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DE MICROBIOLOGIA
Revisin: B
LABORATORIOS CLINICOS
NORMA UNE-EN ISO 15189
Ana Isabel Lpez Calleja Juan Ramn Garcia Mata M Concepcin Moliner
Slo la versin accesible en la INTRANET de SALUD, es un ORIGINAL VIGENTE. Cualquier otro ejemplar, constituye una COPIA NO CONTROLADA
MANUAL DE TOMA DE MUESTRAS PTP-08_Z2(E)M_L
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HISTORIAL DE REVISIONES
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INDICE
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2. CARTERA DE SERVICIOS
El Servicio de Microbiologa est situado en la planta tercera del Edificio de Consultas Externas
del Hospital Universitario Miguel Servet.
Funciona todos los das de la semana desde las 8,00 a las 22,00 horas del da en distinto
rgimen de actividad.
Telfonos de contacto:
Secretara: 976765542
Supervisora: extensin 142713
Telfonos por Unidades: ver anexo 2
Actividad ordinaria:
Lunes a viernes:
de 8,00 h a 15,00 h (actividad normal): recepcin, estudio e informe de muestras
ordinarias y urgentes.
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Sbados
de 8,00 h a 15,00 h: recepcin, estudio e informe de muestras establecidas para esta jornada
complementaria (Hemocultivos, LCR, otras muestras especiales, etc).
de 15,00 h a 22,00 h (continuidad asistencial): urgencias, recepcin, estudio e informe de
muestras urgentes.
Festivos:
de 8,00 h a 21,00 h (continuidad asistencial): urgencias, recepcin, estudio e informe de
muestras urgentes.
Adems de 22,00 a 8,00 existen guardias localizadas para serologas de donantes de rganos.
Envo de muestras
A partir de las 22,00 h hasta las 8,00 h no hay recogida de muestras en el Servicio de
Microbiologa. Las muestras que ineludiblemente se deban tomar en este horario
sern conservadas y custodiadas en los Servicios correspondientes.
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La obtencin de la muestra debe seguir unos principios generales para asegurar su calidad y
unos resultados correctos:
La muestra debe ser representativa del proceso y tomada lo ms precozmente posible tras
el inicio de los sntomas o aparicin de la lesin.
Se debe recoger una cantidad suficiente para asegurar un examen adecuado.
Se evitar contaminar la muestra con la flora normal ya sea del propio paciente o bien del
personal que manipule la muestra. Para ello se realizar en las mximas condiciones de
asepsia posibles (lavado de manos y cambio de guantes entre pacientes).
Se tomar la muestra antes de instaurar tratamiento antibitico. Si esto no es posible, se
obtendr justo antes de la administracin de las dosis del antimicrobiano, o 48 horas
despus de la retirada del mismo, indicando en el volante de peticin los antibiticos
administrados, tiempo de tratamiento, tiempo transcurrido desde la ltima dosis y la
recogida de la muestra.
Las muestras se tomarn con dispositivos estriles y se colocarn en recipientes
adecuados estriles y hermticos para su transporte al laboratorio.
El transporte debe realizarse lo antes posible. Si se ha de producir un retraso en el envo,
la muestra deber almacenarse en las condiciones correctas para cada caso.
Es imprescindible la correcta identificacin de la muestra, haciendo constar nombre y
apellidos del paciente o el mismo cdigo de barras que lleve el volante de peticin.
La comunicacin entre el laboratorio y el clnico es esencial para la eleccin de las pruebas
diagnsticas a realizar y la interpretacin de sus resultados y especialmente en las
muestras de obtencin dificultosa o alta significacin clnica.
4.4. RECIPIENTES
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LCR
Frasco estril boca CATETER
estrecha cierre rosca LIQUIDOS
BIOPSIAS, TEJIDOS
Conservar a temperatura
ambiente
Tubo estril CON No se deben utilizar tubos
CONSERVANTE, con conservante para
ORINA
recogida mediante cultivo de micobacterias,
sistema de vaco virus, hongos, deteccin de
antgenos o deteccin de
parsitos.
CULTIVO BACTERIANO
Torunda estndar con
Vlido para:
medio lquido de EXUDADOS (ulceras, heridas,
Aerobios
transporte exudados tico, farngeo,
Anaerobios
AEROBIOS/ oral, conjuntival, vaginal,
Grmenes exigentes
ANAEROBIOS/ otros exudados)
GERMENES EXIGENTES
CONSERVAR A
TEMPERATURA AMBIENTE
CULTIVO BACTERIANO
CONSERVAR A
TEMPERATURA AMBIENTE
CULTIVO BACTERIANO
Bordetella spp
Torunda PERNASAL con
medio lquido de Medio lquido vlido para:
transporte Aerobios
PERNASAL
AEROBIOS/ Anaerobios
ANAEROBIOS/ Grmenes exigentes
GERMENES EXIGENTES
CONSERVAR A
TEMPERATURA AMBIENTE
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CULTIVO VIRUS
Inhibe el crecimiento
Frasco o tubo estril
bacteriano: NO VLIDO PARA
con medio de
VARIAS CULTIVO BACTERIANO
transporte lquido para
VIRUS
CONSERVAR EN
REFRIGERACIN (2 A 8C).
Todas las muestras deben enviarse rpidamente al Servicio de Microbiologa para ser
procesadas lo antes posible (preferiblemente en las dos primeras horas desde su recogida).
Siempre que sea posible se recomienda programar la toma y envo de muestras en horario
matutino de recepcin de muestras en el laboratorio (de 8 a 14,30h), para evitar el deterioro
de la muestra y demoras en el procesamiento posterior.
