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CDU 621.3:533.951(043)
via Skype
Agradecimentos
Primeiro de tudo, gostaria de agradecer ao meu orientador professor Dr. Franz Helmut Ne,
pela orientao, participao e pelos encaminhamentos efetivos ao trmino e apresenta-
o nal deste trabalho. Quando comecei a trabalhar no laboratrio de biossenores no
imaginava a quanto de experincia e conhecimento poderia adquirir. Com a orientao de
Helmut, comecei a aprender sobre o mundo da SPR e rapidamente quei fascinado. Serei
sempre grato pelo entusiasmo e perspectiva positiva que Helmut dava ao trabalho mesmo
diante de contratempos ocorridos durante o desenvolvimento do sensor.
Um agradecimento especial ao tambm orientador professor Dr. Antonio Marcus No-
gueira Lima, pela orientao, participao e sustentao acadmica ao longo deste perodo.
O prof. Antonio Marcus contribui e guiou os trabalhos para o desenvolvimento do sensor,
sempre buscando qualidade e excelncia nos resultados. Antonio Marcus ajudou bastante
para que eu melhorasse a redao e a apresentao de trabalhos cientcos.
A construo do sensor no seria possvel sem a colaborao do colega Dr. Cleumar
Moreira da Silva. Obrigado pelas inndveis discusses e pela elaborao conjunta dos
prismas polimricos aqui tratados.
Talvez eu no tivesse conhecido o mundo da SPR se no fosse a professora Dra. Fer-
nanda Ceclia. Fernanda obrigado pela conana em ter me convidado para trabalhar no
laboratrio de biossensores.
Aos colegas do Laboratrio de Biossensores (eBIO), particularmente me dirijo ao Dr.
Arlindo Garcia, Luis Hermano, Tiago de Sousa e Eduardo Gomes Pereira pelas conversas,
pelas contribuies imprescindveis quando do processo de construo e caracterizao dos
prismas e das tcnicas para extrao dos parmentros da curva SPR.
Agradeo aos meus pais Wilma Casemiro Oliveira e Manoel Vieira de Oliveira por sempre
estarem presentes, acreditando no meu potencial e investindo nos meus estudos... um beijo.
Um agradecimento especial a minha noiva Nvia Bit Saraiva por estar sempre presente
mesmo na distncia. Por seu apoio incondicional sempre serei grato.
Enm a todos aqueles que direta ou indiretamente contriburam para consecuo deste
trabalho. Serei sempre grato.
i
Resumo
Sensores baseados na ressonncia de plasmons de superfcie (SPR) foram construdos, ex-
plorando diferentes materiais para compor o arranjo multicamadas do tipo substrato/me-
tal/amostra. A denio do arranjo multicamadas de um sensor SPR fundamental pois
determina as condies para a construo do sensor, denindo os blocos funcionais que
o compem alm de ser responsvel pela transduo da interao molecular. O arranjo
multicamadas determina o ngulo de incidncia e o comprimento de onda da luz utilizada
para excitao dos plasmons na interface entre o metal e substncia em anlise (amostra).
Averiguou-se a qualidade da excitao dos plasmons de superfcie em lmes nos metlicos,
variando os materiais dos pares substrato/metal do arranjo multicamadas com estrutra de
Kretschmann. A caracterizao da resposta do sensor foi realizada usando o prisma p-
tico PPBIO, por sua estrutura trapezoidal que facilita a instrumentao ao evitar o uso de
partes mveis e/ou rotacionais. Prismas com os polmeros PC, PMMA, TOPAS e com o
vidro BK7 foram manufaturados. Os metais ouro (Au), prata (Ag), cobre (Cu) e alumnio
(Al) foram depositados nas superfcies de cada um dos prismas. Aspectos sobre a confec-
o dos prismas, deposio da camada metlica, montagem dos componentes e do software
para processamento da resposta do sensor foram apresentados. Experimentos com ligaes
reversveis e irreversveis no modo de interrogao angular e no modo de interrogao de
comprimento de onda foram realizados. Os resultados mostram que o arranjo composto do
par PC/Al no exibe boa resposta. Os arranjos com Ag e Cu formam facilmente camadas
de oxidao. A adsoro de protena mais acentuada em lmes de Au, moderada em lmes
de Ag e fraca/inexistente em lmes de Cu e Al. Os resultados obtidos atestam a viabilidade
da excitao dos plasmons de superfcie em sensores SPR a base do PPBIO, com limite de
deteco de ndice de refrao na ordem de 1106 RIU.
ii
Abstract
A sensor based on surface plasmon resonance (SPR) was developed, exploring dierent
materials to built the substrate/metal/sample multilayer arrangement type. The multilayer
arrangement denition of a SPR sensor is crucial because it determines the conditions
for sensor construction by setting its functional blocks, besides being responsible for the
molecular interaction transduction to be detected, and denes the incidence angle and
wavelength of the light used for plasmons excitation at the metal and analyte interface.
The quality of surface plasmons exitation in thin metal lms was investigated by changing
the materials of substrate/metal pairs of the multilayer arrangement with Kretschmann
structure. The sensor response characterization was performed using the optical prism
PPBIO due it's trapezoid structure that facilitates instrumentation, avoiding mobile and/or
rotational parts. Prisms with PC, PMMA and TOPAS polymers and glass BK7 were
manufactured. The metals gold (Au), silver (Ag), copper (Cu) and aluminum (Al) were
deposited on the top surfaces of the prisms. The prisms manufacture aspects, the metal
layer deposition, the assembly of components in the experimental set-up and details about
the software which processes the sensor response are presented. Experiments with reversible
and irreversible linkage in both angular and wavelength interrogation mode were performed.
The results show that the arrangement composed of PC/Al pair does not possess good
response. Arrangements with Ag and Cu easily form oxide layers. Protein adsorption is
more pronounced in Au lms, moderate in Ag lms and weak/absent in Cu and Al lm.
Moreover the results attest the feasibility of the surface plasmons excitation in PPBIO based
SPR sensors, with 1106 RIU on the order of refractive index limit of detection.
iii
Sumrio
1 Introduo 1
1.1 Objetivos e metodologia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5
1.2 Estrutura do documento . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7
v
Lista de Smbolos e Abreviaturas
DF Distncia focal
DP Densidade de pixel
AF Anlise de Fresnel
AF M Microscpio de fora-atmica
CI Caminho Inclinado
DN A cido desoxirribonucleico
EBR Abertura do Feixe de Luz
N P Nano-Partcula
OP Ponto de Operao
P C Policarbonato (polmero)
P M M A Polimetil-metacrilato (polmero)
SP Surface Plasmon
vii
SP R Surface Plasmon Resonance
T M Transverso-Magntico
viii
Lista de Tabelas
x
Lista de Figuras
Figura 1.1: Esquema indicando os elementos necessrios para um sensor SPR com
congurao ATR-Kretschmann. No exemplo, emprega-se um prisma
semi-cilndrico sobre o qual um substrato ptico no com uma na ca-
mada de metal depositada acoplado com o uso de um gel. A luz
incidente, aps interagir com os vrios materiais, capturada por um
componente fotossensvel (sensor de imagem). Esto indicados na gura
o campo evanescente (Eev. ) e os vetores de onda da luz incidente (kpx )
e dos SPs (kSP ). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5
xii
Figura 3.8: ndice de refrao em funo do comprimento de onda para diferen-
tes materiais usados como substrato dieltrico (TOPAS, PC, PMMA e
BK7s). nP C > nT OP AS > nBK7 > nP M M A . . . . . . . . . . . . . . . . . . 26
Figura 3.9: Grco para o Fator Q expresso em termos relao da 2r ()2 /2i ().
Prata, ouro, cobre e alumnio exibem regimes de baixas perdas no es-
pectro da luz visvel. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 27
Figura 3.10: Dependncia da funo dieltrica do metal para o comprimento de onda.
Observa-se diferena entre a CDF do Alumnio obtida por intermdio
da D.A. (linhas tracejadas) e da CDF determinada experimentalmente
(linhas slidas). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 28
Figura 3.11: Curva SPR para diferentes valores de comprimento de onda e de ngulo.
Interfaces a) Al/gua e b) Cu/gua. Acoplamento ptico para ngulos
maiores que 60 . Vistas: Reetividade x (esquerda), Reetividade x
x ngulo (direita) e ngulo x (subgrco) . . . . . . . . . . . . . . 30
Figura 3.12: Curva SPR para diferentes valores de comprimento de onda e de ngulo.
Interfaces a) Au/gua e b) Ag/gua. Acoplamento ptico para ngulos
maiores que 60 . Vistas: Reetividade x (esquerda), Reetividade x
x ngulo (direita) e ngulo x (subgrco) . . . . . . . . . . . . . . 31
Figura 3.13: Sensibilidade espectral em funo do ngulo de incidncia. Subgrco
para a sensibilidade espectral em funo do ndice de refrao para os
diversos ngulos. Os valores foram calculados para o par BK7/Ag. . . . 32
Figura 3.14: Funo dieltrica complexa do Al. Parte real e imaginria para dife-
rentes representaes. Ver-se que CDF experimental no aproximada
pela D.A. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 35
Figura 3.15: Variao da resposta SPR para diferentes representaes da funo di-
eltrica 2 () do alumnio. Curvas com e sem camada de oxidao. A
resposta experimental mais semelhante curva representada por Rakic
na presena de oxidao. Detalhe (subgrco em verde) para o perl
espectral da fonte de luz. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36
xiii
Figura 3.16: Curvas SPR no modo WIM para os substratos de BK7, TOPAS, PMMA
e PC. ngulos de incidncia xados em 58 ,63 ,68 ,71 e 75 para faixa
de comprimentos de onda de 400 nm < < 1400 nm. Resposta WIM
para lmes de alumnio com espessura de 20 nm em contato com gua
deionizada e desgaseicada. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37
Figura 3.17: Curvas SPR no modo AIM para os substratos de BK7, TOPAS, PMMA
e PC. Grcos para diferentes comprimentos de onda, indicados na -
gura, para faixa de ngulo de 50 < < 80 . Resposta AIM para lmes
de alumnio com 20 nm em contato com a gua deionizada e desgaseicada. 37
Figura 3.18: Curvas SPR no modo WIM para diferentes analitos no intervalo de
1,33 < n3 < 1,39. Substratos de BK7, TOPAS, PMMA e PC com
lmes de alumnnio de 20 nm de espessura. ngulo de incidncia xado
em 68 para faixa de comprimentos de onda de 400 nm < < 1400 nm. 38
Figura 3.19: Parmetros extrados das curvas SPR no modo WIM para lmes de Al.
a) Sensibilidade, b) Comprimento de onda de ressonncia e c) largura
da curva associada ao valor FWHM. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 38
Figura 3.20: Curvas SPR no modo AIM para diferentes analitos no intervalo de
1,33 < n3 < 1,39. Curvas com os comprimentos de onda xos nos
valores encontrados na simulao WIM (Sw em cores e Lw em tons de
cinza). Substratos de BK7, TOPAS, PMMA e PC com lmes de alum-
nio com espessura de 20 nm. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 39
Figura 3.21: Parmetros extrados das curvas SPR no modo AIM para lmes de Al.
a) Sensibilidade, b) ngulo de ressonncia e c) largura da curva associ-
ada ao valor FWHM. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 39
Figura 3.22: Reetividade-WIM (grcos superiores) e AIM (grcos inferiores) para
diferentes espessuras do lme de alumnio. Curvas SPRs para a multica-
mada composta por BK7/Al/analito, com as espessuras para os lmes
metlicos de 1, 10, 20, 30 e 40 nm. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 40
Figura 3.23: Parte real e imaginria para diferentes representaes da CDF do ouro.
Nota-se que a CDF experimental parcialmente aproximada pela D.A. 41
xiv
Figura 3.24: Curvas SPR no modo WIM para os substratos de BK7, TOPAS, PMMA
e PC. ngulos de incidncia xados em 58 ,63 ,68 ,71 e 75 para faixa
de comprimentos de onda de 400 nm < < 1400 nm. Resposta WIM
para lmes de ouro com espessura de 50 nm, em contato com gua
deionizada e desgaseicada. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 41
Figura 3.25: Curvas SPR no modo AIM para os substratos de BK7, TOPAS, PMMA
e PC. Grcos para diferentes comprimentos de onda, indicados na -
gura, para faixa de ngulo de 40 < < 80 . Resposta AIM para lmes
de ouro com 50 nm em contato com a gua deionizada e desgaseicada. 42
Figura 3.26: Curvas SPR no modo WIM para diferentes analitos no intervalo de
1,33 < n3 < 1,39. Substratos de BK7, TOPAS, PMMA e PC. ngulo
de incidncia xado em 68 para faixa de comprimentos de onda de
400 nm < < 1400 nm. O lme de ouro com espessura de 50 nm. . . . 42
Figura 3.27: Parmetros extrados das curvas SPR no modo WIM para lmes de Au.
a) Sensibilidade, b) Comprimento de onda de ressonncia e c) largura
da curva associada ao valor FWHM. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 43
Figura 3.28: Curvas SPR no modo AIM para diferentes analitos no intervalo de
1,33 < n3 < 1,39. Substratos de BK7, TOPAS, PMMA e PC com
lmes de ouro de 50 nm de espessura. Curvas com os comprimentos de
onda xos nos valores encontrados na simulao WIM. . . . . . . . . . . 43
Figura 3.29: Parmetros extrados das curvas SPR no modo AIM para lmes de Au.
a) Sensibilidade, b) ngulo de ressonncia e c) largura da curva associ-
ada ao valor FWHM. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 44
Figura 3.30: Reetividade-WIM (grcos superiores) e AIM (grcos inferiores) para
diferentes espessuras do lme de ouro. Curvas SPR para multicamada
composta por BK7/Au/analito, com as espessuras para os lmes met-
licos de 10, 30, 50, 70 e 90 nm. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 44
Figura 3.31: Funo dieltrica complexa do Cu. Parte real e imaginria para diferen-
tes representaes. Observa-se que a CDF experimental parcialmente
aproximada pela D.A. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 45
xv
Figura 3.32: Curvas SPR no modo WIM para os substratos de BK7, TOPAS, PMMA
e PC. ngulos de incidncia xados em 58 ,63 ,68 ,71 e 75 para faixa
de comprimentos de onda de 400 nm < < 1400 nm. Resposta WIM
para lmes de cobre com espessura de 40 nm em contato com gua
deionizada e desgaseicada. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 45
Figura 3.33: Curvas SPR no modo AIM para os substratos de BK7, TOPAS, PMMA
e PC. Grcos para diferentes comprimentos de onda, indicados na -
gura, para faixa de ngulo de 40 < < 80 . Resposta AIM para lmes
de cobre com 40 nm em contato com a gua deionizada e desgaseicada. 46
Figura 3.34: Curvas SPR no modo WIM para diferentes analitos no intervalo de
1,33 < n3 < 1,39. Substratos de BK7, TOPAS, PMMA e PC com
lmes de cobre de 40 nm de espessura. ngulo de incidncia xado em
68 para faixa de comprimentos de onda de 400 nm < < 1400 nm. . . 46
Figura 3.35: Parmetros extrados das curvas SPR no modo WIM para lmes de Cu.
