Scientia Chromatographica 2012; 4(4):287-297

Instituto Internacional de Cromatografia

http://dx.doi.org/10.4322/sc.2012.017
TCNICAS ELETROFORTICAS
ISSN 1984-4433

Conceitos bsicos em Eletroforese Capilar

Daniel Alfonso Spudeit, Maressa Danielli Dolzan, Gustavo Amadeu Micke*
Departamento de Qumica, Universidade Federal de Santa Catarina - UFSC,
Campus Universitrio Trindade, CP 476, Cep 88040-900, Florianpolis, SC, Brasil
e-mail: gustavomicke@qmc.ufsc.br

Resumo
Historicamente, o qumico sueco Arne Tiselius foi o pioneiro na utilizao da Eletroforese como
ferramenta de separao, aplicando-a em protenas presentes no sangue. A Eletroforese Capilar surgiu
aps dcadas de aperfeioamento dessa tcnica, proporcionando aumento de eficincia e diminuio dos
tempos de anlise. Sua aplicao vasta e compreende desde molculas pequenas e simples, orgnicas e
inorgnicas, at molculas volumosas e complexas, como protenas e cidos nuclicos. Essa versatilidade
peculiar da Eletroforese Capilar a torna ferramenta promissora para diversas reas do conhecimento.
As metodologias desenvolvidas por essa tcnica podem ser auxiliadas e aperfeioadas offline atravs
de softwares de otimizao e simulao, destacando-se o software Peakmaster. O presente artigo ir
introduzir ainda aspectos da instrumentao da Eletroforese Capilar, modos de injeo e deteco, bem
como fenmenos peculiares da tcnica, como o fluxo eletrosmtico.
Palavras-chave
Eletroforese Capilar; fluxo eletrosmtico; instrumentao; modos de injeo.

Basic concepts in Capillary Electrophoresis

Abstract
Historically, the Swedish chemist Arne Tiselius was the first to use Electrophoresis as a separation
tool, applying in blood proteins. The Capillary Electrophoresis emerged after decades as an improved
technique providing an increase in efficiency and reduced analysis time. Its applications are wide and
the range is from small and simple molecules organic and inorganic, to large and complex, as protein
molecules and nucleic acids. This peculiar versatility of Capillary Electrophoresis makes it a promising
tool for several knowledge areas. The methodologies developed by this technique can be improved offline
by optimization and simulation softwares, highlighting the Peakmaster software. This present paper will
further introduce Capillary Electrophoresis instrumental aspects, injection modes and detection, as well
as peculiar phenomena of technique, as electroosmotic flow.
Keywords
Capillary Electrophoresis; electroosmotic flow; instrumentation; injection modes.
Spudeit DA, Dolzan MD, Micke GA Eletroforese Capilar
1 Introduo
A palavra eletroforese originada do grego
electro, eletricidade; phresis, transporte. Assim,
a tcnica de eletroforese definida como uma
tcnica de separao baseada na diferena de
migrao de compostos inicos ou ionizveis na
presena de um campo eltrico. Historicamente,
a eletroforese foi apresentada pela primeira vez
pelo qumico sueco Arne Tiselius[1] em sua tese
intitulada The Moving Boundary Method to
Study the Electrophoresis of Proteins, publicada
em 1930. A ideia surgiu pela necessidade de
separar as diversas protenas que estavam sendo
descobertas desde o incio do sculo XX, tor-
nando possveis estudos aprofundados acerca
de cada protena. O trabalho pioneiro envolveu
a separao das protenas presentes no plasma
sanguneo[2].
Ao longo dos anos, a Eletroforese foi sendo
aperfeioada de forma a se obter uma maior efi-
cincia e diminuio dos efeitos trmicos pro-
venientes da aplicao de um campo eltrico[2].
Com esta finalidade, o avano instrumental das
tcnicas de eletroforese permitiu a introduo
de colunas capilares no sistema eletrofortico, e
esta foi denominada Eletroforese Capilar (CE, do
ingls Capillary Electrophoresis).
A primeira tentativa de realizar separa-
o em tubos com pequenos dimetros inter-
nos surgiu em 1967, quando Hjertn realizou a
separao em tubos com dimetro interno (d.i.)
de 300 m. Porm, foi apenas aps a publica-
o de Jorgenson e Lukacs em 1981[3] que a tc-
nica comeou a ser reconhecida. Este trabalho,
publicado no Journal of Analytical Chemistry,
demonstrou a capacidade da realizao de sepa-
raes em capilares com dimetro interno redu-
zido, combinado com a aplicao de altas volta-
gens, resultando em um aumento de eficincia e
de resoluo e diminuio dos tempos de anlise.