En ocasiones las muestras que llegan al laboratorio pueden haber sido recogidas o
transportadas de manera incorrecta. El procesamiento de estas muestras y la emisin de un
informe posterior proporciona al clnico una informacin errnea, que puede conducir a un
diagnstico incorrecto y un tratamiento inapropiado.
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El laboratorio posee unos criterios estrictos sobre la aceptacin y rechazo de las muestras,
realiza el registro de las incidencias detectadas y de las posibles acciones correctoras que se
lleven a cabo.
Son criterios de rechazo de las muestras:
Identificacin incorrecta
Transporte incorrecto
En algunas ocasiones, una muestra puede procesarse aunque su calidad sea dudosa si se trata
de un caso mdico inusual, obtencin dificultosa y despus de establecerse contacto previo
entre el mdico solicitante y el laboratorio.
5. HEMOCULTIVOS
Recipiente
Se considera una extraccin para hemocultivo o hemocultivo a la sangre extrada de una nica
venopuncin, independientemente de los frascos en los que sea inoculada, habitualmente dos
(aerobio y anaerobio).
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Obtencin de la muestra
Hemocultivo Convencional
Rotular los dos frascos y el volante de solicitud con los datos del paciente. No escribir
sobre el cdigo de barras
Quitar la tapa plstica del tapn. Desinfectar la superficie con alcohol al 70%. No usar
povidona yodada.
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Utilizar guantes de un solo uso mientras se selecciona la vena del paciente y seguir
utilizndolos hasta el final del procedimiento.
Desinfectar la zona:
Una vez inoculados, invertir suavemente los viales varias veces, para evitar la
coagulacin de la sangre y favorecer la mezcla con el medio de cultivo.
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Etiquetar los frascos con el nombre del paciente, fecha y hora de extraccin. INDICAR
EN LOS FRASCOS QUE SE TRATA DE HEMOCULTIVO EXTRADO DE CATTER
Desinfectar los tapones de los frascos con alcohol al 70%. Dejar secar 30- 60
Desinfectar la zona de conexin del catter con alcohol al 70% limpiando durante 15
(utilizar para ello un preparado de alcohol diferente). Dejar secar 30
Usando guantes estriles, desconectar el tubo o tapn del catter y recoger con jeringa
una cantidad de 3ml que NO se usar para cultivo
Una vez inoculados, invertir suavemente los frascos varias veces, para mezclar la
sangre con el medio de cultivo y evitar grumos
NOTA IMPORTANTE:
Etiquetar los frascos con el nombre del paciente, fecha y hora de extraccin. INDICAR EN LOS
FRASCOS QUE SE TRATA DE HEMOCULTIVO DE SANGRE PERIFRICA.
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-Extensin telefnica del control de enfermera a donde debera darse aviso en caso de
disponer de resultados urgentes
Volumen
Conservacin y transporte
Deben enviarse al laboratorio lo ms rpidamente posible (no usar el tubo neumtico por riesgo
de rotura de los frascos). Cuando esto no sea posible, mantener a temperatura ambiente hasta
su envo. Nunca refrigerar ni congelar.
Observaciones
Recipiente
Cateter, reservorio: Tubo o frasco estril cierre hermtico.
Piel pericateter: Torunda estndar con medio de transporte.
Conexin del cateter: Torunda fina (tipo uretral o pernasal) con medio de transporte.
Obtencin de la muestra
CATETERES INTRAVASCULARES
Desinfectar con etanol 70% una zona de la piel de unos 10 cm de dimetro, correspondiente
a la zona de entrada del catter. Hacerlo en forma de crculos concntricos, comenzando por
el centro.
Repetir la misma operacin pero con solucin alcohlica de clorhexidina al 2 0,5%,
dejando que se seque 1 minuto.
Retirar el catter con la mxima asepsia.
Ayudndose de pinzas y tijeras estriles, cortar los 2-4 cm distales del catter, que
corresponden a la porcin intravascular.
Introducir el segmento en el recipiente estril de tapa a rosca.
RESERVORIO
Se recoger aspticamente en un recipiente estril con cierre a rosca. Entrega inmediata en el
laboratorio.
PIEL PERICATETER
Toma de muestra con torunda de la zona que rodea el punto de insercin del catter. Para ello
frotar con una torunda la piel (dimetro: 1-2 cm) que rodea el punto de insercin del catter.
Introducir la torunda en su medio de transporte.
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Conservacin y transporte
Observaciones
El cultivo de cateter intravascular no tiene valor para el diagnstico de bacteriemia por cateter
si no viene acompaado de un hemocultivo obtenido por venopuncin.
Las muestras de cateter aislado (sin hemocultivo) no se procesaran.
7. ORINAS
Recipiente
Frasco estril de boca ancha con cierre de rosca o dispositivo para obtencin con sistema de
vaco (frasco estril de boca ancha especial y tubo acompaante con conservante).
Obtencin de la muestra
Debido a que la uretra distal, tanto del hombre como de la mujer poseen microflora comensal,
es muy importante que la orina se recoja siguiendo una serie de normas.
El frasco estril de boca ancha no debe abrirse hasta el momento de su uso. El tubo
acompaante de los dispositivos con sistema de vaco no se abrir en ningn momento.
En mujeres:
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Los tubos con conservante se agitarn tras el llenado para mezclar con el conservante y se
mantendrn a temperatura ambiente.
En hombres:
Recin nacidos, lactantes y nios pequeos en los que el procedimiento de recoleccin con
bolsa o sonda hayan fracasado (cantidad de orina insuficiente, contaminaciones repetidas).
