Sunteți pe pagina 1din 253

CORELATII CLINICE IN CORELATII CLINICE IN

INTERPRETAREA INTERPRETAREA
PARAMETRILOR BIOCHIMICI PARAMETRILOR BIOCHIMICI

Sub redactia LILIANA FOIA Sub redactia LILIANA FOIA

EDITURA JUNIMEA EDITURA JUNIMEA


IAI 2010 IAI 2010
Tehnoredactor: Marius Cristian Toma Tehnoredactor: Marius Cristian Toma

Descrierea CIP a Bibliotecii Nationale A Romaniei Descrierea CIP a Bibliotecii Nationale A Romaniei
Corelatii clinice in interpretarea parametrilor biochimici /red.: Corelatii clinice in interpretarea parametrilor biochimici /red.:
Liliana Foia-Iasi : Junimea,2010 Liliana Foia-Iasi : Junimea,2010
ISBN 978-973-37-1483-5 ISBN 978-973-37-1483-5

Foia Liliana (red.) Foia Liliana (red.)

616 616

LILIANA FOIA LILIANA FOIA


EDITURA JUNIMEA, IAI ROMNIA EDITURA JUNIMEA, IAI ROMNIA

EDITURA JUNIMEA EDITURA JUNIMEA


ACREDITARE CNCSIS NR. 97/2010 ACREDITARE CNCSIS NR. 97/2010
AUTORI AUTORI

Liliana FOIA Liliana FOIA


Profesor universitar Disciplina Chimie i Biochimie a Cavitii Orale Profesor universitar Disciplina Chimie i Biochimie a Cavitii Orale
UMF Gr. T. Popa Iai UMF Gr. T. Popa Iai
Medic primar Medicina de Laborator Medic primar Medicina de Laborator
Doctor n tiine medicale Doctor n tiine medicale

Florina Mihaela FILIP-CIUBOTARU Florina Mihaela FILIP-CIUBOTARU


ef lucrri Disciplina de Medicin de Familie Aduli ef lucrri Disciplina de Medicin de Familie Aduli
UMF Gr. T. Popa Iai UMF Gr. T. Popa Iai
Medic primar Medicina Interna Medic primar Medicina Interna
Medic primar Medicina Muncii Medic primar Medicina Muncii
Medic specialist Medicin de Familie Medic specialist Medicin de Familie
Doctor n tiine medicale Doctor n tiine medicale

Ancuta GORIUC Ancuta GORIUC


Doctorand UMF Gr. T. Popa Iai Doctorand UMF Gr. T. Popa Iai
Medic in specialitatea Stomatologie generala Medic in specialitatea Stomatologie generala

Stefania RACOVITA Stefania RACOVITA


Cercetator tiinific Cercetator tiinific
Institutul de Chimie Macromolecular Petru Poni Iai Institutul de Chimie Macromolecular Petru Poni Iai
Doctor n chimie Doctor n chimie

Vasilica TOMA Vasilica TOMA


ef lucrri Disciplina de Pedodonie ef lucrri Disciplina de Pedodonie
UMF Gr. T. Popa Iai UMF Gr. T. Popa Iai
Medic primar Stomatologie general Medic primar Stomatologie general
Medic specialist Ortodonie i Ortopedie Facial Medic specialist Ortodonie i Ortopedie Facial
Doctor n tiine medicale Doctor n tiine medicale

Didona UNGUREANU Didona UNGUREANU


Confereniar universitar Disciplina de Biochimie Confereniar universitar Disciplina de Biochimie
UMF Gr. T. Popa Iai UMF Gr. T. Popa Iai
Medic primar Medicina de Laborator Medic primar Medicina de Laborator
Doctor n tiine medicale Doctor n tiine medicale
Colaboratori Colaboratori

Alina ANDONE, Medic rezident Medicin de laborator Spitalul Sf. Spiridon Iai Alina ANDONE, Medic rezident Medicin de laborator Spitalul Sf. Spiridon Iai
Monica BEJINARIU, Chimist Principal Laboratorul de Biochimie, Spitalul Sf. Monica BEJINARIU, Chimist Principal Laboratorul de Biochimie, Spitalul Sf.
Spiridon Iai Spiridon Iai
Cristina CECATI, Chimist Principal Laboratorul de Biochimie, Spitalul Sf. Spiridon Cristina CECATI, Chimist Principal Laboratorul de Biochimie, Spitalul Sf. Spiridon
Iai Iai
Ioana CHIULU, Medic rezident Medicin de laborator Spitalul Sf. Spiridon Iai Ioana CHIULU, Medic rezident Medicin de laborator Spitalul Sf. Spiridon Iai
Ancua LUPU, Medic rezident Medicin de laborator Spitalul Sf. Spiridon Iai Ancua LUPU, Medic rezident Medicin de laborator Spitalul Sf. Spiridon Iai
Vlad PARASCHIV, Medic rezident Medicin de laborator Spitalul Sf. Spiridon Iai Vlad PARASCHIV, Medic rezident Medicin de laborator Spitalul Sf. Spiridon Iai
Alina VERINGU, Medic rezident Medicin de laborator Spitalul Sf. Spiridon Iai Alina VERINGU, Medic rezident Medicin de laborator Spitalul Sf. Spiridon Iai
Cuvnt nainte Cuvnt nainte

Biochimia, fie ea analitic, descriptiv sau clinic este doar una, Biochimia, fie ea analitic, descriptiv sau clinic este doar una,
cea aplicat, poate fi doar scris diferit dup cum se adreseaz cea aplicat, poate fi doar scris diferit dup cum se adreseaz
studenilor, biochimitilor, cercettorilor sau medicilor curani i de studenilor, biochimitilor, cercettorilor sau medicilor curani i de
laborator. laborator.
Pornind de la premize practice i realiste, care atest Pornind de la premize practice i realiste, care atest
semnificaia covritoare a rezultatelor analizelor de laborator, precum semnificaia covritoare a rezultatelor analizelor de laborator, precum
i a interpretrii corecte a acestora n cadrul oricrui proces de i a interpretrii corecte a acestora n cadrul oricrui proces de
diagnostic i monitorizare a terapiei pacienilor, lucrarea de fa ofer diagnostic i monitorizare a terapiei pacienilor, lucrarea de fa ofer
celor interesai, date att despre noiuni fundamentale de biochimie ct celor interesai, date att despre noiuni fundamentale de biochimie ct
i tehnici de analiz a parametrilor de laborator n scop diagnostic. i tehnici de analiz a parametrilor de laborator n scop diagnostic.
Aspectul practic vine i din capitolul n care sunt prezentate Aspectul practic vine i din capitolul n care sunt prezentate
modalitile de prelevare, prelucrare i investigare a fluidelor biologice, modalitile de prelevare, prelucrare i investigare a fluidelor biologice,
extins nu doar la nivel sistemic, dar i la nivelul cavitii orale. extins nu doar la nivel sistemic, dar i la nivelul cavitii orale.
In construirea acestui volum ne-am cluzit dup curricula de In construirea acestui volum ne-am cluzit dup curricula de
predare a Universitii de Medicin i Farmacie Gr. T. Popa Iai, cu predare a Universitii de Medicin i Farmacie Gr. T. Popa Iai, cu
extinderea orizontului de informaie dup domeniile actuale de interes extinderea orizontului de informaie dup domeniile actuale de interes
medical, testele gril special concepute la sfritul fiecrui capitol medical, testele gril special concepute la sfritul fiecrui capitol
lrgind aria de recomandare a crii. lrgind aria de recomandare a crii.
Interpretrile i comentariile clinice respect un tipar general, Interpretrile i comentariile clinice respect un tipar general,
rezultat al corelrii experienei didactice i profesionale a autorilor cu rezultat al corelrii experienei didactice i profesionale a autorilor cu
datele de referin din literatura de specialitate. datele de referin din literatura de specialitate.
Abordarea interdisciplinar a temelor prezentate a constituit Abordarea interdisciplinar a temelor prezentate a constituit
suportul de baz, la realizarea acestei lucrri contribuind att medici suportul de baz, la realizarea acestei lucrri contribuind att medici
specialiti n medicin de laborator ct i medici stomatologi, cercettori specialiti n medicin de laborator ct i medici stomatologi, cercettori
i doctoranzi. i doctoranzi.
Invitm cititorii s poposeasc i s osteneasc un strop de timp Invitm cititorii s poposeasc i s osteneasc un strop de timp
ntre paginile crii, pentru a cuprinde n fapte, cuvintele aternute de ntre paginile crii, pentru a cuprinde n fapte, cuvintele aternute de
cei care s-au straduit s aeze managementul diagnosticului de cei care s-au straduit s aeze managementul diagnosticului de
laborator, pe baze mai puin empirice, clinice i tiinifice. laborator, pe baze mai puin empirice, clinice i tiinifice.

Autorii Autorii
CUPRINS CUPRINS

CAPITOLUL 1 - Msuri de protecie n laboratorul de biochimie 3 CAPITOLUL 1 - Msuri de protecie n laboratorul de biochimie 3
(Liliana Foia, Ancua Goriuc) (Liliana Foia, Ancua Goriuc)
CAPITOLUL 2 - Cunotine fundamentale de biochimie descriptiv i CAPITOLUL 2 - Cunotine fundamentale de biochimie descriptiv i
biologie a fluidelor de investigaie 6 biologie a fluidelor de investigaie 6
(Liliana Foia, Vasilica Toma) (Liliana Foia, Vasilica Toma)
2.1. Apa, pH, acizi, baze ............................................... 6 2.1. Apa, pH, acizi, baze ............................................... 6
2.2. Hidroliza srurilor ........................................................ 10 2.2. Hidroliza srurilor ........................................................ 10
2.3. Sisteme tampon .................................................. 12 2.3. Sisteme tampon .................................................. 12
2.4. Prelevarea i prelucrarea produselor biologice ........ 13 2.4. Prelevarea i prelucrarea produselor biologice ........ 13
o Snge ....................................................................... 13 o Snge ....................................................................... 13
o Urin ......................................................................... 15 o Urin ......................................................................... 15
o Saliv ........................................................................ 16 o Saliv ........................................................................ 16
o Fluid gingival ............................................................. 18 o Fluid gingival ............................................................. 18
2.5. MCQ ............................................................................. 21 2.5. MCQ ............................................................................. 21

CAPITOLUL 3 - Tehnici de analiz a parametrilor biologici i biochimici CAPITOLUL 3 - Tehnici de analiz a parametrilor biologici i biochimici
n laborator 23 n laborator 23
(Ancua Goriuc, tefania Racovi) (Ancua Goriuc, tefania Racovi)
3.1. Spectrofotometria ....................................................... 23 3.1. Spectrofotometria ....................................................... 23
3.2. Electroforeza ............................................................... 26 3.2. Electroforeza ............................................................... 26
3.3. ELISA ............................................................................ 30 3.3. ELISA ............................................................................ 30
3.4. Citometria n flux (FCM) .............................................. 36 3.4. Citometria n flux (FCM) .............................................. 36

CAPITOLUL 4 - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 45 CAPITOLUL 4 - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 45
(Liliana Foia, Vasilica Toma) (Liliana Foia, Vasilica Toma)
4.1. Dozarea amilazei serice Amy ............................ 45 4.1. Dozarea amilazei serice Amy ............................ 45
4.2. Dozarea transaminazelor: ALT si AST (GPT si GOT).. 52 4.2. Dozarea transaminazelor: ALT si AST (GPT si GOT).. 52
4.3. Dozarea fosfatazei alcaline ALP .......................... 70 4.3. Dozarea fosfatazei alcaline ALP .......................... 70
4.4. Dozarea gamaglutamil transferazei GGT .............. 77 4.4. Dozarea gamaglutamil transferazei GGT .............. 77
4.5. Dozarea lactat dehidrogenazei LDH .................... 84 4.5. Dozarea lactat dehidrogenazei LDH .................... 84
4.6. Dozarea creatinkinazei CK ..................................... 91 4.6. Dozarea creatinkinazei CK ..................................... 91

CAPITOLUL 5 - Explorarea metabolismului glucidic CAPITOLUL 5 - Explorarea metabolismului glucidic


(Liliana Foia, Didona Ungureanu) 99 (Liliana Foia, Didona Ungureanu) 99
5.1. Determinarea glicemiei .......................................... 99 5.1. Determinarea glicemiei .......................................... 99
5.2. Determinri calitative i cantitative 5.2. Determinri calitative i cantitative
ale glucidelor n urin ............................................. 108 ale glucidelor n urin ............................................. 108
5.3. Hemoglobina glicozilat HbA1c ........................... 110 5.3. Hemoglobina glicozilat HbA1c ........................... 110

CAPITOLUL 6 - Explorarea metabolismului lipidic 118 CAPITOLUL 6 - Explorarea metabolismului lipidic 118
(Liliana Foia, Didona Ungureanu) (Liliana Foia, Didona Ungureanu)
6.1. Determinri cantitative ale trigliceridelor .................. 118 6.1. Determinri cantitative ale trigliceridelor .................. 118
6.2. Dozarea colesterolului ................................................ 126 6.2. Dozarea colesterolului ................................................ 126
6.3. Dozarea corpilor cetonici n urin.............................. 136 6.3. Dozarea corpilor cetonici n urin.............................. 136

CAPITOLUL 7 - Explorarea metabolismului proteic 142 CAPITOLUL 7 - Explorarea metabolismului proteic 142
(Florina Filip, Liliana Foia) (Florina Filip, Liliana Foia)
7.1.Analiza calitativ i cantitativ a proteinelor n ser; 7.1.Analiza calitativ i cantitativ a proteinelor n ser;
Disproteinemii ......................................................... 142 Disproteinemii ......................................................... 142
7.2. Dozarea ureei n ser i urin ..................................... 151 7.2. Dozarea ureei n ser i urin ..................................... 151
7.3. Dozarea creatininei n ser i urin ........................... 159 7.3. Dozarea creatininei n ser i urin ........................... 159
7.4. Dozarea acidului uric n ser i urin ......................... 168 7.4. Dozarea acidului uric n ser i urin ......................... 168
7.5. Dozarea bilirubinei ...................................................... 177 7.5. Dozarea bilirubinei ...................................................... 177

CAPITOLUL 8 - Explorarea homeostaziei minerale CAPITOLUL 8 - Explorarea homeostaziei minerale


(Vasilica Toma, Ancua Goriuc) (Vasilica Toma, Ancua Goriuc)
8.1. Dozarea calciului (Ca) n ser ..................................... 188 8.1. Dozarea calciului (Ca) n ser ..................................... 188
8.2. Dozarea magneziului (Mg) n ser ............................. 195 8.2. Dozarea magneziului (Mg) n ser ............................. 195
8.3. Sideremia ................................................................... 201 8.3. Sideremia ................................................................... 201
8.4. Dozarea ionilor de sodiu, potasiu i clor (Na, K, Cl).... 208 8.4. Dozarea ionilor de sodiu, potasiu i clor (Na, K, Cl).... 208

CAPITOLUL 9 - Analiza biochimic a urinii 220 CAPITOLUL 9 - Analiza biochimic a urinii 220
(Liliana Foia, Florina Filip) (Liliana Foia, Florina Filip)
9.1. Recoltarea i pregtirea urinii ..................................... 220 9.1. Recoltarea i pregtirea urinii ..................................... 220
9.2. Examenul macroscopic................................................. 221 9.2. Examenul macroscopic................................................. 221
9.3. Sumarul de urin .......................................................... 222 9.3. Sumarul de urin .......................................................... 222
9.4. Sedimentul urinar ........................................................ 228 9.4. Sedimentul urinar ........................................................ 228

CAPITOLUL 10 - Principalii parametri biochimici: valori de referin 236 CAPITOLUL 10 - Principalii parametri biochimici: valori de referin 236

Rspunsurile corecte ale testelor gril de tip MCQ (multiple choice 240 Rspunsurile corecte ale testelor gril de tip MCQ (multiple choice 240
question) question)

Bibliografie selectiv 242 Bibliografie selectiv 242


CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010

CAPITOLUL 1 CAPITOLUL 1

MSURI DE PROTECTIE MSURI DE PROTECTIE


N LABORATORUL DE BIOCHIMIE N LABORATORUL DE BIOCHIMIE

Munca n laboratorul de biochimie presupune o cunoatere Munca n laboratorul de biochimie presupune o cunoatere
aprofundat a regulilor de securitate de ctre ntreg personalul i studeni. aprofundat a regulilor de securitate de ctre ntreg personalul i studeni.
Pentru a asigura sigurana experimentelor i prevenirea accidentelor de Pentru a asigura sigurana experimentelor i prevenirea accidentelor de
munc trebuie cunoscute i respectate cu strictee unele reguli: munc trebuie cunoscute i respectate cu strictee unele reguli:
o ntregul personal care lucreaz n laboratorul de biochimie trebuie s o ntregul personal care lucreaz n laboratorul de biochimie trebuie s
poarte halat de protecie. poarte halat de protecie.
o Persoanele de sex feminin trebuie s poarte prul strns. o Persoanele de sex feminin trebuie s poarte prul strns.
o Instrumentele electrice (ultracentrifugi, termostate, frigidere, o Instrumentele electrice (ultracentrifugi, termostate, frigidere,
spectrofotometre) trebuie s aib prizele mpmntate i izolare spectrofotometre) trebuie s aib prizele mpmntate i izolare
electric perfect. Fixarea lor n priz se face numai cu mna uscat. electric perfect. Fixarea lor n priz se face numai cu mna uscat.
o ncperea unde se prepar acizi, apa de brom i solveni organici o ncperea unde se prepar acizi, apa de brom i solveni organici
trebuie s fie prevzut cu co de evacuare i ventilaie electric. trebuie s fie prevzut cu co de evacuare i ventilaie electric.
o Fiecare laborator trebuie s prezinte un extinctor i periodic o Fiecare laborator trebuie s prezinte un extinctor i periodic
personalul trebuie s verifice funcionalitatea lui. personalul trebuie s verifice funcionalitatea lui.
o La sfritul zilei, aparatura electric trebuie verificat s fie scoas o La sfritul zilei, aparatura electric trebuie verificat s fie scoas
din priz iar robinetele s fie nchise. din priz iar robinetele s fie nchise.
o Evaporarea solvenilor inflamabili se va face deasupra unei bi de o Evaporarea solvenilor inflamabili se va face deasupra unei bi de
nisip sau bi electrice, sub nie special amenajate. nisip sau bi electrice, sub nie special amenajate.
o Acizii minerali i hidroxizii concentrai, hrtiile i eprubetele sparte o Acizii minerali i hidroxizii concentrai, hrtiile i eprubetele sparte
nu trebuie aruncate n chiuvet. nu trebuie aruncate n chiuvet.
o Pentru a lucra cu animale de laborator este necesar ca acestea s o Pentru a lucra cu animale de laborator este necesar ca acestea s
prezinte analize de laborator i s fie inute n locuri izolate, special prezinte analize de laborator i s fie inute n locuri izolate, special
amenajate. amenajate.
o Pipetarea acizilor concentrai i bazelor se face cu pipet automat o Pipetarea acizilor concentrai i bazelor se face cu pipet automat
sau cu pipet cu volum mai mare dect volumul de pipetat i sau cu pipet cu volum mai mare dect volumul de pipetat i
prevzute cu filtru de vat. prevzute cu filtru de vat.
3 3
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010

o Pipetarea produselor biologice se face cu pipete automate sau o Pipetarea produselor biologice se face cu pipete automate sau
prevzute cu filtru de vat. prevzute cu filtru de vat.
o Bromul se msoar numai sub ni, cu pipete cu bul, prevzute cu o o Bromul se msoar numai sub ni, cu pipete cu bul, prevzute cu o
par de cauciuc pentru aspirare. par de cauciuc pentru aspirare.
o Acidul sulfuric diluat se prepar prin turnarea acidului sulfuric o Acidul sulfuric diluat se prepar prin turnarea acidului sulfuric
concentrat n vasul cu ap i nu invers. concentrat n vasul cu ap i nu invers.
o Este interzis pstrarea alimentelor n frigidere cu produse biologice, o Este interzis pstrarea alimentelor n frigidere cu produse biologice,
pentru a evita pericolul de infectare. pentru a evita pericolul de infectare.
o Tuburile de oxigen, bioxid de carbon i azot lichid, se depoziteaz n o Tuburile de oxigen, bioxid de carbon i azot lichid, se depoziteaz n
afara laboratorului. Cnd sunt strict necesare anumitor operaii n afara laboratorului. Cnd sunt strict necesare anumitor operaii n
laborator ele se ancoreaz cu lan n locuri anume prevzute. laborator ele se ancoreaz cu lan n locuri anume prevzute.
o Cromatografia i electroforeza se efectueaz n ncperi izolate de o Cromatografia i electroforeza se efectueaz n ncperi izolate de
restul laboratorului i prevzute cu ventilatoare electrice. restul laboratorului i prevzute cu ventilatoare electrice.
o Substanele toxice se in sub cheie i n borcane sau sticle prevzute o Substanele toxice se in sub cheie i n borcane sau sticle prevzute
cu etichete speciale, semnalizate cu cap de mort. cu etichete speciale, semnalizate cu cap de mort.
o Mirosirea substanelor chimice nu se face prin apropierea nasului o Mirosirea substanelor chimice nu se face prin apropierea nasului
direct la gtul sticlei cu reactivi, ci prin aducerea unui curent de aer direct la gtul sticlei cu reactivi, ci prin aducerea unui curent de aer
care conine vapori ai substanelor de la gtul sticlei cu ajutorul care conine vapori ai substanelor de la gtul sticlei cu ajutorul
palmei n apropierea nasului. palmei n apropierea nasului.
o Agitarea eprubetelor se face cu mare atenie pentru a evita contactul o Agitarea eprubetelor se face cu mare atenie pentru a evita contactul
agenilor chimici cu pielea, tiindu-se c muli dintre ei produc agenilor chimici cu pielea, tiindu-se c muli dintre ei produc
afeciuni la acest nivel. afeciuni la acest nivel.
o Inventarea i asumarea de noi experimente pe cont propriu nu este o Inventarea i asumarea de noi experimente pe cont propriu nu este
permis fr consultarea prealabil a ndrumtorului de laborator. permis fr consultarea prealabil a ndrumtorului de laborator.

Acordarea primului ajutor n laboratorul de biochimie Acordarea primului ajutor n laboratorul de biochimie
Cele mai multe accidente care au loc n absena unui biochimist sau Cele mai multe accidente care au loc n absena unui biochimist sau
personal calificat de laborator sunt cauzate de soluiile concentrate de acizi personal calificat de laborator sunt cauzate de soluiile concentrate de acizi
i baze. n aceste situaii, orice afectare trebuie raportat de urgen i baze. n aceste situaii, orice afectare trebuie raportat de urgen
laborantului sau ndrumtorului pentru a ameliora situaia. laborantului sau ndrumtorului pentru a ameliora situaia.
n caz de accidentare cu acizi puternici, trebuie urmate cteva reguli: n caz de accidentare cu acizi puternici, trebuie urmate cteva reguli:
Pielea trebuie splat urgent cu mult ap Pielea trebuie splat urgent cu mult ap
n caz de accidentare cu acid sulfuric se spal zona cu mult n caz de accidentare cu acid sulfuric se spal zona cu mult
ap i apoi cu NaHCO3 2% ap i apoi cu NaHCO3 2%
n caz de afectare ocular prin stropire cu un acid, se spal n caz de afectare ocular prin stropire cu un acid, se spal
ochii cu ap cldu, apoi se aplic o soluie de borax 2% i ochii cu ap cldu, apoi se aplic o soluie de borax 2% i
se consult urgent un oftalmolog se consult urgent un oftalmolog

4 4
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010

n caz de ingerare a unui acid, persoana n cauz trebuie s n caz de ingerare a unui acid, persoana n cauz trebuie s
clteasc gura cu ap i apoi s bea lapte (sau ap dac nu clteasc gura cu ap i apoi s bea lapte (sau ap dac nu
exist lapte la momentul respectiv). exist lapte la momentul respectiv).
Accidentele produse de soluiile alcaline (carbonai, amoniu, oxalat Accidentele produse de soluiile alcaline (carbonai, amoniu, oxalat
de calciu) sunt mult mai severe. Msurile generale constau n: de calciu) sunt mult mai severe. Msurile generale constau n:
ndeprtarea hainelor, urmat de splarea zonei cu ap timp ndeprtarea hainelor, urmat de splarea zonei cu ap timp
de 15 minute n cazul contaminrii pielii, urmat de aplicarea de 15 minute n cazul contaminrii pielii, urmat de aplicarea
local a unui antibiotic pentru evitarea infeciei local a unui antibiotic pentru evitarea infeciei
n caz de ingestie persoana trebuie s consume mult ap n caz de ingestie persoana trebuie s consume mult ap
pentru a induce voma pentru a induce voma
Se pot administra oral ageni neutralizani (acid acetic 1%, Se pot administra oral ageni neutralizani (acid acetic 1%,
sau suc de lmie) i ou sau lapte. sau suc de lmie) i ou sau lapte.
Durerea este calmat cu analgezice. Durerea este calmat cu analgezice.
Sunt i alte posibile accidente severe care necesit primul ajutor n Sunt i alte posibile accidente severe care necesit primul ajutor n
cadrul laboratorului: cadrul laboratorului:
n cazul intoxicaiilor cu cloruri, dioxid de sulf, amoniu, acid n cazul intoxicaiilor cu cloruri, dioxid de sulf, amoniu, acid
hidrocianic sau alte gaze toxice, persoana trebuie mutat din hidrocianic sau alte gaze toxice, persoana trebuie mutat din
zona contaminat. Dac este posibil i se va administra oxigen zona contaminat. Dac este posibil i se va administra oxigen
i ventilaie artificial (dac nu s-a instalat edemul pulmonar). i ventilaie artificial (dac nu s-a instalat edemul pulmonar).
Victima va fi transportat apoi la cel mai apropiat spital. Victima va fi transportat apoi la cel mai apropiat spital.
Intoxicaii severe pot s apar prin inhalarea unor substane Intoxicaii severe pot s apar prin inhalarea unor substane
volatile (tetraclorura de carbon, anilin, benzen, toluen) care volatile (tetraclorura de carbon, anilin, benzen, toluen) care
ajung rapid la nivelul sistemului nervos central. Primul ajutor ajung rapid la nivelul sistemului nervos central. Primul ajutor
n acest caz const n mutarea persoanei n aer curat i dac n acest caz const n mutarea persoanei n aer curat i dac
este necesar administrarea de oxigen i ventilaie artificial. este necesar administrarea de oxigen i ventilaie artificial.
n cazuri grave se recomand spitalizarea. n cazuri grave se recomand spitalizarea.

5 5
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010

CAPITOLUL 2 CAPITOLUL 2

CUNOSTINTE FUNDAMENTALE DE CUNOSTINTE FUNDAMENTALE DE


BIOCHIMIE DESCRIPTIVA SI BIOLOGIE BIOCHIMIE DESCRIPTIVA SI BIOLOGIE
A FLUIDELOR DE INVESTIGATIE A FLUIDELOR DE INVESTIGATIE

2.1. Apa, pH, Acizi, Baze 2.1. Apa, pH, Acizi, Baze

Toate organismele vii sunt dependente de ap. Apa este solventul Toate organismele vii sunt dependente de ap. Apa este solventul
pentru substanele ionice i polare i este prezent n toate celulele, unde pentru substanele ionice i polare i este prezent n toate celulele, unde
particip la multe dintre reaciile lor metabolice. Toate caracteristicile particip la multe dintre reaciile lor metabolice. Toate caracteristicile
biochimice i fiziologice ale moleculelor materiei vii depind de abilitatea biochimice i fiziologice ale moleculelor materiei vii depind de abilitatea
biomoleculelor de a interaciona cu apa. Datorit proprietilor sale de biomoleculelor de a interaciona cu apa. Datorit proprietilor sale de
ionizare apa ia parte la reaciile acido-bazice, ce afecteaz valoarea pH-ului. ionizare apa ia parte la reaciile acido-bazice, ce afecteaz valoarea pH-ului.
Reaciile studiate n biochimie sunt cele din soluii care trebuie s fie Reaciile studiate n biochimie sunt cele din soluii care trebuie s fie
hidrolizate pentru a stimula pe ct posibil zona din jurul celulelor. hidrolizate pentru a stimula pe ct posibil zona din jurul celulelor.
Interaciunile majore ntre biomolecule i ap iau natere prin Interaciunile majore ntre biomolecule i ap iau natere prin
formarea legturilor de H, care reprezint legturi necovalente ntre formarea legturilor de H, care reprezint legturi necovalente ntre
molecule polare. Totui apa are un rol important n meninerea pH-ului intra molecule polare. Totui apa are un rol important n meninerea pH-ului intra
i extracelular. De aceea una din funciile importante ale apei este cea de i extracelular. De aceea una din funciile importante ale apei este cea de
disociere a ionilor din moleculele biologice. De asemenea, esenial pentru disociere a ionilor din moleculele biologice. De asemenea, esenial pentru
moleculele neutre, apa le va ioniza n molecule mai mici, lucru ce poate fi moleculele neutre, apa le va ioniza n molecule mai mici, lucru ce poate fi
descris printr-o simpl reacie de echilibru: descris printr-o simpl reacie de echilibru:
H2O H++ OH- H2O H++ OH-
Constanta de echilibru, Keq, scris pentru reacia de mai sus poate fi Constanta de echilibru, Keq, scris pentru reacia de mai sus poate fi
calculat astfel: calculat astfel:
[H+] [OH-] [H+] [OH-]
Keq= Keq=
[H2O] [H2O]

6 6
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010

La temperatura de 25C apa se afl ionizat n proporie de o La temperatura de 25C apa se afl ionizat n proporie de o
molecul la 555 milioane de molecule. De aceea se consider c, prin molecul la 555 milioane de molecule. De aceea se consider c, prin
ionizare, concentraia apei (de la numitor) rmne practic constant i deci ionizare, concentraia apei (de la numitor) rmne practic constant i deci
poate fi nmulit cu constanta de aciditate. poate fi nmulit cu constanta de aciditate.
Ka [H2O]2 = Pi = [H3O+][OH-] Ka [H2O]2 = Pi = [H3O+][OH-]
Constanta Pi este numit produsul ionic al apei sau constanta de Constanta Pi este numit produsul ionic al apei sau constanta de
autoprotoliz a apei. Deoarece la temperatura de 25C produsul ionic al apei autoprotoliz a apei. Deoarece la temperatura de 25C produsul ionic al apei
are valoarea de 10-14 moli, nseamn c n apa pur la 25C concentraia are valoarea de 10-14 moli, nseamn c n apa pur la 25C concentraia
ionilor de hidroniu, egal cu cea a ionilor de hidroxil, este 10-7 moli/l. ionilor de hidroniu, egal cu cea a ionilor de hidroxil, este 10-7 moli/l.
[H3O]+ = [OH-] = 10-7 moli/l [H3O]+ = [OH-] = 10-7 moli/l
n soluii diluate, acizii tari pot fi considerai practic ionizai n soluii diluate, acizii tari pot fi considerai practic ionizai
complet. complet.

Scala de pH a fost introdus deoarece valoarea [H+] este foarte mic Scala de pH a fost introdus deoarece valoarea [H+] este foarte mic
i este mult mai convenabil s se exprime concentraia [H+] dintr-o i este mult mai convenabil s se exprime concentraia [H+] dintr-o
soluie apoas n form logaritmic. Se numete exponent al soluie apoas n form logaritmic. Se numete exponent al
concentraiei [H+] sau pH, logaritmul zecimal cu semn schimbat al concentraiei [H+] sau pH, logaritmul zecimal cu semn schimbat al
concentraiei [H+] din soluie (Srensen, 1909): concentraiei [H+] din soluie (Srensen, 1909):
pH = - lg [H3O+] pH = - lg [H3O+]
Punctul neutru: O soluie apoas este neutr cnd concentraiile [H+] Punctul neutru: O soluie apoas este neutr cnd concentraiile [H+]
i [OH-] sunt egale, conform ecuaiei: i [OH-] sunt egale, conform ecuaiei:
[H3O+] = [OH-] = 10-7 moli/l [H3O+] = [OH-] = 10-7 moli/l
Punctul neutru, n soluii apoase, este la pH = 7. Punctul neutru, n soluii apoase, este la pH = 7.
O soluie cu pH < 7 este acid; o soluie cu pH > 7 este bazic. O soluie cu pH < 7 este acid; o soluie cu pH > 7 este bazic.
Msurarea pH-ului unei soluii - se face cu: Msurarea pH-ului unei soluii - se face cu:
hrtie indicator: o hrtie impregnat cu substane a cror culoare se hrtie indicator: o hrtie impregnat cu substane a cror culoare se
modific n funcie de concentraia n ioni de H3O+ a mediului; este modific n funcie de concentraia n ioni de H3O+ a mediului; este
suficient s impregnm hrtia indicator cu 1-2 picturi din soluia cu suficient s impregnm hrtia indicator cu 1-2 picturi din soluia cu
pH necunoscut i apoi s comparm culoarea hrtiei cu scala de pH pH necunoscut i apoi s comparm culoarea hrtiei cu scala de pH
(cu care fiecare tip de hrtie indicator este prevzut) (cu care fiecare tip de hrtie indicator este prevzut)

7 7
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010

cu soluii de indicatori acido bazici de culoare: substane cu soluii de indicatori acido bazici de culoare: substane
organice care pot exista n dou forme, acid baz conjugat, forme organice care pot exista n dou forme, acid baz conjugat, forme
deosebite prin culoare (substanele i schimb culoarea n funcie de deosebite prin culoare (substanele i schimb culoarea n funcie de
pH-ul soluiei). pH-ul soluiei).
Acizii sunt substane care n soluie apoas pun n libertate protoni Acizii sunt substane care n soluie apoas pun n libertate protoni
(H+). (H+).
Bazele sunt substane care n soluie apoas pun n libertate ioni de Bazele sunt substane care n soluie apoas pun n libertate ioni de
hidroxil (OH-). hidroxil (OH-).
Acizii i bazele sunt clasificate ca donori i respectiv acceptori de Acizii i bazele sunt clasificate ca donori i respectiv acceptori de
protoni. Cnd un proton disociaz dintr-un acid n mediul nconjurtor, protoni. Cnd un proton disociaz dintr-un acid n mediul nconjurtor,
molecula rezultant este numit perechea conjugat a acidului . molecula rezultant este numit perechea conjugat a acidului .

8 8
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010

De exemplu, disocierea unui proton din acidul acetic va da o baz De exemplu, disocierea unui proton din acidul acetic va da o baz
conjugat, ionul de acetat: conjugat, ionul de acetat:
CH3COOH CH3COO- + H+ CH3COOH CH3COO- + H+
Acizii i bazele sunt definite ca fiind tari dac ionizeaz uor n Acizii i bazele sunt definite ca fiind tari dac ionizeaz uor n
soluii apoase, n timp ce acizii i bazele slabe ionizeaz greu. n fluidele soluii apoase, n timp ce acizii i bazele slabe ionizeaz greu. n fluidele
corpului exist numeroi compui care sunt acizi i baze slabe, precum corpului exist numeroi compui care sunt acizi i baze slabe, precum
aminoacizi, nucleotide, acidul lactic, acidul piruvic, fosfolipidele etc. aminoacizi, nucleotide, acidul lactic, acidul piruvic, fosfolipidele etc.
Acizii i bazele slabe n soluii nu disociaz complet i mai mult, Acizii i bazele slabe n soluii nu disociaz complet i mai mult,
exist un echilibru ntre acid i baza conjugat. Ca i n cazul ionizrii apei, exist un echilibru ntre acid i baza conjugat. Ca i n cazul ionizrii apei,
constanta de echilibru Keq poate fi calculat i pentru acizi i baze slabe. n constanta de echilibru Keq poate fi calculat i pentru acizi i baze slabe. n
cazul acizilor i bazelor slabe constanta de ionizare Keq, este identificat ca cazul acizilor i bazelor slabe constanta de ionizare Keq, este identificat ca
i Ka. i Ka.
n cazul unui acid slab: n cazul unui acid slab:
HA A- + H+ HA A- + H+
Constanta de echilibru poate fi calculat din urmtoarea ecuaie: Constanta de echilibru poate fi calculat din urmtoarea ecuaie:
[H+] [A-] [H+] [A-]
Ka= Ka=
[HA] [HA]
Definiia Ph-ului este obinut prin utilizarea logaritmilor. Definiia Ph-ului este obinut prin utilizarea logaritmilor.
pKa= - log Ka pKa= - log Ka
Reacia ionilor srurilor dizolvate cu solventul (apa), n urma crora Reacia ionilor srurilor dizolvate cu solventul (apa), n urma crora
se formeaz acizi slab disociai, baze slab disociate sau sruri acide sau se formeaz acizi slab disociai, baze slab disociate sau sruri acide sau
bazice se numete hidroliz. bazice se numete hidroliz.
Acest fenomen are n vedere numai modificrile de pH, deoarece Acest fenomen are n vedere numai modificrile de pH, deoarece
soluia astfel obinut are un caracter acid sau bazic. soluia astfel obinut are un caracter acid sau bazic.
n reacia dintre un acid AH i o baz BOH, sensul spre dreapta este n reacia dintre un acid AH i o baz BOH, sensul spre dreapta este
neutralizare, spre stnga este hidroliz. neutralizare, spre stnga este hidroliz.

neutralizare neutralizare
- +
AH + BOH [ A + B ] + H2O AH + BOH [ A- + B+] + H2O
hidroliz hidroliz
n cazul reaciei de neutralizare, dintre un acid tare i o baz tare n cazul reaciei de neutralizare, dintre un acid tare i o baz tare
echilibrul reaciei de mai sus este mult deplasat spre dreapta, deoarece se echilibrul reaciei de mai sus este mult deplasat spre dreapta, deoarece se
formeaz sare (este un electrolit puternic) i ap (electrolit foarte slab). n formeaz sare (este un electrolit puternic) i ap (electrolit foarte slab). n
celelalte cazuri de neutralizare, n care acidul i baza sunt de trie redus, celelalte cazuri de neutralizare, n care acidul i baza sunt de trie redus,

9 9
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010

echilibrul reaciei de mai sus este determinat de gradul de ionizare al echilibrul reaciei de mai sus este determinat de gradul de ionizare al
componentului de trie redus, iar sarea rezultat va hidroliza. componentului de trie redus, iar sarea rezultat va hidroliza.

2.2. Hidroliza srurilor 2.2. Hidroliza srurilor

HIDROLIZA unei sri este procesul chimic invers neutralizrii prin HIDROLIZA unei sri este procesul chimic invers neutralizrii prin
care moleculele sau ionii unei sri reacioneaz cu moleculele de ap i cu care moleculele sau ionii unei sri reacioneaz cu moleculele de ap i cu
ionii apei (ioni H3O+ i OH), rezultai n concentraie mic, 10-7 ioni-g/l, prin ionii apei (ioni H3O+ i OH), rezultai n concentraie mic, 10-7 ioni-g/l, prin
ionizarea reversibil a apei. ionizarea reversibil a apei.
Condiiile pentru ca o sare s hidrolizeze sunt: Condiiile pentru ca o sare s hidrolizeze sunt:
o s fie solubil n ap i disociat n ioni o s fie solubil n ap i disociat n ioni
o s provin prin neutralizarea: unui acid tare, (H3O+ + A- ) cu o baz o s provin prin neutralizarea: unui acid tare, (H3O+ + A- ) cu o baz
slab, BOH; a unui acid slab, HA cu o baz slab, BOH; a unui acid slab, BOH; a unui acid slab, HA cu o baz slab, BOH; a unui acid
slab, HA cu o baz tare, (B+ + OH-) slab, HA cu o baz tare, (B+ + OH-)
Srurile provenite din neutralizarea acizilor tari cu baze tari practic Srurile provenite din neutralizarea acizilor tari cu baze tari practic
nu hidrolizeaz, ele ioniznd total (dac sunt solubile n ap) i formeaz nu hidrolizeaz, ele ioniznd total (dac sunt solubile n ap) i formeaz
soluii apoase neutre soluii apoase neutre
Soluiile apoase ale srurilor hidrolizate au caracter acid sau bazic Soluiile apoase ale srurilor hidrolizate au caracter acid sau bazic
deoarece acizii sau bazele rezultate ionizeaz (disociaz) complet, n timp ce deoarece acizii sau bazele rezultate ionizeaz (disociaz) complet, n timp ce
acizii sau bazele slabe ionizeaz n msur mai mic (sunt puin disociate) n acizii sau bazele slabe ionizeaz n msur mai mic (sunt puin disociate) n
soluii apoase; dac ntre gradul de ionizare n ap a acidului sau bazei slabe soluii apoase; dac ntre gradul de ionizare n ap a acidului sau bazei slabe
care rezult prin hidroliz exist o diferen, are loc variaia concentraiei care rezult prin hidroliz exist o diferen, are loc variaia concentraiei
ionilor de hidroniu [H3O+] sau de hidroxil [OH-], respectiv o variaie de pH. ionilor de hidroniu [H3O+] sau de hidroxil [OH-], respectiv o variaie de pH.
Constanta de hidroliz, se exprim n funcie de produsul ionic al Constanta de hidroliz, se exprim n funcie de produsul ionic al
apei, de constanta de aciditate a acidului slab, respectiv de bazicitate a bazei apei, de constanta de aciditate a acidului slab, respectiv de bazicitate a bazei
slabe, din care provine sarea care hidrolizeaz. slabe, din care provine sarea care hidrolizeaz.
Hidroliza srurilor provenite din acid slab i baz tare (de ex: Hidroliza srurilor provenite din acid slab i baz tare (de ex:
CH3COONa) CH3COONa)
La dizolvare n ap CH3COONa puternic disociat reacioneaz cu La dizolvare n ap CH3COONa puternic disociat reacioneaz cu
apa: apa:
[ CH3COO- + Na+] + H2O CH3COOH + [Na+ + OH-] [ CH3COO- + Na+] + H2O CH3COOH + [Na+ + OH-]
acid slab baz tare acid slab baz tare
Ionii srii se comport astfel: Ionii srii se comport astfel:
+ +
o Na - acid Bronsted conjugat al unei baze tari nu reacioneaz cu o Na - acid Bronsted conjugat al unei baze tari nu reacioneaz cu
apa i rmne n soluie apa i rmne n soluie

10 10
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010

- -
o CH COO - baza conjugat a unei acid slab, are tendina de a o CH COO - baza conjugat a unei acid slab, are tendina de a
3 3
accepta protoni de la ap formnd acidul slab disociat. accepta protoni de la ap formnd acidul slab disociat.
- -
n soluie apar ioni OH , care imprim soluiei caracter bazic. n soluie apar ioni OH , care imprim soluiei caracter bazic.
ntruct ionul acetat reacioneaz cu apa, reacia de hidroliz este: ntruct ionul acetat reacioneaz cu apa, reacia de hidroliz este:
CH3COO- + H2O CH3COOH + OH- sau n general: CH3COO- + H2O CH3COOH + OH- sau n general:
A- + H2O AH+ + OH- A- + H2O AH+ + OH-
Hidroliza este cu att mai pronunat cu ct acidul este mai slab. Hidroliza este cu att mai pronunat cu ct acidul este mai slab.
Hidroliza srurilor provenite din acid tare i baz slab (ex. FeCl ) Hidroliza srurilor provenite din acid tare i baz slab (ex. FeCl )
3 3

Reacia de hidroliz : Reacia de hidroliz :


3+ - + -
Fe + 3Cl + 3 H2O Fe(OH)3 + 3 H3O + Cl Fe3+ + 3Cl- + 3 H2O Fe(OH)3 + 3 H3O+ + Cl-
baz slab acid tare baz slab acid tare
Ionii srii se comport astfel: Ionii srii se comport astfel:
- -
Cl - baza conjugat a unui acid tare, nu reacioneaz cu apa i Cl - baza conjugat a unui acid tare, nu reacioneaz cu apa i
rmne n soluie; rmne n soluie;
3+ 3+
Fe - acid conjugat al unei baze slabe, are tendina de a ceda protonii Fe - acid conjugat al unei baze slabe, are tendina de a ceda protonii
apei formnd baza slab nedisociat. apei formnd baza slab nedisociat.
+ +
n soluii apar ionii H O care imprim caracter acid soluiei. n soluii apar ionii H O care imprim caracter acid soluiei.
3 3
3+ 3+
ntruct ionul Fe reacioneaz cu apa, reacia de hidroliz este: ntruct ionul Fe reacioneaz cu apa, reacia de hidroliz este:

Fe3+ + 3 H2O Fe(OH)3 + 3 H3O+ sau n general Fe3+ + 3 H2O Fe(OH)3 + 3 H3O+ sau n general
B+ + H2O B + H3O+ B+ + H2O B + H3O+
Hidroliza srurilor provenite din acid slab i baz slab (Ex Hidroliza srurilor provenite din acid slab i baz slab (Ex
Pb(CH3COO)2) Pb(CH3COO)2)
Ionii ce se formeaz prin ionizarea srii, stabilesc cu apa echilibre Ionii ce se formeaz prin ionizarea srii, stabilesc cu apa echilibre
acid-baz: acid-baz:
+2 H2O +2 H2O
Pb2+ + 2 H2O Pb(OH)2 + 2 H3O+ Pb2+ + 2 H2O Pb(OH)2 + 2 H3O+

CH3COO- + H2O CH3COOH +OH- sau CH3COO- + H2O CH3COOH +OH- sau

2 CH3COO- + Pb2+ + 2 H2O 2CH3COOH + Pb(OH)2 2 CH3COO- + Pb2+ + 2 H2O 2CH3COOH + Pb(OH)2

11 11
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010

Avnd n vedere c n orice soluie apoas echilibrul ntre moleculele Avnd n vedere c n orice soluie apoas echilibrul ntre moleculele
de ap i ionii si este acelai, reacia se poate scrie pentru cazul general: de ap i ionii si este acelai, reacia se poate scrie pentru cazul general:
B+ + A- + H2O BOH + HA B+ + A- + H2O BOH + HA
n acest caz, soluia va avea caracter slab acid sau slab bazic n n acest caz, soluia va avea caracter slab acid sau slab bazic n
funcie de tria relativ a celor doi componeni. funcie de tria relativ a celor doi componeni.
Srurilor provenite din acid tare i baz tare nu hidrolizeaz (Ex.NaCl, Srurilor provenite din acid tare i baz tare nu hidrolizeaz (Ex.NaCl,
KCl) KCl)

2.3. SISTEME TAMPON 2.3. SISTEME TAMPON

Pentru a neutraliza produsul acid sau bazic al reaciilor biologice in Pentru a neutraliza produsul acid sau bazic al reaciilor biologice in
vitro i a menine un pH apropiat de cel fiziologic, se utilizeaz soluiile vitro i a menine un pH apropiat de cel fiziologic, se utilizeaz soluiile
tampon. O soluie tampon este o soluie care se opune variaiei pH-ului unei tampon. O soluie tampon este o soluie care se opune variaiei pH-ului unei
soluii prin adugare de acid sau baz. soluii prin adugare de acid sau baz.
Sngele i alte fluide din organism conin soluii tampon i n mare Sngele i alte fluide din organism conin soluii tampon i n mare
parte funcionarea organismului depinde de meninerea unei balane acizi- parte funcionarea organismului depinde de meninerea unei balane acizi-
baze dependent de soluiile tampon. Att alcaloza ct i acidoza sunt baze dependent de soluiile tampon. Att alcaloza ct i acidoza sunt
mpiedicate i uneori prevenite cu ajutorul soluiilor tampon. mpiedicate i uneori prevenite cu ajutorul soluiilor tampon.
Cele mai utilizate soluii tampon sunt amestecuri de acizi slabi i Cele mai utilizate soluii tampon sunt amestecuri de acizi slabi i
srurile lor hidrolizabile. Acizii i bazele slabe sunt soluii tampon utile n srurile lor hidrolizabile. Acizii i bazele slabe sunt soluii tampon utile n
cazul unui pH mai mare sau mai mic cu 1 dect pKa (pH= pKa 1). n afara cazul unui pH mai mare sau mai mic cu 1 dect pKa (pH= pKa 1). n afara
acestei variaii, concentraia acidului sau a bazei conjugate este prea mic acestei variaii, concentraia acidului sau a bazei conjugate este prea mic
pentru a rezista la efectul administrrii [H+] sau [OH-]. pentru a rezista la efectul administrrii [H+] sau [OH-].
Exit dou categorii de soluii tampon: Exit dou categorii de soluii tampon:
1. Sisteme tampon (care conin dou componente diferite, una 1. Sisteme tampon (care conin dou componente diferite, una
pentru neutralizarea [H+] i alta pentru neutralizarea [OH-]) pentru neutralizarea [H+] i alta pentru neutralizarea [OH-])
2. Amfoliii, molecule care conin n structura lor dou sau mai 2. Amfoliii, molecule care conin n structura lor dou sau mai
multe grupri funcionale diferite. multe grupri funcionale diferite.
Sistemele tampon simple constau dintr-o soluie a unui acid slab i Sistemele tampon simple constau dintr-o soluie a unui acid slab i
baza lor conjugat (de exemplu: acid acetic i acetatul de sodiu) sau o baz baza lor conjugat (de exemplu: acid acetic i acetatul de sodiu) sau o baz
slab i acidul conjugat (de exemplu: amoniacul i clorura de amoniu). O slab i acidul conjugat (de exemplu: amoniacul i clorura de amoniu). O
soluie tampon este selectat n funcie de valoarea pKa i natura chimic. soluie tampon este selectat n funcie de valoarea pKa i natura chimic.
Multe substane din natur conin ambele grupri acid i bazic i Multe substane din natur conin ambele grupri acid i bazic i
adesea se ntlnesc diferite tipuri ale acestor grupri n aceleai molecul adesea se ntlnesc diferite tipuri ale acestor grupri n aceleai molecul
(aminoacizii din structura proteinelor prezint n structura lor dou grupri (aminoacizii din structura proteinelor prezint n structura lor dou grupri
funcionale, putnd astfel neutraliza att excesul de acid ct i excesul de funcionale, putnd astfel neutraliza att excesul de acid ct i excesul de
baz). Moleculele care conin mai mult de o grupare acid sau bazic sunt baz). Moleculele care conin mai mult de o grupare acid sau bazic sunt

12 12
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010

numite amfolii (cu o grupare acid i una bazic) sau poliamfolii numite amfolii (cu o grupare acid i una bazic) sau poliamfolii
(numeroase grupri acide sau bazice). (numeroase grupri acide sau bazice).
Pentru a descrie statusul ionic al amfoliilor i poliamfoliilor se Pentru a descrie statusul ionic al amfoliilor i poliamfoliilor se
folosete termenul de punct izoelectric pI, sau pH izoelectric). pI folosete termenul de punct izoelectric pI, sau pH izoelectric). pI
reprezint pH-ul la care sarcina unei molecule este zero. Acest lucru apare reprezint pH-ul la care sarcina unei molecule este zero. Acest lucru apare
de regul cnd numrul gruprilor cu sarcini negative este egal cu numrul de regul cnd numrul gruprilor cu sarcini negative este egal cu numrul
gruprilor sarcinilor pozitive. gruprilor sarcinilor pozitive.
Natura chimic a soluiilor tampon este important n cadrul Natura chimic a soluiilor tampon este important n cadrul
investigaiilor biologice. Solubilitatea, stabilitatea, diferite interaciuni cu investigaiilor biologice. Solubilitatea, stabilitatea, diferite interaciuni cu
ali ioni din sistem, absorbia luminii i potenialul inhibitor sau stimulator ali ioni din sistem, absorbia luminii i potenialul inhibitor sau stimulator
al funciilor sistemului biologic reprezint criteriul de selecie al soluiilor al funciilor sistemului biologic reprezint criteriul de selecie al soluiilor
tampon. tampon.

2.4. PRELEVAREA I PRELUCRAREA 2.4. PRELEVAREA I PRELUCRAREA


PRODUSELOR BIOLOGICE PRODUSELOR BIOLOGICE
N VEDEREA ANALIZELOR DE LABORATOR N VEDEREA ANALIZELOR DE LABORATOR

Analizele biochimice ale constituenilor anorganici i organici Analizele biochimice ale constituenilor anorganici i organici
sanguini se pot realiza pe snge venos, capilar i arterial (foarte rar). n sanguini se pot realiza pe snge venos, capilar i arterial (foarte rar). n
unele ri muli dintre parametrii biochimici se dozeaz n alte fluide ale unele ri muli dintre parametrii biochimici se dozeaz n alte fluide ale
organismului, saliva fiind de exemplu oglinda modificrilor suferite de organismului, saliva fiind de exemplu oglinda modificrilor suferite de
acetia n organism, n paralel cu cele din snge. acetia n organism, n paralel cu cele din snge.
Condiii de recoltare a sngelui Condiii de recoltare a sngelui
n mod curent, recoltarea sngelui se efectueaz dimineaa, jeun n mod curent, recoltarea sngelui se efectueaz dimineaa, jeun
(pe nemncate). Analizndu-se influena micului dejun (mas uoar) asupra (pe nemncate). Analizndu-se influena micului dejun (mas uoar) asupra
concentraiei unor constitueni sanguini, s-a gsit c recoltarea sngelui concentraiei unor constitueni sanguini, s-a gsit c recoltarea sngelui
jeun nu este obligatorie n cazul dozrii tuturor parametrilor. jeun nu este obligatorie n cazul dozrii tuturor parametrilor.

2.4.1 Recoltarea sngelui capilar 2.4.1 Recoltarea sngelui capilar


Recoltarea sngelui capilar se face din pulpa degetului, din clci (la Recoltarea sngelui capilar se face din pulpa degetului, din clci (la
nou nscui) sau din lobul urechii (la pacienii n stare de oc), dup nou nscui) sau din lobul urechii (la pacienii n stare de oc), dup
urmtoarea tehnic : urmtoarea tehnic :
se spal locul cu eter se usuc, se neap suficient de adnc cu un se spal locul cu eter se usuc, se neap suficient de adnc cu un
ac steril; ac steril;
se las sngele s curg spontan pn cnd se formeaz o pictur se las sngele s curg spontan pn cnd se formeaz o pictur
apreciabil din care se recolteaz cu ajutorul unei micropipete apreciabil din care se recolteaz cu ajutorul unei micropipete
cantitatea de snge necesar; cantitatea de snge necesar;
13 13
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010

dac sngele nu curge spontan n cantitate suficient, se pot folosi dac sngele nu curge spontan n cantitate suficient, se pot folosi
manevre ajuttoare: frecarea degetului n cazul prelevrii din manevre ajuttoare: frecarea degetului n cazul prelevrii din
pulp, a gambei n cazul prelevrii din clci sau aplicare de pulp, a gambei n cazul prelevrii din clci sau aplicare de
alcool 70 n cazul prelevrii din lobul urechii; dup prelevare se alcool 70 n cazul prelevrii din lobul urechii; dup prelevare se
pune pe locul nepturii un tampon steril. pune pe locul nepturii un tampon steril.
2.4.2 Recoltarea sngelui venos 2.4.2 Recoltarea sngelui venos
Recoltarea sngelui venos se efectueaz din venele plicii cotului (la Recoltarea sngelui venos se efectueaz din venele plicii cotului (la
adult i copii mari), din fontanel i venele jugulare (la sugari i copii mici). adult i copii mari), din fontanel i venele jugulare (la sugari i copii mici).
Recoltarea din venele plicii cotului se face dup urmtoarea tehnic: Recoltarea din venele plicii cotului se face dup urmtoarea tehnic:
se fixeaz garoul deasupra cotului, se dezinfecteaz tegumentul se fixeaz garoul deasupra cotului, se dezinfecteaz tegumentul
n locul puncionrii cu alcool 70 % n locul puncionrii cu alcool 70 %
se puncioneaz vena i se recolteaz sngele prin ac fie direct n se puncioneaz vena i se recolteaz sngele prin ac fie direct n
eprubet prin scurgere liber, fie prin aspirare n sering eprubet prin scurgere liber, fie prin aspirare n sering
dup recoltare se ndeprteaz garoul i se tamponeaz locul dup recoltare se ndeprteaz garoul i se tamponeaz locul
puncionat cu un tampon de vata mbibat n alcool. puncionat cu un tampon de vata mbibat n alcool.
Se folosesc ace i seringi de unic utilizare sau ace i vase speciale Se folosesc ace i seringi de unic utilizare sau ace i vase speciale
pentru recoltarea sngelui (vacutainere), vasele n care se recolteaz trebuie pentru recoltarea sngelui (vacutainere), vasele n care se recolteaz trebuie
s fie n perfect stare de curenie i uscare ntruct urmele de alcool, ap s fie n perfect stare de curenie i uscare ntruct urmele de alcool, ap
etc. pot produce hemoliza sngelui, iar diferitele impuriti pot falsifica etc. pot produce hemoliza sngelui, iar diferitele impuriti pot falsifica
rezultatele dozrilor. Poziia corpului i staza venoas influeneaz rezultatele dozrilor. Poziia corpului i staza venoas influeneaz
rezultatele obinute n cazul determinrii elementelor figurate (eritrocitele, rezultatele obinute n cazul determinrii elementelor figurate (eritrocitele,
etc.) i a celor cu greutate molecular mare (proteinele totale, fraciunile etc.) i a celor cu greutate molecular mare (proteinele totale, fraciunile
proteice individuale, colesterolul din complexul lipoproteinelor). proteice individuale, colesterolul din complexul lipoproteinelor).

2.4.3. Condiiile de conservare a probelor recoltate 2.4.3. Condiiile de conservare a probelor recoltate
Probele de snge total recoltat pe heparin se pstreaz la 4 C, iar Probele de snge total recoltat pe heparin se pstreaz la 4 C, iar
dozrile trebuie fcute n mai puin de 4 ore de la recoltare. Pstrarea prea dozrile trebuie fcute n mai puin de 4 ore de la recoltare. Pstrarea prea
ndelungat (chiar la 4C) este contraindicat. Conservarea probelor la ndelungat (chiar la 4C) este contraindicat. Conservarea probelor la
temperatura camerei determin perturbri n compoziia electroliilor, temperatura camerei determin perturbri n compoziia electroliilor,
enzimelor i diferiilor metabolii. enzimelor i diferiilor metabolii.
n cazul plasmei sau serului, determinrile metaboliilor i enzimelor n cazul plasmei sau serului, determinrile metaboliilor i enzimelor
trebuie realizate, de asemenea, n decurs de 4 ore de la recoltare, n trebuie realizate, de asemenea, n decurs de 4 ore de la recoltare, n
condiiile pstrrii la temperatura camerei. Fr alterri importante, serul sau condiiile pstrrii la temperatura camerei. Fr alterri importante, serul sau
plasma pot fi pstrate la 4 C timp de 24 ore. n cazul dozrilor dup 24 ore plasma pot fi pstrate la 4 C timp de 24 ore. n cazul dozrilor dup 24 ore
de la recoltare plasma sau serul trebuie congelat sau liofilizat, form de de la recoltare plasma sau serul trebuie congelat sau liofilizat, form de
conservare preferabil adugrii de conservani (amestec timol-fluorur: 10 conservare preferabil adugrii de conservani (amestec timol-fluorur: 10
mg fluorur de sodiu + 1 mg timol/ml snge sau streptomicin 1 mg/l0 ml mg fluorur de sodiu + 1 mg timol/ml snge sau streptomicin 1 mg/l0 ml
snge). snge).

14 14
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010

2.4.4 Recoltarea urinei 2.4.4 Recoltarea urinei


Recoltarea urinei se poate face att la nivelul laboratorului ct i la Recoltarea urinei se poate face att la nivelul laboratorului ct i la
domiciliu. n raport cu analiza solicitat se recolteaz: domiciliu. n raport cu analiza solicitat se recolteaz:
fie urina de diminea fie urina de diminea
fie urina din 24 de ore fie urina din 24 de ore
Recoltarea urinei de diminea Recoltarea urinei de diminea
Persoanele care recolteaz urina la domiciliu, n vederea analizelor Persoanele care recolteaz urina la domiciliu, n vederea analizelor
curente, trebuie s respecte urmtoarele indicaii: curente, trebuie s respecte urmtoarele indicaii:
recipientul n care se recolteaz urina s fie perfect curat; recipientul n care se recolteaz urina s fie perfect curat;
se recolteaz urina proaspat de diminea, imediat dup se recolteaz urina proaspat de diminea, imediat dup
deteptare, direct n recipient; deteptare, direct n recipient;
cantitatea minim necesar de urin este de 100 ml; nu are cantitatea minim necesar de urin este de 100 ml; nu are
importan faptul dac persoana a mai urinat n timpul nopii; importan faptul dac persoana a mai urinat n timpul nopii;
pe sticl se lipete o etichet cu numele bolnavului i vrsta; pe sticl se lipete o etichet cu numele bolnavului i vrsta;
dac medicul suspecteaz o infecie urinar, recomand dac medicul suspecteaz o infecie urinar, recomand
bolnavului s fac o urocultur. bolnavului s fac o urocultur.
n aceast ultim situaie, cnd trebuie prelevat urina pentru analiza n aceast ultim situaie, cnd trebuie prelevat urina pentru analiza
microbiologic (urocultura), urina se va recolta tot dimineaa n condiii de microbiologic (urocultura), urina se va recolta tot dimineaa n condiii de
sterilitate, ntr-un vas steril procurat de la laborator, iar n lipsa acestuia, sterilitate, ntr-un vas steril procurat de la laborator, iar n lipsa acestuia,
ntr-o sticl de 100 ml care a fost dezinfectat mpreun cu dopul su prin ntr-o sticl de 100 ml care a fost dezinfectat mpreun cu dopul su prin
fierbere timp de 30 minute. nainte de urinare se va face o toalet a fierbere timp de 30 minute. nainte de urinare se va face o toalet a
organelor genitale cu ap i spun pentru ndeprtarea eventualilor microbi. organelor genitale cu ap i spun pentru ndeprtarea eventualilor microbi.
Tot n acest scop se recomand ca urina s se recolteze numai dup ce prima Tot n acest scop se recomand ca urina s se recolteze numai dup ce prima
parte a urinei, care a splat canalul urinar, a fost ndeprtat. parte a urinei, care a splat canalul urinar, a fost ndeprtat.

