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DIAGNOSTICO DE
LEPTOSPIROSIS EN BOVINOS
DIAGNOSTICO DE
LEPTOSPIROSIS EN BOVINOS
TRABAJO DE GRADO
Presentado como requisito parcial
Para obtar al titulo de
APROBADO
________________________
Gustavo Arbelaez M.V.Z., MSc, PhD.
Director
________________________ ________________________
Orlando Torres M.V.Z., MSc. Javier Rivas M.V.Z.
Jurado Jurado
REVISION ACTUALIZADA SOBRE METODOS DE IDENTIFICACION Y
DIAGNOSTICO DE
LEPTOSPIROSIS EN BOVINOS
APROBADO
________________________ ________________________
ngela Umaa Muoz M.Phil. David Gmez Mndez MSc.
Decana Acadmica Facultad de Director de carrera Microbiologa
Ciencias Agrcola y Veterinaria
DEDICATORIA
A mis padres por su apoyo e inters permanente. A ellos dedique este tiempo,
que con su paciencia, orientacin y empeo me encaminaron a terminar con una
de las etapas de la vida y me ayudaron a asimilar el compromiso acadmico,
personal, y social.
AGRADECIMIENTOS
Agosto 11 de 2006
vii
TABLA DE CONTENIDO
Pginas
1. INTRODUCCIN...12
2. JUSTIFICACION14
3. OBJETIVOS...16
3.1. Objetivo general...16
3.2. Objetivo especifico...16
4. MARCO TEORICO17
4.1. HISTORIA.17
4.2. ETIOLOGIA Y MORFOLOGIA..22
4.2.1. Estructura..24
4.2.2. Crecimiento...26
4.3. TAXONOMIA Y CLASIFICACION27
4.3.1. Clasificacin serolgica...28
4.3.2. Clasificacin opcional..31
4.3.3. Especies31
4.3.3.1. Bovinos..31
4.3.3.2. Caninos y felinos..33
4.3.3.3. Porcinos.33
4.3.3.4. Equinos..33
4.3.3.5. Ovinos y Caprinos34
4.3.3.6. Hombre..34
4.4. EPIDEMIOLOGIA34
4.4.1. Transmisin..37
4.4.2. Hospedero de mantenimiento39
4.4.3. Hospederos accidentales42
4.4.4. Reservorio.43
4.5. PATOGENESIS46
4.6. RESPUESTA INMUNE53
4.7. ASPECTOS CLINICOS...56
4.7.1. Manifestaciones clnicas..58
4.7.1.1. Leptospirosis anicterica.58
4.7.1.2. Leptospirosis ictrica (Sndrome de Weil).60
4.7.2. Presentacin clnica en las diferentes especies animales.63
viii
4.7.2.1. Perros y gatos63
4.7.2.2. Equinos...64
4.7.2.3. Ovinos y Caprinos.65
4.7.2.4. Porcinos..65
4.7.2.5. Bovinos66
4.7.3. Sndrome pulmonar..68
4.7.4. Manifestaciones no comunes.68
4.7.5. Lesiones anatomopatolgicas.68
4.8. DIAGNOSTICO.70
4.8.1. DIAGNOSTICO EPIDEMIOLOGICO..70
4.8.2. DIAGNOSTICO CLINICO.71
4.8.3. DIAGNOSTICO DE LABORATORIO.71
4.8.3.1. Tcnicas indirectas73
4.8.3.1.1. MAT (Tcnica de aglutinacin microscpica).74
4.8.3.1.2. Prueba de aglutinacin microscpica con antigeno muerto
(MSAT).............................................................................................................79
4.8.3.1.3. Fijacin del complemento (FC).79
4.8.3.1.4. ELISA.80
4.8.3.1.5. Aglutinacin macroscpica.81
4.8.3.1.6. Aglutinacin en microcpsula81
4.8.3.1.7. Hemoaglutinacin indirecta (HA)...81
4.8.3.2. Tcnicas directas.82
4.8.3.2.1. Observacin en microscopio de campo oscuro82
4.8.3.2.2. Tincin Argnica82
4.8.3.2.3. Tcnicas de tincin inmunohistoquimica..82
4.8.3.2.3.1. Inmunofluoresencia83
4.8.3.2.3.2. Inmunoperoxidasa.83
4.8.3.2.4. Tcnicas de deteccin y estudio de cidos nucleicos.83
4.8.3.2.5. Aislamiento..84
4.8.4. DIAGNOSTICO DIFERENCIAL..85
4.9. CONTROL Y TRATAMIENTO.87
4.9.1. Control.87
4.9.1.1. Control inmune87
4.9.1.2. Control higinico- sanitario90
4.10. TRATAMIENTO92
ix
4.10.1. En bovinos92
4.10.2. En humanos.93
5. DISCUSION.95
6. CONCLUSIONES98
7. RECOMENDACIONES.100
8. REFERENCIAS ..101
x
Resumen
Abstract
In the present work a will be given reader a collection and analysis of the different
methods of diagnosis existing for the identification specifies of Leptospira
interrogans serovar hardjo responsible of abortions in bovine. Consequences in
pregnant cows exist in which the consequent fetal infection results in abortion,
premature births and of sick calves. The Leptospira is also considered an illness
of occupational type acquaintance with the name of Weil's disease. The
bacterium can enter to the organism through the skin or of mucous membranes
nasally or mouth, by the contact with ejections of rats contaminated with the
bacterium. After a period of incubation during the day to weeks them host
infected they develop the illness. The prevalence serologic of this illness has
been determined worldwide based on the test of microaglutinacin, by its sanitary
and economic importance since situates mainly, in the economic losses of
productive and reproductive character in the stockbreeding.
The exposed thing previously permits to conclude that the leptospirosis is one of
the disease with effect in the reproduction, cause of important economic losses in
the livestock explotations, as is the case of abortions, death calves and decrease
in the milkmaid production; and is, besides, a zoonotic capable to produce the
death of animals and infected men.
1. INTRODUCCION
12
gastos originados que se presentan por causa de este
microorganismo como son el cuidado mdico veterinario, la
vigilancia y control de los lugares de trabajo, ropas especiales de
proteccin, costos de vacunacin y seguros mdicos para el
personal en riesgo.
13
2. JUSTIFICACION
14
sern presentadas en este documento, que pretende recopilar la
informacin mas actualizada y detallada que exista hasta el
momento y darla a conocer al sector ganadero.
15
3. OBJETIVOS
GENERAL
Recopilar y analizar informacin bibliografca existente para la
identificacin de Leptospira interrogans serovar hardjo causante de
abortos en bovinos.
OBJETIVOS ESPECIFICOS
16
4. MARCO TEORICO
4.1 HISTORIA
17
de desage y al estudiarlas encontraron que el 40% de esas ratas
eran portadoras de la Spirochaeta icterohaemorrhagiae (Van der
Hoeden, 1958; Acha & Szyfres, 1986; Laguna, 2000), luego
renombrado Leptospira en 1917. Tambin en este ao, Noguchi
aisl esta bacteria, pero en ratas de Nueva York, EE.UU. En 1917,
se describe la infeccin en ratas gris (Rattus noruegicus) por el
mismo agente y se postul su posible papel como transmisora de
esta enfermedad al hombre. La confirmacin de aparicin de la
leptospirosis en toda la frontera occidental europea fue obtenida
rpidamente despus de la publicacin de los trabajos de Inada. Las
primeras informaciones sobre la enfermedad de leptospira en los
animales procedan de la leptospirosis humana, datan de 1852, ao
en el que Hofer describi una enfermedad de los perros antes
desconocida que llam Tyfus Seu Febris Nervosa Canum; Keff en
1898 cambi el nombre de esta enfermedad por la enfermedad de
los perros de Stuttgard; Sin embargo, la etiologa de esta
enfermedad fue aclarada en 1922 por el Checoslovaco Lukes, el
cual demostr que el agente era una espiroqueta.
