INHIBICIN ENZIMTICA

Cualquier compuesto que reduce la velocidad de una reaccin enzimtica es considerado

como un inhibidor; la inhibicin enzimtica es un mecanismo de regulacin en las clulas y
uno de los procedimientos de diagnstico y tratamiento ms importantes en clnica. Los
inhibidores enzimticos los encontramos en medicamentos, antibiticos, venenos, toxinas,
preservantes, insecticidas, etc.
Se pueden distinguir dos tipos de inhibidores, los irreversibles y los reversibles; en la
inhibicin irreversible el inhibidor se une fuertemente a la enzima ya sea covalentemente o
no, de tal suerte que su disociacin es lenta, no puede ser separado fcilmente de la enzima
por dilisis ni se puede disminuir su efecto por dilucin simplemente; de esta forma la
enzima es inactivada y difcilmente recupera su actividad. Algunos frmacos son
inhibidores irreversibles como la penicilina la cual acta modificando covalentemente a la
enzima transpeptidasa, impidiendo por lo tanto la sntesis de las paredes celulares de las
bacterias, matndolas de esta manera. La aspirina acta modificando covalentemente a la
enzima ciclooxigenasa reduciendo as la sntesis de prostaglandinas y por lo tanto las
seales inflamatorias.
La inhibicin reversible por el contrario muestra una rpida disociacin del complejo EI,
pues rpidamente forman un sistema de equilibrio, dando lugar a un grado de inhibicin
definido, que depende de las concentraciones de la enzima, del sustrato y del inhibidor. Los
inhibidores se unen reversiblemente a la enzima a travs de las mismas interacciones que
participan en la unin enzima-sustrato; de esta forma, la unin es ms especfica que en la
inhibicin irreversible. En la inhibicin reversible, la actividad de la enzima (in vitro)
puede ser recuperada por dilisis o simplemente por dilucin.

TIPOS DE INHIBICIN REVERSIBLE:

1. INHIBICIN COMPETITIVA
e el sustrato
En sta, el inhibidor compite con S por el sitio de unin de la enzima,Sdebido ald
gran parecido entre ambos, tanto en la forma como en el modo de interaccin con la
E
enzima,
I ver figura 1.
S I S
I
E

I S I

Figura 1.- Diferentes posibilidades de inhibicin competitiva, a: modelo clsico, b: S e I

son excluyentes, c: S e I comparten un grupo comn de unin, d: sitios de unin distintos
pero se sobrelapan, e: la unin del inhibidor a pesar de ser en un sitio distinto, distorsiona o
enmascara el sitio de unin del sustrato.

De esta forma, el centro activo de la enzima puede ser ocupado por el sustrato o por el
inhibidor, con la diferencia de que en el primer caso hay formacin de producto y en el
segundo no:
ks kp
E S ES E P

I
ki
EI

Haciendo la deduccin de Michaelis Menten en estas condiciones se tiene:

Vmx S
vo
I
KM 1 S
Ki

Como vemos, se ha introducido un factor al denominador de la ecuacin el cual va a

aumentar el valor de este y por lo tanto va a disminuir la velocidad inicial. Pero este intruso
est afectando especficamente a la KM, la que aumenta y con ello disminuye la afinidad de
la enzima por su sustrato. Expresndola de acuerdo a Lineweaver Burk:

1 K
M 1
I 1

1

vo K mx ki S Vmx

Si hacemos las grficas de Michaelis Menten y Lineweaver Burk en presencia y ausencia

del inhibidor competitivo se puede observar que la v o se ve disminuida por efecto del
inhibidor (a concentracin fija), en cualquier concentracin de sustrato, mientras que la V mx
no vara y la KM aumenta (ver figura 5.2). Lo que se obtiene es una serie de rectas que
pasan por el punto 1/Vmx pero variando 1/KM, que se desplazan en sentido anti horario a
medida que se aumenta la concentracin del inhibidor competitivo.

