TITULO: Determinacin de la cantidad de colorante natural extrado a partir del

Hongo Pycnoporus Sanguineus mediante el uso de benceno.

Problema:

En el trabajo de investigacin, se desea verificar la cantidad colorante natural que

puede ser extraido a partir del Hongo Pycnoporus Sanguineus mediante la extracion
solido-liquido con un solvente orgnico , por medio de pruebas experimentales, para
ello, se necesita verificar la influencia de las variables: Tipo de sepa de hongos
Pycnoporus Sanguineus, Concentracin de Solvente y Tiempo de extraccin.

Para lo cual en un determinado nmero de muestras se coloc un volumen

constante de solvente orgnico en este caso Benceno a diferentes concentraciones,
con hongo Pycnoporus Sanguineus a distintas caractersticas fisicoqumicas como:
humedad, porosidad y procedencia del hongo, de la misma forma a tiempos variados
de extraccin.

1. INTRODUCCION

Los colorantes naturales son pigmentos coloreados obtenidos de materia prima

animal, mineral y fundamentalmente vegetal; tambin, son aquellas sustancias que
aaden o devuelven el color a un alimento e incluyen componentes naturales de
sustancias alimenticias y otras fuentes naturales que son normalmente utilizados
como ingredientes caractersticos en la alimentacin. Si considerados colorantes
segn esta directiva obtenidos a partir d los alimentos y otras materias naturales
obtenidas mediante extraccin fsica o qumica que ocasione na seleccin de los
pigmentos que se usan como componentes nutritivos o aromticos.
Los colorantes han de emplearse para devolver su aspecto original a los alimentos
cuyo color ha sido afectado por el proceso de elaboracin, almacenamiento, envasa
y distribucin, lo cual puede hacerlos menos aceptables visualmente.
Existen compuestos coloreados que se encuentran en el cuerpo fructfero de
algunos hongos, los cuales con el debido proceso podran ser extrados y
aprovechados industrialmente.
Pycnoporus sanguineus, es un hongo filamentoso perteneciente a los
basidiomicetos, se produce en las zonas tropicales y subtropicales, crece en
maderas muertas y restos de rboles. Es de color rojo-anaranjado en su totalidad,
incluyendo su interior. A nivel mundial existen investigaciones acerca de la
produccin de extractos del hongo Pycnoporus sanguineus para evaluar su
actividad antimicrobiana en hongos y bacterias fitopatgenas.
2. OBJETIVO GENERAL

Cuantificar la cantidad de colorante natural extrado a partir del Hongo Pycnoporus

Sanguineus mediante el uso de benceno.

1. OBJETIVOS DEL DISEO EXPERIMENTAL

1.1. Identificar las variables que influyen en la cantidad de colorante natural

extrado
1.2. Determinar cmo influye las diferentes concentraciones de benceno en la
obtencin de colorante adquirido del hongo Pycnoporus Sanguineus.
1.3. Determinar cmo interviene los tipos de sepa de hongos Pycnoporus
Sanguineus en la obtencin de colorante.
1.4. Determinar como interviene el tiempo de extraccin del hongo en la
obtencin de colorante.
Ho.- Es posible obtener mayor cantidad de colorante al utilizar altas
concentraciones de benceno con muestras de diferentes tipos de sepa de hongos
Pycnoporus Sanguineus y diferentes tiempos de extraccin.
Ha.- No es posible obtener mayor cantidad de colorante al utilizar altas
concentraciones de benceno con muestras de diferentes tipos de sepa de hongos
Pycnoporus Sanguineus y diferentes tiempos de extraccin.
2. FUENTES POSIBLES DE VARIACIN

