Tesis 295

ESTUDIO DEL DESARROLLO DE LA INFECCIN Y DEL EFECTO DE
LA FORMULACIN DE AISLAMIENTOS DE GRANULOVIRUS SOBRE
Tecia solanivora (Povolny) y Phthorimaea operculella (Zeller)
(Lepidoptera: Gelechiidae)
PAOLA EMILIA CUARTAS OTLORA
TRABAJO DE GRADO
Presentado como requisito parcial
para optar al ttulo de
Microbilogo Agrcola y Veterinario
Laura Villamizar, M. Sc.

Directora
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA

FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS
MICROBIOLOGIA AGRCOLA Y VETERINARIA
Bogot, D.C. Colombia
Diciembre de 2006
NOTA DE ADVERTENCIA
Artculo 23 de la Resolucin N13 de Julio de 1946

La Universidad no se hace responsable por los conceptos emitidos por sus
alumnos en sus trabajos de tesis. Solo velar por que no se publique nada
contrario al dogma y a la moral catlica y por que las tesis no contengan ataques
personales contra persona alguna, antes bien se vea en ellas anhelo de buscar la
verdad y la justicia.
APROBADO
LAURA VILLAMIZAR CARLOS ESPINEL

Qumica Farmacutica, M.Sc. Bilogo, M.Sc.
Directora Codirector
AMANDA VARELA, Ph.D EDISON VALENCIA, Ph.D

Jurado Jurado
APROBADO
ANGELA UMAA, M.Phil. DAVID GMEZ, M.Sc.

Decana Acadmica Director de Carrera
A Dios por darme esta gran oportunidad,
a mi familia que me ha enseado todo lo
necesario para ser lo que soy, por todo
su amor y comprensin; y a Cesar por
ser mi apoyo incondicional y por no
dejarme retroceder jams.
AGRADECIMIENTOS
A Alba Marina Cotes, Ph.D. Directora del Laboratorio de Control Biolgico de

Corpoica-Tibaitat, por darme la oportunidad de ingresar a su excelente equipo de
trabajo y aportar en mi formacin profesional y personal.
A Laura Villamizar, Q.F. M.Sc., investigadora del Laboratorio de Control

Biolgico de Corpoica-Tibaitat y directora de este trabajo, por compartir
conmigo parte de su experiencia profesional y por su gran dedicacin durante todo
el proceso.
A Carlos Espinel, B. M.Sc., investigador del Laboratorio de Control Biolgico de

Corpoica-Tibaitat y codirector de este trabajo, por ensearme un poco ms del
mundo de los insectos y por su gran apoyo y entusiasmo.
A Aristbulo Lopez-vila, Ph.D. Director del Laboratorio de Entomologa de

Corpoica-Tibaitat, por su orientacin y colaboracin.
A los auxiliares del Laboratorio de Control Biolgico y del Laboratorio de

Entomologa de Corpoica-Tibaitat, por su gran colaboracin, alegra y
comprensin.
A los investigadores del Laboratorio de Control Biolgico de Corpoica-Tibaitat

por sus enseanzas, apoyo incondicional y por su gran amistad.
A todos los estudiantes del Laboratorio de Control Biolgico de Corpoica-

Tibaitat por su entusiasmo y por su gran amistad, por compartir momentos
inolvidables y porque son una de las mejores partes del laboratorio; muchas
gracias por su colaboracin.
TABLA DE CONTENIDO
1. INTRODUCCIN 1
2. MARCO TERICO 3
2.1. CULTIVO DE LA PAPA. 3