Son ejemplos de este tipo de inhibicin, el uso de muchos medicamentos como el

alopurinol en el tratamiento de la gota, el cual inhibe competitivamente a la enzima
Xantino oxidasa que se encarga de la formacin del cido rico, los quimioterpicos que se
emplean en el tratamiento del cncer, los cuales no son ms que inhibidores competitivos
de alguna de las enzimas del proceso de replicacin del DNA, con ello se evita la
proliferacin de las clulas malignas (aunque tambin se inhibe la proliferacin de las
c
1/v0

I c

dems clulas). c

1/Vmx
v0 CON INHIBIDOR COMPETITIVO

Vmx

CON INHIBIDOR COMPETITIVO

KM KM [S] -1/KM 1/[S]

c
Figura2.- Ploteos de Michaelis-Menten y Lineweaver-Burk en presencia y ausencia de un
inhibidor competitivo.

2. INHIBICIN NO COMPETITIVA
En este tipo de inhibicin el inhibidor se une a un lugar distinto al sitio de unin del
sustrato produciendo un complejo inactivo, independientemente de que la molcula de
sustrato se haya unido o no a la enzima. Tanto el complejo EI como el ESI son inactivos.

En la figura 3 se puede observar el mecanismo clsico de inhibicin no competitiva; la letra

c est indicando el centro cataltico.

Figura 3.- Modelo clsico de inhibicin no competitiva.

Pueden presentarse entonces las siguientes 3 posibilidades:

1/Vmx

1/v0 ks kp
E S ES E P

I I
ki ks ki
1/Vmx
EI S ESI

Al hacer la deduccin de la ecuacin de Michaelis Menten en estas circunstancias, esta

queda afectada de la siguiente manera:
CON INHIBIDOR NO COMPETITIVO

Vmx
S

1
I

vo
ki
K M S

1/[S]
Como vemos, el intruso ahora est afectando al numerador, dividindolo, pero
especficamente es la Velocidad mxima la que es modificada (es disminuida), en tanto que
la KM no vara. La ecuacin doble recproca para la inhibicin no competitiva es:

1 K I 1 1 1 I
M 1
v o Vmx ki S Vmx ki
S

Vmx

Las grficas para estas dos ecuaciones sern: Vmx

KM [S]

Un ejemplo de este tipo de inhibicin es el efecto del cianuro sobre la enzima citocromo
oxidasa, la cual interacta con el oxgeno durante la respiracin celular; la presencia de
cianuro impide el ingreso del oxgeno al centro activo de la enzima.

Estos inhibidores generalmente actan sobre varias enzimas distintas, ya que como no se
unen al centro activo de la enzima, carecen de Sespecificidad de unin.
 3. INHIBICIN ACOMPETITIVA

En esta tambin el inhibidor se une a un lugar distinto al centro activo, pero aqu
sucede que solo se unir el inhibidor si lo ha hecho previamente el sustrato, ya que
I I
la unin de este ltimo, produce un cambio conformado nal en la enzima, que recin
permite la unin del inhibidor.

Existen entonces las siguientes dos posibilidades:

ks kp
E S ES E P

-1/KM -1/KM
I
ki
1/v0
1/Vmx
ESI

Con esta nueva posibilidad, la ecuacin de Michaelis Menten se ve modificada de la

siguiente manera:
CON Inhibidor ACOMPETITIVO

Vmx
S
1/Vmx
1 I ki
vo
KM
S
1 I / ki

En este caso, tanto la Velocidad mxima como la KM son afectadas por el mismo factor de
1/[S]
los anteriores casos, disminuyendo ambos parmetros. La ecuacin doble recproca ser por
lo tanto:

1 K 1 1
M 1 I / ki
v o Vmx S
Vmx
Vmx
Vmx

Como puede verse, la pendiente de la ecuacin no es afectada, pero el intercepto en el eje

v0
1/vo aumenta por el factor (1 + [I]/ki), por lo tanto para la ecuacin de Lineweaver-Burk, la
recta en presencia del inhibidor acompetitivo ser KM una paralela
[S]
que pasa por encima de la
recta sin inhibidor; a medida que aumentamos el inhibidor, las rectas paralelas seguirn
subiendo. Las grficas de Michaelis-Menten y Lineweaver-Burk sern:
C I
S de inhibicin lo realizan algunos aminocidos aromticos sobre la enzima
Este tipo
E fosfatasa alcalina. I
C
S
En la figura 4 podemos ver un esquema representativo de este tipo de inhibicin.
E
S

Figura 4.- Modelo esquemtico de la inhibicin acompetitiva. c = centro cataltico

REGULACIN ENZIMTICA

Como ya hemos dicho anteriormente, la presencia de la enzima resulta ser un regulador del
metabolismo pues de ella depende que se lleve a cabo la reaccin correspondiente; por esta
razn cuando hay necesidad de ella, hay un primer punto de control y es la sntesis de la
enzima misma, lo cual es controlado hormonalmente; la enzima cumple su rol y luego
desaparece. Existen enzimas que tienen una vida media prolongada (por ejemplo horas o
das), estas deben funcionar en determinados momentos del metabolismo y en otros no; por
esta razn, estas enzimas estn sujetas a mecanismos de regulacin.

Las enzimas regulables tienen en comn las siguientes caractersticas:

1. Catalizan la primera o una de las primeras reacciones de una va metablica.

2. Catalizan reacciones irreversibles generalmente.
3. Tienen una vida media prolongada.

La Modulacin de la actividad de una enzima se puede llevar a cabo por cuatro

mecanismos diferentes:

1. Control alostrico, llamado tambin modulacin no covalente, aqu la enzima es

regulada por molculas que se unen a la misma a travs de interacciones dbiles, pero lo
ms caracterstico de este tipo de regulacin es el efecto cooperativo que muestra el
sustrato, el cual tambin acta como modulador.

2. Modificacin covalente reversible, la cual se da por la unin covalente de un grupo

qumico el que modifica la actividad de la enzima; este generalmente es el fosfato.

3. Mltiples formas de las enzimas; las isoenzimas aportan una va para regular a misma
 reaccin de modo diverso en diferentes localizaciones o tiempos. Las isoenzimas son
enzimas homologas dentro del mismo organismo, catalizan la misma reaccin pero
presentan ligeras diferencias en su estructura y de forma ms evidente en sus valores de
KM o Vmx, as como en sus propiedades reguladoras. Pueden distinguirse unas de otras
por su movilidad electrofortica.

Un ejemplo de este tipo de regulacin lo tenemos en la diferente susceptibilidad que

tienen al piruvato las isoenzimas de lactato deshidrogenasa; la isoenzima H 4 es inhibida
alostricamente por el piruvato a altas concentraciones, en tanto que la M 4 no;
asimismo, la isoenzima H4 tiene valores de KM para sus dos sustratos mucho ms bajos
que la M4.

4. Activacin proteoltica; las enzimas controladas por mecanismos regulatorios oscilan

entre formas activas e inactivas. Un modo diferente de regulacin se utiliza para
convertir de manera irreversible una enzima inactiva en otra activa; muchas enzimas se
activan por la hidrlisis de unos pocos e incluso de un solo enlace peptdico de sus
precursores llamados zimgenos, este tipo de regulacin lo tienen las enzimas de la
digestin, de la coagulacin y las caspasas, enzimas que inician la apoptosis (muerte
celular programada), entre otras.

Lo interesante de este tipo de regulacin es que su carcter de irreversibilidad a permitido

que aparezcan a travs de la evolucin, los famosos inhibidores de proteasas, los cuales son
protenas que encajan exactamente en el centro activo de estos zimgenos activados,
inhibindolos competitivamente a travs de una alta especificidad de unin, lo que hace
difcil su separacin. As tenemos por ejemplo el inhibidor pancretico de la tripsina, la
antitripsina cuyo nombre ms adecuado es antielastasa porque esta enzima es su principal
molcula de unin y bloqueo, la antitrombina III, etc.