El asigna miento de variables a los niveles se debe a distintos factores; de

acuerdo a la bibliografa el factor que tiene ms influencia en el proceso de
extraccin de colorante a partir del hongo es el tipo de solvente; el cual en este
caso de experimentacin es el Benceno.
El segundo factor elegido es el porcentaje de humedad existente en el hongo,
este factor al igual que el tipo de solvente es de fcil medicin e influencia en la
concentracin final de colorante.
Nuestra variable respuesta es la concentracin de colorante, debido a la
comparacin de este factor se puede determinar los factores tratamiento de
mayor influencia.
Existen varios factores molestia, su asignacin se debe a ciertos factores:
2.1. Pueden interferir en el proceso, pero no nos interesa su interaccin.
2.2. Se quiere verificar la influencia del tipo de equipo como factor molestia, por
ello se bloquea.
2.3. El tamao de partcula no se lo puede tomar como factor de estudio debido a
la complejidad que demuestra la medicin de este factor en las muestras.
2.4. La temperatura de extraccin no se eligi como factor tratamiento debido a
que este valor no puede variar durante la experimentacin, se necesita la
temperatura de ebullicin del solvente para su correcto funcionamiento.
2.5. Factores como: Tiempo de extraccion , Cantidad de masa, Porosidad,
Temperatura de secado , Numero de sifonadas , Tipo de operador , Horario
de ensayo y Procedencia del hongo son factores fuera de nuestro inters o
que se pueden bloquear, pero en nuestro caso nos interesa como bloque el
tipo de mezclado.

3. Regla de asignacin de las unidades experimentales a las condiciones de estudio

Para la elaboracin del proyecto se ha realizado una matriz experimental factorial de 2 k,
utilizado software especializado para el clculo y anlisis de resultados. En base a los
factores a estudiar (Concentracin de Solvente, Tiempo de extraccin y tipo de cepa de
Pycnoporus sangunea), cada uno va tener dos repeticiones, estableciendo interaccin
entre todas las combinaciones posibles en los diferentes niveles y factores. Obteniendo
un total de 8 observaciones

El diseo factorial 2k utilizado, se debe a que se va a realizar a dos niveles para

cada factor, establecidos para una ptima extraccin, especificando los niveles
tenemos: Tipo de sepa de hongos Pycnoporus Sanguineus (2 cepas: HEMIM-52,
HEMIM-53 ), Concentracin de Solvente ( 75% v/v, 100% v/v) y Tiempo de
extraccin (4h, 6h), teniendo en cuenta que la variable tipo de Soxhlet, se va a
aleatorizar para evitar sesgo en los resultados y que se convierta en ruido
aleatorio, considerando como variables de ruidos todo lo referente a condiciones
ambientales de ensayo.
Especificando las interacciones entre los diferentes factores y niveles se puede
observar en la tabla N, la influencia sobre los diferentes resultados entre
tratamientos.

4. Parte experimental y posibles dificultades

4.1. Medidas a realizar
Peso de los hongos
Temperatura de secado
Peso del agua absorbida por el solido
Peso del hongo seco en que esta absorbido el agua
Peso mximo del agua que puede ser absorbida por el hongo

4.2. Materiales y equipos

Reverbero Proctor-Silex 34101, 1000W

Malla de amianto (L: 15 cm; A: 15 cm)

 Vasos de precipitacin (R: 1000 ml; Ap: 50
ml)
(R: 600 ml; Ap: 50 ml)
Autoclave TUTTNAUER 3870M

Balanza analtica Boeco (R: 220 g; Ap: 0,1 mg)

Varilla de agitacin

Jeringuilla plstica (R: 1 ml; Ap: 0,1 ml)

Papel aluminio

Caja Petri (R: 40 ml; D: 9 cm)

Cmara de flujo laminar Biofase BBS-V1300

Parafilm M All-Purpose Laboratory Film (L: 10 cm; A: 2 cm)

Mechero Fisher

Estufa MEMMERT INCO med (R: 20 C 220 C; Ap 0,5

C)
Bisturs

Mango para bistur

Esptula cuchara de acero inoxidable, grande

Ligas de cauchos

Tubos de PVC (L: 3 cm; D:1 pulg)

Condensador GRAHAM 24/40

Mangueras para condensador

Baln de destilacin (R: 250ml)

Ncleos de ebullicin de vidrio (D: 0,5 cm)

Probeta (R: 100 ml; Ap: 1 ml)

Manto calefactor de laboratorio

Equipo soxhlet:

Condensador ALLIHN

Cmara de extraccin (R:200ml)

Tubo sifonador

Baln destilacin (R:250ml)

 Mortero grande
4.3. Sustancias y Reactivos

Agua destilada H2O (l.)