2.1.1. IMPORTANCIA AGRCOLA. 3
2.1.2. PLAGAS DE LA PAPA. 4
2.2. TECIA SOLANIVORA (POVOLNY). 5
2.2.1. DISTRIBUCIN GEOGRFICA. 6
2.2.2. IMPORTANCIA ECONMICA. 7
2.2.3. BIOLOGA Y COMPORTAMIENTO. 8
2.2.3.1. Huevo. 8
2.2.3.2. Larva. 9
2.2.3.3. Pupa. 10
2.2.3.4. Adulto. 10
2.2.4. DESCRIPCIN DE LOS DAOS. 11
2.2.5. MANEJO INTEGRADO DE TECIA SOLANIVORA (POVOLNY). 12
2.2.5.1. Control Cultural. 13
2.2.5.2. Control Etolgico. 13
2.2.5.3. Control Qumico. 14
2.2.5.4. Control Biolgico. 15
2.3. PHTHORIMAEA OPERCULELLA (ZELLER). 16
2.3.1. DISTRIBUCIN GEOGRFICA. 17
2.3.2. IMPORTANCIA ECONMICA. 17
2.3.3. BIOLOGA Y COMPORTAMIENTO. 18
2.3.3.1. Huevo. 19
2.3.3.2. Larva. 19
2.3.3.3. Pupa. 20
2.3.3.4. Adulto. 20
2.3.4. DESCRIPCIN DE LOS DAOS. 21
2.3.5. MANEJO INTEGRADO DE PHTHORIMAEA OPERCULELLA (ZELLER). 21
2.3.5.1. Control Cultural. 22
2.3.5.2. Control Etolgico. 22
2.3.5.3. Control Qumico. 22
2.3.5.4. Control Biolgico. 23
2.3.5.4.1. Bacillus thuringiensis. 23
2.3.5.4.2. Parasitoides. 24
2.3.5.4.3. Beauveria bassiana. 24
2.3.5.4.4. Virus de la Granulosis (VG). 24
2.4. BACULOVIRUS. 26
2.4.1. ESTRUCTURA Y COMPOSICIN. 27
2.4.1.1. Nucleocpside. 27
2.4.1.2. Viriones. 27
2.4.1.3. Cuerpos de Inclusin. 27
2.4.2. CLASIFICACIN. 28
2.4.3. PROCESO DE INFECCIN. 29
2.4.3.1. Infeccin Primaria. 30
2.4.3.2. Infeccin Secundara. 31
2.4.4. SNTOMAS DE LA ENFERMEDAD. 31
2.4.5. TRANSMISIN. 33
3. FORMULACIN DEL PROBLEMA Y JUSTIFICACIN 34
3.1. FORMULACIN DEL PROBLEMA. 34

3.2. JUSTIFICACIN DE LA INVESTIGACIN. 34
4. OBJETIVOS 37
4.1. OBJETIVO GENERAL. 37

4.2. OBJETIVOS ESPECFICOS. 37
5. MATERIALES Y MTODOS 38
5.1. UBICACIN. 38
5.2. AISLAMIENTOS VIRALES. 38
5.3. PROPAGACIN VIRAL. 38
5.4. PURIFICACIN VIRAL. 39
5.5.DETERMINACIN DEL RENDIMIENTO DE PRODUCCIN DE PARTCULAS VIRALES
DE LOS AISLAMIENTOS NATIVOS DE GRANULOVIRUS EN LAS POLILLAS DE LA PAPA. 40
5.6. ESTUDIO DEL DESARROLLO DE LOS SIGNOS DE LA INFECCIN DE LOS DIFERENTES
AISLAMIENTOS DE GRANULOVIRUS EN LARVAS DE TECIA SOLANIVORA Y
PHTHORIMAEA OPERCULELLA. 41
5.6.1. DESARROLLO DE LOS SIGNOS DE LA INFECCIN DE LOS DIFERENTES AISLAMIENTOS
DE GRANULOVIRUS. 42
5.7. EVALUACIN DE LA EFICACIA DE LOS DIFERENTES AISLAMIENTOS DE
GRANULOVIRUS FORMULADOS Y SIN FORMULAR EN LARVAS DE TECIA SOLANIVORA
Y PHTHORIMAEA OPERCULELLA. 44
5.8. SELECCIN DEL MEJOR AISLAMIENTO DE GRANULOVIRUS MS PROMISORIO. 45
6. RESULTADOS Y DISCUSIN 47
6.1. PROPAGACIN Y PURIFICACIN VIRAL. 47

6.2.DETERMINACIN DEL RENDIMIENTO DE PRODUCCIN DE PARTCULAS VIRALES
DE LOS AISLAMIENTOS NATIVOS DE GRANULOVIRUS EN LAS POLILLAS DE LA PAPA. 48
6.3. ESTUDIO DEL DESARROLLO DE LOS SIGNOS DE LA INFECCIN DE LOS DIFERENTES
AISLAMIENTOS DE GRANULOVIRUS EN LARVAS DE TECIA SOLANIVORA Y
PHTHORIMAEA OPERCULELLA. 56
6.3.1. ESTADOS DE DESARROLLO DE TECIA SOLANIVORA Y PHTHORIMAEA OPERCULELLA. 56
6.3.2. DESARROLLO DE LOS SIGNOS DE LA INFECCIN CAUSADA POR DIFERENTES
AISLAMIENTOS DE GRANULOVIRUS EN LARVAS DE T. SOLANIVORA. 62
6.3.3. DESARROLLO DE LOS SIGNOS DE LA INFECCIN CAUSADA POR DIFERENTES
AISLAMIENTOS DE GRANULOVIRUS EN LARVAS DE P. OPERCULELLA. 70
6.4. EVALUACIN DE LA EFICACIA DE LOS DIFERENTES AISLAMIENTOS DE
GRANULOVIRUS FORMULADOS Y SIN FORMULAR EN LARVAS DE TECIA SOLANIVORA
Y PHTHORIMAEA OPERCULELLA. 79
6.5. SELECCIN DEL AISLAMIENTO DE GRANULOVIRUS MS PROMISORIO. 82
7. CONCLUSIONES 85
8. RECOMENDACIONES 86
9. REFERENCIAS 87
10. ANEXOS 95
10.1. ANEXO 1. 95
10.2. ANEXO 2. 97
10.3. ANEXO 3. 98
10.4. ANEXO 4. 100
10.5. ANEXO 5. 103
10.6. ANEXO 6. 104
10.7. ANEXO 7. 108
10.8. ANEXO 8. 115
10.9. ANEXO 9. 117
NDICE DE TABLAS
Tabla 1. Plagas de la papa en Colombia (Cevipapa, 2004). Pp. 5.
Tabla 2. Estado actual de los insecticidas registrados en Colombia para controlar