a) Sensibilidade, b) Comprimento de onda de ressonncia e c) largura
da curva associada ao valor FWHM. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 47
Figura 3.36: Curvas SPR no modo AIM para diferentes analitos no intervalo de
1,33 < n3 < 1,39. Curvas com os comprimentos de onda xos nos
valores encontrados na simulao WIM. Substratos de BK7, TOPAS,
PMMA e PC com lmes de cobre de 40 nm de espessura. . . . . . . . . 47
Figura 3.37: Parmetros extrados das curvas SPR no modo AIM para lmes de Cu.
a) Sensibilidade, b) ngulo de ressonncia e c) largura da curva associ-
ada ao valor FWHM. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 48
Figura 3.38: Reetividade-WIM (grcos superiores) e AIM (grcos inferiores) para
diferentes espessuras do lme de cobre. Curvas SPRs para a multi-
camada composta por BK7/Cu/analito, com as espessuras dos lmes
metlicos de 10, 30, 40, 50 e 70 nm. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 48
Figura 3.39: Funo dieltrica complexa do Ag. Parte real e imaginria para dife-
rentes representaes. Ver-se que a CDF experimental parcialmente
aproximada pela D.A. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 49
xvi
Figura 3.40: Curvas SPR no modo WIM para os substratos de BK7, TOPAS, PMMA
e PC. ngulos de incidncia xados em 58 ,63 ,68 ,71 e 75 para faixa
de comprimentos de onda de 400 nm < < 1400 nm. Resposta WIM
para lmes de prata com 50 nm em contato com gua deionizada e
desgaseicada. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 49
Figura 3.41: Curvas SPR no modo AIM para os substratos de BK7, TOPAS, PMMA
e PC. Grcos para diferentes comprimentos de onda, indicados na -
gura, para faixa de ngulo de 40 < < 80 . Resposta AIM para lmes
de prata com 50 nm em contato com a gua deionizada e desgaseicada. 50
Figura 3.42: Curvas SPR no modo WIM para diferentes analitos no intervalo de
1,33 < n3 < 1,39. Substratos de BK7, TOPAS, PMMA e PC com
lmes de prata de 50 nm de espessura. ngulo de incidncia xado em
68 para faixa de comprimentos de onda de 400 nm < < 1400 nm.
Curvas para lmes de prata com espessuras de 50 nm. . . . . . . . . . . 51
Figura 3.43: Parmetros extrados das curvas SPR no modo WIM para lmes de Ag.
a) Sensibilidade, b) Comprimento de onda de ressonncia e c) largura
da curva associada ao valor FWHM. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 51
Figura 3.44: Curvas SPR no modo AIM para diferentes analitos no intervalo de
1,33 < n3 < 1,39. Curvas para os comprimentos de onda xos em
658 nm(BK7), 620 nm(TOPAS), 779 nm(PMMA) e 519 nm(PC) en-
contrados na simulao WIM, para lmes de prata com espessuras de
50 nm. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 52
Figura 3.45: Parmetros extrados das curvas SPR no modo AIM para lmes de Ag.
a) Sensibilidade, b) ngulo de ressonncia e c) largura da curva associ-
ada ao valor FWHM. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 52
Figura 3.46: Reetividade-WIM (grcos superiores) e AIM (grcos inferiores) para
diferentes espessuras do lme de prata. Curvas SPRs para a multi-
camada composta por BK7/Ag/analito, com as espessuras dos lmes
metlicos de 10, 30, 40, 50 e 70 nm. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 52
Figura 3.47: Detectividade no modo WIM para diferentes interfaces substrato/metal.
OP com ngulo xo em = 68 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 53
xvii
Figura 3.48: Diagrama de ptica geomtrica usado para o clculo do Campo de Viso
(FoV) do PPBIO. Esquema indicando distncias, ngulos e elementos
presentes no set-up AIM. Para o sensor SPR desenvolvido o valor de
FoV de 22,6 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 55
Figura 4.1: Moldes produzidos para fabricao do PPBIO. a) Molde com 3 cavidades
e b) Molde com 4 cavidades. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 58
Figura 4.2: Percentual de transmitncia (transparncia) para os prismas fabricados
com PC, PMMA, TOPAS e BK7. Dados obtidos com o espectrofot-
metro FENTO 800 XI. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 59
Figura 4.3: Esquema ilustrativo de uma luz polarizada atravessando um meio bir-
refringente e outro no birrefringente. As componentes extraordinria,
mais lenta (raioE ), e ordinria, mais rpida (raioO ), esto indicadas. . . 60
Figura 4.4: Esquema de um polariscpio. Atrs do prisma sob anlise h uma luz
no polarizada seguido de um polarizador e um plano de 1/4 de onda.
frente do prisma, outro polarizador (analisador) utilizado para analisar
a polarizao e um sensor de imagem captura o valor da intensidade. . . 62
Figura 4.5: a) Fotograa para prismas com [1]-[2]-[3] e sem [4]-[5]-[6] annealing, po-
lidos [3]-[4] e no polidos [1]-[2]-[5]-[6], todos fabricados com TOPAS e
usando o molde de 3 cavidades. b) Fotograa para prismas polimricos
fabricados com o molde de 4 cavidades e prisma de vidro BK7. Prismas
que passam pelo processo de injeo [PC]-[PMMA]-[TOPAS] possuem
stress enquanto o prisma vidro [BK7], fabricado de forma diferente,
ausente de stress. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 63
Figura 4.6: Curvas SPR para lme de prata depositado no substratos BK7, TOPAS,
PMMA e PC. Curvas tericas (linha tracejada) e experimentais (linha
slida). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 64
Figura 4.7: Curva SPR para prisma com (linha slida preta) e sem (linha slida
vermelha) anneling, e curva SPR terica (curva tracejada). A excitao
dos SP para prisma sem annealing ineciente. Exemplo da excitao
SP melhorada com o uso de annealing. . . . . . . . . . . . . . . . . . . 64
xviii
Figura 4.8: a) Perl espectral para a fonte de luz usada no modo WIM. A linha
tracejada a resposta obtida antes do polimento. b) Perl da fonte
de luz usada no modo AIM. A linha tracejada a resposta obtida com
prismas no polidos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 65
Figura 4.9: Exemplos de prisma de PC aps a deposio do metais a) Al, b) Ag, c)
Cu e d) Au. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 66
Figura 4.10: Anlise da superfcie metlica de ouro, depositada em um prisma manu-
faturado com TOPAS. Imagens (2D e 3D) obtidas com um AFM para
superfcie de Au. Grcos para distribuio de altura nos intervalos A-
B e C-D. Resumo dos parmetros e grcos relativos rugossidade da
superfcie extrados com o software Gwyddion. . . . . . . . . . . . . . 67
Figura 4.11: a) Diagrama de blocos de biossensor baseado na ressonncia de plasmons
de superfcie o qual compreende 4 subsistemas diferentes: Microudico,
ptico, Estrutura Multicamadas e UACPE. Disposio dos elementos
que excitam o fenmeno SPR usando o PPBIO. Montagem para o b)
modo de interrogao espectral e c) para o modo de interrogao angu-
lar. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 68
Figura 4.12: Fotograa da montagem experimental para os componentes do diagrama
ilustrado na Fig.4.11, apresentando a disposio dos elementos que ex-
citam o fenmeno SPR usando o PPBIO. a) Montagem para o modo de
interrogao espectral, em que uma luz branca atravessa uma lente co-
limadora e um polarizador at atingir o prisma; a luz reetida na outra
extremidade do prisma passa por uma bra ptica at ser captura por
um espectrmetro. b) Montagem para o modo de interrogao angular,
com utilizao de lente cilndrica para focalizao do espectro da fonte
de luz quase monocromtica; a luz reetida pelo PBBIO atingi um es-
pelho antes de ser capturada por uma cmera empregada como detector
ptico. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 71
Figura 4.13: Imagem de pea impressa em impressora 3D para encaixe do prisma e
da bra ptica na montagem para o modo de interrogao espectral.
Pea de polmero ABS (Acrilonitrila Butadieno Estireno). . . . . . . . 72
xix
Figura 5.1: Curvas SPRs tericas e experimentais para lmes de prata com 50 nm
de espessura, depositado nos substratos BK7, TOPAS, PMMA e PC nos
modos WIM (os quatro grcos superirores) e AIM (os quatro grcos
inferiores). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 79
Figura 5.2: Curvas SPRs tericas e experimentais para lmes de ouro com 50 nm
de espessura, depositado nos substratos BK7, TOPAS, PMMA e PC nos
modos WIM (superior) e AIM (inferior). . . . . . . . . . . . . . . . . . 79
Figura 5.3: Curvas SPRs tericas e experimentais para lmes de cobre com 40 nm
de espessura, depositado nos substratos BK7, TOPAS, PMMA e PC nos
modos WIM (superior) e AIM (inferior). . . . . . . . . . . . . . . . . . 81
Figura 5.4: Curvas SPRs tericas e experimentais para lmes de alumnio com 20
nm de espessura, depositado nos substratos BK7, TOPAS, PMMA e PC
nos modos WIM (superior) e AIM (inferior). . . . . . . . . . . . . . . . 81
Figura 5.5: Exemplo de um sensorgrama para o ciclo H2 O BSA H2 O
Hypo. H2 O. Destaque para as fases de um sensorgrama: linha base,
adsoro, monolayer, dissociao, lavagem e regenerao. . . . . . . . . 83
Figura 5.6: Sensorgramas obtidos nos modos AIM (verde) e WIM (azul) para R
(verde superior), n3 (R ) (verde inferior), R (azul superior) e n3 (R )
(azul inferior) para lme de prata depositado no substrato BK7. Al-
goritmos de deteco do valor mnimo, multicamada, comprimento de
onda, ngulo e substncias indicados na gura. Experimento reali-
zado primeiro no modo WIM, em seguida, o mesmo prisma utilizado
no modo AIM. Ciclo experimental iniciando com H2 O, depois Etanol
de alta-concentrao, retorno para H2 O, em seguida Etanol de baixa-
concentrao e retorno para H2 O; por m soluo de BSA, remoo de
excesso com H2 O, limpeza com Etanol e retorno para H2 O. . . . . . . . 84
Figura 5.7: Sensorgramas obtidos nos modos AIM (verde) e WIM (azul) para R
(verde superior), n3 (R ) (verde inferior), R (azul superior) e n3 (R )
(azul inferior) para lme de prata depositado no substrato TOPAS. . 86
xx
Figura 5.8: Sensorgramas obtidos nos modos AIM (verde) e WIM (azul) para R
(verde superior), n3 (R ) (verde inferior), R (azul superior) e n3 (R )
(azul inferior) para lme de prata depositado no substrato PMMA.
Algoritmos de deteco do valor mnimo, multicamada, comprimento
de onda, ngulo e substncias indicados na gura. Experimento reali-
zado primeiro no modo WIM, em seguida, o mesmo prisma utilizado
no modo AIM. Ciclo experimental iniciando com H2 O, depois Etanol
de alta-concentrao, retorno para H2 O, em seguida Etanol de baixa-
concentrao e retorno para H2 O; por m soluo de BSA, remoo de
excesso com H2 O, limpeza com Etanol e retorno para H2 O. . . . . . . . 87
Figura 5.9: Sensorgramas obtidos nos modos AIM (verde) e WIM (azul) para R
(verde superior), n3 (R ) (verde inferior), R (azul superior) e n3 (R )
(azul inferior) para lme de prata depositado no substrato PC. Al-
goritmos de deteco do valor mnimo, multicamada, comprimento de
onda, ngulo e substncias indicados na gura. Experimento reali-
zado primeiro no modo WIM, em seguida, o mesmo prisma utilizado
no modo AIM. Ciclo experimental iniciando com H2 O, depois Etanol
de alta-concentrao, retorno para H2 O, em seguida Etanol de baixa-
concentrao e retorno para H2 O; por m soluo de BSA, remoo de
excesso com H2 O, limpeza com Etanol e retorno para H2 O. . . . . . . 88
Figura 5.10: Sensorgramas obtidos nos modos AIM (verde) e WIM (azul) para R
(verde superior), n3 (R ) (verde inferior), R (azul superior) e n3 (R )
(azul inferior) para lme de ouro depositado no substratos BK7. Al-
goritmos de deteco do valor mnimo, multicamada, comprimento de
onda, ngulo e substncias indicados na gura. Experimento realizado
primeiro no modo WIM, em seguida, o mesmo prisma utilizado no
modo AIM. Ciclo experimental iniciando com H2 O, depois Hypo., re-
torno para H2 O; em seguida P BS e retorno para H2 O; por m soluo
de BSA, remoo de excesso com H2 O, limpeza com Hypo e retorno
para H2 O. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 90
xxi
Figura 5.11: Sensorgramas obtidos nos modos AIM (verde) e WIM (azul) para R
(verde superior), n3 (R ) (verde inferior), R (azul superior) e n3 (R )
(azul inferior) para lme de ouro depositado no substrato TOPAS. Al-
goritmos de deteco do valor mnimo, multicamada, comprimento de
onda, ngulo e substncias indicados na gura. Experimento realizado
primeiro no modo WIM, em seguida, o mesmo prisma utilizado no
modo AIM. Ciclo experimental iniciando com H2 O, depois Hypo., re-
torno para H2 O; em seguida P BS e retorno para H2 O; por m soluo
de BSA, remoo de excesso com H2 O, limpeza com Hypo e retorno
para H2 O. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 91
Figura 5.12: Sensorgramas obtidos nos modos AIM (verde) e WIM (azul) para R
(verde superior), n3 (R ) (verde inferior), R (azul superior) e n3 (R )
(azul inferior) para lme de ouro depositado no substrato PMMA. Al-
goritmos de deteco do valor mnimo, multicamada, comprimento de
onda, ngulo e substncias indicados na gura. Experimento realizado
primeiro no modo WIM, em seguida, o mesmo prisma utilizado no
modo AIM. Ciclo experimental iniciando com H2 O, depois Hypo., re-
torno para H2 O; em seguida P BS e retorno para H2 O; por m soluo
de BSA, remoo de excesso com H2 O, limpeza com Hypo e retorno
para H2 O. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 92
Figura 5.13: Sensorgramas obtidos nos modos AIM (verde) e WIM (azul) para R
(verde superior), n3 (R ) (verde inferior), R (azul superior) e n3 (R )
(azul inferior) para lme de ouro depositado no substrato PC. Algorit-
mos de deteco do valor mnimo, multicamada, comprimento de onda,
ngulo e substncias indicados na gura. Experimento realizado pri-
meiro no modo WIM, em seguida, o mesmo prisma utilizado no modo
AIM. Ciclo experimental iniciando com H2 O, depois Hypo., retorno para
H2 O; em seguida P BS e retorno para H2 O; por m soluo de BSA,
remoo de excesso com H2 O, limpeza com Hypo e retorno para H2 O. . 93
xxii
Figura 5.14: Sensorgramas obtidos nos modos AIM (verde) e WIM (azul) para R
(verde superior), n3 (R ) (verde inferior), R (azul superior) e n3 (R )
(azul inferior) para lme de cobre depositado no substratos BK7. Al-
goritmos de deteco do valor mnimo, multicamada, comprimento de
onda, ngulo e substncias indicados na gura. Experimento reali-
zado primeiro no modo WIM, em seguida, o mesmo prisma utilizado
no modo AIM. Ciclo experimental iniciando com H2 O, depois Etanol
de alta-concentrao, retorno para H2 O, em seguida Etanol de baixa-
concentrao e retorno para H2 O; por m soluo de BSA, remoo de
excesso com H2 O, limpeza com Etanol e retorno para H2 O. . . . . . . . 95
Figura 5.15: Sensorgramas obtidos nos modos AIM (verde) e WIM (azul) para R
(verde superior), n3 (R ) (verde inferior), R (azul superior) e n3 (R )
(azul inferior) para lme de cobre depositado no substrato TOPAS.