Alcohol Etlico 96 % v/v C2H5OH (sol.)

Sulfato de Calcio p.a. CaSO4 (s.)
Metanol Grado H.P.L.C. CH3OH (l.)
Piridina p.a. C5H5N (l.)
Benceno p.a. C6H6 (l.)
Acetato de etilo 99.9 % v/v C4H8O2 (l.)
cido actico glacial CH3COOH (l.)
cido frmico p.a. CH2O2 (l.)

4.4. Microorganismo

Cepa del Hongo Pycnoporus sanguineus

4.5. Procedimiento
Separar los hongos por tiempo de vida aproximado

Secar los hongos a 30C por 5 das en un horno.

Desmenuzar los hongos con un bistur.

Pesar la cantidad de hongo, para obtener una relacin de 1:25 p/v (g/ml) con
el volumen de solvente.
Depositar los cuerpos fructferos en un cartucho hecho de papel filtro.

Agregar al baln, el solvente hasta las partes de su volumen y los ncleos

de ebullicin.
Proceder a calentar el solvente.

Tomar muestra en cada sifonacin, para determinar su concentracin y la

saturacin de solvente, mediante el uso del espectrofotmetro UV-VIS.
Seguir con el proceso de extraccin hasta que se agote el colorante o se sature
el solvente.
Eliminacin del solvente mediante evaporacin.

Secar y pesar el colorante.

4.5.1. Caracterizacin del colorante
 Preparar una solucin de 3 ml del extracto y 1 ml de una mezcla de metanol-
piridina (3:1).
Tomar una muestra de la solucin con la ayuda de tubo capilar, y tocar 3
veces la placa de TLC.
Colocar la placa de slica gel, dentro de un recipiente de vidrio a la que
previamente se aadi una mezcla constituida por benceno: acetato de etilo:
cido actico glacial:
cido frmico (12:6:1:1)
Dejar correr el eluyente y medir los frentes de retencin (Rf) de cada muestra
para identificar los compuestos coloreados presentes en los extractos,
revelados en luz UV.

5. Variable de respuesta
Cantidad de colorante obtenido
5.1. Posibles dificultades
No se conoce el tiempo verdadero de vida que tiene el hongo, solo un aproximado
que podra influir en la cantidad de colorante extrado. Este tipo de hongo es de
ambiente tropical pero por cambios climticos, estas especies tienden a adaptarse a
un nuevo medio, lo que provoca cambios en la forma y en su composicin qumica
6. Diagrama de flujo del procedimiento experimental
El siguiente diagrama, indica el procedimiento a tomar para la realizacin del
proyecto tanto para el solvente benceno.
7. Especificar el modelo matemtico

El modelo matemtico a usar es una anlisis de varianza (ANOVA) de dos factores con
replicas. Ya que en nuestro conjunto de pruebas de hiptesis se necesita analizar la
diferencia de medias que se basa en la comparacin de las variaciones producidas por el
error y variaciones producidas por el tipo de sepa de hongos Pycnoporus Sanguineus,
concentracin de solvente y tiempo de extraccin.por cada diseo experimental.
El modelo matemtico de un experimento factorial de tres factores con dos niveles

Hay dos niveles para el factor A ( tipo de sepa de hongos Pycnoporus Sanguineus ), dos
niveles del factor B (concentracin de solvente ) y dos niveles para el factor C (tiempo
de extraccin ) y que cada rplica del experimento contiene todas las posibles
combinaciones de tratamientos, se hizo una aleatorizacin de ( tipos de soxhlet )

8. Esquematizacin de los pasos del anlisis estadstico

8.1. Estimaciones a calcular
8.1.1. Cantidad de colorante natural extraido a partir del hongo Pycnoporus
Sanguineus
8.2. Intervalos de confianza
Intervalo de confianza al 95% para el diseo.
9. Bibliografa
9.1. ( NORMAS APA)
Alimentos y nutricin en la prctica sanitaria
Iciar Astiasarn 2003 dias de santos Espaa