Recoltarea urinei din 24 de ore Recoltarea urinei din 24 de ore


n cazul n care este necesar recoltarea urinei din 24 ore se va n cazul n care este necesar recoltarea urinei din 24 ore se va
proceda astfel: proceda astfel:
se golete vezica urinar, dimineaa la ora 6; se golete vezica urinar, dimineaa la ora 6;
ncepnd de la aceasta or, se recolteaz toat urina pn a doua zi ncepnd de la aceasta or, se recolteaz toat urina pn a doua zi
la ora 6. la ora 6.
Pentru a nu se pierde din cantitatea de urin se recomand s se Pentru a nu se pierde din cantitatea de urin se recomand s se
urineze separat, nainte de scaun. Se msoar apoi volumul urinei din 24 de urineze separat, nainte de scaun. Se msoar apoi volumul urinei din 24 de
ore i se noteaz. Apoi se amestec urina (n cazul n care a fost recoltat n ore i se noteaz. Apoi se amestec urina (n cazul n care a fost recoltat n
mai multe sticle) se agit i pentru laborator se oprete numai o cantitate de mai multe sticle) se agit i pentru laborator se oprete numai o cantitate de
100-200 ml, iar restul se arunc. 100-200 ml, iar restul se arunc.

15 15
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010

2.4.5. Recoltarea salivei 2.4.5. Recoltarea salivei


Saliva este produsul de secreie al glandelor salivare (parotide - Saliva este produsul de secreie al glandelor salivare (parotide -
simetrice, submaxilare, linguale). Are rolul de a favoriza procesele fizice ale simetrice, submaxilare, linguale). Are rolul de a favoriza procesele fizice ale
digestiei, mai puin pe cele chimice. digestiei, mai puin pe cele chimice.
Saliva, serul i fluidul gingival (GCF) au fost, pe rnd, investigate ca Saliva, serul i fluidul gingival (GCF) au fost, pe rnd, investigate ca
micromedii de cercetare ndeosebi a activitii bolii parodontale. Saliva micromedii de cercetare ndeosebi a activitii bolii parodontale. Saliva
versus snge nregistreaz o serie de avantaje: versus snge nregistreaz o serie de avantaje:
uor de recoltat; uor de recoltat;
uor de manipulat; uor de manipulat;
uor de analizat; uor de analizat;
lipsete pacientul de disconfortul i anxietatea caracteristice lipsete pacientul de disconfortul i anxietatea caracteristice
prelevrilor parenterale; prelevrilor parenterale;
uor de stocat i transportat; uor de stocat i transportat;
ieftin n cantitile necesare. ieftin n cantitile necesare.
De altfel, compoziia salivei i a celorlalte fluide orale reflect De altfel, compoziia salivei i a celorlalte fluide orale reflect
nivelul lichidian i tisular al moleculelor imunologice, tumorale, terapeutice, nivelul lichidian i tisular al moleculelor imunologice, tumorale, terapeutice,
precum i prezenta markerilor bolilor orale i sistemice. precum i prezenta markerilor bolilor orale i sistemice.
Totui, analiza salivei prezint i o serie de disfuncionaliti, mai Totui, analiza salivei prezint i o serie de disfuncionaliti, mai
ales dac lum n considerare faptul c, la nivelul ei sunt exprimate ales dac lum n considerare faptul c, la nivelul ei sunt exprimate
molecule derivate din surse multiple: glande salivare, ser, GCF (fluid molecule derivate din surse multiple: glande salivare, ser, GCF (fluid
gingival), celule epiteliale, bacterii i substane strine ajunse n cavitatea gingival), celule epiteliale, bacterii i substane strine ajunse n cavitatea
oral. oral.
Saliva reprezint oglinda modificrilor sistemice, astfel nct, analiza Saliva reprezint oglinda modificrilor sistemice, astfel nct, analiza
acestui fluid versus snge ar fi extrem de util i n acelai timp mai puin acestui fluid versus snge ar fi extrem de util i n acelai timp mai puin
discomfortant n evaluarea diverilor analii. Cel mai mare dezavantaj al discomfortant n evaluarea diverilor analii. Cel mai mare dezavantaj al
analizei parametrilor biologici i imunochimici n saliv o reprezint lipsa analizei parametrilor biologici i imunochimici n saliv o reprezint lipsa
de standardizare a metodei. de standardizare a metodei.
Exist cteva precauii n prelevarea n vederea analizei, a fluidului Exist cteva precauii n prelevarea n vederea analizei, a fluidului
salivar: salivar:
Se evit Se evit
o ingestia de alcool (cu 12 ore nainte de colectare) o ingestia de alcool (cu 12 ore nainte de colectare)
o fumatul i orice tip de alimente cu o or nainte o fumatul i orice tip de alimente cu o or nainte
o ingestia de cafea, alimente acide sau zaharoase n perioada o ingestia de cafea, alimente acide sau zaharoase n perioada
de dinaintea recoltrii, acestea putnd determina modificri de dinaintea recoltrii, acestea putnd determina modificri
(reduceri) ale pH-ului salivar precum i favorizarea (reduceri) ale pH-ului salivar precum i favorizarea
culturilor bacteriene culturilor bacteriene
Se cltete cavitatea oral cu ap pentru a ndeprta eventualele Se cltete cavitatea oral cu ap pentru a ndeprta eventualele
detritusuri, cu nghiirea apoi a apei (pentru a favoriza hidratarea) detritusuri, cu nghiirea apoi a apei (pentru a favoriza hidratarea)
16 16
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010

Se ateapt minimum 10 minute dup cltire (pentru a evita Se ateapt minimum 10 minute dup cltire (pentru a evita
diluia fluidului). diluia fluidului).
Recoltarea salivei se poate face cu sau fr stimulare. Stimularea se Recoltarea salivei se poate face cu sau fr stimulare. Stimularea se
poate realiza prin masticaie (gum sau parafin), sau stimulare gustativ poate realiza prin masticaie (gum sau parafin), sau stimulare gustativ
(aplicarea de acid citric pe limb). n general se recomand recoltarea salivei (aplicarea de acid citric pe limb). n general se recomand recoltarea salivei
fr a stimula secreia glandelor, pentru a evita att interferarea agentului fr a stimula secreia glandelor, pentru a evita att interferarea agentului
stimulant ct i eventuala reducere a nivelului analiilor dozai. Saliva stimulant ct i eventuala reducere a nivelului analiilor dozai. Saliva
nestimulat este afectat de gradul de hidratare, expunerea la lumin, poziia nestimulat este afectat de gradul de hidratare, expunerea la lumin, poziia
corpului, momentul recoltrii. corpului, momentul recoltrii.
Contaminarea cu snge a salivei este deasemeni un inconvenient Contaminarea cu snge a salivei este deasemeni un inconvenient
uneori n analiza analiilor la nivelul acestui fluid, mai ales dac inem cont uneori n analiza analiilor la nivelul acestui fluid, mai ales dac inem cont
c nivelul celor mai muli parametri este mai mare n fluidul sanguin c nivelul celor mai muli parametri este mai mare n fluidul sanguin
comparativ cu fluidele orale (sngele poate contamina saliva din cauza, fie a comparativ cu fluidele orale (sngele poate contamina saliva din cauza, fie a
unei igiene precare, fie a periajului abraziv). unei igiene precare, fie a periajului abraziv).
De aceea, pentru evitarea acestor evenimente, n analiza fluidului De aceea, pentru evitarea acestor evenimente, n analiza fluidului
salivar se ine cont de unele recomandri: salivar se ine cont de unele recomandri:
Evitarea periajului dentar cu minimum 45 minute naintea Evitarea periajului dentar cu minimum 45 minute naintea
prelevrii salivei; prelevrii salivei;
Evitarea tratamentelor stomatologice cu 48 de ore nainte; Evitarea tratamentelor stomatologice cu 48 de ore nainte;
Prelevarea de la pacieni care prezint doar semne minime de Prelevarea de la pacieni care prezint doar semne minime de
afectare la nivel oral; afectare la nivel oral;
ndeprtarea eventualelor probe contaminate cu snge i ndeprtarea eventualelor probe contaminate cu snge i
recolectarea. recolectarea.
Cavitatea oral reprezint aadar un ecosistem distinctiv al Cavitatea oral reprezint aadar un ecosistem distinctiv al
organismului la nivelul cruia se desfoar o multitudine de funcii organismului la nivelul cruia se desfoar o multitudine de funcii
biologice. Saliva, fluidul care scald acest ecosistem posed un numr biologice. Saliva, fluidul care scald acest ecosistem posed un numr
impresionant de componente, multe dintre acestea fiind identificate ca impresionant de componente, multe dintre acestea fiind identificate ca
protectori, cu rol esenial n meninerea homeostaziei orale i sistemice, protectori, cu rol esenial n meninerea homeostaziei orale i sistemice,
acionnd ca vector al agenilor antimicrobieni, umectnd i lubrefiind acionnd ca vector al agenilor antimicrobieni, umectnd i lubrefiind
suprafeele dentare i mucoasa bucal. suprafeele dentare i mucoasa bucal.
Fluidul salivar este unic n felul su, iar utilizarea sa ca lichid de Fluidul salivar este unic n felul su, iar utilizarea sa ca lichid de
diagnostic al numeroaselor afeciuni orale i sistemice, a devenit un real diagnostic al numeroaselor afeciuni orale i sistemice, a devenit un real
succes n cercetare, mai ales n ultimii zece ani. Tehnicile disponibile n succes n cercetare, mai ales n ultimii zece ani. Tehnicile disponibile n
prezent permit nu numai diagnosticul de boal, dar i predicia i prezent permit nu numai diagnosticul de boal, dar i predicia i
monitorizarea evoluiei unor afeciuni prin prisma analizei parametrilor monitorizarea evoluiei unor afeciuni prin prisma analizei parametrilor
salivari. salivari.
Dealtfel, unele state cum sunt SUA au ineles necesitatea dezvoltrii Dealtfel, unele state cum sunt SUA au ineles necesitatea dezvoltrii
tehnologiilor de investigaie a fluidului salivar, nct au derulat aceste tehnologiilor de investigaie a fluidului salivar, nct au derulat aceste
aciuni chiar prin planuri federale, conduse de la nivelul departamentelor de aciuni chiar prin planuri federale, conduse de la nivelul departamentelor de
chirurgie general i NICDR (Institutul Naional de Cercetare Dentar i chirurgie general i NICDR (Institutul Naional de Cercetare Dentar i
17 17
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010

Cranio-facial). Literatura de specialitate este continuu alimentat cu Cranio-facial). Literatura de specialitate este continuu alimentat cu
numeroase articole n care, utilizarea salivei, a lichidului gingival i a numeroase articole n care, utilizarea salivei, a lichidului gingival i a
transudatelor mucoasei orale n monitorizarea drogurilor i detectarea transudatelor mucoasei orale n monitorizarea drogurilor i detectarea
numeroaselor afeciuni sistemice i orale, sunt relevate i puse la dispoziia numeroaselor afeciuni sistemice i orale, sunt relevate i puse la dispoziia
cercettorilor i a medicilor practicieni. cercettorilor i a medicilor practicieni.

Figura 1. Recoltarea salivei Figura 1. Recoltarea salivei

2.4.6 Prelevarea fluidului gingival 2.4.6 Prelevarea fluidului gingival

n condiii de normalitate fiziologic, fluidul gingival crevicular n condiii de normalitate fiziologic, fluidul gingival crevicular
(GCF - gingival crevicular fluid) este un transudat seros, ce provine, n (GCF - gingival crevicular fluid) este un transudat seros, ce provine, n
cantiti mici, continuu, din venulele corionului gingival situat sub epiteliul cantiti mici, continuu, din venulele corionului gingival situat sub epiteliul
sulcular. sulcular.
Sulcusul gingival este spaiul virtual situat ntre suprafaa dintelui i Sulcusul gingival este spaiul virtual situat ntre suprafaa dintelui i
versantul intern al gingiei marginale (de la marginea gingival pn la versantul intern al gingiei marginale (de la marginea gingival pn la
epiteliul joncional) (figura 2). epiteliul joncional) (figura 2).

18 18
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010

Figura 2. Recoltarea fluidului gingival Figura 2. Recoltarea fluidului gingival

Sulcusul gingival este delimitat de un peretele intern - dentar; perete Sulcusul gingival este delimitat de un peretele intern - dentar; perete
extern-gingival; baza anului conturul coronar al epiteliului joncional. extern-gingival; baza anului conturul coronar al epiteliului joncional.
n cursul bolii, numeroi produi ai conflictului parazit gazd n cursul bolii, numeroi produi ai conflictului parazit gazd
ptrund n fluid, fapt ce face ca acesta s devin un adevrat exudat. ptrund n fluid, fapt ce face ca acesta s devin un adevrat exudat.
Ptrunderea n anul gingival a microbilor sau a unor corpi strini Ptrunderea n anul gingival a microbilor sau a unor corpi strini
este urmat de creterea fluxului de lichid crevicular i de eliminarea este urmat de creterea fluxului de lichid crevicular i de eliminarea
acestora ncepnd la cteva minute dup insinuarea lor. acestora ncepnd la cteva minute dup insinuarea lor.
Analiza GCF constituie o modalitate neagresiv de examinare a Analiza GCF constituie o modalitate neagresiv de examinare a
reaciei gazdei la nivelul parodoniului. reaciei gazdei la nivelul parodoniului.
O parte dintre aceste componente (enzime, prostaglandine, citokine) O parte dintre aceste componente (enzime, prostaglandine, citokine)
pot constitui markeri sensibili ai parodontitei distructive, a cror analiz n pot constitui markeri sensibili ai parodontitei distructive, a cror analiz n
GCF prezint numeroase avantaje deoarece, spre deosebire de ser i saliv, GCF prezint numeroase avantaje deoarece, spre deosebire de ser i saliv,
se pot folosi mostre convenabile din situsuri specifice care conin se pot folosi mostre convenabile din situsuri specifice care conin
componente derivate att de la gazd (n forma plasmei, componentelor componente derivate att de la gazd (n forma plasmei, componentelor
celulare, esuturi de legtur), ct i din placa bacterian, GCF putnd fi celulare, esuturi de legtur), ct i din placa bacterian, GCF putnd fi
considerat un adevrat cmp de lupt (focarul interaciunii bolnav- considerat un adevrat cmp de lupt (focarul interaciunii bolnav-
microorganism) ntre agresorii externi (ai plcii bacteriene n special) i cei microorganism) ntre agresorii externi (ai plcii bacteriene n special) i cei
interni (de la nivelul organismului gazd). interni (de la nivelul organismului gazd).
Astfel, nzestrat cu peste 50 de indicatori ai rspunsului imun i Astfel, nzestrat cu peste 50 de indicatori ai rspunsului imun i
inflamator ai gazdei, fluidul gingival crevicular prezint capacitatea de a inflamator ai gazdei, fluidul gingival crevicular prezint capacitatea de a
reflecta complexitatea interaciunii bacterie gazd, i de a oferi informaii reflecta complexitatea interaciunii bacterie gazd, i de a oferi informaii
nu numai referitoare la echilibrul dintre acestea ci i informaii specifice nu numai referitoare la echilibrul dintre acestea ci i informaii specifice
mecanismelor patogenice. mecanismelor patogenice.

19 19
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010

Colectarea GCF: Fluidul crevicular gingival este de obicei colectat Colectarea GCF: Fluidul crevicular gingival este de obicei colectat
prin introducerea unei hrtii de filtru subire cu dimensiuni standardizate prin introducerea unei hrtii de filtru subire cu dimensiuni standardizate
pentru a ptrunde n spaiul gingival, i meninerea acolo o perioad de timp pentru a ptrunde n spaiul gingival, i meninerea acolo o perioad de timp
(de obicei 30 de secunde). Fluidul este absorbit de hrtia de filtru. Tehnica (de obicei 30 de secunde). Fluidul este absorbit de hrtia de filtru. Tehnica
uzual presupune inseria subgingival dinspre vestibular spre oral i uzual presupune inseria subgingival dinspre vestibular spre oral i
dinspre oral spre vestibular la nivelul feei meziale a dinilor. dinspre oral spre vestibular la nivelul feei meziale a dinilor.
n prezent, volumul GCF colectat cu hrtia de filtru este determinat n prezent, volumul GCF colectat cu hrtia de filtru este determinat
cu Periotron 8000, un aparat electronic ce msoar modificarea capacitanei cu Periotron 8000, un aparat electronic ce msoar modificarea capacitanei
n lungul hrtiei de filtru ude. Aceast modificare este transmis unui n lungul hrtiei de filtru ude. Aceast modificare este transmis unui
dispozitiv digital care poate fi corelat cu volumul de fluid crevicular. O dispozitiv digital care poate fi corelat cu volumul de fluid crevicular. O
anumit surs de potenial de eroare este asociat cu utilizarea timpurie a anumit surs de potenial de eroare este asociat cu utilizarea timpurie a
modelului Periotron (rezultatele pot fi afectate de temperatura din camer i modelului Periotron (rezultatele pot fi afectate de temperatura din camer i
umiditate, iar plasarea hrtiei de filtru n interior trebuie standardizat). umiditate, iar plasarea hrtiei de filtru n interior trebuie standardizat).
Totui metodele mbuntite sunt n general recunoscute ca avnd rezultate Totui metodele mbuntite sunt n general recunoscute ca avnd rezultate
exacte i reproductibile. Noul Periotron 8000 presupune o calibrare exacte i reproductibile. Noul Periotron 8000 presupune o calibrare
automat a adevratului volum, n relaie cu un computer pentru stocare, automat a adevratului volum, n relaie cu un computer pentru stocare,
salvare i expunere a datei i msurarea volumului de fluid (pn la 3 l). salvare i expunere a datei i msurarea volumului de fluid (pn la 3 l).
n fluidul crevicular au fost identificate peste 100 de componente n fluidul crevicular au fost identificate peste 100 de componente
care pot fi clasificate n elemente: celulare, electrolii, compui organici, care pot fi clasificate n elemente: celulare, electrolii, compui organici,
produi bacterieni, produi metabolici, enzime i inhibitori enzimatici. Mai produi bacterieni, produi metabolici, enzime i inhibitori enzimatici. Mai
mult, exist numeroase studii care atest potenialul enzimelor hidrolitice i mult, exist numeroase studii care atest potenialul enzimelor hidrolitice i
proteolitice din fluidul gingival, ca markeri de diagnostic n boala proteolitice din fluidul gingival, ca markeri de diagnostic n boala
parodontal. Dintre enzimele existente, majoritatea sunt secretate i eliberate parodontal. Dintre enzimele existente, majoritatea sunt secretate i eliberate
de ctre celulele gazdei: colagenaza, elastaza, fosfataza alcalin, beta de ctre celulele gazdei: colagenaza, elastaza, fosfataza alcalin, beta
glucuronidaza, AST-aspartat amino transferaza, LDH lactat glucuronidaza, AST-aspartat amino transferaza, LDH lactat
dehidrogenaza, catepsine (unele dintre acestea constituind markeri ai dehidrogenaza, catepsine (unele dintre acestea constituind markeri ai
activitii lizozomale din esutul gazd). Aciunea multora dintre aceste activitii lizozomale din esutul gazd). Aciunea multora dintre aceste
enzime poate fi modulat la rndul su de enzime specifice i proteine, enzime poate fi modulat la rndul su de enzime specifice i proteine,
generate fie local fie la nivelul circulaiei sistemice. Simpla prezen a generate fie local fie la nivelul circulaiei sistemice. Simpla prezen a
acestor enzime n anumite situsuri, nu echivaleaz cu boala, att timp ct nu acestor enzime n anumite situsuri, nu echivaleaz cu boala, att timp ct nu
exist o activitate biologic evident a acestora (multe dintre enzime sunt exist o activitate biologic evident a acestora (multe dintre enzime sunt
secretate sub form inactiv i devin active doar in condiii de alterare secretate sub form inactiv i devin active doar in condiii de alterare
biologic). biologic).
Coninutul su bogat n produi de reacie asociai cu inflamaia Coninutul su bogat n produi de reacie asociai cu inflamaia
parodontal, disponibilitatea recoltrii facile, cu investiie minim de timp, parodontal, disponibilitatea recoltrii facile, cu investiie minim de timp,
riscuri, capital i materiale, sunt tot attea motive care acrediteaz fluidul riscuri, capital i materiale, sunt tot attea motive care acrediteaz fluidul
crevicular ca un micromediu de analiz al potenialilor markeri de alterare a crevicular ca un micromediu de analiz al potenialilor markeri de alterare a
teritoriilor orale, ndeosebi a celor parodontale. teritoriilor orale, ndeosebi a celor parodontale.

20 20
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010

2.5 MCQ 2.5 MCQ


I1. Care dintre urmtoarele afirmaii NU este corect: I1. Care dintre urmtoarele afirmaii NU este corect:
A. Fiecare laborator trebuie s prezinte un extinctor i periodic A. Fiecare laborator trebuie s prezinte un extinctor i periodic
personalul trebuie s verifice funcionalitatea lui personalul trebuie s verifice funcionalitatea lui
B. ncperea unde se prepar acizi, apa de brom i solveni organici B. ncperea unde se prepar acizi, apa de brom i solveni organici
trebuie s fie prevzut cu co de evacuare i ventilaie electric trebuie s fie prevzut cu co de evacuare i ventilaie electric
C. Evaporarea solvenilor inflamabili se face deasupra unei C. Evaporarea solvenilor inflamabili se face deasupra unei
chiuvete chiuvete
D. Acizii minerali i hidroxizii concentrai, hrtiile i eprubetele D. Acizii minerali i hidroxizii concentrai, hrtiile i eprubetele
sparte nu trebuie aruncate n chiuvet. sparte nu trebuie aruncate n chiuvet.
E. Pipetarea produselor biologice se face cu pipete automate sau E. Pipetarea produselor biologice se face cu pipete automate sau
prevzute cu filtru de vat prevzute cu filtru de vat
I2. Mirosirea substanelor chimice se face: I2. Mirosirea substanelor chimice se face:
A. Apropiind nasul de gtul sticlei A. Apropiind nasul de gtul sticlei
B. De la distan B. De la distan
C. Prin intermediul unei mti speciale C. Prin intermediul unei mti speciale
D. Prin aducerea unui curent de aer care conine vapori ai D. Prin aducerea unui curent de aer care conine vapori ai
substanelor de la gtul sticlei cu ajutorul palmei, n apropierea substanelor de la gtul sticlei cu ajutorul palmei, n apropierea
nasului nasului
E. Nici un rspuns corect E. Nici un rspuns corect
I3. Recoltarea sngelui capilar se face: I3. Recoltarea sngelui capilar se face:
A. De la nivelul plicii cotului A. De la nivelul plicii cotului
B. De pe faa dorsal a minii B. De pe faa dorsal a minii
C. De la nivelul fontanelei la copii mici C. De la nivelul fontanelei la copii mici
D. Din pulpa degetului D. Din pulpa degetului
E. Nici un rspuns corect E. Nici un rspuns corect
I4. Referitor la recoltarea sngelui venos NU este adevrat c: I4. Referitor la recoltarea sngelui venos NU este adevrat c:
A. Se folosesc ace i seringi de unic utilizare A. Se folosesc ace i seringi de unic utilizare
B. Se folosesc ace i vase speciale pentru recoltarea sngelui B. Se folosesc ace i vase speciale pentru recoltarea sngelui
C. Se efectueaz din venele plicii cotului (la adult i copii mari), C. Se efectueaz din venele plicii cotului (la adult i copii mari),
din fontanel i venele jugulare (la sugari i copii mici). din fontanel i venele jugulare (la sugari i copii mici).
D. Poziia corpului i staza venoas nu influeneaz rezultatele D. Poziia corpului i staza venoas nu influeneaz rezultatele
obinute n cazul determinrii elementelor figurate. obinute n cazul determinrii elementelor figurate.
E. Conservarea probelor la T camerei determin perturbri n E. Conservarea probelor la T camerei determin perturbri n
compoziia electroliilor, enzimelor i diferiilor metabolii. compoziia electroliilor, enzimelor i diferiilor metabolii.
I5. Fluidul crevicular I5. Fluidul crevicular
A. Reprezint fluidul predominant din cavitatea oral A. Reprezint fluidul predominant din cavitatea oral

21 21
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Cunotine fundamentale de biochimie 2010

B. Posed un bogat echipament enzimatic provenit exclusiv din B. Posed un bogat echipament enzimatic provenit exclusiv din
esuturile gazei esuturile gazei
C. Reprezint o extensie a fluidului salivar la nivelul jonciunii C. Reprezint o extensie a fluidului salivar la nivelul jonciunii
radiculare cu gingia radiculare cu gingia
D. Este n mod normal inaparent i devine un lichid inflamator D. Este n mod normal inaparent i devine un lichid inflamator
E. Se exprim n cavitatea oral n jurul dinilor cariai E. Se exprim n cavitatea oral n jurul dinilor cariai
I6. Recoltarea urinei n vederea analizei biochimice: I6. Recoltarea urinei n vederea analizei biochimice:
A. Se face doar dimineaa la prima or A. Se face doar dimineaa la prima or
B. Se face doar n cadrul laboratoarelor B. Se face doar n cadrul laboratoarelor
C. Se realizeaz obligatoriu cu urina recoltat ntr-un vas steril C. Se realizeaz obligatoriu cu urina recoltat ntr-un vas steril
D. Nu necesit toaleta zonei genitale nainte de recoltare D. Nu necesit toaleta zonei genitale nainte de recoltare
E. Nici un rspuns corect E. Nici un rspuns corect
I7. Acizii: I7. Acizii:
A. Sunt donori de protoni A. Sunt donori de protoni
B. Au pH>7 B. Au pH>7
C. Accept protoni C. Accept protoni
D. Cei tari ionizeaz greu n soluie apoas D. Cei tari ionizeaz greu n soluie apoas
E. Cei slabi disociaz complet n soluii E. Cei slabi disociaz complet n soluii
I8. Amfoliii : I8. Amfoliii :
A. Sunt acizi slabi A. Sunt acizi slabi
B. Sunt baze tari B. Sunt baze tari
C. Au pH-ul > 7 C. Au pH-ul > 7
D. Pot funciona ca sisteme tampon D. Pot funciona ca sisteme tampon
E. Conin doar grupri acide E. Conin doar grupri acide
I9. Urmtoarele condiii sunt necesare ca o sare s hidrolizeze, cu excepia: I9. Urmtoarele condiii sunt necesare ca o sare s hidrolizeze, cu excepia:
A. S fie solubil n ap A. S fie solubil n ap
B. S fie disociat n ioni B. S fie disociat n ioni
C. S provin prin neutralizarea unui acid tare cu o baz slab C. S provin prin neutralizarea unui acid tare cu o baz slab
D. S provin din neutralizarea unui acid tare cu o baz tare D. S provin din neutralizarea unui acid tare cu o baz tare
E. Nici un rspuns corect E. Nici un rspuns corect
I10. Analiza biochimic a salivei: I10. Analiza biochimic a salivei:
A. Prezint avantaje fa de analiza fluidului gingival A. Prezint avantaje fa de analiza fluidului gingival
B. Prezint riscul de a fi compromis prin contaminare cu fluid B. Prezint riscul de a fi compromis prin contaminare cu fluid
gingival gingival
C. Se efectueaz obligatoriu la pacienii cu carie dentar C. Se efectueaz obligatoriu la pacienii cu carie dentar
D. Nu prezint riscul contaminrii cu snge D. Nu prezint riscul contaminrii cu snge
E. Nici un rspuns corect E. Nici un rspuns corect

22 22
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010

CAPITOLUL 3 CAPITOLUL 3

TEHNICI DE ANALIZA A PARAMETRILOR BIOLOGICI TEHNICI DE ANALIZA A PARAMETRILOR BIOLOGICI


SI BIOCHIMICI IN LABORATOR SI BIOCHIMICI IN LABORATOR

3.1. SPECTROFOTOMETRIA 3.1. SPECTROFOTOMETRIA

Spectrofotometria se bazeaz pe proprietatea substanelor de a Spectrofotometria se bazeaz pe proprietatea substanelor de a


absorbi selectiv radiaiile electromagnetice i este folosit pentru absorbi selectiv radiaiile electromagnetice i este folosit pentru
identificarea i determinarea cantitativ a acestora. identificarea i determinarea cantitativ a acestora.
Spectrele de absorbie se obin la trecerea unui fascicul de radiaii Spectrele de absorbie se obin la trecerea unui fascicul de radiaii
continue prin substana de analizat care poate absorbi o parte din energia continue prin substana de analizat care poate absorbi o parte din energia
acestuia. Cantitatea de energie absorbit este n funcie de structura i de acestuia. Cantitatea de energie absorbit este n funcie de structura i de
numrul moleculelor sau al atomilor substanei cu care interacioneaz numrul moleculelor sau al atomilor substanei cu care interacioneaz
fasciculul de radiaii. fasciculul de radiaii.
Spectrofotometrul difer de colorimetru prin modul n care lumina Spectrofotometrul difer de colorimetru prin modul n care lumina
este separat n lungimile de und componente. Spectrofotometrul utilizeaz este separat n lungimile de und componente. Spectrofotometrul utilizeaz
o prism pentru separarea luminii, iar colorimetrul utilizeaz filtre. Ambele o prism pentru separarea luminii, iar colorimetrul utilizeaz filtre. Ambele
se bazeaz pe un model simplu de trecere a luminii de lungime de unda se bazeaz pe un model simplu de trecere a luminii de lungime de unda
cunoscut printr-o prob i msurarea cantitii de energie luminoas care cunoscut printr-o prob i msurarea cantitii de energie luminoas care
este transmis. Aceasta se realizeaz prin plasarea unei fotocelule n partea este transmis. Aceasta se realizeaz prin plasarea unei fotocelule n partea
opus a probei respective. O raz de lumina este format din fotoni; cnd un opus a probei respective. O raz de lumina este format din fotoni; cnd un
foton ntlnete o molecul de analit, exist anse ca analitul s absoarb foton ntlnete o molecul de analit, exist anse ca analitul s absoarb
fotonul. Aceasta absorbie reduce numrul de fotoni din raza de lumina, fotonul. Aceasta absorbie reduce numrul de fotoni din raza de lumina,
astfel reducnd intensitatea luminoas. Toate moleculele absorb energie astfel reducnd intensitatea luminoas. Toate moleculele absorb energie
radiant la anumite lungimi de unda. Cele care absorb energie n spectrul radiant la anumite lungimi de unda. Cele care absorb energie n spectrul
vizibil sunt cunoscute ca pigmeni. Proteinele i acizii nucleici absorb vizibil sunt cunoscute ca pigmeni. Proteinele i acizii nucleici absorb
lumina n domeniul ultraviolet. lumina n domeniul ultraviolet.
Un spectrofotometru implic o surs de lumin, o prism, un suport Un spectrofotometru implic o surs de lumin, o prism, un suport
pentru probe i o fotocelul. Acestea sunt conectate la un sistem electric sau pentru probe i o fotocelul. Acestea sunt conectate la un sistem electric sau
mecanic care controleaz intensitatea luminii, lungimea de und i conversia mecanic care controleaz intensitatea luminii, lungimea de und i conversia
energiei primite la nivelul fotocelulei n fluctuaii voltmetrice. Fluctuaiile energiei primite la nivelul fotocelulei n fluctuaii voltmetrice. Fluctuaiile
23 23
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010

voltmetrice sunt apoi proiectate pe o scal metric/digital i valorile sunt voltmetrice sunt apoi proiectate pe o scal metric/digital i valorile sunt
nregistrate ntr-un computer. nregistrate ntr-un computer.
Intensitatea culorii dintr-o prob depinde de cantitatea de soluie din Intensitatea culorii dintr-o prob depinde de cantitatea de soluie din
proba respectiv. Transmisia luminii nu este o funcie liniar, ci mai degrab proba respectiv. Transmisia luminii nu este o funcie liniar, ci mai degrab
exponenial. Transmitana este procentul relativ de lumin care a trecut exponenial. Transmitana este procentul relativ de lumin care a trecut
prin proba. Transmitana procentual este transformat ntr-o funcie prin proba. Transmitana procentual este transformat ntr-o funcie
logaritmic invers cunoscut ca absorban (sau densitate optic). logaritmic invers cunoscut ca absorban (sau densitate optic).
Legea Bouguer-Lambert-Beer: descreterea intensitii fascisolului dup Legea Bouguer-Lambert-Beer: descreterea intensitii fascisolului dup
ce a strbtut un strat absorbant este proporional cu grosimea stratului i ce a strbtut un strat absorbant este proporional cu grosimea stratului i
concentraia acestuia. concentraia acestuia.
I / I 0 10 c l ; I I 0 10 c l I / I 0 10 c l ; I I 0 10 c l
unde: I = intensitatea luminii transmise (ce prsete proba); unde: I = intensitatea luminii transmise (ce prsete proba);
I0 = intensitatea luminii incidente (ce ptrunde n prob); I0 = intensitatea luminii incidente (ce ptrunde n prob);
= coeficient molar de extincie sau absorbtivitate molar; = coeficient molar de extincie sau absorbtivitate molar;
c = concentraia soluiei ce absoarbe (n mol/L); c = concentraia soluiei ce absoarbe (n mol/L);
l = grosimea stratului absorbant (cm). l = grosimea stratului absorbant (cm).
I / I0 = T = transmitan sau transmisie - este deci raportul dintre I / I0 = T = transmitan sau transmisie - este deci raportul dintre
intensitatea luminii transmise (I) i intensitatea luminii incidente (I0). intensitatea luminii transmise (I) i intensitatea luminii incidente (I0).
Aplicnd logaritmul pentru Io / I rezult: Aplicnd logaritmul pentru Io / I rezult:
log (I0 / I) = log (1 / T) = cl = A = E = D = absorban (A), extincie (E) sau log (I0 / I) = log (1 / T) = cl = A = E = D = absorban (A), extincie (E) sau
densitate optic (D). densitate optic (D).
Deci, legea care st la baza spectrofotometriei se exprim simplu:A= .c.l Deci, legea care st la baza spectrofotometriei se exprim simplu:A= .c.l
Conform legii de baz a spectrofotometriei, absorbana (extincia) este Conform legii de baz a spectrofotometriei, absorbana (extincia) este
proporional cu concentraia i cu grosimea stratului absorbant. proporional cu concentraia i cu grosimea stratului absorbant.
Pentru a utiliza un spectrofotometru este necesar stabilirea unei serii Pentru a utiliza un spectrofotometru este necesar stabilirea unei serii
cunoscute de diluii a unor cantiti cunoscute de soluii. Una din acestea nu cunoscute de diluii a unor cantiti cunoscute de soluii. Una din acestea nu
conine soluie si este cunoscut ca blank. Este utilizat pentru ajustarea conine soluie si este cunoscut ca blank. Este utilizat pentru ajustarea
instrumentului s citeasc 100% transmitana pentru absorban 0. O valoare instrumentului s citeasc 100% transmitana pentru absorban 0. O valoare
a transmitanei de 0% (absorbana infinit) este stabilit prin plasarea unei a transmitanei de 0% (absorbana infinit) este stabilit prin plasarea unei
bariere ntre sursa de lumin i fotocelul. Toate celelalte msurtori sunt bariere ntre sursa de lumin i fotocelul. Toate celelalte msurtori sunt
apoi efectuate prin simpla plasare a probelor n calea luminii. Dup apoi efectuate prin simpla plasare a probelor n calea luminii. Dup
nregistrarea absorbanei pentru o serie de probe standard este efectuat un nregistrarea absorbanei pentru o serie de probe standard este efectuat un
grafic absorban versus concentraie. Panta dreptei reprezint coeficientul grafic absorban versus concentraie. Panta dreptei reprezint coeficientul
de extincie. Aceasta valoare este o constant i este utilizat pentru de extincie. Aceasta valoare este o constant i este utilizat pentru
conversia oricrei absorbane msurate n concentraia corespunzatoare (C = conversia oricrei absorbane msurate n concentraia corespunzatoare (C =
A/). A/).

24 24
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010

Un spectrofotometru poate utiliza att lumina vizibil (de obicei Un spectrofotometru poate utiliza att lumina vizibil (de obicei
avnd ca surs de lumin o lamp cu tugsten/halogen, 400-800 nm), ct i avnd ca surs de lumin o lamp cu tugsten/halogen, 400-800 nm), ct i
lumina UV (180-400nm). Singura modificare necesar este nlocuirea lumina UV (180-400nm). Singura modificare necesar este nlocuirea
tuburilor de sticl cu cuvete de quartz (sticla absoarbe lumina UV i nu este tuburilor de sticl cu cuvete de quartz (sticla absoarbe lumina UV i nu este
potrivit pentru un spectrofotometru UV). potrivit pentru un spectrofotometru UV).
Radiaia electromagnetic ce constituie lumina este caracterizat (ca Radiaia electromagnetic ce constituie lumina este caracterizat (ca
de altfel toate radiaiile electromagnetice) prin lungime de und (), de altfel toate radiaiile electromagnetice) prin lungime de und (),
frecven (), respectiv energie () corelate prin expresia: = h. frecven (), respectiv energie () corelate prin expresia: = h.
Sub numele de absorbiometrie sau spectrofotometrie prin absorbie Sub numele de absorbiometrie sau spectrofotometrie prin absorbie
a luminii se neleg toate metodele ce au la baz urmtorul principiu: un a luminii se neleg toate metodele ce au la baz urmtorul principiu: un
fascicol luminos, de o anumit lungime de und, strbate proba de analizat fascicol luminos, de o anumit lungime de und, strbate proba de analizat
i dup proporia n care este absorbit radiaia luminoas, se determin i dup proporia n care este absorbit radiaia luminoas, se determin
cantitatea de substan absorbant. cantitatea de substan absorbant.
Metoda se numete absorbiometrie fotometric sau Metoda se numete absorbiometrie fotometric sau
spectrofotometrie prin absorbie sau nc spectrocolorimetrie; denumirea spectrofotometrie prin absorbie sau nc spectrocolorimetrie; denumirea
de colorimetrie este improprie, acesta definind n realitate metodele de de colorimetrie este improprie, acesta definind n realitate metodele de
analiz pentru specificarea i descrierea culorilor. analiz pentru specificarea i descrierea culorilor.
Domenii de aplicare i avantaje Domenii de aplicare i avantaje
Datorit perfecionrii aparaturii i metodelor de lucru, Datorit perfecionrii aparaturii i metodelor de lucru,
spectrofotometria UV-VIS a devenit o metod performant, cu o eroare spectrofotometria UV-VIS a devenit o metod performant, cu o eroare
mic = 0,25 - 0,5%, comparabil cu a metodelor titrimetrice. (la nceput mai mic = 0,25 - 0,5%, comparabil cu a metodelor titrimetrice. (la nceput mai
ales n cazul analizei urmelor precizia lsa de dorit. ales n cazul analizei urmelor precizia lsa de dorit.
Principalele avantaje: Principalele avantaje:
se pot aplica pentru dozarea majoritii substanelor. n cazul n se pot aplica pentru dozarea majoritii substanelor. n cazul n
care compusul nu absoarbe lumina, poate fi transformat printr-o care compusul nu absoarbe lumina, poate fi transformat printr-o
reacie chimic adecvat ntr-un compus colorat ce absoarbe reacie chimic adecvat ntr-un compus colorat ce absoarbe
lumina. lumina.
folosirea reactivilor organici a condus la realizarea unor metode folosirea reactivilor organici a condus la realizarea unor metode
de determinare a urmelor de substan. de determinare a urmelor de substan.
sunt metode rapide, prin msurarea direct, fr a fi necesar sunt metode rapide, prin msurarea direct, fr a fi necesar
adugarea de soluie titrat. n multe cazuri se poate evita adugarea de soluie titrat. n multe cazuri se poate evita
separarea altor componente, iar prin folosirea unor reactivi separarea altor componente, iar prin folosirea unor reactivi
specifici i prin controlul strict al reaciei se poate elimina specifici i prin controlul strict al reaciei se poate elimina
interferena ionilor strini (controlul pH-ului, lungime de und interferena ionilor strini (controlul pH-ului, lungime de und
convenabil aleas, utilizarea solvenilor organici pentru convenabil aleas, utilizarea solvenilor organici pentru
extragerea complecilor colorai, utilizarea unor reacii redox). extragerea complecilor colorai, utilizarea unor reacii redox).
prin metodele spectrofotometrice se poate pune n eviden prin metodele spectrofotometrice se poate pune n eviden
punctul de echivalen ntr-o metod titrimetric (titrare punctul de echivalen ntr-o metod titrimetric (titrare
spectrofotometric). spectrofotometric).
25 25
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010

3.2. ELECTROFOREZA 3.2. ELECTROFOREZA


-Metod de analiz calitativ a proteinelor- -Metod de analiz calitativ a proteinelor-

Electroforeza este o metod de separare a proteinelor din ser sau Electroforeza este o metod de separare a proteinelor din ser sau
urin, ce permite separarea n cmp electric a proteinelor serice n 5 urin, ce permite separarea n cmp electric a proteinelor serice n 5
fraciuni (albumina, alfa1, alfa2, beta, gama globuline) la pH 9.2 sau n 6 fraciuni (albumina, alfa1, alfa2, beta, gama globuline) la pH 9.2 sau n 6
fraciuni, cu submprirea grupului beta (albumina, alfa1, alfa2, beta 1, fraciuni, cu submprirea grupului beta (albumina, alfa1, alfa2, beta 1,
beta2, gama globuline) la un pH de 8.5. beta2, gama globuline) la un pH de 8.5.
Albumina este produs n ficat i reprezint aproape 60% din Albumina este produs n ficat i reprezint aproape 60% din
proteinele din snge, globulinele constituind restul de 40%. n afara proteinele din snge, globulinele constituind restul de 40%. n afara
imunoglobulinelor i a ctorva proteine complementare, majoritatea imunoglobulinelor i a ctorva proteine complementare, majoritatea
globulinelor sunt produse n ficat. globulinelor sunt produse n ficat.
Analiza electroforezei este utilizat pentru a identifica prezena sau Analiza electroforezei este utilizat pentru a identifica prezena sau
absena proteinelor anormale, a proteinelor monoclonale-producerea absena proteinelor anormale, a proteinelor monoclonale-producerea
excesiv a imunoglobulinei specifice i pentru a determina cnd diferite excesiv a imunoglobulinei specifice i pentru a determina cnd diferite
grupe de proteine au valorile crescute sau sczute n ser. Electroforeza grupe de proteine au valorile crescute sau sczute n ser. Electroforeza
proteinelor i cea cu imunofixare sunt utile n determinarea, diagnosticul i proteinelor i cea cu imunofixare sunt utile n determinarea, diagnosticul i
monitorizarea cursului i tratamentului unor afeciuni asociate cu proteinele monitorizarea cursului i tratamentului unor afeciuni asociate cu proteinele
anormale. Proteinele, n mod normal nu sunt excretate n urin, iar cnd se anormale. Proteinele, n mod normal nu sunt excretate n urin, iar cnd se
prezint n cantiti prea mari poate indica existena unor probleme renale prezint n cantiti prea mari poate indica existena unor probleme renale
i/sau producerea anormal de proteine. i/sau producerea anormal de proteine.

Figura 1. Relevarea pe un gel de agaroz a migrrii diferite a fraciilor Figura 1. Relevarea pe un gel de agaroz a migrrii diferite a fraciilor
proteice serice; cu rou este figurat un aspect normal de expresie a nivelului proteice serice; cu rou este figurat un aspect normal de expresie a nivelului
fraciunilor. fraciunilor.

26 26
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010

Tehnica const n depunerea ctorva microlitri de ser pe un suport pe Tehnica const n depunerea ctorva microlitri de ser pe un suport pe
suprafaa cruia este aplicat un gel de agaroz, cu pH 8,6. La acest pH, suprafaa cruia este aplicat un gel de agaroz, cu pH 8,6. La acest pH,
proteinele sunt sub form de anioni (ioni negativi), avnd tendina s proteinele sunt sub form de anioni (ioni negativi), avnd tendina s
migreze spre anod. migreze spre anod.
Se folosesc diverse aparate care prezint dou sectoare: unul pentru Se folosesc diverse aparate care prezint dou sectoare: unul pentru
migrarea proteinelor i cellalt pentru relevarea migrrii prin colorarea migrarea proteinelor i cellalt pentru relevarea migrrii prin colorarea
gelului n care a avut loc migrarea. Gelul se aeaz n cmp electric n cuva gelului n care a avut loc migrarea. Gelul se aeaz n cmp electric n cuva
de migrare. Se acoper cuva, pentru inchiderea circuitului, i se aplic un de migrare. Se acoper cuva, pentru inchiderea circuitului, i se aplic un
curent de 100 V, timp de 20 de minute. Dup migrare, gelul se imerseaz n curent de 100 V, timp de 20 de minute. Dup migrare, gelul se imerseaz n
soluia de fixare (alcool etilic 96% + acid acetic + ap distilat), timp de 15 soluia de fixare (alcool etilic 96% + acid acetic + ap distilat), timp de 15
minute, n poziie vertical. Se usuc apoi gelul cu un curent de aer de 80C. minute, n poziie vertical. Se usuc apoi gelul cu un curent de aer de 80C.
Dup uscarea completa, se imerseaz n soluia de colorare amidoblack, 10 Dup uscarea completa, se imerseaz n soluia de colorare amidoblack, 10
minute, apoi se decoloreaz, se spal i se usuc. Vizualizarea se face cu minute, apoi se decoloreaz, se spal i se usuc. Vizualizarea se face cu
ajutorul unui densitometru. ajutorul unui densitometru.
Electroforeza furnizeaz valori procentuale ale celor cinci fracii Electroforeza furnizeaz valori procentuale ale celor cinci fracii
proteice, concentraia absolut a acestora calculndu-se n funcie de nivelul proteice, concentraia absolut a acestora calculndu-se n funcie de nivelul
proteinelor serice totale. proteinelor serice totale.
Dup ncrctura electric i mas molecular, fraciunile proteice Dup ncrctura electric i mas molecular, fraciunile proteice
migreaz diferit - cel mai departe migreaz albuminele, urmate apoi de alfa1 migreaz diferit - cel mai departe migreaz albuminele, urmate apoi de alfa1
globulinele, alfa 2 globulinele, beta globulinele i gama globulinele. globulinele, alfa 2 globulinele, beta globulinele i gama globulinele.
Euproteinemie se numete situaia normal n care nivelul fraciilor Euproteinemie se numete situaia normal n care nivelul fraciilor
proteice separate prin electroforez nregistreaz valori fiziologice, situate n proteice separate prin electroforez nregistreaz valori fiziologice, situate n
limite normale. limite normale.
Disproteinemiile sunt modificri n nivelul fraciilor proteice, cele Disproteinemiile sunt modificri n nivelul fraciilor proteice, cele
mai frecvente constnd n scderea serumalbuminelor i creterea mai frecvente constnd n scderea serumalbuminelor i creterea
globulinelor. Disproteinemiile interesnd globulinele sunt foarte des globulinelor. Disproteinemiile interesnd globulinele sunt foarte des
intlnite, creterile pot fi globale sau intereseaz doar anumite fraciuni. intlnite, creterile pot fi globale sau intereseaz doar anumite fraciuni.

27 27
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010

Figura 2. Domeniul de migrare al proteinelor serice prin electroforez Figura 2. Domeniul de migrare al proteinelor serice prin electroforez

Prezentm pe scurt, variaiile fraciilor proteice serice: Prezentm pe scurt, variaiile fraciilor proteice serice:
Albumina Albumina
nivel sczut n: nivel sczut n:
o insuficiena aportului albuminelor n alimentaie o insuficiena aportului albuminelor n alimentaie
(malnutriie cronic sever) (malnutriie cronic sever)
o diminuarea sintezei: insuficien hepatic (ciroze, o diminuarea sintezei: insuficien hepatic (ciroze,
hepatite) i inflamaii hepatite) i inflamaii
o pierderea lor accentuat pe cale urinar (sindrom o pierderea lor accentuat pe cale urinar (sindrom
nefrotic), digestiv (gastroenteropatie exudativ) sau nefrotic), digestiv (gastroenteropatie exudativ) sau
cutanat(arsuri) cutanat(arsuri)
o hipercatabolism: sindroame inflamatorii severe, o hipercatabolism: sindroame inflamatorii severe,
endocrinopatii diverse (tireotoxicoza, sindrom Cushing) endocrinopatii diverse (tireotoxicoza, sindrom Cushing)
o analbuminemie congenital o analbuminemie congenital

28 28
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010

nivelul crescut este de regul fr semnificaie patologic nivelul crescut este de regul fr semnificaie patologic
important, aprnd frecvent la pacienii cu hemoconcentraie important, aprnd frecvent la pacienii cu hemoconcentraie
local sau sistemic sau la cei crora li se adminstreaz local sau sistemic sau la cei crora li se adminstreaz
albumin n perfuzie. albumin n perfuzie.
Alfa 1 Globulinele Alfa 1 Globulinele
nivel sczut: boli cronice ale ficatului, deficit congenital de nivel sczut: boli cronice ale ficatului, deficit congenital de
alfa-1 antitripsina alfa-1 antitripsina
nivel crescut: diabet zaharat, boli inflamatoare acute sau nivel crescut: diabet zaharat, boli inflamatoare acute sau
cronice (endocardit, reumatism, hepatit cronic) reacii de cronice (endocardit, reumatism, hepatit cronic) reacii de
faz acut nsoite de hemoliz, terapie cu estrogeni, sarcin faz acut nsoite de hemoliz, terapie cu estrogeni, sarcin
Alfa 2 Globulinele Alfa 2 Globulinele
nivel sczut: hipertiroidism, boli severe ale ficatului, nivel sczut: hipertiroidism, boli severe ale ficatului,
hemoliz hemoliz
nivel crescut: boli renale, boli inflamatoare acute sau cronice nivel crescut: boli renale, boli inflamatoare acute sau cronice
(poliartrit reumatoid, boli cu complexe imune circulante) (poliartrit reumatoid, boli cu complexe imune circulante)
Beta Globulinele Beta Globulinele
nivel sczut malnutriie, insuficien hepatic, ciroz, nivel sczut malnutriie, insuficien hepatic, ciroz,
scderea fraciunii C3 a complementului, asociat cu o scderea fraciunii C3 a complementului, asociat cu o
scdere a fraciunii beta-2 scdere a fraciunii beta-2
nivel crescut- hipercolesterolemie, anemie feripriv, nivel crescut- hipercolesterolemie, anemie feripriv,
dislipidemii, sindrom Cushing, gamapatii monoclonale, dislipidemii, sindrom Cushing, gamapatii monoclonale,
hepatite toxice, ciroza, sindrom nefrotic hepatite toxice, ciroza, sindrom nefrotic
Gama Globulinele Gama Globulinele
nivel sczut anumite disfuncionaliti imunogenetice i nivel sczut anumite disfuncionaliti imunogenetice i
deficien imun secundar deficien imun secundar
nivel crescut a) policlonal n: afeciuni inflamatoare cronice nivel crescut a) policlonal n: afeciuni inflamatoare cronice
(artrit reumatoid, colagenoze, parazitoze, infecii (artrit reumatoid, colagenoze, parazitoze, infecii
bacteriene); b) monoclonal n macroglobulinemie, mielom bacteriene); b) monoclonal n macroglobulinemie, mielom
multiplu, alte gamapatii multiplu, alte gamapatii
estomparea sau absena benzii gama sugereaz un deficit estomparea sau absena benzii gama sugereaz un deficit
imun (hipo- sau agamaglobulinemie). imun (hipo- sau agamaglobulinemie).
Electroforeza proteinelor se efectueaz aadar cnd se dorete Electroforeza proteinelor se efectueaz aadar cnd se dorete
investigarea nu doar a nivelului total al proteinelor serice, ci i vizualizarea investigarea nu doar a nivelului total al proteinelor serice, ci i vizualizarea
fraciilor acestora, mai ales n contextul unor simptome asociate (dureri fraciilor acestora, mai ales n contextul unor simptome asociate (dureri
articulare, oboseal, fracturi, infecii repetate) ce pot sugera boli articulare, oboseal, fracturi, infecii repetate) ce pot sugera boli
mieloproliferative cu producie de proteine anormale (paraproteine). De mieloproliferative cu producie de proteine anormale (paraproteine). De
asemenea, cunoaterea nivelului fraciilor proteice din ser poate aduce asemenea, cunoaterea nivelului fraciilor proteice din ser poate aduce
29 29
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010

elemente importante n diagnosticul unor maladii care se asociaz cu creteri elemente importante n diagnosticul unor maladii care se asociaz cu creteri
sau reduceri semnificative ale nivelului unora dintre acestea. sau reduceri semnificative ale nivelului unora dintre acestea.

3.3. ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) 3.3. ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay)

Consideraii generale asupra tehnicii ELISA Consideraii generale asupra tehnicii ELISA
Testele imunoenzimatice de tip ELISA (enzyme-linked Testele imunoenzimatice de tip ELISA (enzyme-linked
immunosorbent assay) sunt concepute pentru detectarea i cuantificarea de immunosorbent assay) sunt concepute pentru detectarea i cuantificarea de
substane precum peptide, proteine, anticorpi i hormoni. substane precum peptide, proteine, anticorpi i hormoni.
Tehnica ELISA, const n imobilizarea unui antigen la o suprafa Tehnica ELISA, const n imobilizarea unui antigen la o suprafa
solid i apoi complexarea cu un anticorp care este legat la o enzim. solid i apoi complexarea cu un anticorp care este legat la o enzim.
Detectarea se efectueaz prin evaluarea activitii enzimei conjugat, prin Detectarea se efectueaz prin evaluarea activitii enzimei conjugat, prin
incubare cu un substrat, pentru a realiza o cuantificare a produsului. incubare cu un substrat, pentru a realiza o cuantificare a produsului.
Elementul cel mai important al strategiei de detectare l constituie Elementul cel mai important al strategiei de detectare l constituie
specificitatea nalt a interaciunii anticorp-antigen. specificitatea nalt a interaciunii anticorp-antigen.
Protocolul de detectare cantitativ ELISA este de obicei efectuat n Protocolul de detectare cantitativ ELISA este de obicei efectuat n
plci de polistiren cu 96 de godeuri care vor lega pasiv anticorpi si proteine. plci de polistiren cu 96 de godeuri care vor lega pasiv anticorpi si proteine.
Existena reactanilor ELISA imobilizai la suprafaa microplcilor Existena reactanilor ELISA imobilizai la suprafaa microplcilor
faciliteaz separarea materialului legat de material nelegat n timpul testului. faciliteaz separarea materialului legat de material nelegat n timpul testului.
Detecia se va realiza printr-o enzim legat direct la nivelul anticorpului Detecia se va realiza printr-o enzim legat direct la nivelul anticorpului
primar, sau printr-un anticorp secundar care recunoate anticorpul primar. primar, sau printr-un anticorp secundar care recunoate anticorpul primar.
De asemenea, enzima poate fi legat de o protein, cum ar fi streptavidina, De asemenea, enzima poate fi legat de o protein, cum ar fi streptavidina,
mai ales n cazul n care anticorpul primar este marcat cu biotin. mai ales n cazul n care anticorpul primar este marcat cu biotin.
Cele mai frecvent utilizate enzime sunt peroxidaza din hrean (HRP) Cele mai frecvent utilizate enzime sunt peroxidaza din hrean (HRP)
i fosfataza alcalin (AP), alte enzime fiind doar cu utilizare restrictiv i fosfataza alcalin (AP), alte enzime fiind doar cu utilizare restrictiv
avnd n vedere opiunile limitate pentru substrat (-galactozidaza, avnd n vedere opiunile limitate pentru substrat (-galactozidaza,
acetilcolinesteraza, catalaza). O gam larg de substrate este disponibil acetilcolinesteraza, catalaza). O gam larg de substrate este disponibil
pentru efectuarea ELISA cu un HRP sau conjugat AP. Alegerea substratului pentru efectuarea ELISA cu un HRP sau conjugat AP. Alegerea substratului
depinde de sensibilitatea analizei i a instrumentelor disponibile pentru depinde de sensibilitatea analizei i a instrumentelor disponibile pentru
detectarea i nregistrarea semnalului (spectrofotometru, fluorimetru sau detectarea i nregistrarea semnalului (spectrofotometru, fluorimetru sau
luminometru). luminometru).
Protocoalele ELISA pot fi modificate, prin completri la procedura Protocoalele ELISA pot fi modificate, prin completri la procedura
de baz, momentul cheie, de imobilizare a antigenului de interes, putnd fi de baz, momentul cheie, de imobilizare a antigenului de interes, putnd fi
realizat direct prin adsorbie la plac sau indirect, prin intermediul unui realizat direct prin adsorbie la plac sau indirect, prin intermediul unui
anticorp de captare, care a fost ataat la plac (plcile sunt deja impregnate anticorp de captare, care a fost ataat la plac (plcile sunt deja impregnate
cu acest anticorp). Antigenul este apoi detectat fie direct (anticorpi primari) cu acest anticorp). Antigenul este apoi detectat fie direct (anticorpi primari)
sau indirect (anticorpi secundari). Cel mai sensibil procedeu ELISA este aa sau indirect (anticorpi secundari). Cel mai sensibil procedeu ELISA este aa

30 30
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010

numitul test sandwich numit astfel, datorit faptului c analitul care numitul test sandwich numit astfel, datorit faptului c analitul care
urmeaz s fie msurat este legat ntre doi anticorpi: de captare i de urmeaz s fie msurat este legat ntre doi anticorpi: de captare i de
detectare. detectare.
ELISA poate fi efectuat de asemenea i ca un test competitiv, mai ELISA poate fi efectuat de asemenea i ca un test competitiv, mai
ales n cazul antigenelor de talie mic i care prezint un singur epitop sau ales n cazul antigenelor de talie mic i care prezint un singur epitop sau
situs de legare al anticorpului. Una din variantele acestei metode const n situs de legare al anticorpului. Una din variantele acestei metode const n
marcarea cu antigen purificat n loc de anticorp, n care, antigenul nemarcat marcarea cu antigen purificat n loc de anticorp, n care, antigenul nemarcat
(din prob) i antigenul marcat intr n competiie pentru legarea la (din prob) i antigenul marcat intr n competiie pentru legarea la
anticorpul de captare. O scdere a semnalului pentru antigen purificat indic anticorpul de captare. O scdere a semnalului pentru antigen purificat indic
prezena antigenului n probe, cuantificarea semnalului fiind realizat prezena antigenului n probe, cuantificarea semnalului fiind realizat
comparativ cu nivelul din godeurile ce prezint doar antigenul marcat. comparativ cu nivelul din godeurile ce prezint doar antigenul marcat.
Substanele fluorescente reprezint de asemeni o alternativ la detecia Substanele fluorescente reprezint de asemeni o alternativ la detecia
dependent de enzime n cadrul determinrilor cantitative ale analiilor. dependent de enzime n cadrul determinrilor cantitative ale analiilor.
Metoda direct de detectare ELISA utilizeaz un anticorp primar Metoda direct de detectare ELISA utilizeaz un anticorp primar
marcat care reacioneaz direct cu antigenul. Detectarea direct poate fi marcat care reacioneaz direct cu antigenul. Detectarea direct poate fi
efectuat cu antigen imobilizat direct pe plac sau prin testul de captare. efectuat cu antigen imobilizat direct pe plac sau prin testul de captare.
Modalitatea direct de analiz nu este utilizat pe scar larg n ELISA, dar Modalitatea direct de analiz nu este utilizat pe scar larg n ELISA, dar
este destul de comun pentru coloraia imunohistochimic de esuturi i este destul de comun pentru coloraia imunohistochimic de esuturi i
celule. celule.
Metoda de detecie indirect, mai popular ntre procedeele ELISA Metoda de detecie indirect, mai popular ntre procedeele ELISA
utilizeaz un anticorp secundar marcat specific pentru anticorpul primar (nu utilizeaz un anticorp secundar marcat specific pentru anticorpul primar (nu
i pentru anticorpul de captur, n general acest lucru fiind realizat prin i pentru anticorpul de captur, n general acest lucru fiind realizat prin
utilizarea de anticorpi primari i de captare din specii diferite). utilizarea de anticorpi primari i de captare din specii diferite).
Modelul sandwich msoar cantitatea de antigen ntre dou straturi Modelul sandwich msoar cantitatea de antigen ntre dou straturi
de anticorpi. Antigenele ce urmeaz s fie msurate trebuie s conin cel de anticorpi. Antigenele ce urmeaz s fie msurate trebuie s conin cel
puin dou situsuri antigenice, capabile de legare a anticorpilor, avnd n puin dou situsuri antigenice, capabile de legare a anticorpilor, avnd n
vedere utilizarea celor doi anticorpi n sandwich. Acest procedeu este aadar vedere utilizarea celor doi anticorpi n sandwich. Acest procedeu este aadar
limitat la cuantificarea de antigene multivalente, cum ar fi proteine sau limitat la cuantificarea de antigene multivalente, cum ar fi proteine sau
polizaharide. polizaharide.
Etapa final n toate sistemele ELISA este aceea de detectare, Etapa final n toate sistemele ELISA este aceea de detectare,
realizat de regul cu ajutorul enzimelor care vor transforma substratul ntr- realizat de regul cu ajutorul enzimelor care vor transforma substratul ntr-
un produs detectabil (cu excepia cazului n care se folosesc markeri un produs detectabil (cu excepia cazului n care se folosesc markeri
radioactivi sau fluoresceni). Un procedeu ELISA corect implementat, va radioactivi sau fluoresceni). Un procedeu ELISA corect implementat, va
asigura o proporionalitate direct i corect a intensitii semnalului asigura o proporionalitate direct i corect a intensitii semnalului
nregistrat (odat cu adugarea substratului) cu cantitatea de antigen capturat nregistrat (odat cu adugarea substratului) cu cantitatea de antigen capturat
i legat de reactivi de detectare. Anticorpii enzim-conjugat (n special care i legat de reactivi de detectare. Anticorpii enzim-conjugat (n special care
implic peroxidaza HRP) ofer cea mai mare flexibilitate n metodele de implic peroxidaza HRP) ofer cea mai mare flexibilitate n metodele de
detecie ELISA. Aceasta se datoreaz existenei unei palete largi i variate detecie ELISA. Aceasta se datoreaz existenei unei palete largi i variate

31 31
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010

de substrate disponibile pentru detectri cromogenice, chemifluorescente i de substrate disponibile pentru detectri cromogenice, chemifluorescente i
chemiluminiscente. chemiluminiscente.
Dei nu la fel de sensibile ca cele fluorescente sau Dei nu la fel de sensibile ca cele fluorescente sau
chemiluminiscente, substratele cromogenice ELISA permit vizualizarea chemiluminiscente, substratele cromogenice ELISA permit vizualizarea
direct i permit efectuarea de studii cinetice. Substratele fluorescente direct i permit efectuarea de studii cinetice. Substratele fluorescente
ELISA nu sunt la fel de comune i necesit un fluorometru care produce un ELISA nu sunt la fel de comune i necesit un fluorometru care produce un
fasciculul de excitaie corespunztor, capabil de a provoca emisia fasciculul de excitaie corespunztor, capabil de a provoca emisia
semnalului generat de agentul fluorescent. semnalului generat de agentul fluorescent.

