosintez
acid oxalilacetic

Acetil~SCoA carboxilaza (EC 6.4.1.2), sau acetil~SCoA carboxiligaza

COOH molecula starter
2+
O Mn din biosinteza
Biotin-enzim CH2
de acizi grai
H3C C ~ SCoA + "CO2" + ATP O
C ~ SCoA
ADP + Pi malonil~SCoA 42
2. Exemple de carboxilaze dependente de vitamina K (filochinona):
Gama-glutamil carboxilaza catalizeaz, mpreun cu vitamina K1 (filochinona), carboxilarea
acidului glutamic din structura unor proteine biologic active din organism =>> activarea
acestor proteine.
Exemple: proteinele implicate n cascada coagulrii (factorii II, VII, IX, X) i osteocalcina
implicat mineralizarea esutului osos.

Resturile -
carboxiglutamice
permit chelarea ionilor
de calciu !

Ca2+
O O

C C
O O
CH
CH2
NH - CH - CO -

Cascada coagulrii 43
 Cascada coagulrii mecanisme moleculare
Factorii coagulrii se gsesc n forma inactiv (necarboxilat) ;
n cazul producerii unor leziuni la nivelul pereilor vasculari, expunerea fibrelor
de colagen din peretele vascular determin agregarea trombocitelor, eliberarea
enzimelor intracelulare i activarea n cascad a factorilor coagulrii

First, the endothelium is activated by hypoxia and/or inflammatory mediators and expresses the adhesion
proteins P-selectin, E-selectin, and von Willebrand factor (vWF). Second, circulating leukocytes, platelets,
and tissue factor + microvesicles (TF+ MVs) bind to the activated endothelium. Third, the bound leukocytes
become activated and express TF. The local activation of the coagulation cascade overwhelms the
protective anticoagulant pathways and triggers thrombosis. The fibrin-rich clot also contains platelets and
44
red blood cells (J Clin Invest. 2012;122(7):2331-2336).
Filochinona sau vitamina K1 redus este cofactorul acestei carboxilaze care transform
acidul glutamic legat n catene polipeptidice (notat prescurtat Glu-proteine) n acid -
carboxiglutamic (notat prescurtat Gla-proteine).
Enzima oxideaz filochinona (care se afl n form redus) la filochinon 2,3 epoxid i
transfer concomitent o molecul de CO2 pe acidul glutamic.

Rest de acid glutamic

H H
din polipeptide (Glu)
C

C
C N H C
N H C H
H
+CO2 O
O
+ O2 Rest de acid gama-carboxiglutamic
Gama-glutamil carboxilaza din polipeptide (Gla)

Filochinon
Filochinon 2,3-epoxid
(forma redus) Epoxid reductaza
R - radical fitil

NADH+H+
compusi cu punte X H2O NAD+ compusi
disulfur X
ditiolici
45
Enzimele i inhibitorii enzimatici
n terapie.
Mecanisme de aciune

46
Domenii terapeutice de utilizare a enzimelor
Enzimele ca ageni terapeutici

Enzimoterapia

n terapia de substituie
n terapia antiinflamatorie, antiedematoas i cicatrizant
n medicaia aparatului respirator
n patologia cardiovascular
n terapia afeciunilor maligne, etc

47
 Enzimele sunt utilizate n terapie pentru:
Substituia unui deficit sau a unei lipse n producerea enzimelor digestive
pepsin, tripsin, lactaz, etc

Eliminarea depunerilor de esut mort sau a fibrinei (n snge, plmni,

piele, ochi), proteinaze, nucleaze, colagenaze, etc

Accelerarea fibrinolizei (activarea plasminei i a plasminogenului)

streptokinaza, urokinaza
48
 Enzimele utilizate ca medicaie a aparatului respirator

Dornaza
este deoxiribonucleaz I
purificat, obinut prin
recombinare genetic,
Cliveaz selectiv ADN-ul
prezent n sputa
pacienilor cu fibroz
chistic, ameliornd
astfel eliminarea
secreiilor patologice

49
 Enzime cu proprieti fibrinolitice
Streptokinaza
Enzim fibrinolitic, utilizat n
tratarea infarctului mioardic, ce
poate produce liza trombilor, dac
acetia nu sunt mai vechi de 48 de
ore.
Enzima se obine din culturi de
Streptococ beta hemolitic, putnd
declaa din acest motiv reacii
anafilactice la injectare.
Streptodornaza
enzima secretat de streptococii de
grup A i utilizat mpreun cu
streptokinaza pentru ndeprtarea
exudatelor patologice sau a
esuturilor necrozate.
50
Inhibiia enzimatic = int terapeutic
pentru anumite clase de medicamente

