CLULAS MADRE NATURALEZA Y PERSPECTIVAS

Son aquellas clulas dotadas simultneamente de la capacidad de

autorrenovacin (es decir, producir ms clulas madre) y de originar clulas
hijas comprometidas en determinadas rutas de desarrollo, que se convertirn
finalmente por diferenciacin en tipos celulares especializados.

En el contexto de la actual investigacin, se pretende obtener clulas madre

que se mantengan como tales en cultivo en el laboratorio, y que bajo
determinados estmulos puedan conducir a poblaciones de clulas
diferenciadas.

El zigoto (vulo fertilizado) es una clula totipotente, capaz de dar origen a todo
el organismo. Durante las primeras divisiones el embrin es una esfera
compacta (mrula), en la que todas las clulas son totipotentes, y de hecho
esto se refleja de modo natural en los gemelos monozigticos. A los pocos das
comienza una primera especializacin, de modo que se produce un blastocisto,
con una capa superficial que dar origen al trofoblasto, del que deriva la
placenta, y una cavidad casi hueca (rellena de fluido) en la que est la masa
celular interna (m.c.i.).

Las clulas de esta m.c.i. son pluritotentes, porque aunque por s solas no
pueden dar origen al feto completo (necesitan el trofoblasto), son el origen de
todos los tejidos y tipos celulares del adulto.

Hay que aclarar un punto: aunque las clulas de la masa celular interna del
blastocisto son pluripotentes, no son en s mismas clulas madre dentro del
embrin, porque no se mantienen indefinidamente como tales in vivo, sino que
se diferencian sucesivamente en los diversos tipos celulares durante la fase
intrauterina. Lo que ocurre es que cuando se extraen del embrin y se cultivan
in vitro bajo ciertas condiciones, se convierten en clulas inmortales dotadas
de esas dos propiedades de las que hablbamos: autorrenovacin y
pluripotencia.

Obtencin en ratn de clulas madre embrionarias: desde inicios de los aos

80. Actualmente, en casi cualquier raza de ratn es posible separar
blastmeros de m.c.i. del blastocisto, y cultivarlos de modo que las clulas
resultantes (clulas madre o troncales, stem cells) presentan dos notables
propiedades: pluripotencia y capacidad de contribuir a la lnea germinal:

Pluripotencia: Las clulas madre pueden diferenciarse in vivo e in vitro en una

gran diversidad de tipos celulares.

In vivo dicha multipotencia se manifiesta cuando al incorporar clulas

madre en blastocistos pueden dar origen a cualquier tejido u rgano,
 In vitro pueden contribuir igualmente, con las seales adecuadas, a
diferentes lneas celulares de las tres capas embrionarias (ecto-, meso-
y endodermo). Este es el campo donde ms se est investigando
actualmente, por su relevancia para la clonacin teraputica, como
veremos.

Contribucin a la lnea germinal: Las clulas madre embrionarias de ratn

pueden contribuir a la lnea germinal de ratones quimricos. Si se inyecta
clulas madre cultivadas de una raza de ratn en el interior de un embrin
normal (blastocisto) de otra raza, dichas clulas madre pueden dar origen a
cualquier tipo de tejido del adulto. Lo interesante aqu es que en algunos casos
sirven de fuente para las clulas germinales (espermatozoides u vulos). Estos
ratones en los que hay tejidos procedentes de dos razas distintas se
denominan quimeras, y en algunas quimeras las clulas reproductivas
proceden de las clulas madres introducidas en el blastocisto, de modo que su
constitucin gentica se puede distinguir de la de las clulas somticas.

Si manipulamos clulas madre por ingeniera gentica, y las transferimos a un

blastocisto, podemos obtener ratones quimeras en los que parte de los tejidos
estn alterados genticamente. Si las clulas madre manipuladas contribuyen a
la lnea germinal, el rasgo gentico modificado en el ratn quimera se transmite
a la descendencia, constituyndose entonces una lnea de ratones
transgnicos. Los ratones transgnicos, incluidos los denominados K.O.
(noquedados genticamente, es decir, con un gen mutante introducido por
recomibinacin homloga) son actualmente una herramienta valiossima en
biologa y en diseo de modelos de enfermedades humanas.

Otras clulas madre:

Clulas madre germinales (EG): se aislan de fetos, a partir de la cresta

germinal, donde se est produciendo la diferenciacin de la lnea germinal.