Comparaie ntre metoda ELISA direct i indirect Comparaie ntre metoda ELISA direct i indirect

Rapid, deoarece sunt folosite doar un anticorp i mai Rapid, deoarece sunt folosite doar un anticorp i mai
Avantaje puini pai Avantaje puini pai
Nu exist posibilitatea de reactivitate ncruciat cu Nu exist posibilitatea de reactivitate ncruciat cu
anticorpul secundar anticorpul secundar
Metoda Imunoreactivitatea anticorpului primar ar putea fi Metoda Imunoreactivitatea anticorpului primar ar putea fi
afectat negativ prin marcarea cu enzime sau ali afectat negativ prin marcarea cu enzime sau ali
Direct ageni de marcare Direct ageni de marcare
Dezavantaje Marcarea anticorpilor primari pentru fiecare sistem Dezavantaje Marcarea anticorpilor primari pentru fiecare sistem
specific ELISA este laborioas ca timp i costisitoare. specific ELISA este laborioas ca timp i costisitoare.
Lipsa de flexibilitate n alegerea agentului de marcare Lipsa de flexibilitate n alegerea agentului de marcare
pentru anticorpul primar de la un experiment la altul pentru anticorpul primar de la un experiment la altul
Amplificarea semnalului este minim Amplificarea semnalului este minim

Varietate de anticorpi secundari marcai Varietate de anticorpi secundari marcai


Imunoreactivitatea maximal a anticorpilor primari Imunoreactivitatea maximal a anticorpilor primari
este conservat deoarece nu este marcat este conservat deoarece nu este marcat
Avantaje Sensibilitate crescut, deoarece fiecare anticorp Avantaje Sensibilitate crescut, deoarece fiecare anticorp
primar conine mai muli epitopi care pot fi legai de primar conine mai muli epitopi care pot fi legai de
Metoda ctre anticorpii secundari marcai, permind Metoda ctre anticorpii secundari marcai, permind
amplificarea semnalului. amplificarea semnalului.
Indirect Pot fi folosii markeri de vizualizare diferii pentru Indirect Pot fi folosii markeri de vizualizare diferii pentru
acelai anticorp primar acelai anticorp primar

Posibilitate de nregistrare a unor semnale nespecifice Posibilitate de nregistrare a unor semnale nespecifice
Dezavantaje datorit probabilitii reaciilor ncruciate cu anticorpi Dezavantaje datorit probabilitii reaciilor ncruciate cu anticorpi
secundari secundari
Necesit o etap suplimentar de incubare Necesit o etap suplimentar de incubare

32 32
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010

Tehnica ELISA Tehnica ELISA


1. Anticorpul de captare este mai nti diluat n 0.1M tampon bicarbonat, pH 1. Anticorpul de captare este mai nti diluat n 0.1M tampon bicarbonat, pH
9.2 i se adaug apoi cte 50 l n fiecare godeu al plcii. 9.2 i se adaug apoi cte 50 l n fiecare godeu al plcii.
2. Placa coafat cu anticorpi se acoper cu parafin i se incubeaz peste 2. Placa coafat cu anticorpi se acoper cu parafin i se incubeaz peste
noapte la rece, ntr-o cutie care conine hrtie umed sau, la temperatura noapte la rece, ntr-o cutie care conine hrtie umed sau, la temperatura
camerei i umiditate timp de dou ore. camerei i umiditate timp de dou ore.
3. Placa este golit i locurile neocupate sunt blocate cu 100 l de tampon 3. Placa este golit i locurile neocupate sunt blocate cu 100 l de tampon
de blocare coninnd 100 mM tampon fosfat, pH 7,2, 1% BSA (albumin de blocare coninnd 100 mM tampon fosfat, pH 7,2, 1% BSA (albumin
bovin seric), 0,5% Tween-20 i Thimerosol 0,02% pentru 30 min la bovin seric), 0,5% Tween-20 i Thimerosol 0,02% pentru 30 min la
temperatura camerei. temperatura camerei.
4. Placa este golit i splat de trei ori cu tampon de splare (100 mM 4. Placa este golit i splat de trei ori cu tampon de splare (100 mM
tampon fosfat, 150 mM NaCl, BSA 0,2% i 0,5% Tween 20). tampon fosfat, 150 mM NaCl, BSA 0,2% i 0,5% Tween 20).
5. Soluia de antigen este mai nti diluat n tampon (100 mM tampon 5. Soluia de antigen este mai nti diluat n tampon (100 mM tampon
fosfat, 150mM NaCl) i apoi adaugat n plac ntr-un volum de 50 l pe fosfat, 150mM NaCl) i apoi adaugat n plac ntr-un volum de 50 l pe
godeu. Placa se incubeaz la temperatura camerei timp de 45 de minute godeu. Placa se incubeaz la temperatura camerei timp de 45 de minute
(pn la o or). (pn la o or).
6. Se golete placa din nou i se spal de trei ori cu tampon de splare. 6. Se golete placa din nou i se spal de trei ori cu tampon de splare.
7. Enzima marcat cu anticorp (mpotriva antigenului specific) este diluat 7. Enzima marcat cu anticorp (mpotriva antigenului specific) este diluat
n mod corespunztor n 0.1M tampon bicarbonat, pH 9.2, dup care cte 50 n mod corespunztor n 0.1M tampon bicarbonat, pH 9.2, dup care cte 50
l se adaug n fiecare godeu, cu incubare la temperatura camerei timp de l se adaug n fiecare godeu, cu incubare la temperatura camerei timp de
30 min. 30 min.
8. Placa este golit din nou i splat de trei ori cu tampon de splare. 8. Placa este golit din nou i splat de trei ori cu tampon de splare.
9. Se msoar intensitatea culorii obinute dup adugarea sistemului de 9. Se msoar intensitatea culorii obinute dup adugarea sistemului de
dezvoltare a reaciei de culoare. dezvoltare a reaciei de culoare.

Model de evaluare a concentraiei IL-1 n fluidul gingival Model de evaluare a concentraiei IL-1 n fluidul gingival
(GCF) (GCF)
Metoda imunoenzimatic ELISA de determinre a nivelelor IL-1B se Metoda imunoenzimatic ELISA de determinre a nivelelor IL-1B se
bazeaz pe reacia dintre enzima streptavidin-peroxidaz i substratul bazeaz pe reacia dintre enzima streptavidin-peroxidaz i substratul
tetrametilbenzidin (TMB), iar ca i conjugant biotina. Testul este foarte tetrametilbenzidin (TMB), iar ca i conjugant biotina. Testul este foarte
specific, neprezentnd reactivitate ncruciat cu IL-1A, IL-2, IL-3, IL-4, specific, neprezentnd reactivitate ncruciat cu IL-1A, IL-2, IL-3, IL-4,
IL-7, IL-8, IL-10, IL-13, SCF, IFN-, TNF- sau TNF- umane. IL-7, IL-8, IL-10, IL-13, SCF, IFN-, TNF- sau TNF- umane.
Metoda ELISA utilizat pentru determinarea IL-1 include un cititor Metoda ELISA utilizat pentru determinarea IL-1 include un cititor
de plci ELISA i un kit ELISA Human Interleukin-1 (hIL-1). de plci ELISA i un kit ELISA Human Interleukin-1 (hIL-1).

33 33
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010

Metoda de determinare se bazeaz pe reacia dintre enzima Metoda de determinare se bazeaz pe reacia dintre enzima
streptavidin-peroxidaz i substratul tetrametilbenzidin (TMB), iar ca i streptavidin-peroxidaz i substratul tetrametilbenzidin (TMB), iar ca i
conjugant biotina. conjugant biotina.
Pe scurt, protocolul de lucru, respectnd strict toate indicaiile Pe scurt, protocolul de lucru, respectnd strict toate indicaiile
productorului de utilizare a kitului, const n urmtorii pai: productorului de utilizare a kitului, const n urmtorii pai:
1. Se adaug cte 50 l din standarde, probe i controale n 1. Se adaug cte 50 l din standarde, probe i controale n
godeurile plcilor de test, n acord cu indicaiile de utilizare. godeurile plcilor de test, n acord cu indicaiile de utilizare.
Fraciunile de 50 l ale probelor se scot de la congelator (-70o C) Fraciunile de 50 l ale probelor se scot de la congelator (-70o C)
cu extrem de puin timp nainte de utilizare. cu extrem de puin timp nainte de utilizare.
2. Se adaug cte 50 l de anticorpi specifici anti-IL-1, conjugai 2. Se adaug cte 50 l de anticorpi specifici anti-IL-1, conjugai
cu biotin n fiecare godeu. cu biotin n fiecare godeu.
3. Se incubeaz la temperatura camerei timp de 1 or. 3. Se incubeaz la temperatura camerei timp de 1 or.
4. Se aspir i se spal godeurile de 4 ori cu tamponul de splare 4. Se aspir i se spal godeurile de 4 ori cu tamponul de splare
din kit. din kit.
5. Se adaug cte 100 l de conjugat streptavidin-HRP n fiecare 5. Se adaug cte 100 l de conjugat streptavidin-HRP n fiecare
godeu. godeu.
6. Se incubeaz 30 minute la temperatura camerei. 6. Se incubeaz 30 minute la temperatura camerei.
7. Se aspir i se spal godeurile de 4 ori cu tamponul de splare 7. Se aspir i se spal godeurile de 4 ori cu tamponul de splare
din kit. din kit.
8. Se adaug cte 100 l de cromogen stabilizat n fiecare godeu. 8. Se adaug cte 100 l de cromogen stabilizat n fiecare godeu.
9. Se incubeaz 25 minute la temperatura camerei i la ntuneric. 9. Se incubeaz 25 minute la temperatura camerei i la ntuneric.
10. Se adaug cte 100 l de tampon stop n fiecare godeu. 10. Se adaug cte 100 l de tampon stop n fiecare godeu.
11. Se citete absorbana la 450 nm. Drept standard se folosete o 11. Se citete absorbana la 450 nm. Drept standard se folosete o
soluie din cromogen i tampon stop. Citirea se realizeaz n soluie din cromogen i tampon stop. Citirea se realizeaz n
cel mult 2 ore de la adugarea tamponului stop. cel mult 2 ore de la adugarea tamponului stop.
12. Se construiete (utiliznd un soft) curba standard, respectiv 12. Se construiete (utiliznd un soft) curba standard, respectiv
absorbana standardelor (densitatea optic, O.D.) versus absorbana standardelor (densitatea optic, O.D.) versus
concentraia standard. concentraia standard.
13. Se determin, utiliznd curba standard optim, valorile hIL-1 13. Se determin, utiliznd curba standard optim, valorile hIL-1
din probe i controale. din probe i controale.

34 34
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010

Figura 3. Curba standard pentru testul ELISA hIL-1 Figura 3. Curba standard pentru testul ELISA hIL-1

O privire sintetic asupra testului ELISA hIL-1 este redat n schema: O privire sintetic asupra testului ELISA hIL-1 este redat n schema:

Figura 4. Privire sintetic asupra protocolului ELISA de determinare a hIL-1 Figura 4. Privire sintetic asupra protocolului ELISA de determinare a hIL-1

35 35
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010

3.4. TEHNICA DE CITOMETRIE N FLUX (FCM) 3.4. TEHNICA DE CITOMETRIE N FLUX (FCM)

Principii teoretice i practice Principii teoretice i practice


Citometria n flux (flow-citometria) permite analiza Citometria n flux (flow-citometria) permite analiza
multiparametric, rapid, a celulelor marcate fluorescent. Tehnica se multiparametric, rapid, a celulelor marcate fluorescent. Tehnica se
bazeaz pe capacitatea substanelor fluorescente (fluorocromi) de a emite bazeaz pe capacitatea substanelor fluorescente (fluorocromi) de a emite
semnale luminoase cu lungimi de und particulare, consecutiv excitrii lor semnale luminoase cu lungimi de und particulare, consecutiv excitrii lor
cu fascicule laser. Determinarea intensitii semnalelor optice emise este cu fascicule laser. Determinarea intensitii semnalelor optice emise este
realizat prin intermediul unui citometru, sistem analizor complex ce realizat prin intermediul unui citometru, sistem analizor complex ce
combin componente optice, fluidice i electronice pentru corelarea combin componente optice, fluidice i electronice pentru corelarea
semnalelor optice emise de celule cu parametrii celulari de interes (Zola, semnalelor optice emise de celule cu parametrii celulari de interes (Zola,
2000). 2000).

Aplicaiile citometriei n flux - sunt vaste: Aplicaiile citometriei n flux - sunt vaste:
Metode semicantitative (procente de pozitivitate): Metode semicantitative (procente de pozitivitate):
imunofenotipare imunofenotipare
viabilitate celular/ apoptoz viabilitate celular/ apoptoz
proliferare celular proliferare celular
detecie de citokine intra-celulare detecie de citokine intra-celulare
ciclu celular ciclu celular
Metode cantitative, similare tehnicii ELISA Metode cantitative, similare tehnicii ELISA
msurarea nivelelor de factori solubili prezeni n plasm/ ser msurarea nivelelor de factori solubili prezeni n plasm/ ser
msurarea proteinelor fosforilate prezente n lizate celulare msurarea proteinelor fosforilate prezente n lizate celulare
Substanele fluorescente folosite pentru marcare difer n funcie de Substanele fluorescente folosite pentru marcare difer n funcie de
dou caracteristici majore: lungimea de und la care pot fi excitate i dou caracteristici majore: lungimea de und la care pot fi excitate i
lungimea de und a semnalului optic emis (tabelul 1). Cele mai frecvent lungimea de und a semnalului optic emis (tabelul 1). Cele mai frecvent
utilizate citometre sunt prevzut cu dou lasere, un laser de Argon, ce emite utilizate citometre sunt prevzut cu dou lasere, un laser de Argon, ce emite
la 488 nm i o fotodiod cu emisie la 635 nm. Existena celor dou lasere, la 488 nm i o fotodiod cu emisie la 635 nm. Existena celor dou lasere,
precum i a unui ansamblu de filtre optice i detectori, permite analiza precum i a unui ansamblu de filtre optice i detectori, permite analiza
concomitent a 6 parametri: parametrii morfologici (volumul i concomitent a 6 parametri: parametrii morfologici (volumul i
granularitatea celulelor) i patru markeri celulari distinci legai de tipul de granularitatea celulelor) i patru markeri celulari distinci legai de tipul de
fluorescen emis (fluorescena FL 1, FL 2, FL 3, FL 4). Parametrii celulari fluorescen emis (fluorescena FL 1, FL 2, FL 3, FL 4). Parametrii celulari
pot fi afiati ulterior pe coordonate lineare sau logaritmice, n grafice mono pot fi afiati ulterior pe coordonate lineare sau logaritmice, n grafice mono
parametrice (histograme) sau bi parametrice. parametrice (histograme) sau bi parametrice.

36 36
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010

Fluorocrom Excitatie Emisie Fluorocrom Excitatie Emisie

FITC (izotiocianat de fluoresceina) 488 nm 517 nm FITC (izotiocianat de fluoresceina) 488 nm 517 nm

PE (ficoeritrina) 488 nm 578 nm PE (ficoeritrina) 488 nm 578 nm

CyCr (cianat de crom) 488 nm 675 nm CyCr (cianat de crom) 488 nm 675 nm

APC* (aloficocianina) 635 nm 655-660 nm APC* (aloficocianina) 635 nm 655-660 nm

Calcein-AM 490nm 520nm Calcein-AM 490nm 520nm

JC1 490nm 530-590nm JC1 490nm 530-590nm

Tabelul 1. Substanele fluorescente folosite pentru marcarea anticorpilor Tabelul 1. Substanele fluorescente folosite pentru marcarea anticorpilor
monoclonali si caracteristicile lor optice monoclonali si caracteristicile lor optice

Principiul citometriei n flux continuu Principiul citometriei n flux continuu


Un fascicul de lumin (lumina laser, de obicei) dintr-o singur Un fascicul de lumin (lumina laser, de obicei) dintr-o singur
lungime de und este direcionat pe un flux de lichid concentrat lungime de und este direcionat pe un flux de lichid concentrat
hidrodinamic. O serie de detectori sunt ndreptai nspre punctul n care hidrodinamic. O serie de detectori sunt ndreptai nspre punctul n care
fluxul trece prin fascicul de lumin: unul, n conformitate cu fascicul de fluxul trece prin fascicul de lumin: unul, n conformitate cu fascicul de
lumin cu dispersia pe direcia nainte (Forward Scatter) i fasciculul de lumin cu dispersia pe direcia nainte (Forward Scatter) i fasciculul de
lumin cu dispersia perpendicular (Side Scatter). Fiecare particul de lumin cu dispersia perpendicular (Side Scatter). Fiecare particul de
dimensiuni de la 0.2 - 150 micrometri ce trece prin fasciculul de lumin si dimensiuni de la 0.2 - 150 micrometri ce trece prin fasciculul de lumin si
substanele chimice fluorescente gsite n particule sau ataate de particule substanele chimice fluorescente gsite n particule sau ataate de particule
pot fi excitate s emit lumin la o lungime de und mai mare dect sursa de pot fi excitate s emit lumin la o lungime de und mai mare dect sursa de
lumin. Aceast combinaie de lumin fluorescent i lumin dispersat este lumin. Aceast combinaie de lumin fluorescent i lumin dispersat este
preluat de ctre detectoare i prin analizarea fluctuaiilor de luminozitate, la preluat de ctre detectoare i prin analizarea fluctuaiilor de luminozitate, la
fiecare detector, dup care este posibil obinerea diferitelor tipuri de fiecare detector, dup care este posibil obinerea diferitelor tipuri de
informaii despre structura fizic i chimic a fiecrei particule individuale. informaii despre structura fizic i chimic a fiecrei particule individuale.
FSC este corelat cu volumul celulelor si SSC depinde de complexitatea FSC este corelat cu volumul celulelor si SSC depinde de complexitatea
interioar a particulei (Givan A. 2001). interioar a particulei (Givan A. 2001).
37 37
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010

Figura 5 ilustreaz segregarea semnalelor optice provenite de la Figura 5 ilustreaz segregarea semnalelor optice provenite de la
celule marcate fluorescent, iar n figura 6 este reprezentat principiul general celule marcate fluorescent, iar n figura 6 este reprezentat principiul general
al tehnicii i modul de prelucrare a informaiilor sub form de histograme al tehnicii i modul de prelucrare a informaiilor sub form de histograme
sau grafice bi-parametrice. sau grafice bi-parametrice.

Figura 5. Tehnica de citometrie n flux: segregarea semnalelor optice Figura 5. Tehnica de citometrie n flux: segregarea semnalelor optice
provenite de la moleculele marcate fluorescent, pentru detectarea lor provenite de la moleculele marcate fluorescent, pentru detectarea lor
separat (dupa Zola, 2000) (SSC = detector de granularitate celulara, FSC = separat (dupa Zola, 2000) (SSC = detector de granularitate celulara, FSC =
detector de volum celular, FL = detector de fluorescente; LP = filtre long detector de volum celular, FL = detector de fluorescente; LP = filtre long
pass transparente pentru lungimi de und mai mari de x nm; SP = filtre pass transparente pentru lungimi de und mai mari de x nm; SP = filtre
short pass transparente pentru lungimi de und mai mici de y nm). short pass transparente pentru lungimi de und mai mici de y nm).

38 38
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010

Figura 6. Tehnica de citometrie n flux: principiul general al metodei i Figura 6. Tehnica de citometrie n flux: principiul general al metodei i
prelucrarea informaiilor sub form de grafice; (dupa Abbas i colab., prelucrarea informaiilor sub form de grafice; (dupa Abbas i colab.,
2000). SSC = detector de granularitate celular, FSC = detector de volum 2000). SSC = detector de granularitate celular, FSC = detector de volum
celular, FL = detector de fluorescente celular, FL = detector de fluorescente

Determinarea flow-citometric a celulelor n apoptoz Determinarea flow-citometric a celulelor n apoptoz


Studiul apoptozei, sau morii celulare programate, reprezint una Studiul apoptozei, sau morii celulare programate, reprezint una
dintre cele mai actuale arii de cercetare ale biologiei moderne. Apoptoza dintre cele mai actuale arii de cercetare ale biologiei moderne. Apoptoza
reprezint un proces multistadial caracterizat printr-o cascad de evenimente reprezint un proces multistadial caracterizat printr-o cascad de evenimente
ce duc la nmugurirea membranei celulare, diminuarea volumului celular, ce duc la nmugurirea membranei celulare, diminuarea volumului celular,
fragmentarea proteinelor celulare, condensarea cromatinei i clivajul ADN- fragmentarea proteinelor celulare, condensarea cromatinei i clivajul ADN-
lui (Vermes i colab., 2000). Evidenierea celulelor apoptotice poate fi lui (Vermes i colab., 2000). Evidenierea celulelor apoptotice poate fi
realizat n oricare din aceste stadii. Una dintre etapele cele mai timpurii ale realizat n oricare din aceste stadii. Una dintre etapele cele mai timpurii ale
39 39
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010

procesului de apoptoz este pierderea integritii membranare, ceea ce duce procesului de apoptoz este pierderea integritii membranare, ceea ce duce
la translocarea unor grupri de fosfatidil serin de pe suprafaa la translocarea unor grupri de fosfatidil serin de pe suprafaa
citoplasmatic a membranei, la exterior. citoplasmatic a membranei, la exterior.
Apoptoza poate fi definit ca ansamblul reaciilor biochimice care au Apoptoza poate fi definit ca ansamblul reaciilor biochimice care au
loc la nivelul celulei culminnd cu moartea acesteia, ntr-o form ordonat si loc la nivelul celulei culminnd cu moartea acesteia, ntr-o form ordonat si
silenioas. Celula apoptotic sufer o serie de modificri morfologice: silenioas. Celula apoptotic sufer o serie de modificri morfologice:
alterarea membranei plasmatice cu apariia fenomenului de pustulizare alterarea membranei plasmatice cu apariia fenomenului de pustulizare
(blebbing), reducerea considerabil a volumului celular, condensarea (blebbing), reducerea considerabil a volumului celular, condensarea
citoplasmei. De asemenea au loc modificri la nivel nuclear: cromatina se citoplasmei. De asemenea au loc modificri la nivel nuclear: cromatina se
condenseaz i n final se mparte n mai multe fragmente sferice. Celula condenseaz i n final se mparte n mai multe fragmente sferice. Celula
apoptotic este fagocitat de ctre macrofage sau de ctre celule nvecinate, apoptotic este fagocitat de ctre macrofage sau de ctre celule nvecinate,
fiind astfel evitat rspunsul inflamator local care apare n cazul producerii fiind astfel evitat rspunsul inflamator local care apare n cazul producerii
necrozei, cnd celula i elibereaz coninutul n mediu. necrozei, cnd celula i elibereaz coninutul n mediu.
Detecia apoptozei prin marcarea celulelor cu anexina V/ iodura Detecia apoptozei prin marcarea celulelor cu anexina V/ iodura
de propidiu de propidiu

Calceina-AM (acetoximetil esterul calceinei) este un marker Calceina-AM (acetoximetil esterul calceinei) este un marker
fluorescent cu emisie n verde, utilizat pe scar larg pentru evidenierea fluorescent cu emisie n verde, utilizat pe scar larg pentru evidenierea
deschiderii porului de permeabilitate tranzitorie mitocondrial (PTM). deschiderii porului de permeabilitate tranzitorie mitocondrial (PTM).
Calceina-AM (o molecul nefluorescent) difuzeaz pasiv prin Calceina-AM (o molecul nefluorescent) difuzeaz pasiv prin
membrana celulelor vii, acumulndu-se n compartimentele citosolice, membrana celulelor vii, acumulndu-se n compartimentele citosolice,
inclusiv n mitocondrii. Datorit acestei proprieti, calceina-AM reprezint inclusiv n mitocondrii. Datorit acestei proprieti, calceina-AM reprezint
un instrument foarte util pentru studiul integritii membranelor celulare, iar un instrument foarte util pentru studiul integritii membranelor celulare, iar
toxicitatea sa foarte redus face din acest fluorofor opiunea de elecie toxicitatea sa foarte redus face din acest fluorofor opiunea de elecie
pentru experimentele de lung durat. pentru experimentele de lung durat.
La nivel intracelular acetoximetil esterii sunt hidrolizai prin aciunea La nivel intracelular acetoximetil esterii sunt hidrolizai prin aciunea
esterazelor endogene, elibernd calceina polarizat negativ, intens esterazelor endogene, elibernd calceina polarizat negativ, intens
fluorescent (emisie n verde), care este reinut n compartimentele fluorescent (emisie n verde), care este reinut n compartimentele
citoplasmatice ale celulelor vii. Pentru a estompa semnalul fluorescent citoplasmatice ale celulelor vii. Pentru a estompa semnalul fluorescent
citoplasmatic celulele se incubeaz cu CoCl2, care nu ns nu afecteaz citoplasmatic celulele se incubeaz cu CoCl2, care nu ns nu afecteaz
intensitatea semnalului de la nivel mitocondrial. intensitatea semnalului de la nivel mitocondrial.
Viabilitatea celular poate fi evaluat fie prin modificri Viabilitatea celular poate fi evaluat fie prin modificri
morfologice, fie prin modificri ale permeabilitii membranei plasmatice morfologice, fie prin modificri ale permeabilitii membranei plasmatice
sau a statusului fiziologic, relevate prin excluderea anumitori fluorofori sau sau a statusului fiziologic, relevate prin excluderea anumitori fluorofori sau
acumularea i retenia altora. acumularea i retenia altora.
Marcarea celulelor cu iodur de propidiu (IP) este o metod de Marcarea celulelor cu iodur de propidiu (IP) este o metod de
evaluare a viabilitii, bazat pe excluderea fluoroforului din celulele vii, evaluare a viabilitii, bazat pe excluderea fluoroforului din celulele vii,
fapt ce indic pstrarea integritii membranei plasmatice. Colorarea fapt ce indic pstrarea integritii membranei plasmatice. Colorarea
celulelor neviabile cu iodur de propidiu (IP) este aplicabil la majoritatea celulelor neviabile cu iodur de propidiu (IP) este aplicabil la majoritatea

40 40
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010

tipurilor celulare, fiind o procedur simpl. Rezultatele sunt uor de tipurilor celulare, fiind o procedur simpl. Rezultatele sunt uor de
interpretat: celulele moarte sunt identificate rapid, fiind colorate n rou interpretat: celulele moarte sunt identificate rapid, fiind colorate n rou
fluorescent (IP penetreaz membrana celulelor moarte, legndu-se de acizii fluorescent (IP penetreaz membrana celulelor moarte, legndu-se de acizii
nucleici i emind n rou). nucleici i emind n rou).
Celule viabile cu membrana mitocondrial intact exclud PI, n timp Celule viabile cu membrana mitocondrial intact exclud PI, n timp
ce membranele celulelor moarte i deteriorate sunt permeabile pentru PI. De ce membranele celulelor moarte i deteriorate sunt permeabile pentru PI. De
exemplu celule care sunt considerate viabile sunt FITC anexina V i PI exemplu celule care sunt considerate viabile sunt FITC anexina V i PI
negative; celulele care sunt n apoptoza timpurie sunt FITC anexina V negative; celulele care sunt n apoptoza timpurie sunt FITC anexina V
pozitive i PI negative i celulele care sunt n apoptoza trzie sau sunt deja pozitive i PI negative i celulele care sunt n apoptoza trzie sau sunt deja
moarte sunt att FITC anexina V i PI pozitive. moarte sunt att FITC anexina V i PI pozitive.
Evidenierea anexinei V se face datorit conjugatului su fluorescent Evidenierea anexinei V se face datorit conjugatului su fluorescent
FITC. Anexina V este capabil s lege gruprile de fosfatidil serin FITC. Anexina V este capabil s lege gruprile de fosfatidil serin
Concomitent, celulele investigate sunt marcate cu iodur de propidiu (PI), Concomitent, celulele investigate sunt marcate cu iodur de propidiu (PI),
un fluorocrom cu afinitate pentru acizii nucleici, prin care se face distincia un fluorocrom cu afinitate pentru acizii nucleici, prin care se face distincia
ntre celulele vii i cele moarte. Pentru marcare: se recolteaz celulele din ntre celulele vii i cele moarte. Pentru marcare: se recolteaz celulele din
placa de cultur, se resuspensioneaz n 2 mL soluie tampon de legare a placa de cultur, se resuspensioneaz n 2 mL soluie tampon de legare a
anexinei V, se centrifugheaz la 300xg, 5 minute, apoi, la temperatura anexinei V, se centrifugheaz la 300xg, 5 minute, apoi, la temperatura
camerei, se resuspensioneaz n 500 L soluie tampon de legare a anexinei, camerei, se resuspensioneaz n 500 L soluie tampon de legare a anexinei,
se adaug 5 L anexin V-FITC i 2,5 L PI. Se incubeaz 10 minute la se adaug 5 L anexin V-FITC i 2,5 L PI. Se incubeaz 10 minute la
frigider i se analizeaz la flow-citometru (FACS Calibur, Becton frigider i se analizeaz la flow-citometru (FACS Calibur, Becton
Dickinson). Interpretarea rezultatelor se face innd cont de distribuia Dickinson). Interpretarea rezultatelor se face innd cont de distribuia
fiecrei categorii celulare n cadranele delimitate pe coordonatele de fiecrei categorii celulare n cadranele delimitate pe coordonatele de
fluorescen FL1 (anexin-FITC) versus FL2 (PI) (figura 7). fluorescen FL1 (anexin-FITC) versus FL2 (PI) (figura 7).
FL 2- Iodur de propidiu (PI)

FL 2- Iodur de propidiu (PI)


Celule n apoptoz Celule n apoptoz
tar di v tar di v

Celule vii Celule n apoptoz Celule vii Celule n apoptoz


timpurie timpurie

FL 1-Anexin V - FITC FL 1-Anexin V - FITC

Figura 7. Interpretarea testului de detecie a celulelor apoptotice pe baza Figura 7. Interpretarea testului de detecie a celulelor apoptotice pe baza
utilizrii trusei comerciale furnizat de Becton Dickinson utilizrii trusei comerciale furnizat de Becton Dickinson

41 41
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010

Figura 8. Imagine FACS reprezentativ pentru martor negativ calcein/IP Figura 8. Imagine FACS reprezentativ pentru martor negativ calcein/IP
(calcein-/IP). (calcein-/IP).

Figura 9. Imagini FACS reprezentative pentru martor calcein 24 h (stnga) Figura 9. Imagini FACS reprezentative pentru martor calcein 24 h (stnga)
i 48 h (dreapta) (calcein+/IP-) i 48 h (dreapta) (calcein+/IP-)

Evidenierea potenialului mitocondrial transmembranar prin Evidenierea potenialului mitocondrial transmembranar prin
utilizarea JC-1 utilizarea JC-1
Pentru detectarea variaiilor potenialului electric transmembranar Pentru detectarea variaiilor potenialului electric transmembranar
() la nivel de celul sau de mitocondrie se poate utiliza cationul lipofilic () la nivel de celul sau de mitocondrie se poate utiliza cationul lipofilic
iodur de 5,5',6,6'-tetracloro-1,1',3,3'-tetraetilbenzimidazolil-carbocianin iodur de 5,5',6,6'-tetracloro-1,1',3,3'-tetraetilbenzimidazolil-carbocianin
(numit simplu JC-1). Aceast molecul este capabil s ptrund selectiv n (numit simplu JC-1). Aceast molecul este capabil s ptrund selectiv n
membrana mitocondriilor i i modific reversibil culoarea de la verde la membrana mitocondriilor i i modific reversibil culoarea de la verde la
42 42
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010

oranj, odat cu creterea m peste valori de aproximativ 80-100 mV. oranj, odat cu creterea m peste valori de aproximativ 80-100 mV.
Aceast proprietate se datoreaz formrii reversibile a agregatelor JC-1 n Aceast proprietate se datoreaz formrii reversibile a agregatelor JC-1 n
condiiile polarizrii membranei mitocondriale, care determin modificarea condiiile polarizrii membranei mitocondriale, care determin modificarea
emisiei luminii de la 530 nm (emisia JC-1 sub form de monomer) la 590 emisiei luminii de la 530 nm (emisia JC-1 sub form de monomer) la 590
nm (emisia JC-1 sub form de agregate), cnd fluoroforul este excitat la 490 nm (emisia JC-1 sub form de agregate), cnd fluoroforul este excitat la 490
nm. Pe msur ce membrana mitocondrial devine mai polarizat, culoarea nm. Pe msur ce membrana mitocondrial devine mai polarizat, culoarea
fluoroforului se modific de la verde la oranj. Ambele culori pot fi detectate fluoroforului se modific de la verde la oranj. Ambele culori pot fi detectate
cu ajutorul filtrelor montate pe majoritatea citometrelor de flux, astfel c cu ajutorul filtrelor montate pe majoritatea citometrelor de flux, astfel c
emisia verde (JC-1 monomer) poate fi analizat n canalul de fluorescen 1 emisia verde (JC-1 monomer) poate fi analizat n canalul de fluorescen 1
(FL1), iar emisia oranj (JC-1 agregate), n FL2. Avantajul folosirii JC-1 este (FL1), iar emisia oranj (JC-1 agregate), n FL2. Avantajul folosirii JC-1 este
c analiza probei se poate face att calitativ, prin observarea modificrii c analiza probei se poate face att calitativ, prin observarea modificrii
fluorescenei de la verde la oranj, ct i cantitativ, considernd intensitatea fluorescenei de la verde la oranj, ct i cantitativ, considernd intensitatea
fluorescenei pure detectate att n FL1, ct i n FL2 (Cossarizza & fluorescenei pure detectate att n FL1, ct i n FL2 (Cossarizza &
Salvioli, 1998). JC-1 poate fi folosit pentru a indica iniierea fenomenului de Salvioli, 1998). JC-1 poate fi folosit pentru a indica iniierea fenomenului de
apoptoz. Celulele supuse apoptozei sufer o scdere a potenialului apoptoz. Celulele supuse apoptozei sufer o scdere a potenialului
mitocondrial membranar observat prin schimbarea fluorescenei JC-1 de la mitocondrial membranar observat prin schimbarea fluorescenei JC-1 de la
portocaliu la verde. portocaliu la verde.

Figura 10. FACS reprezentativ pentru distribuia raportului Figura 10. FACS reprezentativ pentru distribuia raportului
agregate/monomer pentru martorul de JC-1 la 24 h (prima) i 48 h (a agregate/monomer pentru martorul de JC-1 la 24 h (prima) i 48 h (a
doua) doua)

nainte de a ncepe orice studiu al apoptozei prin citometrie n flux, ar nainte de a ncepe orice studiu al apoptozei prin citometrie n flux, ar
trebui, ori de cte ori este posibil, s se stabileasc n primul rnd prezena trebui, ori de cte ori este posibil, s se stabileasc n primul rnd prezena
acestor celule vizual. Celulele apoptotice au fost identificate iniial datorit acestor celule vizual. Celulele apoptotice au fost identificate iniial datorit
modificrilor caracteristice n nucleele lor, aceasta fiind n continuare cea modificrilor caracteristice n nucleele lor, aceasta fiind n continuare cea
43 43
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Tehnici de analiz a parametrilor biologici 2010

mai bun metod de evideniere a acestor celule. Modificrile nucleare pot fi mai bun metod de evideniere a acestor celule. Modificrile nucleare pot fi
observate cu un microscop cu fluorescen, prin colorarea cu un colorant a observate cu un microscop cu fluorescen, prin colorarea cu un colorant a
ADN-ului (fig.11). ADN-ului (fig.11).

Figura 11. Celule normale (rndul de sus) i HL60 apoptotice (linie Figura 11. Celule normale (rndul de sus) i HL60 apoptotice (linie
celular normal promielocitar), colorate cu PI i vizualizate prin celular normal promielocitar), colorate cu PI i vizualizate prin
microscopie confocal. microscopie confocal.

Caracteristicile cascadei apoptotice ce pot fi observate prin Caracteristicile cascadei apoptotice ce pot fi observate prin
citometrie de flux sunt: citometrie de flux sunt:
o Exprimarea de proteine implicate n apoptoz o Exprimarea de proteine implicate n apoptoz
o Activarea de caspaze o Activarea de caspaze
o Modificri n potenialul de membran mitocondrial o Modificri n potenialul de membran mitocondrial
o Modificri n membrana plasmatic o Modificri n membrana plasmatic
o Contracia celular o Contracia celular
o Modificri ale cromatinei o Modificri ale cromatinei
o Degradarea ADN-ului o Degradarea ADN-ului
n concluzie, aplicaiile citometriei n flux sunt multiple, cu n concluzie, aplicaiile citometriei n flux sunt multiple, cu
nenumrate avantaje n realizarea fidel i extrem de rapid a unor teste, nenumrate avantaje n realizarea fidel i extrem de rapid a unor teste,
care astzi au devenit analize de rutin n anumite sectoare de diagnostic i care astzi au devenit analize de rutin n anumite sectoare de diagnostic i
cercetare: imunofenotiparea, numrtoarea absolut, enumerarea celulelor cercetare: imunofenotiparea, numrtoarea absolut, enumerarea celulelor
albe reziduale, analiza celulelor stem, a ADN-ului i izolarea prin sortare a albe reziduale, analiza celulelor stem, a ADN-ului i izolarea prin sortare a
celulelor. Prin sistemele superioare de analiz multicolor i sortare, flow celulelor. Prin sistemele superioare de analiz multicolor i sortare, flow
citometrele devin instrumente extrem de eficace i sensibile care furnizeaz citometrele devin instrumente extrem de eficace i sensibile care furnizeaz
laboratoarelor avataje tehnologice eseniale pentru operaii celulare i laboratoarelor avataje tehnologice eseniale pentru operaii celulare i
moleculare de avangard n domeniile biochimiei, geneticii, analizei moleculare de avangard n domeniile biochimiei, geneticii, analizei
multicolore i imunologiei. multicolore i imunologiei.

44 44
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

CAPITOLUL 4 CAPITOLUL 4

ENZIME PLASMATICE CU ROL IN ENZIME PLASMATICE CU ROL IN


DIAGNOSTICUL CLINIC DIAGNOSTICUL CLINIC

4.1. DOZAREA AMILAZEI 4.1. DOZAREA AMILAZEI

1. Consideraii generale 1. Consideraii generale


Amilaza seric este o hidrolaz, enzim ce catalizeaz Amilaza seric este o hidrolaz, enzim ce catalizeaz
degradarea hidrolitic a amidonului, a poli- si oligozaharidelor, cu degradarea hidrolitic a amidonului, a poli- si oligozaharidelor, cu
formare de glucoz; formare de glucoz;
Amilaza se sintetizeaz major n pancreas, glandele salivare,dar n Amilaza se sintetizeaz major n pancreas, glandele salivare,dar n
cantiti mici i n ficat, trompele uterine, suc duodenal, intestin, cantiti mici i n ficat, trompele uterine, suc duodenal, intestin,
muchi scheletici; muchi scheletici;
Este excretat n cantiti mici prin urin, amilaza fiind o 1-4 Este excretat n cantiti mici prin urin, amilaza fiind o 1-4
glucozidaz, enzim cu greutate molecular mic, ce filtreaz prin glucozidaz, enzim cu greutate molecular mic, ce filtreaz prin
membrana glomerular, nefiind reabsorbit, cu excepia situaiilor membrana glomerular, nefiind reabsorbit, cu excepia situaiilor
cnd, prin legare complex cu Ig (imunoglobulinele), formeaz cnd, prin legare complex cu Ig (imunoglobulinele), formeaz
macroamilaza. macroamilaza.
Macroamilaza, form molecular rar, este o izoenzim anormal Macroamilaza, form molecular rar, este o izoenzim anormal
care, datorit dimensiunii sale mari, nu se elimin la nivel renal; care, datorit dimensiunii sale mari, nu se elimin la nivel renal;
Amilaza este o enzim de secreie exocrin, ce prezent n mod Amilaza este o enzim de secreie exocrin, ce prezent n mod
normal dou izoenzime principale: normal dou izoenzime principale:
pancreatic (40% din amilaza seric total) pancreatic (40% din amilaza seric total)
salivar (60% din amilaza seric total) salivar (60% din amilaza seric total)
Inflamaia pancreasului (pancreatit) sau a glandelor salivare (de Inflamaia pancreasului (pancreatit) sau a glandelor salivare (de
ex. n parotidit), determin creterea permeabilitii membranei ex. n parotidit), determin creterea permeabilitii membranei
celulelor acestor esuturi, enzima se scurge din celula productoare celulelor acestor esuturi, enzima se scurge din celula productoare
n snge n cantiti mari, astfel nregistrndu-se nivele mult crescute n snge n cantiti mari, astfel nregistrndu-se nivele mult crescute
fa de normal ale amilazei serice; fa de normal ale amilazei serice;

45 45
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

n pancreatita acut, amilaza seric crete semnificativ in decurs de n pancreatita acut, amilaza seric crete semnificativ in decurs de
24 ore de la debutul simptomatologiei. 24 ore de la debutul simptomatologiei.
Amilaza urinar crete ntotdeauna n paralel cu valoarea Amilaza urinar crete ntotdeauna n paralel cu valoarea
amilazemiei. amilazemiei.
n pancreatita acut amilaza urinar crete dup 6-10 ore de la n pancreatita acut amilaza urinar crete dup 6-10 ore de la
creterea amilazei serice dar se menine crescut mai mult timp dect creterea amilazei serice dar se menine crescut mai mult timp dect
aceasta (valorile crescute persist mai mult timp, dup revenirea la aceasta (valorile crescute persist mai mult timp, dup revenirea la
normal a valorilor serice ale amilazei). Exist ns i situaii cnd normal a valorilor serice ale amilazei). Exist ns i situaii cnd
amilaza urinar poate fi crescut, cu valori normale ale amilazemiei amilaza urinar poate fi crescut, cu valori normale ale amilazemiei
i invers. i invers.
Creterea amilazei serice asociat cu niveluri sczute ale amilazei Creterea amilazei serice asociat cu niveluri sczute ale amilazei
urinare se ntlnete n insuficiena renal i n macroamilazemie urinare se ntlnete n insuficiena renal i n macroamilazemie
(macroamilaza nu se poate elimina prin urin). (macroamilaza nu se poate elimina prin urin).
Recomandri pentru determinarea amilazei Recomandri pentru determinarea amilazei
A) n ser A) n ser
o diagnosticul i monitorizarea tratamentului n pancreatita acut; o diagnosticul i monitorizarea tratamentului n pancreatita acut;
o evaluarea n urgen a cazurilor de abdomen acut o evaluarea n urgen a cazurilor de abdomen acut
B) n urin B) n urin
o diferenierea pancreatitei acute de alte cauze de abdomen acut; o diferenierea pancreatitei acute de alte cauze de abdomen acut;
o diagnosticul pseudochistului de pancreas (amilaza urinar persist o diagnosticul pseudochistului de pancreas (amilaza urinar persist
mai multe saptamni dup normalizarea amilazei serice) mai multe saptamni dup normalizarea amilazei serice)

2.Principiul metodei 2.Principiul metodei


Reactivul conine substrat de maltoheptaozid complexat cu etilidena la Reactivul conine substrat de maltoheptaozid complexat cu etilidena la
care se leag p-nitrofenol (pNP). Alfa-amilaza coninut de proba analizat care se leag p-nitrofenol (pNP). Alfa-amilaza coninut de proba analizat
divizeaz molecula de polizaharid n uniti mai mici, care vor fi divizeaz molecula de polizaharid n uniti mai mici, care vor fi
transformate n glucoz, de ctre alfa-glucozidaza din reactiv. transformate n glucoz, de ctre alfa-glucozidaza din reactiv.
Cantitatea de p-nitrofenol rezultat in urma reaciei este proporional cu Cantitatea de p-nitrofenol rezultat in urma reaciei este proporional cu
activitatea alfa-amilazei din prob. activitatea alfa-amilazei din prob.

5 pNG7 pNG4 +2 pNG3 + 2 pNG2 + 2G5 + 2 G4 + G3 5 pNG7 pNG4 +2 pNG3 + 2 pNG2 + 2G5 + 2 G4 + G3

pNG4 + 2 pNG3 + 2 pNG2 + 14 H2O 5 pNP + 14 G pNG4 + 2 pNG3 + 2 pNG2 + 14 H2O 5 pNP + 14 G

46 46
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

3. Reactivi 3. Reactivi
P-nitrofenol-maltoheptaozida (complexata) 1,47 mmol P-nitrofenol-maltoheptaozida (complexata) 1,47 mmol
Alfa-glicozidaz 2,7KU/L Alfa-glicozidaz 2,7KU/L
Clorur de calciu 6,8 mmol Clorur de calciu 6,8 mmol
Clorura de sodiu 50mmol Clorura de sodiu 50mmol
Tampon, conservani, stabilizatori Tampon, conservani, stabilizatori
ATENIE! ATENIE!
Reactivul este limpede, incolor sau glbui. Dac absorbana msurat la Reactivul este limpede, incolor sau glbui. Dac absorbana msurat la
405nm depaete 0,9 reactivul nu mai este utilizabil. 405nm depaete 0,9 reactivul nu mai este utilizabil.
Reactivul este TOXIC, se va utiliza IN VITRO. Reactivul este TOXIC, se va utiliza IN VITRO.

4. Modul de lucru 4. Modul de lucru


Proba: Ser nehemolizat/ Plasm heparinizat/ Urin (colectata in vase Proba: Ser nehemolizat/ Plasm heparinizat/ Urin (colectata in vase
uscate, pastrata la 2-8C cu pH optim 7). uscate, pastrata la 2-8C cu pH optim 7).
Intr-o eprubet se introduc: Intr-o eprubet se introduc:
Reactiv: 1000 L Reactiv: 1000 L
Proba 25 L Proba 25 L
Dup amestecare i incubare 2 minute la 37C, se citete absorbana la 405 Dup amestecare i incubare 2 minute la 37C, se citete absorbana la 405
nm timp de 2 minute, din 30 in 30 de secunde (n dinamic). Se calculeaz nm timp de 2 minute, din 30 in 30 de secunde (n dinamic). Se calculeaz
variaia absorbanei pe minut (A/min). variaia absorbanei pe minut (A/min).
Calcul: A/min x 5000 = U/L Calcul: A/min x 5000 = U/L

5. Valori de referin 5. Valori de referin

Ser 28-120 U/L Ser 28-120 U/L


Urin 460 U/L (spontan) Urin 460 U/L (spontan)
410 U/24h (pe 24de ore) 410 U/24h (pe 24de ore)

6. Variaii fiziologice i patologice 6. Variaii fiziologice i patologice

A) Amilaza seric - Amilazemia A) Amilaza seric - Amilazemia


VALORI CRESCUTE (fiziologic, n sarcin, valori moderat crescute), iar VALORI CRESCUTE (fiziologic, n sarcin, valori moderat crescute), iar
patologic, n: patologic, n:
a. afeciuni pancreatice a. afeciuni pancreatice
Pancreatita acut (valorile cresc semnificativ dup 3-6 ore Pancreatita acut (valorile cresc semnificativ dup 3-6 ore
de la debutul durerii, i pot depi 8000U) de la debutul durerii, i pot depi 8000U)

47 47
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

Pancreatita cronic Pancreatita cronic


Pancreatita indus medicamentos Pancreatita indus medicamentos
Obstructia ductelor pancreatice (compresia prin calculi, Obstructia ductelor pancreatice (compresia prin calculi,
tumori - carcinom, spasmul oddian indus medicamentos) tumori - carcinom, spasmul oddian indus medicamentos)
Traumatism pancreatic Traumatism pancreatic
b. afeciuni non-pancreatice b. afeciuni non-pancreatice
Afeciuni ale tractului biliar (obstrucia cilor biliare Afeciuni ale tractului biliar (obstrucia cilor biliare
principale, colecistita acut) principale, colecistita acut)
Alterarea permeabilitii tractului gastro-intestinal: ulcer Alterarea permeabilitii tractului gastro-intestinal: ulcer
perforat, postoperator, gastrectomie partiala perforat, postoperator, gastrectomie partiala
Alcoolism Alcoolism
Afectiuni ale glandelor salivare (inflamaie-parotidita Afectiuni ale glandelor salivare (inflamaie-parotidita
epidemica, obstrucie ductal prin litiaz, postiradiere) epidemica, obstrucie ductal prin litiaz, postiradiere)
Tumori metastatice cu secreie ectopic de amilaz (valori Tumori metastatice cu secreie ectopic de amilaz (valori
foarte mari) foarte mari)
Traumatisme cerebrale Traumatisme cerebrale
Macroamilazemie Macroamilazemie
Arsuri si oc traumatic Arsuri si oc traumatic
Apendicita acut Apendicita acut
Insuficiena renal Insuficiena renal
Cetoacidoza diabetic (datorit creterii izoenzimei Cetoacidoza diabetic (datorit creterii izoenzimei
salivare) salivare)
VALORI SCZUTE VALORI SCZUTE
o distrucie marcat i extins a pancreasului (pancreatita acut o distrucie marcat i extins a pancreasului (pancreatita acut
fulminant, pancreatita cronic sever, fibroza chistic fulminant, pancreatita cronic sever, fibroza chistic
sever) sever)
o pancreatectomie o pancreatectomie
o afectare hepatic sever (unele forme de hepatit) o afectare hepatic sever (unele forme de hepatit)
o medicamente: steroizi anabolizanti, unele cefalosporine o medicamente: steroizi anabolizanti, unele cefalosporine

B.) Amilaza urinar Amilazuria B.) Amilaza urinar Amilazuria


VALORI CRESCUTE VALORI CRESCUTE
o Afeciuni pancreatice: pancreatita acut (crete dupa 6-10 o Afeciuni pancreatice: pancreatita acut (crete dupa 6-10
ore de la creterea amilazei serice dar se menine crescut ore de la creterea amilazei serice dar se menine crescut
mai mult timp dect aceasta), pseudochistul de pancreas mai mult timp dect aceasta), pseudochistul de pancreas
(amilaza urinar persist mai multe saptamani dup (amilaza urinar persist mai multe saptamani dup
normalizarea amilazei serice), cancer pancreatic, normalizarea amilazei serice), cancer pancreatic,
traumatism de pancreas traumatism de pancreas
48 48
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

o Afeciuni ale glandelor salivare: parotidit (oreion) o Afeciuni ale glandelor salivare: parotidit (oreion)
o Afeciuni ale cilor biliare: colecistita acut, obstrucie canal o Afeciuni ale cilor biliare: colecistita acut, obstrucie canal
cistic, litiaza coledocului; cistic, litiaza coledocului;
o Boli intestinale grave, prin perforare, trangulare, necroz: o Boli intestinale grave, prin perforare, trangulare, necroz:
ulcer perforat, ocluzie intestinal, perforaie intestinal, ulcer perforat, ocluzie intestinal, perforaie intestinal,
infarct intestinal; infarct intestinal;
o Boli inflamatorii abdominale: peritonita, apendicita acut; o Boli inflamatorii abdominale: peritonita, apendicita acut;
o Sarcina extrauterin, ruptur de chist ovarian; o Sarcina extrauterin, ruptur de chist ovarian;
o Cetoacidoza diabetic o Cetoacidoza diabetic
VALORI SCZUTE VALORI SCZUTE
o Insuficiena pancreatic o Insuficiena pancreatic
o Boli hepatice severe: hepatit, ciroz, cancer, alcoolism o Boli hepatice severe: hepatit, ciroz, cancer, alcoolism
o Insuficiena renal o Insuficiena renal
o Macroamilazemie o Macroamilazemie

7. FUNDAMENTE BIOCHIMICE 7. FUNDAMENTE BIOCHIMICE


Amilaza seric, se gasete sub dou forme izoenzimatice Amilaza seric, se gasete sub dou forme izoenzimatice
principale: pancreatic i salivar principale: pancreatic i salivar
O form molecular rar este macroamilaza, izoenzima care, O form molecular rar este macroamilaza, izoenzima care,
datorit dimensiunii sale mari, nu se elimin la nivel renal. datorit dimensiunii sale mari, nu se elimin la nivel renal.
Pacienii cu pancreatit acut prezint valori crescute ale amilazei Pacienii cu pancreatit acut prezint valori crescute ale amilazei
serice n decurs de 24 ore de la debutul simptomatologiei (durerii). serice n decurs de 24 ore de la debutul simptomatologiei (durerii).
Amilaza urinar crete paralel cu valoarea amilazemiei. n Amilaza urinar crete paralel cu valoarea amilazemiei. n
pancreatita acut amilaza urinar crete dup 6-10 ore de la pancreatita acut amilaza urinar crete dup 6-10 ore de la
creterea amilazei serice i se menine crescut mai mult timp creterea amilazei serice i se menine crescut mai mult timp
dect aceasta. dect aceasta.
Amilaza seric i n paralel amilaza urinar nregistreaz valori mari Amilaza seric i n paralel amilaza urinar nregistreaz valori mari
de regul n afeciunile pancreatice i ale glandelor salivare, de de regul n afeciunile pancreatice i ale glandelor salivare, de
natur inflamatorie, traumatic, neoplazic; natur inflamatorie, traumatic, neoplazic;
In insuficiena pancreatic (cu reducerea scleroza - volumului In insuficiena pancreatic (cu reducerea scleroza - volumului
glandular), amilaza nregistreaz valori sczute att n ser ct i n glandular), amilaza nregistreaz valori sczute att n ser ct i n
urin. urin.
Amilaza seric asociat cu amilaza urinar se intalnete in Amilaza seric asociat cu amilaza urinar se intalnete in
insuficiena renal i n macroamilazemie. insuficiena renal i n macroamilazemie.