Casos de cateterizacin contraindicada o dificultosa
Bsqueda de anaerobios
Evidencia clnica del cuadro urinario con recuentos bajos o nulos, o urocultivos repetidos
con dos o ms bacterias.
Pinzar la sonda por la parte inferior para que esta se llene de orina.
Desinfectar la parte media de la sonda con alcohol de 70.
Pinchar la zona desinfectada con jeringa y aguja estril y tomar 2 3 ml de orina.
Verter la orina en un frasco estril de cierre de rosca.
Indicar en el volante que es orina de sonda permanente.
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NOTA IMPORTANTE:
No recoger orina de la bolsa de drenaje. No enviar puntas de sonda vesical (no vlidas para
cultivo), los resultados obtenidos no reflejan infeccin urinaria.
Volumen
Conservacin y transporte
La orina es un medio de cultivo excelente, por tanto las muestras deben ser enviadas lo ms
rpidamente al laboratorio y si no es posible y en ausencia de conservante conservar en
refrigeracin (de 2 a 8C hasta un mximo de 24 horas). Las muestras recogidas en tubo con
conservante se pueden mantener a temperatura ambiente de 24 a 48 horas segn fabricante
(seguir sus instrucciones).
Observaciones
Indicar en el volante si el enfermo est sometido a diuresis forzada, est tomando antibiticos
o los ha tomado, o cualquier otra informacin importante para la valoracin del cultivo.
8. HECES
Recipiente
Obtencin de la muestra
Directa: Recoger con depresor o esptula una pequea porcin de heces recin emitidas
seleccionando las zonas que contengan moco, pus, sangre, restos de mucosa.
Si las heces son liquidas recoger la muestra recin emitida directamente en el frasco estril.
Mediante torunda: Este mtodo deber evitarse siempre que sea posible. Introducir la
torunda (estndar) ms all del esfnter anal, hacindola girar suave y repetidamente,
retirndola a continuacin e introducir en su envase con medio de transporte.
Volumen
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Conservacin y transporte
Observaciones
Se debern indicar en la peticin datos relativos a viajes a reas endmicas, pas de origen.
Biopsias gstricas
Jugo gstrico
Recipiente
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Obtencin de la muestra
Conservacin y transporte
Observaciones
Recipiente
Obtencin de la muestra
Se realizar la toma vaginal sin espculo del tercio externo de la vagina antes de la
utilizacin de ningn antisptico.
Posteriormente la torunda se introducir en el recto.
Introducir la torunda en el medio de transporte.
Conservacin y transporte
Observaciones
Recipiente
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Obtencin de la muestra
Conservacin y transporte
Observaciones
Recipiente
Obtencin de la muestra
Conservacin y transporte
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Observaciones
Para investigacin de Chlamydia trachomatis tambin es una buena muestra la orina uretral
(primer chorro de orina).
Recipiente
Obtencin de la muestra
Introducir la torunda ms all del esfnter anal, hacindolo girar suave y repetidamente.
Posteriormente introducir la torunda en el medio de transporte.
Se intentar evitar el contacto con materia fecal. En caso de que la torunda salga
manchado de heces, deber tomarse una nueva muestra.
Conservacin y transporte
Recipiente
Orina: frasco estril de boca ancha y cierre rosca. Tambin se podr emplear dispositivo para
obtencin con sistema de vacio (frasco estril de boca ancha especial y tubo acompaante con
o sin conservante).
Semen: frasco estril de boca ancha y cierre rosca.
Obtencin de la muestra
Por la maana, antes de orinar, lavarse las manos y despus lavar el pene con agua y
jabn dejando el glande al descubierto. Secar con una toalla limpia.
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Recomendaciones:
Conservacin y transporte
Observaciones
El cultivo aislado de semen no tiene valor y no se procesar. Siempre debe asociarse cultivo de
orina y semen recogidos en el mismo acto para poder valorar las diferencias en el recuento
bacteriano obtenido.
La toma de muestras para estudio de ulceras genitales (tanto en hombres como mujeres) as
como chancro sifiltico debe realizarse en el Servicio de Microbiologa, para realizar de
inmediato el estudio microscpico. Contactar con el Servicio de Microbiologa.
Recipiente
Obtencin de la muestra
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Realizar toma del rea amigdalar y faringe posterior, rotando enrgicamente la torunda y
procurando desprender clulas epiteliales, sobre todo de zonas con exudado, enrojecidas o
inflamadas. Posteriormente introducir la torunda en el medio de transporte.
Es fundamental evitar rozar la torunda con la vula, la mucosa bucal, los labios o con la
lengua, tanto antes como despus de la toma.
Para estudio de virus es imprescindible remitir la toma en medio de transporte de virus.
Conservacin y transporte
Observaciones
La toma de muestras de exudado farngeo para cultivo de virus viene detallada en PTP-
05_Z2(E)_L, disponible en la Intranet.
La toma de muestras para investigacin de Bordetella spp. se realiza en la Consulta del Servicio
de Microbiologa.
Recipiente
Obtencin de la muestra
Introducir una torunda pequea y flexible (pernasal) en la parte posterior de nasofaringe por
va nasal. Hay que mantener la torunda cerca del septum y suelo de la fosa.
Rotar la torunda lentamente durante varios segundos para absorber secreciones y extraer.
Sembrar inmediatamente (investigacin de Bordetella spp) o enviar en medio de transporte
adecuado (para virus o bacterias).
Conservacin y transporte
Recipiente
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Obtencin de la muestra
Volumen
De 0,5 a 1 ml de muestra.
Conservacin y transporte
Observaciones
La toma de muestras de aspirado nasofaringeo para cultivo de virus viene detallada en PTP-
05_Z2(E)_L, disponible en la Intranet.