288 Scientia Chromatographica 2012; 4(4):287-297
O uso do capilar oferece muitas vantagens
sobre os outros meios utilizados para eletrofo-
rese (placas de gel, papel, etc). Devido a fatores
geomtricos (a relao entre a rea superficial
interna e o volume apreciavelmente grande),
um capilar possibilita a dissipao eficiente do
calor gerada pela passagem da corrente eltrica
(efeito Joule). Alm disso, a alta resistncia el-
trica do capilar permite o estabelecimento de
campos eltricos elevados (100-1000 V cm1),
resultando em separaes de alta eficincia
(geralmente excede 105 pratos) e tempos de an-
lise apreciavelmente curtos. Outras vantagens da
Eletroforese Capilar so a pequena demanda de
amostra, volumes tipicamente da ordem de 1 a
10 nL e a possibilidade de injeo e deteco em
fluxo[1,4].
Comparando com os demais mtodos de
separao como Cromatografia Lquida de Alta
Eficincia (HPLC, do ingls High Performance
Liquid Cromatography) e Cromatografia Gasosa
(GC, do ingls Gas Chomatography), a CE con-
siderada uma tcnica analtica recente e vem
ganhando cada vez mais ateno na comunidade
cientfica, bem como no controle de qualidade de
produtos e monitoramento de processos indus-
triais. Uma das razes para a sua crescente uti-
lizao sua gama de aplicaes. A princpio, a
tcnica ficou conhecida apenas pela separao
de macromolculas biolgicas. No entanto, o
avano dos equipamentos permitiu aos pesqui-
sadores do mundo todo demonstrar o potencial
da Eletroforese Capilar na separao de mol-
culas pequenas e diversas como aminocidos[5],
frmacos quirais[6], vitaminas[7], pesticidas[8],
ons inorgnicos[9], etc. Alm da sua utilizao
na separao e determinao quantitativa de
inmeros analitos, a CE permite estudar cinti-
cas de reaes e interaes intermoleculares, no
modo online e offline, auxiliando na elucidao
destes mecanismos e obteno de constantes de
Eletroforese Capilar Spudeit DA, Dolzan MD, Micke GA
associao[10,11]. A tcnica apresenta-se til e pro-
missora para diversos campos da cincia, mas
destacam-se as vertentes da Qumica, Cincias
Forenses, e a Biologia Molecular.
Alm da vasta aplicao da CE, outras
caractersticas da tcnica a tornam bastante vi-
vel, como, por exemplo, o baixo custo analtico
(destacando-se o baixo custo das colunas capila-
res, algo em torno de U$ 5,00 a U$ 20,00), a sim-
plicidade na operao e no manuseio, o tempo de
execuo das metodologias desenvolvidas, alm
da reduo significativa nas quantidades de rea-
gentes e solventes orgnicos utilizados, quando
comparada tcnica de HPLC. O solvente mais
utilizado em CE gua, e sempre em volumes
muito pequenos (poucos mililitros), gerando
quantidade mnima de resduo e toxicidade. Por
estas razes, dentre as tcnicas de separao, a
Eletroforese Capilar a que mais bem se enqua-
dra nos parmetros da Qumica Verde.
2 Fundamentos tericos
2.1 Fluxo eletrosmtico
A utilizao de capilares de slica fundida na
execuo da tcnica introduziu uma importante
peculiaridade: a gerao do chamado fluxo ele-
trosmtico (EOF, do ingls Electroosmotic Flow),
como mostra a Figura1.
Figura 1 Ocorrncia do fluxo eletrosmtico.
Scientia Chromatographica 2012; 4(4):287-297 289
O fluxo eletrosmtico consequncia de
uma interao entre a soluo e a superfcie
interna do capilar. Quimicamente, a slica fun-
dida caracterizada pela presena de vrios tipos
de grupos silanis (SiOH), os quais apresen-
tam um carter cido. Em contato com o meio
aquoso, alguns desses grupos so ionizados, e
com isso, a superfcie do capilar torna-se negati-
vamente carregada. Quando um campo eltrico
imposto tangencialmente superfcie, foras el-
tricas causam um movimento unilateral de ons
em direo ao eletrodo de carga oposta. Durante
a migrao, os ons transportam molculas de
gua, induzindo o fluxo da soluo como um
todo em direo ao ctodo (plo negativo). Este
modo conhecido como fluxo eletrosmtico
normal[1]. A velocidade do EOF pode ser defi-
nida pela Equao1.