Algoritmos de deteco do valor mnimo, multicamada, comprimento
de onda, ngulo e substncias indicados na gura. Experimento reali-
zado primeiro no modo WIM, em seguida, o mesmo prisma utilizado
no modo AIM. Ciclo experimental iniciando com H2 O, depois Etanol
de alta-concentrao, retorno para H2 O, em seguida Etanol de baixa-
concentrao e retorno para H2 O; por m soluo de BSA, remoo de
excesso com H2 O, limpeza com Etanol e retorno para H2 O. . . . . . . . 96
Figura 5.16: Sensorgramas obtidos nos modos AIM (verde) e WIM (azul) para R
(verde superior), n3 (R ) (verde inferior), R (azul superior) e n3 (R )
(azul inferior) para lme de cobre depositado no substrato PMMA.
Algoritmos de deteco do valor mnimo, multicamada, comprimento
de onda, ngulo e substncias indicados na gura. Experimento reali-
zado primeiro no modo WIM, em seguida, o mesmo prisma utilizado
no modo AIM. Ciclo experimental iniciando com H2 O, depois Etanol
de alta-concentrao, retorno para H2 O, em seguida Etanol de baixa-
concentrao e retorno para H2 O; por m soluo de BSA, remoo de
excesso com H2 O, limpeza com Etanol e retorno para H2 O. . . . . . . 97
xxiii
Figura 5.17: Sensorgramas obtidos nos modos AIM (verde) e WIM (azul) para R
(verde superior), n3 (R ) (verde inferior), R (azul superior) e n3 (R )
(azul inferior) para lme de cobre depositado no substrato PC. Al-
goritmos de deteco do valor mnimo, multicamada, comprimento de
onda, ngulo e substncias indicados na gura. Experimento reali-
zado primeiro no modo WIM, em seguida, o mesmo prisma utilizado
no modo AIM. Ciclo experimental iniciando com H2 O, depois Etanol
de alta-concentrao, retorno para H2 O, em seguida Etanol de baixa-
concentrao e retorno para H2 O; por m soluo de BSA, remoo de
excesso com H2 O, limpeza com Etanol e retorno para H2 O. . . . . . . . 98
Figura 5.18: Sensorgramas obtidos nos modos AIM (verde) e WIM (azul) para R
(verde superior), n3 (R ) (verde inferior), R (azul superior) e n3 (R )
(azul inferior) para lme de alumnio depositado no substrato BK7.
Algoritmos de deteco do valor mnimo, multicamada, comprimento
de onda, ngulo e substncias indicados na gura. Experimento reali-
zado primeiro no modo WIM, em seguida, o mesmo prisma utilizado
no modo AIM. Ciclo experimental iniciando com H2 O, depois Etanol
de alta-concentrao, retorno para H2 O, em seguida Etanol de baixa-
concentrao e retorno para H2 O; por m soluo de BSA, remoo de
excesso com H2 O, limpeza com Etanol e retorno para H2 O. . . . . . . . 100
Figura 5.19: Sensorgramas obtidos nos modos AIM (verde) e WIM (azul) para R
(verde superior), n3 (R ) (verde inferior), R (azul superior) e n3 (R )
(azul inferior) para lme de alumnio depositado no substrato TOPAS.
Algoritmos de deteco do valor mnimo, multicamada, comprimento
de onda, ngulo e substncias indicados na gura. Experimento reali-
zado primeiro no modo WIM, em seguida, o mesmo prisma utilizado
no modo AIM. Ciclo experimental iniciando com H2 O, depois Etanol
de alta-concentrao, retorno para H2 O, em seguida Etanol de baixa-
concentrao e retorno para H2 O; por m soluo de BSA, remoo de
excesso com H2 O, limpeza com Etanol e retorno para H2 O. . . . . . . . 101
xxiv
Figura 5.20: Sensorgramas obtidos nos modos AIM (verde) e WIM (azul) para R
(verde superior), n3 (R ) (verde inferior), R (azul superior) e n3 (R )
(azul inferior) para lme de alumnio depositado no substrato PMMA.
Algoritmos de deteco do valor mnimo, multicamada, comprimento
de onda, ngulo e substncias indicados na gura. Experimento reali-
zado primeiro no modo WIM, em seguida, o mesmo prisma utilizado
no modo AIM. Ciclo experimental iniciando com H2 O, depois Etanol
de alta-concentrao, retorno para H2 O, em seguida Etanol de baixa-
concentrao e retorno para H2 O; por m soluo de BSA, remoo de
excesso com H2 O, limpeza com Etanol e retorno para H2 O. . . . . . . . 102
Figura 5.21: Sensorgrama no modo WIM (azul) para R (azul superior) e n3 (R )
(azul inferior) para lme de alumnio depositado no substrato PC.
Algoritmos de deteco do valor mnimo, multicamada, comprimento
de onda, ngulo e substncias indicados na gura. . . . . . . . . . . . . 103
Figura 6.1: Classicao dos trs modos de excitao (LSPR, SPR e LSPP) dos
plasmons de superfcie em funo do valor de S e do comprimento de
propagao dos SP. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 105
Figura 6.2: Geometria alternativa para PPBIO. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 108
Figura 6.3: Ilustrao que exemplica a alterao no padro de deposio da camada
metlica na superfcie do PPBIO. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 108
Figura A.1: Estrutura de uma mquina de moldagem por injeo. Os valores re-
presentados na imagem para o TOPAS 5013 so: TF = 100 C, T1 =
230 260 C, T2 = 240 260 C, T3 = 250 280 C, T4 = 260 290 C e
TN = TM = 240 300 C. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 110
Figura A.2: Imagem tridimensional ilustrando todas as partes (placas, postio e de-
mais itens) que compem o molde. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 112
Figura A.3: Exemplo de curvas SPRs com (BK7-Ag-Etanol, BK7-Au e TOPAS-Au)
e sem (BK7-Ag-H2 O e TOPAS-Ag) excitao simultnea dos plasmons
de superfcie e dos plasmons-radiativos. Detalhe para as superfcies de
prisma de BK7 (mais arranhes) e de TOPAS (menos arranhes). . . . 113
xxv
Figura A.4: Resumo dos valores de sensibilidade e detectividade tericos e experi-
mentais para os modos AIM e WIM. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 114
Figura B.1: Esquema para um sistema de deposio por magnetron sputtering. . . . 116
Figura B.2: Curva de calibrao da espessura do lme no depositado no PPBIO
usando os magnetrons AC e DC. O modo DC mais eciente do que o
modo AC por depositar mais material em menos tempo. . . . . . . . . . 116
Figura B.3: Esquema para um sistema de deposio atravs da evaporao por feixe
de eltrons (e-beam ). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 117
xxvi
Captulo 1
Introduo
Figura 1.1: Esquema indicando os elementos necessrios para um sensor SPR com congu-
rao ATR-Kretschmann. No exemplo, emprega-se um prisma semi-cilndrico sobre o qual
um substrato ptico no com uma na camada de metal depositada acoplado com o uso
de um gel. A luz incidente, aps interagir com os vrios materiais, capturada por um com-
ponente fotossensvel (sensor de imagem). Esto indicados na gura o campo evanescente
(Eev. ) e os vetores de onda da luz incidente (kpx ) e dos SPs (kSP ).
cor, uorescncia ou molcula rdio-ativa como marcador para obteno da resposta, que
podem interferir no evento sob anlise.
AIM e WIM foi desenvolvido para coleta, processamento e anlise das respostas SPR. A
Anlise de Fresnel (AF) empregada para determinar o Ponto de Operao (OP) de cada
arranjo substrato/metal utilizado. A AF fornece a resposta espectral da SPP, com a qual
foi possvel determinar a fonte de luz necessria para excitao dos plasmons de superfcie.
Todavia, a determinao das propriedades pticas dos metais e substratos, as quais so
dependentes do comprimento de onda, deve ser realizado para corretude da AF, e assim,
determinar quais arranjos e em que condies possuem boa resposta SPR.
A caracterizao da resposta SPR para cada combinao substrato/metal presente na
estrutura multicamadas foi realizada de acordo com os seguintes parmetros: faixa de ngulo
de incidncia, faixa de comprimento de onda, espessura do metal, substrato ptico, faixa de
resposta dinmica, sensibilidade, detectividade, pofundidade/contraste e largura da curva
SPR. Tais informaes so essenciais para a construo de um sensor SPR e posterior uso
em aplicaes baseadas na ressonncia de plasmons de superfcie.
Devido a facilidades de instrumentao e possibilidade de operar em ambos os modos,
o PPBIO (Prisma Polimrico para aplicao BIOlgicas) [20] foi utilizado. Novos prismas
foram manufaturados com os substratos escolhidos para caracterizao da resposta SPR.
As principais tarefas que envolvem a confeco do PPBIO so a construo do molde, a
deposio do metal e os processos de polimento e recozimento. Para os pontos de operao
determinados pela AF, a excitao dos SPs nos modos angular e espectral exigem ins-
trumentaes diferentes, com hardwares especcos. Dessa forma, cdigos computacionais
diferentes (um para cada modo) tiveram que ser desenvolvidos para a correta comunicao
com os sensores de imagem e os respectivos componentes de hardware utilizados.
Os sensores SPR desenvolvidos foram testados em diferentes tipos de aplicaes. Os
resultados experimentais dos parmetros para caracterizao so apresentados. A sensibili-
dade instrumental calculada para diferentes tipos de substncias em ensaios com ligaes
reversveis e irreversveis. Os resultados dos diferentes experimentos foram comparados com
modelo utilizado na AF.
Os resultados experimentais e interpretaes so discutidos em termos de trabalhos
futuros e potenciais melhorias. A caracterizao da resposta nos modos AIM e WIM tambm
explorada para otimizao do design do PPBIO.
Captulo 1. Introduo 7
A excitao ptica dos plasmons de superfcie em lmes nos metlicos um fenmeno fsico
cienticamente e tecnologicamente til para o design e confeco de sensores pticos para
uma variedade de aplicaes bio-fsico-qumicas.
Da constatao da existncia dos plasmons de superfcie, apresentados na Roma antiga
atravs do copo de Licurgo [21], at o surgimento dos imunosensores SPR [22] - biossensores
SPR em que um anticorpo usado como elemento de biorreconhecimento, muito trabalho
foi desenvolvido.
A primeira observao dos SPs ocorreu em 1902 quando R.W. Wood percebeu linhas
escuras no espectro de difrao ao incidir uma luz policromtica em grades de difrao me-
tlica [23], fenmeno que posteriormente seria explicado por Ritchie em termos da SPR [24].
Nos anos 60, Kretschmann e Raether [25] e Andreas Otto [26] demonstraram a existncia
do efeito SPR pelo processo da atenuao da reexo interna total da luz (ATR), ao incidir
um feixe luminoso em um prisma acoplado a uma superfcie metlica. Otto props uma
congurao na qual o lme metlico separado do prisma por uma distncia da ordem do
comprimento de onda da luz incidente. Kretschmann utilizou uma congurao em que o
metal depositado diretamente sobre o prisma, tornando menos complexa a instrumenta-
o do sensor e a troca da amostra sob anlise. Mais tarde, foram apresentados o uso da
ressonncia de plasmon de superfcie em aplicaes com os moldes de um biossensor [27, 28].
Captulo 2. Fundamentao Terica para sensores SPR 9
As propriedades pticas dos metais so descritas pela denominada funo dieltrica com-
plexa (CDF), da forma 2 () = 2r () + i2i (), a qual pode ser explicada pelo modelo do
gs de eltrons livres proposto por Paul Drude [29]:
c 2
2 () = 1 (2.1)
2p (c + j)
1 vf
= (2.3)
c 2cRbulk
em que Q representa a concentrao dos eltrons livres, m e e representam a massa e a
carga do eltron, 0 a permissividade eltrica no vcuo, c expressa a velocidade da luz,
Rbulk representa o caminho livre mdio dos eltrons de conduo e vf a velocidade dos
eltrons na energia de Fermi.
A quantizao da oscilao dos eltrons livres denominada de plasmons. Quando estes
ocorrem ao longo da superfcie de um metal so ento chamados de plasmons de superfcie
(SP). Como mencionado anteriormente, os plasmons de superfcie so sensveis radiao
de entrada e a injeo de eltrons ou ftons utilizada para a excitao dos SPs. Para o caso
da injeo de feixes luminosos, mtodo utilizado neste trabalho, um Sistema Multicamadas
(arranjo multimacadas) para a estrutura ATR-Kretschmann ilustrado em detalhes na
Figura 2.1.
Captulo 2. Fundamentao Terica para sensores SPR 10
kx
Ez2 = Ex2 (2.6)
kz2
kx
Ez3 = Ex3 . (2.7)
kz3
A relao entre Hy e Ex pode ser obtida com a equao de Maxwell E = tH (Lei
de Faraday), que para o caso de = 0 obtm-se [31]:
1/2
2 3
kx = k0 (2.12)
2 + 3
1/2
2j
kjz = k0 (2.13)
2 + 3
em que (2.13) orientada ao meio, com j referindo-se a permissividade do metal (j = 2)
ou da amostra (j = 3).
Levando em considerao a permissividade complexa do metal, chega-se aps alguns
rearranjos matemticos a expresso complexa para o vetor dos plasmons de superfcie (kSP =
0
kSP 00
ikSP ):
1/2
2r 3
0
kSP k0 (2.14)
2r + 3
2i 3
00
kSP 0
kSP (2.15)
22r (2r + 3 )
O acoplamento ptico que d origem a SPP ocorre quando a componente horizontal da
luz p-polarizada incidente (kpx ), expressa por kpx = k0 1 sen(1 ), e o vetor dos plasmons
de superfcie (kSP ) oscilam na mesma frequncia e amplitude. Em geral, kSP
00
negligen-
ciado pelo fato de 2i apresentar magnitude numrica muito pequena (kSP
00
0) na faixa
de comprimento de onda utilizado em aplicaes SPR (tipicamente: 400< <1000 nm).