Clulas madre de adulto (AS): El caso paradigmtico es la clula madre

hematopoytica (HSC), que genera todos los tipos de clulas sanguneas y del
sistema inmunitario, y que reside en la mdula sea (aunque en la fase fetal se
encuentra en hgago y bazo).

CLULAS MADRE HUMANAS

Clulas madre embrionarias y germinales

En 1998 dos grupos informaron de la obtencin de clulas madre humanas,

reproduciendo lo que ya se haba logrado en ratones:

El trabajo de Thomson y colegas en la Universidad de Wisconsin,

financiado por Geron: aislamiento y cultivo de clulas madre
embrionarias (ES) a partir de blastocistos sobrantes procedentes de
programas de FIV.
El de Gearhart, en la Universidad John Hopkins obtuvo clulas madre
germinales embrionarias (EG) a partir de fetos abortados
Las posibles aplicaciones de estas clulas madre embrionarias son:

Estudios bsicos
Diseo de nuevos medicamentos
El uso que ms ha llamado la atencin sera el empleo de las clulas
madre o sus derivados para terapias celulares o incluso reparacin de
tejidos daados.

Se ha calculado que se usaran embriones sobrantes de programas de FIV, en

unos cuantos aos se podran establecer unas 1000 lneas distintas de clulas
ES humanas. De los estudios realizados hasta ahora, parece incluso que la
frecuencia de derivacin de ES humanas es alta (25-33%), superior a la de los
ratones, especie en la que, adems, hay variaciones en la eficiencias de
derivacin dependiendo de las razas.

CLULAS MADRE DE ADULTO

En humanos se conoce desde hace aos, al igual que en ratones, la clula

madre hematopoytica de adultos, que reside en la mdula sea y que da
origen a toda las lneas de clulas sanguneas e inmunes. Aunque se conocen
desde hace tiempo clulas madre en tejidos que, como la sangre o la
epidermis, presentan gran tasa de proliferacin, solo recientemente se han
descubierto clulas madre en rganos que normalmente tienen una baja tasa
de renovacin, como es el caso del cerebro.

As pues, la novedad ha consistido en reconocer la existencia de clulas madre

pluripotentes en otros tejidos y rganos, y an ms interesante, que algunas de
ellas presentan la suficiente flexibilidad como para generar clulas
especializadas de otros linajes.

Esto ha supuesto una sorpresa alentadora, ya que aumenta la perpectiva de

obtener a largo y medio plazo terapias celulares, sin los problemas ticos
asociados a destruir embriones para obtener clulas madre.

PAPEL EN LA RENOVACIN CELULAR DEL ORGANISMO

Se estn acumulando pruebas de que desde la vida perinatal a la adulta van

apareciendo clulas madre en los tejidos somticos, como parte de la
estrategia del organismo para su renovacin en condiciones fisiolgicas o ante
un dao. Esto nos lleva a la conclusin aparentemente paradjica de que en
realidad las clulas madre de adulto no son clulas primitivas derivadas
directamente del embrin temprano, sino que seran clulas que aparecen
tardamente, especializadas en suministrar clulas de repuesto al organismo
adulto.

Un descubrimiento de mediados de los 90 parece apoyar esto: existen clulas

madre neuronales en el cerebro anterior de mamferos, rodeando al ventrculo
lateral, y participan en la repoblacin de la subepndima del ventrculo tras
irradiacin, y en los roedores son la fuente de nuevas neuronas que migran
hasta el bulbo olfativo. Adems, en monos migran por una ruta desconocida
hasta la corteza cerebral asociaciativa (la que contribuye a los mecanismos de
memoria).

La identidad exacta de las clulas madre neuronales est sometida a

controversia, ya que algunos las localizan como clulas de la epndima que
rodean a los ventrculos, mientras que otros las hacen coincidir con los
astrocitos de la zona subventricular.

Las clulas madre del sistema nervioso central (SNC) pueden generar los tres
grandes tipos de clulas del cerebro adulto: neuronas, astrocitos y
oligodendrocitos. Pero desconocemos la importancia y significado real de estas
clulas madre. Puede ser que en verdad el SNC del adulto mantenga una
cierta capacidad de autorrenovacin, como rasgo adaptativo segn las
especies. Quiz en los animales superiores la formacin local de nuevas
neuronas en ciertas estructuras cerebrales tenga algo que ver con los
mecanismos de creacin e integracin de la memoria. Adems, hace poco se
han aportado pruebas de que los estmulos ambientales pueden intervenir en la
regulacin de la formacin de neuronas.