Ageni terapeutici inhibitori enzimatici

51
Mecanisme de aciune ale agenilor terapeutici - inhibitori enzimatici
Medicaia anti-Parkinson
- inhibitori ai DOPA-decarboxilazei........................................carbidopa
- inhibitori ai monoaminoxidazei izoforma B.......................selegilina
-inhibitori ai catecol-O-metiltransferazei (COMT) ................tolcapon
Medicaia antidepresiv
-inhibitori ai monoaminoxidazei izoforma Amoclobemid
Medicaia antiepileptic
- Inhibitorii de GABA-T...........................................................vigabatrin
Medicaia activ la nivel de SNC-SNV
-inhibitorii de acetilcolinesteraz carbamai, sruri cuaternare de amoniu
Medicaia antiinflamatoare
-inhibitori ai fosfolipazei A2 .........................antiinflamatoare steroidiene, AIS
-inhibitori ai ciclooxigenazelor (I i II) .......... antiinflamatoare nesteroidiene, AINS
Medicaia antiastmatic
-inhibitori de lipooxigenaz ...................................................montelukast
Medicaia antigutoas
-inhibitori ai xantinoxidazei ................................................alopurinol
Medicaia anticanceroas
- inhibitori de replicaz ......................................6-mercaptopurina
- inhibitori de timidilat sintetaz .........................5-fluorouracil
- inhibitori de dihidrofolatreductaz ....................metotrexat
- inhibitori de amidotransferaz...........................azaserina
52
- inhibitori ai ADN-topoizomerazelor (I i II)......... etoposid
Mecanisme de aciune ale agenilor terapeutici - inhibitori enzimatici
Medicaia antihipertensiv (anti-HTA)
- inhibitori ai enzimei de conversie .............................captopril, enalapril, perindopril
Medicaia hipocolesterolemiant
-inhibitori ai HMG-CoA reductazei ..............................statinele
Medicaia activ la nivel vascular
-inhibitorii de fosfodiesteraz cafeina, milrinona, sildenafil
Medicaia diuretic
- inhibitori ai anhidrazei carbonice ............................acetazolamida
Medicaia bacteriostatic. Sulfamidele bacteriostatice
-inhibitori ai enzimei de sintez a acidului folic .................sulfamidele antibacteriene
Medicaia antiviral
Anti-HIV
-inhibitori ai revers transcriptazei .......................azidotimidin (AZT)
-inhibitori ai proteazei .........................................amprenavir
- inhibitori ai integrazei ........................................zintevir
Antivirale n general
- inhibitori ai proteinkinazei virale..........................................maribavir.
- inhibitori ai ADN-polimerazei virusului herpetic ..........aciclovir (zovirax)
-inhibitori ai neuraminidazei virusului gripal............oseltamivir, zanamivir
Medicaia adenomului de prostat
-inhibitori de de 5--testosteron-reductaz..finasterid
Medicaia diabetului zaharat
53
-inhibitori ai -glucozidazei intestinale.acarboza
 Mecanisme de aciune n
Sindromul Parkinson se caracterizeaz, n
medicaia anti-Parkinson principal, prin scderea concentraiei
neuronale a neuromediatorului dopamin
n substantia nigra.
Manifestri clinice motorii: tremor i
rigiditate
OH OH LEVODOPA = precursorul metabolic
OH OH fiziologic al dopaminei (care este
DOPA- Decarboxilaza
deficitar), este folosit ca medicaie de
substituie n boala Parkinson.
CH2 CH2
CO2
H2N CH CH2-NH2
COOH
L - DOPA Dopamin

Doar 5-10% din L-DOPA administrat strabate BHE, restul se metabolizeaz la nivel
periferic prin decarboxilare i determin apariia unor efecte secundare: grea,
diskinezie (micri involuntare)

Inhibitorii enzimei DOPA decarboxilaza sunt utilizai pentru a mri biodisponibilitatea

L-DOPA la nivel central. 54
Asociat cu LEVODOPA, se administreaz:

