ENFERMEDAD

PERIODONTAL CULTIVO
Y ANTIBIOGRAMA.
Microbiologa y Laboratorio
Contenido
1. Introduccin.................................................................................................... 2
2. Desarrollo....................................................................................................... 2
2.1 La Enfermedad Periodontal.........................................................................2
2.2 La Toma de Muestra................................................................................... 5
2.3 Medios de Cultivo...................................................................................... 7
2.4 Siembra................................................................................................. 10
2.5 Antibiograma........................................................................................... 13
3. Conclusin.................................................................................................... 20
Bibliografa........................................................................................................ 21

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 1. Introduccin

La Enfermedad Periodontal es una enfermedad infecciosa inflamatoria que dependiendo

del nivel de avance de esta puede comprometer los tejidos de soporte del diente pudiendo
llevar a la prdida total del diente, con un buen diagnstico y correcto tratamiento
podemos hacer que nuestro paciente mejore considerablemente, podemos determinar
cul es el mejor tratamiento a realizar por medio del cultivo de las bacterias de la
enfermedad periodontal del paciente y con su respectivo antibiograma determinaremos
que frmaco puede ayudarnos para el correcto tratamiento de esta enfermedad, existen
diferentes medios de cultivo de bacterias as como de mtodos para realizar el
antibiograma, el xito de estos depender de la correcta toma de muestra de las bacterias
de la boca del paciente, A continuacin se hablara sobre la correcta toma de muestra,
Medios de cultivo y Antibiograma para la enfermedad periodontal.

2. Desarrollo

2.1 La Enfermedad Periodontal.

Las enfermedades periodontales son un conjuntos de enfermedades como es la Gingivitis

(Cuando la enfermedad est limitada a las encas) y Periodontitis (Cuando ya se ha
extendido a tejidos ms profundos) estas enfermedades son producidas por bacterias que
forman parte de la placa bacteriana, factores predisponentes del hospedador como
pueden ser Diabetes, mala higiene oral, el hbito de fumar, entre otras cosas; y
microbianos que influyen en la patognesis de la enfermedad. (Bascones Martnez A,
2005)

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Gingivitis: Se Produce inflamacin y enrojecimiento de las encas, pudiendo sangrar ms
fcilmente, esta enfermedad periodontal no causa prdida del hueso alveolar ni del tejido
de soporte.

En la pubertad se presenta una prevalencia elevada de gingivitis. Algunos autores

muestran un aumento en la proporcin de anaerobios gramnegativos. Durante el
embarazo se produce un aumento de progesterona que inducira una modificacin en la
composicin bacteriana de la biopelicula dental. En ocasiones la enfermedad gingival se
ha asociado con un control inadecuado de la biopelicula dental, agravado por hormonas
esteroides.

Gingivitis ulceronecrosante: es una enfermedad inflamatoria y destructiva de la enca

asociada con la biopelicula dental. La enca se ulcera, se necrosa y deja crteres que se
cubren de una exudado fibroso que ha sido denominado seudomembrana. La enfermedad
puede afectar una o varias piezas dentarias.

Caractersticas:

Dolor

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 Hemorragia
Ulceracin
Halitosis
A veces fiebre

Periodontitis (o Piorrea): Cuando la gingivitis no es

tratada a tiempo puede convertirse en una periodontitis, Las bacterias anaerobias
gramnegativas ms importantes en el desarrollo de la periodontis son el Actinobacillus
actinomycetemcomitans, Porphyro-monas gingivalis, Prevotella intermedia y Tannerella
forsythensis, Las encas se separan de los dientes y forman bolas periodontales, Las
toxinas de las bacterias y la respuesta natural del cuerpo contra la infeccin empiezan a
destruir el hueso alveolar y el tejido conectivo que mantienen a los dientes en su lugar. Si
la periodontitis no es tratada a tiempo los dientes pueden perderse.

(Departamento de Salud y servicios humanos, 2013)

Periodontitis cronica: Las principales caracteristicas son:

La biopelicula supragengival abundante

La microbiota subgingival prevalente es: Anaerobios de los cuales son gram,
espiroquetas y muy escasos cocos

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Los estudios de los microorganismos subgingivales predominantes en las lesiones de la
periodontitis cronica han revelado la gran diversidad microbiana (Naranja,rojo, purpura
azul,verde)

Peridontitis agresiva: Es una infeccion que ataca a sitios periodontales multiples o

individuales dentro de la cavidad bucal. Los lipopolisacarido es una endotoxina que
estimula a los macrofagos a producir Il y el factor necrosis tumoral, factores que
involucran a la inflamacion de tejidos y reabsorcion osea . los mcrofagos que migran a los
sitios infectados con Aa sera estimulados a producir citocinas que estaran involucradas en
la inflamacion gingival y la reabsorcion del hueso