Las clulas madre mesenquimales (MSC) humanas estn presentes en el

estroma de la mdula sea, constituyendo una poblacin totalmente diferente
de las clulas madre hematopoyticas, y su papel es contribuir a la
regeneracin de los tejidos mesenquimticos (hueso, cartlago, msculo,
ligamento, tendn, tejido adiposo y estroma). Se han aislado y cultivado MSC
humanas, y lo que es mejor, se ha logrado su diferenciacin controlada hasta
clulas con rasgos tpicos de osteocitos, condrocitos o adipocitos,
respectivamente.

TERAPIAS CON CLULAS MADRE

El retrato robot de una buena clula madre para terapias celulares y trasplantes
en humanos sera como sigue:

1. Debera ser efectivamente pluripotente, idealmente que se pudiera

generar cualquier tipo buscado de clula
2. Debera ser inmortal, es decir, tener la capacidad de proliferar
(autorrenovarse) indefinidamente
3. Debera poseer un fenotipo estable, bien caracterizado desde el punto
de vista molecular
4. Debera carecer de potencial tumorignico
5. Debera ser susceptible de manipulacin gentica, para permitir
modificaciones genmicas precisas, incluyendo la introduccin de genes
teraputicos.

TERAPIAS CELULARES Y TRASPLANTES

La esperanza teraputica principal que se tiene en las clulas madre es que se

puedan emplear para terapias celulares y trasplantes de tejidos, sin los
problemas actuales ligados a los aloinjertos: escasez de donantes
histocompatibles, necesidad de administrar drogas inmunosupresoras
(ciclosporina, corticoides) con sus efectos secundarios (riesgo de infecciones,
de cncer, nefropatas, etc.). Lo ideal sera derivar tejido con la identidad
histolgica del propio paciente para hacer autotrasplantes.

Se est abriendo el campo de la Ingeniera Celular, que en definicin de Bernat

Soria es un nuevo campo interdisciplinar que aplica los principios de la
ingeniera y de las ciencias de la vida a la obtencin de sustitutos biolgicos
para restaurar, mantener o mejorar la funcin tisular.

PERSPECTIVAS CON CLULAS MADRE DE ADULTOS

Ya anteriormente hemos repasado algunos casos recientes que demuestran la

flexibilidad inesperada de clulas madre de adultos para diferenciarse incluso
en lneas que no son las suyas originales. Obviamente, si se confirman estos
datos, y se avanza en esta lnea, tendramos una nueva posibilidad de terapias
celulares y autotrasplantes, sin el problema tico de manipular y destruir
embriones humanos, aunque sean artificiales (por transferencia de ncleo
somtico a ovocitos).

REPROGRAMACIN DIRECTA DE CLULAS SOMTICAS?

Una de las grandes aspiraciones de los estudios sobre el desarrollo

embrionario y las clulas madre es la de desprogramar y reprogramar a placer
clulas somticas, sin necesidad de acudir a la transferencia de ncleos a
ovocitos (con la consiguiente destruccin de embriones). Quiz una vez que
conozcamos en detalle lo que ocurre in vivo, seamos capaces de convencer a
ciertas clulas somticas de comportarse como clulas pluripotentes y despus
encarrilarlas hacia los tipos celulares deseados.