18
Amrica respectivamente, quedando este ltimo como la primera
notificacin en el continente Americano. Mientras el primer reporte
en Gran Bretaa fue a cargo de Field y Wellers, 1950, Smith y Perry,
en 1952 divulgaron los primeros casos en Canad.
Los primeros diagnsticos hallados en el continente Africano datan
casi a mediados del siglo XX por Donatien y Gayot en 1950 en
Argelia; Cordier en 1952 en Tnez y Farina y Sobrero en 1960 en
Somalia etc.
La primera descripcin de Leptospirosis en equinos fue en la antigua
Unin Sovitica por Lubaschenko y Nowikowa 1947 y desde
entonces en Australia por Willington y Ferris en 1953; en
Yugoslavia, Zakarija en 1953; en Hungra, Kasza y Kemenes en
1955; en los EE.UU. Roberts Cork y Robinson en 1955 y en Francia,
Rossi y Kolochine Erber en 1955. Pero anteriormente, haba
notificacin sobre la primera observacin de Leptospira en el rin
de equino ya en 1934.
19
Transcurren algunos aos en Cuba sin que aparezcan
investigaciones y es slo cuando Prez en 1943 logr la
comprobacin de la enfermedad en un 28% de caninos a travs de
una encuesta serolgica. Luego la primera confirmacin en humano
por el mtodo serolgico y microbiolgico fue presentada por
Mrquez, Soler y Curbelo en 1945. Ramrez en 1971, hace la
primera notificacin de la existencia de anticuerpos especficos de
valor diagnstico de Leptospira bovina en Cuba. (Sandow &
Ramrez, 2005).
En los aos 1966- 67, Prez Carril y Sokolov estudiaron un brote de
esta entidad en la regin norte de la antigua provincia de Oriente en
Cuba y confirmaron el diagnstico mediante la observacin por
microscopa directa en campo oscuro y cultivo en el medio Werwor-
Wolff, modificado por Tarasov.
A partir de 1990 se report un aumento de la incidencia de la
leptospirosis en Cuba segn datos del Viceministerio de Higiene y
Epidemiologa del Ministerio de Salud Pblica La tendencia de la
enfermedad es ascendente y acentuada por las condiciones
actuales del perodo especial que afronta el pas, dada la existencia
de parcelas de autoconsumo, cra de animales, mayor asistencia de
personal transitorio a la agricultura, etc.. En el ao 1994 hubo 2.829
casos confirmados de leptospirosis a nivel nacional, por esta razn
aument la letalidad en Ciudad de La Habana y provincia La
Habana con respecto al resto del pas en el ao 1993. (Ayala, et al.,
1998).
20
realizados en Yucatn, Valle de Mxico y el D.F., en donde se
encontr un promedio de 14.4% de positividad en 9,875 sueros
estudiados entre 1961 a 1995. (Vado, et al., 2002).
21
diferencias entre las especies aisladas de la serovariedad hardjo,
sugirindose su diferenciacin en dos genotipos: Hardjobovis y
Hardjoprajitno. Todas las cepas aisladas de humanos, ovinos y
ciervos en Nueva Zelanda y de bovinos en Norteamrica
presentaban unos patrones de ADN similares entre s pero que se
diferenciaban de la cepa tipo original (Hardjoprajitno). Estas cepas
han sido designadas como genotipo Hardjobovis46, diferencindose
tres subtipos: A, B y C. La reciente clasificacin gentica refleja
diferencias, ya que el genotipo Hardjobovis se asocia a la
genoespecie L. borgpetersenii, mientras que el genotipo
Hardjoprajitno se asocia a la genoespecie L. interrogans (Acha &
Szyfres, 1986; Faine, 1994; Ayala et al., 1998).
22
tien con facilidad con los colorantes de anilina aunque son
gramnegativos; pueden impregnarse de plata (Fontana
Tribondeau, Levatidi, Rojo Congo, Tinta China), por fluorescena,
peroxidasa conjugada ms reactivos coloreados o por hibridacin
del ADN con reactivos coloreados biotinaavidit (DAB).
23
4.2.1 Estructura
24
revela un tubo plano y vaci, que retiene varios antigenos y contiene
cido murmico; Su funcin es mantener la estructura y la forma.
Las leptospiras tienen dos flagelos, uno aparece al final de la
insercin a travs del peptidoglicano; Cuando la clula se divide, se
forma un nuevo flagelo.
Los flagelos son similares a la estructura general de un flagelo de
otras bacterias gramnegativas, comprendiendo un gancho proximal
terminal y un disco rotor, intercalado con capas de la pared celular.
Las reacciones antignicas con inmunoglobulinas producidas por
infecciones animales pueden ser identificadas en la superficie
flagelar. El antgeno flagelar especifico puede ser identificado
utilizando calor, una propiedad utilizada para la identificacin de
antigenos flagelares en presencia de LPS. (Faine, 1994).
LipL21
LipL41
OmpL1
LPS
Membrana
externa
Flagelo periplsmico
LipL32 LipL45 LipL48
Espacio
LipL36 periplsmico
PBPs
Peptidoglicano
Membrana
interna
Figura 1. Estructura de la membrana celular leptospiral. Imagen del simposio de
leptospirosis. Asociacin mexicana de mdicos veterinarios especialistas en
bovinos, A.C.
25
4.2.2 Crecimiento
26
aislamiento de este serovar, se han descrito medios ms apropiados
como el EMJH suplementado con 1% se suero de conejo o el medio
con Tween 80/40. (Sandow & Ramrez, 2005).
27
Tabla 1. Especies de leptospira
Patgenas Saprofitas
L. interrogans L. biflexa
L. borgpetersenii L. wolbachii
L. inadai L. parva
L. santarosai
L. noguchii
L. alexanderi
L. kirschneri
L. meyeri
L. fainei
L. Weilii
28
es parsita en el hombre y los animales, mientras L. biflexa, es
saprofita, comnmente encontrada en el agua y el suelo; estas
pueden ser aisladas de ros y lagos. (Naigowit, et al., 2000; Trueba,
et al., 2004).
*En la 8va edicin del Manual Bergey fue denominado como gnero
Leptonema, pero cambi a especie incertae sedis.
29
autores dejaron planteado acerca de la determinacin de los
serogrupos y serovares.
Por razones prcticas, los serovares relacionados antigenicamente
se clasifican bajo el mismo serogrupo. (Sandow & Ramrez, 2005).
Las serovariedades ms frecuentes en Estados Unidos son
icterohaemorrhagiae, canicola, autumnalis, hebdomadis, australis y
pomona. En el Reino Unido, Nueva Zelandia y Australia, la infeccin
por L. interrogans serovariedad hardjo es la ms comn entre
personas que estn en contacto con ganado infectado (Tabla 3).
(Heymann, 2005).