2.2 La Toma de Muestra.

La toma de muestra de las bacterias presentes en la enfermedad periodontal es muy

importante y debe de estar bien realizada ya que de esta depender el futuro anlisis de
laboratorio y antibiograma para el diagnstico y tratamiento de la enfermedad, para
realizarla debemos de contar siempre con nuestros elementos de proteccin como son los
guantes estriles, Gafas de proteccin, Mandil, Mascarilla y Gorro. (P., 2004)

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 Para la toma de la muestra microbiolgica se elimina de la biopelcula
supragingival con curetas.

se frota la superficie dentaria con gasa.

se asla el sector con rollos de algodn estril.
se toma biopelcula subgingival con 2 o 3 puntas de papel estriles nmero 30-35
insertadas durante 15-30 segundos en la bolsa periodontal.

Luego se las coloca en un tubo que contiene medio de transporte VMGAIII para
ser procesado en el laboratorio.

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 El medio VMGAIII es un medio de transporte reducido que mantiene la viabilidad de los
microorganismos.
Una vez en el laboratorio las muestras se dispersan en un sonieador, se distribuyen en
placas de Petri que contienen medios selectivos y no selectivos, las placas son cultivadas
bajo condiciones aerbicas y anaerbicas.
Luego del periodo de incubacin, las colonias son aisladas, repicadas e identificadas
utilizando:
Morfologa de la colonia
Tincin de Gram
Pruebas bioqumicas
Anlisis cromatogrficos de los productos metabolizados

Como aspectos negativos, cabe destacar que existen bacterias ntimamente relacionadas
con la etiologa de la periodontitis que no son cultivables y, por tanto, no detectables por
medio de esta tcnica. (Negroni, 2009)

2.3 Medios de Cultivo.

Un medio de cultivo es aquel que contiene los nutrientes y factores de crecimiento

necesarios para que los microorganismos puedan crecer y formar colonias, a este
crecimiento de microorganismo se los llama cultivo, Debe de estar exento de todo
microorganismo contaminante. (Gonzlez, 2012)

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Con nuestro paciente de enfermedad periodontal utilizamos como medio de cultivo al
Agar-Sangre el cul se explicar ms adelante.

Las condiciones generales para un medio de cultivo es que debe de tener disponibilidad
de nutrientes adecuados, consistencia adecuada del medio, presencia o ausencia de
oxgeno y otros gases, condiciones adecuadas de humedad, luz ambiental, pH,
temperatura y esterilidad del medio.

Tipos de medios de cultivo:

Segn su estado Fsico:

Slidos: Llamados generalmente Agar Existen varios tipos de Agar, como por
ejemplo el Agar-Sangre que est compuesto por sangre de seres vivos al 5 10%,
El Agar chocolate que es un tipo de agar sangre al cual las clulas sanguneas
fueron lisadas por calentamiento a 56, Agar Thayer-Martin y Agar TCBS.

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 Lquidos: denominados caldos, constituidos por nutrientes en solucin acuosa,
por lo general usados para el mantenimiento de los microorganismos, ej.: caldo
nutritivo, infusin cerebro-corazn.

Semislidos: Medios de cultivo lquido con agar al 0.3% o 0.5% usado para
determinar la motilidad de los microorganismos.

Segn su utilizacin:

Medios comunes: Poseen componentes mnimos para que pueda producirse el

crecimiento de bacterias, como es el agar nutritivo o agar comn.
Medios de enriquecimiento: contiene nutrientes necesarios para microorganismo
exigentes, se utiliza para el cultivo de diferentes tipos de microorganismo en un
mismo medio.
Medios Selectivos: Favorecen el crecimiento de ciertos microorganismos, facilita
nutricionalmente el crecimiento de una poblacin microbiana especfica.
Medios Inhibidores: Las sustancias aadidas impiden e crecimiento de los
microorganismos.
Medios Diferenciales: Ponen en evidencia caractersticas bioqumicas que ayudan
a identificar la especie o genero del microorganismo. (Negroni, 2009)
Medios de Identificacin: Son los medios de cultivos que nos ayudan a identificar
determinadas caractersticas para reconocer la identidad de un microorganismo.