Algunos ejemplos de terapias experimentales con clulas madre

Cerebro
Como dijimos, an tenemos que aclarar el debate sobre la identidad y
localizacin de las clulas madre neuronales.
Neuronas funcionales dopaminrgicas y serotoninrgicas a partir de ES de
ratn.
Se ha logrrado el trasplante de clulas pluripotentes del mesencfalo en
ratas parkinsonianas, que experimentaron una recuperacin transitoria.
A partir del telencfalo de fetos se han aislado clones de clulas madre
neuronales, que se han logrado diferenciar en los principales linajes
neurales. Se han trasplantado en zonas germinales de ratones neonatos, y
all participaron en desarrollo normal, incluyendo migracin por rutas
establecidas para diseminarse a regiones del SNC.
En 2001, un equipo del Medical College de Nueva York logr en ratones
infartados la reparacin del 68% del tejido cardiaco, con una recuperacin
funcional parcial. Se originaron clulas de varios tipos esenciales: msculo
esqueltico, endotelio y msculo liso.
Pncreas:
Estudios de Bernat Soria (Universidad Miguel Hernndez de Elche): clulas
secretoras de insulina a partir de clulas ES de ratn. Curacin tras ms de
 un ao de ratones diabticos.
Grupo de Amon Peck (Universidad de Florida): reversin de diabetes en
ratones NOD (diabticos no obesos) por trasplante de islotes de
Langerhans generados a partir de clulas madre del pncreas. En junio de
2000 un grupo de la Universidad de California en San Diego anunci que
haba reactivado la produccin de insulina en clulas beta crecidas a partir
de lneas inmortales.
Equipo de Susan Bonner-Weir: cultivo de clulas de islotes humanos a
partir de clulas del ducto pancretico.
Hgado:
Ya aludimos a las clulas madre de hepatocitos que parecen residir en la
mdula sea. Un reciente informe en ratones logr usar con xito
trasplantes de mdula sea para corregir tirosinemia, como modelo de
enfermedad heptica.
Hay ejemplos de clulas pancreticas que se diferencian a hepatocitos.
Corazn:
La empresa Geron ha comprobado que clulas madre embrionarias
humanas pueden originar cardiomiocitos. Pero todava no se han
encontrado clulas madre en el propio corazn.
En 2001 un equipo del Medical College de Nueva York comunic en ratn
la reparacin del 68% del tejido cardiaco de corazones infartados,
inyectando directamente clulas madre de la mdula sea. Se regener
msculo estriado, y vasos (endotelio y musculatura lisa). Recuperacin de
parte de la funcin cardiaca.
Otros ejemplos:
Un equipo de la Universidad John Hopkins demostr que una sola clula
madre hematopoytica de ratn poda desarrollarse en clulas epiteliales
de diferentes rganos, incluyendo intestinos, pulmn y piel. A los 11 meses
de los trasplantes el pulmn tena un 20% de clulas diferenciadas a partir
de la clula madre.

Estos ejemplos son alentadores, pero no eliminan totalmente la cuestin del

uso de las clulas embrionarias:

No se han aislado clulas pluripotentes de ciertos rganos, como es el caso

del corazn. Puede que haya tejidos y rganos de los que no podamos
disponer de clulas madre, por lo que tcnicamente tendramos que volver a
pensar en las ES por clonacin teraputica.
Las clulas madre embrionarias son ideales para realizar terapia gnica, que
ser necesaria para curar ciertas patologas. Lo veremos a continuacin.

CLULAS MADRE PARA TERAPIA GNICA SOMTICA

En algunas enfermedades no bastar con realizar autotrasplantes, sino que

habr que corregir defectos genticos. Las clulas madre embrionarias de
ratn (y quiz las humanas), son excelentes para manipulacin gentica, y
pueden realizar recombinacin homloga, por lo que se podra ensayar incluso
terapia gnica sustitutiva, reemplazando genes anmalos por versiones
correctas.
Imaginemos el caso de un paciente aquejado de anemia falciforme o talasemia
(enfermedades genticas que afectan a la hemoglobina). Se realiza la
transferencia de ncleo somtico a vulos, se desarrolla el blastocisto artificial,
se aislan las clulas madre y se manipulan por ingeniera gentica para corregir
el defecto. Una vez asegurados de que el gen se ha insertado correctamente
(por recombinacin homloga) y se puede expresar, se induce la diferenciacin
de las ES hasta clulas sanguneas o sus precursores pluripotentes, que
podran recolonizar la mdula sea, y se curara la enfermedad de modo
permante.

Tambin se puede intentar la manipulacin gentica de clulas madre no

embrionarias: clulas madre neuronales de fetos humanos fueron manipuladas
genticamente, y demostraron su capacidad de secretar productos
teraputicos, por lo que muestran un potencial para corregir defectos
metablicos en neuronas y gla.

HACIA LA RECONSTRUCCIN DE RGANOS Y TEJIDOS?