1. Inhibitori ai dioxifenilalanin (DOPA)-decarboxilazei benserazida i carbidopa

(inhib decarboxilarea L-DOPA n periferie fr a o modifica la nivel central)
O
OH NH2
H HO
HO OH
OH
CH3
H HN
O HO NH2
HO

benserazid
carbidopa

OH OH
OH OH
DOPA- Decarboxilaza Dopamina este metabolizat enzimatic prin
participarea a dou enzime:
CH2
CO2
CH2 MAO (monoaminoxidaza, cu izoformele A i B)
H2N CH CH2-NH2
COMT (catecol-O-metiltransferaza)
COOH
L - DOPA Dopamin

55
 Tot asociat cu LEVODOPA se administreaz, de asemenea:

2. Inhibitori ai monoaminoxidazei izoforma B (MAO-B): selegilina = inhibitor

selectiv i ireversibil al enzimei MAO-B;

CH3

N
CH
CH3

selegilina

3. Inhibitori ai catecol-O-metiltransferazei (COMT) - tolcapon, entacapon = inhibitori

selectivi i reversibili ai COMT, enzim ce metabolizeaz, de asemenea, dopamina.
Au rolul de a prelungi aciunea levodopa.

56
Monoamin-oxidaza (MAO) enzim implicat n metabolismul (inactivarea)
neurotransmitorilor cu structur aminic

monoamin oxidaz (MAO, EC: 1.4.3.4)

R CH2 NH2 + H2O + O2 R CHO + NH3 + H2O2
Amin biologic activ FAD Aldehid
(dopamin, triptamin, FADH2
serotonin, adrenalin,
noradrenalin)

dopamina noradrenalina adrenalina

serotonina 2- feniletilamina 57
Monoamin-oxidaza, izoformele A i B (MAO, EC: 1.4.3.4 ; amin : oxigen
oxidoreductaz)
enzime mitocondriale, prezente n numeroase esuturi, ce catalizeaz
dezaminarea oxidativ a multor substrate : amine primare, secundare i
teriare, neurotransmitori sau hormoni precum dopamina, noradrenalina,
adrenalina i serotonina;
produii de reacie: aldehide, H2O2 i NH3 (neurotoxici)

MAO exist n dou izoforme, denumite MAO-A i MAO-B pe baza sensibilitii

la diferii inhibitori enzimatici: clorgilin (forma A) i deprenil (forma B), i a
specificitii pentru substratele menionate;

- serotonina MAO-A
- noradrenalina
Aldehid + NH3 + H2O2
- adrenalina
- dopamina clorgilin

- 2-feniletilamina
- benzilamina MAO-B
- tiramina Aldehid + NH3 + H2O2
- dopamina Deprenil 58
(selegilina)
 Inhibitori enzimatici utilizai ca
antidepresive

Inhibitorii selectivi, reversibili, de MAO-A sunt utilizai n terapia depresiei

deoarece cresc concentraia neuromediatorilor (mai ales a serotoninei) n fanta
sinaptic:
isocarboxazid
phenelzine
moclobemid
FADH2
HO HO
CH2-CH2-NH2 CH2-CHO
FAD
N MAO-A N
H H
+O2
Serotonin +H2O 5- hidroxiindol acetaldehid
NH3
59
 Tratamentul cu inhibitori MAO
(MAOIs) necesit restricii dietare
pentru alimentele ce conin tiramin,
pentru a nu determina crize de
hipertensiune arterial (HTA)
(cheese effect).

tiramin

Br J Pharmacol. 2006 Jan;

147(Suppl 1): S287S296. 60
 Inhibitorii enzimatici activi la nivelul acetilcolinesterazei (AChE)
carbamai, sruri cuaternare de amoniu
Inhibiia AChE reduce/mpiedic degradarea acetilcolinei (neuromediator) i astfel prelungete
semnificativ aciunea acesteia la nivelul sinapselor; substanele ce acioneaz astfel sunt utilizate
n tratarea unor afeciuni cum ar fi miastenia gravis, atonia muscular sau maladia
Alzheimer.

Piridostigmina
Rivastigmina
Maladia Alzheimer se caracterizeaz printr-o pierdere selectiva a neuronilor colinergici la nivelul
hipocampului i a cortexului frontal, precum i o diminuare drastic a enzimei colin acetiltransferaza.
Inhibitori reversibili ai colinesterazei: fizostigmina (eserina, rivastigmina (Excelon) i
donepezil (Aricept)).