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 Medios de Transporte: Medios que aseguran la viabilidad de los microorganismos
desde la toma de la muestra hasta su procesamiento en el laboratorio, son medios
poco nutritivos, semislidos o lquidos que no deben potenciar el crecimiento
microbiano, evita reacciones enzimticas autodestructivas y la oxidacin, como
ejemplo est el tioglicolato, solucin de Ringer, medio de Stuart. (Hylary, 2014)
Medios Especiales: Para microorganismos anaerobios se utiliza la jarra de
anaerobiosis con generador de gas desechable, jarra de evacuacin-reemplazo;
para el cultivo de hongos estn los medios enriquecidos, medios con o son el
agregado de la sangre, medios con y sin cicloheximida, con y sin agentes
antibacterianos; Los virus se cultivan en huevos embrionarios y animales de
experimentacin. (Negroni, 2009)

Por su origen:

Medios Naturales: Se obtienen a partir de sustancias naturales animales o

vegetales como son suero, leche, entre otros.
Medios sintticos o artificiales: Sus componentes estn qumicamente definidos y
contienen nutrientes que permiten el crecimiento de microorganismos sin darle
ventajas especiales a ninguno.
Medios semisintticos o completos: Cuando se agregan factores de crecimiento a
los medios sintticos, su composicin qumica no se conoce con exactitud, se lo
utiliza para el cultivo de microorganismos hetertrofos. (Negroni, 2009)

2.4 Siembra

Para sembrar un microorganismo debemos de colocarlo en un ambiente artificial

apropiado para que se lleve a cabo su metabolismo, desarrollo y reproduccin; Para
cultivar a los microorganismos es indispensable que se lo haga en rigurosas condiciones
de asepsia para que as los microorganismos contaminantes propios del medio de cultivo
no se reproduzcan en la siembra, para la incubacin de los microorganismo es necesaria
una buena temperatura ambiental, la mayora de los microorganismos se reproducen a
35C, los hongos crecen a 30C, los hongos filamentosos se demoran en incubar entre 15
30 das y los hongos levaduriformes se demoran entre 24 48 h; las bacterias

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anaerobias se incuban durante 48h a 35 37C y re incubarse 2-4 das ms para que los
microorganismos de crecimiento lento formen colonias.

Aislamiento:

Los cultivos puros nos permiten realizar pruebas de identificacin o tipificacin y

antibiogramas, para aislar las bacterias a las que queremos estudiar existen varios
mtodos como son: Siembra por agotamiento por estras, siembra por diseminacin en
superficie, siembra de disoluciones seriadas.

Siembra por agotamiento por estras: Primero se debe de siempre esterilizar la asa
bacteriolgica, luego se recoge la muestra de los microorganismos a cultivar, las
bacterias en el asa bacteriolgica pasan a travs de estras al medio slido en la
caja de Petri, los microorganismos en las estras iniciales presentan un crecimiento
confluyente mientras que las ltimas estras se desarrollan colonias bien aisladas.

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 Siembra por diseminacin en superficie: Se coloca una gota (0.005ml) del inculo
en el centro del medio de cultivo en una placa Petri, con la esptula de Drigalsky
se hacen movimientos hacia adelante y hacia atrs mientras se gira la placa.

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 Siembra de diluciones seriadas: Se realizan diluciones sucesivas de la muestra
para despus sembrar las cantidades conocidas de las disoluciones en la caja
Petri, esto permite conocer la cantidad de microorganismos viables. (Alfaro, 2004)

2.5 Antibiograma

El antibiograma o pruebas de sensibilidad son un procedimiento que se realiza en el

laboratorio microbiolgico clnico en el cul se evala la respuesta del microorganismo a
uno o varios antimicrobianos, el antibiograma mide la actividad in-vitro de un
antimicrobiano frente a un determinado microorganismo y su capacidad para inhibir el

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crecimiento de este, De esta manera nos ofrece elementos objetivos de actuacin en los
tratamientos empricos.

Es necesario cuando:

Cuando se desconoce la sensibilidad de los microorganismos a determinados

antimicrobianos.
Como vigilancia epidemiolgica, para detectar e informar la evolucin de
resistencias conocidas.
En infecciones microbianas graves en las que se compromete la vida del paciente.
Cuando el cuadro clnico no responde al tratamiento antimicrobiano clsico.

En el caso de nuestro Antibiograma se utiliz el mtodo de difusin en agar.

Mtodos de Antibiograma:

Mtodo de dilucin en caldo:

Se la realiza en tubo o en microplaca, es un mtodo cuantitativo, de referencia que

permite determinar la CIM (Concentracin inhibidora mnima) y CBM (Concentracin
bactericida mnima)

La CIM es la menor concertacin de una gama de diluciones de antibiticos, que produce

una inhibicin de cualquier tipo de crecimiento bactriano que sea visible. Nos ayuda a
establecer una escala de accin de antibiticos de diferentes tipos de bacterias.

La CBM es la menor concentracin del agente antimicrobiano que permite sobrevivir al

menos del 0.1% del inculo original.

Tcnica:

Se realizan diluciones seriadas del agente antimicrobiano a probar desde 100 ug/ml hasta
0.4 ug/ml en una serie de 10 tubos que contengan igual cantidad de caldo de Mller-
Hinton, el tubo 10 no tiene antibitico y sirve de referencia para el control de crecimiento.

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Se debe de observar la turbidez del tubo sin antibitico y compararla con el tubo que
menor turbidez tenga, el tubo anterior a este (Sin turbidez) dar el CIM.