Assim, a SPP pode ser aproximada por:
r
2 3
k0 = k0 1 sen (i ) . (2.16)
2 + 3 | {z }
| {z } kpx
kSP
Figura 2.2: Disperso dos SP (E(kSP )) em uma interface metal-H2 O, com indicao das
regies SPP, QB e RPP. Disperso dos ftons (E(kpx )) com ngulo de incidncia de 75 , no
vcuo e em substrato de sara. A interseo das curvas (acoplamento ptico) representa a
situao em que ocorre a ressonncia.
Captulo 2. Fundamentao Terica para sensores SPR 14
em que Hyj
0
e Exj
0
so as amplitudes de Hyj e Exj , respectivamente, calculados no limite z
da camada j . Mj a matriz de transferncia que descreve a transferncia de propagao do
meio j para o meio j + 1, denida por:
cosj qij senj
Mj = (2.18)
iqj senj cosj
q
a qual depende das propriedades pticas de absorbncia j = k0 dj n2j (n1 sen(1 ))2 e
q
admitncia qj = n2j (n1 sen(1 ))2 /n2j de cada meio, alm da espessura (dj ) e ndice de
refrao (nj ), ou permissividade (j ), do mesmo.
As amplitudes dos campos da primeira at a N-sima camada so expressas pela matriz
de transferncia total, Mtot , calculada em funo da matriz de transferncia individual Mj
Captulo 2. Fundamentao Terica para sensores SPR 15
Figura 2.3: Exemplo de curva para a SPR obtida atravs da Anlise de Fresnel. A variao
de R1 para R2 no modo WIM, ou de R1 para R2 no modo AIM, indica uma alterao no
ndice de refrao da amostra.
Captulo 4, bem como conceitos relativos a deposio de lmes nos; e aspectos relativos
ao processamento de sinal e de imagem sero discutidos no Captulo 5.
2.3 Resumo
Neste captulo apresentou-se as formulaes matemticas para a excitao dos SPs. Partindo
das expresses para os campos e eltricos e magnticos de uma onda eletromagntica do tipo-
p, apresentou-se as condies para existncia dos plasmons de superfcie. Posteriormente,
as equaes de disperso para o vetor dos SPs, suas componentes normal e tangencial e
suas partes real e imaginria foram apresentados. Para o caso de uma nica interface, a
condio para ocorrncia da SPP pode ser aproximada com a igualdade entre os vetores kSP
e kpx . Para o sistema com mltiplas interfaces, a ocorrncia da SPP melhor representada
computando a inuncia de cada meio na interao-luz matria atravs das equaes de
Fresnel. A curva SPR foi apresentada, bem como alguns parmetros que podem ser extrados
da curva. Para maiores detalhes, indicam-se as referncias [14, 32, 34]. Para o fenmeno da
SPP de longo-alcance (LRSPP) indicamos ao leitor consultar as referncias [32, 33, 39, 40].
Sobre a ressonncia de plasmons localizada em nano-partculas (LSPR), ver [2, 4144].
Captulo 3
Os sensores SPR foram desenvolvidos com base no PPBIO [20]. Devido principalmente
a sua geometria trapezoidal, o PPBIO torna menos dispendiosa a instrumentao de um
dispositivo SPR por evitar partes mveis e/ou rotacionais. Suas superfcies laterais so
espelhadas para que haja a reexo da luz incidente. Esse prisma possui uma na camada
metlica depositada na base superior, evitando o uso de leo/gel para acoplamento da
superfcie metlica.
A Figura 3.1 apresenta as etapas da metodologia para construo do sensor SPR uti-
lizando o PPBIO. A metodologia pode ser dividida em duas etapas: uma composta pelo
estudo computacional sobre os efeitos da multicamada na resposta e geometria do prisma e
outra com o objetivo de manufaturar o sensor. A caracterizao do transdutor SPR consiste
no Ramo ptico da metodologia e a construo do transdutor engloba o Ramo Mecnico.
Em ambas as etapas, as decises de projeto dependem da escolha do material para a fa-
bricao da geometria do prisma - primeira camada do Sistema Multicamadas (ver Figura
2.1) e do metal a ser depositado sobre a superfcie do prisma, segunda camada da estrutura
multicamadas.
O design do prisma parte das informaes sobre o tamanho e focalizao dos feixes luminosos
descritas na patente de Thirstrup et al. [45]. A partir da patente possvel obter as
Captulo 3. Projeto do transdutor SPR 19
Figura 3.1: Etapas da metodologia para construo do sensor SPR utilizando o PPBIO.
Aps a manufatura do prisma as escolhas feitas em cada etapa so avaliadas e a anlise de
sensibilidade verica a qualidade nal do sensor.
Figura 3.2: Prisma polimrico desenvolvido por Moreira. Os valores utilizados no projeto
foram: h =3 mm, L =26,72 mm, l =17,84 mm, =34 , =68 com foco ocorrendo no
ponto A(10,2,9) mm. Fonte [20].
contrapartida, tal estrutura propicia ao feixe luminoso sofrer um desvio maior do que soferia
com as lentes integradas. Assim, dependendo do comprimento focal e das caractersticas
da lente a ser utilizada, a ocorrncia de RIT e a incidncia dos feixes luminosos na regio
sensvel pode ser comprometida.
O design com lentes externas foi estudado e implementado por Moreira [20]. De incio,
vericou-se o dimensionamento do prisma (Figura 3.2). Este deve assumir uma forma
trapezoidal devido necessidade de se ter duas superfcies paralelas que permitissem um
caminho ptico dos raios luminosos, raios estes que chegam e saem perpendicular base
inferior do prisma, garantindo assim, uma maior facilidade de instrumentao. A distncia
entre essas supercies paralelas, a altura do prisma (h), no deve exceder 3 mm. Com esse
dado em mos, h =3 mm, e do fato de que o ngulo de inclinao das paredes laterais ()
metade do ngulo de incidncia na superfcie de medio (), = /2, possvel formalizar
as dimenses do prisma segundo as equaes abaixo:
h 1 h 1
l=2 + + htan(2) (3.1)
2 tan() 2 tan(90 )
3
L= 1 (3.2)
tan()
No projeto implementado por Moreira [20] apenas uma lente foi utilizada, sendo esta
colocada junto aos feixes de entrada no prisma. Investigou-se o caminho ptico percorrido
pela luz, com origem na fonte luminosa e trmino ao atingir o sensor de imagem, usado
no conjunto nal que compe a instrumentao do sensor SPR baseado no prisma. A
distncia em que a lente se encontra da base inferior do prisma (T), o raio de curvatura
Captulo 3. Projeto do transdutor SPR 21
Figura 3.3: Condicionantes operacionais para a lente cilndrica utilizada para focalizar os
feixes luminosos. Os valores utilizados no projeto foram: T=5 mm, R=11,2 mm, J=3,9 mm
e EBR=0,5 mm. A distncia focal (f) da lente utilizada de 20 mm para =587,6 nm.
(R), sua espessura (J) e sua distncia focal (f), ilustradas Figura 3.3, foram investigados.
Para o modo AIM os valores ideais encontrados foram: T=5 mm, R=11,2 mm, J=3,9 mm
e f=15 mm. No modo WIM investigou-se apenas a abertura do feixe de luz (EBR), onde
se concluiu que quanto maior o valor de EBR maior ser o foco no centro da superfcie de
medio.
Figura 3.4: Caminho ptico detalhado percorrido pelos feixes luminosos. Detalhe (em
azul) para a distncia percorrida (D) da base inferior at atingir o ponto focal (X4). Os
valores dos parmetros representados na imagem so: F=5,36 mm, DX2_min =9,66 mm,
DX2_max =12,62 mm, h0 =0,5-2,5 mm. Para L, l, e os valores so os mesmos apresentados
na Figura 3.2.
equao [34]: s 2
D(1 + T )
a(X2) = (1 + T ) 1 + , (3.3)
n X2
em que representa o coeciente trmico de expanso do prisma, T a variao de
temperatura e D a altura do prisma adicionado altura do ponto X2 (h0 ) (distncia
percorrida dentro do prisma) e DX2_min e DX2_max representam as distncias da entrada
no prisma, do primeiro e do ltimo feixe de luz, at o ponto X4.
O efeito da temperatura no caminho ptico ideal dos feixes de luz pode ser computado
calculando a posio focal [34]
D(1 + T )
X4 = X2 s 2 , (3.4)
n1 (1+T )
1
a(X2)
2D(1 + T )
X6 = X2 s 2 . (3.5)
n1 (1+T )
1
a(X2)
Captulo 3. Projeto do transdutor SPR 24
Figura 3.7: a) Variao da espessura do foco em funo da posio de entrada para dife-
rentes temperaturas b) Ilustrao do comportamento do foco nos modos AIM e WIM com
o aumento da temperatura (vista superior do prisma).
Essa faixa angular utilizada na denio do ponto de operao para o par substrato/metal,
orientando o alinhamento geomtrico da montagem do sensor e na relao pixel vs. ngulo.
B1 2 B2 2 B3 2
2
n () = 1 + + + , (3.7)
2 C 1 2 C 2 2 C3
em que os coecientes Bi e Ci , com i=1,2 e 3, variam com o tipo de material. A Figura 3.8
apresenta a relao de Sellmeier para alguns substratos pticos, todos possveis de serem
utilizados para fabricao do prisma.
O ndice de refrao dos vidros/polmeros no somente dependente do comprimento de
onda, mas tambm depende da temperatura. A relao entre a variao do ndice de refrao
para a variao de temperatura, denotado por coeciente de temperatura de variao do
ndice de refrao (ou a taxa de variao do ndice de refrao, ) expresso por [49]:
n2 (,T0 ) 1
dn(,T ) E0 + 2E1 T
= 2
D0 + eD1 T + 3D2 T + , (3.8)
dT 2n(,T0 ) 2 2T K
Figura 3.8: ndice de refrao em funo do comprimento de onda para diferentes materiais
usados como substrato dieltrico (TOPAS, PC, PMMA e BK7s). nP C > nT OP AS > nBK7 >
nP M M A .
Para o caso dos polmeros, tambm so considerados seus parmetros mecnicos tendo
em vista que estes sero submetido a um processo de fabricao que pode causar birrefrin-
gncia (ver Captulo 4) e afetar sua utilizao na excitao do fenmeno SPR.
A escolha do substrato se dar por convenincias de facilidade de manufatura, disponi-
bilidade do material no mercado e preo mas, necessariamente, o substrato deve ser o mais
transparente possvel (transmitncia100%) na faixa de comprimento de onda desejada.
Para confeco dos prisma quatro materiais foram utilizados, sendo trs polmeros (PC,
PMMA e TOPAS) e um vidro (BK7).
Figura 3.9: Grco para o Fator Q expresso em termos relao da 2r ()2 /2i (). Prata,
ouro, cobre e alumnio exibem regimes de baixas perdas no espectro da luz visvel.
de baixa perda pode ser caracterizado pela relao abaixo [50], denominada de Fator Q:
|2i |3
1. (3.9)
22r (2r + 3 )
O Fator Q tambm pode ser expresso em termos da funo dieltrica do metal, atravs
do quociente 2r ()2 /2i (). Como apresentado na Figura 3.9, na regio do espectro visvel,
o ouro, a prata, o cobre e o alumnio possuem altos valores para o Fator Q, caracterstica
do regime de baixa perda [51]. Nota-se pelos grcos da Fig.3.9 que para <500 nm o
alumnio possui a menor perda (maior valor do Fator Q). Na regio 500 nm> <1000 nm,
a prata o metal com menores perdas associadas absoro intrnseca do material.
No obstante, as propriedades ptico-eltricas dos metais nas frequncias compreendi-
das entre o ultravioleta e o infravermelho so imprecisamente descritas pelas expresses
da Aproximao de Drude (D.A.). Imprecises devido dinmica dos nveis de energia,
especialmente a atenuao oriunda da parte imaginria da funo dieltrica do metal (2i ),
varia consideravelmente com a frequncia ou comprimento de onda e, eventualmente, es-
tes so os comprimentos de ondas que modulam a condio de ressonncia bem como as
propriedades pticas prximas a ressonncia dos plasmons de superfcie. A Figura 3.10
apresenta, como exemplo dessa impreciso, uma comparao entre CDF do alumnio obtida
experimentalmente e a atravs da aproximao de Drude.
Tentativas de formular expresses mais aproximadas para as propriedades ptico-eltricas
Captulo 3. Projeto do transdutor SPR 28
dos metais podem ser encontradas na literatura a exemplo destas citaes [52, 53]. As im-
precises da CDF so compensadas nesse trabalho por meio da Anlise de Fresnel (AF)
em um sistema multicamadas, conforme descrito nas eqs. (2.17) a (2.20), de modo que
a condio de ressonncia analisada para a funo dieltrica do metal atravs de dados
experimentais.
A variao de temperatura afeta o comportamento dos SPs no metal, uma vez que
provoca uma mudana na funo dieltrica. Com relao a frequncia dos plasmons, p ,
seu comportamento em funo da temperatura pode ser expressa por [54]:
Figura 3.11: Curva SPR para diferentes valores de comprimento de onda e de ngulo.
Interfaces a) Al/gua e b) Cu/gua. Acoplamento ptico para ngulos maiores que 60 .
Vistas: Reetividade x (esquerda), Reetividade x x ngulo (direita) e ngulo x
(subgrco)
Figura 3.12: Curva SPR para diferentes valores de comprimento de onda e de ngulo.
Interfaces a) Au/gua e b) Ag/gua. Acoplamento ptico para ngulos maiores que 60 .
Vistas: Reetividade x (esquerda), Reetividade x x ngulo (direita) e ngulo x
(subgrco)
Para cada par substrato/metal escolhido para a anlise de variao do analito, calcula-
se a gura de mrito sensibilidade e a inuncia da espessura o metal na resposta SPR. A
relao entre a sensibilidade e o ngulo de incidncia apresentada na Figura 3.13. Para
um comprometimento entre faixa de operao geomtrica e faixa de variao de ndice de
refrao detectvel (i.e. a faixa de resposta dinmica do sensor SPR), o ngulo de 68 foi
escolhido para caracterizao da resposta SPR, ver seo Ponto de Operao.
Para os metais Au, Ag, Cu e Al calcula-se a detectividade, verica-se a inuncia destes
na resposta do sensor SPR e investiga-se a qualidade dos detectores pticos necessrios para
cada arranjo, ver seo Sensibilidade e Detectividade.
Captulo 3. Projeto do transdutor SPR 32
Ponto de operao
Todos os condicionantes que fornecem o par em que ocorre a SPR denominado
de Ponto de Operao (OP) [62]. O design do prisma apresentado na Figura 3.2 prev
que o ngulo de incidncia do feixe luminoso que atinge a superfcie sensvel seja de 68 .
Neste caso, a condio de ressonncia ocorre em 6775 nm quando apenas gua deionizada
e desgaseicada ui sobre a camada metlica, proporcionando assim, n3 =1,331 RIU a
temperatura ambiente. Essa condio descreve o ponto de operao quando o polmero
TOPAS empregado como substrato ptico e a camada metlica uma pelcula na de
ouro com 50 nm de espessura. O OP para os demais pares sero obtidos atravs da AF.