Ladostigil inhibitor att al MAO-A i B ct i al

colinesterazei (crete concentraia de acetilcolin la
nivel SNC) i este folosit n tratarea maladiilor
neurodegenerative (Alzheimer)
61
GABA-transaminazele i inhibitorii cu
utilizare terapeutic

Sunt enzime care catalizeaz

transaminarea GABA cu 2-oxoglutarat sau
piruvat
GABA-T exprim o activitate excesiv la
unii pacieni epileptici
Reprezint inte terapeutice
Unele substane din clasa antiepilepticelor
(acid valproic, vigabatrin) sau unii compui
naturali (acidul rozmarinic) inhib GABA-T

GABA-neurotransmitor
inhibitor, scade excitabilitatea
neuronal, crete pragul
convulsivant!!!

62
 Mecanisme de aciune ale
medicaiei antiinflamatoare
Inhibitori ai enzimelor care intervin n
formarea factorilor proinflamatori
Fosfolipide
membranare
Fosfolipaza A2
Inflamaia este o reacie complex,
neurotrop, vascular, metabolic,
declanat de ptrunderea unor ageni
patogeni (strini sau produi de degradare
proprii) n esuturile sntoase ale unui
organism. Inflamaia este o reacie de
aprare i are mecanisme comune cu
infecia i alergia. Este o reacie care are ca
scop eliminarea unui factor agresiv (toxine
bacteriene, celule moarte, etc).

Principalii factori biologici endogeni

Acid arahidonic proinflamatori sunt prostaglandinele,
prostaciclinele, tromboxanii,
Reacii enzimatice leukotrienele, biomolecule care fac parte
din categoria eicosanoizilor derivai din
Lipooxigenaze Ciclooxigenaze (COX -1 i 2) acidul arahidonic.
Semnele clinice ale inflamaiei acute:
Leucotriene Prostaglandine calor, tumor, dolor, rubor, functio laesa.
Tromboxani
Compui biologic activi 63
1. Inhibitori ai fosfolipazei A2.
Fosfolipaza A2 : eliberarea, din fosfolipidele membranare, a acidului arahidonic care
este substrat pentru formarea compuilor proinflamatori.
Medicamente cu structur corticosteroidic (antiinflamatoare steroidiene, AIS), foarte
eficiente dar cu numeroase efecte adverse.
Medicamente utilizate n afeciuni inflamatorii severe: poliartrit reumatoid, reumatism
poliarticular acut, artrita acut gutoas, etc.
2.Inhibitori ai ciclooxigenazelor (I i II) din cascada acidului arahidonic.
Compui cu structuri diverse non-steroidice (antiinflamatoare nesteroidiene, AINS).
Ciclooxigenaze - 2 izoforme:
COX-1, enzim constitutiv i COX-2, enzim inductibil n timpul inflamaiei (accentueaz
rspunsul inflamator).
=> dou categorii de AINS:
- inhibitori COX neselectivi (denumite AINS clasice), medicamente ce inhib att COX-1,
ct i COX-2: acidul acetilsalicilic, diclofenac, indometacin, ibuprofen, piroxicam, etc.
- inhibitori selectivi COX-2: celecoxib, rofecoxib, parecoxib, etoricoxib, etc.

SO2NH2

F3 C N
N

CH3
64
celecoxib
 Stimuli fiziologici Infecie, traum

Acid arahidonic

Prostaglandine protectoare Prostaglandine proinflamatoare

Mucoas stomacal Trombocite Durere Febr Inflamaie

65
Aciunea diferit a celor dou ciclooxigenaze
Meninerea homeostaziei i a
Efecte funciilor celulare fiziologice
secundare Integritatea endoteliului
nedorite Vasodilatare
PGI2 Integritatea mucoasei
gastrice
Constitutiv COX-1 Bronhodilatare
PGE2 Integritatea
funciei renale
TXA2
AINS Agregare plachetar

PGE2
Inductibil
COX-2 PGF2 Inflamaie

Proteaze
Efecte terapeutice
antiinflamatoare 66
 Astmul bronic este o afeciune
Mecanisme de aciune n inflamatorie a cilor respiratorii, cu
terapia antiastmatic caracter cronic, care se manifest clinic,
periodic, prin crize de dispnee expiratorie,
cu senzaie de sufocare.
Medicamente care reduc
intensitatea i frecvena crizelor
de astm bronic: inhibitorii
selectivi ai enzimei 5-
lipoxigenaz - zileuton
ce catalizeaz biosinteza
leucotrienelor (LT)
bronhoconstrictoare, din acid
arahidonic.
Inhibarea formrii
leucotrienelor conduce la
bronhodilataie, efect
antiastmatic selectiv.
OH O
S
CH-N-C-NH2
CH3
67
zileuton