( )
VEOF = / E
(1)
onde a constante dieltrica; a viscosidade
do eletrlito; E o campo eltrico aplicado e
o potencial zeta medido entre plano de cisalha-
mento e a interface lquido-slido.
O potencial zeta essencialmente determi-
nado pela carga na superfcie do capilar. Como
a ionizao dos grupos silanis so dependen-
tes do pH, temos que a magnitude do EOF varia
com o pH. Para valores de pH mais elevados
onde os grupos silanis esto mais desprotona-
dos, a magnitude do EOF maior que em valores
de pH menores, onde os grupos silanis esto
menos ionizados (Figura2)[12].
Uma caracterstica do EOF seu perfil
radial, o que permite que o componente veloci-
dade seja adicionado a todos os analitos de forma
homognea, independente da posio radial do
analito. Essa caracterstica permite separaes
com maiores eficincias, distinguindo a CE dos
mtodos cromatogrficos em fase lquida em
coluna, que apresentam um perfil de velocidade
parablico, caracterstico do fluxo gerado por
presso (Figura3)[13].
Spudeit DA, Dolzan MD, Micke GA Eletroforese Capilar
Figura 2Variao da mobilidade do fluxo
eletrosmtico em funo da variao do pH em
um capilar de slica fundida. Legenda: EOF, fluxo
eletrosmtico.
Figura 3Perfil de velocidade do fluxo radial
(eletrosmticoEOF) e laminar (presso).
Em condies normais, o fluxo prove-
niente do nodo (eletrodo de carga positiva) para
o ctodo (eletrodo de carga negativa). Os nions
so levados em direo ao ctodo nos casos em
que a magnitude do EOF maior que a magni-
tude da sua mobilidade efetiva. Assim, ctions,
nions e molculas neutras podem ser analisados
em uma nica corrida. Porm, no haver distin-
o das molculas neutras quando houver mais
de uma destas[14].
O EOF pode ser reduzido ou at mesmo
invertido. A reduo do EOF ocorre com a alte-
rao dos valores de pH para faixas mais cidas,
onde os grupos silanis esto menos ionizados.
Outra alternativa utilizar aditivos catinicos no
eletrlito de corrida que interajam com a super-
fcie do capilar, de forma a reduzir a carga nega-
tiva dessa superfcie. J a inverso do fluxo pode
ocorrer tambm pela adio de componentes no
eletrlito, como surfactantes, ou pela modifica-
290 Scientia Chromatographica 2012; 4(4):287-297
o da superfcie interna do capilar, que pode ser
dinmica ou permanente, atravs da adsoro ou
alterao qumica da slica, respectivamente[15].
A separao das espcies por eletroforese
se d pela diferena da velocidade do soluto na
presena de um campo eltrico. A velocidade
eletrofortica de um determinado on pode ser
definido pela Equao2.
Vep = ep E
(2)
onde Vep a velocidade do eletrofortica, ep a
mobilidade eletrofortica e E o campo eltrico
aplicado[13].
Todo on em soluo possui uma mobi-
lidade que caracterstica para cada on. Essa
mobilidade, tambm conhecida como mobili-
dade eletrofortica (ep), determinada pela fora
eltrica que as espcies ionizadas, molculas ou
partculas, sofrem, balanceada com as foras de
frico geradas pela passagem das espcies pelo
meio. Para um determinado on, sua mobilidade
eletrofortica pode ser determinada atravs da
Equao3[13-14].
q
e = (3)
6 r
onde q a carga do on, a viscosidade da solu-
o e r o raio inico.
Com base na Equao3, evidente que esp-
cies menores e mais carregadas possuem mobi-
lidades elevadas. Por outro lado, espcies com
maiores raios inicos e menos carregadas pos-
suem valores baixos de mobilidade. As mobili-
dades eletroforticas so determinadas no ponto
em que o soluto est completamente ionizado
(= 1) e extrapoladas para diluio infinita[1].
Espcies que se comportam como cidos
ou bases fracas apresentam, no equilbrio, duas
espcies: uma neutra, com mobilidade nula, e
outra inica, que possui mobilidade que passa
agora a ser chamada de mobilidade efetiva (()ef)
e pode ser obtida atravs da Equao4.