Recipiente
Obtencin de la muestra
Conservacin y transporte
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Revisin: B
En general slo til para estudio de portadores de Staphylococcus aureus. Existe un sistema
con triple torunda y medio lquido para el cribado de Staphylococcus aureus meticilin resistente
(ver anexo 7).
Recipiente
Conservacin y transporte
Observaciones
Recipiente
Obtencin de la muestra
Conservacin y transporte
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Recipiente
Obtencin de la muestra
OIDO EXTERNO
Limpiar el odo externo con un antisptico suave utilizando una torunda para eliminar
cualquier detritus existente en el canal del odo.
Utilizando una torunda se toma la muestra del canal del odo externo; en caso de tomarse
a partir de fornculos se debe realizar por aspiracin.
Especificar en la torunda la localizacin de la muestra (odo derecho o izquierdo). Se
emplear una torunda para cada odo si procede.
OIDO MEDIO
Conservacin y transporte
Observaciones
Si se solicita cultivo de bacterias anaerobias una parte de muestra obtenida por aspiracin se
puede inocular en frasco de hemocultivo para anaerobios (volumen recomendado de 3 a 10 ml)
y mantenerse a temperatura ambiente. Si el volumen de muestra es escaso se puede enviar en
la misma jeringa de inmediato (no usar tubo neumtico).
12.1. ESPUTO
Recipiente
Obtencin de la muestra
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Enjuagar la boca con agua o solucin salina estril (para disminuir la contaminacin del
tracto respiratorio superior y cavidad oral). No emplear antispticos.
Tras golpe de tos profundo, preferentemente a primera hora de la maana, recoger las
secreciones purulentas en el recipiente estril.
Para el estudio de micobacterias deber recogerse la muestra en ayunas, a primera hora de
la maana. Se recogern tres muestras en das sucesivos.
Conservacin y transporte
Observaciones
El esputo obtenido por expectoracin espontnea debe ser el resultado de un golpe de tos
profunda y contener secreciones purulentas representativas del tracto respiratorio inferior.
Las muestras de mala calidad (saliva) no se procesaran para su estudio a no ser que se
haga constar en la solicitud estudio de micobacterias, Nocardia, Legionella o Rhodococcus.
Recipiente
Obtencin de la muestra
Conservacin y transporte
Observaciones
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Recipiente
Obtencin de la muestra
Si se van a obtener varias muestras, el orden de recogida indicado es obtener en primer lugar
el lavado bronquial y el LBA antes que el cepillado bronquial o la biopsia transbronquial, con el
fin de evitar el exceso de sangre en los lquidos de lavado, que puede alterar la concentracin
de los componentes celulares
Volumen
LBA: El volumen de muestra obtenido depende del volumen instilado y puede variar entre 10 y
100 ml. Se considera que para tener una buena eficacia diagnstica el volumen de lquido
recuperado debe ser superior al 30% del introducido. Volmenes recuperados inferiores a 10 ml
no son representativos de la afeccin pulmonar.
CBCT: se debe recoger en 1 ml de suero salino.
Conservacin y transporte
Observaciones
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Recipiente
Obtencin de la muestra
Biopsia por puncin transtorcica. Obtencin del exudado de las lesiones pulmonares a
travs de una puncin transtorcica con aguja ultrafina (PAAF) con control radioscpico o
ecogrfico.
Puncin pleural. Tcnica habitual en el estudio del derrame pleural. Extraccin de lquido
pleural con una aguja introducida transparietalmente. El lquido pleural se enviar en frasco
estril de cierre hermtico (para estudio microscpico y cultivo) y si hay suficiente volumen
se inocular tambin en frascos (aerobio y anaerobio) de hemocultivos.
Volumen
Conservacin y transporte
Las muestras oculares deben tomarse antes de la instilacin de anestsicos locales, colirios o
instaurar tratamiento antibitico, ya que pueden inhibir el crecimiento bacteriano o fngico. Si
esto no es posible tomar la muestra transcurridas al menos 4 horas desde la ltima
administracin.
Recipiente
Obtencin de la muestra
EXUDADO CONJUNTIVAL
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Revisin: B
Humedecer la torunda con suero fisiolgico y frotar con ella la conjuntiva tarsal inferior,
desde el ngulo lateral al interno.
Se debe utilizar una torunda para cada ojo, marcando derecho o izquierdo en el envase.
Introducir cada torunda en el tubo con medio de transporte.
En caso de obstruccin del canal lacrimal, presionar sobre ste y recoger el exudado.
Si se sospecha infeccin por virus o Chlamydia hay que tomar una torunda adicional y
colocar la muestra en el medio de transporte de virus.
Durante la toma de la muestra ha de evitarse el contacto con el borde del prpado para no
arrastrar microbiota colonizante.
RASPADO CORNEAL
HUMOR VITREO
Puede obtenerse por aspiracin con jeringa en el quirfano o por vitrectoma y lavado.
Transferir el lquido obtenido al frasco estril si la cantidad es suficiente.
Si la cantidad es muy pequea puede dejarse en la misma jeringa, tapndola con tapn estril.
Para investigacin de virus se debe reservar parte del contenido de la jeringa (no inocular en
frasco hemocultivo).
EXUDADO PALPEBRAL
Humedecer una torunda con suero fisiolgico y frotar con ella el borde del prpado o de la zona
ulcerada. Introducir la torunda en el tubo con medio de transporte.
Si hay exudado purulento procedente del canal o del saco lagrimal, hay que aspirarlo con
jeringa. Tambin se puede aspirar el material obtenido en el curso de una dacriocistotoma o
canaliculotoma. Si se observan concreciones en el canal deben extraerse con una esptula o
cureta y a continuacin se extienden sobre un portaobjetos estril para su posterior tincin
(contactar con Microbiologa).