49 49
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

8. MCQ 8. MCQ
A1 Amilaza seric A1 Amilaza seric
A. este o fosfataz A. este o fosfataz
B. catalizeaz degradarea acizilor grai, cu formare de corpi B. catalizeaz degradarea acizilor grai, cu formare de corpi
cetonici cetonici
C. este o enzim de secreie endocrin C. este o enzim de secreie endocrin
D. este prezent sub forma a dou izoenzime principale: intestinal D. este prezent sub forma a dou izoenzime principale: intestinal
i muscular i muscular
E. este prezent n cantiti foarte mici n ficat, sucul duodenal, E. este prezent n cantiti foarte mici n ficat, sucul duodenal,
trompele uterine trompele uterine
A2 Amilaza urinar A2 Amilaza urinar
A. crete de regul n paralel cu valoarea amilazemiei A. crete de regul n paralel cu valoarea amilazemiei
B. n pancreatit, crete naintea amilazei serice cu 6-8h B. n pancreatit, crete naintea amilazei serice cu 6-8h
C. n pancreatit, se menine crescut mai puin timp decat amilaza C. n pancreatit, se menine crescut mai puin timp decat amilaza
seric seric
D. este scazut si asociat cu amilaza seric crescut n insuficiena D. este scazut si asociat cu amilaza seric crescut n insuficiena
renal si macroamilazemie renal si macroamilazemie
E. nu nregistreaz creteri n paralel cu cele ale amilazei serice E. nu nregistreaz creteri n paralel cu cele ale amilazei serice

A3 Care din urmtoarele afirmaii, NU este adevarat: A3 Care din urmtoarele afirmaii, NU este adevarat:
A. una dintre cele dou izoenzime principale ale amilazei este A. una dintre cele dou izoenzime principale ale amilazei este
macroamilaza care, datorita dimensiunii mari, nu se elimina la macroamilaza care, datorita dimensiunii mari, nu se elimina la
nivel renal nivel renal
B. pacienii cu pancreatit acut prezint valori crescute ale B. pacienii cu pancreatit acut prezint valori crescute ale
amilazei serice n decurs de 24 ore de la debutul amilazei serice n decurs de 24 ore de la debutul
simptomatologiei simptomatologiei
C. n pancreatita acut amilaza urinar nregistreaz valori crescute, C. n pancreatita acut amilaza urinar nregistreaz valori crescute,
dup un interval de 6-10 ore de la creterea amilazei serice dup un interval de 6-10 ore de la creterea amilazei serice
D. amilaza urinar se menine la valori crescute mai mult timp D. amilaza urinar se menine la valori crescute mai mult timp
dect cea seric, la bolnavii cu pancreatit acut dect cea seric, la bolnavii cu pancreatit acut
E. bolnavii cu pancreatit acut prezint mai nti o cretere a E. bolnavii cu pancreatit acut prezint mai nti o cretere a
amilazei urinare i ulterior a celei serice amilazei urinare i ulterior a celei serice
A4 Valorile normale ale amilazei serice sunt: A4 Valorile normale ale amilazei serice sunt:
A. 460U/L A. 460U/L
B. 28-120U/L B. 28-120U/L
C. 150mg/dL C. 150mg/dL
D. 200U/L D. 200U/L
E. nici un raspuns corect E. nici un raspuns corect

50 50
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

A5 Determinarea amilazei NU este recomandat pentru: A5 Determinarea amilazei NU este recomandat pentru:
A. diagnosticul i monitorizarea tratamentului n pancreatita acut A. diagnosticul i monitorizarea tratamentului n pancreatita acut
B. evaluarea n urgen a cazurilor de abdomen acut B. evaluarea n urgen a cazurilor de abdomen acut
C. diferenierea pancreatitei acute de alte cauze de abdomen acut C. diferenierea pancreatitei acute de alte cauze de abdomen acut
D. diagnosticul i tratamentul diabetului zaharat D. diagnosticul i tratamentul diabetului zaharat
E. diagnosticul pseudochistului de pancreas E. diagnosticul pseudochistului de pancreas
A6 Amilaza seric crete n urmtoarele situaii, CU EXCEPIA: A6 Amilaza seric crete n urmtoarele situaii, CU EXCEPIA:
A. afeciuni pancreatice: pancreatita acut, pancreatita cronic A. afeciuni pancreatice: pancreatita acut, pancreatita cronic
B. pancreatectomie B. pancreatectomie
C. afeciuni ale tractului biliar C. afeciuni ale tractului biliar
D. ingestie acut de alcool D. ingestie acut de alcool
E. afeciuni ale glandelor salivare E. afeciuni ale glandelor salivare
A7 Amilaza seric poate nregistra valori sczute la pacieni cu: A7 Amilaza seric poate nregistra valori sczute la pacieni cu:
A. distrucie marcat i extins a pancreasului A. distrucie marcat i extins a pancreasului
B. tumori metastatice cu secreie ectopic de amilaz B. tumori metastatice cu secreie ectopic de amilaz
C. macroamilazemie C. macroamilazemie
D. leziuni hepatice severe D. leziuni hepatice severe
E. n nici unul din aceste cazuri E. n nici unul din aceste cazuri
A8 Amilaza urinar crete n urmtoarele cazuri, CU EXCEPIA: A8 Amilaza urinar crete n urmtoarele cazuri, CU EXCEPIA:
A. pancreatita acut A. pancreatita acut
B. obstrucia cilor biliare B. obstrucia cilor biliare
C. traumatism de pancreas i glande salivare C. traumatism de pancreas i glande salivare
D. pseudochist de pancreas D. pseudochist de pancreas
E. afeciuni hepatice severe E. afeciuni hepatice severe

A9 Amilaza urinar scade n urmtoarele situaii, CU EXCEPIA: A9 Amilaza urinar scade n urmtoarele situaii, CU EXCEPIA:
A. hepatite cronice A. hepatite cronice
B. ciroza hepatic B. ciroza hepatic
C. carcinom hepatic C. carcinom hepatic
D. alcoolism cronic D. alcoolism cronic
E. pancreatita acut E. pancreatita acut

A10 Amilaza seric: A10 Amilaza seric:


A. poate crete moderat in sarcina normal A. poate crete moderat in sarcina normal
B. este o liaz care desface legturile 1-4 glicozidice B. este o liaz care desface legturile 1-4 glicozidice
C. nu este influenat de ingestia acut sau cronic de alcool C. nu este influenat de ingestia acut sau cronic de alcool
D. este principalul test n diagnosticul insuficienei renale D. este principalul test n diagnosticul insuficienei renale
E. scade n apendicita acut E. scade n apendicita acut

51 51
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

4.2. DOZAREA TRANSAMINAZELOR 4.2. DOZAREA TRANSAMINAZELOR

GLUTAMIC PIRUVIC TRANSAMINAZA GLUTAMIC PIRUVIC TRANSAMINAZA


(Alanin Transaminaza) - (GPT, ALT) (Alanin Transaminaza) - (GPT, ALT)

1. Consideraii generale 1. Consideraii generale


ALT cunoate o distribuie destul de larg, gsindu-se n special n: ALT cunoate o distribuie destul de larg, gsindu-se n special n:
ficat (de trei ori mai mult dect n alte esuturi) ficat (de trei ori mai mult dect n alte esuturi)
esutul miocardic esutul miocardic
muschii scheletici muschii scheletici
rinichi rinichi
pancreas pancreas
La nivel hepatic, ALT se afl mai ales n hepatocitele de la periferia La nivel hepatic, ALT se afl mai ales n hepatocitele de la periferia
lobulului hepatic i este localizat exclusiv citoplasmatic (n timp ce glutamic lobulului hepatic i este localizat exclusiv citoplasmatic (n timp ce glutamic
oxalacetic transaminaza GOT, cunoscuta si sub numele de aspartat oxalacetic transaminaza GOT, cunoscuta si sub numele de aspartat
transaminaza - AST, cunoate o distribuie bimodal, putnd fi gasit i la transaminaza - AST, cunoate o distribuie bimodal, putnd fi gasit i la
nivel mitocondrial). nivel mitocondrial).
Odat cu alterarea metabolismului energetic al celulei hepatice, Odat cu alterarea metabolismului energetic al celulei hepatice,
indus fie de ageni infecioi (cum sunt virusurile hepatice de exemplu) sau indus fie de ageni infecioi (cum sunt virusurile hepatice de exemplu) sau
toxici, se produce o cretere a permeabilitii membranei celulare hepatice, toxici, se produce o cretere a permeabilitii membranei celulare hepatice,
cu eliberarea n ser a componentelor citoplasmatice (citoliz). n acest fel, o cu eliberarea n ser a componentelor citoplasmatice (citoliz). n acest fel, o
cretere semnificativ n ser a nivelului acestei enzime (i nu numai, citoliza cretere semnificativ n ser a nivelului acestei enzime (i nu numai, citoliza
antrennd scurgerea ctre torentul circulator i a altor enzime, precum AST, antrennd scurgerea ctre torentul circulator i a altor enzime, precum AST,
LDH), reprezint indicator fidel pentru instalarea unei suferine hepatice. LDH), reprezint indicator fidel pentru instalarea unei suferine hepatice.
Factorii care influeneaz nivelul seric al acestor enzime marker de Factorii care influeneaz nivelul seric al acestor enzime marker de
distrucie intracelular sunt: distrucie intracelular sunt:
severitatea afectrii i numrul de hepatocite lezate severitatea afectrii i numrul de hepatocite lezate
viteza cu care s-au produs leziunile viteza cu care s-au produs leziunile
viteza de excreie n ser a enzimelor respective viteza de excreie n ser a enzimelor respective
ALT este indicatorul de citoliz cel mai frecvent explorat, ALT este indicatorul de citoliz cel mai frecvent explorat,
majoritatea autorilor considerndu-l cel mai relevant pentru detectarea chiar majoritatea autorilor considerndu-l cel mai relevant pentru detectarea chiar
i a leziunilor hepatice minime. n plus, ALT este specific pentru i a leziunilor hepatice minime. n plus, ALT este specific pentru
afeciunile hepatice (cealalt transaminaz - AST, dei nregistreaz valori afeciunile hepatice (cealalt transaminaz - AST, dei nregistreaz valori
crescute n leziuni ale ficatului, nu este specific la acest nivel, modificri crescute n leziuni ale ficatului, nu este specific la acest nivel, modificri

52 52
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

spectaculoase ale acesteia din urm nregistrndu-se n cazul alterrilor spectaculoase ale acesteia din urm nregistrndu-se n cazul alterrilor
esutului miocardic, spre exemplu, n infarctul de miocard). esutului miocardic, spre exemplu, n infarctul de miocard).
Valorile absolute ale ALT nu se coreleaz totui direct cu Valorile absolute ale ALT nu se coreleaz totui direct cu
severitatea afectrii ficatului i cu prognosticul, de aceea se recomand severitatea afectrii ficatului i cu prognosticul, de aceea se recomand
explorarea n dinamic a acestui parametru, atunci cnd valorile sale sunt explorarea n dinamic a acestui parametru, atunci cnd valorile sale sunt
modificate fa de normal. modificate fa de normal.
Recomandri pentru determinarea ALT Recomandri pentru determinarea ALT
Cunoaterea nivelului acestei transaminaze n snge este util: Cunoaterea nivelului acestei transaminaze n snge este util:
- atunci cnd pacientul prezint unele din semnele - atunci cnd pacientul prezint unele din semnele
caracteristice unei disfuncionaliti hepatice precum: caracteristice unei disfuncionaliti hepatice precum:
ameeli, stare de vom, dureri abdominale, oboseal continu, ameeli, stare de vom, dureri abdominale, oboseal continu,
colorarea n galben a tegumentelor (icter), sau urini nchise la colorarea n galben a tegumentelor (icter), sau urini nchise la
culoare; culoare;
- asociat cu ali parametri de laborator, putnd fi relevant n - asociat cu ali parametri de laborator, putnd fi relevant n
depistarea alterrilor hepatice n cazul consumatorilor cronici depistarea alterrilor hepatice n cazul consumatorilor cronici
de alcool; de alcool;
- la cei cu istoric de boala hepatica familial, sau - la cei cu istoric de boala hepatica familial, sau
- cei care urmeaz un tratament cu formule medicamentoase ce - cei care urmeaz un tratament cu formule medicamentoase ce
pot interfera funcia normal hepatic (iar medicamentele n pot interfera funcia normal hepatic (iar medicamentele n
acest sens, adic cele care au efecte adverse ce se rsfrng acest sens, adic cele care au efecte adverse ce se rsfrng
asupra funciei ficatului, sunt foarte numeroase). asupra funciei ficatului, sunt foarte numeroase).
n esen, dozarea ALT este util in: n esen, dozarea ALT este util in:
1. Diagnosticul bolilor hepatice; 1. Diagnosticul bolilor hepatice;
2. Monitorizarea evoluiei i a tratamentului hepatitei virale; 2. Monitorizarea evoluiei i a tratamentului hepatitei virale;
3. Diagnosticul diferenial al bolilor hepatobiliare i 3. Diagnosticul diferenial al bolilor hepatobiliare i
pancreatice; pancreatice;
4. Diagnosticul diferenial ntre forme variate de icter. 4. Diagnosticul diferenial ntre forme variate de icter.

2. Principiul metodei 2. Principiul metodei


Transaminazele catalizeaz transferul de grupare amino de la un aminoacid Transaminazele catalizeaz transferul de grupare amino de la un aminoacid
la un cetoacid, cu interconversia substratelor specifice: aminoacid i la un cetoacid, cu interconversia substratelor specifice: aminoacid i
cetoacid, ntr-o nou pereche de aminoacid i cetoacid. Enzima ALT (GPT) cetoacid, ntr-o nou pereche de aminoacid i cetoacid. Enzima ALT (GPT)
catalizeaz interconversia substratelor specifice: alanina Ala (aminoacid) catalizeaz interconversia substratelor specifice: alanina Ala (aminoacid)
si alfacetoglutaratul (cetoacid). Piruvatul format n aceast reacie (prin si alfacetoglutaratul (cetoacid). Piruvatul format n aceast reacie (prin
transaminarea alaninei) este supus aciunii lactat dehidrogenazei LDH, cu transaminarea alaninei) este supus aciunii lactat dehidrogenazei LDH, cu
conversia consecutiv a coenzimei reduse a acesteia (NADH + H+) n forma conversia consecutiv a coenzimei reduse a acesteia (NADH + H+) n forma
oxidat (NAD+) i formare de lactat. Variaia absorbanei NADH msurat oxidat (NAD+) i formare de lactat. Variaia absorbanei NADH msurat
la 340 nm este proporional cu activitatea ALT. la 340 nm este proporional cu activitatea ALT.

53 53
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

Ala + cetoglutarat TGP



piruvat + Glu (glutamat) Ala + cetoglutarat TGP

piruvat + Glu (glutamat)

Piruvat + NADH+H+ LDH


lactat + NAD+ Piruvat + NADH+H+ LDH
lactat + NAD+

3. Reactivi 3. Reactivi

Reactiv 1 (R1): Reactiv 1 (R1):


Tampon TRIS, pH=7,5 110 mmol/L Tampon TRIS, pH=7,5 110 mmol/L
L-alanin 550 mmol/L L-alanin 550 mmol/L

Reactiv 2 (R2): Reactiv 2 (R2):


LDH 1200 mmol/L LDH 1200 mmol/L
NADH + H+ 0,2 mmol/L NADH + H+ 0,2 mmol/L
- cetoglutarat 16 mmol/L - cetoglutarat 16 mmol/L

4. Modul de lucru 4. Modul de lucru


Proba: Ser nehemolizat / Plasm Proba: Ser nehemolizat / Plasm
Se pregtete amestecul de reactivi (soluia stoc-R): se dizolv coninutul Se pregtete amestecul de reactivi (soluia stoc-R): se dizolv coninutul
unui flacon de R2 n cantitatea corespunztoare de reactiv 1 (R1). unui flacon de R2 n cantitatea corespunztoare de reactiv 1 (R1).
ntr-o eprubet se introduc: ntr-o eprubet se introduc:
Amestec de reactivi (R) 1000 L Amestec de reactivi (R) 1000 L
Proba 100 L Proba 100 L
Dup amestecare i o incubare de 1 minut la 37C se citete valoarea Dup amestecare i o incubare de 1 minut la 37C se citete valoarea
absorbanei (A) la 340 nm, n cuve de 1cm, fa de ap distilata. Se va absorbanei (A) la 340 nm, n cuve de 1cm, fa de ap distilata. Se va
urmri variaia absorbanei pe minut (A/min) timp de 3 minute. urmri variaia absorbanei pe minut (A/min) timp de 3 minute.
Mod de msurare: cinetic (descresctor). Mod de msurare: cinetic (descresctor).
Calcul: U/L = ( A/min) 1750 Calcul: U/L = ( A/min) 1750

5. Valori de referin < 40 U/L 5. Valori de referin < 40 U/L

6. Variaii patologice 6. Variaii patologice


ALT reprezint un indicator precoce n afectarea acut hepatic. ALT reprezint un indicator precoce n afectarea acut hepatic.
Timpul de njumtire (T1/2) al ALT este mai prelungit, astfel nct Timpul de njumtire (T1/2) al ALT este mai prelungit, astfel nct
aceasta enzim persist mai mult n ser dect AST al carei timp de aceasta enzim persist mai mult n ser dect AST al carei timp de
njumtire este mai scurt. njumtire este mai scurt.

54 54
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

VALORI CRESCUTE VALORI CRESCUTE


Creterea valorilor TGP (enzim intracelular) se nregistreaz n Creterea valorilor TGP (enzim intracelular) se nregistreaz n
situaia deversrii n cantitate mai mare dect cea fiziologic (normal) a situaia deversrii n cantitate mai mare dect cea fiziologic (normal) a
enzimei n torentul circulator, cauzat fie de creterea permeabilitii enzimei n torentul circulator, cauzat fie de creterea permeabilitii
celulare (hepatice n principal sau miocardice) consecutiv fenomenelor celulare (hepatice n principal sau miocardice) consecutiv fenomenelor
inflamatorii, cronice, toxice sau neoplazice, fie de liza acestor celule inflamatorii, cronice, toxice sau neoplazice, fie de liza acestor celule
(determinat de reducerea duratei de via ca n cazul alterrilor canceroase, (determinat de reducerea duratei de via ca n cazul alterrilor canceroase,
sau de ageni infecioi. alterri ale irigaiei i deci ale vitalitii n teritoriile sau de ageni infecioi. alterri ale irigaiei i deci ale vitalitii n teritoriile
tisulare afectate). tisulare afectate).
Cele mai importante i mai rapide creteri n ser ale enzimelor Cele mai importante i mai rapide creteri n ser ale enzimelor
celulare survin n leziunile toxice ale ficatului (provocate ndeosebi de celulare survin n leziunile toxice ale ficatului (provocate ndeosebi de
intoxicaia cu ciuperci, tetraclorura de carbon). Valorile aminotransferazelor intoxicaia cu ciuperci, tetraclorura de carbon). Valorile aminotransferazelor
pot depi n aceste situaii, de 100 de ori limita superioar a normalului. pot depi n aceste situaii, de 100 de ori limita superioar a normalului.
Nivelul ALT este modificat n ser, n principal n urmtoarele Nivelul ALT este modificat n ser, n principal n urmtoarele
cazuri: cazuri:
Afeciuni hepatice, de natur: Afeciuni hepatice, de natur:
o inflamatorie - hepatit (cu valori semnificativ mai mari o inflamatorie - hepatit (cu valori semnificativ mai mari
n procesele acute); n procesele acute);
o cronic - ciroz o cronic - ciroz
o neoplazic - cancer (cu afectare primar - hepatom sau o neoplazic - cancer (cu afectare primar - hepatom sau
secundar - metastaze); secundar - metastaze);
o mecanic (obstruc|ie) - colestaz intrahepatic; o mecanic (obstruc|ie) - colestaz intrahepatic;
Inflamaia altor esuturi: Inflamaia altor esuturi:
o colecistit (inflamaia vezicii biliare) o colecistit (inflamaia vezicii biliare)
o pancreatit acut (inflamaia pancreasului), o pancreatit acut (inflamaia pancreasului),
Distrucii severe celulare (citoliz) - infarct miocardic acut, Distrucii severe celulare (citoliz) - infarct miocardic acut,
insuficien cardiac; insuficien cardiac;
Infecii severe (mononucleoza infecioas) Infecii severe (mononucleoza infecioas)
oc, arsuri, eclampsie oc, arsuri, eclampsie
n hepatita viral acut: survine o lezare destul de rapid a unui n hepatita viral acut: survine o lezare destul de rapid a unui
numr mare de hepatocite; creterea aminotransferazelor depete numr mare de hepatocite; creterea aminotransferazelor depete
de 10-100 de ori limita superioar a normalului. de 10-100 de ori limita superioar a normalului.
o n hepatita acut cu virus A, creterea ALT precede cu dou o n hepatita acut cu virus A, creterea ALT precede cu dou
sptmni instalarea icterului, cu revenirea la normal a sptmni instalarea icterului, cu revenirea la normal a
valorilor ALT n decurs de aproximativ 3 saptmni. valorilor ALT n decurs de aproximativ 3 saptmni.
Markerii de laborator sunt primele semne pozitive care apar Markerii de laborator sunt primele semne pozitive care apar
cu mult naintea semnelor clinice evidente, parametrii cu mult naintea semnelor clinice evidente, parametrii
biologici fiind primii care apar i ultimii care dispar, ei biologici fiind primii care apar i ultimii care dispar, ei
55 55
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

ramnnd pentru un timp pozitivi chiar dup dispariia ramnnd pentru un timp pozitivi chiar dup dispariia
semnelor clinice de boal (icter). semnelor clinice de boal (icter).
o n cazul hepatitelor virale cu virus B sau C, valoarea ALT o n cazul hepatitelor virale cu virus B sau C, valoarea ALT
prezint creteri i scderi imprevizibile, revenind la valori prezint creteri i scderi imprevizibile, revenind la valori
aproape normale. aproape normale.
n icterele obstructive creterile pot fi mici i tardive; creterea n icterele obstructive creterile pot fi mici i tardive; creterea
rapid i marcat (>600 U/l) urmat de o scdere abrupt n decurs rapid i marcat (>600 U/l) urmat de o scdere abrupt n decurs
de 12-72 ore este considerat caracteristic pentru obstrucia acut a de 12-72 ore este considerat caracteristic pentru obstrucia acut a
ductelor bilare. ductelor bilare.
n hepatita cronic persistent, valorile transaminazelor apar n hepatita cronic persistent, valorile transaminazelor apar
intermitent crescute; n hepatita cronic activat apar creteri ale intermitent crescute; n hepatita cronic activat apar creteri ale
ALT, dar nu la nivelul celor din hepatita acut; ALT, dar nu la nivelul celor din hepatita acut;
n hepatita cronic progresiv valoarea transaminazelor crete cu n hepatita cronic progresiv valoarea transaminazelor crete cu
pn la 20 de ordine de mrime fa de limita superioar a pn la 20 de ordine de mrime fa de limita superioar a
normalului. normalului.
Hepatita cronic stabilizat, n care procesul inflamator este cantonat Hepatita cronic stabilizat, n care procesul inflamator este cantonat
n spaiile portale, se insoete de regul de creteri mai puin n spaiile portale, se insoete de regul de creteri mai puin
exprimate ale acestor enzime (2-3 ori limita superioar a normalului) exprimate ale acestor enzime (2-3 ori limita superioar a normalului)
i de obicei, ALT>AST. i de obicei, ALT>AST.
Hepatopatia alcoolic acut duce la creteri relativ mai importante Hepatopatia alcoolic acut duce la creteri relativ mai importante
ale aminotransferazelor (5-10 ori limita superioar a normalului), iar ale aminotransferazelor (5-10 ori limita superioar a normalului), iar
AST>ALT. AST>ALT.
n cirozele hepatice decompensate parenchimatos (cnd parenchimul n cirozele hepatice decompensate parenchimatos (cnd parenchimul
hepatic este n parte nlocuit cu esut fibros) creterile enzimatice hepatic este n parte nlocuit cu esut fibros) creterile enzimatice
sunt reduse, accentundu-se n puseele evolutive necrotice, cnd sunt reduse, accentundu-se n puseele evolutive necrotice, cnd
AST>ALT. AST>ALT.
n procesele neoplazice ale ficatului, cnd lezarea celulelor hepatice n procesele neoplazice ale ficatului, cnd lezarea celulelor hepatice
se produce pe arii limitate, n jurul infiltratului malign, apar creteri se produce pe arii limitate, n jurul infiltratului malign, apar creteri
moderate ale aminotransferazelor, dei lezarea celulelor este sever. moderate ale aminotransferazelor, dei lezarea celulelor este sever.
n metastazele hepatice se observ uneori creteri moderate ale n metastazele hepatice se observ uneori creteri moderate ale
ALT, iar n hepatomul primar nu se produc modificri remarcabile. ALT, iar n hepatomul primar nu se produc modificri remarcabile.
n steatoza hepatic - creteri ale ALT de 2-3 ori fa de valorile n steatoza hepatic - creteri ale ALT de 2-3 ori fa de valorile
fiziologice. fiziologice.
Creteri moderate ale ALT se observ i n strile de oc, arsuri Creteri moderate ale ALT se observ i n strile de oc, arsuri
severe, mononucleoza infecioas, leucemia limfoblastic acut severe, mononucleoza infecioas, leucemia limfoblastic acut
(copii), infarctul miocardic, insuficiena cardiac, eclampsie, (copii), infarctul miocardic, insuficiena cardiac, eclampsie,
hepatotoxice, pancreatita acut. hepatotoxice, pancreatita acut.
La subiecii sntoi, raportul De Rittis, (AST/ALT) este aproximativ La subiecii sntoi, raportul De Rittis, (AST/ALT) este aproximativ
1,15-1,3. 1,15-1,3.

56 56
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

Valorile diminuate (subunitare) ale raportului De Rittis n diversele Valorile diminuate (subunitare) ale raportului De Rittis n diversele
afeciuni hepatice apar: afeciuni hepatice apar:
in cazul unei leziuni moderate care afecteaz doar in cazul unei leziuni moderate care afecteaz doar
permeabilitatea membranei hepatocitelor, scurgerea din celule permeabilitatea membranei hepatocitelor, scurgerea din celule
interesnd mai ales enzimele cu localizare citosolic aa cum este interesnd mai ales enzimele cu localizare citosolic aa cum este
ALT; ALT;
fie datorit creterii nivelului circulant al ALT (prin scurgerea fie datorit creterii nivelului circulant al ALT (prin scurgerea
predominant n snge a acestei transaminaze care se afl n predominant n snge a acestei transaminaze care se afl n
cantitate mai mare n celulele de la periferia lobulilor hepatici, cantitate mai mare n celulele de la periferia lobulilor hepatici,
mai rapid afectate de procesele inflamatorii). mai rapid afectate de procesele inflamatorii).
Valori crescute ale raportului se nregistreaz la: Valori crescute ale raportului se nregistreaz la:
*aloolici (hepatitele alcoolice prin deficit de vitamina B6) *aloolici (hepatitele alcoolice prin deficit de vitamina B6)
*tranzitoriu la gravide *tranzitoriu la gravide
*ciroza hepatic *ciroza hepatic
*metastazele hepatice *metastazele hepatice
Valori critice: sindromul alcool-acetaminofen: valori >9000 U/L Valori critice: sindromul alcool-acetaminofen: valori >9000 U/L
(nivelele extreme pot distinge acest sindrom de hepatita viral sau (nivelele extreme pot distinge acest sindrom de hepatita viral sau
alcoolic). alcoolic).
VALORI SCZUTE VALORI SCZUTE
infecii urinare infecii urinare
neoplazii neoplazii
deficit de vitamin B6 (n malnutriie, consum de alcool): piridoxalul deficit de vitamin B6 (n malnutriie, consum de alcool): piridoxalul
vitamina B6 intervine ca i coenzim a transaminazelor, de vitamina B6 intervine ca i coenzim a transaminazelor, de
aceea, n deficitul vitaminic se va nregistra consecutiv un deficit aceea, n deficitul vitaminic se va nregistra consecutiv un deficit
coenzimatic i deci o reducere a activitii transaminazelor. coenzimatic i deci o reducere a activitii transaminazelor.

7. FUNDAMENTE BIOCHIMICE 7. FUNDAMENTE BIOCHIMICE


ALT este o enzim care face parte din clasa transferazelor i ALT este o enzim care face parte din clasa transferazelor i
catalizeaz transferul reversibil al gruprii amino (NH2) de la un catalizeaz transferul reversibil al gruprii amino (NH2) de la un
aminoacid (alanin), la cetoglutarat, cu formarea de acid piruvic aminoacid (alanin), la cetoglutarat, cu formarea de acid piruvic
i glutamat. i glutamat.
Cantitile cele mai ridicate de ALT se afl la nivelul citosolului Cantitile cele mai ridicate de ALT se afl la nivelul citosolului
celulei hepatice, urmate n ordine descresctoare de cantiti celulei hepatice, urmate n ordine descresctoare de cantiti
semnificative la nivelul rinichiului, miocardului, muchilor semnificative la nivelul rinichiului, miocardului, muchilor
scheletici i pancreasului. scheletici i pancreasului.
Creterea nivelului plasmatic al ALT are dou cauze principale Creterea nivelului plasmatic al ALT are dou cauze principale
(determinate de multiple situaii): (determinate de multiple situaii):
1. Creterea permeabilitii celulare 1. Creterea permeabilitii celulare
57 57
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

2. Liza celular 2. Liza celular


Dac metabolismul energetic al celulei hepatice este alterat de Dac metabolismul energetic al celulei hepatice este alterat de
ageni infecioi (virusurile hepatice) sau toxici, se produce o ageni infecioi (virusurile hepatice) sau toxici, se produce o
cretere a premeabilitii membranei celulare, avnd ca urmare cretere a premeabilitii membranei celulare, avnd ca urmare
trecerea n ser a componentelor citoplasmatice, i deci i a trecerea n ser a componentelor citoplasmatice, i deci i a
enzimelor intracelulare (hepatit, ciroz, colecistit, enzimelor intracelulare (hepatit, ciroz, colecistit,
pancreatit). pancreatit).
Liza acestor celule (determinat de reducerea duratei de via a Liza acestor celule (determinat de reducerea duratei de via a
acestora, ca n cazul modificrilor de natur canceroas, sau de acestora, ca n cazul modificrilor de natur canceroas, sau de
alterri ale irigaiei i deci ale vitalitii n teritoriile tisulare alterri ale irigaiei i deci ale vitalitii n teritoriile tisulare
afectate) citoliz se nsoete de asemeni de eliberarea afectate) citoliz se nsoete de asemeni de eliberarea
coninutului acestor celule n circulaie i deci nivele serice coninutului acestor celule n circulaie i deci nivele serice
enzimatice crescute (cancer, insuficien cardiac). enzimatice crescute (cancer, insuficien cardiac).
ALT este indicatorul de citoliz cel mai frecvent utilizat, detectnd ALT este indicatorul de citoliz cel mai frecvent utilizat, detectnd
chiar i leziunile hepatice minime, fiind mai specific dect aspartat chiar i leziunile hepatice minime, fiind mai specific dect aspartat
aminotransferaza (AST). Totui, valorile absolute ale ALT nu se aminotransferaza (AST). Totui, valorile absolute ale ALT nu se
coreleaz direct cu severitatea lezarii hepatice i cu prognosticul, coreleaz direct cu severitatea lezarii hepatice i cu prognosticul,
din acest motiv fiind mai folositoare determinrile seriate. din acest motiv fiind mai folositoare determinrile seriate.

8. MCQ 8. MCQ

1. Care dintre urmtoarele afirmaii referitoare la ALT este adevrat: 1. Care dintre urmtoarele afirmaii referitoare la ALT este adevrat:
A. Se gsete preponderant la nivelul miocardului A. Se gsete preponderant la nivelul miocardului
B. Valorile absolute ale ALT se coreleaz direct cu severitatea afectrii B. Valorile absolute ale ALT se coreleaz direct cu severitatea afectrii
hepatice hepatice
C. Are specificitate mai nalt dect AST n evaluarea afeciunilor C. Are specificitate mai nalt dect AST n evaluarea afeciunilor
ficatului ficatului
D. Valorile ALT n cazul hepatitelor virale (B, C) , NU prezint creteri D. Valorile ALT n cazul hepatitelor virale (B, C) , NU prezint creteri
constante constante
E. n cazul consumului de alcool nregistreaz valori ridicate E. n cazul consumului de alcool nregistreaz valori ridicate

2. ALT (alanin transaminaza, sau GPT): 2. ALT (alanin transaminaza, sau GPT):
A. Timpul su de njumtire este jumtate fa de cel al AST A. Timpul su de njumtire este jumtate fa de cel al AST
B. n icterele obstructive, dup o cretere semnificativ, sufer n decurs B. n icterele obstructive, dup o cretere semnificativ, sufer n decurs
de 12-72 ore o scdere brusc de 12-72 ore o scdere brusc
C. Infarctul miocardic este caracterizat de valori impresionante ale C. Infarctul miocardic este caracterizat de valori impresionante ale
acestei enzime acestei enzime
D. Modul de msurare al concentraiei sale este cinetic (cresctor) D. Modul de msurare al concentraiei sale este cinetic (cresctor)
E. Nu se afl in concentraie mai mare la nivelul centrului lobulului E. Nu se afl in concentraie mai mare la nivelul centrului lobulului
hepatic hepatic

58 58
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

3. Raportul de Rittis: 3. Raportul de Rittis:


A. Reprezint raportul dintre ALT/AST A. Reprezint raportul dintre ALT/AST
B. La subiecii normali are valori cuprinse ntre 2,3-2,5 B. La subiecii normali are valori cuprinse ntre 2,3-2,5
C. Valori crescute ale acestui raport apar n leziunile moderate hepatice, C. Valori crescute ale acestui raport apar n leziunile moderate hepatice,
cu interesarea doar a permeabilitii celulare cu interesarea doar a permeabilitii celulare
D. n cazul sarcinii acest raport poate avea valori supraunitare D. n cazul sarcinii acest raport poate avea valori supraunitare
E. La subiecii cu afectare hepatic are valori cuprinse ntre1,15-1,3 E. La subiecii cu afectare hepatic are valori cuprinse ntre1,15-1,3

4. Care dintre afirmaiile urmtoare referitoare la activitatea alanin transaminazei 4. Care dintre afirmaiile urmtoare referitoare la activitatea alanin transaminazei
NU este adevrat? NU este adevrat?
A. ALT catalizeaz transferul ireversibil al gruprii amino ntre alanin A. ALT catalizeaz transferul ireversibil al gruprii amino ntre alanin
i cetoglutarat i cetoglutarat
B. n cadrul sindromului alcool-acetaminofen ALT nregistreaz valori B. n cadrul sindromului alcool-acetaminofen ALT nregistreaz valori
>9000U/L >9000U/L
C. Deficitul de piridoxal fosfat ( vitamina B6) determin o cretere a C. Deficitul de piridoxal fosfat ( vitamina B6) determin o cretere a
ALT ALT
D. n hepatita cu virus A, icterul este precedat cu aproximativ 2 D. n hepatita cu virus A, icterul este precedat cu aproximativ 2
sptmni de valori ridicate ale ALT sptmni de valori ridicate ale ALT
E. La gravide de obicei raportul de Rittis are valori crescute E. La gravide de obicei raportul de Rittis are valori crescute

5. Cele mai importante i mai rapide creteri n ser ale ALT apar n: 5. Cele mai importante i mai rapide creteri n ser ale ALT apar n:
A. Neoplazii A. Neoplazii
B. Intoxicaia cu tetraclorur de carbon B. Intoxicaia cu tetraclorur de carbon
C. Infecii urinare C. Infecii urinare
D. Intoxicaia cu ciuperci D. Intoxicaia cu ciuperci
E. Malnutriie E. Malnutriie

6. Despre ALT se pot afirma urmtoarele: 6. Despre ALT se pot afirma urmtoarele:
A. Este singurul parametru util n evaluarea consumatorilor cronici A. Este singurul parametru util n evaluarea consumatorilor cronici
de alcool de alcool
B. Este indicatorul de citoliz cel mai frecvent utilizat B. Este indicatorul de citoliz cel mai frecvent utilizat
C. Creterea nivelului su plasmatic poate fi declanat de injeciile C. Creterea nivelului su plasmatic poate fi declanat de injeciile
intramusculare intramusculare
D. Este mai specific dect AST (aspartat aminotransferaza) n evaluarea D. Este mai specific dect AST (aspartat aminotransferaza) n evaluarea
afectrii hepatice afectrii hepatice
E. Valorile sale absolute se coreleaz cu prognosticul bolilor hepatice E. Valorile sale absolute se coreleaz cu prognosticul bolilor hepatice

7. Dintre afirmaiile urmtoare cu privire la activitatea alanin transaminazei, sunt 7. Dintre afirmaiile urmtoare cu privire la activitatea alanin transaminazei, sunt
adevrate: adevrate:
A. n icterele obstructive nivelele ALT se menin constant ridicate A. n icterele obstructive nivelele ALT se menin constant ridicate
B. n leucemia limfoblastic acut la copil valorile ALT sunt moderat B. n leucemia limfoblastic acut la copil valorile ALT sunt moderat
crescute crescute
59 59
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

C. n procesele neoplazice ale ficatului, cu lezare important dar limitat C. n procesele neoplazice ale ficatului, cu lezare important dar limitat
n jurul ariilor de infiltrare a hepatocitelor, apar creteri importante ale n jurul ariilor de infiltrare a hepatocitelor, apar creteri importante ale
ALT ALT
D. n hepatitele virale (B, C) ALT are valori constant ridicate D. n hepatitele virale (B, C) ALT are valori constant ridicate
E. Malnutriia determin nivele sczute de ALT E. Malnutriia determin nivele sczute de ALT

8.Valori subunitare ale raportului de Rittis se nregistreaz n: 8.Valori subunitare ale raportului de Rittis se nregistreaz n:
A. Leziuni moderate care afecteaz permeabilitatea membranei A. Leziuni moderate care afecteaz permeabilitatea membranei
hepatocitelor hepatocitelor
B. Leziuni inflamatorii care afecteaz periferia lobulilor hepatici B. Leziuni inflamatorii care afecteaz periferia lobulilor hepatici
C. Ciroza hepatic decompensat parenchimatos C. Ciroza hepatic decompensat parenchimatos
D. Sarcin D. Sarcin
E. Metastaze hepatice E. Metastaze hepatice

9.Care dintre afirmaii este adevrat? 9.Care dintre afirmaii este adevrat?
A. ALT se gsete preponderent n muchiul scheletic A. ALT se gsete preponderent n muchiul scheletic
B. Viteza de excreie n ser a ALT nu influeneaz concentraia sa B. Viteza de excreie n ser a ALT nu influeneaz concentraia sa
C. n cadrul monitorizrii evoluiei hepatitelor virale B, C determinarea C. n cadrul monitorizrii evoluiei hepatitelor virale B, C determinarea
ALT nu este neaprat necesar ALT nu este neaprat necesar
D. Numrul de hepatocite lezate influeneaz concentraia seric a ALT D. Numrul de hepatocite lezate influeneaz concentraia seric a ALT
E. Nici un rspuns corect E. Nici un rspuns corect

10.Dozarea ALT: 10.Dozarea ALT:


A. Este esenial in prognosticul bolilor hepatice A. Este esenial in prognosticul bolilor hepatice
B. Presupune utilizarea de ser hemolizat sau plasm B. Presupune utilizarea de ser hemolizat sau plasm
C. Este un indicator relativ tardiv n cadrul suferinelor acute hepatice C. Este un indicator relativ tardiv n cadrul suferinelor acute hepatice
D. Este mai puin specific dect dozarea AST n aprecierea alterrilor D. Este mai puin specific dect dozarea AST n aprecierea alterrilor
hepatice hepatice
E. Este util n diagnosticul diferenial al bolilor hepatobiliare i E. Este util n diagnosticul diferenial al bolilor hepatobiliare i
pancreatice pancreatice

60 60
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

GLUTAMIC OXALACETIC TRANSAMINAZA GLUTAMIC OXALACETIC TRANSAMINAZA


(Aspartat Transaminaza) - (GOT, AST) (Aspartat Transaminaza) - (GOT, AST)

1. Consideraii generale 1. Consideraii generale

Transaminazele catalizeaza reacia reversibil, de transfer a unei grupari Transaminazele catalizeaza reacia reversibil, de transfer a unei grupari
amino de la un aminoacid la un cetoacid. AST (TGO) amino de la un aminoacid la un cetoacid. AST (TGO)
aspartataminotransferaza este o enzim ce face parte din clasa aspartataminotransferaza este o enzim ce face parte din clasa
transaminazelor i catalizeaz transferul gruprii amino de la acidul aspartic transaminazelor i catalizeaz transferul gruprii amino de la acidul aspartic
la acidul cetoglutaric cu formare de acid oxalacetic i acid glutamic. la acidul cetoglutaric cu formare de acid oxalacetic i acid glutamic.

61 61
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

Spre deosebire de ALT care se gsete n principal la nivelul ficatului, Spre deosebire de ALT care se gsete n principal la nivelul ficatului,
AST este ntlnit n mai multe esuturi: miocard, ficat, muchi AST este ntlnit n mai multe esuturi: miocard, ficat, muchi
scheletici, rinichi, pancreas, esut cerebral, splin, plman, eritrocite, scheletici, rinichi, pancreas, esut cerebral, splin, plman, eritrocite,
fiind astfel un indicator mai puin specific al funciei hepatice. fiind astfel un indicator mai puin specific al funciei hepatice.
La nivelul celulei hepatice, izoenzimele AST se gsesc att n citosol, La nivelul celulei hepatice, izoenzimele AST se gsesc att n citosol,
ct i n mitocondrii. ct i n mitocondrii.
Concentraia seric a AST variaz n funcie de: Concentraia seric a AST variaz n funcie de:
numrul de celule afectate numrul de celule afectate
gravitatea lezrii fiecrei celule gravitatea lezrii fiecrei celule
viteza cu care s-au produs leziunile viteza cu care s-au produs leziunile
viteza de eliminare n ser viteza de eliminare n ser
n situaiile de afectare a unor celule, alturi de creterea n ser a n situaiile de afectare a unor celule, alturi de creterea n ser a
enzimelor celulare, se produc i modificri ale raporturilor dintre activitile enzimelor celulare, se produc i modificri ale raporturilor dintre activitile
diverselor enzime. Astfel, la subiecii sntoi raportul AST/ ALT (raportul diverselor enzime. Astfel, la subiecii sntoi raportul AST/ ALT (raportul
De Rittis) este aproximativ de 1,3, n timp ce n cazurile de hepatit viral De Rittis) este aproximativ de 1,3, n timp ce n cazurile de hepatit viral
acest raport este subunitar datorit creterii cu predominan a ALT. Mai acest raport este subunitar datorit creterii cu predominan a ALT. Mai
mult, odat cu necrozarea teritoriului afectat, raportul de Rittis se modific mult, odat cu necrozarea teritoriului afectat, raportul de Rittis se modific
n sensul creterii valorii, pe seama creterii ALT asociat ns cu o cretere n sensul creterii valorii, pe seama creterii ALT asociat ns cu o cretere
i mai exprimata a AST. i mai exprimata a AST.
Recomandri pentru determinarea AST Recomandri pentru determinarea AST
Valorile AST i ALT cresc n aproape toate hepatopatiile, dar creterea Valorile AST i ALT cresc n aproape toate hepatopatiile, dar creterea
nivelului seric al AST poate fi ntlnit i n numeroase afeciuni nivelului seric al AST poate fi ntlnit i n numeroase afeciuni
extrahepatice, cu precdere n infarctul miocardic i n boli ale extrahepatice, cu precdere n infarctul miocardic i n boli ale
muchiului striat. muchiului striat.

2. Principiul metodei 2. Principiul metodei


Se utilizeaz metoda cinetic UV recomandat de Federaia Internaional Se utilizeaz metoda cinetic UV recomandat de Federaia Internaional
de Chimie Clinic (IFCC). de Chimie Clinic (IFCC).
AST prezent in prob catalizeaz transferul gruparii amino de la L-aspartat AST prezent in prob catalizeaz transferul gruparii amino de la L-aspartat
la cetoglutarat (2-oxoglutarat) cu formare de oxaloacetat i L-glutamat. la cetoglutarat (2-oxoglutarat) cu formare de oxaloacetat i L-glutamat.
Oxaloacetatul reacioneaz cu NADH n prezena malatdehidrogenazei Oxaloacetatul reacioneaz cu NADH n prezena malatdehidrogenazei
(MDH) formnd NAD i L-malat. (MDH) formnd NAD i L-malat.
Rata de oxidare a NADH este direct proporional cu activitatea catalitic a Rata de oxidare a NADH este direct proporional cu activitatea catalitic a
AST msurat fotometric la 340nm. AST msurat fotometric la 340nm.

L aspartat 2 oxoglutara t oxaloaceta t L glutamat


AST
L aspartat 2 oxoglutara t oxaloaceta t L glutamat
AST

Oxaloaceta t NADH H L malat NAD


MDH
Oxaloaceta t NADH H L malat NAD
MDH

62 62
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

3. Reactivi 3. Reactivi
Reactiv 1 (R1) Reactiv 1 (R1)
Tampon TRIS, pH=7,8 88 mmol/L Tampon TRIS, pH=7,8 88 mmol/L
L-aspartat 260 mmol/L L-aspartat 260 mmol/L
Reactiv 2 (R2): Reactiv 2 (R2):
MDH 600 U/L MDH 600 U/L
LDH 900 U/L LDH 900 U/L
NADH 0.22 mmol/L NADH 0.22 mmol/L
-Cetoglutarat 12 mmol/L -Cetoglutarat 12 mmol/L

4. Modul de lucru 4. Modul de lucru


Proba: Ser, plasm fr hemoliz. Plasma poate fi colectat pe Proba: Ser, plasm fr hemoliz. Plasma poate fi colectat pe
heparin sau EDTA. heparin sau EDTA.
Pregatirea amestecului de lucru: se dizolv coninutul unui flacon Pregatirea amestecului de lucru: se dizolv coninutul unui flacon
de reactiv 2 (R2) sub form de pulbere, in cantitatea corespunztoare de de reactiv 2 (R2) sub form de pulbere, in cantitatea corespunztoare de
reactiv 1 (R1). reactiv 1 (R1).
Se utilizeaz dou eprubete (cuvete) prob si martor (blank): P, M, n care Se utilizeaz dou eprubete (cuvete) prob si martor (blank): P, M, n care
se pipeteaza: se pipeteaza:

Reactiv P (l) M (l) Reactiv P (l) M (l)


Amestec de lucru 1000 1000 Amestec de lucru 1000 1000
Proba 100 - Proba 100 -
Ap distilat (AD) - 100 Ap distilat (AD) - 100

Dupa agitare amestecul se incubeaz la 37C. Absorbana iniial se Dupa agitare amestecul se incubeaz la 37C. Absorbana iniial se
citete dupa 1min, la 340 nm. Se repet citirea absorbanei la 2 i 3 min la citete dupa 1min, la 340 nm. Se repet citirea absorbanei la 2 i 3 min la
aceeai lungime de und n cuve de 1cm fa de martor (citire in trei puncte) aceeai lungime de und n cuve de 1cm fa de martor (citire in trei puncte)
Se determina modificarea medie a absorbanei per minut A/min, care se Se determina modificarea medie a absorbanei per minut A/min, care se
folosete n calcul. folosete n calcul.
Citirea se poate efectua la 340 nm, 334 nm sau 365 nm. Citirea se poate efectua la 340 nm, 334 nm sau 365 nm.
Calcul: Calcul:
U / L A / min xFactor U / L A / min xFactor
Masurarea la 334 nm 340 nm 365 nm Masurarea la 334 nm 340 nm 365 nm
F 1780 1746 3235 F 1780 1746 3235

5. Valori de referin 5. Valori de referin


TGO < 40 U/L TGO < 40 U/L
63 63
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

6. Variaii patologice 6. Variaii patologice


Aceast enzim prezint dou izoenzime : AST 1 (GOT 1) - Aceast enzim prezint dou izoenzime : AST 1 (GOT 1) -
izoenzim situat n citosol i care provine n circulaie n mare parte de la izoenzim situat n citosol i care provine n circulaie n mare parte de la
nivelul globulelor roii i miocard i AST 2 (GOT 2) izoenzima nivelul globulelor roii i miocard i AST 2 (GOT 2) izoenzima
mitocondrial, prezent n cea mai mare parte n ficat. mitocondrial, prezent n cea mai mare parte n ficat.
AST este crescut cu precdere n afectrile hepatice severe. De AST este crescut cu precdere n afectrile hepatice severe. De
asemenea creteri ale ei se ntlnesc n afectri ale muchiului cardiac asemenea creteri ale ei se ntlnesc n afectri ale muchiului cardiac
(indicator destul de fidel al leziunilor din infarctul miocardic). (indicator destul de fidel al leziunilor din infarctul miocardic).

VALORI CRESCUTE VALORI CRESCUTE


cele mai ridicate valori (de 10 100 ori valorile normale) sunt cele mai ridicate valori (de 10 100 ori valorile normale) sunt
ntlnite n: ntlnite n:
afeciunile nsoite de necroz hepatic extins: hepatit afeciunile nsoite de necroz hepatic extins: hepatit
viral, hepatit toxic, intoxicaii cu tetraclorur de carbon, viral, hepatit toxic, intoxicaii cu tetraclorur de carbon,
dar i in dar i in
infarctul de miocard, infarctul de miocard,
oc de diferite origini oc de diferite origini
stri septice stri septice
intervenii pe cord intervenii pe cord
n cazul infarctului miocardic eliberarea enzimei din celule are loc la n cazul infarctului miocardic eliberarea enzimei din celule are loc la
6-12 ore de la instalare, creterea continu fiind de regul expresia 6-12 ore de la instalare, creterea continu fiind de regul expresia
extinderii leziunilor necrotice; nivelul maxim se nregistreaz cel mai extinderii leziunilor necrotice; nivelul maxim se nregistreaz cel mai
frecvent la 48 de ore de la apariia leziunilor necrotice, dup care frecvent la 48 de ore de la apariia leziunilor necrotice, dup care
revinerea la normal se ntinde pe parcursul a 3-5 zile; revinerea la normal se ntinde pe parcursul a 3-5 zile;
valori ale AST de 1000-9000 U/l, care scad la 50% n urmtoarele 3 valori ale AST de 1000-9000 U/l, care scad la 50% n urmtoarele 3
zile sugereaz ficat de oc cu necroz centrolobular (insuficien zile sugereaz ficat de oc cu necroz centrolobular (insuficien
cardiac congestiv, aritmii, sepsis, hemoragii); o cretere brusc cardiac congestiv, aritmii, sepsis, hemoragii); o cretere brusc
poate aprea i n hepatita viral acut fulminant (rar >4000 U/l); poate aprea i n hepatita viral acut fulminant (rar >4000 U/l);
creterea i scderea rapid sugereaz obstrucia biliar creterea i scderea rapid sugereaz obstrucia biliar
extrahepatic; extrahepatic;
valori marcat crescute mai pot aprea n cazul agresiunilor i valori marcat crescute mai pot aprea n cazul agresiunilor i
alterrilor hepatice de natur traumatic sau neoplazic (cel mai alterrilor hepatice de natur traumatic sau neoplazic (cel mai
frecvent metastaze) i a celor musculare masive (de tipul frecvent metastaze) i a celor musculare masive (de tipul
rabdomiolizei, de exemplu); rabdomiolizei, de exemplu);
valori moderat crescute apar n: valori moderat crescute apar n:
o formele uoare de hepatit viral acut o formele uoare de hepatit viral acut

64 64
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

o hepatopatii cronice (hepatita cronic activ, ciroz), hepatit o hepatopatii cronice (hepatita cronic activ, ciroz), hepatit
din cadrul alcoolismului, dar rareori depesc 300U/l (n din cadrul alcoolismului, dar rareori depesc 300U/l (n
hepatopatii alcoolice, ciroz: AST>ALT); hepatopatii alcoolice, ciroz: AST>ALT);
o icter obstructiv o icter obstructiv
o unele afeciuni ale muchilor scheletici o unele afeciuni ale muchilor scheletici
o anemia hemolitic sever o anemia hemolitic sever
o mononucleoza infecioas, unde creterea nivelului AST este o mononucleoza infecioas, unde creterea nivelului AST este
proporional cu afectarea hepatic proporional cu afectarea hepatic
o administrarea de opiacee la pacieni cu afeciuni ale tractului o administrarea de opiacee la pacieni cu afeciuni ale tractului
biliar (valori de 2-6 ori mai mari dect normal) biliar (valori de 2-6 ori mai mari dect normal)
Limite i interferene Limite i interferene
Condiii fiziologice - n sarcin pot s apar valori sczute <10 Condiii fiziologice - n sarcin pot s apar valori sczute <10
U/L. U/L.
Condiii patologice - creteri moderate nespecifice apar n unele Condiii patologice - creteri moderate nespecifice apar n unele
forme de distrofie muscular, n dermatomiozit, traumatisme, forme de distrofie muscular, n dermatomiozit, traumatisme,
intervenii chirurgicale, injecii intramusculare, pancreatit intervenii chirurgicale, injecii intramusculare, pancreatit
acut, leziuni intestinale, infarct cerebral, infarct renal, arsuri, acut, leziuni intestinale, infarct cerebral, infarct renal, arsuri,
hipotermie, hipertermie, intoxicaii (ciuperci), anemii hipotermie, hipertermie, intoxicaii (ciuperci), anemii
hemolitice. hemolitice.
Medicamente Medicamente
Care induc creteri tranzitorii ale AST: Care induc creteri tranzitorii ale AST:
medicamente care produc colestaz: acid medicamente care produc colestaz: acid
aminosalicilic, steroizi anabolizani, androgeni, aminosalicilic, steroizi anabolizani, androgeni,
benzodiazepine benzodiazepine
medicamente care determina afectare hepatocelular: medicamente care determina afectare hepatocelular:
acid aminosalicilic, cloramfenicol, cimetidin, acid aminosalicilic, cloramfenicol, cimetidin,
diclofenac, eritromicin, estrogeni, ibuprofen, diclofenac, eritromicin, estrogeni, ibuprofen,
papaverin, fenobarbital, fenilbutazon, i altele. papaverin, fenobarbital, fenilbutazon, i altele.
medicamente care induc hepatotoxicitate: medicamente care induc hepatotoxicitate:
aminoglicozide, azitromicin, captopril, cefalosporine, aminoglicozide, azitromicin, captopril, cefalosporine,
ciclosporine, heparin, lovastatin, simvastatin, etc ciclosporine, heparin, lovastatin, simvastatin, etc
Care produc scderi: acid ascorbic, ibuprofen, Care produc scderi: acid ascorbic, ibuprofen,
metronidazol, prednison, i altele. metronidazol, prednison, i altele.

7. FUNDAMENTE BIOCHIMICE 7. FUNDAMENTE BIOCHIMICE


AST i ALT sunt enzime de tip transferaze, creterea activitii lor AST i ALT sunt enzime de tip transferaze, creterea activitii lor
fiind frecvent asociat cu alterarea inflamatorie sau leziunea fiind frecvent asociat cu alterarea inflamatorie sau leziunea
hepatocelular (condiii ce induc o cretere a permeabilitatii celulei hepatocelular (condiii ce induc o cretere a permeabilitatii celulei
65 65
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

hepatice, cu eliberarea n cantitate aberanta a enzimelor n torentul hepatice, cu eliberarea n cantitate aberanta a enzimelor n torentul
circulator). circulator).
AST cunoate o distribuie oarecum diferit de ALT, astfel c pe AST cunoate o distribuie oarecum diferit de ALT, astfel c pe
lng celulele hepatice, enzima este regsit la diferite alte nivele lng celulele hepatice, enzima este regsit la diferite alte nivele
(precum rinichi, muchi scheletic i miocard), ceea ce face ca o (precum rinichi, muchi scheletic i miocard), ceea ce face ca o
cretere semnificativ a AST s nu fie ntotdeauna expresia alterrii cretere semnificativ a AST s nu fie ntotdeauna expresia alterrii
esutului hepatic (chiar i un antrenament care implic un exerciiu esutului hepatic (chiar i un antrenament care implic un exerciiu
fizic intens poate s determine creterea tranzitorie a AST n snge). fizic intens poate s determine creterea tranzitorie a AST n snge).
Pe de alt parte, o cretere a nivelului sanguin al ALT, reprezint Pe de alt parte, o cretere a nivelului sanguin al ALT, reprezint
cel mai adesea expresia alterrii esutului hepatic, avnd n vedere cel mai adesea expresia alterrii esutului hepatic, avnd n vedere
distribuia preferenial a ALT la acest nivel, cu toate c, o valoare distribuia preferenial a ALT la acest nivel, cu toate c, o valoare
normal a acestei enzime nu nseamn fr echivoc o stare de normal a acestei enzime nu nseamn fr echivoc o stare de
normalitate hepatic. normalitate hepatic.
Ca un corolar, putem spune ca cele mai frecvente situaii Ca un corolar, putem spune ca cele mai frecvente situaii
caracterizate prin elevarea nivelului circulant al celor doua caracterizate prin elevarea nivelului circulant al celor doua
transaminaze includ: transaminaze includ:
o Hepatita viral o Hepatita viral
o Ficatul gras o Ficatul gras
o Alcoolism o Alcoolism
o Medicaie (cu efect secundar - afectare hepatocelular) o Medicaie (cu efect secundar - afectare hepatocelular)
o Hepatita autoimun o Hepatita autoimun
o Tumorile hepatice o Tumorile hepatice
o Insuficiena cardiac, infarctul de miocard o Insuficiena cardiac, infarctul de miocard
Raportul de Rittis (AST/ALT) poate deasemeni furniza informaii Raportul de Rittis (AST/ALT) poate deasemeni furniza informaii
utile privind gradul i cauza probabil de alterare hepatic, utile privind gradul i cauza probabil de alterare hepatic,
majoritatea afeciunilor fiind caracterizate de creteri mai majoritatea afeciunilor fiind caracterizate de creteri mai
semnificative ale ALT comparativ cu AST. Excepie fac de la aceasta semnificative ale ALT comparativ cu AST. Excepie fac de la aceasta
regula dou situaii principale: alcoolismul i ciroza, atunci cnd, regula dou situaii principale: alcoolismul i ciroza, atunci cnd,
nivelul AST este de cele mai multe ori aproape dublu fa de al ALT. nivelul AST este de cele mai multe ori aproape dublu fa de al ALT.
Creterea activitii transaminazelor poate fi determinat de cauze Creterea activitii transaminazelor poate fi determinat de cauze
multiple, nu este specific doar afectrii hepatice. Detectarea unor multiple, nu este specific doar afectrii hepatice. Detectarea unor
valori mari ale acestor transferaze n snge impune examinarea valori mari ale acestor transferaze n snge impune examinarea
asociat i a altor enzime sau parametri, pentru a stabili natura asociat i a altor enzime sau parametri, pentru a stabili natura
exact a alterrii care a determinat scurgerea excesiv a acestor exact a alterrii care a determinat scurgerea excesiv a acestor
enzime de la nivel intracelular, la nivel sanguin. enzime de la nivel intracelular, la nivel sanguin.

66 66
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

8. MCQ 8. MCQ

TGO1 Reacia de transaminare: TGO1 Reacia de transaminare:


A. Este caracterizat prin participarea enzimei piruvic oxalacetic A. Este caracterizat prin participarea enzimei piruvic oxalacetic
transaminaza transaminaza
B. Este ireversibila B. Este ireversibila
C. Are drept substrate acidul glutamic, aspartic i C. Are drept substrate acidul glutamic, aspartic i
alfacetoglutaric alfacetoglutaric
D. Favorizeaz formarea unui aminoacid dintr-un hidroxiacid D. Favorizeaz formarea unui aminoacid dintr-un hidroxiacid
E. Este catalizat de enzime din clasa metiltransferazelor E. Este catalizat de enzime din clasa metiltransferazelor

TGO 2 Reaciile de transaminare sunt catalizate de enzime transaminaze, n TGO 2 Reaciile de transaminare sunt catalizate de enzime transaminaze, n
cursul crora: cursul crora:
A. Un aminoacid este convertit la un cetoacid A. Un aminoacid este convertit la un cetoacid
B. Particip dou substrate, i anume dou molecule de B. Particip dou substrate, i anume dou molecule de
aminoacid aminoacid
C. Dintr-o pereche de doi aminoacizi, se formeaz doi cetoacizi C. Dintr-o pereche de doi aminoacizi, se formeaz doi cetoacizi
D. Se transfer o grupare cetonic de la un cetoacid la un alt D. Se transfer o grupare cetonic de la un cetoacid la un alt
cetoacid cetoacid
E. Se transfer o grupare aminic de la un aminoacid la un alt E. Se transfer o grupare aminic de la un aminoacid la un alt
aminoacid aminoacid

TGO 3 n cazul infarctului miocardic acut: TGO 3 n cazul infarctului miocardic acut:
A. Creterea GOT este rareori proporional cu extinderea A. Creterea GOT este rareori proporional cu extinderea
leziunii miocardice leziunii miocardice
B. Se elibereaz cantiti mult mai mari de GOT2 dect GOT1 B. Se elibereaz cantiti mult mai mari de GOT2 dect GOT1
C. Valori maxime ale GOT se nregistreaz la aproximativ 24 de C. Valori maxime ale GOT se nregistreaz la aproximativ 24 de
ore de la debut ore de la debut
D. ntlnim valori ridicate ale GOT chiar i la o sptmn de la D. ntlnim valori ridicate ale GOT chiar i la o sptmn de la
declanare declanare
E. GPT este enzima care se elibereaz naintea GOT E. GPT este enzima care se elibereaz naintea GOT

TGO 4 Cele mai frecvente situaii n care se nregistreaz valori crescute TGO 4 Cele mai frecvente situaii n care se nregistreaz valori crescute
ale nivelului circulant al transaminazelor includ: ale nivelului circulant al transaminazelor includ:
A. Hepatita viral A. Hepatita viral
B. Tromboflebita B. Tromboflebita
C. Alcoolism C. Alcoolism
D. Pancreatita D. Pancreatita
E. Ficatul gras E. Ficatul gras

67 67
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

TGO 5 Care dintre urmtoarele afirmaii cu privire la TGO este adevrat? TGO 5 Care dintre urmtoarele afirmaii cu privire la TGO este adevrat?
A. se gsete predominant n celulele hepatice A. se gsete predominant n celulele hepatice
B. nregistreaz un nivel crescut la pacienii cu infarct miocardic B. nregistreaz un nivel crescut la pacienii cu infarct miocardic
C. creterea valorilor sanguine ale acesteia, sugereaz C. creterea valorilor sanguine ale acesteia, sugereaz
ntotdeauna o leziune hepatocelular ntotdeauna o leziune hepatocelular
D. poate nregistra un nivel seric aproape dublu comparativ cu D. poate nregistra un nivel seric aproape dublu comparativ cu
cel al TGP, la bolnavii cirotici cel al TGP, la bolnavii cirotici
E. nici un rspuns corect E. nici un rspuns corect

TGO 6 Glutamic oxalacetic transaminaza nregistreaz nivele serice moderat TGO 6 Glutamic oxalacetic transaminaza nregistreaz nivele serice moderat
crescute n: crescute n:
A. anemia hemolitic A. anemia hemolitic
B. distrofii ale muchiului scheletic B. distrofii ale muchiului scheletic
C. hepatita acut C. hepatita acut
D. hepatita cronic D. hepatita cronic
E. infarct de miocard E. infarct de miocard

TGO 7 Aspartat transaminaza: TGO 7 Aspartat transaminaza:


A. prezint o izoenzim citosolic A. prezint o izoenzim citosolic
B. poate nregistra nivele crescute la pacienii cu afectare sever B. poate nregistra nivele crescute la pacienii cu afectare sever
hepatic hepatic
C. este strict specific leziunilor hepatocelulare C. este strict specific leziunilor hepatocelulare
D. este o enzim ce se poate gsi n citoplasma hepatic sub D. este o enzim ce se poate gsi n citoplasma hepatic sub
forma a dou izoenzime forma a dou izoenzime
E. n afectarea hepatic nregistreaz de regul valori mai mici E. n afectarea hepatic nregistreaz de regul valori mai mici
comparativ cu alanin transaminaza comparativ cu alanin transaminaza

TGO 8 AST: TGO 8 AST:


A. Se gsete numai la nivel mitocondrial A. Se gsete numai la nivel mitocondrial
B. Izoenzima AST1 are distribuie n special la nivel hepatic B. Izoenzima AST1 are distribuie n special la nivel hepatic
C. Face parte din clasa transferazelor C. Face parte din clasa transferazelor
D. Cantitatea prezent n snge este invers proporional cu D. Cantitatea prezent n snge este invers proporional cu
timpul care a trecut de la injuria tisular timpul care a trecut de la injuria tisular
E. Malnutriia determin valori sczute ale acestei enzime E. Malnutriia determin valori sczute ale acestei enzime

TGO 9 Urmtoarele afirmaii cu privire la AST aspartat trasnaminaza- NU TGO 9 Urmtoarele afirmaii cu privire la AST aspartat trasnaminaza- NU
sunt adevrate: sunt adevrate:
A. Izoenzima AST2 se gsete cu preponderen la nivelul A. Izoenzima AST2 se gsete cu preponderen la nivelul
miocardului; miocardului;

68 68
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

B. n cazul infarctului miocardic acut AST revine la valori B. n cazul infarctului miocardic acut AST revine la valori
normale n aproximativ 3-5 zile normale n aproximativ 3-5 zile
C. Azotemia determin creteri ale valorilor AST C. Azotemia determin creteri ale valorilor AST
D. Hepatita alcoolic determin valori nalte ale AST, chiar i D. Hepatita alcoolic determin valori nalte ale AST, chiar i
peste 3000U/l peste 3000U/l
E. n cazul infarctului miocardic acut ncep s se elibereze E. n cazul infarctului miocardic acut ncep s se elibereze
cantiti de AST nc din primele 6 ore de la declanare cantiti de AST nc din primele 6 ore de la declanare

TGO 10 Sunt adevrate afirmaiile: TGO 10 Sunt adevrate afirmaiile:


A. Dup o distrucie celular sever, nivelul AST n snge A. Dup o distrucie celular sever, nivelul AST n snge
revine la normal n 3-5 zile revine la normal n 3-5 zile
B. AST este o enzim exclusiv mitocondrial B. AST este o enzim exclusiv mitocondrial
C. Dializa renal cronic nu determin creteri ale nivelurilor de C. Dializa renal cronic nu determin creteri ale nivelurilor de
AST AST
D. n cazul hepatitelor virale acute valorile AST se normalizeaz D. n cazul hepatitelor virale acute valorile AST se normalizeaz
dup dou sptmni dup dou sptmni
E. Aspartat aminotransferaza este prezent mai ales la nivelul E. Aspartat aminotransferaza este prezent mai ales la nivelul
esuturilor cu activitate metabolic sczut esuturilor cu activitate metabolic sczut

TGO 11 Despre AST nu se poate afirma c: TGO 11 Despre AST nu se poate afirma c:
A. Nu se gsete la nivelul citoplasmei sau mitocondriilor A. Nu se gsete la nivelul citoplasmei sau mitocondriilor
globulelor albe globulelor albe
B. Substratele specifice pe care le catalizeaz sunt alanina i B. Substratele specifice pe care le catalizeaz sunt alanina i
alfacetoglutaratul alfacetoglutaratul
C. n distrofia muscular progresiv creterea sa este rareori C. n distrofia muscular progresiv creterea sa este rareori
proporional cu extinderea leziunilor musculare proporional cu extinderea leziunilor musculare
D. Sarcina determin scderi ale acestui parametru n snge D. Sarcina determin scderi ale acestui parametru n snge
E. nregistreaz creteri importante n snge la pacienii E. nregistreaz creteri importante n snge la pacienii
alcoolici alcoolici

TGO 12 NU sunt adevrate afirmaiile: TGO 12 NU sunt adevrate afirmaiile:


A. Izoenzima GOT1 are distribuie mai ales la nivelul A. Izoenzima GOT1 are distribuie mai ales la nivelul
miocardului miocardului
B. n cazul n care raportul de Rittis este supraunitar leziunile B. n cazul n care raportul de Rittis este supraunitar leziunile
tisulare sunt mai puin severe tisulare sunt mai puin severe
C. Pacientul cirotic prezint valori foarte mari ale AST, valori C. Pacientul cirotic prezint valori foarte mari ale AST, valori
care se menin constante care se menin constante
D. Pacienii cu retenie azotat au adesea valori mari ale AST D. Pacienii cu retenie azotat au adesea valori mari ale AST
E. Injeciile intramusculare nu determin eliberarea de AST de E. Injeciile intramusculare nu determin eliberarea de AST de
la nivel celular la nivel celular
69 69
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

4.3. DOZAREA FOSFATAZEI ALCALINE 4.3. DOZAREA FOSFATAZEI ALCALINE


(ALP) (ALP)

1. Consideraii generale 1. Consideraii generale


Fosfataza alcalin - ALP este este o metaloenzim cu 2 ioni de Fosfataza alcalin - ALP este este o metaloenzim cu 2 ioni de
Zn2+ i un ion de Mg2+ la nivelul fiecrui site activ. ALP este o Zn2+ i un ion de Mg2+ la nivelul fiecrui site activ. ALP este o
enzim derivat din membrana plasmatic, care hidrolizeaz enzim derivat din membrana plasmatic, care hidrolizeaz
esterii sintetici ai fosfatului la un pH egal cu 9 (mediu alcalin). esterii sintetici ai fosfatului la un pH egal cu 9 (mediu alcalin).
Ca i aciune, ALP este o enzim hidrolitic, responsabil pentru Ca i aciune, ALP este o enzim hidrolitic, responsabil pentru
detaarea gruprilor fosfat de la nivelul a numeroase molecule, detaarea gruprilor fosfat de la nivelul a numeroase molecule,
incluznd nucleotide, proteine i alcaloizi. Acest proces se incluznd nucleotide, proteine i alcaloizi. Acest proces se
numete defosforilare i aa cum o sugereaz i numele enzimei, numete defosforilare i aa cum o sugereaz i numele enzimei,
ea funcioneaz cel mai bine ntr-un mediu alcalin (la un pH=9- ea funcioneaz cel mai bine ntr-un mediu alcalin (la un pH=9-
10). ALP este o fosfomonoesteraza nespecific cu o distribuie 10). ALP este o fosfomonoesteraza nespecific cu o distribuie
generoasa, ce funcioneaz prin formarea unui produs intermediar generoasa, ce funcioneaz prin formarea unui produs intermediar
covalent (fosfoenzim) (E-P). n practica clinic de rutin, covalent (fosfoenzim) (E-P). n practica clinic de rutin,
fosfataza alcalin reprezint un indicator sensibil al alterarilor la fosfataza alcalin reprezint un indicator sensibil al alterarilor la
nivel hepatic, osos, digestiv. nivel hepatic, osos, digestiv.
Formele principale ale ALP n snge sunt multiple, fiecare form Formele principale ale ALP n snge sunt multiple, fiecare form
fiind caracterizat de o structur chimic diferit. Pentru organe fiind caracterizat de o structur chimic diferit. Pentru organe
diferite, se difereniaz anumite tipuri de ALP numite izoenzime: diferite, se difereniaz anumite tipuri de ALP numite izoenzime:
la nivel hepatic izoenzima ALP-1, la nivel osos izoenzima la nivel hepatic izoenzima ALP-1, la nivel osos izoenzima
ALP-2. ALP-2.
Formele moleculare ale fosfatazei alcaline sunt: Formele moleculare ale fosfatazei alcaline sunt:
o fosfataza alcalin hepatic (LAP) o fosfataza alcalin hepatic (LAP)
o fosfataza alcalin osoas (BAP) o fosfataza alcalin osoas (BAP)
o fosfataza alcalin intestinal (IAP) o fosfataza alcalin intestinal (IAP)
o fosfataza alcalin corticosteroid (CAP) o fosfataza alcalin corticosteroid (CAP)
o fosfataza alcalin leucocitar (neutrofilica) (NAP) o fosfataza alcalin leucocitar (neutrofilica) (NAP)
o fosfataza alcalin placentar (PLAP) o fosfataza alcalin placentar (PLAP)
o fosfataza alcalin renal (sintetizat la nivelul tubilor o fosfataza alcalin renal (sintetizat la nivelul tubilor
renali proximali) renali proximali)
Aceste forme moleculare difer prin structura situsului catalitic, Aceste forme moleculare difer prin structura situsului catalitic,
secvena de aminoacizi, mobilitatea electroforetic, secvena de aminoacizi, mobilitatea electroforetic,
imunogenitate i activitate enzimatic. imunogenitate i activitate enzimatic.