Serogrupos Serovar(es)
Australis australis, bratislava, lora
Autumnalis autumnalis, forbragg, bim,
weerasinghe
Ballum ballum, aroborea
Bataviae bataviae
Canicola canicola
Cynopteri cynopteri
Celledoni celledoni
Djasiman djasiman
Grippotyphosa grippotyphosa, canalzonae,
ratnapura
Hebdomadis hebdomadis, jules, kremastos
Hurstbridge hurstbridge
Icterohaemorrhagiae icterohaemorrhagiae,
copenhageni, lai,
Zimbabwe
Javanica javanica, poi
Louisiana louisiana, lanka
Manhao manhao
Mini mini, georgia, swajizak
Panama panama, mangus
Pomona pomona
Pyrogenes pyrogenes
30
Ranarum ranarum
Sarmin sarmin
Sejroe sejroe, saxkoebing, hardjo
Semaranga patoc
Shermani shermani
Tarassovi tarassovi
31
4.3.3 Especies
4.3.3.1 Bovinos
Se han aislado de bovinos por lo menos 13 serovares. En Amrica
los serovares predominantes en bovinos son pomona, hardjo y
grippotyphosa; a veces se encuentran infecciones por canicola e
icterohaemorrhagiae, como tambin por otros serovares. Los
serovares pomona y hardjo son universales. Los brotes por este
ultimo se han comprobado cada vez con mas frecuencia, al
mejorarse los mtodos de diagnostico de laboratorio. En los ltimos
aos, se estn aislando tambin con ms frecuencia serovares del
grupo Hebdomadis. Es difcil interpretar la importancia de la
infeccin causada por algunos serovares; Tal es el caso del serotipo
paidjan (serogrupo Bataviae), aislado de riones de bovinos
obtenidos en un matadero de Argentina, y del serotipo galtoni
(serogrupo Canicola), aislado en Argentina y Colombia.
En las infecciones por hardjo, se encontr que las leptospiras
pueden residir en los rganos genitales (tero y oviductos), tanto en
hembras preadas como no preadas. Hay quienes sealan que la
infeccin de los rganos genitales indica que existe la posibilidad de
transmisin venrea. L. hardjo se subdivide en dos genotipos hardjo
hardjo-bovis y hardjo hardjo-prajitno. (Lewis, 1999; Veloso, et al.,
2000; Acha & Szyfres, 2001).
32
La leptospirosis aguda debida a L. pomona afecta principalmente a
los terneros y a veces a los bvidos adultos. (Biberstein & Cheng,
1994). L. hardjo, adems del sndrome de la disminucin de la
produccin de leche, produce problemas de esterilidad en los
bvidos. (Biberstein & Cheng, 1994).
4.3.3.2 Caninos y Felinos
Los serovares predominantes en todo el mundo en los caninos son
canicola e icterohaemorrhagiae. Adems de estos serovares, en
Amrica Latina y el Caribe se han aislado pyrogenes, paidjan y
tarassovi y en los Estados Unidos, ballum, grippotyphosa, pomona y
bratislava. Los serovares que predominan en Europa son similares.
(Acha & Szyfres, 2001).
4.3.3.3 Porcinos
Los serovares que con ms frecuencia se aslan de cerdos en
Amrica y en el mundo son pomona, icterohaemorrhagiae,
grippotyphosa, canicola, tarassovi, bratislava y muenchen del grupo
australis.
El cerdo es un reservorio muy importante de pomona. Las
leptospiras de los serovares bratislava y muenchen, adems de
localizarse en los riones, se refugian en los rganos genitales de
los porcinos, a semejanza de hardjo en los bovinos. (Acha &
Szyfres, 2001).
4.3.3.4 Equinos
Serolgicamente el equino reacciona a muchos serotipos
prevalentes en el medio ambiente. En los Estados Unidos se aisl
pomona y en Argentina, el serotipo hardjo. En Europa, adems de
33
pomona, se ha aislado icterohaemorrhagiae, sejroe y canicola. La
mayora de las infecciones son inaparentes.
Mediante la inoculacin de leptospiras inactivadas de varios
serovares se puede reproducir la opacidad corneal, que
frecuentemente se observa como una secuela de la fase aguda.
(Acha & Szyfres, 2001).
4.3.3.6 Hombre
El hombre es susceptible a un gran nmero de serovares. Muchas
veces se relaciona con la infeccin por icterohaemorrhagiae, pero
este no es el nico serovar que la puede producir como es el caso
de grippotyphosa. (Acha & Szyfres, 2001; Mayberry, 2003).
34
4.4 EPIDEMIOLOGIA
35
encuestas serolgicas permiten explorar los factores de riesgo
asociados con la presentacin endmica o epidmica de la
enfermedad en animales y humanos.
Un estudio realizado en Nueva Zelanda investig la presencia de
Leptospira en 1.003 inspectores de carne y encontr una asociacin
entre la positividad y el nmero de aos de empleo. Otra
investigacin realizada en trabajadores de alcantarillado de Canad
en 1995 registr una positividad de 12%, frente a 2% en el grupo de
control (P = 0,003), resalt la importancia de los roedores en la
transmisin de la enfermedad y se hizo nfasis en la necesidad del
uso adecuado de los elementos de proteccin personal.
En Colombia hay informes aislados de leptospirosis desde 1933, en
trabajos con ms orientacin a identificar los reservorios animales.
El primer caso humano en el pas se inform en 1968 y en 1997 se
public una serie en la que se hace referencia a los hallazgos
histopatolgicos, correspondientes a enfermos fallecidos en 1995
durante una epidemia en Barranquilla, con diagnstico clnico y
serolgico de leptospirosis icterohemorrgica (Hoyos, et al., 1998).
En Colombia la leptospirosis no es una enfermedad de notificacin
obligatoria y se desconocen tanto su prevalencia como su impacto
econmico, aunque se han descrito casos aislados en humanos y
brotes en Barranquilla, Buenaventura y Lrida. En un estudio
realizado se utiliz la tcnica de microaglutinacin-lisis (MAT) para
seis serotipos de Leptospira con el objetivo de estimar la prevalencia
de la infeccin en las poblaciones de operarios, bovinos y porcinos y
explorar algunas variables ambientales y del sistema de produccin
asociadas a la seropositividad. La prevalencia de individuos
seropositivos fue de 22,4% (intervalo de confianza de 95% (IC95%:
13,1 a 34,2) en los operarios, de 60,9% (IC95%: 53,2 a 68,2) en las
vacas en produccin, de 10,3% en los cerdos de ceba y de 25,7%
36
en los cerdos de cra. Se encontr una alta prevalencia de
infectados por Leptospira (serotipos pomona, bratislava y hardjo) en
este sistema de produccin, en el que existen condiciones
favorables para la transmisin de este microorganismo en las
diferentes especies animales y en los humanos. (Ochoa, et al.,
2000).
La infeccin por Leptospira en bovinos es importante por las
prdidas econmicas que generan problemas de infertilidad. En
Venezuela, en 1980, se verific que 40,8% de 1.526 abortos bovinos
eran atribuibles a la leptospirosis, y en Irlanda, en 1982, el serotipo
hardjo se asoci con 49,7% de 348 abortos bovinos. El aborto es
una secuela crnica de la infeccin que se produce semanas
despus de la leptospiremia (Hoyos, et al., 1998).
4.4.1 Transmisin
37
multiplicndose. El contagio se produce por el coito, al ingerir agua o
pienso contaminado; es mucho ms raro que acten insectos
picadores y otros artrpodos.
38
Teniendo en cuenta las particularidades epizoticas mencionadas
de la leptospirosis, resulta que es sta una enfermedad estacional
con un mximo de morbilidad en la poca calida del ao. Sin
embargo, con los animales explotados a escala industrial, esto no
sucede; en este caso las mayores cifras de morbilidad coinciden con
los mximos de partos, con la tasa de reproduccin y otros factores.
La llegada de grupo de animales no infectados activa en las
poblaciones afectadas el proceso patolgico. De aqu que el ingreso
de animales nuevos deba hacerse principalmente en poblaciones
que sufrieron la enfermedad tiempo atrs. En virtud de las
oscilaciones que sufren las poblaciones de animales- reservorios,
puede producirse un cierto ritmo en la presentacin de la
enfermedad a lo largo de los aos. En los llamados aos aos de
roedores y en los aos calurosos con precipitaciones, se presenta
tambin la enfermedad frecuentemente en los animales de
explotacin zootcnica.