Volumen
Conservacin y transporte
Enviar lo ms rpidamente posible a Microbiologa (sobre todo humor vtreo y otras muestras
obtenidas por aspiracin). Si se demora el transporte, las torundas con medio de transporte
pueden conservarse a temperatura ambiente (para cultivo aerobios y/o anaerobios) y en
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Las infecciones de piel y tejidos blandos incluyen a todas las que afectan a piel y anejos
cutneos, tejido celular subcutneo, fascias y msculo estriado
La dificultad que entraa la recogida de muestras de buena calidad para estudio microbiolgico
es un punto crtico. La muestra debe tomarse de una zona representativa de la infeccin y en
cantidad adecuada y evitando, en lo posible, la contaminacin con la microbiota normal.
Consideraciones generales
Recipiente
HERIDAS ABIERTAS: con una torunda muestrear un rea de aproximadamente 1 cm2 del
tejido celular subcutneo de los bordes de la herida o de la base de la lesin.
No frotar con fuerza para evitar el sangrado. En el caso de heridas muy secas, impregnar la
torunda con suero salino estril antes de realizar la toma.
Si existe pus, recoger con jeringa y aguja, aspirando preferiblemente de zonas profundas.
Transferir al tubo estril de cierre de rosca o dejar en jeringa si el volumen es escaso.
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Conservacin y transporte
Recipiente
Frasco estril cierre hermtico
Medio de transporte anaerobios (si se sospechan). (Ver punto n 19 Estudio de Anaerobios)
Obtencin de la muestra
Se obtendr un bloque de tejido por escisin quirrgica procurando incluir las zonas ms
afectadas. Cuando las lesiones estn bien delimitadas se intentar incluir tambin el borde
activo de la lesin.
Los fragmentos se introducirn en un recipiente estril con tapa de rosca y cierre hermtico,
aadiendo una gotas de suero salino estril para prevenir la desecacin (para la
investigacin de micobacterias se aadir agua destilada estril).
Las vlvulas cardacas (nativas o protsicas) se introducirn en frasco estril. NO AADIR
NINGN TIPO DE LQUIDO. TRANSPORTE INMEDIATO.
El material protsico y otros dispositivos (cables marcapasos, etc) se introducirn en frasco
estril. NO AADIR NINGN TIPO DE LQUIDO (suero salino, caldo de enriquecimiento, etc.)
Conservacin y transporte
Observaciones
No introducir las muestras en formol ni otras sustancias que puedan inhibir el crecimiento de
microorganismos.
Especificar claramente en la solicitud el tipo de estudio solicitado.
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DE MICROBIOLOGIA
Revisin: B
Engloba los lquidos orgnicos normalmente estriles: amnitico, articular, asctico, biliar,
pericrdico, peritoneal, pleural, sinovial, etc.
Recipiente
Frasco estril cierre hermtico
Obtencin de la muestra
Volumen de muestra
Bacterias:5-10 mL
Hongos y micobacterias: >10 ml.
Para micobacterias es preferible, siempre que se pueda, biopsia de tejido y enviar la mxima
cantidad posible.
Volumen mximo a inocular en cada frasco de hemocultivos: 10 ml.
Conservacin y transporte
Recipiente
La toma de muestras nunca retrasar la instauracin de tratamiento emprico. Siempre que sea
posible se obtendr antes de instaurar cualquier teraputica antimicrobiana.
Obtencin de la muestra
Es importante una correcta tcnica de extraccin manteniendo los mismos cuidados de asepsia
que para cualquier operacin de ciruga menor.
Volumen
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DE MICROBIOLOGIA
Revisin: B
Determinacin Volumen
Bacterias aerobias 1 ml
Bacterias anaerobias 2 ml
Virus 1-2 ml
Micobacterias 2 ml
Hongos 2ml
Serologa 1 ml
Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) 0.5-1 ml
Parsitos 2 ml
Conservacin y transporte
Si esto no fuera posible, los LCR para cultivo bacteriano se conservarn a temperatura
ambiente hasta su transporte. Nunca se guardarn en frigorfico ni en sitio fro.
Los LCR para otros estudios microbiolgicos (p.ej. virus, biologa molecular -PCR-, serologa y
micobacterias) se conservarn en refrigeracin (de 2 a 8C) hasta su envo.
A partir de las 22,00 h hasta las 8,00 h no hay personal para la recogida de muestras
en el Servicio de Microbiologa. Los LCR que se tomen en este horario sern
conservados y custodiados en los Servicios correspondientes, segn las indicaciones
de conservacin establecidas.
Observaciones
En todos los casos de sospecha clnica de meningitis es recomendable adems del cultivo de
LCR, realizar hemocultivos.
Si lo que se solicita es serologa en LCR tambin se debe de enviar suero del enfermo con
las mismas peticiones serolgicas, extrado simultneamente.
Recipiente
Tubo con anticoagulante EDTA (tapn malva): para estudio microscpico, diagnstico de
leishmaniasis visceral.
Frascos de hemocultivos (aerobios/anaerobios): para cultivo bacteriano.
Frascos de hemocultivos (micobacterias): si sospecha de infeccin diseminada por
micobacterias.
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DE MICROBIOLOGIA
Revisin: B
Obtencin de la muestra
Volumen de muestra
Conservacin y transporte
Tipo de muestra
Muestras de tracto digestivo: heces, torunda rectal (excepto para toxina de Clostridium
difficile), muestras de ileostoma o colostoma, jugo o contenido gstrico.