70 70
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

Fosfataza alcalin reprezint un indicator sensibil al leziunilor la Fosfataza alcalin reprezint un indicator sensibil al leziunilor la
nivelul ficatului, sistemului osos, tubului digestiv. nivelul ficatului, sistemului osos, tubului digestiv.
Recomandri pentru determinarea fosfatazei alcaline: Recomandri pentru determinarea fosfatazei alcaline:
Determinarea nivelelor serice ale ALP se recomand n: Determinarea nivelelor serice ale ALP se recomand n:
investigarea funciei hepatice investigarea funciei hepatice
colestaz colestaz
rahitism sau alte boli osoase rahitism sau alte boli osoase
monitorizarea terapiei cu vitamin D la copiii rahitici monitorizarea terapiei cu vitamin D la copiii rahitici

2. Principiul determinrii 2. Principiul determinrii


Fosfataza alcalin - ALP catalizeaz hidroliza p-nitrofenilfosfatului cu Fosfataza alcalin - ALP catalizeaz hidroliza p-nitrofenilfosfatului cu
formarea de p-nitrofenol i fosfat anorganic liber, activnd soluia-tampon formarea de p-nitrofenol i fosfat anorganic liber, activnd soluia-tampon
alcalin ca acceptor grup-fosfat. Ionii de magneziu sporesc activitatea alcalin ca acceptor grup-fosfat. Ionii de magneziu sporesc activitatea
enzimei. enzimei.
Reacia este monitorizat cinetic la 405 nm de ctre rata de formare a p- Reacia este monitorizat cinetic la 405 nm de ctre rata de formare a p-
nitrofenol, proporional cu activitatea ALP-ului prezent in prob. nitrofenol, proporional cu activitatea ALP-ului prezent in prob.

ALP,Mg ALP,Mg
p-nitrofenilfosfat + H2O p-nitrofenol + fosfat p-nitrofenilfosfat + H2O p-nitrofenol + fosfat
3. Reactivi 3. Reactivi
Reactiv 1 (R1): Reactiv 1 (R1):
Tampon dietilamin, pH=9,8 1mol/L Tampon dietilamin, pH=9,8 1mol/L
Clorur de magneziu 0,6mmol/L Clorur de magneziu 0,6mmol/L
Reactiv2 (R2): Reactiv2 (R2):
p- nitrofenilfosfat (soluie) 10mmol/L p- nitrofenilfosfat (soluie) 10mmol/L

4. Modul de lucru 4. Modul de lucru


Proba: Ser nehemolizat/ Plasm heparinizat Proba: Ser nehemolizat/ Plasm heparinizat
Pregatirea amestecului de reactivi: se dizolv coninutul unui flacon de Pregatirea amestecului de reactivi: se dizolv coninutul unui flacon de
reactiv 2 (R2) n cantitatea corespunztoare de tampon (R1). reactiv 2 (R2) n cantitatea corespunztoare de tampon (R1).
ntr-o eprubet se introduc: ntr-o eprubet se introduc:
amestec de reactivi 1000 L amestec de reactivi 1000 L
proba 200 L proba 200 L
Dup amestecare i incubare de 1 minut la 25C (30,37C) se va msura Dup amestecare i incubare de 1 minut la 25C (30,37C) se va msura
variaia absorbanei la lungimea de und 410 nm, n cuve de 1cm, fa de variaia absorbanei la lungimea de und 410 nm, n cuve de 1cm, fa de
aer sau ap distilat, timp de 3 minute. Se va calcula variaia absorbanei pe aer sau ap distilat, timp de 3 minute. Se va calcula variaia absorbanei pe
minut (A/min). minut (A/min).
71 71
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

Mod de msurare: cinetic. Mod de msurare: cinetic.


Calcul: Valoarea activitii ALP n UI/L = A x F (3433) Calcul: Valoarea activitii ALP n UI/L = A x F (3433)

5. Valori de referin 5. Valori de referin


n mod fiziologic, valorea acestei enzime n snge crete tranzitoriu, la copii n mod fiziologic, valorea acestei enzime n snge crete tranzitoriu, la copii
n perioada de cretere (poate ajunge la valori de trei ori mai mari n perioada de cretere (poate ajunge la valori de trei ori mai mari
comparativ cu ale adultului) i la gravide. comparativ cu ale adultului) i la gravide.
Aduli: femei: 35-130 UI/L Aduli: femei: 35-130 UI/L
brbai: 40-145 UI/L brbai: 40-145 UI/L
Copii n perioada de cretere: pn la 500 UI/l Copii n perioada de cretere: pn la 500 UI/l

6. VARIAII PATOLOGICE 6. VARIAII PATOLOGICE


Fosfataza alcalin exprimat la nivel tisular are rol de marker al Fosfataza alcalin exprimat la nivel tisular are rol de marker al
citotoxicitii la nivelul esutului respectiv. Creteri ale fosfatazei alcaline citotoxicitii la nivelul esutului respectiv. Creteri ale fosfatazei alcaline
serice s-au nregistrat n numeroase boli. serice s-au nregistrat n numeroase boli.
VALORILE CRESCUTE pot apare n urmatoarele situaii, cel mai VALORILE CRESCUTE pot apare n urmatoarele situaii, cel mai
frecvent nregistrndu-se n cazul afeciunilor care cauzeaz sinteza frecvent nregistrndu-se n cazul afeciunilor care cauzeaz sinteza
crescut la nivel hepatic, osos, sau al epiteliului cilor biliare: crescut la nivel hepatic, osos, sau al epiteliului cilor biliare:
Congestie/colestaz hepatic Congestie/colestaz hepatic
Pancreatit obstructiv Pancreatit obstructiv
Hepatit/mononucleoz Hepatit/mononucleoz
Insuficien cardiac congestiv Insuficien cardiac congestiv
Parazitoze Parazitoze
Metastaze Metastaze
Colestaza (poate fi i indus medicamentos) Colestaza (poate fi i indus medicamentos)
Ciroza biliara primitiv Ciroza biliara primitiv
Infecia cu mycobacterii Infecia cu mycobacterii
Afeciuni osoase/osteoblastice Afeciuni osoase/osteoblastice
Boala Paget afectare osoas n aceast afeciune, activitatea Boala Paget afectare osoas n aceast afeciune, activitatea
fosfatazei alcaline serice totale constituie markerul biochimic fosfatazei alcaline serice totale constituie markerul biochimic
cel mai fidel al activitii bolii. Are avantajul ca are o cel mai fidel al activitii bolii. Are avantajul ca are o
reproductibilitate bun, este sensibil la modificrile clinice i, reproductibilitate bun, este sensibil la modificrile clinice i,
mai mult, se coreleaz destul de bine cu evoluia bolii mai mult, se coreleaz destul de bine cu evoluia bolii
Hiperparatiroidism primar sau secundar afeciunilor renale, Hiperparatiroidism primar sau secundar afeciunilor renale,
osteomalaciei osteomalaciei
Rahitism deficiena vitaminei D Rahitism deficiena vitaminei D

72 72
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

Procesul
de vindecare al fracturilor, prin creterea osoas Procesul
de vindecare al fracturilor, prin creterea osoas
rapid (post-fractur) rapid (post-fractur)
Poliartrita reumatoid Poliartrita reumatoid
Osteomalacie Osteomalacie
Osteosarcoame (forme severe de cancer osos) Osteosarcoame (forme severe de cancer osos)
Tratamentul osteoporozei Tratamentul osteoporozei
Hiperfuncia corticosuprarenalian Hiperfuncia corticosuprarenalian
Afeciuni non-osoase/non-hepatice Afeciuni non-osoase/non-hepatice
Sarcina (placenta produce fosfataza alcalin ale crei valori pot Sarcina (placenta produce fosfataza alcalin ale crei valori pot
ajunge la o valoare dubl fa de normal) ajunge la o valoare dubl fa de normal)
Formarea de esut de granulaie Formarea de esut de granulaie
Afeciuni gastro-intestinale: colit ulcerativ, boala Crohn, Afeciuni gastro-intestinale: colit ulcerativ, boala Crohn,
ulcer ulcer
Infecii sistemice (sepsis) Infecii sistemice (sepsis)
Artrit reumatoid Artrit reumatoid
Herpes Zoster; Herpes Zoster;
Hipertiroidism Hipertiroidism
Limfom Hodgkin, sau alte neoplazii Limfom Hodgkin, sau alte neoplazii
Afeciuni acute ale esuturilor miocardic sau pulmonar (infarct Afeciuni acute ale esuturilor miocardic sau pulmonar (infarct
miocardic sau pulmonar) miocardic sau pulmonar)
Post-medicamentos Post-medicamentos

VALORILE SCZUTE VALORILE SCZUTE


o Hipofosfatemia, o afeciune autosomal recesiv o Hipofosfatemia, o afeciune autosomal recesiv
o Postmenopauz (indus de aciunea hormonilor estrogenici o Postmenopauz (indus de aciunea hormonilor estrogenici
administrai pentru tratamentul osteoporozei) administrai pentru tratamentul osteoporozei)
o Hipotiroidism o Hipotiroidism
o Insuficien paratiroidian o Insuficien paratiroidian
o Lipsa de vitamina D, zinc, acid folic, vitamina B6 o Lipsa de vitamina D, zinc, acid folic, vitamina B6
o Anemie sever o Anemie sever
o Leucemia mieloid cronic o Leucemia mieloid cronic
o Malnutriia asociat cu asimilarea sczut a proteinelor o Malnutriia asociat cu asimilarea sczut a proteinelor

7. FUNDAMENTE BIOCHIMICE 7. FUNDAMENTE BIOCHIMICE


ALP este o hidrolaz, responsabil de defosforilarea substratelor ALP este o hidrolaz, responsabil de defosforilarea substratelor
(detaarea gruprilor fosfat), n condiii de pH alcalin (detaarea gruprilor fosfat), n condiii de pH alcalin
Prezint mai multe forme moleculare, cu distribuie i origine Prezint mai multe forme moleculare, cu distribuie i origine
variat, cele mai reprezentative fiind fraciunile: hepatic, osoas, variat, cele mai reprezentative fiind fraciunile: hepatic, osoas,
intestinal intestinal
73 73
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

Avnd n vedere principalele localizri (origini) ale ALP, Avnd n vedere principalele localizri (origini) ale ALP,
modificarea valorilor serice ale acestei enzime trdeaz o suferin modificarea valorilor serice ale acestei enzime trdeaz o suferin
hepatic, biliar sau osoas. hepatic, biliar sau osoas.
Determinarea plasmatic a acestei enzime, asociat cu msurarea Determinarea plasmatic a acestei enzime, asociat cu msurarea
AST i ALT (cele dou transaminaze), se ncadreaz n termenul de AST i ALT (cele dou transaminaze), se ncadreaz n termenul de
investigare a funciei hepatice, dei, oarecum impropriu folosit investigare a funciei hepatice, dei, oarecum impropriu folosit
acest termen generos, avnd n vedere faptul c, aceste enzime acest termen generos, avnd n vedere faptul c, aceste enzime
prezint un nivel evident crescut n variate tipuri de leziuni prezint un nivel evident crescut n variate tipuri de leziuni
hepatice. n acest fel, activitatea acestor enzime, este mai degrab hepatice. n acest fel, activitatea acestor enzime, este mai degrab
o msur a integritii hepatice, dect o msur a funciei acestui o msur a integritii hepatice, dect o msur a funciei acestui
organ. organ.
Creterea valorii ALP totale pe seama fraciunii hepatice, Creterea valorii ALP totale pe seama fraciunii hepatice,
constituie un indicator fidel al existentei unui proces intra- sau constituie un indicator fidel al existentei unui proces intra- sau
extrahepatic de colestaz. Valori de pn la doua ordine de extrahepatic de colestaz. Valori de pn la doua ordine de
magnitudine mai mari fa de limita superioar normal se magnitudine mai mari fa de limita superioar normal se
ntlnesc de regul n cazul pacienilor cu hepatit, alcoolici, n ntlnesc de regul n cazul pacienilor cu hepatit, alcoolici, n
timp ce nivele semnificativ mult mai elevate se regsesc n cazul timp ce nivele semnificativ mult mai elevate se regsesc n cazul
cirozei biliare primare, obstruciilor biliare extrahepatice, sau al cirozei biliare primare, obstruciilor biliare extrahepatice, sau al
proceselor infiltrative de tipul neoplaziilor. proceselor infiltrative de tipul neoplaziilor.
Creterea nivelului seric al enzimei n obstruciile ductelor Creterea nivelului seric al enzimei n obstruciile ductelor
hepatice, hepatit, ficat gras, afeciuni inflamatorii (de tip hepatice, hepatit, ficat gras, afeciuni inflamatorii (de tip
mononucleoz infectioas) este mai puin spectaculoas. mononucleoz infectioas) este mai puin spectaculoas.
Asocierea valorilor crescute ale ALP cu un nivel seric crescut al Asocierea valorilor crescute ale ALP cu un nivel seric crescut al
GGT (gama glutamil transferaz), vine n sprijinul originii hepatice GGT (gama glutamil transferaz), vine n sprijinul originii hepatice
a afeciunii, n timp ce o valoare normala a GGT, impune cutarea a afeciunii, n timp ce o valoare normala a GGT, impune cutarea
mai departe a unei alte surse de modificare a nivelului ALP, foarte mai departe a unei alte surse de modificare a nivelului ALP, foarte
probabil la nivelul celulelor osoase (posibil prin afectare secundar probabil la nivelul celulelor osoase (posibil prin afectare secundar
de tip metastatic, tumora primar putnd avea o alt localizare). de tip metastatic, tumora primar putnd avea o alt localizare).
In perioada de cretere, copiii prezint valori mai ridicate ale ALP In perioada de cretere, copiii prezint valori mai ridicate ale ALP
comparativ cu adulii. Osteoblastele, prin crearea unui mediu comparativ cu adulii. Osteoblastele, prin crearea unui mediu
nconjurtor alcalin prin intermediul fosfatazei alcaline, ajut la nconjurtor alcalin prin intermediul fosfatazei alcaline, ajut la
refacerea osoas. Pentru a ncetini pierderea osoas, este necesar refacerea osoas. Pentru a ncetini pierderea osoas, este necesar
ca pH-ul s fie ct mai diferit de cel acid, iar pentru a realiza acest ca pH-ul s fie ct mai diferit de cel acid, iar pentru a realiza acest
lucru organismul reacioneaz prin creterea nivelului de fosfataz lucru organismul reacioneaz prin creterea nivelului de fosfataz
alcalin osoas. alcalin osoas.
n neutrofilele umane exist un tip specific de fosfataz alcalin, n neutrofilele umane exist un tip specific de fosfataz alcalin,
fosfataza alcalin leucocitar (neutrofilic), care este localizat n fosfataza alcalin leucocitar (neutrofilic), care este localizat n
principal, n veziculele secretorii. Fosfataza alcalin leucocitar principal, n veziculele secretorii. Fosfataza alcalin leucocitar
74 74
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

(NAP) poate fi considerat un marker al maturrii neutrofilelor. (NAP) poate fi considerat un marker al maturrii neutrofilelor.
Valorile sanguine ale NAP sunt utile n diagnosticul unor afeciuni Valorile sanguine ale NAP sunt utile n diagnosticul unor afeciuni
hematologice (leucemia mieloid cronic, policitemia vera). hematologice (leucemia mieloid cronic, policitemia vera).

8. MCQ 8. MCQ

ALP 1. Fosfataza alcalin este o enzim de tip: ALP 1. Fosfataza alcalin este o enzim de tip:
A. Transferaz A. Transferaz
B. Liaz B. Liaz
C. Hidrolaz C. Hidrolaz
D. Kinaz D. Kinaz
E. Dehidrogenaz E. Dehidrogenaz

ALP 2. Fosfataza alcalin poate fi de origine: ALP 2. Fosfataza alcalin poate fi de origine:
A. Hepatic A. Hepatic
B. Osoas B. Osoas
C. Pulmonar C. Pulmonar
D. Intestinal D. Intestinal
E. Pancreatic E. Pancreatic

ALP 3. Care dintre urmtoarele afeciuni osoase NU este caracterizat de ALP 3. Care dintre urmtoarele afeciuni osoase NU este caracterizat de
creterea ALP? creterea ALP?
A. Osteoporoza A. Osteoporoza
B. Rahitismul B. Rahitismul
C. Fracturi osoase C. Fracturi osoase
D. Osteosarcomul D. Osteosarcomul
E. Gonartroza E. Gonartroza

ALP 4. Valorile de referin pentru fosfataza alcalin n ser sunt: ALP 4. Valorile de referin pentru fosfataza alcalin n ser sunt:
A. 80-240 UI/L A. 80-240 UI/L
B. 35- 130 UI/L B. 35- 130 UI/L
C. 200-500UI/L C. 200-500UI/L
D. 10-45 UI/L D. 10-45 UI/L
E. Nici un rspuns corect E. Nici un rspuns corect
ALP 5. Creterea fosfatazei alcaline poate apare n: ALP 5. Creterea fosfatazei alcaline poate apare n:
A. Afeciuni hepatice A. Afeciuni hepatice
B. Afeciuni inflamatorii B. Afeciuni inflamatorii
C. Afeciuni intestinale C. Afeciuni intestinale
D. Afeciuni cerebrale D. Afeciuni cerebrale
75 75
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

E. Afeciuni pulmonare E. Afeciuni pulmonare


ALP 6. Urmtoarele afeciuni se caracterizeaz prin creterea fosfatazei ALP 6. Urmtoarele afeciuni se caracterizeaz prin creterea fosfatazei
alcaline, CU EXCEPIA: alcaline, CU EXCEPIA:
A. Hepatit A. Hepatit
B. Ciroz B. Ciroz
C. Parotidit C. Parotidit
D. Tumori hepatice D. Tumori hepatice
E. Obstrucie biliar E. Obstrucie biliar

ALP 7. Scderea fosfatazei alcaline apare n: ALP 7. Scderea fosfatazei alcaline apare n:
A. Rahitism A. Rahitism
B. Hepatite B. Hepatite
C. Insuficien paratiroidian C. Insuficien paratiroidian
D. Anemie sever D. Anemie sever
E. Boala Paget E. Boala Paget

ALP 8. Rahitismul poate fi caracterizat prin: ALP 8. Rahitismul poate fi caracterizat prin:
A. Scderea fosfatazei alcaline A. Scderea fosfatazei alcaline
B. Scderea calciului seric B. Scderea calciului seric
C. Creterea uoar a magneziului n ser C. Creterea uoar a magneziului n ser
D. Valori foarte crescute a fosfatazei alcaline D. Valori foarte crescute a fosfatazei alcaline
E. Nici un rspuns corect E. Nici un rspuns corect

ALP 9. Urmtoarele afeciuni sunt nsoite de scderea fosfatazei alcaline cu ALP 9. Urmtoarele afeciuni sunt nsoite de scderea fosfatazei alcaline cu
EXCEPIA: EXCEPIA:
A. Anemia A. Anemia
B. Leucemia mieloid cronic B. Leucemia mieloid cronic
C. Hipotiroidism C. Hipotiroidism
D. Hipofosfatemia D. Hipofosfatemia
E. Artrita reumatoid E. Artrita reumatoid

ALP 10. Determinarea fosfatazei alcaline se recomand n: ALP 10. Determinarea fosfatazei alcaline se recomand n:
A. Leucemii A. Leucemii
B. Bronite B. Bronite
C. Monitorizarea terapiei cu vitemina D la copii cu rahitism C. Monitorizarea terapiei cu vitemina D la copii cu rahitism
D. Ciroze D. Ciroze
E. Infarct de miocard E. Infarct de miocard

76 76
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

4.4. GAMA-GLUTAMIL TRANSFERAZA 4.4. GAMA-GLUTAMIL TRANSFERAZA


(GGT) (GGT)

1. Consideraii generale 1. Consideraii generale

GGT gama-glutamiltransferaza (sau transpeptidaza) catalizeaz GGT gama-glutamiltransferaza (sau transpeptidaza) catalizeaz
transferul grupului glutamil de la peptide ca glutationul (GSH) transferul grupului glutamil de la peptide ca glutationul (GSH)
ctre ali aminoacizi; este o protein heterodimeric, fiecare ctre ali aminoacizi; este o protein heterodimeric, fiecare
subunitate constnd dintr-un singur lan polipeptidic. subunitate constnd dintr-un singur lan polipeptidic.
GGT este prezent (n ordinea descresctoare a cantitilor) n GGT este prezent (n ordinea descresctoare a cantitilor) n
tubii renali proximali, ficat, pancreas i intestin. Este tubii renali proximali, ficat, pancreas i intestin. Este
localizat la nivelul membranei citoplasmatice a numeroase celule, localizat la nivelul membranei citoplasmatice a numeroase celule,
centrul activ al enzimei fiind situat la exterior. centrul activ al enzimei fiind situat la exterior.
GGT din ser provine n special din ficat. Cea mai mare parte este GGT din ser provine n special din ficat. Cea mai mare parte este
legat de lipoproteine, n special HDL, dar i de LDL. GGT legat legat de lipoproteine, n special HDL, dar i de LDL. GGT legat
de HDL predomin n bolile hepatice non-icterice, n timp ce GGT de HDL predomin n bolile hepatice non-icterice, n timp ce GGT
legat de LDL este crescut n colestaz, iar forma hidrosolubila ntr- legat de LDL este crescut n colestaz, iar forma hidrosolubila ntr-
o varietate de boli hepatice. o varietate de boli hepatice.
GGT este singura enzim care cliveaz cantiti semnificative de GGT este singura enzim care cliveaz cantiti semnificative de
glutation (GSH) i conjugai ai acestuia n cadrul ciclului - glutation (GSH) i conjugai ai acestuia n cadrul ciclului -
glutamil (GSH este transportat la nivelul suprafeei extracelulare a glutamil (GSH este transportat la nivelul suprafeei extracelulare a
membranei, unde este clivat de ctre GGT n cisteinil-glicina i membranei, unde este clivat de ctre GGT n cisteinil-glicina i
reziduuri -glutamil, care sunt transferate ctre ali aminoacizi). reziduuri -glutamil, care sunt transferate ctre ali aminoacizi).
GGT este ndeprtat din plasm prin bil, activitatea enzimei n GGT este ndeprtat din plasm prin bil, activitatea enzimei n
bil fiind de 10 ori mai mare decat cea plasmatic. O mica parte bil fiind de 10 ori mai mare decat cea plasmatic. O mica parte
este degradat de rinichi i eliminat prin urin. este degradat de rinichi i eliminat prin urin.
Recomandri pentru determinarea GGT Recomandri pentru determinarea GGT
o GGT este cel mai sensibil indicator pentru depistarea o GGT este cel mai sensibil indicator pentru depistarea
alcoolismului, creterea activitii acestei enzime fiind constant alcoolismului, creterea activitii acestei enzime fiind constant
i la valori mult mai mari comparativ cu celelalte enzime i la valori mult mai mari comparativ cu celelalte enzime
hepatice dozate n mod curent. La alcoolici nivelul seric al hepatice dozate n mod curent. La alcoolici nivelul seric al
GGT poate ajunge la valori de 50 de ori peste valoarea GGT poate ajunge la valori de 50 de ori peste valoarea
normal, gradul de cretere depinznd att de cantitatea de normal, gradul de cretere depinznd att de cantitatea de
alcool consumat, ct mai ales de persistena ndelungat a alcool consumat, ct mai ales de persistena ndelungat a
77 77
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

consumului. Are rol de asemenea n monitorizarea abstinenei consumului. Are rol de asemenea n monitorizarea abstinenei
de la alcool. de la alcool.
o n bolile hepato-biliare GGT se coreleaz cu nivelurile o n bolile hepato-biliare GGT se coreleaz cu nivelurile
fosfatazei alcaline. Creterile nu sunt totui specifice i pot fi fosfatazei alcaline. Creterile nu sunt totui specifice i pot fi
asociate i cu afectiuni pancreatice, cardiace, renale, diabet asociate i cu afectiuni pancreatice, cardiace, renale, diabet
zaharat. zaharat.
o Dozarea GGT este de asemenea util pentru diagnosticul unei o Dozarea GGT este de asemenea util pentru diagnosticul unei
hepatopatii n prezena unei afeciuni osoase, a sarcinii sau n hepatopatii n prezena unei afeciuni osoase, a sarcinii sau n
perioada copilriei (condiii n care valorile fosfatazei alcaline perioada copilriei (condiii n care valorile fosfatazei alcaline
cresc, n timp ce GGT rmne la valori normale). cresc, n timp ce GGT rmne la valori normale).

2. Principiul metodei 2. Principiul metodei


Gama-glutamiltransferaza (GGT) catalizeaz transferul gruprii - Gama-glutamiltransferaza (GGT) catalizeaz transferul gruprii -
glutamil de la un peptid donor (gama-glutamil-3-nitroanilida) la un glutamil de la un peptid donor (gama-glutamil-3-nitroanilida) la un
aminoacid acceptor (glicil-glicina), pentru a forma 3 carboxi-nitroanilina. aminoacid acceptor (glicil-glicina), pentru a forma 3 carboxi-nitroanilina.
Creterea valorii absorbanei msurat la 405 nm este corelat cu Creterea valorii absorbanei msurat la 405 nm este corelat cu
formarea 3 carboxi-4 nitroanilinei i este direct proporional cu activitatea formarea 3 carboxi-4 nitroanilinei i este direct proporional cu activitatea
gama-glutamiltransferazei. gama-glutamiltransferazei.

GGT GGT
gama-glutamil-3-nitroanilida + glicilglicina gama-glutamil-glicilglicina gama-glutamil-3-nitroanilida + glicilglicina gama-glutamil-glicilglicina
+ 3-carboxinitroanilina + 3-carboxinitroanilina

3. Reactivi 3. Reactivi
Reactiv 1 (R1): Reactiv 1 (R1):
Tampon TRIS, pH=8,1 100 mmol/L Tampon TRIS, pH=8,1 100 mmol/L
Reactiv 2 (R2): Reactiv 2 (R2):
Glicilglicina 100 mmol/L Glicilglicina 100 mmol/L
Gama-glutamil-3-nitroanilida 4 mmol/L Gama-glutamil-3-nitroanilida 4 mmol/L

4. Modul de lucru 4. Modul de lucru


Proba: Ser nehemolizat Proba: Ser nehemolizat
Se pregtete amestecul de reactivi (soluia stoc-R) - se dizolv prin Se pregtete amestecul de reactivi (soluia stoc-R) - se dizolv prin
agitare coninutul unui flacon de reactiv 2 (R2) n cantitatea corespunztoare agitare coninutul unui flacon de reactiv 2 (R2) n cantitatea corespunztoare
de reactiv 1 (R1). Dac absorbana (extincia) reactivului la 405 nm fa de de reactiv 1 (R1). Dac absorbana (extincia) reactivului la 405 nm fa de
ap distilat este mai mare de 0,8 acesta NU se va folosi. ap distilat este mai mare de 0,8 acesta NU se va folosi.
ntr-o eprubet se introduc: ntr-o eprubet se introduc:

78 78
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

a. Amestec de reactivi (R) 1000 L a. Amestec de reactivi (R) 1000 L


b. Proba 100 L b. Proba 100 L
Dup amestecare i incubare de 1 minut la 37oC se citete valoarea Dup amestecare i incubare de 1 minut la 37oC se citete valoarea
absorbanei (A) la 405 nm, n cuve de 1 cm, fa de apa distilat. Se va absorbanei (A) la 405 nm, n cuve de 1 cm, fa de apa distilat. Se va
urmari variaia absorbanei (A/min) timp de 3 minute. urmari variaia absorbanei (A/min) timp de 3 minute.
Mod de msurare: cinetic (descresctor). Mod de msurare: cinetic (descresctor).
Calcul: Calcul:
U / L A / min xFactor U / L A / min xFactor
Masurarea la 405 nm 365 nm Masurarea la 405 nm 365 nm
F 1190 1339 F 1190 1339

5.Valori de referin < 60 U/L (barbati) 5.Valori de referin < 60 U/L (barbati)
< 35 U/L (femei) < 35 U/L (femei)

6. Variaii patologice 6. Variaii patologice

n interpretarea valorilor crescute ale GGT se iau in considerare, n n interpretarea valorilor crescute ale GGT se iau in considerare, n
afara nivelului activitii GGT, comportamentul GGT n raport cu afara nivelului activitii GGT, comportamentul GGT n raport cu
aminotransferazele, adic raportul GGT/TGO sau GGT/TGP (la pacienii cu aminotransferazele, adic raportul GGT/TGO sau GGT/TGP (la pacienii cu
icter acest raport msoar extensia colestazei fa de lezarea membranei icter acest raport msoar extensia colestazei fa de lezarea membranei
celulare) i comportamentul GGT fa de celelalte enzime de colestaz, celulare) i comportamentul GGT fa de celelalte enzime de colestaz,
respectiv fosfataza alcalin. respectiv fosfataza alcalin.

VALORI CRESCUTE VALORI CRESCUTE


GGT crete n principal n afeciuni hepatice: GGT crete n principal n afeciuni hepatice:
o n hepatita acut viral creterea GGT este mai mic dect o n hepatita acut viral creterea GGT este mai mic dect
a altor enzime hepatice (GGT/TGO=0.1-0.2), dar revine a altor enzime hepatice (GGT/TGO=0.1-0.2), dar revine
ultima la normal; n formele colestatice GGT/TGO=1; ultima la normal; n formele colestatice GGT/TGO=1;
o n hepatita cronic activ, viral sau autoimun creterile o n hepatita cronic activ, viral sau autoimun creterile
pot depi de 7 ori limita superioar a normalului pot depi de 7 ori limita superioar a normalului
(GGT/TGO=1-3); (GGT/TGO=1-3);
o n hepatita alcoolic acut GGT/TGO >6; o n hepatita alcoolic acut GGT/TGO >6;
o n ciroza hepatic creterile sunt n medie de 2 ori n ciroza o n ciroza hepatic creterile sunt n medie de 2 ori n ciroza
posthepatitic i n jur de 10 ori n ciroza alcoolic; posthepatitic i n jur de 10 ori n ciroza alcoolic;
o n ciroza biliar primitiv GGT crete paralel cu fosfataza o n ciroza biliar primitiv GGT crete paralel cu fosfataza
alcalin, naintea apariiei icterului, creterile putnd ajunge alcalin, naintea apariiei icterului, creterile putnd ajunge
pn la de 13 ori limita superioar a normalului; pn la de 13 ori limita superioar a normalului;
79 79
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

o n ficatul gras de etiologie alcoolic GGT este aproximativ o n ficatul gras de etiologie alcoolic GGT este aproximativ
dublu i persist crescut mult timp dup ntreruperea dublu i persist crescut mult timp dup ntreruperea
consumului; n ficatul gras non-alcoolic predomin creterea consumului; n ficatul gras non-alcoolic predomin creterea
uoar a aminotransferazelor, mai frecvent dect GGT; uoar a aminotransferazelor, mai frecvent dect GGT;
o n sindromul de colestaz GGT i fosfataza alcalin cresc o n sindromul de colestaz GGT i fosfataza alcalin cresc
aproximativ n aceeai proporie n colestaza mecanic i aproximativ n aceeai proporie n colestaza mecanic i
viral, spre deosebire de colestaza indus medicamentos n viral, spre deosebire de colestaza indus medicamentos n
care GGT crete mult mai mult dect fosfataza alcalin; n care GGT crete mult mai mult dect fosfataza alcalin; n
medie creterile depesc de 6 ori normalul; n colestaza medie creterile depesc de 6 ori normalul; n colestaza
extrahepatic GGT crete de >10 ori, GGT/TGO=3-6 n extrahepatic GGT crete de >10 ori, GGT/TGO=3-6 n
obstrucia recent i >6 n obstrucia de lung durat; n obstrucia recent i >6 n obstrucia de lung durat; n
colestaza intrahepatic (hepatita acut, sarcina, medicamente, colestaza intrahepatic (hepatita acut, sarcina, medicamente,
boala Hodgkin, nutriie parenteral, atrezia ductelor biliare boala Hodgkin, nutriie parenteral, atrezia ductelor biliare
etc.) creterile GGT sunt mai mici; n sarcin GGT nu crete etc.) creterile GGT sunt mai mici; n sarcin GGT nu crete
la fel de mult ca fosfataza alcalin; la fel de mult ca fosfataza alcalin;
o n tumorile hepatice primitive, metastazele hepatice o n tumorile hepatice primitive, metastazele hepatice
evoluia este paralel cu cea a fosfatazei alcaline i creterile evoluia este paralel cu cea a fosfatazei alcaline i creterile
pot depi de 14 ori valoarea normal; GGT este crescut la pot depi de 14 ori valoarea normal; GGT este crescut la
90% din pacienii cu metastaze, nivelurile normale excluznd 90% din pacienii cu metastaze, nivelurile normale excluznd
practic prezena acestora, iar determinrile seriate pot practic prezena acestora, iar determinrile seriate pot
monitoriza rspunsul la chimioterapie; monitoriza rspunsul la chimioterapie;
o n congestia hepatic cronica GGT poate crete de pn la o n congestia hepatic cronica GGT poate crete de pn la
5 ori, iar n cea acut (ex.: tromboza de vena port), creterea 5 ori, iar n cea acut (ex.: tromboza de vena port), creterea
este mic comparativ cu cea a transaminazelor i LDH. este mic comparativ cu cea a transaminazelor i LDH.
Creteri ale GGT se ntlnesc mereu n pancreatita acut. n cea Creteri ale GGT se ntlnesc mereu n pancreatita acut. n cea
cronic se observ creteri doar cnd este implicat tractul biliar sau cronic se observ creteri doar cnd este implicat tractul biliar sau
cnd este prezent inflamaia acut. cnd este prezent inflamaia acut.
Abuzul de alcool sau alcoolismul ocult pot fi descoperite cu Abuzul de alcool sau alcoolismul ocult pot fi descoperite cu
ajutorul GGT care este crescut. ajutorul GGT care este crescut.

VALORI SCZUTE VALORI SCZUTE


GGT poate fi sczut n urmtoarele cazuri: GGT poate fi sczut n urmtoarele cazuri:
o Hipotiroidie o Hipotiroidie
o Consum de anticoncepionale orale o Consum de anticoncepionale orale

80 80
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

Diagnosticul diferenial al afeciunilor cu GGT crescut: Diagnosticul diferenial al afeciunilor cu GGT crescut:

GGT ALT <80 U/L Inducie enzimatic hepatic GGT ALT <80 U/L Inducie enzimatic hepatic
ALP <200 U/L Exces de alcool ALP <200 U/L Exces de alcool
Medicamente (barbiturice, benzodiazepine) Medicamente (barbiturice, benzodiazepine)
Obezitate Obezitate
Diabet zaharat Diabet zaharat
Steatoz hepatic Steatoz hepatic
Hipertrigliceridemie Hipertrigliceridemie

GGT ALT <80 U/L Colestaz hepatic GGT ALT <80 U/L Colestaz hepatic
ALP >200U/L Inducie enzimatic hepatic plus afectare ALP >200U/L Inducie enzimatic hepatic plus afectare
osoas osoas

GGT ALT>80 U/L Boli hepatice (hepatite, infecii cu virus GGT ALT>80 U/L Boli hepatice (hepatite, infecii cu virus
ALP<200 U/L Epstein-Barr, toxice hepatice- ALP<200 U/L Epstein-Barr, toxice hepatice-
alcool/medicamente, steatoz alcool/medicamente, steatoz
nonalcoolic) nonalcoolic)
GGT ALT>80 U/L Afeciuni hepatocelulare concomitent cu GGT ALT>80 U/L Afeciuni hepatocelulare concomitent cu
ALP >200U/L boli colestatice (hepatit acut, hepatit ALP >200U/L boli colestatice (hepatit acut, hepatit
cronic activ, toxice hepatice, neoplazii, cronic activ, toxice hepatice, neoplazii,
abcese hepatice, chisturi) abcese hepatice, chisturi)

7. FUNDAMENTE BIOCHIMICE 7. FUNDAMENTE BIOCHIMICE

Gama-glutamiltransferaza (GGT) este enzima ce catalizeaz Gama-glutamiltransferaza (GGT) este enzima ce catalizeaz
tranferul gruprii -glutamil de la un peptid donor la un tranferul gruprii -glutamil de la un peptid donor la un
aminoacid acceptor aminoacid acceptor
GGT msurat n ser provine n principal din ficat, ea fiind prezent GGT msurat n ser provine n principal din ficat, ea fiind prezent
i n alte esuturi, cum ar fi tubii renali proximali, pancreas sau i n alte esuturi, cum ar fi tubii renali proximali, pancreas sau
intestin intestin
Este singura enzim ce poate cliva Glutationul (GSH) sau conjugai Este singura enzim ce poate cliva Glutationul (GSH) sau conjugai
ai acestuia, n cadrul ciclului -glutamil. ai acestuia, n cadrul ciclului -glutamil.
GGT este cel mai sensibil indicator al alcoolismului, deoarece GGT este cel mai sensibil indicator al alcoolismului, deoarece
valoarea ei crete mult peste valorile celorlate enzime dozate n valoarea ei crete mult peste valorile celorlate enzime dozate n
mod curent. Este folosit de asemenea i pentru monitorizarea mod curent. Este folosit de asemenea i pentru monitorizarea
abstinenei la alcool. abstinenei la alcool.
GGT prezinta creteri patologice n special n: GGT prezinta creteri patologice n special n:
81 81
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

- afeciuni hepatice, unde necesit corelarea cu enzimele - afeciuni hepatice, unde necesit corelarea cu enzimele
specifice ficatului (TGP si TGO) i cu enzimele de colestaz, n specifice ficatului (TGP si TGO) i cu enzimele de colestaz, n
special fosfataza alcalin special fosfataza alcalin
- afeciuni pancreatice acute - afeciuni pancreatice acute
excreia se face n principal prin bil, unde activitatea enzimei este excreia se face n principal prin bil, unde activitatea enzimei este
de 10 ori mai mare dect cea plasmatic, iar o mica parte este de 10 ori mai mare dect cea plasmatic, iar o mica parte este
degradat de rinichi i eliminat prin urin. degradat de rinichi i eliminat prin urin.

8. MCQ 8. MCQ

GGT1 Creterile patologice ale GGT se ntlnesc cel mai frecvent in: GGT1 Creterile patologice ale GGT se ntlnesc cel mai frecvent in:
A. Afecuni renale A. Afecuni renale
B. Afeciuni pancreatice B. Afeciuni pancreatice
C. Afeciuni osoase C. Afeciuni osoase
D. Afeciuni cardiace D. Afeciuni cardiace
E. Afeciuni hepatice E. Afeciuni hepatice

GGT2 Principala cale de excreie a GGT-ului este: GGT2 Principala cale de excreie a GGT-ului este:
A. plasm A. plasm
B. ser B. ser
C. bil C. bil
D. urin D. urin
E. LCR E. LCR
GGT3 Valori sczute ale GGT se pot ntlni n urmatoarele situaii: GGT3 Valori sczute ale GGT se pot ntlni n urmatoarele situaii:
A. Hipotiroidism A. Hipotiroidism
B. Gua multinodular B. Gua multinodular
C. Consum de anticoncepionale orale C. Consum de anticoncepionale orale
D. Infarct miocardic acut D. Infarct miocardic acut
E. Hepatita viral E. Hepatita viral

GGT4 Principala enzim de colestaz a crei activitate trebuie corelat cu GGT4 Principala enzim de colestaz a crei activitate trebuie corelat cu
valoarea GGT pentru interpretarea valorilor patologice este: valoarea GGT pentru interpretarea valorilor patologice este:
A. TGO A. TGO
B. TGP B. TGP
C. Fosfataza alcalin C. Fosfataza alcalin
D. Feritina D. Feritina
E. Bilirubina E. Bilirubina

82 82
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

GGT5 Principala condiie patologic diagnosticat prin valoarea crescuta a GGT5 Principala condiie patologic diagnosticat prin valoarea crescuta a
GGT este: GGT este:
A.hepatita viral A.hepatita viral
B. alcoolismul B. alcoolismul
C. hepatita autoimun C. hepatita autoimun
D. infarctul miocardic acut D. infarctul miocardic acut
E. litiaza renal E. litiaza renal
GGT6 GGT-ul msurat n ser poate proveni din urmatoarele surse: GGT6 GGT-ul msurat n ser poate proveni din urmatoarele surse:
A. ficat A. ficat
B. creier B. creier
C. inim C. inim
D. tubii renali proximali D. tubii renali proximali
E. pancreas E. pancreas
GGT7 Care din fraciunile lipoproteice pot lega GGT pentru a-l transporta GGT7 Care din fraciunile lipoproteice pot lega GGT pentru a-l transporta
n plasm: n plasm:
A. IDL A. IDL
B. HDL B. HDL
C. VLDL C. VLDL
D. LDL D. LDL
E. chilomicroni E. chilomicroni
GGT8 GGT este o enzim ce transfer urmatoarea grupare proteic: GGT8 GGT este o enzim ce transfer urmatoarea grupare proteic:
A. gruparea amino A. gruparea amino
B. gruparea carboxil B. gruparea carboxil
C. gruparea -glutamil C. gruparea -glutamil
D. gruparea hidroxil D. gruparea hidroxil
E. gruparea tiol E. gruparea tiol
GGT9 GGT are o importan deosebit deoarece are capacitatea de a cliva GGT9 GGT are o importan deosebit deoarece are capacitatea de a cliva
cantiti importante de: cantiti importante de:
A. hemoglobin A. hemoglobin
B. bilirubin B. bilirubin
C. amoniac C. amoniac
D. glutation D. glutation
E. gastrin E. gastrin
GGT10 GGT este prezent n urmtoarele esuturi, CU EXCEPIA: GGT10 GGT este prezent n urmtoarele esuturi, CU EXCEPIA:
A. tubii renali proximali A. tubii renali proximali
B. creier B. creier
C. ficat C. ficat
D. muchi D. muchi
E. pancreas E. pancreas
83 83
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

4.5. LACTAT DEHIDROGENAZA 4.5. LACTAT DEHIDROGENAZA


- LDH - - LDH -

1. Consideraii generale 1. Consideraii generale


LDH este o enzim care face parte din categoria oxidoreductazelor LDH este o enzim care face parte din categoria oxidoreductazelor
(implicate n transferul protonilor ntre substrate), i care (implicate n transferul protonilor ntre substrate), i care
catalizeaz interconversia piruvatului n lactat. Este o catalizeaz interconversia piruvatului n lactat. Este o
dehidrogenaz NAD-dependent, citoplasmatic, ce se elibereaz dehidrogenaz NAD-dependent, citoplasmatic, ce se elibereaz
n condiii fiziologice n cantiti reduse, din paleta enzimatic n condiii fiziologice n cantiti reduse, din paleta enzimatic
deosebit de bogat a celulelor variatelor organe i esuturi. deosebit de bogat a celulelor variatelor organe i esuturi.
LDH este o enzim intracelular larg distribuit n organism, fiind LDH este o enzim intracelular larg distribuit n organism, fiind
ntlnit cu precdere n rinichi, miocard, musculatura ntlnit cu precdere n rinichi, miocard, musculatura
scheletic, creier, ficat i plmni. scheletic, creier, ficat i plmni.
Investigarea acestei enzime este util pentru confirmarea Investigarea acestei enzime este util pentru confirmarea
diagnosticului de infarct miocardic sau pulmonar. n infarctul diagnosticului de infarct miocardic sau pulmonar. n infarctul
miocardic persistena nivelului LDH crescut este mai ndelungat miocardic persistena nivelului LDH crescut este mai ndelungat
dect a celorlalte enzime asociate, fiind astfel un element sugestiv dect a celorlalte enzime asociate, fiind astfel un element sugestiv
n aprecierea diagnosticului de alterare miocardic. n aprecierea diagnosticului de alterare miocardic.
LDH este o enzim tetrameric ce prezint dou tipuri de lanuri: LDH este o enzim tetrameric ce prezint dou tipuri de lanuri:
de tip H (heart) si M (muscle), combinarea diferit a acestora de tip H (heart) si M (muscle), combinarea diferit a acestora
conducnd la existena a 5 izoenzime: LDH1 (H4) / LDH2 (H3M) / conducnd la existena a 5 izoenzime: LDH1 (H4) / LDH2 (H3M) /
LDH3 (H2M2) / LDH4 (HM3) / LDH5 (M4). LDH3 (H2M2) / LDH4 (HM3) / LDH5 (M4).
Aceste izoenzime au origine diferit iar prezena lor n cantiti Aceste izoenzime au origine diferit iar prezena lor n cantiti
anormale n snge poate orienta diagnosticul, cunoscut fiind faptul anormale n snge poate orienta diagnosticul, cunoscut fiind faptul
c necroza esutului de origine conduce la eliberarea excesiv a c necroza esutului de origine conduce la eliberarea excesiv a
enzimei n circulaie: enzimei n circulaie:
LDH1 si LDH2 n miocard i eritrocite LDH1 si LDH2 n miocard i eritrocite
LDH3 plmni, splin, pancreas, placent LDH3 plmni, splin, pancreas, placent
LDH4 - ficat i muchi scheletici LDH4 - ficat i muchi scheletici
LDH5 ficat i muchi scheletici. LDH5 ficat i muchi scheletici.
Inima conine variantele bogate n monomerul H: LDH1 i LDH2, Inima conine variantele bogate n monomerul H: LDH1 i LDH2,
iar ficatul -izoenzima lent - LDH5. Cele 5 izoenzime ale LDH au iar ficatul -izoenzima lent - LDH5. Cele 5 izoenzime ale LDH au
mobilitate electroforetic diferit, izoenzimele cardiace fiind cele mobilitate electroforetic diferit, izoenzimele cardiace fiind cele
mai rapide, iar cele musculare/ hepatice cele mai lente. mai rapide, iar cele musculare/ hepatice cele mai lente.

84 84
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

Modificarea ratei intrrii LDH n snge este determinat de Modificarea ratei intrrii LDH n snge este determinat de
amploarea leziunii esutului, iar rata de ndeprtare a LDH din amploarea leziunii esutului, iar rata de ndeprtare a LDH din
sange depinde de: sange depinde de:
timpul de injumtire diferit al enzimelor plasmatice timpul de injumtire diferit al enzimelor plasmatice
(LDH1-113 ore, LDH5-10ore) (LDH1-113 ore, LDH5-10ore)
modul diferit de eliminare modul diferit de eliminare

CH3 CH3 CH3 CH3


| LDH | | LDH |
C=O =============== CH-OH C=O =============== CH-OH
| NADH+H+ >NAD+ | | NADH+H+ >NAD+ |
COOH COOH COOH COOH

piruvat lactat piruvat lactat

2. Principiul determinrii 2. Principiul determinrii


Metoda cinetic pentru determinarea LDH este recomandat de Metoda cinetic pentru determinarea LDH este recomandat de
Societatea German de Chimie Clinic (DGKC). LDH catalizeaz conversia Societatea German de Chimie Clinic (DGKC). LDH catalizeaz conversia
piruvatului la L-lactat n prezena NADH care se oxideaz la NAD+. Rata de piruvatului la L-lactat n prezena NADH care se oxideaz la NAD+. Rata de
oxidare a NADH este proporional cu activitatea catalitic a LDH. oxidare a NADH este proporional cu activitatea catalitic a LDH.

Piruvat NADH H L Lactat NAD


LDH
Piruvat NADH H L Lactat NAD
LDH

3. Reactivi 3. Reactivi
Reactiv 1 (R1) Reactiv 1 (R1)
Tampon fosfat, pH 7,5 56 mmol/L Tampon fosfat, pH 7,5 56 mmol/L
Piruvat 1,6 mmol/L Piruvat 1,6 mmol/L
Reactiv 2 (R2) Reactiv 2 (R2)
NADH 240 mol/L NADH 240 mol/L

4. Modul de lucru 4. Modul de lucru


Proba: Ser nehemolizat Proba: Ser nehemolizat
Temperatura de incubare: 37oC. Temperatura de incubare: 37oC.
Lungimea de und: 340 nm (334nm, 365 nm) Lungimea de und: 340 nm (334nm, 365 nm)

85 85
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

Pregtirea amestecului de lucru: se amestec 1 volum reactiv 1 (R1) cu 1 Pregtirea amestecului de lucru: se amestec 1 volum reactiv 1 (R1) cu 1
volum reactiv 2 (R2). Se omogenizeaz amestecul prin agitare uoar. volum reactiv 2 (R2). Se omogenizeaz amestecul prin agitare uoar.
Pentru lucru se utilizeaz dou cuvete prob (P) i martor (M) n care se Pentru lucru se utilizeaz dou cuvete prob (P) i martor (M) n care se
pipeteaz: pipeteaz:

Reactiv P (l) M (l) Reactiv P (l) M (l)


Amestec de lucru 1000 1000 Amestec de lucru 1000 1000
Proba 25 - Proba 25 -
Ap distilat (AD) - 25 Ap distilat (AD) - 25

Dup omogenizarea amestecurilor prin agitare uoar se incubeaz la 37C Dup omogenizarea amestecurilor prin agitare uoar se incubeaz la 37C
timp de 1 min. timp de 1 min.
Dup incubare se citete absorbana iniial la 340 nm a martorului i probei Dup incubare se citete absorbana iniial la 340 nm a martorului i probei
apoi se repet citirea absorbanei la 1, 2, 3 min la aceeai lungime de und. apoi se repet citirea absorbanei la 1, 2, 3 min la aceeai lungime de und.
Se determin valoarea medie a absorbanei per minut A/min, care se Se determin valoarea medie a absorbanei per minut A/min, care se
folosete n calcul. folosete n calcul.
Citirea se poate efectua la 340 nm, 334 nm sau 365 nm. Citirea se poate efectua la 340 nm, 334 nm sau 365 nm.

Calcul: Calcul:
Valoarea activitii enzimatice a LDH n prob se calculeaz utiliznd Valoarea activitii enzimatice a LDH n prob se calculeaz utiliznd
formula: formula:
Activitatea LDH U / L A / min xFactor Activitatea LDH U / L A / min xFactor
Valoarea factorului F depinde de lungimea de unda utilizata. Astfel, pentru: Valoarea factorului F depinde de lungimea de unda utilizata. Astfel, pentru:
334 nm 340 nm 365 nm 334 nm 340 nm 365 nm
F 8252 8450 15000 F 8252 8450 15000

5. Valori de referin 5. Valori de referin

125 250 U/L (valorile de referin variaz n funcie de metoda folosit) 125 250 U/L (valorile de referin variaz n funcie de metoda folosit)

6. VARIAII PATOLOGICE 6. VARIAII PATOLOGICE


Valori crescute Valori crescute
Valoarea total modificat a acestei enzime n snge poate apare n orice Valoarea total modificat a acestei enzime n snge poate apare n orice
situaie patologic caracterizat prin degradarea citosolic, cel mai frecvent situaie patologic caracterizat prin degradarea citosolic, cel mai frecvent
n: n:
86 86
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

boli cardiovasculare, n special n cazul Infarctului miocardic boli cardiovasculare, n special n cazul Infarctului miocardic
(IMA), insuficiena cardiac (IMA), insuficiena cardiac
unele afeciuni musculare (distrofii, traumatisme) unele afeciuni musculare (distrofii, traumatisme)
cancer (leucemii, limfoame datorit diviziunii celulare cancer (leucemii, limfoame datorit diviziunii celulare
aberante a celulelor tumorale, cu citoliza consecutiv i aberante a celulelor tumorale, cu citoliza consecutiv i
eliberarea coninutului celular n snge) eliberarea coninutului celular n snge)
boli hematologice (Anemii megaloblastice i hemolitice) boli hematologice (Anemii megaloblastice i hemolitice)
boli hepatice (hepatita acut viral, ciroz, alcoolism) boli hepatice (hepatita acut viral, ciroz, alcoolism)
boli pulmonare (infarct pulmonar) boli pulmonare (infarct pulmonar)
necroz tisular sau cei care au suferit ocuri calorice necroz tisular sau cei care au suferit ocuri calorice
eforturi fizice mari eforturi fizice mari
sarcin sarcin
postoperator (datorit aciunii agenilor anestezici, sau a unor postoperator (datorit aciunii agenilor anestezici, sau a unor
preparate anticoagulante cum este dicumarolul) preparate anticoagulante cum este dicumarolul)
hipotiroidism hipotiroidism
convulsii, delirium tremens convulsii, delirium tremens
oc, hipoxie, hipotensiune oc, hipoxie, hipotensiune
hipertermie hipertermie
infarct renal infarct renal
pancreatit acut pancreatit acut
Efortul fizic susinut precum i efortul din cursul travaliului pot Efortul fizic susinut precum i efortul din cursul travaliului pot
determina creteri ale LDH. Afeciunile cutanate pot produce false creteri determina creteri ale LDH. Afeciunile cutanate pot produce false creteri
ale LDH. ale LDH.
De menionat de asemeni, este i faptul c o prob de snge De menionat de asemeni, este i faptul c o prob de snge
hemolizat poate aduce rezutate fals crescute ale activitii acestei enzime. hemolizat poate aduce rezutate fals crescute ale activitii acestei enzime.
Valori sczute Valori sczute
Scderea valorilor LDH poate fi ntlnit n terapia antineoplazic (cancer) Scderea valorilor LDH poate fi ntlnit n terapia antineoplazic (cancer)
i indic evoluia optim a terapiei i rspuns bun la aciunea agenilor i indic evoluia optim a terapiei i rspuns bun la aciunea agenilor
farmacologici. farmacologici.