Como vimos anteriormente, la terapia en principio ms inmediata de los cultivos

de clulas madre ser el trasplante de poblaciones clulares al propio individuo
donante. Pero para conseguir el autntico potencial teraputico de esta
tecnologa habra que lograr reconstruir tejidos ms complejos e incluso
rganos o algunas de sus partes, con plena funcionalidad. Aqu se presentan
nuevos problemas de otro tipo, que podramos englobar bajo el epgrafe de
ingeniera de tejidos y rganos, pero que an quedan relativamente lejos de
las posibilidades actuales. De todas formas, repasaremos algunos avances
recientes que en un futuro podran combinarse con las estrategias de las
clulas madre.

En una situacin relativamente sencilla de este enfoque se encuentran las

tecnologas de clulas encapsuladas, por la que las clulas teraputicas se
separan del resto del organismo por una membrana sinttica con permeabilidad
selectiva, de modo que suministra proteccin al trasplante, al tiempo que
permite el intercambio de nutrientes, oxgeno y seales moleculares, y la
liberacin de las sustancias teraputicas. Las clulas se pueden manipular
genticamente previamente para garantizar la secrecin de la sustancia
teraputica. Se est intentando con clulas secretoras de insulina (para la
diabetes), con clulas cromafines (tratamiento del dolor crnico), con clulas
secretoras de hormona de crecimiento (para enanismo), etc. Igualmente
existen intentos de expresar protenas antiangiognicas contra el cncer
(endostatina) en clulas inmovilizadas en matrices de alginato.

En cuanto a regeneracin de rganos, uno de los puntos clave es lograr

estructuras organizadas tridimensionalmente, donde las distintas clulas
adquieran posiciones adecuadas para intercomunicarse entre s y con otras
partes del organismo. Para ello se intenta disponer de andamios
tridimensionales que sirvan para dar forma y consistencia, y para alojar
adecuadamente a las clulas:
Prtesis seas biolgicas, a base de combinaciones de clulas, sustancias
bioactivas y matrices tridimensionales de soporte que imitan el hueso natural:

Un grupo ha demostrado la importancia de las interacciones celulares

tridimensionales y de la densidad celular para producir tejidos de tipo seo. Se
logr la agregacin de precursores seos sometiendo a clulas osteognicas,
procedentes de cultivo, al factor TGF-1, lo que a su vez desencaden la
produccin de protenas especficas del hueso y la formacin de
microespculas cristalinas maduras con tejido seo humano organizado.

Otro grupo ha usado una combinacin de trozos de coral (una cermica natural
de carbonato clcico) con clulas madre mesenquimales para generar
implantes ortopdicos que lograron curacin al menos parcial de lesiones
seas en ovejas. Al cabo de varios meses tras la implantacin, estos
composites de coral se haban remodelado como huesos maduros, e incluso
haban logrado su fusin completa con el hueso nativo. Parece ser que parte
del xito se debe a que el coral suministra una matriz porosa tridimensional
reabsorbible, que permite la infiltracin y organizacin de las clulas
repobladoras.

La ventaja de usar clulas madre mesenquimales es que son fciles de aislar

de la mdula sea, y puede inducirse su diferenciacin en osteoblastos
tratndolas con factores como dexametasona, BPM (protenas morfogenticas
seas) o vitamina C.

Anteriormente las aproximaciones se haban basado en matrices

tridimensionales de polisteres degradables o de cermicas de hidroxiapatita,
que se repoblaban con clulas de mdula sea o tejido del periostio, y se
mantenan en cultivo durante varios das antes de su implantacin.

Reconstruccin de vejiga urinaria de perros: se aislaron clulas de msculo liso

del exterior y clulas uroteliales del interior de la pared de la vejiga, se
multiplicaron in vitro, y se sembraron respectivamente en la superficie exterior e
interior de un tejido de polister con forma de vejiga; la construccin resultante
se nutri durante 7 das en un medio estril, y se implant en perros que
carecan de la mayor parte de su vejiga. Esta neo-vejiga funcion de modo
notablemente similar a la natural al menos durante un ao, demostrando
estabilidad en el volumen de orina y resistencia adecuada. A los tres meses del
trasplante los polmeros haban desaparecido, y la vejiga haba desarrollado
vasos sanguneos y alguna inervacin. A microscopio, la histologa de la
neovejiga era notablemente parecida a la natural, con capas de msculo liso y
urotelio patentes.
 BIBLIOGRAFA

http://www.ugr.es/~eianez/Biotecnologia/clonembrion.htm