Muestras de tracto respiratorio, EXCEPTO lquido pleural, puncin pulmonar o cepillado
bronquial por catter telescopado.
Muestras de tracto urogenital, EXCEPTO orina tomada por puncin suprapbica.
Muestras de tracto genital femenino tomadas via vaginal.
Puntas de catter.
Obtencin de la muestra
Medio de transporte
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Revisin: B
Transporte
OTRAS MUESTRAS
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DE MICROBIOLOGIA
Revisin: B
Tipo de muestra
Tracto respiratorio (esputo, BAS, BAL), orina, jugo gstrico, lquidos orgnicos (LCR, lquido
pleural, articular, asctico), tejidos (biopsias, aspirados, abscesos), mdula sea, sangre.
Hemocultivo: Existen frascos especiales para estudio de micobacterias en sangre. Seguir las
mismas indicaciones que para hemocultivos convencionales.
Esputo: Son suficientes 3 muestras de esputo (1 por da) en das sucesivos, preferentemente
matinales, despus de enjuagar la boca con agua o suero salina.
Las muestras de pacientes ambulantes pueden conservarse en frigorfico (de 2 a 8C) y
enviarse conjuntamente (preferible envio diario).
Esputo inducido: Para nios o pacientes que no expectoren, realizar nebulizaciones con suero
fisiolgico antes de la recogida del esputo.
Jugo gstrico: Indicado en nios o pacientes que no expectoren. La aspiracin gstrica debe
realizarse a primera hora de la maana. Debe ser transportada inmediatamente al laboratorio.
En caso de no procesar la muestra en la hora siguiente a su recogida, es conveniente
neutralizarla, aadiendo a la muestra una cantidad igual o aproximada de fosfato trisdico y
conservarla entre 2 y 8C hasta su procesamiento.
Lquido pleural: Muestra til para el diagnstico de micobacterias. Enviar la mayor cantidad
posible (recomendado >10ml). No inocular en frascos de hemocultivos.
Orina: Deben recogerse 3 muestras de la primera orina de la maana (1 cada da). El volumen
recomendado es de 20 a 50 ml. No se deben emplear tubos con conservante. Las muestras de
pacientes ambulantes pueden conservarse en frigorfico (de 2 a 8C) y enviarse conjuntamente
(preferible envio diario).
LCR: Volumen mnimo recomendado 2 ml. Transporte en un tubo estril con cierre de rosca.
Sospecha de TBC sea, ganglionar, miliar, heptica, peritoneal, pericrdica, articular, etc.:
Enviar la mayor cantidad posible de material extrado por puncin o biopsia.
Transporte en frasco estril con cierre de rosca. Las biopsias se enviarn en AGUA DESTILADA
(no en suero fisiolgico).
Si la cantidad de muestra fuera muy escasa, se enviar la jeringa con la muestra que se haya
podido extraer.
No se procesarn muestras recogidas con torunda.
Transporte
Todas las muestras deben entregarse de forma inmediata en el laboratorio, excepto esputos y
orinas de pacientes ambulantes que se podrn entregar de forma conjunta (preferible envio
diario). Si se demora el transporte las muestras se conservarn en refrigeracin (de 2 a 8C)
hasta un mximo de 24 horas (excepto esputos y orinas seriados de pacientes ambulantes).
Tipos de muestra
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Revisin: B
Heces, parche anal para test de Graham (oxiuros), otras muestras: abscesos, biopsias,
exudado/raspado corneal, mdula sea, orina, sangre, larvas, ectoparsitos, anillos de Taenia
spp).
Durante las 24 horas previas el enfermo no debe tomar medicamentos a base de carbn o sales
de bario y restringir la ingestin de hidratos de carbono
ORINA: Investigacin de Schistosoma spp. Orina recogida al mediodia (>100 ml), tras
ejercicio moderado, como subir y bajar escaleras. NO emplear tubos con conservante.
Conservacin en refrigeracin (de 2 a 8C).
Transporte
Las muestras deben ser enviadas lo ms rpidamente posible al laboratorio (excepto heces de
pacientes ambulantes que se podrn enviar conjuntamente). Si se demora el transporte se
conservarn segn lo indicado en el apartado anterior.
Se debe recomendar al paciente que no se lave la zona perianal ni defeque antes de realizar la
toma.
Se debe utilizar cello transparente (no translcido) que se pondr en contacto con el margen
anal y posteriormente se pegar por la parte adhesiva en el portabojetos (para observacin
posterior al microscopio). Es necesario recoger tres muestras en tres das consecutivos que
deben ser transportadas al laboratorio en un sobre de papel cerrado o envueltos en papel de
aluminio, ya que los huevos de E. vermicularis son infectivos a las 4-6 horas de haber sido
puestos. La persona que haga la toma de muestras debe lavarse las manos antes y depus de
la toma.
En el anexo n 3 se proponen unas instrucciones para la correcta realizacin de la toma de
muestras.
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DE MICROBIOLOGIA
Revisin: B
Tipo de muestra
Biopsias, exudado conjuntival, exudado corneal, exudado de crvix, heces, LCR, orina, saliva,
sangre, tracto respiratorio (aspirado nasofarngeo, frotis farngeo, BAS, BAL), vesculas
drmicas.
Obtencin de la muestra
Medio de transporte
Muestras que requieren para su envo medio de transporte especfico para virus
(medios lquidos que deben mantener un pH adecuado que se manifiesta por el color rojo-
naranja del medio, debiendo descartarse aquellos con coloracin violeta o amarilla)
Muestras que no requieren para su envo medio de transporte especfico para virus
LCR, biopsias o tejidos, muestras obtenidas por bronscoscopia, heces, orina, saliva:
enviar sin ningn aditivo en frasco estril con cierre de rosca.