7. FUNDAMENTE BIOCHIMICE 7. FUNDAMENTE BIOCHIMICE

LDH este o enzim din clasa oxidoreductazelor, o dehidrogenaz LDH este o enzim din clasa oxidoreductazelor, o dehidrogenaz
NAD-dependent, citoplasmatic, ce se elibereaz n condiii NAD-dependent, citoplasmatic, ce se elibereaz n condiii
fiziologice n cantiti reduse, din garnitura enzimatic deosebit de fiziologice n cantiti reduse, din garnitura enzimatic deosebit de
bogat a celulelor variatelor organe i esuturi. bogat a celulelor variatelor organe i esuturi.
LDH este o enzim tetrameric ce prezint dou tipuri de lanuri: LDH este o enzim tetrameric ce prezint dou tipuri de lanuri:
de tip H (heart) si M (muscle), i de aceea se prezint sub forma a de tip H (heart) si M (muscle), i de aceea se prezint sub forma a
5 izoenzime: 5 izoenzime:
87 87
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

LDH1 si LDH2 n miocard, eritrocite


LDH1 si LDH2 n miocard, eritrocite

LDH3 plmni, splin, placent, pancreas LDH3 plmni, splin, placent, pancreas
LDH4 - ficat i muchi scheletici LDH4 - ficat i muchi scheletici
LDH5 ficat i muchi scheletici LDH5 ficat i muchi scheletici
LDH se gsete n aproape toate esuturile organismului, de aceea LDH se gsete n aproape toate esuturile organismului, de aceea
creterea nivelului LDH are o valoare diagnostic limitat n creterea nivelului LDH are o valoare diagnostic limitat n
absena corelrii cu datele clinice i alte investigaii de laborator. absena corelrii cu datele clinice i alte investigaii de laborator.
Analiza LDH i a izoenzimelor sale este util n: Analiza LDH i a izoenzimelor sale este util n:
diagnosticul retroactiv al infarctului miocardic diagnosticul retroactiv al infarctului miocardic
stabilirea gradului de activitate al bolii n alveolita stabilirea gradului de activitate al bolii n alveolita
fibrozant fibrozant
diagnosticul hemolizei in vivo (anemii hemolitice) sau in diagnosticul hemolizei in vivo (anemii hemolitice) sau in
vitro vitro
diagnosticul diferenial n IMA, Anemia megaloblastic, diagnosticul diferenial n IMA, Anemia megaloblastic,
Anemia hemolitic Anemia hemolitic
monitorizarea terapiei citostatice n diverse tumori monitorizarea terapiei citostatice n diverse tumori
Unele medicamentele pot interfera cu valoarea seric a acestei Unele medicamentele pot interfera cu valoarea seric a acestei
enzime,determinnd false creteri ale enzimei serice: anestezice, enzime,determinnd false creteri ale enzimei serice: anestezice,
aspirin, azitromicin, cefalosporine, heparin, antiinflamatoare aspirin, azitromicin, cefalosporine, heparin, antiinflamatoare
nesteroidiene nesteroidiene

8. MCQ 8. MCQ

LDH 1. LDH este o enzim din clasa: LDH 1. LDH este o enzim din clasa:
A. Hidrolazelor A. Hidrolazelor
B. Oxidoreductazelor B. Oxidoreductazelor
C. Transferazelor C. Transferazelor
D. Mutazelor D. Mutazelor
E. Nici un rspuns correct E. Nici un rspuns correct

LDH 2. LDH este o enzim ce catalizeaz: LDH 2. LDH este o enzim ce catalizeaz:
A. Transformarea etanolaminei n colin A. Transformarea etanolaminei n colin
B. Trecerea piruvatului n cetoglutarat B. Trecerea piruvatului n cetoglutarat
C. Interconversia piruvatului n lactat C. Interconversia piruvatului n lactat
D. Interconversia piruvatului n OAA D. Interconversia piruvatului n OAA
E. Transformarea piruvatului n acetil CoA E. Transformarea piruvatului n acetil CoA

88 88
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

LDH 3. Distribuia n organism a enzimei LDH o reprezint urmtoarele LDH 3. Distribuia n organism a enzimei LDH o reprezint urmtoarele
organe, CU EXCEPIA: organe, CU EXCEPIA:
A. Creier A. Creier
B. Miocard B. Miocard
C. Intestin C. Intestin
D. Muchi scheletic D. Muchi scheletic
E. Ficat E. Ficat

LDH 4. Investigarea enzimei LDH este util n confirmarea diagnosticului LDH 4. Investigarea enzimei LDH este util n confirmarea diagnosticului
de: de:
A. Hepatit A. Hepatit
B. Infarctul pulmonar B. Infarctul pulmonar
C. Pancreatit C. Pancreatit
D. Infarct miocardic D. Infarct miocardic
E. Peritonit E. Peritonit

LDH 5. Valorile de referin ale LDH n ser sunt: LDH 5. Valorile de referin ale LDH n ser sunt:
A. 200-500UI/L A. 200-500UI/L
B. 35- 130 UI/L B. 35- 130 UI/L
C. 125-250 U/L C. 125-250 U/L
D. 80-340 UI/L D. 80-340 UI/L
E. Nici un rspuns corect E. Nici un rspuns corect

LDH 6. Valori crescute ale enzimei LDH pot apare n: LDH 6. Valori crescute ale enzimei LDH pot apare n:
A. Infarct miocardic A. Infarct miocardic
B. Hepatite B. Hepatite
C. Pancreatite C. Pancreatite
D. Ocluzie intestinal D. Ocluzie intestinal
E. Efort muscular prelungit E. Efort muscular prelungit

LDH 7.Una dintre urmtoarele afeciuni este caracterizat de creteri ale LDH 7.Una dintre urmtoarele afeciuni este caracterizat de creteri ale
nivelului LDH: nivelului LDH:
A. Gastrit A. Gastrit
B. Anemia hemolitic B. Anemia hemolitic
C. Hipertiroidie C. Hipertiroidie
D. Diabet D. Diabet
E. Nici un rspuns corect E. Nici un rspuns corect

LDH 8. Analiza LDH este util n : LDH 8. Analiza LDH este util n :
A. Diagnosticul retroactiv al infarctului miocardic A. Diagnosticul retroactiv al infarctului miocardic
89 89
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

B. Diagnosticul precoce al rahitismului B. Diagnosticul precoce al rahitismului


C. Monitorizarea terapiei citostatice n diverse tumori C. Monitorizarea terapiei citostatice n diverse tumori
D. Evaluarea rspunsului la tratament n tetanie D. Evaluarea rspunsului la tratament n tetanie
E. Diagnosticul diferenial al anemiilor E. Diagnosticul diferenial al anemiilor

LDH 9. Fiziologic ntlnim valori crescute ale LDH n: LDH 9. Fiziologic ntlnim valori crescute ale LDH n:
A. Sarcin A. Sarcin
B. Efort musculat prelungit B. Efort musculat prelungit
C. Efort intelectual susinut C. Efort intelectual susinut
D. Menopauz D. Menopauz
E. La sugar n primele luni de via E. La sugar n primele luni de via

LDH 10. Urmtoarele afeciuni pot fi caracterizate de o cretere a LDH-ului LDH 10. Urmtoarele afeciuni pot fi caracterizate de o cretere a LDH-ului
CU EXCEPIA: CU EXCEPIA:
A. Pancreatita A. Pancreatita
B. Infarctul miocardic B. Infarctul miocardic
C. Anemia megaloblastic C. Anemia megaloblastic
D. Hipotiroidism D. Hipotiroidism
E. Nici un rspuns corect E. Nici un rspuns corect

90 90
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

4.6. CREATINKINAZA 4.6. CREATINKINAZA

1. Consideraii generale 1. Consideraii generale


Creatinkinaza (CK) cunoscut i sub numele de Creatinkinaza (CK) cunoscut i sub numele de
creatinfosfokinaza, este o enzim care catalizeaz interconversia creatinfosfokinaza, este o enzim care catalizeaz interconversia
creatinei n creatin fosfat (compus macroergic, adevarat rezerv creatinei n creatin fosfat (compus macroergic, adevarat rezerv
energetic a muchiului), printr-o reacie reversibil, cu consum energetic a muchiului), printr-o reacie reversibil, cu consum
(i respectiv descompunere) de ATP. (i respectiv descompunere) de ATP.
Creatinkinaza se gsete n concentraii crescute n miocard i Creatinkinaza se gsete n concentraii crescute n miocard i
muchii scheletici i, n concentraii mult mai mici, la nivelul muchii scheletici i, n concentraii mult mai mici, la nivelul
creierului; la nivel muscular aceasta catalizeaz reacia creierului; la nivel muscular aceasta catalizeaz reacia
reversibil de sintez i utilizare a creatinfosfatului. reversibil de sintez i utilizare a creatinfosfatului.
Creatinkinaza are o structur dimeric, cu lanuri de aminoacizi Creatinkinaza are o structur dimeric, cu lanuri de aminoacizi
de tip M (muscle) i B (brain), prin a cror combinare se de tip M (muscle) i B (brain), prin a cror combinare se
formeaza cele trei izoenzime (forme moleculare distincte ale formeaza cele trei izoenzime (forme moleculare distincte ale
aceleiai enzime): aceleiai enzime):
CK-MM (muscular) CK-MM (muscular)
CK-MB (miocardic) CK-MB (miocardic)
CK-BB (cerebral) CK-BB (cerebral)
CK-BB este localizat n creier, plmni, tub digestiv, pancreas, CK-BB este localizat n creier, plmni, tub digestiv, pancreas,
rinichi, uter, prostat (n ser, n mod normal, nu este detectat rinichi, uter, prostat (n ser, n mod normal, nu este detectat
CK-BB); CK-BB);
CK-MM este localizat predominant n musculatura striat i n CK-MM este localizat predominant n musculatura striat i n
miocard i reprezint 95-100% din creatinkinaza seric; are trei miocard i reprezint 95-100% din creatinkinaza seric; are trei
izoforme (CK-MM1, CK-MM2 i CK-MM3). izoforme (CK-MM1, CK-MM2 i CK-MM3).
CK-MB este prezent n miocard, musculatura striat, uter i CK-MB este prezent n miocard, musculatura striat, uter i
prostat; ea are dou izoforme (CK-MB1 i CK-MB2); n ser, prostat; ea are dou izoforme (CK-MB1 i CK-MB2); n ser,
reprezint 0-5% din creatinkinaza total. reprezint 0-5% din creatinkinaza total.
Aproximativ 80% din activitatea creatinkinazei n miocard e Aproximativ 80% din activitatea creatinkinazei n miocard e
reprezentat de izoenzima CK-MM, CK-MB reprezentnd doar reprezentat de izoenzima CK-MM, CK-MB reprezentnd doar
20% (este relativ specific miocardului). Creterea CK la valori 20% (este relativ specific miocardului). Creterea CK la valori
de peste dou ori mai mari peste dublul limitei superioare a de peste dou ori mai mari peste dublul limitei superioare a
normalului i o activitate CK-MB de peste 5% din activitatea normalului i o activitate CK-MB de peste 5% din activitatea
total a CK sunt sugestive pentru infarct miocardic. Mai mult, o total a CK sunt sugestive pentru infarct miocardic. Mai mult, o
cretere succesiv cu 50% a valorilor CK, pe probe de snge cretere succesiv cu 50% a valorilor CK, pe probe de snge
recoltate la interval de 4-12 h, sunt extrem de sugestive pentru recoltate la interval de 4-12 h, sunt extrem de sugestive pentru
confirmarea diagnosticului de IMA (infarct miocardic acut). confirmarea diagnosticului de IMA (infarct miocardic acut).
91 91
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

Evidenierea modificrilor izoenzimei CK-MM este Evidenierea modificrilor izoenzimei CK-MM este
independent de cantitatea de esut lezat, in timp ce activitatea independent de cantitatea de esut lezat, in timp ce activitatea
CK total depinde de dimensiunile zonei de infarct. La indivizii CK total depinde de dimensiunile zonei de infarct. La indivizii
sntoi, nivelul creatinkinazei totale este dat, aproape n sntoi, nivelul creatinkinazei totale este dat, aproape n
totalitate, de izoenzima MM. totalitate, de izoenzima MM.
n cazul lezrii cerebrale, a miocardului sau a muchilor n cazul lezrii cerebrale, a miocardului sau a muchilor
scheletici, CK nregistreaz creteri semnificative n primele 6 scheletici, CK nregistreaz creteri semnificative n primele 6
ore, cu un maxim n 15-20 de ore de la debut, i revenirea la ore, cu un maxim n 15-20 de ore de la debut, i revenirea la
valorile normale n 48-72 de ore. valorile normale n 48-72 de ore.
Raportul izoenzimelor MM-3/MM-1 poate fi sugestiv n cazurile Raportul izoenzimelor MM-3/MM-1 poate fi sugestiv n cazurile
de alterare necrotic a esutului miocardic, nivelul normal al de alterare necrotic a esutului miocardic, nivelul normal al
acestuia oscilnd n jurul valorii de 1,3. n cazul pacienilor cu acestuia oscilnd n jurul valorii de 1,3. n cazul pacienilor cu
IMA, valoarea acestui raport poate crete de cteva ori, uneori la IMA, valoarea acestui raport poate crete de cteva ori, uneori la
valori de peste 14 (MM-1 este continuu eliminat n snge). valori de peste 14 (MM-1 este continuu eliminat n snge).
Mai mult, valoarea raportului dintre cele doua izoforme ale CK Mai mult, valoarea raportului dintre cele doua izoforme ale CK
are valoare semnificativ n aprecierea eficienei terapeutice, un are valoare semnificativ n aprecierea eficienei terapeutice, un
eec al tratamentului fibrinolitic fiind asociat cu maximizarea eec al tratamentului fibrinolitic fiind asociat cu maximizarea
valorilor acestui raport dup 12 ore de la nceperea tratamentului valorilor acestui raport dup 12 ore de la nceperea tratamentului
(n loc de 4 ore, ct dureaz atingerea maximului, n cazul unui (n loc de 4 ore, ct dureaz atingerea maximului, n cazul unui
succes terapeutic). succes terapeutic).
Recomandri pentru determinarea creatinkinazei Recomandri pentru determinarea creatinkinazei
Dozarea CK-MB asociat cu CK total este intens recomandat n Dozarea CK-MB asociat cu CK total este intens recomandat n
cazul pacienilor care acuz durere toracic. Valoarea anormal a CK cazul pacienilor care acuz durere toracic. Valoarea anormal a CK
sugereaz o alterare fie la nivelul muchiului inimii, fie al altor muchi, sugereaz o alterare fie la nivelul muchiului inimii, fie al altor muchi,
nivelul CK-MB putnd orienta asupra diferenierii celor dou surse. nivelul CK-MB putnd orienta asupra diferenierii celor dou surse.
Nivelul seric al izoenzimei CK-MB ofer medicului clinician o Nivelul seric al izoenzimei CK-MB ofer medicului clinician o
dubl imagine, att asupra dimensiunii zonei infarctizate din miocard dubl imagine, att asupra dimensiunii zonei infarctizate din miocard
(ntruct este singura izoenzim care are origine numai la acest nivel), (ntruct este singura izoenzim care are origine numai la acest nivel),
precum i asupra succesului terapeutic, prin urmrirea n dinamic a precum i asupra succesului terapeutic, prin urmrirea n dinamic a
valorilor. valorilor.
Limite i interferene Limite i interferene
Rezultatele fals negative pot fi urmarea unei necoordonri n timp a Rezultatele fals negative pot fi urmarea unei necoordonri n timp a
recoltrilor (de exemplu recoltarea la 72 ore de la producerea IMA), n timp recoltrilor (de exemplu recoltarea la 72 ore de la producerea IMA), n timp
ce nivelul enzimei poate nregistra valori crescute tranzitoriu, n urmatoarele ce nivelul enzimei poate nregistra valori crescute tranzitoriu, n urmatoarele
situaii: efortul fizic susinut, travaliu, injecii intramusculare, rni situaii: efortul fizic susinut, travaliu, injecii intramusculare, rni
grave la nivelul muchilor scheletici, administrarea unor medicamente grave la nivelul muchilor scheletici, administrarea unor medicamente
(amfotericin B, captopril, clorpromazin, clofibrat, clonidin, diclofenac, (amfotericin B, captopril, clorpromazin, clofibrat, clonidin, diclofenac,
digoxin, lovastatin, insulin, propranolol, trimetroprim). digoxin, lovastatin, insulin, propranolol, trimetroprim).

92 92
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

2. Principiul metodei 2. Principiul metodei


Metoda cinetica pentru determinarea CK in prezenta N-acetil-L- Metoda cinetica pentru determinarea CK in prezenta N-acetil-L-
cisteinei (NAC) este recomandat de Federaia Internaional de Chimie cisteinei (NAC) este recomandat de Federaia Internaional de Chimie
Clinic (IFCC) i Societatea German de Chimie Clinic (DGKC). Clinic (IFCC) i Societatea German de Chimie Clinic (DGKC).
CK activat de NAC, catalizeaz transferul gruprii fosfat de la CK activat de NAC, catalizeaz transferul gruprii fosfat de la
creatin fosfat la ADP cu formare de ATP i creatin. ATP-ul particip la creatin fosfat la ADP cu formare de ATP i creatin. ATP-ul particip la
fosforilarea glucozei n prezena HK cu formare de glucoza-6-fosfat (G-6- fosforilarea glucozei n prezena HK cu formare de glucoza-6-fosfat (G-6-
P), care in prezena NADP i G-6-P-DH este oxidat la D-6-fosfogluconat. P), care in prezena NADP i G-6-P-DH este oxidat la D-6-fosfogluconat.
Concomitent are loc reducerea NADP la NADPH. Concomitent are loc reducerea NADP la NADPH.
Rata de formare a NADPH monitorizat la 340 nm este direct proporional Rata de formare a NADPH monitorizat la 340 nm este direct proporional
cu activitatea catalitic a CK. cu activitatea catalitic a CK.
Schema de reacii este redat mai jos: Schema de reacii este redat mai jos:

Creatinosf at ADP
CK
Creatina ATP Creatinosf at ADP
CK
Creatina ATP
ATP D glucoza HK
ADP G 6 P ATP D glucoza HK
ADP G 6 P
6 P DH 6 P DH
G 6 P NADP G 6 PG NADPH H G 6 P NADP G 6 PG NADPH H

3. Reactivi 3. Reactivi
Reactiv 1 (R1): Reactiv 1 (R1):
Tampon imidazol, pH 6,7 100 mmol/L Tampon imidazol, pH 6,7 100 mmol/L
Reactiv 2 (R2): Reactiv 2 (R2):
Creatin fosfat 30 mmol/L Creatin fosfat 30 mmol/L
D-glucoza 20 mmol/L D-glucoza 20 mmol/L
NAC 20 mmol/L NAC 20 mmol/L
Acetat de magneziu 10 mmol/L Acetat de magneziu 10 mmol/L
EDTA 2 mmol/L EDTA 2 mmol/L
ADP 2 mmol/L ADP 2 mmol/L
NADP 2 mmol/L NADP 2 mmol/L
AMP 5 mmol/L AMP 5 mmol/L
Diadenozin pentafosfat 10 mol/L Diadenozin pentafosfat 10 mol/L
G-6-P-DH > 1500 U/L G-6-P-DH > 1500 U/L
HK > 2500 U/L HK > 2500 U/L

4. Mod de lucru 4. Mod de lucru


Proba: Ser nehemolizat/ Plasm. Plasma poate fi colectat pe heparinat de Proba: Ser nehemolizat/ Plasm. Plasma poate fi colectat pe heparinat de
sodiu sau heparinat de litiu. sodiu sau heparinat de litiu.
93 93
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

Temperatura de incubare: 37oC. Temperatura de incubare: 37oC.


Lungimea de und: 340 nm (334nm - 365 nm) Lungimea de und: 340 nm (334nm - 365 nm)
Pregtirea amestecului de lucru: se amestec 4 volume de Reactiv Pregtirea amestecului de lucru: se amestec 4 volume de Reactiv
1 (R1) cu un volum Reactiv 2 (R2) (Ex.: 4 ml R1 + 1 ml R2). Se 1 (R1) cu un volum Reactiv 2 (R2) (Ex.: 4 ml R1 + 1 ml R2). Se
omogenizeaz amestecul prin agitare uoar. omogenizeaz amestecul prin agitare uoar.
Pentru lucru se utilizeaz doua cuvete de 1 cm (eprubete) prob (P) Pentru lucru se utilizeaz doua cuvete de 1 cm (eprubete) prob (P)
i martor (M) n care se pipeteaz: i martor (M) n care se pipeteaz:

Reactiv P (l) M (l) Reactiv P (l) M (l)


Amestec de lucru 1000 1000 Amestec de lucru 1000 1000
Proba 40 - Proba 40 -
Ap distilat (AD) - 40 Ap distilat (AD) - 40

Dupa omogenizarea amestecurilor prin agitare uoar se incubeaz la Dupa omogenizarea amestecurilor prin agitare uoar se incubeaz la
37C timp de 3 min. 37C timp de 3 min.
Dupa incubare se citete absorbana iniial la 340 nm a martorului i Dupa incubare se citete absorbana iniial la 340 nm a martorului i
probei apoi se repet citirea absorbanei la 1, 2, 3 min la aceeai lungime de probei apoi se repet citirea absorbanei la 1, 2, 3 min la aceeai lungime de
und.Se determin valoarea medie a absorbanei per minut A/min, care se und.Se determin valoarea medie a absorbanei per minut A/min, care se
folosete n calcul. folosete n calcul.
Citirea se poate efectua la 340 nm, 334 nm sau 365 nm. Citirea se poate efectua la 340 nm, 334 nm sau 365 nm.
Calcul: Calcul:
Valoarea activitii enzimatice a CK n prob se calculeaz utiliznd Valoarea activitii enzimatice a CK n prob se calculeaz utiliznd
formula: formula:
Activitatea CK U / L A / min xFactor Activitatea CK U / L A / min xFactor
Valoarea factorului F depinde de lungimea de und utilizat. Astfel, pentru: Valoarea factorului F depinde de lungimea de und utilizat. Astfel, pentru:
334 nm 340 nm 365 nm 334 nm 340 nm 365 nm
F 4207 4127 7429 F 4207 4127 7429

5. Valori de referin 5. Valori de referin


Brbai: 30 - 200 U/L Brbai: 30 - 200 U/L
Femei: 26 - 165 U/L Femei: 26 - 165 U/L

6. Variaii patologice 6. Variaii patologice


VALORI CRESCUTE VALORI CRESCUTE
infarct miocardic acut (la 4-6 ore de la debut, datorit eliberrii n infarct miocardic acut (la 4-6 ore de la debut, datorit eliberrii n
cantitate crescut n circulaie a enzimelor din celulele miocardice) cantitate crescut n circulaie a enzimelor din celulele miocardice)

94 94
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

miocardita sever miocardita sever


acidoza diabetic acidoza diabetic
afeciuni autoimune: dermatomiozit, polimiozit afeciuni autoimune: dermatomiozit, polimiozit
boala Addison boala Addison
convulsii convulsii
distrofie muscular Duchenne distrofie muscular Duchenne
dup intervenie chirurgical deschis pe cord i defribilare electric dup intervenie chirurgical deschis pe cord i defribilare electric
hipertermie malign hipertermie malign
post-biopsii musculare, post-injecii intramusculare, hipertermia post-biopsii musculare, post-injecii intramusculare, hipertermia
malign post-operatorie malign post-operatorie
miopatii diverse gen: paralizia paroxistic hipokalemic din miopatii diverse gen: paralizia paroxistic hipokalemic din
disfunciile tiroidiene disfunciile tiroidiene
rabdomioliz n cadrul intoxicaiei cu cocain rabdomioliz n cadrul intoxicaiei cu cocain
traumatisme musculare traumatisme musculare

VALORI SCZUTE VALORI SCZUTE


Valori sczute ale enzimei se asociaz de regul cu reducerea masei Valori sczute ale enzimei se asociaz de regul cu reducerea masei
musculare indus de: musculare indus de:
o metastaze o metastaze
o corticoterapie o corticoterapie
o boala alcoolic a ficatului o boala alcoolic a ficatului
o modificri ale colagenului o modificri ale colagenului
o artrita reumatoid o artrita reumatoid

7. FUNDAMENTE BIOCHIMICE 7. FUNDAMENTE BIOCHIMICE

Creatinkinaza (CK sau CPK) este o enzim care catalizeaz Creatinkinaza (CK sau CPK) este o enzim care catalizeaz
interconversia creatinei n creatin fosfat (compus macroergic interconversia creatinei n creatin fosfat (compus macroergic
format i ulterior descompus n muchi) format i ulterior descompus n muchi)
Principalele localizri intracelulare ale creatinkinazei sunt: Principalele localizri intracelulare ale creatinkinazei sunt:
miocardul, muchii scheletici i creierul (aici ns n miocardul, muchii scheletici i creierul (aici ns n
concentraii net inferioare celor din celelalte dou esuturi) concentraii net inferioare celor din celelalte dou esuturi)
Este o enzim dimer, format din dou lanuri de aminoacizi, de Este o enzim dimer, format din dou lanuri de aminoacizi, de
tip M (muscular) i B (cerebral brain), asociate astfel nct tip M (muscular) i B (cerebral brain), asociate astfel nct
pot forma trei izoenzime: pot forma trei izoenzime:
o CK-MM (muscular) o CK-MM (muscular)
o CK-MB (miocardic) o CK-MB (miocardic)
o CK-BB (cerebral) o CK-BB (cerebral)

95 95
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

Izoenzima CK-MM este responsabil de aproximativ 80% din Izoenzima CK-MM este responsabil de aproximativ 80% din
activitatea creatinkinazei la nivelul miocardului, restul fiind activitatea creatinkinazei la nivelul miocardului, restul fiind
reprezentat de activitatea CK-MB (este relativ specific reprezentat de activitatea CK-MB (este relativ specific
miocardului) miocardului)
n IMA (infarct miocardic acut) se ntlnesc de regul valori n IMA (infarct miocardic acut) se ntlnesc de regul valori
duble sau chiar mai mari ale CK total, dar i valori specific mai duble sau chiar mai mari ale CK total, dar i valori specific mai
mari ale izoenzimei CK-MB. mari ale izoenzimei CK-MB.
n IMA activitatea CK depinde de dimensiunile ariei miocardice n IMA activitatea CK depinde de dimensiunile ariei miocardice
necrozate (zonei de infarct). La indivizii sntoi, nivelul necrozate (zonei de infarct). La indivizii sntoi, nivelul
creatinkinazei totale este dat, aproape n totalitate, de creatinkinazei totale este dat, aproape n totalitate, de
izoenzima CK-MM. izoenzima CK-MM.
Dozarea CK-MB asociat cu CK total este recomandat ndeosebi Dozarea CK-MB asociat cu CK total este recomandat ndeosebi
pacienilor care acuz durere toracic. pacienilor care acuz durere toracic.
Analiza ulterioar a valorilor CK-MB n dinamic poate aduce o Analiza ulterioar a valorilor CK-MB n dinamic poate aduce o
imagine att asupra ntinderii ariei de necroz, cat i asupra imagine att asupra ntinderii ariei de necroz, cat i asupra
eficienei terapiei IMA. eficienei terapiei IMA.

8. MCQ 8. MCQ
CK 1 Creatinkinaza se gsete predominant la nivelul urmtoarelor CK 1 Creatinkinaza se gsete predominant la nivelul urmtoarelor
esuturi: esuturi:
A. Miocard A. Miocard
B. Rinichi B. Rinichi
C. Intestin C. Intestin
D. Ficat D. Ficat
E. Muchi scheletici E. Muchi scheletici

CK 2 Care dintre urmtoarele afirmaii privind activitatea creatinkinazei CK 2 Care dintre urmtoarele afirmaii privind activitatea creatinkinazei
este FALS? este FALS?
A. Dozarea acestei enzime se recomand la pacienii cu dureri A. Dozarea acestei enzime se recomand la pacienii cu dureri
toracice toracice
B. Este o enzim care se gsete n cantiti mari n muchii B. Este o enzim care se gsete n cantiti mari n muchii
scheletici scheletici
C. Este o enzim tetrameric C. Este o enzim tetrameric
D. Este o enzim dimeric, prezentnd lanuri de tip H i M D. Este o enzim dimeric, prezentnd lanuri de tip H i M
E. Catalizeaz reacia de descompunere a creatinei E. Catalizeaz reacia de descompunere a creatinei

CK 3 Dozarea izoenzimei CK-MB este util n: CK 3 Dozarea izoenzimei CK-MB este util n:
A. Monitorizarea pancreatitei acute A. Monitorizarea pancreatitei acute
96 96
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

B. Evaluarea succesului terapeutic la pacienii cu infarct B. Evaluarea succesului terapeutic la pacienii cu infarct
miocardic miocardic
C. Aprecierea extinderii zonei de infarct cerebral C. Aprecierea extinderii zonei de infarct cerebral
D. Diagnosticarea infarctului cerebral D. Diagnosticarea infarctului cerebral
E. Aprecierea ntinderii zonei de infarct miocardic E. Aprecierea ntinderii zonei de infarct miocardic

CK 4 Nivelul seric al creatinkinazei poate crete n urmtoarele CK 4 Nivelul seric al creatinkinazei poate crete n urmtoarele
circumstane: circumstane:
A. Pancreatit A. Pancreatit
B. Distrofie muscular B. Distrofie muscular
C. Convulsii C. Convulsii
D. Colecistit D. Colecistit
E. Injecii intramusculare E. Injecii intramusculare

CK 5 In infarctul miocardic: CK 5 In infarctul miocardic:


A. Crete nivelul total al creatinkinazei A. Crete nivelul total al creatinkinazei
B. Scade nivelul CK-MB B. Scade nivelul CK-MB
C. Intinderea zonei de necroz poate fi apreciat prin dozarea C. Intinderea zonei de necroz poate fi apreciat prin dozarea
CK-MM CK-MM
D. Nivelul seric al creatinkinazei crete in primele patru ore de D. Nivelul seric al creatinkinazei crete in primele patru ore de
la debut la debut
E. Nici un rspuns corect E. Nici un rspuns corect

CK 6 Creatinkinaza, izoenzima cerebral: CK 6 Creatinkinaza, izoenzima cerebral:


A. Nu este de regul detectat n ser A. Nu este de regul detectat n ser
B. Reprezint 80% din activitatea total a creatinkinazei B. Reprezint 80% din activitatea total a creatinkinazei
C. Reprezint 20% din activitatea creatinkinazei totale C. Reprezint 20% din activitatea creatinkinazei totale
D. Este reprezentat de izoenzima CK-MB D. Este reprezentat de izoenzima CK-MB
E. Se gsete predominant la nivelul esutului muscular i E. Se gsete predominant la nivelul esutului muscular i
cerebral cerebral

CK 7 Valorile normale ale creatinkinazei serice: CK 7 Valorile normale ale creatinkinazei serice:
A. Pot fi mai mari la brbai comparativ cuf emei, datorit A. Pot fi mai mari la brbai comparativ cuf emei, datorit
diferenelor n masa muscular diferenelor n masa muscular
B. Sunt cuprinse ntre 30 200 U/l B. Sunt cuprinse ntre 30 200 U/l
C. Pot fi reduse n cursul distruciilor musculare C. Pot fi reduse n cursul distruciilor musculare
D. Pot fi influenate de corticoterapie D. Pot fi influenate de corticoterapie
E. Sunt cuprinse ntre 10 40 UI/l E. Sunt cuprinse ntre 10 40 UI/l

97 97
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI - Enzime plasmatice cu rol in diagnosticul clinic 2010

CK 8 Alterrile cerebrale, miocardice sau ale muchilor scheletici CK 8 Alterrile cerebrale, miocardice sau ale muchilor scheletici
antreneaz: antreneaz:
A. O cretere a nivelului seric al creatinkinazei A. O cretere a nivelului seric al creatinkinazei
B. Modificri semnificative ale nivelului creatinkinazei n B. Modificri semnificative ale nivelului creatinkinazei n
primele ase ore primele ase ore
C. Creteri ale CK cu revenirea la valorile de repaus dup 24 de C. Creteri ale CK cu revenirea la valorile de repaus dup 24 de
ore ore
D. Diminuarea nivelului CK-MM D. Diminuarea nivelului CK-MM
E. Nici un rspuns corect E. Nici un rspuns corect

CK 9 Care dintre urmtoarele enzime poate fi sugestiv n diagnosticarea CK 9 Care dintre urmtoarele enzime poate fi sugestiv n diagnosticarea
unui infarct miocardic? unui infarct miocardic?
A. Fosfataza alcalin A. Fosfataza alcalin
B. Amilaza B. Amilaza
C. AST (TGO) C. AST (TGO)
D. CK D. CK
E. LDH E. LDH

CK 10 Izoenzima CK-MB CK 10 Izoenzima CK-MB


A. Este una dintre cele dou izoenzime ale creatinkinazei A. Este una dintre cele dou izoenzime ale creatinkinazei
B. Se dozeaz alturi de LDH n suspiciunea de infarct B. Se dozeaz alturi de LDH n suspiciunea de infarct
miocardic miocardic
C. Inregistreaz valori sczute n distrofiile musculare C. Inregistreaz valori sczute n distrofiile musculare
D. Poate diferenia ntre alterrile muchilor scheletici i ale D. Poate diferenia ntre alterrile muchilor scheletici i ale
miocardului miocardului
E. Prin dozare n dinamic este util n aprecierea extinderii E. Prin dozare n dinamic este util n aprecierea extinderii
zonei miocardice necrozate zonei miocardice necrozate

98 98
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010

CAPITOLUL 5 CAPITOLUL 5

EXPLORAREA METABOLISMULUI GLUCIDIC EXPLORAREA METABOLISMULUI GLUCIDIC

5.1. DOZAREA GLICEMIEI 5.1. DOZAREA GLICEMIEI

1. Consideraii generale 1. Consideraii generale


Glicemia reprezint cantitatea de glucoz din snge. Glicemia reprezint cantitatea de glucoz din snge.
Exist numeroase substane care intr n categoria zaharurilor: Exist numeroase substane care intr n categoria zaharurilor:
fructoza, lactoza, galactoza, zaharoza, dar glucoza constituie cea fructoza, lactoza, galactoza, zaharoza, dar glucoza constituie cea
mai importanta sursa de energie pentru organismul uman. mai importanta sursa de energie pentru organismul uman.
Glucoza provine din diet (zahr i produse zaharoase, miere, Glucoza provine din diet (zahr i produse zaharoase, miere,
cartofi, fin, cerealele), dar poate fi sintetizat i la nivelul cartofi, fin, cerealele), dar poate fi sintetizat i la nivelul
esuturilor, din orice tip de constituent (inclusiv grsimi i esuturilor, din orice tip de constituent (inclusiv grsimi i
proteine, prin procesul de gluconeogeneza). proteine, prin procesul de gluconeogeneza).
Glucoza rezultat n urma procesului de digestie a alimentelor Glucoza rezultat n urma procesului de digestie a alimentelor
(proces strict coordonat de enzimele digestive) i ulterior de (proces strict coordonat de enzimele digestive) i ulterior de
absorbie n intestin, este transportat prin torentul circulator, absorbie n intestin, este transportat prin torentul circulator,
ctre celulele care o consum. ctre celulele care o consum.
Pentru a ptrunde din snge la nivel celular, glucoza trebuie s Pentru a ptrunde din snge la nivel celular, glucoza trebuie s
strbat membrana celular, proces mediat de insulin, hormon strbat membrana celular, proces mediat de insulin, hormon
secretat la nivel pancreatic. Glucoza care nu se folosete imediat secretat la nivel pancreatic. Glucoza care nu se folosete imediat
de ctre organism este stocat n ficat, i muchi sub forma de de ctre organism este stocat n ficat, i muchi sub forma de
glicogen (polizaharid). n momentul n care organismul are glicogen (polizaharid). n momentul n care organismul are
nevoie de glucoz pentru producerea de energie, glicogenul este nevoie de glucoz pentru producerea de energie, glicogenul este
eliberat de ctre esuturi i transformat n glucoz, echilibrnd n eliberat de ctre esuturi i transformat n glucoz, echilibrnd n
acest fel nivelul glicemiei. acest fel nivelul glicemiei.
Nivelul glicemiei este variabil, n funcie de diet, activitate Nivelul glicemiei este variabil, n funcie de diet, activitate
fizic, prezena unor afeciuni, medicamente, stres i chiar de fizic, prezena unor afeciuni, medicamente, stres i chiar de
momentul din zi la care se msoar. momentul din zi la care se msoar.

99 99
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010

Variaiile ample ale glicemiei pot conduce la grave tulburri, iar Variaiile ample ale glicemiei pot conduce la grave tulburri, iar
glicoreglarea care n mod normal are susinere att hormonal glicoreglarea care n mod normal are susinere att hormonal
ct i fizico-chimic, nu mai are eficien. ct i fizico-chimic, nu mai are eficien.
REGLAREA HORMONAL a glicemiei este mediat REGLAREA HORMONAL a glicemiei este mediat
preponderent de dou grupe de hormoni: hipoglicemiani i preponderent de dou grupe de hormoni: hipoglicemiani i
hiperglicemiani. Insulina este factorul hipoglicemiant, iar hiperglicemiani. Insulina este factorul hipoglicemiant, iar
ceilali hormoni acioneaz prin hiperglicemie (glucagonul, ceilali hormoni acioneaz prin hiperglicemie (glucagonul,
hormonul somatotrop hipofizar, ACTH-ul, hormonii hormonul somatotrop hipofizar, ACTH-ul, hormonii
glucocorticoizi i catecolaminele - adrenalina i noradrenalina). glucocorticoizi i catecolaminele - adrenalina i noradrenalina).
Insulina, hormon polipeptidic care circul n snge fixat de Insulina, hormon polipeptidic care circul n snge fixat de
unele globuline, poate fi inactivat la nivelul ficatului. Aciunea unele globuline, poate fi inactivat la nivelul ficatului. Aciunea
sa hipoglicemiant se realizeaz pe mai multe planuri: sa hipoglicemiant se realizeaz pe mai multe planuri:
accelerarea i transportul glucozei prin membranele celulare, accelerarea i transportul glucozei prin membranele celulare,
stimularea glicogenogenezei hepatice i musculare, stimularea glicogenogenezei hepatice i musculare,
inhibarea gluconeogenezei. Insulina acioneaz i prin inhibarea gluconeogenezei. Insulina acioneaz i prin
favorizarea conversiei proteinelor ctre forma de depozit a favorizarea conversiei proteinelor ctre forma de depozit a
excesului de zahr - glicogenul, favorizarea neolipogenezei excesului de zahr - glicogenul, favorizarea neolipogenezei
din glucide sub form de grsimi de depozit, avnd i o din glucide sub form de grsimi de depozit, avnd i o
aciune antagonist fa de hormonul contrainsular al hipofizei. aciune antagonist fa de hormonul contrainsular al hipofizei.
Aprecierea nivelului gucozei n snge i a metabolismului Aprecierea nivelului gucozei n snge i a metabolismului
acesteia poate fi realizat prin multiple teste: acesteia poate fi realizat prin multiple teste:
o Glicemia determinata jeun (pe nemncate) o Glicemia determinata jeun (pe nemncate)
o Testul de toleran la glucoza administrat oral o Testul de toleran la glucoza administrat oral
o Glicemia spontan o Glicemia spontan
o Glicemia capilar o Glicemia capilar
Modaliti de apreciere a glicemiei Modaliti de apreciere a glicemiei
Glicemia jeun se refer la determinarea cantitii Glicemia jeun se refer la determinarea cantitii
glucozei din plasm dup un repaos alimentar de cel glucozei din plasm dup un repaos alimentar de cel
puin 8 ore, i se analizeaz pe probele recoltate prin puin 8 ore, i se analizeaz pe probele recoltate prin
puncie venoas - prin metode enzimatice puncie venoas - prin metode enzimatice
Glicemia capilar - msoar valoarea glucozei la nivel Glicemia capilar - msoar valoarea glucozei la nivel
capilar, prin neparea pulpei degetului, i msurarea cu capilar, prin neparea pulpei degetului, i msurarea cu
ajutorul unui aparat numit glucometru (e recomandat la ajutorul unui aparat numit glucometru (e recomandat la
pacienii diabetici n scopul monitorizrii valorilor pacienii diabetici n scopul monitorizrii valorilor
glicemiei). glicemiei).
Testul de tolerana la glucoz administrat oral/TTGO Testul de tolerana la glucoz administrat oral/TTGO
este un test de provocare ce msoar capacitatea este un test de provocare ce msoar capacitatea
organismului de a reaciona la o cantitate standard de organismului de a reaciona la o cantitate standard de
glucoz; acest test evalueaz nivelul glicemiei dup un glucoz; acest test evalueaz nivelul glicemiei dup un
100 100
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010

post alimentar de minim 8 ore, nainte i la 2 ore de la post alimentar de minim 8 ore, nainte i la 2 ore de la
administrarea unei soluii de 75 de grame de glucoz. administrarea unei soluii de 75 de grame de glucoz.
Este mai sensibil i puin mai specific decat glicemia Este mai sensibil i puin mai specific decat glicemia
jeun n diagnosticarea diabetului zaharat, ns este mai jeun n diagnosticarea diabetului zaharat, ns este mai
dificil de realizat, fiind folosit uzual n determinarea dificil de realizat, fiind folosit uzual n determinarea
diabetului gestaional (de sarcin) i toleranei alterate diabetului gestaional (de sarcin) i toleranei alterate
la glucoz sau prediabet. la glucoz sau prediabet.

2. Principiul determinrii - metoda cu glucozoxidaz 2. Principiul determinrii - metoda cu glucozoxidaz


Glucozoxidaza (catalizeaz oxidarea glucozei) Glucozoxidaza (catalizeaz oxidarea glucozei)

Glucoz + O2 + H2O<-- glucozoxidaza-->Acid gluconic + H2O2 Glucoz + O2 + H2O<-- glucozoxidaza-->Acid gluconic + H2O2

Peroxidul de hidrogen format reacioneaz cu 4- amino-antipirina i fenolul, Peroxidul de hidrogen format reacioneaz cu 4- amino-antipirina i fenolul,
n prezena peroxidazei i formeaz chinonimina. Intensitatea culorii n prezena peroxidazei i formeaz chinonimina. Intensitatea culorii
produsului rezultat este proporional cu concentraia de glucoz din proba produsului rezultat este proporional cu concentraia de glucoz din proba
de analizat. de analizat.
2H2O2 + fenol + 4-amino-antipirina <--peroxidaza--> chinonimina +4H2O 2H2O2 + fenol + 4-amino-antipirina <--peroxidaza--> chinonimina +4H2O

3. Reactivi 3. Reactivi
Reactiv 1 (tampon-fenol) Reactiv 1 (tampon-fenol)
Tampon fosfat pH = 7,4100 mmol/l Tampon fosfat pH = 7,4100 mmol/l
Fenol ..24 mmol/l Fenol ..24 mmol/l
Reactiv 2 (amestec enzime) Reactiv 2 (amestec enzime)
Glucoz-oxidaza..12.000 U/l Glucoz-oxidaza..12.000 U/l
Peroxidaza .700 U/l Peroxidaza .700 U/l
4-amino-antipirina.0,4 mmol/l 4-amino-antipirina.0,4 mmol/l
Reactiv 3 (standard glucoz)100mg% Reactiv 3 (standard glucoz)100mg%

4. Mod de lucru 4. Mod de lucru

Proba: Ser nehemolizat / Plasm (fr hemoliz): Proba: Ser nehemolizat / Plasm (fr hemoliz):
Se pregtete reactivul enzimatic de lucru amestecul de reactivi prin Se pregtete reactivul enzimatic de lucru amestecul de reactivi prin
dizolvarea reactivului 2 n reactivul 1. dizolvarea reactivului 2 n reactivul 1.
Se folosesc trei eprubete prob, standard (etalon) i martor (blank) P, S, Se folosesc trei eprubete prob, standard (etalon) i martor (blank) P, S,
M: M:

101 101
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010

PROBA STANDARD MARTOR PROBA STANDARD MARTOR


Reactiv enzimatic de 1000 l 1000 l 1000 l Reactiv enzimatic de 1000 l 1000 l 1000 l
lucru lucru
Proba 10 l - - Proba 10 l - -
Standard - 10 l - Standard - 10 l -

se agit eprubetele se agit eprubetele


se incubeaz 15min la 37o C se incubeaz 15min la 37o C
se citesc absorbanele probei (Ap) i standardului (As) fa de martor se citesc absorbanele probei (Ap) i standardului (As) fa de martor
la 500 nm (492-550 nm), n cuva de 1cm. la 500 nm (492-550 nm), n cuva de 1cm.
Calcul: Calcul:
Glicemie (mg%) = (Ap/As) x 100 (sau) Glicemie (mg%) = (Ap/As) x 100 (sau)
Glicemie (mmol/l = (Ap/As) x 5,5 Glicemie (mmol/l = (Ap/As) x 5,5

5. Valori de referin 5. Valori de referin


65 - 110 mg/dl 65 - 110 mg/dl
Glicemia se poate exprima n mg/dl sau n mmol/l. Unitatea de masur n Glicemia se poate exprima n mg/dl sau n mmol/l. Unitatea de masur n
Sistemul Internaional este milimol/litru (mmol/l), ns mai des folosit este Sistemul Internaional este milimol/litru (mmol/l), ns mai des folosit este
exprimarea n miligram/decilitru (mg/dl). Conversia mg/dl la mmol/l se face exprimarea n miligram/decilitru (mg/dl). Conversia mg/dl la mmol/l se face
prin mprirea la 18. prin mprirea la 18.

6. Variaii fiziologice i patologice ale glicemiei 6. Variaii fiziologice i patologice ale glicemiei
Variaii fiziologice Variaii fiziologice
o Postprandrial o Postprandrial
o In timpul sarcinii (glicemia scade datorit necesitilor o In timpul sarcinii (glicemia scade datorit necesitilor
energetice ale ftului) energetice ale ftului)
o Excesul ponderal este unul dintre factorii care altereaz testul o Excesul ponderal este unul dintre factorii care altereaz testul
de toleran la glucoz de toleran la glucoz
o Repausul alimentar (voluntar sau involuntar) influeneaz o Repausul alimentar (voluntar sau involuntar) influeneaz
nivelul glicemiei, n special la obezi i la femeile gravide nivelul glicemiei, n special la obezi i la femeile gravide
o Stresul psihic face s creasc nivelul glicemiei, datorit o Stresul psihic face s creasc nivelul glicemiei, datorit
descrcrii de adrenalin descrcrii de adrenalin

102 102
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010

o Efortul fizic susinut (poate scade glicemia prin consum o Efortul fizic susinut (poate scade glicemia prin consum
exagerat al rezervelor glucidice n scopul obinerii energiei exagerat al rezervelor glucidice n scopul obinerii energiei
necesare efortului fizic) necesare efortului fizic)
Variaii patologice Variaii patologice
VALORI CRESCUTE VALORI CRESCUTE
Hiperglicemia definete prezena glucozei n snge la nivele mai mari Hiperglicemia definete prezena glucozei n snge la nivele mai mari
dect limita ei normal superioar (110 mg%), i este nregistrat de regul dect limita ei normal superioar (110 mg%), i este nregistrat de regul
n: n:
1. Boli ale glandelor endocrine cu rol n reglarea nivelului sanguin 1. Boli ale glandelor endocrine cu rol n reglarea nivelului sanguin
al glucozei pancreas, hipofiz, tiroid, suprarenalele. Se pot al glucozei pancreas, hipofiz, tiroid, suprarenalele. Se pot
distinge aadar origini diferite ale afectrii metabolismului distinge aadar origini diferite ale afectrii metabolismului
glucidic, iar instalarea diabetului zaharat poate fi determinat de glucidic, iar instalarea diabetului zaharat poate fi determinat de
modificri, cel mai frecvent ale activitii anormale insulare a modificri, cel mai frecvent ale activitii anormale insulare a
pancreasului, dar uneori prin dereglri la nivelul hipofizei, pancreasului, dar uneori prin dereglri la nivelul hipofizei,
suprarenalelor sau a tiroidei. suprarenalelor sau a tiroidei.
2. Infecii 2. Infecii
3. Intoxicaii cu CO, organofosforice 3. Intoxicaii cu CO, organofosforice
4. Accidente cerebro-vasculare. 4. Accidente cerebro-vasculare.
Un parametru sugestiv pentru diagnosticul unei alterri a Un parametru sugestiv pentru diagnosticul unei alterri a
metabolismului glucozei, n context diabetic, l reprezint hemoglobina metabolismului glucozei, n context diabetic, l reprezint hemoglobina
glicozilata - HbA1c. Aceast protein reprezint rezultatul procesului de glicozilata - HbA1c. Aceast protein reprezint rezultatul procesului de
glicozilare al hemoglobinei, proces ce se desfoar la nivelul sngelui, glicozilare al hemoglobinei, proces ce se desfoar la nivelul sngelui,
proporional cu valoarea glicemiei. n mod normal 5% din hemoglobina este proporional cu valoarea glicemiei. n mod normal 5% din hemoglobina este
glicozilat, HbA1c fiind un parametru foarte util datorit timpului de glicozilat, HbA1c fiind un parametru foarte util datorit timpului de
njumtire lung al hemoglobinei (90-100 zile), astfel nct poate da njumtire lung al hemoglobinei (90-100 zile), astfel nct poate da
informaii asupra controlului glicemiei pentru o perioad anterioar mai informaii asupra controlului glicemiei pentru o perioad anterioar mai
lung de timp (spre deosebire de valoarea glicemiei, care reflect doar lung de timp (spre deosebire de valoarea glicemiei, care reflect doar
situaia din momentul recoltrii). Testul Hb A1c ofer o estimare a situaia din momentul recoltrii). Testul Hb A1c ofer o estimare a
nivelului mediu de glucoz din snge pe o perioad de 30- 90 de zile. nivelului mediu de glucoz din snge pe o perioad de 30- 90 de zile.
Determinarea Hb A1c constituie un test de evaluare i Determinarea Hb A1c constituie un test de evaluare i
monitorizare pe termen lung al controlului glicemic la pacienii cu monitorizare pe termen lung al controlului glicemic la pacienii cu
diabet zaharat, si are rol predictiv n ceea ce privete riscul complicaiilor diabet zaharat, si are rol predictiv n ceea ce privete riscul complicaiilor
diabetului: cetoacidoza, nefropatia, retinopatia. diabetului: cetoacidoza, nefropatia, retinopatia.
VALORI SCZUTE VALORI SCZUTE
Hipoglicemia, adic o cantitate mai sczut dect valoarea limit Hipoglicemia, adic o cantitate mai sczut dect valoarea limit
inferioar a glucozei n snge, poate fi cauzat de diferite boli metabolice, inferioar a glucozei n snge, poate fi cauzat de diferite boli metabolice,
endocrinopatii (boli ale glandelor endocrine, care secret hormoni) sau boli endocrinopatii (boli ale glandelor endocrine, care secret hormoni) sau boli

103 103
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010

hepatice. Valori reduse sub limita inferioar normal a glicemiei se pot hepatice. Valori reduse sub limita inferioar normal a glicemiei se pot
decela i la bolnavii diabetici, n lipsa unui tratament individualizat decela i la bolnavii diabetici, n lipsa unui tratament individualizat
corespunztor (administrare de doze necorespunzatoare de insulin, care n corespunztor (administrare de doze necorespunzatoare de insulin, care n
loc s echilibreze nivelul glicemiei, determin conversia ntre valorile loc s echilibreze nivelul glicemiei, determin conversia ntre valorile
extreme, de la hiperglicemie la hipoglicemie). extreme, de la hiperglicemie la hipoglicemie).
Hipoglicemia (tradus clinic prin slabiciune, tremurturi, transpiraii si chiar Hipoglicemia (tradus clinic prin slabiciune, tremurturi, transpiraii si chiar
pierderea contienei), se nregistreaz n anumite situaii patologice: pierderea contienei), se nregistreaz n anumite situaii patologice:
1. Inaniie, malabsorbie 1. Inaniie, malabsorbie
2. Insulinom (adenom langerhansian - tumor a insulelor langerhans 2. Insulinom (adenom langerhansian - tumor a insulelor langerhans
ale pancreasului) ale pancreasului)
3. Defect de gluconeogenez sau de mobilizare a glicogenului din 3. Defect de gluconeogenez sau de mobilizare a glicogenului din
rezerve rezerve
4. Insuficiena cortico-suprarenal (boala Addison) 4. Insuficiena cortico-suprarenal (boala Addison)
5. Insuficiena tiroidian 5. Insuficiena tiroidian
6. Insuficiena hepatic grav 6. Insuficiena hepatic grav
7. Insuficiea hipofizei anterioare 7. Insuficiea hipofizei anterioare
8. Intolerana ereditar la fructoz (prin defect de fructokinaz) 8. Intolerana ereditar la fructoz (prin defect de fructokinaz)

7. FUNDAMENTE BIOCHIMICE 7. FUNDAMENTE BIOCHIMICE


Dozarea glicemiei este un test care se efectueaz de rutin n Dozarea glicemiei este un test care se efectueaz de rutin n
laboratoarele de analize medicale, dereglarea acestui parametru laboratoarele de analize medicale, dereglarea acestui parametru
fiind o expresie a posibilei alterri a mai multor metabolisme, nu fiind o expresie a posibilei alterri a mai multor metabolisme, nu
numai a celui glucidic. numai a celui glucidic.
Valoarea modificat a glicemiei exprim de regul alterri n funcia Valoarea modificat a glicemiei exprim de regul alterri n funcia
unor glande endocrine care intervin n reglarea metabolismului unor glande endocrine care intervin n reglarea metabolismului
glucidic (pancreas, hipofiz, suprarenale). glucidic (pancreas, hipofiz, suprarenale).
Principala condiie pentru ca glucoza s se metabolizeze, este ca Principala condiie pentru ca glucoza s se metabolizeze, este ca
aceasta s patrund n celul, proces mediat de insulin, hormon aceasta s patrund n celul, proces mediat de insulin, hormon
secretat la nivel pancreatic. Defectul de insulin va antrena secretat la nivel pancreatic. Defectul de insulin va antrena
creterea nivelului plasmatic al glucozei hiperglicemie prin creterea nivelului plasmatic al glucozei hiperglicemie prin
defectul acesteia de a se angaja n interiorul celulelor (i deci defectul acesteia de a se angaja n interiorul celulelor (i deci
imposibilitatea metabolizrii normale a glucozei). imposibilitatea metabolizrii normale a glucozei).
Prinipalii parametri biochimici la bolnavii cu diabet sunt: Prinipalii parametri biochimici la bolnavii cu diabet sunt:
o Hiperglicemie o Hiperglicemie
o Glucozurie (dac nivelul glicemiei depete pragul renal) o Glucozurie (dac nivelul glicemiei depete pragul renal)
o Cetonurie (eliminare de corpi cetonici n urin, compui o Cetonurie (eliminare de corpi cetonici n urin, compui
sintetizai datorit degradrii n exces a lipidelor din cauza sintetizai datorit degradrii n exces a lipidelor din cauza

104 104
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010

defectului de utilizare celular a glucidelor); aceasta defectului de utilizare celular a glucidelor); aceasta
confer un miros specific urinii (mere verzi); corpii confer un miros specific urinii (mere verzi); corpii
cetonici au o structur carbonilic i odat cu eliminarea cetonici au o structur carbonilic i odat cu eliminarea
prin urin, atrag i substane alcaline, spoliind organismul prin urin, atrag i substane alcaline, spoliind organismul
de compui bazici, ceea ce poate antrena, n unele de compui bazici, ceea ce poate antrena, n unele
circumstane instalarea unui pH acid (coma acidotic) circumstane instalarea unui pH acid (coma acidotic)
o Hiperamonemie (prin degradarea excesiv i a o Hiperamonemie (prin degradarea excesiv i a
proteinelor nu numai a lipidelor - n ncercarea proteinelor nu numai a lipidelor - n ncercarea
organismului de a compensa lipsa energiei care n mod organismului de a compensa lipsa energiei care n mod
normal se elibereaz din metabolizarea glucozei) normal se elibereaz din metabolizarea glucozei)
esuturile cu rol semnificativ n meninerea homeostaziei glucidice esuturile cu rol semnificativ n meninerea homeostaziei glucidice
sunt n mod special ficatul i rinichiul. sunt n mod special ficatul i rinichiul.
Ficatul contribuie la meninerea normal a glicemiei prin medierea Ficatul contribuie la meninerea normal a glicemiei prin medierea
aciunilor sale n cadrul metabolismului glucidic prin dou enzime aciunilor sale n cadrul metabolismului glucidic prin dou enzime
principale: GK i G-6-P-aza, care asigur consumul i respectiv principale: GK i G-6-P-aza, care asigur consumul i respectiv
formarea glucozei n organism, astfel nct, acest organ poate formarea glucozei n organism, astfel nct, acest organ poate
funciona, n funcie de necesitile organismului, ca i consumator, funciona, n funcie de necesitile organismului, ca i consumator,
respectiv donator de glucoz. respectiv donator de glucoz.
Rinichiul intervine n reglarea homeostaziei glicemice prin Rinichiul intervine n reglarea homeostaziei glicemice prin
reabsorbia total, prin tubii renali, a glucozei filtrate la acest nivel, reabsorbia total, prin tubii renali, a glucozei filtrate la acest nivel,
astfel nct, doar excepional, cnd pragul renal de eliminare a astfel nct, doar excepional, cnd pragul renal de eliminare a
glucozei n urin (170 mg%) este depit, o parte din glucoz se glucozei n urin (170 mg%) este depit, o parte din glucoz se
elimin prin urin, aprnd astfel glucozuria. elimin prin urin, aprnd astfel glucozuria.

8. MCQ 8. MCQ

1. Hormonul insulin: 1. Hormonul insulin:


A. are o aciune hiperglicemiant A. are o aciune hiperglicemiant
B. contribuie la metabolizarea glucozei B. contribuie la metabolizarea glucozei
C. inhib conumul glucozei odat cu angajarea intracelular a C. inhib conumul glucozei odat cu angajarea intracelular a
acesteia acesteia
D. favorizeaz procesul de gluconeogenez D. favorizeaz procesul de gluconeogenez
E. are o aciune inhibitoare asupra procesului de degradare de E. are o aciune inhibitoare asupra procesului de degradare de
glicogen glicogen

2. In care dintre urmtoarele situaii se poate instala hiperglicemia? 2. In care dintre urmtoarele situaii se poate instala hiperglicemia?
A. infecii severe A. infecii severe
B. diabet zaharat B. diabet zaharat
105 105
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010

C. adenom hipofizar C. adenom hipofizar


D. accident vascular cerebral D. accident vascular cerebral
E. hepatit E. hepatit

3. Care din urmtorii parametri biochimici, sunt utili n diagnosticul i 3. Care din urmtorii parametri biochimici, sunt utili n diagnosticul i
monitorizarea diabeticului? monitorizarea diabeticului?
A. glicemia A. glicemia
B. analiza de urin B. analiza de urin
C. LDH C. LDH
D. TGO D. TGO
E. HbA1c E. HbA1c

4. Corpii cetonici: 4. Corpii cetonici:


A. pot apare n urin la pacienii cu diabet A. pot apare n urin la pacienii cu diabet
B. prezena lor n urina bolnavilor diabetici sugereaz alterarea B. prezena lor n urina bolnavilor diabetici sugereaz alterarea
metabolismului proteic metabolismului proteic
C. nu se elimin n urin la pacienii cu glucozurie C. nu se elimin n urin la pacienii cu glucozurie
D. prezeni n urina pacienilor imprim acesteia un miros specific D. prezeni n urina pacienilor imprim acesteia un miros specific
E. formai n exces pot determina instalarea comei acidotice E. formai n exces pot determina instalarea comei acidotice

5. Glicemia: 5. Glicemia:
A. reprezint prezena glucozei n snge A. reprezint prezena glucozei n snge
B. poate fi sczut la bolnavii diabetici incorect tratai B. poate fi sczut la bolnavii diabetici incorect tratai
C. este crescut la pacienii diabetici C. este crescut la pacienii diabetici
D. se poate modifica tranzitoriu n cursul sarcinii D. se poate modifica tranzitoriu n cursul sarcinii
E. poate varia fiziologic la sportivii de performan E. poate varia fiziologic la sportivii de performan

6. Hiperglicemia: 6. Hiperglicemia:
A. reprezint valori ale glicemiei peste 180 mg/dl A. reprezint valori ale glicemiei peste 180 mg/dl
B. se poate ntlni la pacienii cu insulinom B. se poate ntlni la pacienii cu insulinom
C. este caracteristic la indivizii cu intoleran ereditar la C. este caracteristic la indivizii cu intoleran ereditar la
fructoz fructoz
D. este prezent ntotdeauna la pacienii cu diabet renal D. este prezent ntotdeauna la pacienii cu diabet renal
E. nici un rspuns corect E. nici un rspuns corect

7. Precizai care dintre urmtoarele afirmaii referitoare la glicemie sunt 7. Precizai care dintre urmtoarele afirmaii referitoare la glicemie sunt
adevrate: adevrate:
A. crete la pacienii cu defect de mobilizare a glucozei din A. crete la pacienii cu defect de mobilizare a glucozei din
depozite depozite
B. se modific ntotdeauna la pacienii cu glucozurie B. se modific ntotdeauna la pacienii cu glucozurie
106 106
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010

C. este crescut atunci cnd nivelul glucozei n urin depete C. este crescut atunci cnd nivelul glucozei n urin depete
180 mg/dl 180 mg/dl
D. este sczut atunci cnd valorile sunt mai mici de 65 mg/dl D. este sczut atunci cnd valorile sunt mai mici de 65 mg/dl
E. creterea glicemiei se asociaz ntotdeauna cu glucozurie E. creterea glicemiei se asociaz ntotdeauna cu glucozurie

8. Alturi de rinichi, ficatul este unul din organele cu aciune major n 8. Alturi de rinichi, ficatul este unul din organele cu aciune major n
reglarea glicemiei prin: reglarea glicemiei prin:
A. aciunea GK (glucokinazei) atunci cnd n organism exist un A. aciunea GK (glucokinazei) atunci cnd n organism exist un
deficit de glucoz deficit de glucoz
B. reabsorbia total a glucozei din sange B. reabsorbia total a glucozei din sange
C. eliberarea de glucoz din esterii acesteia sub aciunea G-6- C. eliberarea de glucoz din esterii acesteia sub aciunea G-6-
Fosfatazei Fosfatazei
D. consumul cantitilor excesive de zahr D. consumul cantitilor excesive de zahr
E. nici un raspuns corect E. nici un raspuns corect

9. Boala diabetic nu este exclusiv o dereglare a metabolismului glucidic, 9. Boala diabetic nu este exclusiv o dereglare a metabolismului glucidic,
ci i a celui lipidic. Acest lucru, la pacienii diabetici se traduce prin: ci i a celui lipidic. Acest lucru, la pacienii diabetici se traduce prin:
A. posibilitatea instalrii alcalozei metabolice A. posibilitatea instalrii alcalozei metabolice
B. eliminarea acizilor biliari n urin B. eliminarea acizilor biliari n urin
C. apariia hipoamoniemiei C. apariia hipoamoniemiei
D. formarea i eliberarea de corpi cetonici prin urin D. formarea i eliberarea de corpi cetonici prin urin
E. glucozurie E. glucozurie

10. Care dintre parametrii biochimici urmatori NU este caracteristic 10. Care dintre parametrii biochimici urmatori NU este caracteristic
bolnavilor diabetici ? bolnavilor diabetici ?
A. Hiperglicemie A. Hiperglicemie
B. Fenilcetonurie B. Fenilcetonurie
C. Eliminare de corpi cetonici n urin C. Eliminare de corpi cetonici n urin
D. Cantitate mare de amoniac n sange D. Cantitate mare de amoniac n sange
E. Glucozurie E. Glucozurie

107 107
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010

5.2. DETERMINARI CALITATIVE I CANTITATIVE 5.2. DETERMINARI CALITATIVE I CANTITATIVE


ALE GLUCIDELOR IN URINA ALE GLUCIDELOR IN URINA

1. Consideraii generale 1. Consideraii generale


n condiii normale, aproape toat glucoza filtrat este n condiii normale, aproape toat glucoza filtrat este
reabsorbit prin tubii renali, fiind absent n urin. n condiii reabsorbit prin tubii renali, fiind absent n urin. n condiii
de hiperglicemie, cnd este depit valoarea prag de eliminare de hiperglicemie, cnd este depit valoarea prag de eliminare
a glucozei n urin, tubii renali nu pot reabsorbi ntreaga a glucozei n urin, tubii renali nu pot reabsorbi ntreaga
cantitate de glucoz, aceasta fiind astfel eliminat n urin. cantitate de glucoz, aceasta fiind astfel eliminat n urin.
Pragul renal de eliminare a glucozei n urin este de 180 Pragul renal de eliminare a glucozei n urin este de 180
mg/dL. mg/dL.
Glicozuria apare n mod specific asociat cu hiperglicemie, n Glicozuria apare n mod specific asociat cu hiperglicemie, n
diabet zaharat, acromegalie, hipertiroidism, boli hepatice i diabet zaharat, acromegalie, hipertiroidism, boli hepatice i
pancreatice, boli SNC. pancreatice, boli SNC.
Prezena glucozei n urin cnd concentraia glucozei sangvine Prezena glucozei n urin cnd concentraia glucozei sangvine
este n limite normale indic un defect tubular n reabsorbia este n limite normale indic un defect tubular n reabsorbia
glucozei, care se exprim prin scderea pragului renal de glucozei, care se exprim prin scderea pragului renal de
eliminare a glucozei i este caracteristic diabetului renal eliminare a glucozei i este caracteristic diabetului renal
(glicozurie renal). (glicozurie renal).