Eletroforese Capilar Spudeit DA, Dolzan MD, Micke GA
ef = i .e (4)
onde i o grau de ionizao de uma determi-
nada molcula.
Como o grau de ionizao pode ser defi-
nido pelo pKa do soluto, a mobilidade efetiva
altamente dependente do pH e da composio
do eletrlito de corrida. O efeito da variao do
pH na mobilidade efetiva pode ser observado na
Figura4, onde temos um grfico de mobilidade
efetiva versus pH para o cido p-hidroxibenzico
(pKa1 4,53 e pKa2 9,31), cido actico (pKa 4,75) e
cido clordrico.
Observando-se o grfico de curva de mobi-
lidade podemos perceber que para os cidos
p-hidroxibenzico e actico, a mobilidade efe-
tiva varia consideravelmente com a variao do
pH. Isso ocorre pelo fato destes serem eletrlitos
fracos. Por sua vez, o cido clordrico em soluo
um eletrlito forte, ou seja, sua ionizao ser
completa. Sendo assim, o on cloreto no sofre
variao de mobilidade efetiva com o pH.
A combinao vetorial do fluxo eletrosm-
tico e a mobilidade do analito resulta na mobili-
dade aparente do composto.
Figura 4Curva de mobilidade para o cido
p-hidroxibenzico (1), cido actico (2) e cido
clordrico (3).
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3 Instrumentao
Uma caracterstica fundamental da CE sua
simplicidade instrumental. Uma representao
esquemtica de um equipamento de Eletroforese
Capilar demonstrada na Figura5.
Basicamente, um equipamento de CE con-
siste em um sistema de injeo, uma coluna capi-
lar onde ocorre a separao, uma fonte de alta
tenso, representada por F na Figura5 (que opera
com voltagens at 30 kV), um par de eletrodos
(e1 e e2), um detector (D) e um computador (C)
para obteno e tratamento dos dados[13,14].
A fonte de alta tenso conectada, por meio
dos eletrodos, aos reservatrios que contm o
eletrlito adequado (R1 e R2). Os capilares preen-
chidos com eletrlito ajudam a manter o contato
eltrico, funcionando como um canal de migra-
o.
Para minimizar os efeitos gerados pelo
aquecimento, os capilares devem ser mantidos
temperatura constante, mantida principalmente
atravs da circulao de lquidos ou de ar.
Figura 5 Esquema ilustrativo de um equipamento
de Eletroforese capilar. Onde R1 e R2, e1 e e2 so
os reservatrios e eletrodos, respectivamente. F
representa a fonte de alta tenso, D o detector, C
o computador para obteno dos dados e EOF
representa o fluxo eletrosmtico, que gerado aps
ser aplicado o potencial[16].
Spudeit DA, Dolzan MD, Micke GA Eletroforese Capilar
3.1 Capilares
Em geral, os capilares utilizados em CE so
abertos, constitudos de slica fundida e revesti-
dos externamente com polmeros que fornecem
flexibilidade e resistncia, geralmente polii-
mida ou poliacrilato. Dependendo do modo de
deteco, necessria uma janela de deteco ser realizada individualmente ou em sequncia,
no capilar, que seria um pequeno seguimento
ausente destes polmeros, j que estes absorvem
luz em comprimentos de onda que podem pre-
judicar ou tornar impossvel a deteco dos ana-
litos. A janela de deteco feita num compri-
mento especfico do capilar atravs da remoo
do polmero, geralmente realizada por calor. Os
capilares utilizados em eletroforese apresentam
tamanhos que variam de 10 a 100cm, mais comu-
mente se utilizam comprimentos de 25-75cm e
dimetros internos entre 25 e 75 m, embora
possam ser encontrados capilares comerciais de
10 a 200 m de d.i.[14].
3.2 Modos de injeo da amostra
Em CE, as amostras podem ser introduzidas
por injeo hidrodinmica ou eletrocintica. A
injeo hidrodinmica feita aplicando-se uma
diferena de presso que se estabelece entre o
reservatrio do eletrlito e o capilar. O volume
da amostra injetada depende do tamanho do
capilar, da viscosidade da amostra e da diferena
de presso usada, e apresenta-se na ordem de
nanolitros (1-50 nL). O volume (Vi) de injeo
pode ser calculado atravs da Equao5.