39
mamferos (roedores, carnvoros, marsupiales, etc.), que tienen la
capacidad de mantener una amplia variedad de serovares. Los
hospederos de mantenimiento se caracterizan por los siguientes
elementos:
Gran receptividad a la infeccin por el serovar.
Relativa baja patogenicidad del microorganismo en el hospedero.
Presencia de infeccin renal con leptospiruria prolongada.
Infeccin crnica.
Transmisin eficaz de la infeccin a los animales de la misma
especie por contacto directo.
En algunos hospederos, se mantiene la Leptospira en el tracto
genital.
40
hardjo y pomona; al ovino del serogrupo australis, especialmente
serovar bratislava y el perro de canicola. Ellis y col., en 1981 y 1982,
proclamaron al ganado bovino como hospedero de mantenimiento
del serovar hardjo y tambin de pomona y grippotyphosa, siendo en
EE.UU; la L. pomona, al contrario de lo que ocurre en Europa. Quinn
y col., en 2002, sealan a la especie equina como posible especie
de mantenimiento al serovar bratislava.
41
muchas veces expuestas a la orina de los animales, ya sea de modo
indirecto o por aerosol, que puede contaminar sus conjuntivas,
mucosa nasal o abrasiones en las partes descubiertas de la piel
(Wangroongsarb, et al., 2005).Tambin pueden infectarse en forma
indirecta, al caminar descalzos en lugares donde los animales han
orinado. En muchos pases, los animales domsticos, sobre todo
cerdos y bovinos, constituyen importantes reservorios de leptospiras
y una fuente frecuente de infeccin para el hombre.
Los trabajadores de arrozales estn expuestos al agua contaminada
por la orina de roedores que infestan los campos. Entre los
trabajadores agrcolas, los que recogen la caa de azcar
constituyen otro grupo de alto riesgo. Los ratones de campo que
anidan sobre vegetales son una fuente de infeccin para los
trabajadores que recogen diferentes cosechas, especialmente en las
primeras horas de la maana cuando las manos de estos entran en
contacto con el roci mezclado con la orina. (Acha & Szyfres, 2001).
42
4.4.3 Hospederos accidentales
43
tambin influye en su supervivencia. En resumen la fuente de
infeccin y el modo de transmisin son variados y tienen relacin
con actividades de riesgo.
4.4.4 Reservorio
44
las encontradas en la costa y sierra del pas. Estos estudios
merecen ser realizados en la actualidad estableciendo muestras
significativas y metodologa adecuada para poder establecer la
seroprevalencia real de la leptospirosis en los reservorios de
nuestras diferentes regiones.
Los roedores son unos de los animales ms importantes en la
transmisin de la leptospirosis sobre todo la relacionada a las
formas ictricas y de mayor cuidado en el humano. La mayora de
ellos vive en ambientes silvestres en equilibrio con la naturaleza
pero al producirse alteraciones de la misma como en el Fenmeno
de El Nio, la redistribucin del curso de las aguas por la lluvia
excesiva llev a la destruccin de sus madrigueras, acercndolos
hacia el abrigo que la vivienda humana puede ofrecerles.
Asimismo, la conservacin de alimentos en el hogar permite que
ellos incrementen el contacto con el humano aumentando las
posibilidades de transmitir la infeccin. Algunas especies que son
llamadas roedores comensales o sinantrpicos se adaptan mejor a
las condiciones ambientales creadas por el hombre (Rattus y mus).
De esta manera Ratus norvergicus (rata de desages), Rattus rattus
(rata del tejado) y mus musculus (ratn domstico) deben ser
reconocidos por sus caractersticas morfolgicas y caractersticas de
su comportamiento entendiendo las reas donde buscan abrigo, la
forma de su dinmica poblacional, cules son sus predadores
naturales as como sus habilidades y comportamiento habitual.
(Laguna, 2000).
45
favorece la transmisin y dispersin de las leptospiras por
contaminacin del alimento y agua a travs de su orina.
4.5 PATOGENESIS
46
fenmenos inflamatorios, que agreden a la clula endotelial y liberan
citoquinas y potentes compuestos vasoactivos. Algunos autores
describen que la presencia de una sustancia endotoxina en la
espiroqueta estimulara la produccin de citoquinas entre ella el
factor de necrosis tumoral (FNT). (Laguna, 2000). Peptidoglicanos
extrados de la pared celular de la Leptospira interrogans inducen
liberacin de FNT alfa por los monocitos y aumentan la adherencia
de las clulas endoteliales a neutrfilos. La induccin del TNF alfa
por factores txicos bacterianos produce una respuesta local y
sistmica, resultando en dao capilar y vasculitis. (Cornejo, et al.,
2001). Este FNT, cuyo papel es decisivo en la mediacin de la
respuesta inflamatoria induce la produccin de otras citocinas de
importancia en este proceso, tales como interleucina 1y 6 (IL-1 e IL-
6). (Laguna, 2000). Esta capacidad nociva puede ser debida a
factores txicos (hemosilina, fibrolisinas, lipasas) y endotoxinas
(catalasa, hialuronidasa) (Sandow & Ramrez, 2005). Tambin se
describe una alteracin de la bomba Na/K ATPasa. (Cornejo, et al.,
2001).
47
Ms tarde, se le suma la accin de los anticuerpos situados en la
superficie eritrocitaria que sensibilizan al eritrocito, causando su
rotura -anemia-. Durante esta fase (leptospiremia) ocurre una
reaccin inflamatoria en la mama (mastitis). La hemlisis producida
por la hemosilina y por el dao hepatocelular se le atribuye a las
causas isquemicas y toxicas ictericia-. Tras esta fase, las
leptospiras se sitan en el rin, lugar de difcil acceso para los
anticuerpos, la ubicacin en los tbulos renales se ve facilitada por
la produccin de ureasa por parte de las Leptospiras (Sandow &
Ramrez, 2005).
Algunos estudios en ratones sugieren la presencia de hemorragias
capilares resultando una disrupcin de las clulas de la membrana
endotelial por el intercambio con toxinas glicoprotenicas, que
sustituyen la recepcin de cidos grasos requeridos para mantener
la integridad vascular de la pared celular. A pesar de todo el
mecanismo, las lesiones petequiales reflejan una vasculitis
sistmica, permitiendo la migracin y proliferacin de espiroquetas
casi dentro de todos los rganos y tejidos, teniendo en cuenta un
amplio espectro por enfermedades clnicas (Mandell, et al., 2000);
Asociada a la agresin de las clulas parenquimatosas, el endotelio
capilar es lesionado con intensidad, probablemente por la accin de
las citotxinas. De Brito y cols. observaron, en la clula endotelial de
capilares del pulmn, rin y diafragma, alteraciones mitocondriales
y del retculo endoplasmtico, semejantes a las detectadas en los
hepatocitos. Las mitocondrias se encuentran dilatadas mientras que
el retculo endoplasmtico est aumentado de tamao. Todos estos
fenmenos precederan a la lesin final de necrosis celular.
(Laguna, 2000).
48
Posteriormente, se multiplicarn en la luz de los tbulos
contorneados renales, principalmente en las proximidades de las
microvellosidades, donde la nefritis es provocada por el dao capilar
y la produccin de determinadas endotoxinas y hemolisinas , que
terminan por producir anoxia, nefrosis y hemoglobinuria, por la
posible isquemia debida a la agregacin intravascular de
hemoglobina que obstruira los capilares y tambin por la presencia
de mononucleares infiltrados por una reaccin autoinmune, lo que
da lugar a la fase de (leptospiruria) que puede tener carcter
continuo o intermitente y de duracin variable segn la especie
afectada. (Sandow & Ramrez, 2005; Garca, et al., 1998).
