Determinarea colorimetric, pe baza reaciei Griess, a azotului nitric n

extract apos
Metoda se bazeaz pe reducerea cantitativ a N-NO 3 din extractul de material vegetal la
N-NO2 de ctre zinc, n prezena ionilor de cadmiu, la pH = 9,6 9,7 i dozarea colorimetric
a colorantului azoic Orange I format n urma reaciei de diazotare a ionului nitrit cu acidul
sulfanilic, urmat de cuplarea cu alfa naftol.
Mod de lucru
Extracia
Se cntrete o cantitate de 0,2 g material uscat i mcinat care se pune ntr-un balon conic
de 100 mL. Se adaug 25 mL ap distilat, se las 30 minute, agitnd din cnd n cnd, apoi
se filtreaz printr-un filtru uscat de porozitate medie.
Dozarea
n baloane conice de 25 mL, se pipeteaz 1 mL din extractul apos de material vegetal. Se
adaug 9 mL soluie tampon care conine ioni de cadmiu i aproximativ 10 mL zinc pulbere.
Se agit timp de 10 minute, apoi se filtreaz printr-un filtru uscat de porozitate medie. Din
filtratul obinut se pipeteaz 2 mL i se adaug 2 mL din reactivul de culoare. Se las 30
minute la 25-300 pentru dezvoltarea culorii maxime. Coloraia rmne maxim 24 de ore.
Concomitent cu pregtirea extractelor de material vegetal se pregtete o serie de etaloane
de 2, 4, 6, 8, 10 micrograme de N-NO 3 / mL. Pipetnd din soluia etalon, care conine 100
micrograme de N-NO3 1, 2, 3, 4, 5 mL n baloane cotate de 50 mL care se completeaz la
semn cu ap distilat. Din soluiile astfel obinute se pipeteaz cte 1 mL n baloane de 25 mL
i se prelucreaz dup modul descris la dozare.
Dozarea azotului nitric se face spectrofotometric la 470 nm fa de o prob oarb ob inut
n aceleai condiii ca i proba de analizat, volumul de extract fiind nlocuit cu un volum egal
de ap distilat. Coninutul de N-NO3 gsit la colorimetrie se determin prin interpolare din
graficul de calibrare.
n cazul obinerii unor extracte colorate nu este necesar s se recurg la opera ii speciale
de decolorare, deoarece n condiiile de pH ale reaciei, pigmen ii prezeni n solu ie sunt
distrui eliminndu-se posibilitatea interferenelor.
Aparatur i materiale
Balana analitic;
Spectrofotometru sau fotocolorimetru cu filtru albastru;
Baie de ap;
Baloane cotate de 25 i 100 mL
Baloane cotate cu dop rodat de 50 i 1000 mL
Pipete de 1, 2, 5, 10, 25 mL;
Cilindru gradat de 10 i 500 mL.

Reactivi
Soluie tampon de pH 9,6 9,7 cu ioni de cadmiu: se dizolv 0,3 g de acetat de cadmiu n
aproximativ 400 mL ap distilat. Se amestec cu o soluie obinut prin adugarea a 10 mL
soluie HCl concentrat (d = 1,19 g/cm3) i a 35 mL amoniac 25% (d = 0,91) adugate pe
rnd n aproximativ 500 mL ap distilat. Soluia se aduce la 1000 ml cu ap distilat;

1
 Reactiv pentru formarea colorantului azoic Orange I: se prepar prin nclzirea la 50-60 0 C a
soluiei obinute din 900 mL ap distilat i 100 mL acid acetic glacial n care se dizolv
apoi pe rnd: 0,25 g acid sulfanilic i 0,2 g -anaftol. Dup rcire se adaug 100 mL solu ie
amoniacal 10%. Se pstreaz n sticl brun;
Soluie etalon de N-NO3: se dizolv 0,722 g azotat de potasiu anhidru cu ap distilat ntr-un
balon cotat de 1000 mL i se aduce la semn. 1ml din soluie conine 100 g N-NO3.

Calcularea i exprimarea rezultatelor

Coninutul de N-NO3 din materialul vegetal uscat se exprim n ppm i se calculeaz:
V
N NO 3 ( ppm s.u.) C
m

Unde:
C = coninutul de N NO3 din extractul colorimetrat, gsit din curba de etalonare
(g);
V = volumul soluiei extractive (mL);
m = cantitatea de material vegetal luat pentru analiz(g).