Pd 4 tinj
Vinj = (5)
128 L
onde P a presso aplicada no capilar, d o di-
metro interno do capilar, t o tempo em que a
presso aplicada, a viscosidade da amostra e
L o comprimento total do capilar. Por exemplo,
em uma injeo de uma soluo aquosa a 25 C
292 Scientia Chromatographica 2012; 4(4):287-297
por 3 segundos, aplicando-se uma presso de 50
mbar em um capilar de 70cm de comprimento
total e dimetro interno de 50 m, o volume cor-
responde a aproximadamente 3,7 nL e o compri-
mento seria igual a 1,9mm[14].
A injeo hidrodinmica em CE permite
sendo denominada de injeo simples e inje-
es mltiplas, respectivamente. Esta ltima
vem sendo demonstrada em trabalhos publica-
dos principalmente na ltima dcada, tanto em
metodologias para determinao quantitativa de
analitos, quanto para metodologias empregadas
em estudos de interao intermoleculares[17,18].
A principal vantagem em se utilizar o modo de
injees mltiplas o aumento da frequncia
analtica do mtodo, ou seja, a possibilidade de
um maior nmero de anlises num dado inter-
valo de tempo[18,19].
O segundo modo de injeo mais comum
em CE a eletrocintica ou por eletromigrao.
Neste caso, a amostra introduzida atravs da
aplicao de uma tenso eltrica. A quantidade
injetada pode ser calcula atravs da Equao6.
Q=
( ep )
+ eo V r 2Ctinj
(6)
L
onde e a mobilidade eletrofortica do analito,
EOF a mobilidade do fluxo eletroosmtico, V
a voltagem, r o raio interno do capilar, C a
concentrao do analito, tinj o tempo de injeo
e L o comprimento total do capilar.
Assim sendo, a quantidade de amostra inje-
tada no capilar ser dependente da mobilidade
eletrofortica de cada analito, o que pode acarre-
tar discriminao entre espcies inicas de maior
e menor mobilidade. Este fato pode ser limitante
deste tipo de injeo, bem como uma forma de
injeo seletiva. A injeo eletrocintica sim-
Eletroforese Capilar Spudeit DA, Dolzan MD, Micke GA
ples, no requer nenhum equipamento adicional
e vantajosa quando utilizada em amostras com
maior viscosidade[1,2].
3.3 Detectores
A Tabela1 apresenta de forma resumida os
detectores mais comuns em CE e seus limites de
deteco caractersticos.
Muitos dos detectores utilizados em CE
so tambm empregados em HPLC. Em ambas
as tcnicas, o detector de absorbncia no ultra-
violeta/visvel (UV-Vis) o mais utilizado[13].
No entanto o espectrmetro de massas (MS, do
ingls Mass Spectrometer) apresenta-se universal
e altamente seletivo.
De um modo geral, para a escolha de um
detector adequado o analista deve atentar-se
primeiramente ao fato dos compostos separa-
dos apresentarem caractersticas que permitam
que sejam detectados pelo mtodo selecionado.
Assim como em HPLC, outros fatores devem ser
levados em considerao na escolha do modo de
deteco, tais como sensibilidade, seletividade,
faixa linear e a capacidade de fornecer dados
quantitativos[14].
No caso de CE equipada com detector
UV-Vis, a tcnica tem sua sensibilidade prejudi-
cada com relao ao mesmo modo de deteco
em HPLC. Isso se deve ao reduzido caminho
ptico, cujo dimetro do capilar da ordem
de m. Para detectores deste tipo, a absortivi-
Tabela 1 Detectores mais comuns usados em Eletroforese Capilar.
Modo de deteco
UV-Vis
Fluorescncia (LIF)
Espectrometria de Massas (MS)
Amperomtrico
Condutomtrico
1
Concentrao em mol L . 1
Scientia Chromatographica 2012; 4(4):287-297 293
dade do analito respeita a Lei de Lambert Beer,
Abs=b.C., onde Abs a resposta em absorbn-
cia, b o caminho ptico, C a concentrao
molar e a absortividade molar do analito. Por
este motivo, o feixe ptico deve ser bem focali-
zado no capilar, de forma a minimizar a disper-
so da luz[13,14].