2. Principiul determinrii i modul de lucru 2. Principiul determinrii i modul de lucru

Determinarea calitativ Determinarea calitativ


Testul se bazeaz pe formarea unui compus colorat care determin o Testul se bazeaz pe formarea unui compus colorat care determin o
schimbare de culoare a zonei de pe strip, de la galben la verde. schimbare de culoare a zonei de pe strip, de la galben la verde.
Determinarea cantitativ Determinarea cantitativ
Proba: Urin Proba: Urin
Principiul de determinare a cantitii de glucoz din urin este acelai cu cel Principiul de determinare a cantitii de glucoz din urin este acelai cu cel
din snge, folosind amestecul de reactivi - prin dizolvarea reactivului 2 n din snge, folosind amestecul de reactivi - prin dizolvarea reactivului 2 n
reactivul 1. reactivul 1.
Se folosesc trei eprubete prob, standard (etalon) i martor (blank) P, S, Se folosesc trei eprubete prob, standard (etalon) i martor (blank) P, S,
M: M:

108 108
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010

PROBA STANDARD MARTOR PROBA STANDARD MARTOR


Reactiv enzimatic de lucru 1000 l 1000 l 1000 l Reactiv enzimatic de lucru 1000 l 1000 l 1000 l
Proba 10 l - - Proba 10 l - -
Standard - 10 l - Standard - 10 l -

Dup agitare i incubare 15min la 37o C, se citesc absorbanele probei Dup agitare i incubare 15min la 37o C, se citesc absorbanele probei
(Ap) i standardului (As) fa de martor la 500 nm (492-550 nm), n cuva de (Ap) i standardului (As) fa de martor la 500 nm (492-550 nm), n cuva de
1cm. 1cm.
Calcul: Calcul:
Glucozurie (mg%) = (Ap/As) x Cst Glucozurie (mg%) = (Ap/As) x Cst
Cst = concentraia standardului Cst = concentraia standardului

3. Valori de referin: absent 3. Valori de referin: absent

4. Variaii patologice 4. Variaii patologice


n mod normal, toat glucoza filtrat este reabsorbit prin tubii n mod normal, toat glucoza filtrat este reabsorbit prin tubii
renali, fiind absent n urin (doar cantti extrem de mici, de ordinul a renali, fiind absent n urin (doar cantti extrem de mici, de ordinul a
ctorva miligrame se pot elimina prin urin n mod fiziologic, dar aceste ctorva miligrame se pot elimina prin urin n mod fiziologic, dar aceste
cantiti extrem de mici, nu sunt puse n eviden cu testele uzuale de cantiti extrem de mici, nu sunt puse n eviden cu testele uzuale de
detectare, astfel nct, spunem ca glucoza este n mod normal absent n detectare, astfel nct, spunem ca glucoza este n mod normal absent n
urin). Acest lucru este posibil datorit capacitii rinichilor de a reabsorbi urin). Acest lucru este posibil datorit capacitii rinichilor de a reabsorbi
n mod fiziologic toat glucoza prin tubii renali, conservnd astfel nivelul n mod fiziologic toat glucoza prin tubii renali, conservnd astfel nivelul
glicemiei (care ar diminua dac rinichii ar absorbi doar parial glucoza, glicemiei (care ar diminua dac rinichii ar absorbi doar parial glucoza,
lasnd o parte s se elimine prin urin). lasnd o parte s se elimine prin urin).
Rinichii au ns o capacitate limitat de reabsorbie a glucozei, Rinichii au ns o capacitate limitat de reabsorbie a glucozei,
valoare numit prag renal de eliminare a glucozei n urin. Acest prag are valoare numit prag renal de eliminare a glucozei n urin. Acest prag are
o valoare de aproximativ 180 mg/dl, i reprezint nivelul glicemiei pn la o valoare de aproximativ 180 mg/dl, i reprezint nivelul glicemiei pn la
care rinichiul face fa n ceea ce privete funcia lui normal de a reabsorbi care rinichiul face fa n ceea ce privete funcia lui normal de a reabsorbi
ntreaga cantitate de glucoz filtrat; n schimb, depirea nivelului acestui ntreaga cantitate de glucoz filtrat; n schimb, depirea nivelului acestui
prag (deci o glicemie cu valori peste 180 mg/dl), atrage dup sine prag (deci o glicemie cu valori peste 180 mg/dl), atrage dup sine
imposibilitatea rinichiului de a reabsorbi complet glucoza, cu eliminarea n imposibilitatea rinichiului de a reabsorbi complet glucoza, cu eliminarea n
parte a acesteia prin urin. parte a acesteia prin urin.
Glicozurie semnific eliminarea de glucoz prin urin, este o situaie Glicozurie semnific eliminarea de glucoz prin urin, este o situaie
patologic, ce poate apare fie necorelat cu nivelul crescut al glicemiei, fie n patologic, ce poate apare fie necorelat cu nivelul crescut al glicemiei, fie n
condiii de hiperglicemie, cnd este depit valoarea prag de eliminare a condiii de hiperglicemie, cnd este depit valoarea prag de eliminare a

109 109
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010

glucozei n urin, tubii renali nemaiputnd reabsorbi ntreaga cantitate de glucozei n urin, tubii renali nemaiputnd reabsorbi ntreaga cantitate de
glucoz. glucoz.
Glicozuria poate apare asociat cu hiperglicemie n: Glicozuria poate apare asociat cu hiperglicemie n:
afeciuni endocrine: hipertiroidism, acromegalie, boala afeciuni endocrine: hipertiroidism, acromegalie, boala
Cushing, feocromocitom Cushing, feocromocitom
boli hepatice i pancreatice boli hepatice i pancreatice
boli SNC: traumatisme cerebrale, AVC (accident vascular boli SNC: traumatisme cerebrale, AVC (accident vascular
cerebral) cerebral)
Glicozuria fr hiperglicemie - Prezena glucozei n urin cnd Glicozuria fr hiperglicemie - Prezena glucozei n urin cnd
concentraia glucozei sangvine este n limite normale indic: concentraia glucozei sangvine este n limite normale indic:
un defect tubular n reabsorbia glucozei, care se exprim un defect tubular n reabsorbia glucozei, care se exprim
prin scderea pragului renal de eliminare a glucozei i este prin scderea pragului renal de eliminare a glucozei i este
caracteristic diabetului renal (glicozurie renal). caracteristic diabetului renal (glicozurie renal).
alterarea reabsorbiei tubulare a glucozei din sindromul Toni- alterarea reabsorbiei tubulare a glucozei din sindromul Toni-
Debre-Fanconi, boli tubulare renale avansate Debre-Fanconi, boli tubulare renale avansate
diabet gestaional. diabet gestaional.

5.3. HEMOGLOBINA GLICOZILATA 5.3. HEMOGLOBINA GLICOZILATA


(HbA1c) (HbA1c)

1. Consideraii generale 1. Consideraii generale


Hemoglobina glicozilat - HbA1c, reprezint un mic procent din Hemoglobina glicozilat - HbA1c, reprezint un mic procent din
hemoglobina A (5-7%, n snge distingndu-se trei componente ale hemoglobina A (5-7%, n snge distingndu-se trei componente ale
HbA1 - HbA1a, HbA1b i HbA1c), rezultat prin legarea continu i HbA1 - HbA1a, HbA1b i HbA1c), rezultat prin legarea continu i
ireversibil a glucozei din snge pe durata de via a eritrocitelor (de ireversibil a glucozei din snge pe durata de via a eritrocitelor (de
aproximativ 100-120 zile). aproximativ 100-120 zile).
Folosirea hemoglobinei A1c pentru monitorizarea metabolismului Folosirea hemoglobinei A1c pentru monitorizarea metabolismului
glucozei la pacienii diabetici a fost propus n 1976 de Koenig i glucozei la pacienii diabetici a fost propus n 1976 de Koenig i
colaboratorii si. colaboratorii si.
Diabetul zaharat se caracterizeaz prin hiperglicemie determinat de Diabetul zaharat se caracterizeaz prin hiperglicemie determinat de
incapacitatea organismului de a utiliza glucoza pentru producerea de incapacitatea organismului de a utiliza glucoza pentru producerea de
energie. energie.

110 110
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010

Tratamentul diabetului presupune meninerea pe termen lung a Tratamentul diabetului presupune meninerea pe termen lung a
nivelului glucozei din snge (glicemia), ct mai aproape posibil de nivelului glucozei din snge (glicemia), ct mai aproape posibil de
nivelul normal, reducnd riscul consecinelor cardiovasculare. nivelul normal, reducnd riscul consecinelor cardiovasculare.
Efectuarea glicemiei permite evaluarea statusului curent al Efectuarea glicemiei permite evaluarea statusului curent al
metabolismului carbohidrailor la pacienii diabetici n momentul metabolismului carbohidrailor la pacienii diabetici n momentul
recoltrii probei de snge, dar nu reprezint o reflectare real a recoltrii probei de snge, dar nu reprezint o reflectare real a
statusului glicemic. statusului glicemic.
Spre deosebire de aceasta, determinarea hemoglobinei glicozilate Spre deosebire de aceasta, determinarea hemoglobinei glicozilate
ofer o estimare retrospectiv a statusului glicemic, independent de ofer o estimare retrospectiv a statusului glicemic, independent de
ritmul circadian, diet i alte fluctuaii tranzitorii ale concentraiei ritmul circadian, diet i alte fluctuaii tranzitorii ale concentraiei
glucozei n snge. glucozei n snge.
Hemoglobina glicozilat HbA1c reprezint aadar un mic procent Hemoglobina glicozilat HbA1c reprezint aadar un mic procent
din hemoglobina A i reflect legarea continu i ireversibil a din hemoglobina A i reflect legarea continu i ireversibil a
glucozei din snge pe durata de via a eritrocitelor. n acest fel, glucozei din snge pe durata de via a eritrocitelor. n acest fel,
creterea valorilor Hb A1c este proporional cu nivelul mediu al creterea valorilor Hb A1c este proporional cu nivelul mediu al
glucozei sanguine n cursul ultimelor 2-3 luni anterioare testrii. glucozei sanguine n cursul ultimelor 2-3 luni anterioare testrii.
Glicozilarea se desfaoar n dou etape, prin reacii non- Glicozilarea se desfaoar n dou etape, prin reacii non-
enzimatice, fiind dependent de cantitatea de glucoz din snge. enzimatice, fiind dependent de cantitatea de glucoz din snge.
Glicozilarea implic i alte proteine i este principalul mecanism Glicozilarea implic i alte proteine i este principalul mecanism
prin care apare glucotoxicitatea. prin care apare glucotoxicitatea.
Alte mecanisme implicate sunt: Alte mecanisme implicate sunt:
o stressul oxidativ o stressul oxidativ
o activarea cii poliol o activarea cii poliol
o activarea proteinkinazei C o activarea proteinkinazei C
o distrucia endotelial o distrucia endotelial
o schimbri hemodinamice i de coagulare o schimbri hemodinamice i de coagulare
Alte proteine care pot glicozila sunt componente cu timp de Alte proteine care pot glicozila sunt componente cu timp de
injumatire scurt, fiind glicozilate ntr-o proporie mult mai scazut injumatire scurt, fiind glicozilate ntr-o proporie mult mai scazut
dect Hb. De exemplu, albumina are timpul de njumtire de 20 de dect Hb. De exemplu, albumina are timpul de njumtire de 20 de
zile. Altele ns, precum actina, mielina, colagenul, fibronectina, zile. Altele ns, precum actina, mielina, colagenul, fibronectina,
nucleoproteinele, spectrina, pot fi i ele glicozilate i au un timp de nucleoproteinele, spectrina, pot fi i ele glicozilate i au un timp de
njumtire lung. Ele trec printr-un proces de rearanjare complex i njumtire lung. Ele trec printr-un proces de rearanjare complex i
ireversibil, cu formarea produilor finali avansai de glicozilare ireversibil, cu formarea produilor finali avansai de glicozilare
(advanced glycocosylation end products - AGEs). (advanced glycocosylation end products - AGEs).
AGEs formeaz o mare familie cu numeroase componente, parial AGEs formeaz o mare familie cu numeroase componente, parial
identificate. Acumularea lor n structura proteinelor le modific identificate. Acumularea lor n structura proteinelor le modific
funcionarea. Ele au capacitatea de a se leaga de receptorii specifici funcionarea. Ele au capacitatea de a se leaga de receptorii specifici
pentru macrofage i induc eliberarea enzimelor hidrolitice, a pentru macrofage i induc eliberarea enzimelor hidrolitice, a
citokinelor i factorilor de cretere capabili s iniieze sinteza citokinelor i factorilor de cretere capabili s iniieze sinteza

111 111
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010

substanelor fundamentale i, acionnd la nivel intracelular pot substanelor fundamentale i, acionnd la nivel intracelular pot
conduce la degradri ale acizilor nucleici. conduce la degradri ale acizilor nucleici.
Recomandri pentru determinarea HbA1c Recomandri pentru determinarea HbA1c
Determinarea Hb A1c constituie un test de evaluare i monitorizare Determinarea Hb A1c constituie un test de evaluare i monitorizare
pe termen lung al controlului glicemic la pacienii cu diabet zaharat. pe termen lung al controlului glicemic la pacienii cu diabet zaharat.
Mai mult, are un rol predictiv n ceea ce privete riscul Mai mult, are un rol predictiv n ceea ce privete riscul
complicaiilor diabetului: cetoacidoza, nefropatia, retinopatia i complicaiilor diabetului: cetoacidoza, nefropatia, retinopatia i
asigur discernmnt n alegerea metodei terapeutice de elecie la asigur discernmnt n alegerea metodei terapeutice de elecie la
pacienii diabetici, pe criteriul eficienei: antidiabetice orale sau pacienii diabetici, pe criteriul eficienei: antidiabetice orale sau
insulin insulin
Recomandri pentru determinarea HbA1c: Recomandri pentru determinarea HbA1c:
o diabet zaharat de tip I instabil, cu modificri mari ale o diabet zaharat de tip I instabil, cu modificri mari ale
glicemiei de la o zi la alta glicemiei de la o zi la alta
o diabetul copilului o diabetul copilului
o diabetul la bolnavii cu prag renal al glucozei anormal o diabetul la bolnavii cu prag renal al glucozei anormal
o diabetul zaharat de tip II, la paciente nsrcinate sau o diabetul zaharat de tip II, la paciente nsrcinate sau
pacieni care i-au modificat recent dieta, stilul obinuit pacieni care i-au modificat recent dieta, stilul obinuit
de via sau medicaia, astfel nct controlul lor de via sau medicaia, astfel nct controlul lor
metabolic pare mai bun dect este n realitate metabolic pare mai bun dect este n realitate
o diabet gestaional tip 2. o diabet gestaional tip 2.
Testul se execut la interval de : Testul se execut la interval de :
o 3-4 luni la pacienii cu diabet zaharat tip I; o 3-4 luni la pacienii cu diabet zaharat tip I;
o 6 luni la pacieni cu diabet zaharat de tip II (excepie: sarcin o 6 luni la pacieni cu diabet zaharat de tip II (excepie: sarcin
unde controlul este indicat la 2 luni. unde controlul este indicat la 2 luni.

2. Principiul metodei 2. Principiul metodei


Adiia fructozei pe molecula de hemoglobin schimb unele dintre proprietile sale Adiia fructozei pe molecula de hemoglobin schimb unele dintre proprietile sale
fizico-chimice iar aceste proprieti sunt utilizate pentru metoda electroforetic i fizico-chimice iar aceste proprieti sunt utilizate pentru metoda electroforetic i
cromatografic de dozare a Hb A1c. cromatografic de dozare a Hb A1c.
Mai exact, Hb A1c difer de hemoglobina nativ prin ncrctura electric total, Mai exact, Hb A1c difer de hemoglobina nativ prin ncrctura electric total,
regiunea electric pentru care are afinitate gruparea fructozei i proprietile antigenice. regiunea electric pentru care are afinitate gruparea fructozei i proprietile antigenice.

3. Modul de lucru 3. Modul de lucru


Proba: Snge total Proba: Snge total
Metodele de dozare sunt multiple: Metodele de dozare sunt multiple:
1. Cromatografie (prin schimb ionic) 1. Cromatografie (prin schimb ionic)
2. Metoda electroforetic 2. Metoda electroforetic
3. Metoda imunologic 3. Metoda imunologic
112 112
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010

Metoda de elecie este considerat cromatografia de schimb ionic de Metoda de elecie este considerat cromatografia de schimb ionic de
nalt performan (HPLC). Probele sunt diluate automat n aparat, nalt performan (HPLC). Probele sunt diluate automat n aparat,
transmise circuitului i ncrcate n cartuul analitic. Aparatul distribuie n transmise circuitului i ncrcate n cartuul analitic. Aparatul distribuie n
cartu un tampon cu gradient programabil de trie ionic cresctoare, unde cartu un tampon cu gradient programabil de trie ionic cresctoare, unde
hemoglobinele sunt separate pe baza interacunilor ionice cu materialul hemoglobinele sunt separate pe baza interacunilor ionice cu materialul
coninut de cartu. coninut de cartu.
Hemoglobinele separate vor trece apoi prin filtrul fotometric unde Hemoglobinele separate vor trece apoi prin filtrul fotometric unde
sunt msurate schimbrile de absorbie la 415 nm. sunt msurate schimbrile de absorbie la 415 nm.
Programul analizorului realizeaz prelucrarea datelor brute obinute Programul analizorului realizeaz prelucrarea datelor brute obinute
pentru fiecare prob. Pentru cuantificarea valorilor HbA1c sunt utilizate pentru fiecare prob. Pentru cuantificarea valorilor HbA1c sunt utilizate
dou nivele de calibrare. Pentru fiecare prob este generat un raport i o dou nivele de calibrare. Pentru fiecare prob este generat un raport i o
cromatogram. Aria HbA1c se calculeaz utiliznd un algoritm exponenial cromatogram. Aria HbA1c se calculeaz utiliznd un algoritm exponenial
gaussian modificat (care exclude din ara pick-urilor de HbA1c aria pick- gaussian modificat (care exclude din ara pick-urilor de HbA1c aria pick-
urilor de HbA1c labil i carbamilat). urilor de HbA1c labil i carbamilat).
Se aduc eprubetele cu probe la temperatura camerei nainte de a Se aduc eprubetele cu probe la temperatura camerei nainte de a
incepe testarea. La temperatura camerei probele sunt stabile timp de 3 zile. incepe testarea. La temperatura camerei probele sunt stabile timp de 3 zile.
Nu este necesar pregatirea anterioar a probelor i nici omogenizarea Nu este necesar pregatirea anterioar a probelor i nici omogenizarea
acestora nainte de ncrcare. Eprubetele cu probe sunt puse n suportul acestora nainte de ncrcare. Eprubetele cu probe sunt puse n suportul
special i ncrcate direct n aparat. special i ncrcate direct n aparat.
Aparatul este un sistem nchis de dozare a acestui parametru. Aparatul este un sistem nchis de dozare a acestui parametru.

4. Valori de referin 4. Valori de referin


HBA1C = 4 6% HBA1C = 4 6%

5. Variaii patologice 5. Variaii patologice


VALORI CRESCUTE VALORI CRESCUTE
diabet zaharat diabet zaharat
splenectomie splenectomie
intoxicaii cu plumb intoxicaii cu plumb
consumul de alcool consumul de alcool
anemie feripriv anemie feripriv
dup unele medicamente: aspirin, betablocante, dup unele medicamente: aspirin, betablocante,
lovastatin, propranolol lovastatin, propranolol
VALORI SCZUTE VALORI SCZUTE
sarcin sarcin
pierderi cronice de snge pierderi cronice de snge
post-transfuzional post-transfuzional
113 113
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010

insuficien renal cronic insuficien renal cronic


defect al enzimei Glucozo-6-fosfat dehidrogenaz defect al enzimei Glucozo-6-fosfat dehidrogenaz
anemiile hemolitice (datorit scderii duratei de via a anemiile hemolitice (datorit scderii duratei de via a
hematiilor) hematiilor)
post administrare a unor ageni farmacologici: enalapril, post administrare a unor ageni farmacologici: enalapril,
insulina, verapamil. insulina, verapamil.
Limite i interferene: Limite i interferene:
o Testul HbA1c nu se recomand n diagnosticul diabetului o Testul HbA1c nu se recomand n diagnosticul diabetului
zaharat pentru c sensibilitatea sa este sczut n zaharat pentru c sensibilitatea sa este sczut n
comparaie cu testul de toleran la glucoz comparaie cu testul de toleran la glucoz
o La pacienii cu gamapatii monoclonale, n special de tip o La pacienii cu gamapatii monoclonale, n special de tip
IgM (boala Waldenstrm) rezultatele obinute pot fi uneori IgM (boala Waldenstrm) rezultatele obinute pot fi uneori
neconcludente neconcludente
o Prezena hemoglobinelor patologice interfer cu testul o Prezena hemoglobinelor patologice interfer cu testul
pentru determinare a HbA1c (Hb F i Hb H determina pentru determinare a HbA1c (Hb F i Hb H determina
valori fals crescute, Hb S din sicklemie, C, E, D, i Lepore valori fals crescute, Hb S din sicklemie, C, E, D, i Lepore
determin valori fals sczute) determin valori fals sczute)

6. FUNDAMENTE BIOCHIMICE 6. FUNDAMENTE BIOCHIMICE


Hemoglobina glicozilat este format continuu n eritrocite ca Hemoglobina glicozilat este format continuu n eritrocite ca
produs al reaciei non-enzimatice dintre glucoz i hemoglobin produs al reaciei non-enzimatice dintre glucoz i hemoglobin
(proteina roie din snge responsabil de transportul gazelor (proteina roie din snge responsabil de transportul gazelor
respiratorii, O2 i CO2). Legtura dintre glucoz i hemoglobin respiratorii, O2 i CO2). Legtura dintre glucoz i hemoglobin
este foarte stabil, astfel hemoglobina rmne glicat pe toata este foarte stabil, astfel hemoglobina rmne glicat pe toata
durata vieii eritrocitelor; aproximativ 110 +/- 23 zile. durata vieii eritrocitelor; aproximativ 110 +/- 23 zile.
Testul Hb A1c ofer o estimare a nivelului mediu de glucoz din Testul Hb A1c ofer o estimare a nivelului mediu de glucoz din
snge pe o perioad de 30 - 90 de zile. snge pe o perioad de 30 - 90 de zile.
Nivelul mediu normal al Hb A1c este < 6%. Valorile crescute ale Nivelul mediu normal al Hb A1c este < 6%. Valorile crescute ale
Hb A1c se coreleaz cu dezvoltarea complicaiilor diabetice i pot Hb A1c se coreleaz cu dezvoltarea complicaiilor diabetice i pot
reprezenta o modalitate eficient n monitorizarea ulterioar a reprezenta o modalitate eficient n monitorizarea ulterioar a
diabetului. diabetului.
n condiii de hiperglicemie, i alte proteine din ser n afar de n condiii de hiperglicemie, i alte proteine din ser n afar de
hemoglobin sunt glicozilate. Msurarea acestor proteine glicate hemoglobin sunt glicozilate. Msurarea acestor proteine glicate
poate fi o alternativ a HbA1c pentru evaluarea nivelului glicemic. poate fi o alternativ a HbA1c pentru evaluarea nivelului glicemic.
La pacienii cu diabet, testarea hemoglobinei glicozilate (HbA1c) La pacienii cu diabet, testarea hemoglobinei glicozilate (HbA1c)
este curent utilizat pentru a monitoriza controlul glicemic este curent utilizat pentru a monitoriza controlul glicemic
general al pacientului. general al pacientului.

114 114
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010

Asociaia American de Diabet nu recomand acest test pentru Asociaia American de Diabet nu recomand acest test pentru
diagnostic, avnd n vedere c nu exist un aa numit standard de diagnostic, avnd n vedere c nu exist un aa numit standard de
aur pentru Hb A1c i pentru c multe ri nu au acces la el. aur pentru Hb A1c i pentru c multe ri nu au acces la el.
La pacienii diabetici cu valoarea Hba1c < 7%, se consider c La pacienii diabetici cu valoarea Hba1c < 7%, se consider c
metabolismul glucidic este relativ bine controlat, la cei la care metabolismul glucidic este relativ bine controlat, la cei la care
Hba1c este ntre 7-9% controlul metabolismului glucidic este slab, Hba1c este ntre 7-9% controlul metabolismului glucidic este slab,
iar valori > 9%, sugereaz un dezechilibru, o decompensare a iar valori > 9%, sugereaz un dezechilibru, o decompensare a
metabolismului glucidic la aceast categorie de pacieni. metabolismului glucidic la aceast categorie de pacieni.
Valorile protective ale HbA1c de complicaiile cronice ale Valorile protective ale HbA1c de complicaiile cronice ale
diabetului sunt considerate cele pan in 7% diabetului sunt considerate cele pan in 7%
Studiile de specialitate ale cercettorilor din ntreaga lume atrag Studiile de specialitate ale cercettorilor din ntreaga lume atrag
atenia asupra necesitii evaluarii controlului metabolic la copil, atenia asupra necesitii evaluarii controlului metabolic la copil,
n momentul de fa, atitudinea global fiind departe de n momentul de fa, atitudinea global fiind departe de
ndeplinirea acestor deziderate ndeplinirea acestor deziderate
Studiile de specialitate efectuate n rile i comunitile care Studiile de specialitate efectuate n rile i comunitile care
beneficiaz de fonduri special destinate ameliorrii diabetului i beneficiaz de fonduri special destinate ameliorrii diabetului i
complicaiilor acestuia, au demonstrat c scderea cu 10% a valorii complicaiilor acestuia, au demonstrat c scderea cu 10% a valorii
HbA1c determin o reducere cu 35% a riscului de retinopatie, cu HbA1c determin o reducere cu 35% a riscului de retinopatie, cu
25-44% a riscului de nefropatie i cu 30% a celui de neuropatie. 25-44% a riscului de nefropatie i cu 30% a celui de neuropatie.
Testul Hb glicozilate nu se folosete niciodat ca test unic pentru Testul Hb glicozilate nu se folosete niciodat ca test unic pentru
diagnosticarea diabetului zaharat, ci alturi de el se face testul diagnosticarea diabetului zaharat, ci alturi de el se face testul
glicemiei provocate, se cerceteaz i dozeaz prezena glucozei glicemiei provocate, se cerceteaz i dozeaz prezena glucozei
in urin - glicozuria, cantitatea de corpi cetonici. in urin - glicozuria, cantitatea de corpi cetonici.

7. MCQ 7. MCQ

Hb gl 1 Care dintre urmtorii parametri sunt utili n evaluarea Hb gl 1 Care dintre urmtorii parametri sunt utili n evaluarea
metabolismului glucidic? metabolismului glucidic?
A. Glicemia A. Glicemia
B. Testul de toleran oral la glucoz B. Testul de toleran oral la glucoz
C. Prezena glucozei n urin C. Prezena glucozei n urin
D. Eliminarea de fenilpiruvat n urin D. Eliminarea de fenilpiruvat n urin
E. Corpii cetonici n urin E. Corpii cetonici n urin

Hb gl 2 Valoarea normal a hemoglobinei glicozilate este: Hb gl 2 Valoarea normal a hemoglobinei glicozilate este:
A. 1-3% A. 1-3%
B. 4-7% B. 4-7%
C. 7-9% C. 7-9%
115 115
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010

D. 4-6% D. 4-6%
E. 1,3-1,7 g/l E. 1,3-1,7 g/l

Hb gl 3 n condiii de hiperglicemie: Hb gl 3 n condiii de hiperglicemie:


A. O parte din glucoz se elimin obligatoriu prin urin A. O parte din glucoz se elimin obligatoriu prin urin
B. Testul HbA1c este util n monitorizarea bolnavului cu diabet B. Testul HbA1c este util n monitorizarea bolnavului cu diabet
C. Corpii cetonici se elimin n urin C. Corpii cetonici se elimin n urin
D. Valoarea glicemiei depete pragul renal de eliminare a D. Valoarea glicemiei depete pragul renal de eliminare a
glucozei n urin glucozei n urin
E. Pacientul prezint asociat i variaii ale ureei E. Pacientul prezint asociat i variaii ale ureei

Hb gl 4 Testul HbA1c: Hb gl 4 Testul HbA1c:


A. Este recomandat n diagnosticul bolnavilor diabetici A. Este recomandat n diagnosticul bolnavilor diabetici
B. nregistreaz valori peste 7% la pacienii cu diabet B. nregistreaz valori peste 7% la pacienii cu diabet
C. Prezint valori sub 6g/l la indivizii normali C. Prezint valori sub 6g/l la indivizii normali
D. Poate fi util, alturi de ali parametri, n monitorizarea D. Poate fi util, alturi de ali parametri, n monitorizarea
metabolismului glucidic la diabetici metabolismului glucidic la diabetici
E. Este un test ce ofer date despre durata de via a hematiilor E. Este un test ce ofer date despre durata de via a hematiilor

Hb gl 5 Determinarea valorilor HbA1c: Hb gl 5 Determinarea valorilor HbA1c:


A. Se poate realiza prin metode electroforetice A. Se poate realiza prin metode electroforetice
B. Poate fi realizat prin cromatografie prin schimb ionic, mai B. Poate fi realizat prin cromatografie prin schimb ionic, mai
rar folosit rar folosit
C. Ofer indicaii privind nivelul glicemiei al individului, din C. Ofer indicaii privind nivelul glicemiei al individului, din
ultimele 3-4 luni ultimele 3-4 luni
D. Se recomand ca test de diagnostic la pacienii diabetici D. Se recomand ca test de diagnostic la pacienii diabetici
E. Poate nregistra rezultate false la pacienii cu sicklemie E. Poate nregistra rezultate false la pacienii cu sicklemie
(anemie falciform) (anemie falciform)

Hb gl 6 Hemoglobina glicozilat Hb gl 6 Hemoglobina glicozilat


A. Prezint valori crescute la pacienii cu anemie hemolitic A. Prezint valori crescute la pacienii cu anemie hemolitic
B. nregistreaz valori sczute la bolnavii cu insuficien renal B. nregistreaz valori sczute la bolnavii cu insuficien renal
cronic cronic
C. Este un test recomandat n diagnosticul diabetului zaharat C. Este un test recomandat n diagnosticul diabetului zaharat
D. Poate nregistra valori sub 4% la pacientii diabetici cu control D. Poate nregistra valori sub 4% la pacientii diabetici cu control
slab al metabolismului glucidic slab al metabolismului glucidic
E. Nici un rspuns corect E. Nici un rspuns corect

Hb gl 7 Se recomand determinarea valorilor hemoglobinei glicozilate, la Hb gl 7 Se recomand determinarea valorilor hemoglobinei glicozilate, la
urmtoarele categorii: urmtoarele categorii:
116 116
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010 CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului glucidic 2010

A. Pacieni cu diabet zaharat tip I A. Pacieni cu diabet zaharat tip I


B. Indivizi cu diabet tip II B. Indivizi cu diabet tip II
C. Gravide C. Gravide
D. Pacienii cu boli renale D. Pacienii cu boli renale
E. Nici un rspuns corect E. Nici un rspuns corect

Hb gl 8 Hemoglobina glicozilat: Hb gl 8 Hemoglobina glicozilat:


A. Reprezint un procent mic din hemoglobina total din snge A. Reprezint un procent mic din hemoglobina total din snge
B. Reprezint singura protein glicozilat din snge B. Reprezint singura protein glicozilat din snge
C. Deine un procent ntre 4-6% din hemoglobina total C. Deine un procent ntre 4-6% din hemoglobina total
D. Se gsete n snge n proporie echimolecular cu Hb S D. Se gsete n snge n proporie echimolecular cu Hb S
E. Se formeaz prin glicozilarea anormal a hemoglobinei, E. Se formeaz prin glicozilarea anormal a hemoglobinei,
proteina roie din snge proteina roie din snge

Hb gl 9 Legarea resturilor glicozil la hemoglobin Hb gl 9 Legarea resturilor glicozil la hemoglobin


A. Se realizeaz doar n condiii patologice A. Se realizeaz doar n condiii patologice
B. Are loc n paralel cu glicozilarea n cantiti mult mai mari, B. Are loc n paralel cu glicozilarea n cantiti mult mai mari,
ale altor proteine ale altor proteine
C. Conduce la formarea hemoglobinei glicozilate, care 1n mod C. Conduce la formarea hemoglobinei glicozilate, care 1n mod
fiziologic lipsete din sngele indivizilor normali fiziologic lipsete din sngele indivizilor normali
D. Este un proces catalizat de enzime specifice D. Este un proces catalizat de enzime specifice
E. Nici un rspuns corect E. Nici un rspuns corect

Hb gl 10 Testul HbA1c: Hb gl 10 Testul HbA1c:


A. Se folosete ca test unic n diagnosticul diabetului zaharat A. Se folosete ca test unic n diagnosticul diabetului zaharat
B. Prezint nivele szute la etanolici B. Prezint nivele szute la etanolici
C. nregistreaz valori sczute la pacienii cu anemie feripriv C. nregistreaz valori sczute la pacienii cu anemie feripriv
D. Este util n evaluarea nivelului glicemic din perioada D. Este util n evaluarea nivelului glicemic din perioada
anterioar dozrii anterioar dozrii
E. Se recomand n evaluarea controlului metabolismului E. Se recomand n evaluarea controlului metabolismului
glucidic la pacienii diabetici glucidic la pacienii diabetici

117 117
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului lipidic 2010

CAPITOLUL 6

EXPLORAREA METABOLISMULUI LIPIDIC

6.1. DOZAREA TRIGLICERIDELOR


(TG)

1. Consideraii generale
Trigliceridele TG, sunt esteri ai glicerolului cu 3 acizi grai.
Acetia sunt parial sintetizai n ficat, mucoasa intestinal i esutul
adipos (TG endogene), iar o parte provin din alimentaie (TG
exogene).
Trigiceridele din esutul adipos i din celelalte esuturi reprezint cel
mai important depozit de rezerve energetice ale organismului.
n esutul adipos sunt depozitate sub forma de glicerol, acizi grai
i monogliceride, care sunt convertite n ficat n trigliceride ce intr
n constituia VLDL lipoproteine cu densitate foarte mica,
specializate in transportul prin sange a TG sintetizate la nivel hepatic
- (80%) i LDL (lipoproteine cu densitate mica, specializate in
transportul de colesterol prin sange - (15%).
Sinteza TG are loc n trei compartimente principale:
o intestin (avand drept precursor un monoglicerid);
o ficat i esut adipos (precursorul de data aceasta este glicerol
fosfatul, care poate proveni din diferite surse, glucoza pe de o
parte, TG i fosfolipidele alimentare pe de alt parte).
Consecutiv sintezei, TG formate n intestin i ficat sunt exportate
ctre esuturile consumatoare, cuplat cu apoproteinele plasmatice,
sub form de lipoproteine plasmatice, de tip chilomicroni (cele cu
origine intestinala) i respectiv VLDL (lipoproteine cu densitate
foarte mic cele sintetizate la nivel hepatic). TG sintetizate n
esutul adipos nu mai sunt exportate ci servesc drept rezerv, fiind
depozitate la acest nivel.
Metabolismul TG presupune ulterior i degradarea unei pri a
acestora, pe masur ce sunt transportate n snge, sub aciunea unei
lipoprotein lipaze (LPL). Se genereaz n acest fel resturile de
118
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului lipidic 2010

chilomicroni, transportate apoi la ficat, precum i forme intermediare


ale lipoproteinelor, IDL i apoi LDL.
Hipertrigliceridemia mpreun cu hipercolesterolemia sunt factori
de risc independeni pentru boala aterosclerotic. Dintre parametrii
serici, nivelul fraciilor de colesterol este desemenea semnificativ n
acest sens, valoarea trigliceridelor fiind necesar pentru calcularea
fraciunii LDL a colesterolului (LDLc). O valoare ns mai mare a
TG, care depete 400 mg/dl, conduce la erori in calcularea corect
a LDLc, aplicnd formula Friedewald.
Recomandri pentru determinarea trigliceridelor
investigarea metabolismului lipidic;
pacienii cu istoric familial sugestiv de dereglri ale metabolismului
lipidic sau cu suspiciune de ATS
afectri hepatice;
monitorizarea bolii diabetice (cnd este afectat nu doar metabolismul
glucidic, ci i cel lipidic, iar uneori i cel proteic)
pacieni care urmeaz un tratament medicamentos ce poate intefera
cu profilul lipidic normal.

2. Principiul metodei
Metoda folosete o lipoprotein lipaz (LPL) pentru hidroliza rapid i
complet a trigliceridelor la glicerol, urmat de oxidarea acestuia la
dihidroxiaceton-fosfat i ap oxigenat. Apa oxigenat astfel obinut
reacioneaz cu 4 aminofenazona si 4 clorofenol sub aciunea catalitic a
peroxidazei pentru a forma un compus rou care este dozat colorimetric.
LPL
Trigligeride + 3 H2O Glicerol + 3 RCOOH
Glicerol K
Glicerol + ATP Glicerol-3-fosfat + ADP
2+
Mg
Glicerol P Oxidaza
Glicerol-3-fosfat + O2 Fosfat de dihidroxiacetona + H2O2

119
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului lipidic 2010

Peroxidaza
+ 4-aminofenazona (p-benzochinona-monoimino)-fenazona (rosu)
H 2O 2 + 2H2O + HCl
+ 4-clorofenol

3. Reactivi
Reactiv 1 (R1):
Tampon PIPES, pH=7,2 50 mmol/L
4-clorofenol 2 mmol/L
Reactiv 2 (R2):
Lipoprotein lipaza 150.000 U/L
Glicerolkinaza 800 U/L
Glicerol fosfat oxidaza 3.000 U/L
Peroxidaza 350 U/L
4-aminofenazona 0,13 mmol/L
ATP 30 mmol/L
Mg2+ 40 mmol/L
Standard :
Glicerin (echivalent de triolein) 2,28 mmol/L

4. Modul de lucru:
Proba : Ser / plasma heparinizat (nehemolizat)
Se dizolv coninutul unui flacon de reactiv 2 (R2) n cantitatea
corespunztoare de reactiv 1 (R1), rezultnd amestecul de reactivi. Se
folosesc 3 eprubete: proba (P) standard (St) i martor (M).

Reactiv P (l) St (l) M (l)


Amestec reactivi 1000 1000 1000
Ap distilat - - 10
Standard - 10 -
Proba 10 - -

Dup amestecare i incubare timp de 6 minute la 37 C sau de 20 minute la


temperatura camerei se citete valoarea absorbanei (A) probei i
standardului la 505 nm (490-550nm), n cuve de 1 cm, fa de martor.
Mod de msurare: cu punct final.
120
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului lipidic 2010

Calcul

A Proba
-------------- x C Standard = mg/dL trigliceride
A Standard
Probele cu o concentraie mai mare de 600 mg/dL trebuiesc diluate 1:2 cu
soluie salin i analizate din nou. Rezultatele obinute vor ine cont de
diluie.
n cazul n care rezultatele trebuie s fie exprimate n uniti SI se aplic
formula de calcul: mg/dL x 0.0113 = mmol/L

5. Valori de referin : 35 - 160 mg/dL


Valori de ALERT CLINIC !
> 500 mg/dL semnific Hipertrigliceridemia extrem n
prezena pancreatitei diagnosticate
> 1000 mg/dL prezint risc extrem pentru Pancreatit

6. VARIAII FIZIOLOGICE I PATOLOGICE


Variaii fiziologice ale trigliceridelor
o Valorile trigliceridelor n snge sunt uor mai mari la femei dect la
brbai, fiind corelate cu greutatea i cu vrsta.
o Nivelul acestora se modific tranzitoriu n sarcin, consumul de
alcool i dup unele medicamente sau ageni farmacologici
(contraceptive orale, estrogeni, colestiramina, vitamina C,
antiinflamatoare steroide/nesteroide, hipolipemiante).
Valori crescute
Valori de alert clinic >500 mg/dl n prezena pancreatitei diagnosticate i
>1.000 mg/dl risc de pancreatit acut (mai ales dac sunt nsoite de
obezitate, diabet, consum de alcool).
Valori crescute ale trigliceridelor >200 mg/dl sunt asociate cu un risc
crescut de ateroscleroz, boal coronariana, infarct de miocard.
Nivelul ridicat al trigliceridelor poate apare ntr-o varietate mare de
dereglri:

121
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului lipidic 2010

Afectare hepatic prin boli inflamatorii (hepatite) sau alcoolism,


care determin consecutiv defect de LPL nu mai are cine s
degradeze lipidele circulante, cu creterea valorii acestora n
snge, sau defect de formare a VLDL care ar trebui sa exporte
TG din ficat, ctre esuturile extrahepatice deci ele nu mai sunt
transportate corespunztor, rmn n circulaie i astfel crete
valoarea absolut a TG n ser
Obezitate (producie crescut de TG);
Ficat gras (fie prin producie crescut i consecutiv depozitare
de TG n ficat, datorat defectului de compusi precum Met, fosfat,
AGN, necesari sintezei de fosfolipide, situaie in care,
digliceridele sunt predominant dirijate catre formarea de TG, in
defavoarea formarii de PL-fosfolipide; fie prin defect de cuplare
cu apoproteinele specifice, si deci defect de formare a
lipoproteinei specifice VLDL, specializat in exportul TG de
origine hepatic) consecina: ficatul va acumula o cantitate prea
mare de grasime fa de capacitatea lui de metabolizare sau export
(ficatul n mod normal nu face depozite de TG aa cum face
esutul adipos)
Pancreatit
Infarct miocardic
Afectare renal (sindrom nefrotic)
Analbuminemie (albumina este transportorul major pentru
agenii liposolubili n plasm, deci n defectul sau lipsa total a
acestei proteine cru, nivelul lipidelor va crete n snge)
Hiperlipoproteinemia tip I (prin defect de LPL)
Hiperlipoproteinemia tip II (prin defect de receptor al LDL),
frecvent asociat cu ATS si boli coronariene
Hiperlipoproteinemia tip III (cu creteri ale nivelului de
colesterol, chilomicroni i VLDL)
Hiperlipoproteinemia tip IV (caracterizat prin nivele crescute
de TG i VLDL).
Dieta prea bogat n carbohidrai i srac n proteine
Afectare tiroidian (Hipotiroidie)
Guta, sindrom Down (afectare genetic)
Valori sczute
o Valorile extreme i foarte reduse ale TG (mai putin de 10 mg/dl)
reprezint de asemeni o problem pentru clinicianul practician.

122
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului lipidic 2010

De cele mai multe ori, aceste valori sunt sugestive pentru un


organism malnutrit, sau existenta unei malabsorbii.
o Nivele reduse de TG se pot nregistra ns i la pacieni cu:
insuficien hepatic
hipertiroidism, hiperparatiroidism
infecii cronice (nespecific)
neoplazii
Colesterolul total i TG sunt dozrile folosite n prima etap de evaluare
a riscului aterogen, n evaluarea prevalenei i diagnosticului bolilor
coronariene.
Realizarea unui profil lipidic complet lipidograma - se impune ca o
necesitate n diagnosticul diferenial al dislipidemiilor, dar i pentru a aeza
managementul bolilor cardiovasculare pe raionamente mai puin empirice,
alturi de TG n aceste situaii, fiind recomandat asociat, i evaluarea
colesterolului total (Colt), a LDL, VLDL, HDL

7. FUNDAMENTE BIOCHIMICE
Trigliceridele sunt esteri ai glicerolului cu 3 acizi grai.
Reprezint cel mai important depozit de rezerve energetice ale
organismului.
Sunt parial sintetizate n ficat, mucoasa intestinala i esutul
adipos (endogene) i o parte provin din alimentaie(exogene).
Metabolismul TG presupune ulterior i degradarea lor n
circulaie (snge) sub aciunea unei lipoprotein lipaze (LPL).
Aceast enzim acioneaz asupra TG cuprinse n structura
lipoproteinelor: VLDL i chilomicroni. Se genereaz n acest fel
resturile de chilomicroni, transportate apoi la ficat, precum i
forme intermediare ale lipoproteinelor, IDL i apoi LDL.
Hipertrigliceridemia este un factor de risc pentru boala
aterosclerotic.

8. MCQ
TG1 Trigliceridele:
A. reprezint cel mai important depozit de rezerve energetice al
organismului
B. sunt esteri ai glicerolului cu 2 acizi grai

123
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului lipidic 2010

C. sunt parial sintetizate n ficat, o alt parte provenind din


alimentaie
D. se elimina la nivel renal
E. scad n snge n cursul pancreatitei
TG2 Care dintre urmtoarele afirmaii referitoare la trigliceride NU este
adevarat:
A. hipotrigliceridemia este factor de risc independent pentru
boala aterosclerotic
B. administrarea de vitamina C poate interfera cu nivelul TG
C. valoarea acestora crete n pancreatite
D. n esutul adipos sunt depozitate sub forma de glicerol, acizi
grai i monogliceride
E. pot avea valori crescute n snge la pacienii cu diabet zaharat
decompensat
TG3 Valoarea normal a trigliceridelor n ser variaz ntre:
A. 35 - 160 mg/dl
B. >240 mg/dl
C. >40 mg/dl
D. 100 135 mg/dl
E. nici o variant corect
TG4 Care din urmtoarele afirmaii NU este adevrat:
A. ntlnim valori sczute ale trigliceridelor n hipertiroidism
B. HDL-colesterolul reprezint fracia bun a colesterolului
C. valoarea trigliceridelor nu variaz n funcie de alimentaie
D. LDL-colesterolul nu este fraciunea de colesterol care ofer
protecie mpotriva bolii aterosclerotice;
E. n sarcin pot fi ntlnite valori elevate ale colesterolului i
trigliceridelor n ser
TG5 Nivelul trigliceridelor n snge crete n urmtoarele condiii, CU
EXCEPIA:
A. boli hepatice
B. alcoolism
C. sindrom nefrotic
D. malabsorbie
E. gut
TG6 Determinarea trigliceridelor este recomandat i poate aduce
indicaii de diagnostic n:

124
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului lipidic 2010

A. afectri hepatice
B. afeciuni osoase
C. afeciuni renale
D. afeciuni endocrine
E. afeciuni musculare
TG7 Care din urmtoarele afirmaii referitoare la trigliceride NU este fals:
A. circul liber prin snge
B. dieta bogat n grsimi conduce la scderea nivelului
trigliceridelor
C. datorit coninutului mare de energie sunt stocate la nivelul
mitocondriilor
D. sunt transportate n snge legate de proteine transportoare
E. sunt produsul direct de degradare al ADN-ului celular
TG8 Nivelul trigliceridelor n snge scade n urmtoarele condiii, CU
EXCEPIA:
A. gut
B. malabsorbie
C. sindrom nefrotic
D. hiperparatiroidism
E. boli cerebrale
TG9 Nivelul crescut de trigliceride n plasm poart numele de:
A. hiperglicemie
B. hipotrigliceridemie
C. hiperlipemie
D. hipoglicemie
E. hipertrigliceridemie
TG10 Degradarea trigliceridelor sub aciunea enzimei lipoprotein lipaz
conduce la formarea urmtorilor compui cu excepia:
A. resturi de chilomicroni
B. HDL
C. IDL
D. Proteine
E. Albumin

125
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului lipidic 2010

6.2. DOZAREA COLESTEROLULUI

1. Consideraii generale
Colesterolul este un alcool policiclic (sterol) de care se leag acizii
grai, devenind astfel o grsime care se ntlnete n aproape toate
alimentele de origine animal. El este transportat prin snge doar n
combinaie cu proteinele, sub form de lipoproteine.
Principalele roluri ale acestui sterol constau n:
o structura membranelor celulare (unde acioneaz ca un
agent stabilizator i modulator al fluiditii membranare),
o precursor n formarea de: acizi biliari, hormoni sexuali
(sexosteroizi), vitamina D
Organismul i fabric singur colesterolul necesar (ficat, mucoasa
intestinal) i nu are nevoie de nici un aport alimentar de acest fel.
Dac alimentele mncate conin o cantitate prea mare de grsimi
colesterolul se depune pe pereii vaselor de snge sub form de
plcue numite ATEROAME. Prezena plcuelor de colesterol
rigidizeaz peretele vaselor afectate i n acelai timp ngusteaz
lumenul vascular, cu reducerea consecutiv a fluxului sanguin n
vasele afectate = ischemie i consecutiv necroza teritoriilor irigate de
vasele de snge (= infarct) ce prezint plcue de colesterol
(ateroame). De aceea aceast situaie se numete ATEROSCLEROZ -
ATS (scleroza pereilor arteriali ce prezint ateroame), cu consecine
uneori severe la nivelul diferitelor organe - infarct: inim, rinichi,
creier (n funcie de localizarea preferenial a ateroamelor pe vasele
care irig aceste organe, de regul, la nivelul esuturilor menionate,
pentru c acestea sunt esuturile mari consumatoare de oxigen).
Colesterolul crescut peste valorile normale este un factor de risc
important care anun, uneori cu ani nainte, dezvoltarea unor boli
cardiovasculare (cardiopatia ischemic) i cerebrale (accidentul
vascular cerebral - AVC).
Colesterolul este transportat la nivelul esuturilor, cuplat cu
apoproteinele, sub form de lipoproteine de tip:
o HDL-colesterol (colesterol bun pentru c este cel
responsabil de extragerea colesterolului din esuturi i
transportul acestuia la nivelul ficatului unde poate fi degradat
126
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului lipidic 2010

sau convertit n ali metabolii, cu reducerea deci a nivelului


su plasmatic) i
o LDL-colesterol (colesterol ru pentru c este cel ce
aprovizioneaz esuturile cu colesterol), riscul de apariie al
plcilor de aterom depinznd mai ales de raportul dintre cele
dou forme de colesterol;
Dou plante folosite mult drept condimente au proprietatea de a
scdea semnificativ colesterolul: usturoiul i cimbrul. Dintre fructe,
merele iar dintre animale, petele este cel mai important aliment care
scade riscul apariiei plcilor de aterom;
Calea principal de excreie a colesterolului este bila n care, alturi
de colesterol (cea mai mare parte neesterificat), se afl i acizi
biliari (produi de degradare ai colesterolului)
Colesterolul se elimin sub forma de coprostanol i ali compui
derivai (rezultai sub aciunea enzimelor intestinale), sau, in procent
mic, sub form de acizi biliari secundari (doar aceia care scap
circuitului hepato-entero-hepatic).
Recomandri pentru determinarea colesterolului
o screening-ul factorilor de risc n boala coronarian
o screening-ul i monitorizarea dislipidemiilor primare i secundare
o evaluarea riscului de ATS

2. Principiul metodei
A. Colesterol total
Principiul are la baz o metod enzimatic, colorimetric.
Esterii de colesterol sub aciunea colesterol esterazei sunt clivai la
colesterol liber i acizi grai. Colesterolul liber este apoi oxidat sub aciunea
catalitic a colesterol oxidazei la delta-4-colestenon i ap oxigenat,
aceasta din urm, n prezena fenolului i a 4-aminofenazonei, formnd sub
aciunea peroxidazei un compus colorat, care poate fi fotocolorimetrat.

Col esteraza
Colesterol esterificat + H2O Colesterol + RCOOH
Col oxidaza
Colesterol +O2 Delta-4-colestenon + H2O2
Oxidaza

127
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului lipidic 2010

Peroxidaza
2 H2O2 + 4-AP + fenol Compus colorat + 4 H2O

B. LDL colesterol
Detergent
Esteri de colesterol-LDL Colesterol + AGL
Colesterol esteraza
Colesterol oxidaza
LDL-Colesterol + O2 4-colestenona +H2O2

Peroxidaza
2 H2O2 + 4-aminoantipirina Compus colorat + H2O + H+

C. HDL colesterol
PEG-colesterol
Esteri de HDL-colesterol + H2O esteraza HDL-Col + RCOOH

PEG-colestererol
oxidaza
HDL-Colesterol + O2 4-colestenona + H2O2

2 H2O2+4-aminoantipirina+ HSDA+H2O + H+ Compus colorat+5H2O

3. Reactivi
Colesterol total
Reactiv1 (R1)
Tampon PIPES, pH=6,9 90 mmol/L
Fenol 26 mmol/L
Reactiv2 (R2)
Colesterol esteraz 300 U/L
Colesterol oxidaz 300 U/L
Peroxidaz 1.250 U/L
4-aminoantipirina 0,4 mmol/L
Standard
Colesterol 5,17 mmol/L
LDL-Colesterol
Reactiv1 (R1)
128
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului lipidic 2010

Tampon MOPS,pH=6,5 20,1mmol/L


HSDA 0,96mmol/L
Ascorbat oxidaza (Eupenicillium spp) 50kat/L
Peroxidaza (horseradish) 167kat/L
Conservant
Reactiv2 (R2)
Tampon MOPS,pH=6,8 20,1mmol/L
MgSO47H2O 8,11mmol/L
4-aminoantipirina 2,46mmol/L
Colesterol esteraza (Pseudomanas spp) 50kat/L
Colesterol oxidaza (Brevibacterium spp) 33,3kat/L
Peroxidaza (horseradish) 334kat/L
Standard
Colesterol liber i esterificat 1 mmol/L
HDL-Colesterol
Reactiv1 (R1)
MOPS 30 mmol/L
Clorura de magneziu 2 mmol/L
EMSE 0,3 g/L
Reactiv2/a (R2/a)
MOPS 30 mmol/L
Reactiv2/b (R2/b)
PEG-colesterol esteraza (Pseudomonas spp) 1 kU/L
PEG-colesterol oxidaza (Streptomyces spp) 5,6 kU/L
POD 30 kU/L
4-aminofenazona 0,5 g/L
Standard de colesterol

4.Modul de lucru
Proba : Ser sau plasm heparinizat
A. Colesterol total:
Se realizeaz un amestec de reactivi, R1 + R2, prin dizolvarea flaconului de
reactiv 2 (R2) n cantitatea corespunztoare de reactiv 1 (R1). Se folosesc 3
eprubete: prob, standard i martor.

129
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului lipidic 2010

Reactiv P(l) St(l) M(l)


Am. Reactivi 1000 1000 1000
Ap distilat - - 10
Standard - 10 -
Proba 10 - -

Dup amestecare i incubare timp de 10 minute la 37C se citete valoarea


absorbanei probei i a standardului la 505 nm (500-550nm), n cuve de 1
cm, fa de martor.
Mod de msurare: cu punct final.
Calcul:
(Aprob/Astandard) Cst = mg/dl Colesterol
Cst = 5,17mmol/L (200 mg/dl) = concentraia standardului

B. LDL-Colesterol
- ntr-o eprubet de centrifug se msoar 1 ml reactiv R1 i dup 5
minute la rece se adaug 50 l ser;
- se incubeaz 30 minute la 2-8C dup care se centrifugheaz 5 minute la
4.000 rot/min;
- supernatantul se decanteaz i peste precipitat se adaug 500 l de
reactiv R2, determinarea se va face din soluia astfel obinut.

Reactiv P(l) St(l) M(l)


Am. Reactivi 1000 1000 1000
Ap distilat - - 100
Standard - 100 -
Proba 100 - -
Dup amestecare i incubare timp de 5 minute la 37C se citete valoarea
absorbanei la 500 nm, n cuve de 1 cm fa de martor.
Mod de msurare: cu punct final.
Calcul:
(Aprob/Astandard) Cst = mg/dl LDL-colesterol
Cstconcentraia standardului = 1mmol/L (83,7 mg/dl)
Rezultatul se va nmuli cu 10 datorit dilurii probei prin precipitare i
dizolvare.

130
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului lipidic 2010

C. HDL-Colesterol
Se folosesc 3 eprubete: prob, standard (n care se introduce calibratorul),
martor.

Reactiv P(l) St(l) M (l)


Ap distilat - - 3
Standard - 3 -
Proba 3 - -
R1 300 300 300
Se amestec i se incubeaz 5 minute la 37C
R2 100 100 100
Se amestec i se incubeaz 5 minute la 37C

Se citete valoarea absorbanei fa de martor la 600 nm.


Mod de msurare: cu punct final.
Calcul:
(Aprob/Astandard) Cst x Factor de diluie = mg/dl HDL-colesterol
Cstconcentraia standardului

5. Valori de referin
Colesterol total: 160 - 200 mg/dl
Valori de alert clinic >300mg/dL
LDL-Col: < 120 mg/dL
HDL-Col: valori diferite
Brbai: 40-70 mg/dL
Femei: 40-85 mg/dL
Valori de alert clinic <40 mg/dl - se asociaz cu risc crescut de
boal coronarian

6. Variaii patologice
Valori crescute
fiziologic n sarcin
hipercolesterolemia familial
hiperlipoproteinemia tip I, IV
tulburri ale metabolismului lipidic:

131
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului lipidic 2010

diabet (prin degradarea excesive ale acizilor grai n scop


energetic, datorit imposibilitii metabolizrii glucozei,
principala surs de energie)
obezitate
ateroscleroza
dup administarea unor medicamente: corticosteroizi,
anticoncepionale
inaniie total care induce cetoza
alcoolism
obstrucie biliar: (prin precipitarea colesterolului n jurul unui
nucleu format din proteine i bilirubin), de diferite cauze:
o calculi, carcinom (tumor malign) de duct
o ciroza colangiolitic
o ciroza biliar
o colestaz
hipotiroidism (concentraia colesterolului n ser este invers
proporional cu activitatea glandei tiroide);
insuficiena renal cronic - IRC (defect de 1 hidroxilaza)
sindrom nefrotic
diabet zaharat (mai ales cel decompensat)
cancer de pancreas sau prostat
regim alimentar bogat n grsimi i colesterol
O cretere semnificativ a valorilor lipidelor serice reprezint un factor de
risc pentru ATS (ateroscleroza). Creterea HDL i scderea raportului
ColTOTAL/HDL aduce un plus de protecie impotriva ATS i a altor afeciuni
coronariene.