Puede suceder una lesin vascular severa, causando, por ejemplo,
hemorragias pulmonares, isquemia de la corteza renal con necrosis
de clulas de epitelio tubular (Mandell, et al., 2000), con presencia
de coagulacin intravascular diseminada y trombocitopenia
(Annimo, 2000). La agresin pulmonar, que se manifiesta en su
forma ms grave por un cuadro de neumona hemorrgica, parece
relacionarse con la accin directa de una toxina sobre la pared
capilar. Las lesiones son observadas con mayor frecuencia en la
periferia y bases pulmonares como consecuencia de la abundancia
de capilares y mayor vigor de los movimientos respiratorios de esas
reas. Esta grave agresin pulmonar puede en realidad resultar en
una reaccin de Herxheimer, desencadenada por la liberacin de
lipopolisacridos de la pared celular de la leptospira. El compromiso
de otros rganos como las suprarenales, pncreas cerebro y
meninges parece obedecer a los mismos mecanismos
mencionados. (Laguna, 2000). Igualmente se presenta destruccin
de la arquitectura heptica resultando en ictericia y lesin en clulas
del hgado con o sin necrosis (Mandell, et al., 2000), eritrofagocitosis
y colestasis. En el rin, las manifestaciones histopatolgicas
49
presentan una inflamacin tubulointersticial difusa caracterizada por
una variada infiltracin de clulas inflamatorias como linfocitos,
clulas plasmticas, macrfagos y leucocitos polimorfonucleares
(Nelson & Horsburgh, 2005).
50
necrosis. El dao heptico en apariencia es subcelular y las
leptospiras rara vez se observan en el hgado. (Laguna, 2000). La
microscopa muestra alteraciones celulares en de la zona III del
acino de Rappaport (Cornejo, et al., 2001). En los casos graves la
ictericia es muy intensa y tiene su mecanismo de produccin todava
en discusin. Sin embargo parecen importantes la hemlisis, el dao
hepatocelular y la colestasis intraheptica. La insuficiencia renal y la
reabsorcin de hemorragias parecen factores coadyuvantes. Para
algunos autores la disminucin funcional de la clula heptica
representa el factor primordial en el proceso. La ictericia sera
resultante de la agresin heptica aunque la necrosis hepatocelular
no sea prominente, concordando con los valores poco elevados de
las transaminasas sricas. De Brito, por medio de microscopa
electrnica heptica admite que los defectos bsicos se encuentran
en la captacin (lesin del polo sinusoidal) conjugacin (deplecin
de los grnulos de ribonucleina) y la excrecin de la bilirrubina
(alteraciones mitocondriales de los ductos biliares), con
predominancia de la lesin en la ltima fase. La ictericia en los
casos graves es muy intensa, y puede presentar una coloracin
anaranjada por lo que se le denomina cprica o rubnica. Ella se
produce por la asociacin entre la impregnacin bilirrubnica,
amarilla y la dilatacin e hiperpermeabilidad vascular que resulta en
congestin y hemorragia. (Laguna, 2000).
51
placenta destruyen los eritrocitos fetales y los cambios
degenerativos microscpicos en la placenta interfieren en le
intercambio fisiolgico entre la madre y el feto, pudiendo originar la
muerte fetal. Siempre hay que tener en cuenta que, en algunos
casos, la aparicin del aborto es muy posterior al momento de la
infeccin. Por ltimo, la uvetis recurrente en equinos parece
involucrar la produccin de anticuerpos contra el antgeno leptospiral
en reaccin cruzada con tejidos oculares. El dao de la retina con
uvetis tiene una relacin con la presencia de linfocito B en la retina.
52
Los antigenos de superficie pueden tener muchos roles, con ciertos
serovares asociados con enfermedades leves (ballum, canicola,
grippotyphosa, hardjo, hebdomadis, hyos, pomona y tarassovi),
mientras que otros serovares, como los miembros del serogrupo
Icterohaemorrhagiae (australis, autumnalis, bataviae, copenhageni,
icterohaemorrhagiae, lai y pyrogenes), estn asociados con muchas
enfermedades severas (Mandell, et al., 2000). La inmunidad
adquirida despus de la infeccin es serotipo especfica, pudiendo el
mismo individuo ser afectado ms de una vez por serotipos
diferentes (Carneiro, et al., 2004).
53
La respuesta inmunitaria contra un antgeno se produce por
influencia de varias subpoblaciones celulares, entre las cuales se
encuentran los linfocitos y los monocitos; estos reconocen el
antgeno y responden a un determinante antignico especfico y la
respuesta de esta clula antgeno sensible puede resultar en la
produccin de anticuerpos o en la produccin de clulas que
participan en la respuesta inmunitaria mediada por clulas.
54
el macrfago juega un papel en el procesamiento del antgeno, ya
que es la principal clula fagoctica del sistema monocitos-
macrfagos (Aidorevich & Soyano, 1991).
55
La mayora de los estudios realizados se basan, nicamente, en la
investigacin de la inmunidad humoral. Tras la infeccin,
inicialmente se produce una elevacin de las IgM, que alcanzan
niveles detectables a los pocos das de la desaparicin del periodo
febril que acontece durante la fase de bacteremia, es decir a los 2-5
das de la aparicin de los signos de la enfermedad aguda. Los
anticuerpos IgM dificultan la multiplicacin de las leptospiras, pero
no las destruyen, poco despus de la aparicin de las IgM,
comienzan a detectarse las IgG especficos, que producen la lisis de
las leptospiras. Estos anticuerpos persisten durante aos en el
animal. Las IgM alcanzan su pico mximo a las 3- 4 semanas y las
IgG a las 4- 12 semanas post infeccin.
Durante toda la fase de leptospiruria, los niveles de IgM pueden no
detectarse en sangre. En cambio, se puede detectar las IgG en
orina, aproximadamente a las 6 semanas despus de la infeccin.
Adems, los animales suelen presentar una respuesta inmune local,
lo que provoca la aparicin de IgA en la orina, hacia las 12 semanas
post infeccin.
En la mayora de los casos, en el momento del aborto los niveles de
anticuerpos son bajos, incluso negativos. Esto redunda en una
dificultad a la hora de realizar el diagnstico de los abortos por
leptospiras (Sandow & Ramrez, 2005).
La inmunidad es muy resistente, y, supuesta la presencia
simultanea de patgenos en los riones, es probable que se
mantenga durante muy largo tiempo. De acuerdo con el tiempo de
utilizacin del animal domestico, esta inmunidad puede conservarse
durante toda su vida. La inmunidad protege, sin embargo,
nicamente frente a la serovariedad que la origino y ante los
serovares que exhiben una reaccin con ella mas o menos
56
marcada. Por consiguiente, los animales inmunes pueden actuar
como fuentes de contagio (Blaha, 1995).
57
desarrollan los anticuerpos circulantes presentndose la afeccin
renal, heptica, meningitis y uvetis.
58
manera particular a los msculos gemelos de las pantorrillas. El
dolor es intenso y se acompaa de hiperestesia cutnea. La
asociacin de vmitos, dolor abdominal y nuseas ocurren hasta en
el 95% de los pacientes (esto es muy inespecfico). La hepato
(<15%) y la esplenomegalia (< 22%) son poco frecuentes en la
forma anictrica. Lo ms frecuente en la fase sptica es la
sensibilidad muscular y las manifestaciones oculares como
hemorragias conjuntivales, fotofobia y dolor ocular. El signo ms
caracterstico podra ser el de la hiperemia conjuntival, que le da una
tonalidad rojiza a las esclerticas y que usualmente aparece en el
tercer o cuarto da de la enfermedad. Asimismo aparecen
eventualmente hemorragias subconjuntivales. Ocasionalmente los
pacientes presentan diarrea. Menos frecuentemente aparecen:
irritacin farngea, linfadenopatas, hemorragias cutneas y rash
(irritacin) maculopapular o urticarial que se presenta en el tronco.