Sensibilidade e Detectividade
A sensibilidade (ou responsividade) e a detectividade so guras de mrito importantes para
qualquer dispositivo de deteco e so utilizadas para vericar a qualidade da multicamada
para um determinado OP. Em sensores baseados na SPR a sensibilidade tambm depende
da anidade da interao molecular e da massa do analito, mas na prtica, a sensibilidade
expressa a capacidade do sistema SPR detectar variaes de ndice de refrao (ou densidade
Captulo 3. Projeto do transdutor SPR 33
n3 2 n3 1
= + (3.14)
n3 2 1
D = S / h i , D = S / h i (3.15)
Captulo 3. Projeto do transdutor SPR 34
Critrios de classicao
Tendo em visto o efeito da temperatura nos aspectos relacionados ao desenvolvimento de
sensores SPR, a AF realizada para temperatura xa. A temperatura para a qual a CDF
dos metais e a Disperso dos substratos (slidos e lquidos) foram obtidas de 22 2 C.
Os resultados obtidos permitem estabelecer a fonte de luz, o tipo do detector ptico e
a qualidade dos algoritmos, para assim, classicar a excitao dos SP para cada metal. A
interpretao da resposta SPR possibilita tal classicao. Situaes em que a condio de
ressonncia, visualmente expressa pela curva SPR, ocorre em comprimentos de onda entre
330 nm at 880 nm, para ngulos menores que 71 , com boa profundidade (r'0) e largura
pequena (F W HM () 8 2 ou F W HM () 120 30 nm) caracterizam uma boa
resposta SPR. Multicamada cuja resposta possua apenas bons resultados para R ou R ,
tendo a profundidade e largura resultados ruins, normalmente apresentam baixa sensibili-
dade. Desse modo, exige que os algoritmos de processamento e extrao dos parmetros de
interesse sejam capazes de compensar a baixa variao de R e/ou R em funo da variao
de n3 .
Para a condio de ressonncia ocorrendo em comprimentos de onda abaixo de 330 nm
ou acima de 880 nm faz-se necessrio fonte de luz fora do espectro visvel para excitao
do fenmeno e detector ptico apropriado para capturar a luz reetida. Mesmo que o
ngulo de incidncia, profundidade e largura possuam os valores desejados, classicam-se tais
multicamadas como de moderada resposta SPR devido ao tipo de fonte luz e de detector
ptico necessrio. As mesma classicao dada para a multicamada em que a condio
de ressonncia ocorre para ngulos maiores que 71 , pois dicultam o posicionamento dos
elementos que compem a instrumentao ptica. Para multicamadas cuja condio de
ressonncia ocorre em posies de e de difcil instrumentao e ainda possuem baixa
qualidade nos demais parmetros, estas caracterizam-se por uma resposta SPR ruim. Vale
salientar que os modos AIM e WIM so independentes, podendo uma multicamada ter bom
resultado em um modo e um resultado ruim ou moderado no outro.
Captulo 3. Projeto do transdutor SPR 35
Figura 3.14: Funo dieltrica complexa do Al. Parte real e imaginria para diferentes
representaes. Ver-se que CDF experimental no aproximada pela D.A.
Captulo 3. Projeto do transdutor SPR 36
Figura 3.15: Variao da resposta SPR para diferentes representaes da funo dieltrica
2 () do alumnio. Curvas com e sem camada de oxidao. A resposta experimental mais
semelhante curva representada por Rakic na presena de oxidao. Detalhe (subgrco
em verde) para o perl espectral da fonte de luz.
Figura 3.16: Curvas SPR no modo WIM para os substratos de BK7, TOPAS, PMMA e
PC. ngulos de incidncia xados em 58 ,63 ,68 ,71 e 75 para faixa de comprimentos de
onda de 400 nm < < 1400 nm. Resposta WIM para lmes de alumnio com espessura de
20 nm em contato com gua deionizada e desgaseicada.
Figura 3.17: Curvas SPR no modo AIM para os substratos de BK7, TOPAS, PMMA e PC.
Grcos para diferentes comprimentos de onda, indicados na gura, para faixa de ngulo
de 50 < < 80 . Resposta AIM para lmes de alumnio com 20 nm em contato com a
gua deionizada e desgaseicada.
na Figura 3.18 para o ngulo de incidncia xo em 68 . Duas ressonncias, ou seja, o efeito
de splitting SPR em curtos (Sw) e longos (Lw) comprimentos de onda so resolvidos. Para
o substrato de BK7, a posio de ressonncia no Sw inicia-se em 500 nm para 1,33 RIU e
no Lw em 886 nm. PMMA possui valores de Sw para ndices de refrao abaixo de 1,35. A
pofundidade/contraste de penetrao para ambas as ressonncias varia de modo oposto ao
incremento do valor de RIU do analito.
Os parmetros comprimentos de onda de ressonncia (R ), largura da curva (F W HM )
Captulo 3. Projeto do transdutor SPR 38
Figura 3.18: Curvas SPR no modo WIM para diferentes analitos no intervalo de 1,33 <
n3 < 1,39. Substratos de BK7, TOPAS, PMMA e PC com lmes de alumnnio de 20 nm
de espessura. ngulo de incidncia xado em 68 para faixa de comprimentos de onda de
400 nm < < 1400 nm.
Figura 3.19: Parmetros extrados das curvas SPR no modo WIM para lmes de Al. a)
Sensibilidade, b) Comprimento de onda de ressonncia e c) largura da curva associada ao
valor FWHM.
Figura 3.20: Curvas SPR no modo AIM para diferentes analitos no intervalo de 1,33 < n3 <
1,39. Curvas com os comprimentos de onda xos nos valores encontrados na simulao WIM
(Sw em cores e Lw em tons de cinza). Substratos de BK7, TOPAS, PMMA e PC com lmes
de alumnio com espessura de 20 nm.
Figura 3.21: Parmetros extrados das curvas SPR no modo AIM para lmes de Al. a)
Sensibilidade, b) ngulo de ressonncia e c) largura da curva associada ao valor FWHM.
Figura 3.22: Reetividade-WIM (grcos superiores) e AIM (grcos inferiores) para di-
ferentes espessuras do lme de alumnio. Curvas SPRs para a multicamada composta por
BK7/Al/analito, com as espessuras para os lmes metlicos de 1, 10, 20, 30 e 40 nm.
Figura 3.23: Parte real e imaginria para diferentes representaes da CDF do ouro. Nota-se
que a CDF experimental parcialmente aproximada pela D.A.
Figura 3.24: Curvas SPR no modo WIM para os substratos de BK7, TOPAS, PMMA e PC.
ngulos de incidncia xados em 58 ,63 ,68 ,71 e 75 para faixa de comprimentos de onda
de 400 nm < < 1400 nm. Resposta WIM para lmes de ouro com espessura de 50 nm,
em contato com gua deionizada e desgaseicada.
rao (OP) de longos comprimentos de onda (> 800 nm) e ngulos pequenos. Todavia, a
multicamada BK7/Au/H2 O com =63 possui baixa profundidade/contraste.
A Figura 3.26 ilustra a caracterstica de deteco no modo WIM para o ngulo de
incidncia xo em 68 . Os conjunto de valores de ndice de refrao esto na faixa 1,33 <
n3 < 1,39 RIU. Os substratos TOPAS e PMMA possuem profundiade/contraste crescente
e descrescente, respectivamente, com o incremento de n3 . Para ndices de refrao abaixo
1,36 a profundiade/contraste das curvas para BK7 e PC aumentam e acima desse valor o
contraste diminui. Com exceo de PC, o incremento de n3 faz o valor do mnimo deslocar-se
para longos comprimentos de onda.
Os parmetros R , F W HM e S , so apresentados em funo dos ndice de refrao na
Captulo 3. Projeto do transdutor SPR 42
Figura 3.25: Curvas SPR no modo AIM para os substratos de BK7, TOPAS, PMMA e PC.
Grcos para diferentes comprimentos de onda, indicados na gura, para faixa de ngulo
de 40 < < 80 . Resposta AIM para lmes de ouro com 50 nm em contato com a gua
deionizada e desgaseicada.
Figura 3.26: Curvas SPR no modo WIM para diferentes analitos no intervalo de 1,33 <
n3 < 1,39. Substratos de BK7, TOPAS, PMMA e PC. ngulo de incidncia xado em 68
para faixa de comprimentos de onda de 400 nm < < 1400 nm. O lme de ouro com
espessura de 50 nm.
Figura 3.27. A sensibilidade possui faixa dinmica de operao para toda faixa de ndice de
refrao utilizada (62 RIU ) e PMMA apresenta o melhor valor de sensibilidade, possuindo
magnitude de 92002000 nm/RIU; todavia revela os maiores valores de F W HM . Os valores
de R aumentam de forma linear com a variao de n3 para todos os substratos.
A caracterstica de deteco do modo AIM apresentada na Figura 3.28. As curvas
SPRs so calculadas para os valores de R obtidos na resposta WIM para o ngulo de 68 .
A profundidade da curva SPR permanece invarivel para BK7 e PMMA. Assim como nos
Captulo 3. Projeto do transdutor SPR 43
Figura 3.27: Parmetros extrados das curvas SPR no modo WIM para lmes de Au. a)
Sensibilidade, b) Comprimento de onda de ressonncia e c) largura da curva associada ao
valor FWHM.
Figura 3.28: Curvas SPR no modo AIM para diferentes analitos no intervalo de 1,33 < n3 <
1,39. Substratos de BK7, TOPAS, PMMA e PC com lmes de ouro de 50 nm de espessura.
Curvas com os comprimentos de onda xos nos valores encontrados na simulao WIM.
Figura 3.29: Parmetros extrados das curvas SPR no modo AIM para lmes de Au. a)
Sensibilidade, b) ngulo de ressonncia e c) largura da curva associada ao valor FWHM.
Figura 3.31: Funo dieltrica complexa do Cu. Parte real e imaginria para diferentes
representaes. Observa-se que a CDF experimental parcialmente aproximada pela D.A.
Figura 3.32: Curvas SPR no modo WIM para os substratos de BK7, TOPAS, PMMA e
PC. ngulos de incidncia xados em 58 ,63 ,68 ,71 e 75 para faixa de comprimentos de
onda de 400 nm < < 1400 nm. Resposta WIM para lmes de cobre com espessura de
40 nm em contato com gua deionizada e desgaseicada.
Figura 3.33: Curvas SPR no modo AIM para os substratos de BK7, TOPAS, PMMA e PC.
Grcos para diferentes comprimentos de onda, indicados na gura, para faixa de ngulo
de 40 < < 80 . Resposta AIM para lmes de cobre com 40 nm em contato com a gua
deionizada e desgaseicada.
Figura 3.34: Curvas SPR no modo WIM para diferentes analitos no intervalo de 1,33 <
n3 < 1,39. Substratos de BK7, TOPAS, PMMA e PC com lmes de cobre de 40 nm de
espessura. ngulo de incidncia xado em 68 para faixa de comprimentos de onda de
400 nm < < 1400 nm.
Figura 3.35: Parmetros extrados das curvas SPR no modo WIM para lmes de Cu. a)
Sensibilidade, b) Comprimento de onda de ressonncia e c) largura da curva associada ao
valor FWHM.
Figura 3.36: Curvas SPR no modo AIM para diferentes analitos no intervalo de 1,33 < n3 <
1,39. Curvas com os comprimentos de onda xos nos valores encontrados na simulao WIM.
Substratos de BK7, TOPAS, PMMA e PC com lmes de cobre de 40 nm de espessura.
Figura 3.37: Parmetros extrados das curvas SPR no modo AIM para lmes de Cu. a)
Sensibilidade, b) ngulo de ressonncia e c) largura da curva associada ao valor FWHM.
Figura 3.38: Reetividade-WIM (grcos superiores) e AIM (grcos inferiores) para di-
ferentes espessuras do lme de cobre. Curvas SPRs para a multicamada composta por
BK7/Cu/analito, com as espessuras dos lmes metlicos de 10, 30, 40, 50 e 70 nm.
Figura 3.39: Funo dieltrica complexa do Ag. Parte real e imaginria para diferentes
representaes. Ver-se que a CDF experimental parcialmente aproximada pela D.A.
Figura 3.40: Curvas SPR no modo WIM para os substratos de BK7, TOPAS, PMMA e PC.
ngulos de incidncia xados em 58 ,63 ,68 ,71 e 75 para faixa de comprimentos de onda
de 400 nm < < 1400 nm. Resposta WIM para lmes de prata com 50 nm em contato
com gua deionizada e desgaseicada.
O comportamento do sensor SPR com lmes de prata torna-se mais evidente quando se
observa a distribuio angular da reetividade r() no modo AIM. Como apresentada na
Figura 3.41, a profundidade/contraste da curva SPR diminui para OPs com altos valores de
e baixos valores de ; a exceo para desse comportamento o OP = 1187 = 63
Captulo 3. Projeto do transdutor SPR 50
Figura 3.41: Curvas SPR no modo AIM para os substratos de BK7, TOPAS, PMMA e PC.
Grcos para diferentes comprimentos de onda, indicados na gura, para faixa de ngulo
de 40 < < 80 . Resposta AIM para lmes de prata com 50 nm em contato com a gua
deionizada e desgaseicada.
em substratos de BK7. No obstante, h uma correlao entre os modos WIM e AIM, i.e.,
curvas com baixos contrastes em um modo permanecem com baixos valores no outro modo.
Ademais, todos os substratos possuem boa resposta SPR.
A caracterstica de deteco no modo WIM para ndices de refrao na faixa 1,33 <
n3 < 1,39 RIU e ngulo de incidncia xo em 68 , encontra-se na Figura 3.42. A profun-
didade/contraste das curvas SPR sofrem pequenas alteraes com o incremento de n3 e o
valor do mnimo desloca-se para longos comprimentos de onda, especialmente para PMMA.
Os parmetros extrados das curvas SPR-WIM, so apresentados em funo dos ndice de
refrao na Figura 3.43. Os valores de F W HM assume magnitude de 404 nm, e ligeira
oscilao com o aumento de n3 , para BK7, TOPAS e PC. Os valores de R e SW IM aumen-
tam de forma linear com a variao de n3 , com PMMA apresentando os maiores valores de
sensibilidade, SW IM 9.000 nm/RIU.
No modo AIM, a caracterstica de deteco (ver Figura 3.44) mostra que a profundidade
da curva SPR permanece independente da variao de n3 para BK7, TOPAS e PMMA. De
forma semelhante ao ouro e ao cobre, todos os substratos so aplicveis excitao dos SP
no modo AIM.
Os parmetros extrados das curvas SPR-AIM encontram-se na Figura 3.45. O ngulo
de ressonncia (R ), a sensibilidade (S ) e a largura da curva (F W HM ) possuem compor-
Captulo 3. Projeto do transdutor SPR 51
Figura 3.42: Curvas SPR no modo WIM para diferentes analitos no intervalo de 1,33 <
n3 < 1,39. Substratos de BK7, TOPAS, PMMA e PC com lmes de prata de 50 nm de
espessura. ngulo de incidncia xado em 68 para faixa de comprimentos de onda de
400 nm < < 1400 nm. Curvas para lmes de prata com espessuras de 50 nm.