Valori sczute
hipo sau abetalipoproteinemie (deficien de apoprotein)
afeciuni hepatice severe (ciroz, insuficienta hepatic - prin defect
de sintez);
hipertiroidism
malnutriie, malabsorbie
infecii severe (tuberculoz, endocardit, pneumonii, febra tifoid)
arsuri severe, inflamaii
tratamente cu cortizon i ACTH
dup administrarea unor ageni sau medicamente hepatotoxice
(tetracicline, eritromicina) sau care blocheaz sinteza (androgeni)

132
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului lipidic 2010

7. FUNDAMENTE BIOCHIMICE
Colesterolul este un alcool policiclic de care se leag acizii grai,
ntlnindu-se n aproape toate alimentele de origine animal;
Este transportat prin snge cuplat cu proteinele, sub form de
complexe numite lipoproteine;
Colesterolul este util n structura membranelor celulare, i n
sinteza de vitamin D, acizi biliari i hormoni sexuali;
Odat cu creterea nivelului seric al colesterolul, acesta se
depune pe vasele de snge, ceea ce duce la rigidizarea i
ngustarea progresiv a arterelor - ATS, mergnd pn la
fenomene de ischemie i necroz infarct;
Este un factor de risc important pentru bolile cardiovasculare i
cerebrale;
Riscul de apariie al plcilor de aterom depinde mai ales de
raportul dintre HDL-colesterol i LDL-colesterol.

8. MCQ

Col 1 Care din urmtoarele afirmaii NU este adevrat:


A. ntlnim valori sczute ale trigliceridelor n
hipertiroidism
B. HDL-colesterolul reprezint fracia bun a
colesterolului
C. valoarea trigliceridelor variaz n funcie de alimentaie
D. LDL-colesterolul este colesterolul care ofer protecie
mpotriva bolii aterosclerotice
E. n sarcin sunt ntlnite niveluri ridicate ale colesterolului
i trigliceridelor
Col 2 Nivelul colesterolului crete n snge, n urmtoarele condiii:
A. boli pancreatice
B. hipertiroidism
C. alcoolism
D. anemie cronic
E. leziuni hepatocelulare severe

133
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului lipidic 2010

Col 3 Determinarea colesterolului este recomandat n:


A. boala coronarian
B. dislipidemii
C. anemii
D. infecii respiratorii
E. arsuri
Col 4 Care din urmtoarele afirmaii este adevrat:
A. valori ale HDL-Colesterolului < 40 mg/dl se asociaza cu
risc crescut de boala coronarian
B. se ntlnesc valori mai mici ale colesterolului cu pn la
8% iarna dect vara
C. trigliceridele sunt sintetizate n adipocite
D. valori de peste 200 mg/dl ale trigliceridelor i a
colesterolului asigur protecie n boala coronarian
E. malabsorbia este o cauz de hipertrigliceridemie
Col 5 Urmatoarea afirmatie NU este adevarat:
A. sarcina determin creteri ale nivelului seric al
colesterolului i a trigliceridelor;
B. pierderea ponderal conduce la scderea definitiv a
nivelului seric de trigliceride;
C. dieta produce modificri ale nivelurilor serice abia dup o
perioad de 3 sptmni;
D. infeciile severe conduc la creterea nivelului seric al
colesterolului;
E. nici un rspuns corect
Col 6 Care din urmtoarele afirmaii NU este fals:
F. colesterolul circul liber prin snge
G. dieta bogat n grsimi conduce la scderea nivelului
colesterolului
H. valorile ridicate de LDL-colesterol protejeaz pereii
vaselor de snge de plcile de aterom
I. colesterolul este transportat n organism legat de proteine
transportoare
J. colesterolul are ca surs unic, aportul crescut de
alimente vegetale
Col 7Scderea nivelului seric de colesterol este datorat:
A. depunerii acestuia pe pereii vaselor de snge
B. unui regim igieno-dietetic optim
134
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului lipidic 2010

C. obezitate
D. hipertiroidism
E. malnutriie
Col 8 Care din urmtroarele afirmaiii sunt false:
A. raportul dintre HDL i LDL-colesterol n favoarea HDL-
colesterolului nu este de dorit
B. la menopauz colesterolul scade datorit lipsei hormonului
estrogen
C. raportul dintre HDL i LDL-colesterol n favoarea LDL-
colesterolului reprezint un factor protector mpotriva
aterosclerozei
D. motenirea genetic nu are nici o influen asupra
nivelurilor colesterolului seric
E. alimentele cu coninut crescut n grsimi saturate sunt
indicate n dieta pacientului hipercolesterolemic
Col 9 Nivelul crescut de colesterol n plasm poart numele de:
A. colestaz
B. ateroscleroz
C. hipercolinesteraz
D. hipercolesterolemie
E. hipercolestaz
Col 10 Care dintre urmtoarele molecule NU reprezint produi de
metabolism ai colesterolului?
A. acizi biliari
B. vitamina D
C. hormoni tiroidieni
D. hormoni sexuali
E. testosteron

135
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului lipidic 2010

6.3. DOZAREA CORPILOR CETONICI

1. Consideraii generale
Corpii cetonici se formeaz n cantiti mici, n cadrul proceselor
fiziologice din organism, n ficat (mitocondriile hepatice). O parte
din acetia se elimin prin urin iar o alt parte este utilizat n
neosinteze, de obicei n sinteza glucidelor. Acumularea n exces a
corpilor cetonici ns apare ca o consecin a unei catabolizri
defectuoase a acizilor grai.
n cadrul metabolismului lipidic, n urma degradrii trigliceridelor se
formeaz glicerol i acizi grai liberi, acetia din urm fiind supui
ulterior proceselor de degradare cu formare de cantiti mari de acetil
coenzim A (CH3-CO~SCoA). Cnd moleculele de acetil coenzima
A sunt in exces i depesc capacitatea de transformare n cadrul
ciclului Krebs (calea comun de degradare a proteinelor, glucidelor
i lipidelor) prin lipsa echimolecular a oxalacetatului, se formeaz
corpii cetonici. Acetia sunt: acetoacetatul, acidul beta-
hidroxibutiric i acetona, formai n mitocondriile hepatocitelor.
Cantitile fiziologice de corpi cetonici sintetizai n mod normal n
celulele hepatice sunt relativ mici i, dei se elimin prin urin nu
sunt pui n eviden prin testele uzuale.
In situaii patologice, corpii cetonici apar n urin n cantiti
decelabile, n condiii unei degradri n exces a acizilor grai,
cauzate de:
o alterarea metabolismului carbohidrailor, care oblig
organismul la degradarea excesiv a lipidelor, n nercarea de
a obine energia pe care altfel, ar fi procurat-o din
metabolizarea glucidelor; degradarea unor cantiti mari de
lipide i consecutiv a acizilor grai rezultai din acestea, vor
conduce la formarea de molecule de acetil coenzim A n
exces, depind astfel potenialul de metabolizare a acestora
n cadul ciclului Krebs; acumularea acestor molecule va
induce condensarea lor i producia crescut de corpi
cetonici. Aceste situaii se ntlnesc n:
aport sczut de glucide (inaniie),

136
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului lipidic 2010

incapacitatea organismului de a metaboliza glucoza


(n diabet zaharat, din cauza insulino-rezistenei i
insulino-dependenei),
pierderi (vrsturi, diaree prelungite),
creterea necesitilor metabolice (hipertiroidie,
sarcin, lactaie, boli acute, efort fizic intens) (n
condiiile unei cantiti insuficiente de carbohidrai la
nivel celular, se metabolizeaz o cantitate crescut de
lipide, care duce, n final la formarea corpilor
cetonici).
o diete bogate n grsimi
Compuii care pot conduce la formarea corpilor cetonici se numesc
substane cetoformatoare. Dintre acestea, amintim:
o aminoacizii cetoformatori (leucin, tirozin, fenilalanin)
o lipidele
o alcoolul etilic
Corpii cetonici se acumuleaz n snge - cetonemie iar apoi sunt
eliminai prin urin -cetonurie. Corpii cetonici acumulai n snge
pot determina o acidoz metabolic (pH-ul sngelui este mai mic
dect normal), numit cetoacidoz.
n majoritatea cazurilor, strile de acidoz provocate de corpii
cetonici, sunt trectoare, i dispar dac se nltur cauza.
Cetoacidoza diabetic ns poate fi inut sub control prin tratament
i diet. Aceasta apare din cauza incapacitii celulelor de a folosi
glucoza ca urmare a insulinodeficienei i insulinorezistenei
caracteristice diabetului zaharat. Cetoacidoza diabetic constituie o
urgen medical deoarece n stadiile avansate poate surveni decesul.
Recomandri pentru determinarea corpilor cetonici:
screening pentru cetoacidoz
suspiciune de insulinom
monitorizarea echilibrului metabolic n decompensrile
diabetului

2. Principiul metodei
Testul Legal: acidul acetoacetic i acetona reacioneaz cu
nitroprusiatul de sodiu i glicina, formnd un compus colorat n violet.
Reacia este specific numai pentru cei 2 corpi cetonici, acidul -
hidroxibutiric nefiind detectat.

137
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului lipidic 2010

3. Mod de lucru
Proba: Urin
Se imerseaz stripul n urin timp de o secund, dup care se introduce
n analizor; rezultatele apar n 60-120 secunde.
Determinarea corpilor cetonici urinari este un test calitativ care se
noteaza cu - (minus sau abseni) sau cu (+) - (+++) (de la 1 la 3 plusuri).

4. Valori de referin:
corpii cetonici sunt abseni n urin (testele uzuale de determinare
calitativ nu detecteaz prezena acestora)
1,5-3,5 mg/dl (n urma determinrilor cantitative)

5.Variaii patologice
Cetonuria apare frecvent n:
o boli metabolice: diabet zaharat, glicozurie renal,
glicogenoz
o modificri ale dietei normale: inaniie, anorexie
o creterea necesitilor metabolice: hipertiroidie, sarcin,
lactaie, boli acute, boli febrile, stress sever, efort fizic intens
(la sportivii de performan)
o dup anestezie cu eter sau cloroform
Limite i interferene:
urina pstrat mult timp scade nivelul de corpi cetonici prin
volatilizare
unele medicamente (fenilcetona, penicilamina i captoprilul) scad
nivelul de corpi cetonici din urin.

6. FUNDAMENTE BIOCHIMICE
Corpii cetonici sunt compui formai prin condensarea moleculelor
de acetil coenzim A atunci cnd aceste molecule se formeaz n
exces (de regulprin degradarea excesiv a acizilor grai), i
depesc capacitatea ciclului Krebs de a le metaboliza.
Se sintetizeaz n mitocondriile din ficat, i sunt n numr de trei:
Acetoacetat
Beta hidroxi butirat
Acetona

138
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului lipidic 2010

In mod normal, sunt produse cantiti relativ mici de corpi


cetonici, i doar o parte dintre acetia se elimin prin urin, nefiind
astfel pui n eviden prin testele uzuale.
In situaii patologice, corpii cetonici apar n urin n cantiti
decelabile, n condiii unei degradri n exces a acizilor grai,
cauzate fie de defect n metabolismul glucidic, fie prin exces de
aport al grsimilor din alimentaie.
Corpii cetonici se acumuleaz n snge - cetonemie iar apoi sunt
eliminai prin urin -cetonurie. Corpii cetonici acumulai n snge
pot determina o acidoz metabolic (pH-ul sngelui este mai mic
dect normal), numit cetoacidoz.
La pacienii diabetici, cetoacidoza constituie o urgen medical,
modificrile de pH fiind uneori dramatice, lipsa ameliorrii
eficiente i n timp util a acestuia putnd fi fatal.

7. MCQ

CC1 Corpii cetonici:


A. sunt prezeni n urin, la toi pacienii sntoi (n urma
determinrilor calitative)
B. se pot detecta n urin la pacienii cu o cantitate excesiv de
proteine la nivel celular
C. sunt markerii unei afeciuni pulmonare
D. apar n urin n condiiile unei degradri n exces a acizilor
grai
E. nu apar n urin n afeciuni precum diabetul zaharat

CC2 Care dintre urmtoarele afirmaii NU este adevrata?


A. corpii cetonici pot fi prezeni n urin, n urma determinrii
cantitative
B. testul Legal detecteaz acetoacetatul, acidul beta-
hidroxibutiric i acetona
C. corpii cetonici se formeaz n mitocondriile hepatocitelor
D. n aport sczut de carbohidrai, corpii cetonici ating valori
foarte sczute n urin
E. corpii cetonici pot fi pui n eviden printr-o reacie de
culoare, n urma creia se formeaz un compus violet

139
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului lipidic 2010

CC3 Urmtoarele afirmaii sunt false, CU EXCEPIA:


A. corpii cetonici sunt prezeni n urin la pacienii sntoi n
urma determinrilor calitative
B. acidul acetoacetic i acetona nu pot fi detectai n urin prin
testul Legal
C. pentru detectarea corpilor cetonici n laborator, se imerseaz
stripul n urin timp de o secund i apoi se introduce n
analizor
D. corpii cetonici se formeaz n condiiile unei cantiti
insuficiente de lipide la nivel tisular
E. cele trei tipuri de corpi cetonici sunt acetoacetatul, acidul
beta-hidroxibutiric i acetona

CC4 Determinarea corpilor cetonici este recomandat n urmtoarele


cazuri, CU EXCEPIA:
A. screening pentru cetoacidoz
B. cnd se testeaz prezena unui insulinom
C. screening pentru cancerul bronhopulmonar
D. n identificarea unor disfuncii renale sau metabolice
E. n inflamaii, ca reactani de faz acut

CC5 Cauza apariiei corpilor cetonici este:


A. alterarea metabolismului carbohidrailor
B. diete bogate in grasimi
C. aport alimentar excesiv de proteine
D. degradare incomplet a aminoacizilor eseniali
E. alterarea metabolismului acizilor nucleici

CC6 Cetonuria apare n urmtoarele situaii, CU EXCEPIA:


A. diabet zaharat
B. inaniie
C. hipertiroidie
D. febr
E. diabet insipid

CC7 Mecanismele care duc la apariia corpilor cetonici sunt urmtoarele,


CU EXCEPIA:
A. aport sczut de carbohidrai (inaniie)
B. incapacitatea organismului de a metaboliza glucoza (n diabet
zaharat)
140
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului lipidic 2010

C. aport masiv de carbohidrai


D. pierderi de carbohidrai prin vrsturi, diaree prelungite
E. creterea necesitilor metabolice ( n hipertiroidie, sarcina,
lactaie)

CC8 Urmtoarele afirmatii NU sunt adevrate, CU EXCEPIA:


A. corpii cetonici reprezint produii finali de degradare ai
carbohidrailor
B. acetona este precursorul acizilor grai
C. acetoacetatul si acetona sunt mai specifici dect
betahidroxibutiratul pentru screeningul cetoacidozei
D. corpii cetonici apar numai n diabetul insulino-necesitant
E. bolile acute, stresul sever, efort fizic intens pot determina
apariia cetonuriei

CC9 Urmtoarele afirmaii sunt adevrate, CU EXCEPIA:


A. medicamentele (captopril, penicilamina, metformin) scad
nivelul corpilor cetonici urinari
B. anestezia cu eter poate determina apariia cetonuriei
C. febra i inaniia pot crete corpii cetonici urinari
D. corpii cetonici se formeaz n intestin n urma catabolismului
proteinelor
E. determinarea corpilor cetonici reprezint metoda gold-
standard n diagnosticul diabetului zaharat

CC10 Urmtoarele afirmaii sunt false, CU EXCEPIA:


A. urina pstrat mai mult timp crete nivelul corpilor cetonici
(prin volatilizare)
B. urina pstrat timp indelungat scade nivelul corpilor cetonici
(prin volatilizare)
C. corpii cetonici sunt reprezentai de acetoacetat, beta-
hidroxibutirat i fenilceton
D. cetonuria apare prin prezena n exces a oxalacetatului
E. corpii cetonici apar n condiiile unei cantiti insuficiente de
carbohidrai la nivel celular

141
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului proteic 2010

CAPITOLUL 7
Explorarea metabolismului proteic

7.1. analiza cantitativ i calitativ


a proteinelor in ser

1.Consideraii generale

Proteinele totale reprezint suma diferitelor tipuri de proteine, dintre


care multe variaz independent una de cealalt.
Proteinele sunt prezente n toate fluidele corpului ns sunt normal
prezente n concentraii ridicate doar n plasm, limf i unele
exudate.
Electroforeza proteinelor serice este un test ce msoar proteinele
specifice din snge i este folosit pentru a evalua, diagnostica i
monitoriza o varietate de boli i condiii.
Proteinele sunt astfel separate n 5 fracii distincte ce poart numele
de fraciii proteice: *albumina, cu rol de transportor al diferitelor
substane prin snge, cu rol n creterea tisular i procesul de
vindecare i n meninerea volemiei *alfa 1 globulina, o protein cu
densitate mare *alfa 2 globulina, una din funcii este de a lega
hemoglobina *beta globulina, care ca i albumina are rol de
transportor avnd rol i n lupta contra infeciilor *gamaglobulina
care ajut sistemul imun n prevenia i lupta contra infeciilor.
Albumina, este produs n ficat, reprezint aproape 60% din
proteinele din snge, iar globulinele reprezentnd restul de 40%. n
afara imunoglobulinelor i a ctorva proteine complementare,
majoritatea globulinelor sunt produse n ficat.
Scderea proporiei de albumine duce la o cretere relativ a
proporiei de globuline.
Creterea real a globulinelor serice se ntlnete ntr-o serie de boli
microbiene acute i cronice, n bolile virotice i parazitare, n bolile
de ficat i de rinichi, n bolile tumorale, n reumatism, boli de snge,
dup vaccinri.

142
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului proteic 2010

n unele boli pot s creasc numai anumite fraciuni ale globulinelor


aa cum se ntmpl n hepatita cronic, cnd cresc mult gamma-
globulinele i imunoglobulinele A (Ig A).
Dup tratamentul cauzei care a produs perturbarea fraciunilor
proteinice, valorile electroforezei serului revin la normal.
Recomandri pentru determinarea proteinelor
o Determinarea concentraiei proteinelor totale este util n condiii
ce in de modificri ale volumului plasmatic sau volemiei
precum starea de oc sau deshidratare.
o n aceste cazuri concentraia proteinelor serice totale este
crescut indicnd hemoconcentraie.
o Hemodiluia este caracterizat ca o hipoproteinemie relativ, ce
apare n intoxicaia cu ap sau sindromul de retenie de sare.
o Evaluarea statusului nutriional
o Investigarea sindroamelor edematoase
o Electroforeza proteinelor este efectuat cnd: se investigheaz
simptome ce sugereaz prezena mielomului multiplu: dureri de
oase, anemie, oboseal, fracturi inexplicabile i infecii recurente
o In cazul produciei de proteine monoclonale care pot fi urmare a
gamapatiei monoclonale cu semnificaie nedeterminat
o Atunci cnd simptomatologia clinic indic o afeciune
inflamatorie
o Boli autoimune, infecie acut sau cronic
o Dereglri ale funciei renale, hepatice sau pierderi de proteine

2. Principiul metodei
Proteine totale serice
Testul este unul colorimetric i are la baza reacia cuprului divalent cu
legturile peptidice ale proteinelor ntr-un mediu alcalin. Tartratul de sodiu
i potasiu previn precipitarea hidroxidului de cupru i a iodurii de potasiu
mpiedicnd astfel autoreducerea cuprului.

Soluie alcalin
2+
Proteine + Cu Cu complex proteic

Intensitatea culorii este direct proporional cu concentraia proteic, care


poate fi determinat spectrofotometric.

143
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului proteic 2010

Electroforeza proteinelor serice:


Are la baz migrarea n cmp electric a proteinelor n funcie de greutatea
lor molecular i evaluarea concentraiei componenilor prin metoda
fotometric.

3. Reactivi
Reactiv:
Hidroxid de sodiu 3,8 mmol/L
Sulfat de cupru 30 mmol/L
Tartrat de sodiu si potasiu 100 mmol/L
Iodur de potasiu 30 mmol/L
Standard:
Albumina bovin

4. Mod de lucru
Proba: Ser nehemolitic
Limite i interferene - hemoliza poate determina false creteri

Reactiv P(l) St(l) M(l)


Ap distilat - - 10
Standard - 10 -
Proba 10 - -
Reactiv 1000 1000 1000

Dup amestecare i incubare timp de 10 minute la 25-37C se citeste


valoarea absorbantei probei i standardului la 546 nm (530-580 nm), fa de
martor.
Mod de msurare: cu punct final.
Calcul:
Cprob = (Aprob/Astandard) Cstandard
Cconcentraia standardului

5.Valori de referin
Aduli: 65 85 g/L

144
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului proteic 2010

Intervalul de referin pentru fraciunile proteice dup electroforeza


proteinelor :

Fraciunea proteic a serului Procent (%)


Albumine 58-70
Globuline 30-42
din care:
alfa-1-globuline 1.0 2.6
alfa-2-globuline 7.2 11.8
beta 1-globuline 5.6 9.1
beta 2-globuline 2.2 5.7
gamma-globuline 6.2 16.5

Electroforeza - Metod de analiz calitativ a proteinelor


Electroforeza furnizeaz valori procentuale ale celor cinci fracii
proteice, concentraia absolut a acestora calculndu-se n funcie de nivelul
proteinele serice totale.
Dup ncrctura electric i mas molecular, fraciunile proteice migreaz
diferit (cel mai departe migreaz albuminele), cele cinci fraciuni fiind:
albuminele, alfa1 globulinele, alfa2 globulinele, beta globulinele, gama
globulinele.
Euproteinemie atunci cnd valorile fraciilor proteice separate prin
electroforez nregistreaz valori normale. Disproteinemiile modificri n
nivelul fraciilor proteice, cele mai frecvente constnd n scderea
serumalbuminelor i cresterea globulinelor.
Albuminele:
Valori normale: 60% din proteinele totale
Hipoalbuminemiile pot apare prin:
o defect de sintez afeciuni hepatice
o catabolism crescut hepatite acute, hepatite cronice,ciroze, diabet,
neoplazii, denutriie
o pierderi pe cale renal (nefroza lipoidic, sindroame nefrotice,
tumori renale, amiloidoza)

145
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului proteic 2010

o hemoragii masive, arsuri


Hiperalbuminemiile: sunt foarte rare
Serumglobulinele
Valori normale - aproximativ 40% din totalul proteinelor.
Printr-un mecanism de reglare invers, cresterea unei fractiuni a proteinelor
plasmatice, determin scaderea corespunztoare a celorlalte fraciuni si
invers.
Hiperglobuliniile sunt de tip reactiv, determinate de boli infecioase acute
sau cronice i de tip compensator, cnd sinteza albuminelor este deficitar
(hepatopatii).
Hipoglobulinemiile consecina diminurii sintezei prin deficit de factori
alimentari, sau dup iradieri, radioterapie, boli congenitale sau dobndite
(agama sau hipogamaglobulinemie), pierderi consecutive unor arsuri grave.
1 globulinele: (valori normale 1 - 2,6 %)
Scad in etilism cronic i icter hemolitic.
Cresc in- afeciuni inflamatorii acute sau cronice, stress, neoplazii, sindrom
nefrotic
2 globulinele: (valori normale: 7,2 - 11,8%)
Scad in ictere hemolitice i etilism cronic.
Cresc n afeciuni inflamatorii, dnd indicaii asupra intensitii, extinderii si
gravitii procesului inflamator, boli infecioase, RAA reumatism articular
acut, IM infarct miocardic. In poliartrita reumatoid i neoplazii cresc 1
i 2.
globulinele: (valori normale: 8 - 11%)
Cresc de obicei concomitent cu sau globulinele (n mononucleoza
infecioas, hepatite toxice, sindrom nefrotic, hiperlipemii eseniale, i n
afeciuni mai rare ca plasmocitomul cu IgA i macroglobulinemia
Waldenstrom).
globulinele (6,2 - 16,5%)
Cresc n infecii bacteriene, virale, parazitare, boli de colagen, boli
hepatobiliare, macroglobulinemie Waldenstrom, mielom multiplu.

Tabelul urmtor precizeaz cteva dintre situaiile n care electroforeza


proteinelor poate fi util n aprecierea varaiilor patologice ale fraciilor
proteice.

146
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului proteic 2010

Proteina Creteri patologice Scderi patologice


Albumin Deshidratare Malnutriie sau
malabsorbie
Sarcin
Boli renale
Boli hepatice
Inflamatii
Sindromul pierderii de
proteine
Alfa 1 Boli inflamatorii acute sau Emfizem congenital
Globulin cronice (deficien de 1-
antitripsin)
Boli cronice ale ficatului
Alfa 2 Boli renale (Sindromul Hipertiroidism
Globulin nefrotic) Boli grave ale ficatului
Boli inflamatorii cronice sau Hemoliz
acute
Beta Globulin Hipercolesteromia Malnutriie
Anemia feripriv (deficit de Ciroz
fier)
Mielom
Gamma Boli cronice inflamatorii Dereglri genetice
Globulin (Artrit reumatoid de ex) Deficite imunologice
Boli cronice ale ficatului
Infecii acute sau cronice
Mielom multiplu

6. Variaii patologice
Valori crescute pot apare n:
deshidratare i hemoconcentraie datorit pierderilor de fluide;
mielom multiplu, boala Waldenstrm i alte gamapatii;
sarcoidoza i alte boli granulomatoase

147
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului proteic 2010

colagenoze (LES - lupus eritematos sistemic sinteza i


depunere anormal de proteine) i poliartrita reumatoid
boli tropicale (kala-azar, lepra)
alte condiii asociate cu infecii/inflamaii cronice
hipertensiunea arterial
Valori sczute se ntlnesc n:
aport insuficient (inaniie sau malabsorbie);
afeciuni hepatice cronice (ciroz hepatic i alcoolism
cronic, hepatita cronic activ, n special cea indus de
virusul C) prin defectul de sintez de proteine plasmatice
afeciuni renale: glomerulonefrit i sindrom nefrotic (cu
pierderi ale proteinelor prin urin)
insuficiena cardiac
enteropatii cu pierderi de proteine, boala Crohn i colita
ulceroas;
afeciuni dermatologice severe i arsuri
hipotiroidism
Scderea proteinelor totale <4 g/dL poate cauza edeme.

7. FUNDAMENTE BIOCHIMICE

Proteinele totale reprezint suma diferitelor tipuri de proteine


prezente n organism;
Proteinele sunt prezente n toate fluidele corpului fiind
constituieni de baz cu funcii i roluri multiple;
Electroforeza proteinelor serice este un test ce msoar proteinele
specifice din snge i este folosit pentru a evaluarea,
diagnosticarea i monitorizarea unei varieti de boli i condiii;
Proteinele sunt astfel separate n 5 fracii distincte: albumin, alfa
1 globulin, alfa 2 globulin, beta globuline i gamaglobuline;
Albumina, este produs n ficat, reprezint aproape 60% din
proteinele din snge, restul de 40% reprezentnd globulinele, cu
excepia imunoglobulinelor i a ctorva proteine complementare
sunt produse de asemenea n ficat;
Dup tratamentul cauzei care a produs perturbarea fraciunilor
proteinice, valorile electroforezei serului revin la normal.

148
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului proteic 2010

8. MCQ

PT1 Proteinele totale :


A. reprezint suma diferitelor tipuri de proteine
B. sunt reprezentate de fracia globulinic
C. sunt prezente n toate fluidele corpului
D. se elimin renal
E. scad n snge in stri hiperglicemice

PT 2 Care dintre urmtoarele afirmaii referitoare la proteine NU este


adevarat :
A. electroforeza proteinelor este un test calitativ
B. electroforeza proteinelor serice este un test ce msoar
proteinele specifice din snge
C. electroforeza este folosit pentru a evalua, diagnostica i
monitoriza o varietate de boli i condiii
D. n esutul adipos sunt depozitate sub forma de glicerol, acizi
grai i monogliceride
E. pacienii cu colagenoz nregistreaz valori crescute n snge

PT 3 Valoarea normal a proteinelor n ser variaz ntre:


A. 65 85 g/L
B. 10-20 g/L
C. 20 - 40 g/L
D. 100 110 g/L
E. nici o variant corect

PT 4 Care din urmtoarele afirmaii NU este adevrat:


A. proteinele sunt separate n 5 fracii distincte ce poart numele
de fraciii proteice
B. beta globulinele pot nregistra valori crescute n sindroamele
nefrotice
C. fractiile proteice sunt: albumina, alfa1 globulina, alfa2
globulina, beta globulina i gama globulina
D. albumina este fracia care ajut sistemul imun n prevenia i
lupta contra infectiilor
E. gama globulina este fracia care intervine in lupta contra
infeciilor

149
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului proteic 2010

PT 5 Nivelul proteinelor crete n snge, n urmtoarele condiii:


A. deshidratare
B. inaniie
C. afeciuni hepatice cronice
D. ciroza
E. alcoolism

PT 6 Nivelul proteinelor crete n urmtoarele condiii, CU EXCEPIA:


A. mielom multiplu
B. sarcoidoza
C. colagenoze
D. malabsorbie
E. hepatita cronica activa

PT 7 Determinarea proteinelor este recomandat n:


A. stri de soc
B. afeciuni osoase
C. evaluarea statusului nutritional
D. boli autoimmune, infectie acuta sau cronica
E. afeciuni musculare
PT 8 Urmatoarele afirmaii despre electroforez sunt adevarate:
A. este folosit pentru a diagnostica i monitoriza unele
gamapatii
B. prin aceast metod, proteinele plasmatice sunt separate in 3
fracii distincte
C. albumina produs n ficat reprezint aproape 60% din
proteinele din snge
D. electroforeza este un test calitativ
E. cuprinde o etapa in care se realizeaza marcarea proteinelor cu
iod radioactiv
PT 9 Care din urmtoarele afirmaii referitoare la proteine este adevrat:
A. n unele boli pot s creasc numai anumite fraciuni ale
globulinelor
B. reducerea nivelului plasmatic al albuminelor induce creteri
compensatorii ale globulinelor plasmatice
C. albumina este produs n suprarenale
D. albumina reprezint aproximativ 40% din proteinele din
snge
E. malabsorbia este o cauz de disproteinemie
150
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului proteic 2010

PT 10 Urmtoarea afirmaie NU este adevarat:


A. hemoconcentraia datorat pierderilor de fluide conduce la
creterea nivelului proteinelor totale
B. valori crescute ale proteinelor se pot nregistra n
malabsorbie
C. dieta nu poate produce modificri ale nivelelor serice ale
proteinelor
D. infeciile severe conduc la scderea nivelului seric al
proteinelor
E. nici o variant corect

7.2. DOZAREA UREEI

1. Consideraii generale
Ureea este produsul final al procesului de catabolizare al proteinelor.
Proteinele sunt scindate la aminoacizi, care apoi prin dezaminare
formeaz amoniacul (NH3). Fiind toxic, ndeosebi pentru celula
nervoas, acesta este ndeprtat sub form de ion de amoniu (NH4+)
i uree. Pentru a putea fi transportat de la locul de formare la ficat i
rinichi, amoniacul circul legat de acidul aspartic i acidul glutamic.
Producia de uree este astfel o modalitate de detoxifiere a
organismului, o form de a ndeprta o substan toxic.
Sinteza de uree are loc n principal n ficat, dar i esutul n curs de
cretere (esutul embrionar i esutul tumoral au proprietatea de a
forma uree din arginin). n ficat, ciclul de formare al ureei are loc n
5 etape, dintre care 2 mitocondriale i 3 citoplasmatice. Fiecare etap
este catalizat de cte o enzim, astfel nct defectul enzimelor din
etapele 1,2 i 5 duce la un defect n transformarea amoniacului n
uree, cu acumularea acestuia i consecine nefaste la nivel cerebral.
Eliminarea ureei se face n proporie de 90% la nivel renal. Aici ea
nu este reabsorbit activ, nici secretat de ctre tubi, ci este filtrat
liber de ctre glomerul. La nivelul rinichiului normal, ntre 40 i
70% din cantitatea de uree trece pasiv din tubii renali n interstiiu,
pentru a reintra apoi n plasm.
151
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului proteic 2010

Recomandri pentru determinarea ureei


Aceste test este indicat n:
o Diagnosticul i monitorizarea insuficienei renale, acute sau
cronice, ureea mpreun cu creatinina fiind parametri uzuali
pentru urmrirea funciei de filtrare a rinichilor
o Diferenierea ntre azotemia prerenala de cea postrenal, pe
baza raportului uree/creatinin
o Insuficiena renal terminal, deoarece semnele urotoxice se
coreleaz mai bine cu nivelul ureei
o Monitorizarea eficient a hemodializei, la pacienii cu
insuficien renal cronic
o Monitorizarea dietei hipoproteice n insuficiena renal
cronic
o Monitorizarea periodic a pacienilor cu mare risc de boal
renal (diabetici, hipertensivi, aterosclerotici, pacieni cu
antecedente familiale de boala renal, pacieni cu medicaie
cronic potenial nefrotoxic)

2. Principiul metodei
Ureea este principalul produs final azotat rezultat din metabolismul
aminoacizilor.
Determinarea ei n ser, plasm sau urin implic modificri enzimatice,
pe parcursul mai multor reacii. Iniial, ureea este hidrolizat de ureaz la
amoniac (NH4) i dioxid de carbon (CO2). n cea de-a doua reacie,
catalizat de glutamat-dehidrogenaza, amoniacul mpreun cu -
cetoglutaratul se transform n glutamat i apa, cu conversia consecutiv a
coenzimei reduse a acesteia (NADH +H+) n forma oxidat (NAD+).
Variaia absorbantei NADH msurat la 340 nm este proporional cu
formarea de uree.
ureeaz
Uree + H2O 2 NH4+ + CO2
Glutamat-DH
2 NH4+ 2 -cetoglutarat + 2 NADH 2 glutamat + 2 H2O +
2 NAD+

3. Reactivi
Reactiv 1 (R1):
Tampon TRIS, pH=8 80 mmol/L

152
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului proteic 2010

Reactiv 2 (R2):
Ureaz 10 000 U/L
Glutamat-DH 16 000 U/L
NADH 0,3 mmol/L
-cetoglutarat 6,0 mmol/L
Standard:
Standard de uree 8,32 mmol/L

4. Modul de lucru
Proba: Ser nehemolizat/ plasm/ urin diluat cu ap distilat n
proporie de 1:100
Se pregtete amestecul de reactivi (soluia stoc-R): se dizolv prin
agitare coninutul unui flacon de reactiv 1 (R1) n cantitatea corespunztoare
de reactiv 2 (R2).
Pentru fiecare determinare se va prepara standard i prob.
P - proba se introduc:
o Amestec de reactivi (R) 1000 L
o Proba 10 L
S standard, se amestec:
o Amestec de reactivi (R) 1000 L
o Standard 10 L
Dup amestecare i incubare de 30 de secunde la 37oC se citete
valoarea absorbanei (A) la 340 nm, n cuve de 1 cm, fa de ap distilat,
iar peste 60 de secunde se va citi din nou. Se va urmri variaia absorbanei
pe minut (A/min).
Mod de msurare: cinetic (descresctor).
Calcul:
( A prob / A standard ) x n
n concentraia standardului (8,32mmol/L - 50 mg/dL)
n cazul urinei rezultatul se va nmuli cu 100 (factorul de diluie).

5. Valori de referin: 20 45 mg/dl (2-6.5mmol/l)

153
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului proteic 2010

6. Variaii patologice
Ureea este unul din principalii parametri ce oglindesc funcia renal i
efectuarea ei este obligatorie n cadrul oricrui bilan medical, chiar i n
aparent sntate.
O serie de factori extrarenali influeneaz concentraia de uree
circulant, fapt ce limiteaz valoarea ei n evaluarea funciei renale. Acetia
pot fi: *dieta bogat n proteine, *catabolism proteic crescut, *reabsorbia
proteinelor sangvine consecutiv unei hemoragii gastrointestinale, *tratament
cu cortisol sau analogi ai acestuia. n astfel de cazuri nivelul de creatinin se
menine normal, ntruct creatinina depinde exclusiv de masa muscular a
pacientului, nefiind influenat de ali factori. De aceea dozarea creatininei
se efectueaz obligatoriu mpreuna cu analiza ureei, pentru o evaluare
corect a funciei renale.

A. UREEA PLASMATIC
Valori crescute
Creterea nivelului de uree plasmatic conduce la o stare ce se numete
azotemie. n funcie de cauza acesteia i locul unde se produce, azotemia
este de 3 feluri:
PRERENAL (funcional), dat de hipoperfuzia renal,
mecanismele de compensare ale rinichiului fiind depite. Dac starea este
tranzitorie este complet reversibil, odata cu reinstaurarea fluxului sangvin.
Hipoperfuzia sever sau ndelungat poate duce la necroza tubular acut i
azotemie intrinsec. Mecanismele ce duc la azotemia prerenal sunt:
- prin hipovolemie (aport lichidian redus, hemoragii, pierderi
gastrointestinale, pierderi renale excesive, sechestrare n spaii
extravasculare, diabet zaharat cu cetoacidoz)
- prin debit cardiac scazut, n insuficiena cardiac
- prin alterarea perfuziei renale, fie prin vasodilataie sistemic (sepsis
antihipertensive n exces), fie prin vasoconstricie renal
(catecolamine, sindrom hepatorenal)
n toate aceste situaii rinichiul nefiind perfuzat nu va putea filtra ureea,
aceeasta trecnd n totalitate napoi n plasm, ducnd la un nivel peste
normal al acesteia. n plus, n cazul hemoragiilor, reabsorbia proteinelor
sangvine (ce apoi vor fi catabolizate la uree) va duce la creterea valorilor
plasmatice ale ureei.

154
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului proteic 2010

RENAL (intrinsec, parenchimatoas), n care se produce


distrucia glomerulilor renali, cu creterea consecutiv a ureei plasmatice.
Aceasta distrucie are loc n urmtoarele cazuri:
o necroza tubular acut de cauz ischemic (toate cauzele menionate
la azotemia prerenal, care se prelungesc) sau toxic endogen
(eliminare prin urina de mioglobin, hemoglobin substane toxice
pentru tubii renali) sau exogen (etilenglicol, substane de contrast,
aminoglicozide)
o boli glomerulare severe
o obstrucie intravascular (proteine anormale, ca cele din mielom
multiplu, care
o sunt toxice pentru tubii renali)
o boli microvasculare (vasculite sistemice, hipertensiune malign)
o boli macrovasculare (stenoza/tromboza arterei renale, tromboza venei
renale,
o embolism colesterolic)
o pielonefrita acut, glomerulonefrita acut
POSTRENAL (obstructiv), n care se produce obstrucie la
nivel postrenal, fapt ce duce la creterea presiunii n amonte de aceast
obstrucie, cu dilatarea calicelor i pelvisului renal, scderea ratei de filtrare
glomerular i creterea valorii ureei plasmatice. Cauzele sunt acute i au
rsunet major pe ambii rinichii sau pe rinichiul unic. Cauzele de obstrucie
pot fi:
o la nivel ureteral: calculi, cheag de snge, cancer, compresie extern
o la nivelul colului vezical: hiperplazie prostatic, calculi, vezica
neurogen
o la nivelul uretrei: stricturi, valve congenitale
O alt cauz pentru nivelul crescut de uree este creterea catabolismului
proteic n cazul arsurilor, neoplaziilor, febrei, stresului sau a infarctului
miocardic acut. Creatinina rmne neschimbat n aceste cazuri.

Valori sczute
Ureea scade n urmtoarele situaii:
afeciuni hepatice severe de cauz toxic sau infecioas (ureea se
formeaz n ficat, iar cnd acesta este lezat, cantitatea de uree va fi
consecutiv mai mic)
malnutriie (pacientul nemaiconsumnd proteine, cantitatea de uree
scade)

155
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului proteic 2010

malabsorbie (proteinele consumate nu se mai absorb, cantitatea de


uree scade)
acromegalie
hormoni anabolizani
B. UREEA URINAR
Valori crescute
Excreia urinar de uree depinde de regimul alimentar, crescnd ntr-un
regim bazat pe proteine i scznd n dietele vegetariene i hipercatabolism
protidic endogen i exogen.
Valori sczute
o insuficiena renal acut sau cronic (rinichii sunt blocai i nu mai
elimin ureea)
o insuficiena hepatic decompensat (ficatul fiind sever lezat, nu mai
poate sintetiza uree)

7.FUNDAMENTE BIOCHIMICE

Ureea reprezint produsul final de degradare al proteinelor;


este o form de detoxifiere a organismului, deoarece sub form
de uree se elimin amoniacul (toxic cerebral)
creterea nivelului de uree plasmatic se numete azotemie
azotemia este de 3 feluri:
prerenal prin scderea perfuziei renale, ce inactiveaz
funcia de filtrare a rinichiului (hemoragie, diaree, vrsturi,
insuficiena cardiac)
renal prin distrugerea esutului renal de cauz
inflamatorie , ischemic sau toxic
postrenal prin obstrucia cilor postrenale (ureter, col
vezical, uretr), ce duce la imposibilitatea eliminrii ureei
sinteza ureei are loc n ficat n cadrul unui ciclu de 5 reacii,
catalizate fiecare de ctre o enzim specific
eliminarea se face pe cale renal prin filtrare

156
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului proteic 2010

8. MCQ

U1 Ureea este produsul final al metabolismului:


A. purinelor
B. proteinelor
C. hematiilor
D. hepatocitelor
E. glucozei

U2 Principalul loc de sintez al ureei n organismeste:


A. rinichi
B. creier
C. muchi
D. ficat
E. snge
U3 Printre esuturile la nivelul crora poate avea loc formarea ureei se
numr:
A. creierul
B. esuturile n curs de cretere
C. ficatul
D. muchii
E. rinichii

U4 Moleculele ce pot transfera amoniacul prin snge, ctre esuturile


care mai apoi l vor converti n uree i amoniu (forma sub care putem
elimina NH3) sunt:
A. acidul acetic
B. acidul glutamic
C. acidul oleic
D. acidul aspartic
E. acidul uric
F.
U5 Care din urmtoarele afirmaii referitoare la uree NU este adevarat?
A. se elimin n principal pe cale renal
B. este o form de detoxifiere a organismului
C. este produsul final al metabolismului purinelor
D. sinteza are loc n ficat
E. este transportat prin snge de acidul aspartic i acidul
glutamic
157
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului proteic 2010

U6 Cum se numete creterea peste normal a ureei plasmatice?


A. uricemie
B. azotemie
C. leucemie
D. amoniemie
E. deshidratare

U7Creterea nivelului plasmatic de uree se numete azotemie i poate fi:


A. postrenal
B. hepatic
C. prerenal
D. renal
E. cerebral

U8 Dintre urmtoarele situaii NU sunt cauze de azotemie prerenal:


A. glomerulopatie membranoas
B. hemoragie
C. insuficiena cardiac
D. pielonefrita
E. vasculita sistemic

U9 Menionai care din urmtoarele situaii sunt cauze de azotemie


postrenal:
A. hemoragie
B. stenoza de ven renal
C. hiperplazie prostatic
D. diaree cronic
E. calculi ureterali

U10 Care din urmtoarele situaii sunt cauze de azotemie renal?


A. mioglobinurie
B. hemoragie
C. insuficiena cardiac
D. mielom multiplu
E. tromboza de arter renal

158
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului proteic 2010

7.3. DOZAREA CREATININEI

1. Consideraii generale
Creatinina este un compus azotat, sintetizat aproape exclusiv la
nivel muscular (printr-o reacie nonenzimatic, dintr-un precursor
macroergic numit creatinfosfat) i care se elimin prin urin.
Creatina, fosfo-creatina i creatinina sunt compui azotai,
obtinui prin metabolizarea a trei aminoacizi (Met, Gly, Arg).
Aceti aminoacizi interacioneaz, (prin doua reacii, de
transamidinare i transmetilare, la nivel renal i respectiv hepatic)
i formeaz mai nti creatina, precursor apoi pentru fosfocreatin -
compus macroergic sintetizat in muchi (prin fosforilarea creatinei
catalizat de creatin kinaza), cu rol n furnizarea energiei necesare
contraciei musculare.
Ultimul din cei trei compui azotai sintetizai din aminoacizii
menionai, este creatinina care, reprezint forma de eliminare a
creatinei din organism, o alta modalitate de a indeparta compuii
azotai.
Creatinina se formeaz atunci cnd energia stocat n fosfocreatin
- compus macroergic muscular - este solicitat pentru nevoi
metabolice, avnd loc astfel scindarea acesteia pana la creatinin.
Cantitatea de creatin convertit in creatinin este constant i n
raport direct cu masa de esut muscular a organismului. La barbai
1.5% din stocul de creatin este convertit zilnic in creatinin.
Reducerea aportului proteic scade nivelul creatininei prin absena
aminoacizilor precursori ai creatinei.
Creatinina este cel mai fix constituent azotat al sangelui,
neinfluenat de efort, ritmul circadian sau de alte constante
biologice i este corelat cu metabolismul muscular.
Creatinina este excretat cu usurin de ctre rinichi la indivizii
sanatoi. Deoarece excreia sa este relativ constant la o persoan
dat, determinarea concentraiei de creatinin n urina din 24 ore
poate oferi o orientare in ceea ce privete funcia renal.
Dependent de fluxul sanguin renal i rata de filtrare glomerular,
nivelul creatininei serice este afectat n primul rnd n disfunciile
159
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului proteic 2010

renale. Astfel dozarea creatininei este foarte util n evaluarea


funciei renale n special n afeciuni n care un numr mare de
nefroni a fost distrus. Nivelele crescute de creatinin n snge
reflecta o alterare a ratei de filtrare glomerular.
Recomandri pentru determinarea creatininei
o Creatinina seric este un indicator mai specific i mai sensibil al
funciei renale comparativ cu ureea.
o Modificrile creatininei serice se produc mai lent dect cele ale ureei
n condiiile n care rata perfuziei renale este alterat. Mai mult, abia
dup o reducere de aproximativ 50% din funcia renal, valorile
creatininei se modific semnificativ.
o Creatinina seric nu poate fi aadar considerat un indicator
sensibil n caz de leziuni renale uoare pn la moderate.
o O perturbare a funciei renale reduce excreia de creatinin,
determinnd creterea creatininei serice.
o Nivelul seric al creatininei ne ofer indicii pentru estimarea filtrrii
glomerulare numai n condiii de echilibru, cnd rata sintezei
creatininei este egal cu eliminarea.
o Testarea nivelului creatininei serice este util n: evaluarea funciei
renale, n:
monitorizarea pacienilor cu medicaie nefrotoxic
(aminoglicozide);
monitorizarea pacienilor cu diabet zaharat tip 2 tratai cu
anumite medicamente antidiabetice orale (unele din ele
putnd cauza acidoz lactic la pacienii cu insuficien
renal);
evaluarea bolilor renale cronice (cu determinarea in
paralel a nivelului ureei serice)

2. Principiul metodei
Creatinina (compus azotat sintetizat la nivel muscular din
aminoacizi, i eliminat prin urin), formeaz cu acidul picric, la pH alcalin,
complexe colorate (creatinin-picrat). Viteza de formare a complexelor este
direct proporional cu coninutul de creatinin al probei.

3. Reactivi
o Reactiv 1 (R1):
Acid picric 8,73mmol/L
ATENIE, REACTIVUL ARE EFECT IRITANT!
160
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului proteic 2010

o Reactiv 2 (R2):
Hidroxid de sodium 300 mmol/L
Fosfat disodic 25 mmol/L
o Standard:
Soluie de creatinin

4. Modul de lucru
Proba: Ser/ Plasm heparinizat/ Urina din 24 ore diluat in ap distilat
1:100.
Se pregatete amestecul de reactivi: se amestec un volum R1 cu un volum
de R2.
Se folosesc dou eprubete proba, standard (etalon) - P, S:
P - proba, se amestec:
o Amestec de reactivi: 1000 L
o Proba 100 L
St standard, se introduc:
o Amestec de reactivi: 1000 L
o Standard 100 L

Reactiv P (l) St (l)


Amestec de reactivi 1000 1000
Proba 100 -
Sol. Standard - 100

Analiza se va efectua la 37C.


Se citesc absorbantele P si S imediat dup amestecare (A1) i la 2 minute
(A2) la 492nm (480-520nm), in cuve de 1 cm, fa de apa distilat.
Mod de msurare: cu punct final.
Calcul:
Concentraia creatininei n prob mg/dl = (Aprob/ Astandard) x Cst
Cst - concentraia standardului = 2 mg/dL (176,8 mmol/L)
n cazul urinei, rezultatul se va nmuli cu 100.

5. Valori de referin
Ser, plasm 0,6 - 1,3mg/dL 53 - 115 mol/L
Urin 0,8 - 1,8g/24h 7 - 16mmol/24h
161
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului proteic 2010

6. VARIAII PATOLOGICE
Atenie! Pot exista si variaii fiziologice ale acestui parametru n snge:
o efortul fizic i consumul de carne n cantitate mare pot crete
tranzitoriu nivelul creatininei serice;
o brbaii i persoanele cu mas muscular mare nregistreaz de
regul valori uor elevate
A. Creatinina seric:
valori crescute:
afeciuni renale acute sau cronice cauzate de afectarea glomerulilor,
tubilor sau parenchimului renal:
Azotemie Renal:
o glomerulonefrite,
o pielonefrite,
o necroz tubular acut,
o nefropatie diabetic
Azotemie Postrenal:
o obstrucie de tract urinar
Azotemie Prerenal, prin scderea perfuziei renale:
o insuficienta cardiac congestiv
o oc
o deshidratare
afeciuni musculare: miastenia gravis, distrofii musculare, poliomielit;
afeciuni endocrine: hipertiroidism, gigantism, acromegalie
endocardit bacterian (afectarea muschiului cardiac)
afeciuni imunologice - LES (lupus) cu afectarea unor grupe
musculare
artrit reumatoid
gut
valori sczute:
o sarcin (valori normale: 0.4-0.6 mg/dL; un nivel de peste 0.8 mg/dL
este considerat patologic i impune solicitarea unor investigaii
suplimentare)
o mas muscular redus (distrofie muscular, miastenia gravis),
o diet sarac in proteine (i deci defect al aminoacizilor necesari
sintezei);

162
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului proteic 2010

o afeciuni hepatice severe (ciroza, insuficiena hepatic - defect de


sintez al creatinei i deci i de formare i eliminare de creatinin);
o medicamente: ex.glucocorticoizi
B. Creatinina urinar:
valori crescute
o Atenie! Sarcina, efortul fizic i dieta bogat n carne pot determina
creteri tranzitorii ale creatininei urinare.
o tulburri endocrine i metabolice: acromegalie, gigantism, diabet
zaharat
o imobilizare prelungit (mai ales la vrstnici sau dup intervenii
chirurgicale ce necesit o perioad lung de imobilizare)
o medicamente: acid ascorbic, unele cefalosporine (ageni
antimicrobieni), corticosteroizi, metotrexat (antineoplazic).
valori sczute
insuficiena renal cronic (funcia renal de eliminare a creatininei
este alterat, i deci creatinina nu se mai poate elimina prin urin);
medicamente: captopril, ketoprofen, steroizi anabolizani, s.a.

7. CLEARANCE-UL LA CREATININ
Clearence-ul de creatinin este o prob funcional, care ofer
informaii despre viteza de filtrare glomerular.
Rata de filtrare glomerular este dependent de:
1. dimensiunea i permeabilitatea capilar,
2. gradientul de presiune hidrostatic i osmotic ntre capilarul
glomerular capsula Bowman tubul urinifer,
3. integritatea esutului renal.
Determinarea clearence-ului creatininei (substan filtrat exclusiv
glomerular i neabsorbit tubular), implic colectarea urinei din 24 de ore.
Clearence-ul creatininei se calculeaz dupa o formul, n care intervin drept
parametri principali:
U cantitatea ce creatinin n mg/dl excretat n urina din 24 de ore,
V volumul de urin n ml/min,
P creatinina plasmatic n mg/dl.
Clearance creatinin = UxV/P
Recomandri pentru determinarea clearence-ului creatininei

163
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului proteic 2010

o explorarea funciei renale investigarea unei eventuale reduceri


a ratei de filtrare glomerular n situaiile n care nivelul
creatininei serice este nc normal
o monitorizarea insuficienei renale i stabilirea momentului optim
de ncepere a dializei
o ajustarea dozelor la pacienii carora li se administreaz tratament
cu medicamente nefrotoxice (aminoglicozide, metotrexat, .a)
Valori normale ale clearance-ului la creatinin
90 130 ml/min
Cauzele cele mai frecvente de cretere a clearance-ului la creatinin:
o arsuri
o intoxicaie cu monoxid de carbon
o edeme
o diabet zaharat
o sindrom nefrotic
o epuizare muscular
o afeciuni cardiace cu debit crescut
o dup unele medicamente (aminoglicozide, antineoplazice,
hormoni androgeni, .a)
Valori sczute ale clearence-ului de creatinin sunt asociate frecvent cu:
o alterri vasculo-renale: necroz tubular acut, glomerulonefrite
- GNF, pielonefrite - PNF, obstrucia arterei renale, TBC renal,
boal polichistic renal
o insuficien cardiac congestiv
o ciroz cu ascit
o oc
o deshidratri severe
o diet vegetarian
o dup unele medicamente (cortizon, propranolol, histamin, .a)
Scderearea dramatic a capacitii de epurare a glomerulilor
renali (nivelul clearance-ului la creatinin este sub 15 ml/min) impune
DIALIZA ca soluie de supravieuire. Dializa este o metod de eliminare a
reziduurilor, toxinelor i excesului de ap din snge i de restabilire
a echilibrului hidroelectrolitic. Aceste funcii sunt n mod normal ndeplinite
de rinichi, dar n condiiile afectrii severe a funciei glomerulilor renali,
acestea sunt restabilite prin preluarea acestor activiti de ctre membrane
artificiale (asemnatoare membranelor glomerulare), sau membrana
peritoneal.

164
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului proteic 2010

Exist astfel dou tipuri de dializ: hemodializ (rinichiul artificial),


n care sngele este epurat n afara organismului printr-o membran
artificial, i dializa peritoneal, n care peritoneul bolnavului este utilizat
ca membran de filtrare.

9. FUNDAMENTE BIOCHIMICE
Creatina, creatinina si fosfocreatina sunt compui azotai, nu
sunt aminoacizi, dar rezult n urma metabolizrii
aminoacizilor; creatina se formeaz n ficat iar creatinina n
muchi;
Creatinina se elimin prin urin, reprezentnd forma de
ndeprtare a creatinei din organism;
Creatinina este cel mai fix constituent azotat al sngelui,
neinfluenat de majoritatea alimentelor, de efort, ritmul
circadian sau de alte constante biologice i este corelat cu
metabolismul muscular;
Valoarea creatininei serice (n mod normal in intervalul 0,6
1,3 mg/dL) este afectat predominant in afeciuni renale
(dereglari fie ale glomerulilor sau tubilor renali, fie ale
parenchimului renal), musculare, hepatice, dereglri ale
dietei, sarcin
Dozarea creatininei este foarte util n evaluarea funciei
renale n special n afeciuni n care un numr mare de nefroni
a fost distrus;
Creatinina seric nu reprezint un indicator sensibil n caz de
leziuni renale uoare pn la moderate;
Creatinina seric este un indicator specific i mai sensibil al
funciei renale comparativ cu ureea;
Modificrile creatininei serice se produc mai lent dect cele
ale ureei n condiiile n care rata perfuziei renale este
alterat;
Clearence-ul de creatinin este o prob funcional, care
ofer informaii despre viteza de filtrare glomerular i care
poate fi calculat folosind volumul de urin emis in 24 ore.
Clearance-ul la creatinin este un parametru util n aprecierea
i monitorizarea insuficienei renale - n condiiile n care viaa
pacientului este ameninat din cauza reducerii dramatice a
165
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului proteic 2010

funciei renale (pn la 10-15% din funcie restant), atunci se


impune dializa.
10. MCQ
CRT 1 Creatinina:
A. reprezint produsul final de catabolism al acizilor nucleici
B. este sintetizat n rinichi i dup eliberare este preluat la nivelul
musculaturii
C. este cel mai inconstant constituent azotat al sngelui
D. reprezint forma de eliminare a creatinei
E. nici un raspuns corect
CRT 2 Care din urmtoarele afirmaii referitoare la creatinin, NU este
adevarat:
A. este un indicator sensibil n condiiile alterrii uoare sau medii
a funciei renale
B. este util in evaluarea funciei renale
C. reducerea aportului proteic scade nivelul creatininei serice
D. nu poate fi util n aprecierea funciei renale
E. este un indicator specific si mai sensibil al funciei renale
comparativ cu ureea
CRT 3 Valorile normale ale creatininei serice sunt:
A. 0,8-1,8g/L
B. 0,6-1,3mg/dL
C. 20-50mg/dL
D. 11-25g/100mL
E. nici un raspuns corect
CRT 4 Determinarea creatininei NU este recomandat n:
A. perturbarea funciei renale
B. administrarea de medicamente nefrotoxice
C. boli metabolice (diabet zaharat, gut)
D. hemodializ
E. afeciuni nervoase
CRT 5 Creatinina seric crete n urmtoarele situaii, CU EXCEPIA:
A. afeciuni renale acute sau cronice
B. obstrucii ale tractului urinar
C. afeciuni musculare
D. persoane cu masa musculara mare
E. carene proteice n diet
166
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului proteic 2010

CRT 6 Creatinina seric scade in urmtoarele situaii:


A. afeciuni endocrine: hipertiroidism, gigantism, acromegalie
B. alimentaie bogat n carne
C. distrofie muscular
D. afeciuni hepatice severe
E. nici un rspuns corect
CRT 7 Creatinina urinar NU crete n urmtoarele situaii:
A. insuficiena renal cronic
B. stenoza renal
C. boli endocrine: acromegalie, gigantism
D. sarcin i efortul fizic
E. alimentaie bogat in carne
CRT 8 Care din urmtoarele afirmaii referitoare la creatinin NU este
adevarat:
A. principala utilitate a determinarii creatininei serice este
evaluarea insuficienei renale
B. scderea perfuziei renale poate determina creteri ale creatininei
serice
C. alimentaia bogat in carne nu influeneaz valorile creatininei
serice sau urinare
D. creatinina seric poate sa scade in perioada sarcinii
E. n bolile renale cronice este util s se determine att creatinina
ct si ureea seric
CRT 9 Creatina:
A. este sintetizat de rinichi n cadrul insuficienei renale
B. este preluat la nivelul musculaturii, dupa sinteza n ficat
C. este fosforilat n muchi, i are rol n stocarea energiei
D. se poate transforma in creatinin
E. cantitatea convertit n creatinin este inconstant n mod
normal
CRT 10 Principala utilitate a determinarii creatininei serice este:
A. diagnosticarea insuficienei renale
B. evaluarea funciei hepatice
C. diagnosticul diabetului zaharat
D. evaluarea gravidei in trimestrul al II-lea de sarcin
E. diagnosticarea icterului obstructiv

167
CORELATII CLINICE IN INTERPRETAREA PARAMETRILOR BIOCHIMICI Explorarea metabolismului proteic 2010

7.4. DOZAREA ACIDULUI URIC

1. Consideraii generale
Acidul uric se formeaz prin degradarea acizilor nucleici,
reprezentand produsul final al catabolismului purinelor. De la
nivelul ficatului, este transportat la rinichi, unde este filtrat i
excretat intr-o proporie de aproximativ 70%. Restul este eliminat i
degradat n tractul gastrointestinal.
Constituie un antioxidant eficace, fiind implicat n epurarea
speciilor rective ale oxigenului (anionul hidroxil, superoxid, oxigen
singlet), fiind comparabil ca potenial, cu vitamina C.
Principalele probleme pe care le ridic[ patogeneza i metabolismul
acidului uric, le reprezint: mecanismele care conduc la creterea
acestui parametru n umorile organismului, i cile prin care
acidul uric n exces conduce la instalarea diferitelor alterri la
nivelul esuturilor i organelor.
Uricemia reprezint nivelul sanguin al acidului uric;
Acidul uric este aadar produsul de catabolism al purinelor n
organism, acestea din urm provenind la rndul lor din alimentaie,
din catabolismul nucleoproteinelor celulare proprii i prin sinteza
endogen de novo. Sinteza endogen reprezint cea mai
important surs de purine din organism. O alimentaie bogat n
surse de proteine (viscerele i icrele de pete, iar dintre vegetale
spanacul i sparanghelul) poate duce la o cretere a uricemiei.
Calea de sintez a purinelor se desfoara la nivel hepatic i este
deosebit de complex, anumite etape prezintand o importan
deosebit n aa fel nct, dereglarea acestora conduce la instalarea
anumitor anomalii survenite n metabolismul purinelor. Purinele
sintetizate de novo, cele proveninte din alimentaie sau eliberate
prin degradarea endogen a acizilor nucleici pot urma dou ci: pot
fi ncorporate n acizi nucleici sau, pot fi oxidate spre acid uric.
Excreia acidului uric se face pe cale renal i se realizeaz prin
filtrare, reabsorbie, si secreie tubular. Eliminrile urinare de acid
uric n condiii normale sunt de regul sub 600mg/24h.

168
CORELATII C