En la segunda semana de la enfermedad se inicia la fase inmune.
En ella, la fiebre, en caso de estar presente, es baja y dura de uno a
tres das. Esta fase se correlaciona con la aparicin de anticuerpos
IgM circulantes mientras que la concentracin de C3 se encuentra
en el rango normal. Habra evidencias de depsito de IgG e IgM,
as como beta 1C, en el msculo de la pantorrilla, presencia de
autoanticuerpos para msculos esquelticos y corazn, depsitos
en los riones, de IgG, IgM y beta 1C. El dato ms importante,
desde el punto de vista clnico es la presencia de la meningitis
asptica. En esta fase las leptospiras ya desaparecieron del LCR sin
embargo, aparecen las manifestaciones clnicas relacionadas con la
aparicin de anticuerpos. Las manifestaciones no son especficas y
el diagnstico puede ser confundido con meningitis de etiologa viral,
debido a la presencia de pleocitosis mononuclear. Cuando las fases
estn bien definidas, el examen clnico induce a diagnosticar
59
meningitis asptica por leptospirosis. Esta manifestacin
neurolgica dura algunos das (rara vez hasta tres semanas) y no es
fatal sobretodo en los casos anictricos. Al examinar el LCR, los
mononucleares no son mas que 500 clulas por mm3 hay glucosa
normal y clnicamente no hay focalizacin ni encefalitis. La cefalea
es intensa y la puncin lumbar puede proporcionar alivio a sta.
Todos los serotipos patognicos para el humano son probablemente
capaces de causar meningitis asptica. Los serotipos con mayor
prevalencia son icterohaemorrhagiae, cancola y pomona.
60
la excrecin de bilirrubina (Laguna, 2000), Hoyos, et al., 1998,
describe que los niveles de bilirrubina casi siempre son menores a
20 mg/dl, pero pueden ser tan altos como 60-80 mg/dl; igualmente,
los valores de aminotransferasas rara vez exceden de 100/200 U/l;
Hay elevacin de nitrgeno srico ureico y de creatinina srica.
Laguna, 2000; comenta que existe hepatomegalia en el 70 % de los
casos. Hay complicaciones raras como la colecistitis aguda de
tratamiento quirrgico que se asocia con la infeccin de L.
autumnalis. En los nios pueden presentarse hipertensin,
colecistitis acalculosa, pancreatitis, as como vasculitis necrotizante
perifrica.
61
la circulacin de sustancias procoagulantes como la tromboplastina
de los tejidos o de cogulos en la superficie del vaso lesionado. El
compromiso renal es bastante variable, puede ser poco agresivo y
presentar solo albuminuria y hematuria en muchos casos o
presentarse como insuficiencia renal grave con oliguria progresiva.
La insuficiencia renal generalmente es producto de la disminucin
de la perfusin renal, relacionada a la deshidratacin y con menor
frecuencia a la disfuncin miocrdica.
62
grippothyphosa. Es importante tener electrocardiogramas de los
pacientes durante la hospitalizacin. Existe una descripcin clnica
caracterizada, entre otras cosas, por lesiones eritematosas,
sobreelevadas de 1-5 cm, que ha sido denominada Fiebre de Fort
Bragg y parece estar relacionada a infecciones por leptospira del
serotipo autumnalis, aunque parece que ha habido asociacin con el
serotipo pomona. Esta enfermedad fue observada en el verano de
1942 y su fase inicial era similar a la fase sptica de la leptospirosis.
Lo que llam la atencin fue la presencia de las lesiones pretibiales
simtricas alrededor del cuarto da. Adems, al contrario de los otros
cuadros relacionados a leptospiras la esplenomegalia estuvo
presente en el 95% de los casos.
63
Figura 1. Caractersticas clnicas de leptospirosis ictrica y anicterica.
64
La forma urmica, que se centra en los riones, sigue a las otras
dos o aparece en su ausencia. Puede ser aguda y rpidamente
mortal con signos de trastornos gastrointestinales, respiracin
urmica y lceras en el tramo anterior del tracto alimentario; o puede
seguir un curso lento con aparicin retrasada. (Biberstein & Cheng,
1994).
4.7.2.2 Equinos
La mayora de las infecciones son inaparentes o asintomticas.
(Rahim, et al., 2005). La fase aguda es febril puede haber fotofobia,
lagrimeo, edema de la conjuntiva ocular, miosis e iritis. En la fase
crnica, se pueden observar adherencias anteriores y posteriores,
cuerpo vtreo turbio, formacin de cataratas, uvetis y otras
anormalidades oftalmolgicas. Ocasionalmente puede haber abortos
en yeguas infectadas. (Acha & Szyfres, 2001).
Se reconoce, en muchas oportunidades, slo la secuela de la
enfermedad que es la oftalma peridica, la cual aparece despus
de un perodo de latencia que puede ser de varios meses luego del
perodo febril. En los ojos pueden detectarse las leptospiras, as
como anticuerpos en el humor acuoso. En los equinos existen otras
causas de oftalmia peridica y debe ser evaluada por un mdico
veterinario con experiencia en equinos. La enfermedad puede
65
presentarse con sndromes hepatonefrticos y cardiovasculares
como se ha descrito en Europa. Los serotipos que predominan son
icterohaemorrhagiae, pomona, hardjo, y canicola (Laguna, 2000).
Otros sndromes clnicos que han sido reportados en caballos son
uvetis, abortos, pirexia e ictericia (Rahim, et al., 2005); as como,
hemoglobinuria, necrosis de la piel y los labios, conjuntivitis con
edema de los parpados, lagrimeo y fotofobia (Sandow & Ramrez,
2005).
4.7.2.4 Porcinos
La presentacin clnica vara pudiendo ser subclnica o febril fugaz
(Laguna, 2000). Presentan sntomas como anorexia, perturbacin
del equilibrio, parlisis progresiva, disminucin de peso y
produccin Lctea (Sandow & Ramrez, 2005). En otros animales
puede presentarse con abortos y presencia de lechones dbiles o
con retardo del crecimiento, adems ictericia, hemoglobinuria,
convulsiones, y trastornos gastrointestinales. Pueden aparecer
signos neurolgicos y meningitis. El aborto aparece entre los 15-30
das post infeccin principalmente si la infeccin se produjo en el
ltimo tercio de gestacin. Los cerdos son los principales reservorios
66
del serotipo pomona. Adems pueden albergan tarassovi, cancola,
grippotyphosa, e icterrohaemorrhagiae.
4.7.2.5 Bovinos
La infeccin puede provocar una enfermedad de curso agudo,
subagudo o permanecer clnicamente inaparente. La enfermedad se
manifiesta por una fiebre de 4 a 5 das, anorexia, conjuntivitis y
diarrea. La leptospiruria por hardjo es mucho mas prolongada que
por pomona. El serovar hardjo (serogrupo Sejroe) en bovinos se
caracteriza por dos sndromes: a) agalactia, o una reduccin
importante de la produccin lctea y b) abortos o paricin de
terneros dbiles que mueren al poco tiempo de nacer. (Acha &
Szyfres, 2001).
67
Las infecciones con serovar Hardjo, generalmente resultan con
ningn signo o signos clnicos agudos relativamente leves, pero
produce un estado renal asociado con largos perodos de prdida
urinaria. La infeccin persistente en el tracto genital de machos y
hembras es tambin un rasgo prominente de infecciones por hardjo.
(Bolin, 2003).