Figura 3.43: Parmetros extrados das curvas SPR no modo WIM para lmes de Ag. a)
Sensibilidade, b) Comprimento de onda de ressonncia e c) largura da curva associada ao
valor FWHM.
Figura 3.44: Curvas SPR no modo AIM para diferentes analitos no intervalo de 1,33 <
n3 < 1,39. Curvas para os comprimentos de onda xos em 658 nm(BK7), 620 nm(TOPAS),
779 nm(PMMA) e 519 nm(PC) encontrados na simulao WIM, para lmes de prata com
espessuras de 50 nm.
Figura 3.45: Parmetros extrados das curvas SPR no modo AIM para lmes de Ag. a)
Sensibilidade, b) ngulo de ressonncia e c) largura da curva associada ao valor FWHM.
Figura 3.46: Reetividade-WIM (grcos superiores) e AIM (grcos inferiores) para di-
ferentes espessuras do lme de prata. Curvas SPRs para a multicamada composta por
BK7/Ag/analito, com as espessuras dos lmes metlicos de 10, 30, 40, 50 e 70 nm.
Captulo 3. Projeto do transdutor SPR 53
3.3 Detectividade
Alm da sensibilidade, a detectividade tambm foi utilizada como gura de mrito para
caracterizao da resposta SPR. Por permitir quanticar a qualidade da resposta da instru-
mentao ptica-eletrnica do sensor, a detectividade utilizada para comparar diretamente
as respostas do sensor nos modos AIM e WIM. A resoluo instrumental para o modo WIM
foi ajustada para h i=0,1 nm, baseado nas especicaes do espectrmetro e nos estu-
dos experimentais realizados [34, 62]. A Figura 3.47 apresenta os valores de detectividade
alcanveis no modo WIM, assumindo 0.1 nm como resoluo instrumental.
Tendo como base os valores alcanveis de D possvel determinar qual deve ser a
resoluo instrumental do sensor de imagem (cmera CCD ou CMOS) usado no modo AIM,
de maneira que ambos os modos forneam o mesmo valor de detectividade (D = D ). Os
valores requeridos de h i so obtidos pela expresso:
h i = (S /S ) h i , (3.16)
do feixe luminoso que atinge o sensor de imagem do transdutor SPR operando no modo
AIM. Com o valor de FoV, possvel calcular a resoluo angular do sensor SPR, expressa
por:
h i = F oV /DP (3.17)
CI
F oV = 2arctan , (3.18)
DF
em que DP (densidade de pixels) representam a quantidade de pixels por unidade de rea do
sensor de imagem utilizado; CI (caminho inclinado) indica o tamanho na parede lateral do
prisma que utilizado para reetir a luz e DF (distncia focal) a distncia focal da lente
utilizada no set-up AIM. Possveis diferenas entre os valores de h i e h i so compensados
por software atravs de algoritmos de pr-processamento, gerao da curva SPR e extrao
dos parmetros de interesse [69].
Outra forma de calibrar a detectividade do sensor SPR alterando o ponto de operao,
tendo em vista o conhecimento dos valores das resolues instrumentais h i e h i. No modo
WIM a detectividade aumenta com o aumento do comprimento de onda [70], dessa forma,
mesmo um detector com altos valores de resoluo instrumental em h i pode fornecer uma
resposta adequada para D quando um comprimento de onda adequado utilizado, i.e.,
com valores elevados. J a detectividade AIM possui comportamento oposto, ou seja,
decresce com o aumento do comprimento de onda [70]. Assim, para compensar a eventual
baixa qualidade do sensor de imagem empregado, comprimentos de ondas curtos podem ser
utilizados. A calibrao do sensor em ambos os modos pode ser feita escolhendo OPs de
modo que o parmetro , expresso pela equao abaixo, seja mantido prximo de 1.
= D /D = (S /S ) (h i / h i). (3.19)
Captulo 3. Projeto do transdutor SPR 55
Figura 3.48: Diagrama de ptica geomtrica usado para o clculo do Campo de Viso (FoV)
do PPBIO. Esquema indicando distncias, ngulos e elementos presentes no set-up AIM.
Para o sensor SPR desenvolvido o valor de FoV de 22,6 .
3.4 Resumo
formance do alumnio foi apresentada. Com lmes de Al, o sensor apresenta o efeito do split
SPR - a separao da excitao simtrica dos SPs em comprimentos de ondas curtos (Sw)
e longos (Lw). A excitao Sw, em geral, supera a excitao Lw. Em seguida, as respostas
para lmes de ouro, prata e cobre foram apresentadas. A dinmica de sensoriamento para
substncias com ndices de refrao na faixa de 1,33 < n3 < 1,39 RIU permite caracterizar
os sensores SPR.
Os parmetros de desempenho foram apresentados para cada multicamada e os resul-
tados para a sensibilidade e detectividade encontram-se sumarizados no Apndice A -
Fabricao do PPBIO . Em sntese, na comparao metal a metal o valor de S maior
para a prata, com exceo no substrato de TOPAS em que a ressonncia ocorre apenas
em altos valores de ndice de refrao (>1,365). Na comparao substrato a substrato, o
comportamento de S superior em prismas de PMMA, com exceo no lme de alumnio
em que o substrato TOPAS superior por haver apenas ressonncia em altos valores de
ndice de refrao. Por ltimo, a anlise da ptica geomtrica foi discutida. Para ver a
resposta SPR de outros materiais consultar [40].
Comportamento da sensibilidade metal-a-metal, BK7: AlAg>Cu>Au (WIM) e Al>Ag>Au>Cu
e Al: BK7>PMMA>TOPAS>PC.
Captulo 4
Figura 4.1: Moldes produzidos para fabricao do PPBIO. a) Molde com 3 cavidades e b)
Molde com 4 cavidades.
do material. Vale salientar que as variaes nas condies de moldagem tm um efeito direto
sobre as propriedades nais do produto.
Figura 4.3: Esquema ilustrativo de uma luz polarizada atravessando um meio birrefringente
e outro no birrefringente. As componentes extraordinria, mais lenta (raioE ), e ordinria,
mais rpida (raioO ), esto indicadas.
estado da polarizao da luz incidente ou da focalizao da luz incidente por meio de lentes
[72]. Em um material birrefringente, o campo eltrico da luz incidente pode ser decom-
posto em duas componentes conhecidas como raio extraordinrio (paralelo direo do eixo
ptico do material) e raio ordinrio (perpendicular direo do eixo ptico do material),
os quais viajam com velocidades de propagao diferentes. Isso signica que existem dois
ndices de refrao distintos: ne e no relacionados com os raios extraordinrio e ordinrio,
respectivamente.
Essa dupla refrao no ocorre se as molculas que formam o prisma forem completa-
mente livres de tenso residual. No entanto, quando o polmero (PC, PMMA ou TOPAS)
submetido ao processo de injeo acaba por submeter-se a irregularidades e altos nveis de
tenso (devido variao trmica, ao uxo e ao empacotamento [71]). Com o uso de um
polarmetro (ou polariscpio) possvel mensurar o stress residual do prisma. Composto
por uma fonte de luz, dois polarizadores, uma placa de quarto-de-onda e um sensor de
imagem (ver Figura 4.4), esse equipamento possibilita calcular a defasagem entre os raios
extraordinrios e ordinrios do meio birrefringente. Com a rotao do segundo polarizador
(denominado analisador) a intensidade da luz transmitida varia, alcanando intensidade
mxima quando o eixo de polarizao do analisador coincidir com o eixo do raio ordinrio
e intensidade mnima quando o eixo de polarizao do analisador coincidir com o eixo do
raio extraordinrio. Essa intensidade representada por [73]:
2Cd
= (1 2 ). (4.2)
Figura 4.4: Esquema de um polariscpio. Atrs do prisma sob anlise h uma luz no
polarizada seguido de um polarizador e um plano de 1/4 de onda. frente do prisma, outro
polarizador (analisador) utilizado para analisar a polarizao e um sensor de imagem
captura o valor da intensidade.
Figura 4.5: a) Fotograa para prismas com [1]-[2]-[3] e sem [4]-[5]-[6] annealing, polidos
[3]-[4] e no polidos [1]-[2]-[5]-[6], todos fabricados com TOPAS e usando o molde de 3
cavidades. b) Fotograa para prismas polimricos fabricados com o molde de 4 cavidades e
prisma de vidro BK7. Prismas que passam pelo processo de injeo [PC]-[PMMA]-[TOPAS]
possuem stress enquanto o prisma vidro [BK7], fabricado de forma diferente, ausente de
stress.
Figura 4.6: Curvas SPR para lme de prata depositado no substratos BK7, TOPAS, PMMA
e PC. Curvas tericas (linha tracejada) e experimentais (linha slida).
Figura 4.7: Curva SPR para prisma com (linha slida preta) e sem (linha slida vermelha)
anneling, e curva SPR terica (curva tracejada). A excitao dos SP para prisma sem
annealing ineciente. Exemplo da excitao SP melhorada com o uso de annealing.
Captulo 4. Construo do sensor SPR 65
Figura 4.8: a) Perl espectral para a fonte de luz usada no modo WIM. A linha tracejada
a resposta obtida antes do polimento. b) Perl da fonte de luz usada no modo AIM. A
linha tracejada a resposta obtida com prismas no polidos.
grupos baseados em i) deposio de vapor fsico (PVD): como nas tcnicas de sputtering e
da evaporao por feixe de eltrons (e-beam ); e ii) deposio de vapor qumico (CVD): a
exemplo do crescimento de lme (epitaxia) e da oxidao trmica [76]. Os lmes nos dos
metais Ag, Au e Cu foram depositados utilizando a tcnica de sputtering e os lmes nos
de Al atravs de e-beam. Prismas cobertos com os metais analisados, so apresentados na
Figura 4.9. Para deposio do metal utilizou-se o sistema de alto vcuo para a gerao de
pelculas nas Cryofox Explorer 600LT, comercializado pela empresa Polyteknik. Detalhes
sobre o processo de metalizao dos prismas podem ser vistos no Apndice B - Deposio
de lmes nos .
A qualidade da deposio inspecionada atravs da continuidade da camada metlica,
da espessura e da rugossidade. Todas essas medidas esto relacionadas com ajustes no
tempo e na corrente de deposio, alm da qualidade do polimento da superfcie do prisma.
Como exemplo, a Figura 4.11 mostra um resumo da investigao da qualidade do lme
metlico atravs de micro-grcos obtidos com um microscpio de fora-atmica (AFM).
Imagens em duas e trs dimenses da superfcie do prisma e os clculos da rugossidade para
diferentes reas da superfcie so apresentados na gura. Os valores de rudossidade foram
de 523 nm na faixa A-B, de 1,08 m na faixa C-D, com um total de 0,034 m em uma rea
de 5050 m. Detalhes sobre as tecnologias utilizadas na caracterizao podem ser vistos
no Apndice C - Caracterizao de lmes nos .
Captulo 4. Construo do sensor SPR 67
Para excitao do fenmeno fsico, o Sistema ptico ajusta a fonte luminosa s condies
pticas necessrias de polarizao, foco e posio de incidncia para a qual se atingi a
reexo interna total (RIT). O Sistema Microudico do sensor SPR responsvel pela
Captulo 4. Construo do sensor SPR 69
connar a luz na parade lateral do PPBIO, uma clula de uxo com volume aproximado de
75 mm3 e o espectrmetro USB4000 da Ocean Optics [79], que cobre a faixa de comprimento
de onda entre 350 nm a 1050 nm, conversor AD integrado de 16 bits, resoluo de 0.3 nm,
pixels de tamanho 8 m200 m e relao sinal-rudo em torno de 300:1.
No modo AIM, utiliza-se uma fonte de luz quase monocromtica com largura espectral
pequena, centrada em um valor xo de comprimento de onda a depender da multicamada.
Utiliza-se duas lentes cilndricas plano-convexas LJ1960L1 da Throlabs e um espelho para
auxiliar na instrumentao do caminho ptico. Como sensor de imagem, a cmera CMOS
DCC1645C [80] comercializada pela empresa Thorlabs com resoluo 12801024 e 10 bits
por pixel, estes com tamanho de 3,6 m2 , foi utilizada. Clula de uxo, lente colimadora e
polarizador (quando a fonte de luz no for polarizada) tambm so empregados.
Fotograa do sensor SPR composto por componentes udicos (clula de uxo), compo-
nentes pticos (lentes, prisma e polarizador), componentes eletrnicos (sensor de imagem) e
por componentes mecnicos que acoplam todos os componentes, formando o instrumento p-
tico, apresentado na Figura 4.12. Vale salientar que apesar de algumas peas (as metlicas)
terem sido adquiridas da Thorlabs, parte dos components mecnicos foram desenvolvidas
e impressos em impressora 3D no laboratrio de biossenores da UFCG, como ilustrado na
Figura 4.13.
Por m, os softwares da UACPE so desenvolvidos para cara modo de operao uma
vez que o driver de cada dispositivo nico e escrito em linguagem de programao di-
ferente. Desenvolvidos em linguagem Java (modo WIM) e C# (modo AIM), os softwares
so majoritariamente composto por grcos que expressam o comportamento temporal dos
parmetros envolvidos no processo de anlise de substncias. Em sntese, o uxograma de
aes dos softwares inicia com a deteco do sensor de imagem (espectrmetro USB4000
ou cmera DCC1645C), e congurao dos parmetros de aquisio: a exemplo do tempo
de integrao e de aplicao de tcnicas de pr-processamento. Em seguida, tem incio o
processo de aquisio dos dados. O sensor calibrado com um sinal de referncia, e da em
diante, a curva SPR calculada e apresentada. Com a curva SPR calculada, h a possibi-
lidade de congurar os parmetros de realce e suavizao da curva para posterior extrao
dos parmetros de interesse.
Captulo 4. Construo do sensor SPR 71
4.4 Resumo
Finalizada a montagem mecnica, dar-se incio aos testes experimentais do sensor SPR
construdo com diferentes multicamadas. A caracterizao dos lmes metlicos atravs de
elipsometria e espectroscopia demonstram a continuidade e homogeneidade dos lmes. Os
ensaios experimentais e a obteno da resposta do sensor apresentada aps uma srie
de processamentos. A seguir, sero descritas as etapas para o processamento do sinal de
imagem capturada por um sensor de imagem de duas dimenses (2D) - procedimentos
anlogos so realizados quando utiliza-se sensores de imagem de uma dimenso (1D) - e em
seguida apresentam-se os resultados obtidos.
Pr-processamento do sinal
A intensidade da luz capturada pelo i-simo pixel do sensor de imagem representada por
xij (t), i = 1, , M e j = 1, , P de modo que a imagem bruta expressa por:
x11 (t) x12 (t) x1P (t)
x21 (t) x22 (t)
x2P (t)
IRAW (t) =
..