3.3.1 Modos de deteco no UV-Vis:
direto e indireto
O modo de deteco direto comumente
utilizado e adequado quando as espcies a
serem determinadas apresentam absoro na
regio do ultravioleta e/ou visvel. Nesse caso,
normalmente so utilizados como eletrlito de
corrida compostos que no apresentam absoro
nessa regio. Assim sendo, o tamanho do pico
referente dependente da Lei de Lambert Beer,
como descrito anteriormente[4,14,20].
J a deteco indireta aplicada com sucesso
em Eletroforese Capilar para analitos que no
apresentam absoro no UV-Vis, ou apresentam
absoro pouco intensa. Neste modo, faz-se uso
de um cromforo no eletrlito de corrida, ou seja,
um dos componentes do eletrlito deve apresen-
tar absoro na regio UV-Vis. Os compostos
que so normalmente analisados utilizando-se
esse tipo de deteco so ctions e nions inorg-
nicos, cidos carboxlicos, aminocidos e aminas
de cadeia curta[4].
Limite de deteco1
105-107
1013-1016
108-1010
107-1010
107-109
Spudeit DA, Dolzan MD, Micke GA Eletroforese Capilar
4 Modos de operao em
Eletroforese Capilar
Durante as dcadas passadas, a Eletroforese
Capilar e suas muitas variantes, tal como a
Cromatografia Eletrocintica Micelar (MEKC, do
ingls Micellar Electrokinectic Chromatography),
Eletroforese Capilar em Gel (CGE, do ingls
Capillary Gel Electrophoresis), Cromatografia
Eletrocintica (EKC, do ingls Eletrokinetic
Chromatography), Isotacoforese Capilar
(CITP, do ingls Capillary Isotachophoresis) e
Eletroforese Capilar em Soluo Livre (FSCE,
do ingls Free Solution Capillary Electrophoresis),
tm se demonstrado como tcnicas de grande
poder de separao[14,21,22].
4.1 Cromatografia Eletrocintica
Micelar (MEKC)
A cromatografia eletrocintica micelar se
aplica principalmente anlise de compostos
neutros. Neste mecanismo de separao base-
ada na partio diferenciada dos solutos entre a
fase mvel e uma pseudo-fase composta por
micelas, cuja mobilidade efetiva uma resultante
da mobilidade do fluxo eletrosmtico e da mobi-
lidade da prpria micela.
4.2 Eletroforese Capilar em Gel (CGE)
Essa tcnica usada para a separao de
compostos, principalmente protenas e cidos
nucleicos, por diferenas de tamanho relativo. A
separao obtida preenchendo-se um capilar
com uma matriz polimrica. A maior vantagem
sobre a clssica eletroforese em placas a obten-
o de resultados quantitativos mais exatos,
tempo de anlise mais curtos e a possibilidade de
automao do processo.
294 Scientia Chromatographica 2012; 4(4):287-297
4.3 Cromatografia Eletrocintica
Capilar (CEC)
A CEC uma tcnica recente de separa-
o que combina as vantagens da cromatogra-
fia lquida de alta eficincia com a Eletroforese
Capilar. Nesta tcnica, o transporte de solvente
(fase mvel) feito atravs do fluxo eletrosm-
tico ao longo da coluna. Os capilares utilizados
para esse tipo de separao so recheados com
uma fase estacionria, como C18 (octadecils-
lica).
4.4 Isotacoforese Capilar (CITP)
A Isotacoforese Capilar uma tcnica em
que so empregados dois tipos de eletrlito e
os solutos ficam confinados entre duas regies
compostas por estes eletrlitos. O primeiro ele-
trlito, que apresenta mobilidade eletrofortica
maior que todos os componentes da amostra,
chamado de eletrlito lder. O segundo, que
apresenta mobilidade eletrofortica menor que
todos os componentes da amostra, conhecido
como eletrlito terminador. Quando o poten-
cial aplicado, cria-se um estado estacionrio
no qual as zonas dos analitos migram em ordem
decrescente de mobilidade, mas com velocidade
constante e nica. Outro aspecto importante
que todas as zonas adotam a concentrao do
eletrlito lder. Desse modo, esse fenmeno pode
ser utilizado para concentrao de amostras no
interior do capilar.