Microdilucin:
Similares al mtodo de disolucin en caldo pero se la realiza en microplacas y el
inculo se aade con pipetas, los resultados se miden al observar si hay presencia
o no de sedimentos, siempre comparando con el pocillo que no tiene antibitico.

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 Mtodo de difusin en Agar:

Puede usarse como mtodo cuantitivo, semicuantitativo o cualitativo.

Tcnica:

De un cultivo del microorganismo a estudiar se toman de 4 5 colonias y se las suspende

en caldo Mller- Hinton o hidrolizado de soja y casena, se la incuba de 2 5 horas hasta
que tenga una turbidez final de 0.5 de la escala de Mc Farland.

Inmediatamente despus en una placa con agar de Mller Hinton se sembrar la

muestra embebiendo un hisopo de algodn estril en el inculo y dejando los excesos del
lquido contra las paredes del tubo, Se estira sobre la superficie del agar en 3 direcciones
cubriendo toda su superficie y se deja secar de 3 a 5 minutos.

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 Aplicacin del inculo sobre superficie de agar Mller- Hinton

Dejar secar agar de 3-5min

Con una pinza estril se colocan los discos embebidos con antimicrobianos, en este caso
se colocaron 7.

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Se puede observar la abreviatura del antimicrobiano y serie a la que pertenece
(Fosfomicina)

Discos con Antimicrobianos

Colocacin de discos antimicrobianos.

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Se lo deja incubar a 37C durante 12 a 18h y una vez pasado el tiempo se observa e
interpreta los halos de inhibicin que han aparecido alrededor de los discos con
antimicrobiano.

Los halos de Inhibicin nos dicen si el microorganismo es Sensible, Resistente o

Intermedio.

Sensible S: Cuando no hay desarrollo microbiano alrededor del disco, el antimicrobiano

puede usarse en dosis teraputicas.

Resistente R: Cuando hay crecimiento microbiano alrededor del disco, no se debe de

emplear ese antimicrobiano.

Intermedio: Cuando el halo de inhibicin es mayor que R pero menor que S, se puede
usar el antimicrobiano en dosis altas siempre y cuando no produzca efectos secundarios.

Los halos de inhibicin de los discos antibacterianos no siempre indican una determinada
actividad antibacteriana, depende del dimetro de estos halos de inhibicin en referencia
a los valores normales que dan las casas comerciales que fabrican los discos
antibacterianos.

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 Mtodo de E-test:

Es un mtodo que se est utilizando recientemente y proviene de una combinacin de

mtodos anteriores, Es una tcnica cuantitativa mediante la cual obtenemos una lectura
directa de concentracin inhibitoria mnima (CMI) en g/ml, debido a que se utiliza tiras
plsticas impregnadas en concentraciones crecientes de antibitico indicadas en una
escala graduada sobre la propia tira.

Una de las ventajas que tiene este mtodo es que se puede estudiar cualquier tipo de
microorganismo, aerobio o anaerobio, o los que tengan requerimientos especiales para
crecer.

El microorganismo que se va a estudiar se inocula en una placa y sobre ella se deposita

la tira del o los antibiticos a ensayar. Despus de la incubacin de 16 a 24 horas a 35C

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se observan las placas y se valora la zona de inhibicin alrededor de la tira, la CMI se lee
directamente observando el punto ms bajo de la elipse que presenta crecimiento.

3. Conclusin

La enfermedad periodontal debe de ser tratada a tiempo para evitar agravacin de esta y
por consecuencia la prdida de los dientes as como complicaciones en el estado del
paciente, para hacer un buen diagnstico y tratamiento de la enfermedad periodontal que
posee nuestro paciente es conveniente realizar un cultivo de la enfermedad y realizar su
respectivo antibiograma para que as determinemos el frmaco correcto que se deber de
administrar, as evitamos administrar otros frmacos que no beneficiaran a la salud del
paciente, pudiendo resultar hasta contraproducentes; Se debe en un principio de
asegurarnos de tomar bien la muestra del paciente pudiendo hacerlo con conos de papel
o curetas, se los coloca en tioglicolato como medio de transporte y llevarlos al laboratorio
en donde se proceder con el cultivo y antibiograma; el tiempo ideal para llevar esta
muestra es mximo 3 horas, La siembra y cultivo se lo realizo en un medio de Agar
sangre en donde se sembraron los microorganismos en un mtodo por estras;
Procediendo con el antibiograma el cul fue realizado por el mtodo de difusin en Agar;
Antimicrobianos como las Tetraciclinas, Clindamicinas, Azitromicina, Espiramicina han
resultado ser tiles en el tratamiento de enfermedades periodontales.

21
Bibliografa
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script=sci_arttext&pid=S1699-65852004000100004

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