(5.1)
.
xM 1 (t) xM 2 (t) xM P (t)
As fontes de rudos que inuenciam a resposta do sensor de imagem podem ser clas-
sicadas em rudos espaciais e temporais. O rudo independente da posio do pixel e da
relao pixel vs. ngulo, mas surge entre imagens subsequentes de uma mesma substncia,
Captulo 5. Caracterizao do sensor SPR 74
Lt
1 X
xij (t) = xij (t + l) , (5.2)
Lt l=1
tomada como referncia e a partir da injeo do analito realizado o clculo da curva SPR,
da forma:
Ana
ISU AV IZADA (t,,)
SP R(t,,) = Ar
(5.4)
ISU AV IZADA (t,,)
em que ISU
Ana
AV IZADA a resposta do sensor na presena do analito. Esse procedimento de
x (t) x12 (t) x1P (t) A (t)
11 1
x21 (t) x22 (t) x2P (t)
x31 (t) x32 (t) x3P (t) A2 (t)
x41 (t) x42 (t) x4P (t)
ISU AV IZADA (t) = x51 (t) (5.5)
x52 (t) x5P (t) A3 (t)
x61 (t) x62 (t) x6P (t)
.. .. .. ..
. . . .
xM 11 (t) xM 12 (t) xM 1P (t)
xM 1 (t) xM 2 (t) xM P (t) AS (t)
O conjunto de reas sensveis formam os chamados spots sensveis (spots = [A1 (t), A2 (t),
, AS (t)]), os quais indicam a quantidade de substncias que podem ser monitorados
simultaneamente pelo sensor SPR, de modo que SP Ri (t,,) = AAna
i i (t,,). A
(t,,)/AAr
forma de agrupar as linhas que compem uma Ai pode ser expressa pela imagem mdia do
intervalo de linhas utilizados:
xa1 (t) xa2 (t) xaP (t)
1 X .. ..
Ai (t) = . . (5.6)
N
xb1 (t) xb2 (t) xbP (t)
em que N o total de pixels no intervalo [a b]. O uso de multispots mesmo que haja uma
nica regio fsica sensvel no sensor SPR, melhora a relao sinal-rudo [81] e a resposta
dinmica [82] do instrumento SPR.
seguinte equao:
(p) = 2 106 p2 + 0,0119p + 57,893. (5.7)
Para o modo WIM, a relao pixel vs. comprimento de onda fornecida pelo espectrmetro
segue a expresso:
(p) = I + C1 p + C2 p2 + C3 p3 , (5.8)
d d
P ()=R = 0 ou P ()=R = 0. (5.9)
d d
O valor mnimo tambm pode ser considerado como sendo o centro geomtrico (ou
centride) da curva SPR. A tcnica aplicada a valores que esto abaixo de um limiar pr-
estabelecido, conhecido como linha base (LT ). Assim, para uma curva SPR com N pontos,
o valor do centride calculado para os pontos com valores de intensidade abaixo da linha
Captulo 5. Caracterizao do sensor SPR 77
base da forma: PN
(pi (t) LT )i
C(t) = Pi=1
N
, (5.10)
i=1 (pi (t) LT )
em que pi representa o valor do ponto i da curva SPR.
A apresentao do valor de magnitude dos parmetros R , R , n3 e F W HM , apresen-
tada em um grco versus o tempo, grco este denominado de sensorgrama. O sensorgrama
um grco que mostra a evoluo temporal de um determinado parmetro de interesse.
Novamente retorna-se para a situao de clula molhada. Repete-se esse processo at que
todas as substncias sejam analisadas. Os procedimentos descritos compem o chamado
ciclo de teste, ou ensaio de teste, e so utilizados para a quanticao das variaes de R ,
R , n3 e F W HM (largura). Repetiram-se os experimentos por vrios ciclos (5 vezes) e
os resultados foram equivalentes, o que atesta a consistncia das respostas e garante uma
reprodutibilidade de experimentos. Os procedimentos descritos so aplicados nos modos
AIM e WIM. Em sntese, o protocolo experimental possui as seguintes etapas:
Controle de temperatura
A temperatura ambiente para realizao dos experimentos foi ajustada para 231 C de
forma a minimizar os efeitos trmicos nas amostras e nos componentes do sensor. O acesso
ao ambiente foi controlado para evitar utuaes trmicas no momento dos experimentos.
Figura 5.1: Curvas SPRs tericas e experimentais para lmes de prata com 50 nm de
espessura, depositado nos substratos BK7, TOPAS, PMMA e PC nos modos WIM (os
quatro grcos superirores) e AIM (os quatro grcos inferiores).
Figura 5.2: Curvas SPRs tericas e experimentais para lmes de ouro com 50 nm de
espessura, depositado nos substratos BK7, TOPAS, PMMA e PC nos modos WIM (superior)
e AIM (inferior).
Captulo 5. Caracterizao do sensor SPR 80
Figura 5.3: Curvas SPRs tericas e experimentais para lmes de cobre com 40 nm de
espessura, depositado nos substratos BK7, TOPAS, PMMA e PC nos modos WIM (superior)
e AIM (inferior).
Figura 5.4: Curvas SPRs tericas e experimentais para lmes de alumnio com 20 nm de
espessura, depositado nos substratos BK7, TOPAS, PMMA e PC nos modos WIM (superior)
e AIM (inferior).
Captulo 5. Caracterizao do sensor SPR 82
Figura 5.6: Sensorgramas obtidos nos modos AIM (verde) e WIM (azul) para R (verde
superior), n3 (R ) (verde inferior), R (azul superior) e n3 (R ) (azul inferior) para lme
de prata depositado no substrato BK7. Algoritmos de deteco do valor mnimo, mul-
ticamada, comprimento de onda, ngulo e substncias indicados na gura. Experimento
realizado primeiro no modo WIM, em seguida, o mesmo prisma utilizado no modo AIM.
Ciclo experimental iniciando com H2 O, depois Etanol de alta-concentrao, retorno para
H2 O, em seguida Etanol de baixa-concentrao e retorno para H2 O; por m soluo de
BSA, remoo de excesso com H2 O, limpeza com Etanol e retorno para H2 O.
/RIU. Se comparados aos valores tericos apresentados nas Figuras 3.43 (WIM) e 3.45
(AIM) os valores experimentais representam 91,94% e 69,22% destes valores respectiva-
mente. A detectividade mostra que o sensor composto pelo par BK7/Ag, possui melhor
desempenho operando no modo WIM do que no modo AIM nas condies investigadas.
Os resultados para lmes de prata depositados nos substratos TOPAS, PMMA e PC
esto sumarizados nas Tabelas 5.2, 5.3 e 5.4. Assim como nos resultados com BK7, o modo
WIM apresentou desempenho superior ao modo AIM para os polmeros TOPAS e PC. O
sensor com PPBIO de PMMA foi o nico a apresentar melhor desempenho no AIM do
que no modo espectral. A congurao PMMA/Ag no modo AIM, tambm apresentou os
menores valores na variao de R para uma determinada substncia. Tais resultados foram
obtidos com o algoritmo que combina o mtodo do centride e do polinmio, exigindo maior
complexidade na extrao do valor mnimo. Vale salientar que as Figuras 5.6, 5.7, 5.8 e
5.9 apresentam os sensorgramas para o mtodo de extrao do mnimo que apresentou os
melhores resultados para o respectivo par substrato/metal.
A resoluo instrumental foi medida no regime permanente da soluo Etanol12,5% para
os dois modos de operao. As utuaes nos valores de R no regime permanente foram
Captulo 5. Caracterizao do sensor SPR 86
Figura 5.7: Sensorgramas obtidos nos modos AIM (verde) e WIM (azul) para R (verde
superior), n3 (R ) (verde inferior), R (azul superior) e n3 (R ) (azul inferior) para lme
de prata depositado no substrato TOPAS.
Figura 5.8: Sensorgramas obtidos nos modos AIM (verde) e WIM (azul) para R (verde
superior), n3 (R ) (verde inferior), R (azul superior) e n3 (R ) (azul inferior) para lme
de prata depositado no substrato PMMA. Algoritmos de deteco do valor mnimo, mul-
ticamada, comprimento de onda, ngulo e substncias indicados na gura. Experimento
realizado primeiro no modo WIM, em seguida, o mesmo prisma utilizado no modo AIM.
Ciclo experimental iniciando com H2 O, depois Etanol de alta-concentrao, retorno para
H2 O, em seguida Etanol de baixa-concentrao e retorno para H2 O; por m soluo de
BSA, remoo de excesso com H2 O, limpeza com Etanol e retorno para H2 O.
Figura 5.9: Sensorgramas obtidos nos modos AIM (verde) e WIM (azul) para R (verde
superior), n3 (R ) (verde inferior), R (azul superior) e n3 (R ) (azul inferior) para lme de
prata depositado no substrato PC. Algoritmos de deteco do valor mnimo, multicamada,
comprimento de onda, ngulo e substncias indicados na gura. Experimento realizado
primeiro no modo WIM, em seguida, o mesmo prisma utilizado no modo AIM. Ciclo
experimental iniciando com H2 O, depois Etanol de alta-concentrao, retorno para H2 O,
em seguida Etanol de baixa-concentrao e retorno para H2 O; por m soluo de BSA,
remoo de excesso com H2 O, limpeza com Etanol e retorno para H2 O.
Figura 5.10: Sensorgramas obtidos nos modos AIM (verde) e WIM (azul) para R (verde
superior), n3 (R ) (verde inferior), R (azul superior) e n3 (R ) (azul inferior) para lme
de ouro depositado no substratos BK7. Algoritmos de deteco do valor mnimo, mul-
ticamada, comprimento de onda, ngulo e substncias indicados na gura. Experimento
realizado primeiro no modo WIM, em seguida, o mesmo prisma utilizado no modo AIM.
Ciclo experimental iniciando com H2 O, depois Hypo., retorno para H2 O; em seguida P BS
e retorno para H2 O; por m soluo de BSA, remoo de excesso com H2 O, limpeza com
Hypo e retorno para H2 O.
Figura 5.11: Sensorgramas obtidos nos modos AIM (verde) e WIM (azul) para R (verde
superior), n3 (R ) (verde inferior), R (azul superior) e n3 (R ) (azul inferior) para lme
de ouro depositado no substrato TOPAS. Algoritmos de deteco do valor mnimo, mul-
ticamada, comprimento de onda, ngulo e substncias indicados na gura. Experimento
realizado primeiro no modo WIM, em seguida, o mesmo prisma utilizado no modo AIM.
Ciclo experimental iniciando com H2 O, depois Hypo., retorno para H2 O; em seguida P BS
e retorno para H2 O; por m soluo de BSA, remoo de excesso com H2 O, limpeza com
Hypo e retorno para H2 O.
Figura 5.12: Sensorgramas obtidos nos modos AIM (verde) e WIM (azul) para R (verde
superior), n3 (R ) (verde inferior), R (azul superior) e n3 (R ) (azul inferior) para lme
de ouro depositado no substrato PMMA. Algoritmos de deteco do valor mnimo, mul-
ticamada, comprimento de onda, ngulo e substncias indicados na gura. Experimento
realizado primeiro no modo WIM, em seguida, o mesmo prisma utilizado no modo AIM.
Ciclo experimental iniciando com H2 O, depois Hypo., retorno para H2 O; em seguida P BS
e retorno para H2 O; por m soluo de BSA, remoo de excesso com H2 O, limpeza com
Hypo e retorno para H2 O.
Figura 5.13: Sensorgramas obtidos nos modos AIM (verde) e WIM (azul) para R (verde
superior), n3 (R ) (verde inferior), R (azul superior) e n3 (R ) (azul inferior) para lme de
ouro depositado no substrato PC. Algoritmos de deteco do valor mnimo, multicamada,
comprimento de onda, ngulo e substncias indicados na gura. Experimento realizado
primeiro no modo WIM, em seguida, o mesmo prisma utilizado no modo AIM. Ciclo
experimental iniciando com H2 O, depois Hypo., retorno para H2 O; em seguida P BS e
retorno para H2 O; por m soluo de BSA, remoo de excesso com H2 O, limpeza com
Hypo e retorno para H2 O.
Figura 5.14: Sensorgramas obtidos nos modos AIM (verde) e WIM (azul) para R (verde
superior), n3 (R ) (verde inferior), R (azul superior) e n3 (R ) (azul inferior) para lme
de cobre depositado no substratos BK7. Algoritmos de deteco do valor mnimo, mul-
ticamada, comprimento de onda, ngulo e substncias indicados na gura. Experimento
realizado primeiro no modo WIM, em seguida, o mesmo prisma utilizado no modo AIM.
Ciclo experimental iniciando com H2 O, depois Etanol de alta-concentrao, retorno para
H2 O, em seguida Etanol de baixa-concentrao e retorno para H2 O; por m soluo de
BSA, remoo de excesso com H2 O, limpeza com Etanol e retorno para H2 O.
Figura 5.15: Sensorgramas obtidos nos modos AIM (verde) e WIM (azul) para R (verde
superior), n3 (R ) (verde inferior), R (azul superior) e n3 (R ) (azul inferior) para lme
de cobre depositado no substrato TOPAS. Algoritmos de deteco do valor mnimo, mul-
ticamada, comprimento de onda, ngulo e substncias indicados na gura. Experimento
realizado primeiro no modo WIM, em seguida, o mesmo prisma utilizado no modo AIM.
Ciclo experimental iniciando com H2 O, depois Etanol de alta-concentrao, retorno para
H2 O, em seguida Etanol de baixa-concentrao e retorno para H2 O; por m soluo de
BSA, remoo de excesso com H2 O, limpeza com Etanol e retorno para H2 O.
Figura 5.16: Sensorgramas obtidos nos modos AIM (verde) e WIM (azul) para R (verde
superior), n3 (R ) (verde inferior), R (azul superior) e n3 (R ) (azul inferior) para lme
de cobre depositado no substrato PMMA. Algoritmos de deteco do valor mnimo, mul-
ticamada, comprimento de onda, ngulo e substncias indicados na gura. Experimento
realizado primeiro no modo WIM, em seguida, o mesmo prisma utilizado no modo AIM.
Ciclo experimental iniciando com H2 O, depois Etanol de alta-concentrao, retorno para
H2 O, em seguida Etanol de baixa-concentrao e retorno para H2 O; por m soluo de
BSA, remoo de excesso com H2 O, limpeza com Etanol e retorno para H2 O.
Figura 5.17: Sensorgramas obtidos nos modos AIM (verde) e WIM (azul) para R (verde
superior), n3 (R ) (verde inferior), R (azul superior) e n3 (R ) (azul inferior) para lme de
cobre depositado no substrato PC. Algoritmos de deteco do valor mnimo, multicamada,
comprimento de onda, ngulo e substncias indicados na gura. Experimento realizado
primeiro no modo WIM, em seguida, o mesmo prisma utilizado no modo AIM. Ciclo
experimental iniciando com H2 O, depois Etanol de alta-concentrao, retorno para H2 O,
em seguida Etanol de baixa-concentrao e retorno para H2 O; por m soluo de BSA,
remoo de excesso com H2 O, limpeza com Etanol e retorno para H2 O.