A continuacin desarrollaremos la regulacin covalente y la alostrica ya que las otras dos

han sido abordadas anteriormente.

REGULACIN COVALENTE:

En este tipo de regulacin, una molcula especfica se une a la enzima covalentemente a

travs de una reaccin catalizada por otra enzima. Esta molcula generalmente es un grupo
fosfato aunque tambin participan otro tipo de molculas como puede apreciarse en la tabla
1. Para ciertas enzimas la fosforilacin las activa, para otras las inhibe. Las enzimas que se
encargan de la fosforilacin son las quinasas y de la defosforilacin son las fosfatasas.

Tabla 1.- Modificaciones covalentes comunes de la actividad de protenas

Modificacin Molcula dadora Protena modificada

Fosforilacin ATP Glucgeno fosforilasa
Acetilacin Acetil Co A Histonas
Miristilacin Miristil Co A Scr
 ADP-ribosilacin NAD RNA polimerasa
Farnesilacin Farnesilpirofosfato Ras
-Carboxilacin Trombina
3
HCO
Sulfatacin 3'-Fosfoadenosina 5'-Fosfosulfato Fibringeno
Ubiquitinacin Ubiquitina Ciclina

Un ejemplo de este tipo de modulacin lo tenemos en el control del metabolismo del

glucgeno, en donde participan 2 enzimas regulatorias, la glucgeno sinteasa que se
encarga de la sntesis del polisacrido y la glucgeno fosforilasa que por el contrario
degrada al glucgeno; ambos procesos que no deben actuar en forma simultnea, son
regulados hormonalmente. Cuando hay deficiencia de glucosa en sangre (hipoglicemia), se
descarga la hormona glucagn, la cual acta sobre la clula heptica donde empiezan a
ocurrir una serie de fosforilaciones en cascada por accin de las quinasas. El proceso
termina con la fosforilacin de la glucgeno fosforilasa y de la glucgeno sinteasa; en estas
condiciones, la fosforilasa es activada y la sinteasa es inhibida.

Si el organismo se encuentra en una situacin de bien alimentado (hiperglicemia), por el

contrario, se descarga la hormona insulina la que a diferencia de glucagn, propicia dentro
de sus clulas blanco la defosforilacin a travs de fosfatasas. Esta seal defosforila a la
glucgeno sinteasa y a la fosforilasa; en estas condiciones, la primera se activa y la segunda
se inactiva.

La fosforilacin es un mecanismo muy eficaz para regular la actividad de las enzimas, por
esta razn es el mecanismo regulador covalente ms comn. Las protenas quinasas
constituyen una de las mayores familias conocidas, ms de 100 enzimas homlogas en
seres humanos. Esta multiplicidad de enzimas permite que la regulacin se ajuste
cuidadosamente segn el tejido, el tiempo o el sustrato especficos.

Una clase de protena quinasas transfiere el grupo fosforilo terminal del ATP a
determinados residuos de serina y treonina, mientras que otra clase lo transfiere a residuos
especficos de tirosina.

La regulacin covalente, dada la formacin de enlace qumico entre el modulador y la

enzima, se lleva a cabo en minutos.

REGULACIN NO COVALENTE O ALOSTRICA:

Este tipo de modulacin que es ms rpida que la anterior, ya que se lleva a cabo en
segundos o fracciones de segundo, ocurre por la unin no covalente (interacciones dbiles)
de moduladores positivos (cuando hay activacin de la enzima) y moduladores negativos
(cuando hay inhibicin) a un lugar especfico de la enzima regulatoria; este sitio de unin
es distinto al de unin del sustrato, de all el nombre de enzimas alostricas, que viene de
las palabras griegas: allos que significa otro y stereos, estructura
Lo caracterstico de este tipo de modulacin es que el propio sustrato acta regulando su
afinidad por la enzima: efecto cooperativo, por esta razn es que este tipo de enzimas no
cumplen con la cintica de Michaelis Menten sino ms bien, muestran un comportamiento
sigmoidal, como puede verse en la figura 5

Figura 5.- Grfica de [S] vs vo para una enzima alostrica. Se puede observar que a medida
que aumentamos la concentracin de sustrato, aumenta la pendiente de la tangente que
representa la velocidad en cada punto de la curva.