68
4.7.3 Sndrome pulmonar
69
lesiones muy variables desde lesiones blanco amarillento en la
superficie o focos hemorrgicos en pulmn. El msculo cardaco se
presenta degenerado y en algunos puntos hay hemorragias. Los
riones son edematosos de color rojizo o pardo oscuro con nefritis
intersticial, lesiones necrticas e ictricas por toda la superficie,
tambin hemorragia. La vejiga, llena de orina turbia o rosada, los
ganglios tumefactos y las mucosas intestinales pueden estar
inflamadas.
4.8 DIAGNOSTICO
70
tcnicas de laboratorio distintas, para su realizacin previa, es
conveniente aunar informacin sobre una serie de datos que puedan
orientar en el diagnstico.
Para ello, se debe tener en cuenta el diagnstico epidemiolgico,
clnico y de laboratorio.
Un diagnstico especfico y definitivo depende del aislamiento del
microorganismo, pruebas serologicas y una deteccin de DNA
especfico.
71
animales silvestres portadores; si el rebao comparte el bebedero
con otros animales silvestres; edad y sexo de los animales
afectados; sintomatologas predominantes y caractersticas de los
signos clnicos; antecedentes de leptospiras; y si se realiza
vacunacin contra la Leptospirosis.
72
microorganismo es necesario tener en cuenta el tiempo de la
enfermedad que tiene el paciente, de tal manera que ser necesario
obtener sangre para hemocultivo dentro de la primera semana de la
enfermedad y en caso que sobre pase ese tiempo, es necesario
realizar el aislamiento a partir de la orina. El cultivo del lquido
cefalorraqudeo, igualmente ser til en la primera semana de la
enfermedad; aunque suele ser difcil la sospecha clnica en esa
etapa (Laguna, 2000).
73
Para propsitos epidemiolgicos, pueden obtenerse muestras de
agua y suelo, y en caso de epidemias o epizootias, sangre, rin,
hgado de animales capturados (roedores u otros animales
silvestres) (Rahim, et al., 2005).
74
2001 y Dutta & Christopher, 2005, lo considera el gold estndar.
Esta tcnica esta basada en la formacin de agregados de bateras
que resultan de la adicin de una suspensin de leptospiras (suero)
(Yitzhaki, et al., 2004). Se emplea para detectar anticuerpos en
sueros de pacientes sospechosos o enfermos donde el suero del
paciente sospechoso o enfermo que reaccionan con antgenos vivos
(Laguna, 2000) de leptospiras de 10 das de crecimiento en medio
lquido de EMJH con enrequicimiento, y es el ms utilizado.
Adems, es la prueba oficial para la exportacin e importacin de
animales. El MAT fue ideado por Martn et al., en 1917 y en 1918,
Martn y Pettit lograron describir el fenmeno de aglutinacin y lisis
con suero. Desde entonces, el mtodo ha sido modificado y
mejorado por Schffner y Mochtar, 1926; Borg-Peterson y Fagroeus,
1949; Wolff, 1954; Carbrey, 1960; Galton et al., 1965; Cole et al.,
1973; Sulzer y Jones, 1973. Estos autores trataron de estandarizar
factores como: tiempo y temperatura de incubacin, el punto de
corte, la concentracin del antgeno y la edad de siembra (Rahim, et
al., 2005).
75
inicio del cuadro. Existe reaccin cruzada con antigenos de
legionella, sfilis y enfermedad de Lyme (Cornejo, et al., 2001).
76
En varias ocasiones se reportan resultados falsos negativos, se
identifica incorrectamente el serogrupo, o se identifican muestras
positivas para cualquier serogrupo; igualmente se reportan
variaciones en los ttulos en particular en muestras con un serovar
especifico; existen varios factores que pueden contribuir a un error
en el diagnostico del MAT como, contaminacin y deterioro del
antigeno (Chappel, et al., 2004).
77
hardjo, el cual es poco antignico (Sandow & Ramrez, 2005).
Igualmente, Veloso, et al., 2000., describen que este mtodo falla en
la deteccin de anticuerpos durante las infecciones crnicas o en la
fase temprana de la enfermedad.
78
lisis, se interpret tomando como referencia la cantidad de
leptospiras presentes en el control negativo. Se reconoci una
reaccin como positiva s tena el 50% o ms de leptospiras
aglutinadas o lisadas. Una reaccin negativa fue aquella igual al
control negativo, en nmero aproximado de leptospira no
aglutinadas ni lisadas. Los sueros positivos fueron sometidos a
diluciones dobles seriadas hasta alcanzar el ttulo correspondiente
en la ltima dilucin positiva. Las diluciones obtenidas alcanzaron un
rango entre 1:50 1:6400. Se consideraron positivos los sueros que
mostraron ttulos >1:100. Para el anlisis de la significanca de las
diferencias encontradas entre las seroprevalencias se utiliz la
prueba de j cuadrado para proporciones (Almenteros, et al., 2004).
79
4.8.3.1.2 Prueba de Aglutinacin Microscpica con Antgeno
Muerto (MSAT)
4.8.3.1.4 ELISA
80
IgM (Rahim, et al., 2005; Laguna, 2000; Dutta & Christopher, 2005),
durante la primera semana de la enfermedad y la deteccin tarda
de IgG, lo cual permite diferenciar infecciones recientes de las
pasadas. La deteccin de anticuerpos especficos IgM con una sola
muestra es confirmatoria de una infeccin reciente por leptospiras.
Adems, se considera ms sensible que MAT, es fcil de
estandarizar, los antgenos se pueden almacenar durante meses, no
tiene ningn riesgo para los tcnicos y pocas reacciones cruzadas,
tampoco diferencia los anticuerpos vacunales de las infecciones. A
pesar de que es una prueba muy eficaz, aun no est considerada
como prueba oficial.
81
recomiendan debido a su falta de sensibilidad y porque no es capaz
de determinar el serovar.
En la aglutinacin macroscpica se utilizan antgenos muertos y es
til para la evaluacin masiva (Laguna, 2000).
82
4.8.3.2 Tcnicas directas
83
4.8.3.2.3.1 Inmunofluoresencia
Esta tcnica consiste en examinar muestras bajo luz ultravioleta.
Casi siempre se utiliza en el diagnstico para los casos de abortos y
la presencia de Leptospiras en sedimentos de orina. Su mayor
desventaja es que requiere la produccin de antisueros policlonales
de buena calidad y necesita la utilizacin de microscopio de
fluorescencia (Sandow & Ramrez, 2005). Puede detectar
leptospiras en los tejidos o fluidos del feto o de animales infectados.
4.8.3.2.3.2 Inmunoperoxidasa
Es ms rpida y asequible que la anterior ya que no precisa de un
microscopio de fluorescencia.
84
tcnica; un consenso general a definido como una alternativa el
PCR con amplificacin del gen 16S rRNA para identificar bacterias
patgenas.
4.8.3.2.5 Aislamiento
85
Contrainmunoelectrforesis (CIE), Inmunoabsorcin Magntica,
Hibridizacin de ADN, Absorcin de antigeno inmunomagnetica etc.
(Sandow & Ramrez, 2005).
Tambin se realizan aislamientos de este microorganismo,
manejando muestras de orina infectadas por leptospira y realizando
un aislamiento del agente en medios de cultivo bsicos como tween/
suero de bovino + albmina, con suero de conejo, inhibidores y
0.15% de agar (Schnberg, et al., 2005). Tambin se utilizan medios
semislidos como el de Fletcher, o en medio de Ellinghausen-Mc
Cullogh-Johnson-Haris (EMJH) enriquecido con albmina y cidos
grasos. Esta tcnica es difcil y puede demorar hasta 16 semanas.
La sensibilidad del hemocultivo slo alcanza el 50% de los casos
(Cornejo, et al., 2001; Dutta & Christopher, 2005).
86
por especies, segn las manifestaciones clnicas predominantes
(Sandow & Ramrez, 2005).