Cuando se solicite cultivo de virus y bacterias, una parte de la muestra se debe enviar sin
medio de transporte de virus, ya que inhibe el crecimiento bacteriano.
Transporte
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DE MICROBIOLOGIA
Revisin: B
Escarificado
Virus Varicela Zoster (VVZ) Lquido vesicular Cultivo VVZ
Escarificado
Coxsackie A Heces Cultivo viral
Farngeo
ECHO Heces Cultivo viral
Farngeo
Exantema Maculopapular
Sarampin Farngeo PCR
Rubola Farngeo PCR
Adenovirus Heces Cultivo viral
Farngeo
Enterovirus Heces Cultivo viral
Farngeo
Cistitis hemorrgicas
Adenovirus Orina Cultivo viral
Gastroenteritis
Rotavirus Heces IC Rotavirus
Toxina Clostridium Heces EIA
difficile
Infeccin en inmunodeprimidos
Citomegalovirus (CMV) Orina, Viremia CMV (carga viral)
Farngeo Cultivo CMV
Sangre
Herpes simple (VHS) Farngeo Cultivo VHS
Lquido vesicular
VVZ Lquido vesicular Cultivo VVZ
Adenovirus Farngeo Cultivo viral
Heces
Infeccin respiratoria
Adenovirus Farngeo IFD
Aspirado nasofarngeo Cultivo viral
Enterovirus Farngeo Cultivo viral
Aspirado nasofarngeo
Influenza Nasofaringeo o IFD
Aspirado nasofarngeo Cultivo influenza
PCR
Virus Respiratorio Sincitial Aspirado nasofarngeo IFD
(VRS) Cultivo viral
Parainfluenzae Aspirado nasofarngeo IFD
Cultivo viral
Metaneumovirus humano Aspirado nasofarngeo IFD
Cultivo viral
Herpes simple Farngeo Cultivo viral
Broncoalveolar
Varicela Broncoalveolar Cultivo viral
Infeccin congnita y neonatal
CMV Orina Cultivo CMV
Farngeo
Herpes simple Farngeo Cultivo VHS
Lquido vesicular
Meningitis
Enterovirus LCR PCR (slo en LCR)
Farngeo Cultivo viral
Heces
Parotiditis LCR Cultivo viral
Orina
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Revisin: B
Saliva
Herpes simple Farngeo Cultivo viral
Lquido vesicular
Adenovirus LCR Cultivo viral
Farngeo
Heces
Encefalitis
VHS Biopsia cerebral Cultivo VHS
Parotiditis LCR
Orina
Farngeo
Saliva
Sarampin Farngeo PCR
Biopsia cerebral
Varicela Biopsia cerebral Cultivo VVZ
Mononucleosis
CMV Orina Cultivo CMV
Farngeo Viremia CMV (carga
Sangre viral)
Hepatitis
CMV Orina Cultivo CMV
Farngeo Viremia CMV (carga
Biopsia viral
Sangre
Conjuntivitis
VHS Conjuntival Cultivo viral
Adenovirus Conjuntival Cultivo viral
Enterovirus Conjuntival Cultivo viral
Queratitis
VHS Corneal Cultivo VHS
Adenovirus Corneal Cultivo viral
Enterovirus Corneal Cultivo viral
VVZ Corneal Cultivo viral
Miopericarditis
Enterovirus Lquido pericrdico Cultivo viral
Farngeo
Heces
CMV Orina Cultivo CMV
Farngeo Viremia CMV (carga viral
Sangre
Adenovirus Lquido pericrdico Cultivo viral
Farngeo
Heces
Influenza Nasofarngeo Cultivo viral
Parotiditis
Parotiditis Saliva Cultivo viral
IC: inmunocromatografia; EIA: enzimoinmuno anlisis; PCR: reaccin en cadena de la
polimerasa; IFD: inmunofluorescencia directa
Recipiente
Sangre: tubo para recogida de SUERO sin anticoagulante (tubo de vaco con GEL SEPARADOR y
tapn de seguridad, TAPN color variable segn procedencia: ROJO/MARRON/AMARILLO).
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Revisin: B
Obtencin de la muestra
Volumen de muestra
Adultos: 5 ml
Nios: 3-5 ml
Conservacin y transporte
Observaciones
Citomegalovirus IgG
Chagas Rubola
Parotiditis
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DE MICROBIOLOGIA
Revisin: B
Hepatitis A IgG
Parotiditis IgG
Rubeola IgG
Parvovirus IgG
Epstein Barr Ac. IgG
Epstein-Barr IgM (slo en nios Se realizan diferentes Se deban enviar dos muestras con 15
o adultos jvenes) determinaciones segn sospecha das de intervalo
Citomegalovirus IgM clnica, edad y antecedentes del Micoplasma pneumoniae IgG
paciente
Toxoplasma IgM Chlamidia pneumoniae IgG
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DE MICROBIOLOGIA
Revisin: B
FQ IgG
FQ IgM
Legionella
Las tcnicas de Microbiologa Molecular que se realicen con suero y/o sangre, deben
ir en tubos de muestras INDEPENDIENTES de las peticiones para Serologa.
Recipiente
PLASMA/SANGRE COMPLETA: tubo para recogida con anticoagulante (tubo de vaco con
EDTA y tapn de seguridad, TAPN MALVA)
SUERO: tubo para recogida de suero sin anticoagulante (tubo de vaco con gel separador y
tapn de seguridad, TAPN ROJO/MARRON/AMARILLO, segn disponibilidad)
LCR: Tubo estril cierre rosca
Obtencin de la muestra
Volumen de muestra
Conservacin y transporte
A continuacin se detalla, para las tcnicas moleculares disponibles, su aplicacin clnica, tipo
de muestra requerido, volumen de muestra y condiciones de transporte y conservacin.