Esto se debe a que las enzimas alostricas son protenas oligomricas y cada cadena
peptdica que la conforma, tiene su propio centro activo; de tal manera que cada enzima
contiene varios sitios de unin para el sustrato correspondiente. A medida que las molculas
de sustrato van ingresando a la enzima, estas producen cambios conformacionales en el
catalizador, modificando otros sitios de unin cercanos a ellos y de esta forma se facilita
cada vez ms el ingreso de los siguientes sustratos.

La ecuacin de Michaelis Menten en estas circunstancias se ve afectada de la siguiente

manera:

vo = Vmx [S]n
KM + [S]n

Aqu aparece un nuevo trmino y es n el cual se conoce como coeficiente de Hill; este
representa la modificacin del comportamiento Michaeliano que tienen las enzimas
alostricas de tal suerte que, cuando vale 1, el comportamiento es de hiprbola
rectangular. Asimismo, no hay KM sino simplemente Ks Ver figuras 6 y 7
Figura 6.- Representacin grfica de diferentes valores de coeficiente de Hill.

Figura 7.- Representacin de Lineweaver-Burk para diferentes valores de coeficiente de

Hill.

Las enzimas alostricas son protenas oligomricas, es decir, estn conformadas por ms de
una cadena peptdica (protenas de alto peso molecular y por lo tanto muy lbiles a ligeros
cambios en el pH, temperatura y presin); en algunos casos en cada enzima existen
subunidades catalticas, cada una de las cuales presenta su propio centro activo, y sub
unidades regulatorias sin capacidad cataltica, pero all es donde se unen los moduladores
alostricos. En otros casos, las enzimas alostricas estn conformadas por subunidades que
a la vez son catalticas y regulatorias.
Otro detalle que es importante en las enzimas alostricas es que los moduladores alostricos
negativos, aumentan el carcter sigmoidal de la curva a medida que interactan con la
enzima, mientras que los moduladores positivos, transforman ese comportamiento
sigmoidal en Michaeliano a medida que se unen a la enzima (ver figura 8)

Figura 8.- Comportamiento de una enzima alostrica en presencia de un modulador

alostrico positivo y negativo; obsrvese que la Velocidad mxima no vara en ninguna
circunstancia. Para resumir diremos:

CARACTERSTICAS DE LAS ENZIMAS ALOSTRICAS:

1.- Catalizan reacciones irreversibles
2.- Son generalmente las primeras enzimas de una ruta metablica
3.- Son protenas oligomricas y cada cadena tiene un sitio activo independiente
4.- Presentan en su superficie varios sitios de unin para los moduladores
5.- Pueden existir ms de un sitio de unin para un mismo modulador
6.- No cumplen con la cintica de Michaelis Menten, pero si las saturamos con
moduladores positivos, si.
7.- Son moduladas por su propio sustrato.
8.- Son enzimas de alto peso molecular.
9.- Su mecanismo de regulacin permite varias velocidades de catlisis.
10.- Son reguladas en segundos o fracciones
11.- La mayora de ellas tienen unidades peptdicas regulatorias y unidades peptdicas
catalticas.

Un ejemplo de enzima alostrica es la aspartato transcarbamilasa, la cual es modulada por

su propio sustrato, el aspartato; pero asimismo, el ATP acta como modulador positivo y el
CTP como modulador negativo, de tal suerte que al aumentar el ATP en el medio donde
est la enzima, el coeficiente de Hill se har cada vez ms cercano a 1; si por el contrario
aumenta el CTP, la curva se har cada vez ms sigmoidal.