87
4.9 CONTROL Y TRATAMIENTO
4.9.1 Control
Desde el punto de vista epidemiolgico, la Leptospirosis es una
enfermedad difcil de controlar ya que el microorganismo se puede
albergar en el rin y ser eliminado en la orina de muchos animales,
perpetundose entre ellos el estado de portador. Sin embargo, se
deben realizar esfuerzos para conocer la prevalencia de serotipos
especficos en una determinada poblacin y describir los focos de
contagio a fin de evitar aparicin de nuevos casos (WHO, 1982).
88
frente a cepas distintas de un mismo serovar. Estos productos
pueden aumentar su respuesta si se les adicionan adyuvantes, los
cuales son sustancias que estimulan la respuesta inmune y su
duracin. Asimismo, la desparasitacin de bovinos con productos
que contengan levamisol, potencializa la respuesta inmune humoral
en animales inmunosuprimidos. (Brunner & Muscoplat, 1980;
Vanselow, 1987). Los serovares y las cepas varan entre pases, por
lo que la proteccin ofrecida por las vacunas elaboradas con cepas
de otro pas o regin, en otras regiones puede ser poca eficaz
(Thiermann, 1984). En segundo lugar, diversos estudios sobre las
vacunas existentes, han demostrado que tanto vacunas
monovalente, bi y hasta pentavalente, no evitan la infeccin, la
migracin al tero y oviducto ni la persistencia de la infeccin renal y
por con siguiente, tampoco evitan la leptospiruria ni el nacimientos
de algunas cras dbiles y mortinatos (Bolin et al., 1989; Bolin et al.,
1991).
89
servicio y previo al parto, para los terneros hay que vacunar a los 2
meses de edad y luego revacunar en dependencia del productor
(Faine, 1982; WHO, 1986; Ellis, 1992; Bielansk & Surjballi, 1998;
Bolin, 2003).
La otra variante es la vacunacin total del rebao y luego tratar con
dihidroiestreptomicina 2 mg/kg. a todas las vacas preadas (South &
Stoenner, 1974; Bolin, 2003). Tambin hay programa de vacunacin
cuando se que aplica en los cerdos y perros.
90
4.9.1.2 Control higinico sanitario
91
Buen drenaje o relleno de terrenos bajos o fcilmente inundables
de residuos lquidos y agua pluviales.
Se debe prohibir tanto a la poblacin humana como animal beber o
baarse en agua de ros, charcos y lagunas posiblemente
contaminados con el agente.
Disposicin, colecta y eliminacin de los residuos (recipientes
apropiados, colecta permanente y coordinada con la poblacin,
relleno sanitario correcto y en condiciones).
Control ecolgico de la poblacin animal salvaje.
Aislamiento de los animales domsticos.
Tratamiento especifico de personas y animales enfermos segn
los esquemas teraputicos.
Drenaje, canalizacin de cursos o espejos de agua que tienden a
provocar inundaciones o que representen posible focos de esta
enfermedad.
Realizar estudios epidemiolgicos para tener nocin sobre
prevalencia de la enfermedad en la especies as como para saber
que serogrupo o serovar esta circulando.
Desratizacin general de la explotacin y construccin de edificio a
prueba de roedores.
Reducir el pastoreo conjunto con otras especies domsticas y con
otros rebaos.
Mantener una poltica de ciclo cerrado y en su defecto someter a la
cuarentena estricta a los animales de reposicin que entran nuevos
en la explotacin.
No separar las cras de las madres despus de parto (bovino).
Evitar el uso de machos enfermos para la monta directa.
Las mascotas deben vacunarse anualmente.
Realizar informe anual sobre la situacin de la enfermedad en el
territorio.
92
(Faine, 1982; OIE., 1992; WHO., 1993; Ellis, 1994; Heath &
Johnson, 1994; Fenga et al., 2000; Acha & Syfres, 2001; Lyford &
Herrera, 2002; Willat, 2002; Heymann, 2005).
4.10 TRATAMIENTO
4.10.1 En bovinos
Se administran los siguientes antibioticos:
Dihidriestreptomicina: 25mg/kg./5 das /IM.
Estreptomicina: 12-25mg/kg./ dos veces al da por 3 das / IM.
Estreptomicina: 25mg/Kg. una sola vez durante la fase de
leptospiruria.
Clorhidrato de tetraciclina: 11mg/kg./5 das
Tetraciclina: 15-25 ml/kg./4 das / IM.
Oximicina: 100g/5 das / IM.
Transfusin sangunea 5-10 L/450kg en caso de anemia hemoltica.
93
Adems de los antibiticos, en dependencia de la gravedad y
sintomatologa se admite la aplicacin de: transfusin sangunea,
analgsicos, sueros hiperinmunes y gammaglobulinas.
En bovinos, un trabajo relativamente reciente propone la amoxiclina
como opcin a la dihidroestreptomicina en el tratamiento de ganado
infectado con L. hardjo (Smith et al, 1997).
4.10.2 En humanos
Tomando en cuenta que la Leptospirosis humana, tiene una
evolucin clnica sumamente variable y suele ser una enfermedad
fatal cuando se tarda en su reconocimiento temprano. Resulta difcil
evaluar con precisin la eficacia del tratamiento antimicrobiano; por
lo que de considerar estos elementos de gran importancia en su
manejo (Grell et al., 1971; Kobayashi et al., 1984; Tan et al., 1986;
Muthusethupati & Shivakumar, 1987; Dupont et al., 1997; Ginebra,
2001).
94
aceptados en la prctica clnicas (Okuzaki & Ringen, 1975; McClain
et al., 1984; Alexander & Rule, 1986; Cornejo, et al., 2001). El
tratamiento siempre se indicara de inmediato y en correspondencia
con los sntomas que presente el paciente.
95
5. DISCUSION
96
estndar para la deteccin de leptospirosis, ya que es la mas
sensible y especifica si se utilizan los serovares apropiados, sin
embargo, tiene limitaciones para su interpretacin porque es posible
encontrar falsos positivos y la posibilidad que exista reacciones
cruzadas con los serovares; otros mtodos serolgicos son la
tcnica de ELISA y PCR, pero estas tcnicas adems de costosas,
exigen que las muestras con leptospiras no presenten otros
microorganismos contaminantes; por lo tanto la tcnica de
predileccin para el diagnostico de leptospirosis es la MAT, que es
la prueba internacional aceptada para la identificacin de dicha
enfermedad. Es importante la utilizacin del laboratorio como
herramienta fundamental de diagnstico, para el diseo efectivo de
estrategias de control sobre la base de una correcta interpretacin
de los resultados, por lo tanto el diagnostico de esta enfermedad no
debera basarse solo en la utilizacin de mtodos serolgicos, sino
tambin, en tcnicas como aislamiento de la bacteria, microscopia
de campo oscuro, tcnica de ELISA; adems, tener en cuenta la
procedencia del animal, verificar si este vive en zona de riesgo,
observar el medio en el que habita, su alimento y consumo de agua,
presencia de roedores, etc.; es decir, integrar todo tipo de
diagnostico para la confirmacin y veracidad de los resultados.
97
Lo anterior permite focalizar las medidas preventivas y de promocin
de la salud, haciendo ms efectivas las intervenciones en la salud
pblica y animal. Si se realiza un plan estratgico para la prevencin
y control de la leptospirosis seguramente la enfermedad no causara
daos graves e irreversibles en la salud y economa de la poblacin
en riesgo.
98
6. CONCLUSIONES
99
la erradicacin de la bacteria consiste en medidas de prevencin y
control especialmente mascotas, roedores, agua y suelos
contaminados.
100
7. RECOMENDACIONES
101
8. REFERENCIAS
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