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Revisin: B
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DE MICROBIOLOGIA
Revisin: B
Plasma sangre en tubo con EDTA + gel para recogida de plasma, para seguimiento de infeccin
y/o enfermedad por VEB en pacientes trasplantados y grupos de riesgo (enfermedad VIH,
paciente hematolgico)
LCR Para diagnstico de meningitis por VEB y linfoma primario SNC en paciente VIH
Tipo de muestra: PLASMA o SUERO. LCR en contenedor con tubo de rosca
Volumen de muestra: Al menos 5 ml de sangre. 1 mL de LCR
Conservacin: remitir la muestra junto con su volante inmediatamente a Microbiologa. Si no
fuera posible el envo inmediato conservar en refrigeracin (de 2 a 8C).
Aplicacin: estudio genotpico de mutaciones en el genoma del VIH que confieren resistencia a
los antirretrovirales.
Tipo de muestra: PLASMA.
Volumen de muestra: Al menos 5 ml de sangre.
Conservacin: remitir la muestra junto con su volante inmediatamente a Microbiologa. Si no
fuera posible el envo inmediato conservar en refrigeracin (de 2 a 8C).
Aplicacin: marcador basal para la eleccin de la pauta de tratamiento de la infeccin por VHC
y para estudios epidemiologicos.
Tipo de muestra: PLASMA o SUERO.
Volumen de muestra: Al menos 5 ml de sangre. 1 mL de LCR
Conservacin: remitir la muestra junto con su volante inmediatamente a Microbiologa. Si no
fuera posible el envo inmediato conservar en refrigeracin (de 2 a 8C).
Aplicacin:
1-Diagnstico de infecciones del SNC por virus herpes. Detecta simultneamente los siguientes
virus de la familia Herpesviridae: virus herpes simple tipo 1 y 2, virus varicela zoster
(alphaherpesvirus).
2-Humor vtreo, para el estudio de las infecciones oculares por VHS/VVZ
3-Lesiones vesiculares, para el estudio de las infecciones por VHS/VVZ
4-Plasma en pacientes inmunosuprimidos que interese valorar infeccin sistmica
Tipo de muestra: LCR en tubo estril con tapn de rosca. Medio de transporte de virus en
caso de lesin cutneo-mucosa y plasma o suero en caso de formas sistmicas.
Volumen de muestra: 0,5 ml.
Conservacin: remitir la muestra inmediatamente, junto con el volante, a Microbiologa. Si no
fuera posible el envo inmediato conservar en refrigeracin (de 2 a 8C).
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Revisin: B
Para otras determinaciones de biologa molecular consultar con Microbiologa (extensin 2706)
para su envo a laboratorio externo.
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Revisin: B
Tomado de: Procedimientos en Microbiologa Clnica. Recomendaciones de la Sociedad Espaola de Enfermedades Infecciosas y Microbiologa Clnica . Captulo 1 Recogida,
transporte y procesamiento general de las muestras en el laboratorio de Microbiologa
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Revisin: B
UNIDAD EXTENSION
Jefe de Servicio 142751
Supervisora de Enfermera 142713
Secretara 142751
Antibiticos 142754
Calidad 142710
Coprocultivos/Parsitos 142758
Exudados 142760
Genitourinario 142757
Hemocultivos 142752/142753
Hongos-Epidemiologa 142755/142756
Micobacterias 142764/142765
Microbiologa molecular 142706
Preanaltica (Recepcin de Muestras) 142707
Respiratorio 142761/142762
Serologa 142768
Virologa 142767
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Revisin: B
Esta prueba se emplea para detectar huevos del parsito Enterobius vermicularis. Estos huevos
se encuentran en la zona perianal (piel que rodea el ano).
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Revisin: B
Por la maana, antes de orinar, lavarse las manos y despus lavar el pene con agua y
jabn dejando el glande al descubierto. Secar con una toalla limpia.
Numerar los frascos (1 Y 2) y desenroscar las tapas.
Orinar, despreciando el primer chorro de orina (esta primera orina no se recoger en el
frasco). Seguir orinando y recoger en el frasco n1 una cantidad de orina aproximada de
medio recipiente. Cerrar el frasco.
Eliminar las gotas de orina residual del pene para que no se mezclen con la muestra de
semen.
Realizar masaje (masturbacin) y recoger el semen en el frasco n 2.
Recomendaciones importantes:
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Revisin: B
CONSERVAR A TEMPERATURA
AMBIENTE
CULTIVO BACTERIANO
Bordetella spp
Torunda PERNASAL con
Medio lquido vlido para:
medio lquido de
Aerobios
transporte
PERNASAL Anaerobios
AEROBIOS/ANAEROBIOS
Grmenes exigentes
/GERMENES EXIGENTES
CONSERVAR A TEMPERATURA
AMBIENTE
CULTIVO VIRUS
Inhibe el crecimiento bacteriano:
Frasco o tubo estril con NO VLIDO PARA CULTIVO
medio de transporte VARIAS BACTERIANO
lquido para VIRUS
CONSERVAR EN
REFRIGERACIN (2 A 8C).
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Revisin: B
NOTA 2: En caso de no realizar las tres tomas, se emplear siempre en ltimo lugar el
hisopo blanco que se dejar dentro del tubo (por ejemplo, solo nasal y farngeo, se tomar
nasal con hisopo de color, farngeo con hisopo blanco que se dejar dentro del tubo).
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