4.5 Eletroforese Capilar em soluo
livre (FSCE)
Tambm denominado Eletroforese
Capilar de Zona (do ingls Capillary Zone
Electrophoresis), o modo de operao em CE
mais utilizado pelos analistas. Neste modo, a
amostra injetada dentro da coluna capilar pre-
viamente preenchida com o eletrlito de corrida,
Eletroforese Capilar Spudeit DA, Dolzan MD, Micke GA
e o potencial aplicado gerando um campo el-
trico, fazendo com que os solutos migrem den-
tro do capilar em zonas distintas. Dessa forma,
os solutos so separados de acordo com as dife-
rentes mobilidades efetivas resultantes da com-
posio entre as mobilidades eletroforticas e a
mobilidade eletrosmtica.
4.5.1 Simulao de Eletroforese Capilar
em soluo livre
A ferramenta que se destaca para otimizao
e simulao de FSCE o software Peakmaster[27].
Vale reconhecer que a Eletroforese Capilar no
modo FSCE o nico, dentre todos os mtodos
de separao, que pode apresentar simulao
completa da separao.
Para utilizao do software necessrio
que sejam conhecidos os valores de mobilidade
inica e pKa dos componentes da anlise. Estes
dois parmetros fsico-qumicos so, na verdade,
as informaes preliminares mais teis quando se
deseja desenvolver um mtodo por CE. Quando
se pretende utilizar softwares de otimizao e/ou
simulao, so fundamentais.
Conhecidos esses parmetros, possvel
construir curvas de mobilidade efetiva versus
pH. A partir dela so obtidas informaes como
pH timo e componentes do eletrlito de corrida
adequados para a anlise.
O software Peakmaster foi desenvolvido por
Bob Bohuslav Ga[27-29] e fornece caractersticas
relevantes, como pH, fora inica, condutividade
e capacidade tamponante do eletrlito de cor-
rida j estabelecido, bem como eletrodisperso
dos analitos (EMD, do ingls Electromigration
Dispersion) que acarreta alargamento dos picos e
mobilidades efetivas dos componentes da anlise
nas condies determinadas. Deteco indireta e
deteco por condutividade tambm podem ser
simulados pelo software[23,25].
Scientia Chromatographica 2012; 4(4):287-297 295
5 Concluses
Dentre as tcnicas analticas de separao, a
Eletroforese Capilar considerada a mais recente
e, de fato, ainda no est inserida nas comunida-
des acadmicas, bem como em indstrias, tanto
quanto as tcnicas cromatogrficas. No entanto,
vem crescendo exponencialmente o interesse
pela tcnica. Isto se deve principalmente a carac-
tersticas como baixo custo operacional, abran-
gncia das anlises (versatilidade), simplicidade
instrumental, tempo e quantidades e toxicidade
de reagentes e resduos extremamente reduzi-
dos se comparados s tcnicas de HPLC e CG.
Por outro lado, a CE necessita de investigaes e
aperfeioamento para melhoria de sensibilidade
e reprodutibilidade das anlises. De fato, a tc-
nica extremamente verstil, porm apresenta-
-se como complemento s tcnicas de separao,
assim como as demais. Quando se deseja fazer
uma anlise especfica, necessrio uma escolha
criteriosa da tcnica adequada, e para isto deve-
-se considerar seletividade, sensibilidade, robus-
tez, tempo, quantidade de reagentes e amostras
disponveis, concentrao de analito, custo,
quantidade de resduo, e outros. A relevncia de
cada um destes fatores ir depender do objetivo
da anlise que se deseja e das condies as quais
se encontram. A CE apresenta diversos modos
de operao e cada um adequado para sistemas
determinados. No modo CZE possvel otimi-
zar metodologias com auxlio de softwares de
otimizao e simulao, destacando o simulador
Peakmaster, desenvolvido por Ga et al.[23]. No
mais, todos utilizam a mesma instrumentao,
exceto a eletrocromatografia capilar, em que a
coluna capilar se difere pelo empacotamento.
Anlises de molculas pequenas, como fr-
macos, vitaminas, aminocidos, ons inorgni-
cos, etc, so possveis de ser realizadas por CE,
bem como molculas maiores, como polmeros,
protenas e cidos nucleicos. Alm disso, estudos
Spudeit DA, Dolzan MD, Micke GA Eletroforese Capilar
cinticos e de interao para clculos de cons-
tantes de ligao tambm vm sendo realizados
exaustivamente por pesquisadores de todo o
mundo, demonstrando-se uma ferramenta til
para diversas reas do conhecimento.
O sistema da CE permite modificao de
diversos parmetros, como os exemplos citados
ao longo do texto, modificao interna do capilar
e mltiplas injees.
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Recebido: 10/09/2012
Aceito: 31/10/2012