Figura 5.18: Sensorgramas obtidos nos modos AIM (verde) e WIM (azul) para R (verde
superior), n3 (R ) (verde inferior), R (azul superior) e n3 (R ) (azul inferior) para lme
de alumnio depositado no substrato BK7. Algoritmos de deteco do valor mnimo,
multicamada, comprimento de onda, ngulo e substncias indicados na gura. Experimento
realizado primeiro no modo WIM, em seguida, o mesmo prisma utilizado no modo AIM.
Ciclo experimental iniciando com H2 O, depois Etanol de alta-concentrao, retorno para
H2 O, em seguida Etanol de baixa-concentrao e retorno para H2 O; por m soluo de
BSA, remoo de excesso com H2 O, limpeza com Etanol e retorno para H2 O.
Figura 5.19: Sensorgramas obtidos nos modos AIM (verde) e WIM (azul) para R (verde
superior), n3 (R ) (verde inferior), R (azul superior) e n3 (R ) (azul inferior) para lme
de alumnio depositado no substrato TOPAS. Algoritmos de deteco do valor mnimo,
multicamada, comprimento de onda, ngulo e substncias indicados na gura. Experimento
realizado primeiro no modo WIM, em seguida, o mesmo prisma utilizado no modo AIM.
Ciclo experimental iniciando com H2 O, depois Etanol de alta-concentrao, retorno para
H2 O, em seguida Etanol de baixa-concentrao e retorno para H2 O; por m soluo de
BSA, remoo de excesso com H2 O, limpeza com Etanol e retorno para H2 O.
Figura 5.20: Sensorgramas obtidos nos modos AIM (verde) e WIM (azul) para R (verde
superior), n3 (R ) (verde inferior), R (azul superior) e n3 (R ) (azul inferior) para lme
de alumnio depositado no substrato PMMA. Algoritmos de deteco do valor mnimo,
multicamada, comprimento de onda, ngulo e substncias indicados na gura. Experimento
realizado primeiro no modo WIM, em seguida, o mesmo prisma utilizado no modo AIM.
Ciclo experimental iniciando com H2 O, depois Etanol de alta-concentrao, retorno para
H2 O, em seguida Etanol de baixa-concentrao e retorno para H2 O; por m soluo de
BSA, remoo de excesso com H2 O, limpeza com Etanol e retorno para H2 O.
Figura 5.21: Sensorgrama no modo WIM (azul) para R (azul superior) e n3 (R ) (azul
inferior) para lme de alumnio depositado no substrato PC. Algoritmos de deteco do
valor mnimo, multicamada, comprimento de onda, ngulo e substncias indicados na gura.
H2 O 568,5 - -
Etanol 6,5-25% 570 2,341104
Etanol 3,1-12,5% 569,6 5,458106
BSA
Desempenho
Sensibilidade S = - nm/RIU S = - /RIU
Resoluo WIM: R =8,6257 nm AIM: R =-
Instrumental com n = - RIU com n = - RIU
Detectividade D =- RIU 1 D =- RIU 1
5.4 Resumo
Figura 6.1: Classicao dos trs modos de excitao (LSPR, SPR e LSPP) dos plasmons
de superfcie em funo do valor de S e do comprimento de propagao dos SP.
tentes, a depender do substrato dieltrico escolhido. Assim, com o uso de uma fonte de luz
apropriada e um algoritmo concebido adequadamente, este fenmeno permite determinar
de forma simultnea e independente o ndice de refrao e a espessura de uma camada imo-
bilizada na superfcie metlica, alm de suprimir a sensibilidade-cruzada. A formao da
camada de oxidao pode alterar o OP dos lmes de Al [88], todavia a formao de manchas
ou alterao de cor no foi perceptvel.
Finas camadas de ouro so indicadas para mediao de eventos biolgicos em solues
aquosas por serem inertes a formao de camada de oxidao. A excitao dos SP ocorrem
em comprimentos de onda no espectro visvel e em ngulos de fcil instrumentao. A
excitao dos SP em lmes de Au mostrou-se satisfatria em todos os substratos utilizados.
A prata fornece uma curva SPR ntida, isto , com boa profundidade/contraste de
penetrao e possuindo um baixo valor de FWHM. Passado alguns dias aps a deposio,
notou-se a formao de manchas e alterao na cor dos lmes de Ag, caracterizando uma
rpida formao de camada de oxidao. Solues a base de hipoclorito no so indicadas
para deteco com lmes de prata.
Os lmes de cobre apresentaram a maior fragilidade em relao a oxidao, com a forma-
o imediata de camada de oxidao quando em contato com soluo aquosa. Dessa forma,
a aplicao do protocolo experimental para construo do sensorgrama no foi possvel com
uma camada pura de cobre. Para obteno do sensorgrama uma na camada de ouro foi
depositada acima do lme de Cu para previnir a oxidao da camada metlica.
Testes de ligaes reversveis e irreversveis com solues de BSA foram realizados a m
de computar experimentalmente a sensibilidade e detectividade do prisma ptico operando
nos dois modos de interrogao. Em lmes de Au, as solues de BSA apresentaram maior
adeso em ambos os modos de interrogao. No houve adeso em lmes de Cu e Al.
Nos lmes de Ag, em geral, houve baixa adeso de BSA. O primeiro contato entre BSA
e a prata afeta a camada metlica interferindo na qualidade da adeso no segundo contato.
Desse modo, como os primeiros experimentos foram no modo WIM, a adeso da protena
no modo AIM cou prejudicada. No par PMMA/Ag operando no modo espectral, BSA
apresentou uma forte adeso.
Foram analisados as respostas de 16 pares substrato/metal nos modos AIM e WIM,
totalizando 32 possibilidades de sensores SPR. Dentre essas diversas combinaes, as res-
Captulo 6. Concluso e trabalhos futuros 107
posta com BK7 oferecem bons resultados de sensibilidade, limite de detecco e valores de
profundidade/contraste da curva SPR. O uso de polmeros requer o tratamento trmico,
o qual foi mais efetivo em prismas de PMMA. E como previsto no estudo computacional,
o par PC/alumnio no indicado para o desenvolvimento de sensores SPR. No Apn-
dice A - Fabricao do PPBIO encontram-se sumarizados os valores de sensibilidade e
detectividades obtidos com as 32 possibilidades.
Com os resultados obtidos, o objetivo de construir e averiguar experimentalmente a
qualidade da excitao dos plasmons de superfcie em sensores SPR a base do PPBIO foi
alcanado. Todos os aspectos envolvidos no desenvolvimento de um sensor SPR foram
contemplados no trabalho, aspectos que vo da manufatura dos prismas at a programao
dos softwares para extrao dos parmetros.
Figura 6.3: Ilustrao que exemplica a alterao no padro de deposio da camada me-
tlica na superfcie do PPBIO.
Com o uso de um padro de deposio, outro aspecto que caracteriza um trabalho futuro
a investigao de multispot. Trabalhos j iniciados [82] apontam para uma melhora na
Captulo 6. Concluso e trabalhos futuros 109
Fabricao do PPBIO
Injeo
Os prismas foram manufaturados utilizando a mquina de injeo SEMERARO PPIS
50/30T. Como indicado na Figura A.1, a mquina de injeo possui ajustes de opera-
o os quais so regulados para cada polmero utilizado. Em seu funcionamento, os gros
do polmero so inseridos no funil e conduzidos ao cilindro de injeo. Uma rosca conduz
o polmero por este cilindro, que dotado de resistncias eltricas capazes de aquecer o
polmero tornando-o moldvel (uido), at o molde de injeo. O uido polimrico entra
na cavidade do molde e, instantaneamente, a parte extratora deslocada pressionando o
material.
Figura A.1: Estrutura de uma mquina de moldagem por injeo. Os valores representados
na imagem para o TOPAS 5013 so: TF = 100 C, T1 = 230 260 C, T2 = 240 260 C,
T3 = 250 280 C, T4 = 260 290 C e TN = TM = 240 300 C.
Apndice A. Fabricao do PPBIO 111
Molde
Para manufatura do PPBIO os polmeros foram injetados no molde usinado na CNC Har-
dinge XR600 5AX comercializada pela empresa Ergomat. O desenho do molde completo
encontra-se na Figura A.3. As etapas para construo do molde so:
Figura A.2: Imagem tridimensional ilustrando todas as partes (placas, postio e demais
itens) que compem o molde.
Apndice A. Fabricao do PPBIO 113
Polimento
O polimento melhora a excitao dos plasmons de superfcie, enfatizando a profundiade/contraste
da curva SPR, reduzindo as perdas de transmitncia. Alm disso, o uso de superfcies po-
lidas minimiza o aparecimento dos plasmons radiativos [33, 85, 86], os quais surgem na
exitao dos SPs em superfcies com elevados valores de rugossidade (>10 ).
Como apresentado na Figura A.3, exemplos de prismas de BK7 com superfcies contendo
muitos arranhes foram utilizados para excitao dos SPs e os resultados foram comparados
com prismas de TOPAS com superfcies contendo menos arranhes, i.e., mais polidas. Nota-
se a excitao simultnea dos SPs-radiativos e no-radiativos mais evidentes nas superfcies
no-polidas, devido principalmente ao ganho de momento dos ftons incidentes devido a
rugossidade da superfcie.
O processo de polimento dos prismas ocorreu em estgios de polimento na ordem de 5m,
3m, 1m e 0,3m, usando lixas de xido de alumnio e carboneto de silcio comercializadas
pela Thorlabs.
Annealing
A etapa nal da fabricao do PPBIO antes da deposio do lme metlico o tratamento
trmico, o annealing. Utilizou-se uma estufa para realizar o recozimento dos prisma. Deta-
lhes dos procedimentos e exemplos de prisma com e sem annealing encontram-se no Captulo
4 desse trabalho.
Os lmes metlicos foram depositados com o sistema de alto vcuo para a gerao de pelcu-
las nas Cryofox Explorer 600LT, comercializado pela empresa Polyteknik. Para deposio
do lme metlico, faz-se necessrio a limpeza da superfcie do prisma. O equipamento possi-
bilita o processo de deposio de lmes nos por meio das tcnicas de magnetron sputtering
e/ou por meio de e-beam.
Magnetron sputtering
A deposio catdica atravs da tcnica de Sputering um processo no qual tomos de um
material slido (alvo) so extrados bombardeando a superfcie desse material com partculas
de alta energia, que em geral so ons de um gs inerte ionizado [89]. O material alvo serve
como catodo aplicando-lhe uma tenso negativa, enquanto as parades da cmara funcionam
como anodo. Evacua-se a cmara com o uso de bombas de vcuo. Em seguida, o gs inerte
(usualmente Argnio) injetado e atravs de descargas eltricas o plasma gerado. Os ons
oriundos do plasma bombardeiam a superfcie do alvo, e por transferncia de momento,
pulveriza o PPBIO com tomos do material alvo [89]. Os tomos pulverizados atravessam
o plasma e atingem a superfcie do PPBIO, onde podem se condensar e formar o lme
metlico.
Aumentar a taxa de ionizao dos ons do gs inerte durante o processo de sputtering,
para atingir melhores condies de pulverizao, com o uso de campos magnticos dene
o magnetron sputtering [89]. Para isso, ms so colocados por trs do catodo (material
Apndice B. Deposio de lmes nos 116
alvo) com o objetivo de connar os eltrons prximos a superfcie do alvo devido ao campo
magntico. Um esquema para o magnetron sputtering apresentado na Figura B.1.
A taxa de sputtering, e consequentemente da espessura do lme formado na superfcie do
prisma, dependente do tempo e da corrente utilizada na pulverizao. As curvas de ajuste
espessura vs. corrente obtidas para os magnetrons AC e DC operando a uma potncia de
200 W encontram-se na Figura B.2.
Figura B.2: Curva de calibrao da espessura do lme no depositado no PPBIO usando os
magnetrons AC e DC. O modo DC mais eciente do que o modo AC por depositar mais
material em menos tempo.
Apndice B. Deposio de lmes nos 117
E-beam
A evaporao por feixe de eltrons (e-beam ) uma tcnica na qual um intenso feixe de
eltrons gerado a partir de um lamento de tungstnio conduzido por campos magnticos
bombardear um material alvo (exemplo: cadinhos cheios de Al ou Si). Esse bombardeamento
acontece em ambiente de vcuo (cmara). Em um determinado momento, a superfcie do
material alvo ir aquecer (spot ) e os tomos da superfcie tero energia suciente para deix-
la [90]. Assim, esses tomos atravessam a cmara de vcuo e atingem a superfcie do PPBIO
onde podem se condensar e formar o lme metlico.
Um esquema para o e-beam apresentado na Figura B.3. O equipamento Cryofox possui
uma micro-balana de cristal de quartz (QCM, sigla em ingls) responsvel por medir a
espessura da camada depositada. Existe uma relao entre o que depositado na QCM e o
que efetivamente depositado no prisma, originando um erro mximo de 5 nm no valor da
espessura da camada formada na superfcie do PPBIO.
Figura B.3: Esquema para um sistema de deposio atravs da evaporao por feixe de
eltrons (e-beam ).
Apndice C
Os lmes nos foram analisados utilizando o elipsometro SENPRO e SENadv 400 da em-
presa Sentech e atravs de um microscpio de fora atmica (AFM, sigla em ingls) e de
varredura eletrnica (SEM, sigla em ingls).
Elipsometria
A elipsometria mede a mudana na polarizao da luz reetida ou transmitida de um ma-
terial. Em especial, est interessada como as componentes de polarizao p e s mudam
uma em relao a outra aps a reexo ou transmisso. Assim, uma das componentes
reetida/transmitida a partir do material e a polarizao de sada medida.
A mudana de polarizao representada em termos da razo de amplitude () e da
diferena de fase () entre as componentes s e p. A mudana de polarizao () comumente
expressa por [91]:
= tan()ei (C.1)
Figura C.1: Congurao tpica de um elipsmetro que utiliza a luz reetida da superfcie
do material e a mudana de polarizao. Fonte [91]
Microscopia
Alm da elipsometria, imagens obtidas com microscpios SEM e AFM completam a carac-
terizao dos lmes metlicos depositados no PPBIO.
Como apresentado na Figura C.3, diferente de um microscpio ptico convencional que
ilumina o material, tipicamente com uma luz branca, um microscpio eletrnico de varredura
utiliza um feixe de eltrons para varrer a superfcie da amostra, gerando eltrons secundrios
que so captados por um sensor. O sinal capturado convertido em valores de pixel gerando
uma imagem topogrca da superfcie do material.
Um microscpio de fora atmica, por sua vez, no possui lentes que focalizam a luz
ou feixe de eltrons como nos microscpios pticos e eletrnicos, respectivamente. O AFM
constri a imagem topogrca atravs de uma sonda, colocada em contato com a amostra,
que percorre varrendo toda a superfcie do material.
A tecnologia por varredura de sonda usada pelo AFM permite analisar amostras biolgi-
Apndice C. Caracterizao de lmes nos 120
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