Tecia solanivora (Povolny 1973) en campo (Arvalo y Castro, 2003). Pp. 14.
Tabla 3. Distribucin geogrfica de poblaciones de Granulovirus en P.

operculella (Tomado y modificado de Zeddam et al., 1999). Pp. 25.
Tabla 4. Escala del ancho de la cpsula ceflica (ACC) para cada nstar de
T. solanivora. Pp. 58.
P. operculella. Pp. 58.
Tabla 6. Resultados de eficacia y productividad de los diferentes aislamientos de

granulovirus en T. solanivora y P. operculella. Pp. 82.
Tabla 7. Coeficientes de importancia de factor para los aislamientos de

granulovirus evaluados sobre T. solanivora y P. operculella. Pp. 83.
Tabla 8. Coeficientes de seleccin de los aislamientos de granulovirus. Pp. 83.
Tabla 9. Matriz de decisin para la seleccin del mejor aislamiento viral para la
elaboracin de un bioplaguicida para el control de T. solanivora y P. operculella.
Pp. 84.
NDICE DE FIGURAS
Figura 1. Distribucin de la Polilla Guatemalteca de la papa en Colombia (Lpez-

vila y Espitia-Malagn, 2000). Pp. 7.
Figura 2. Ciclo de vida de la Polilla Guatemalteca (2200 a 2800 msnm) (Lpez-

vila y Espitia-Malagn, 2000). Pp. 9.
Figura 3. Daos ocasionados por T. solanivora en tubrculos de papa (Plagas

Agrcolas de Venezuela, 2006). Pp. 12.
Figura 4. Ciclo de vida de la Palomilla de la Papa P. operculella. (Tomado y

modificado de Gamboa y Notz, 1990). Pp. 19.
Figura 5. Daos ocasionados por P. operculella en papa (El autor, 2006; Plagas
Agrcolas de Venezuela, 2006). Pp. 21.
Figura 6. Larvas de Tecia solanivora infectadas con el Granulovirus de P.

operculella (El autor, 2006). Pp. 32.
Figura 7. Macerado de larvas de T. solanivora infectadas con el Granulovirus de

P. operculella (El autor, 2006). Pp. 47.
Figura 8. Banda de granulovirus purificados suspendida en un colchn de glicerol

(El autor, 2006). Pp. 48.
Figura 9. Larvas de T. solanivora infectadas con el aislamiento VG003 de

granulovirus (El autor, 2006). Pp. 49.
Figura 10. Productividad viral de aislamientos de granulovirus en larvas de

P. operculella. Tratamientos con la misma letra no presentan diferencias
significativas segn prueba de Tukey (=0.05). Pp. 50.

T. solanivora. Tratamientos con la misma letra no presentan diferencias
significativas segn prueba de Tukey (=0.05). Pp. 51.
Figura 12. Distribucin de frecuencias del ancho de la cpsula ceflica de larvas

sanas de T. solanivora bajo condiciones de laboratorio. Pp. 56.
Figura 13. Distribucin de frecuencias del ancho de la cpsula ceflica de larvas
sanas de P. operculella bajo condiciones de laboratorio. Pp. 57.
Figura 14. Comportamiento de los nstares larvales de T. solanivora con respecto

al tiempo bajo condiciones de laboratorio (T 23C y HR 65%). Pp. 60.
Figura 15. Comportamiento de los nstares larvales de P. operculella con

respecto al tiempo bajo condiciones de laboratorio (T 23C y HR 65%). Pp. 61.
Figura 16. Comportamiento de los nstares larvales de T. solanivora infectada

con el aislamiento de granulovirus VG003. Pp. 63.



con el aislamiento de granulovirus del Per. Pp. 64.
Figura 20. Mortalidad de larvas de T. solanivora infectadas con los diferentes

aislamientos de granulovirus. Tratamientos con la misma letra no presentan
diferencias significativas segn prueba de Tukey (=0.05). Pp. 67.
Figura 21. Larvas de T. solanivora sin infeccin viral (sanas) (El autor, 2006).
Pp. 69.
Figura 22. Desarrollo de la infeccin del aislamiento VG003 en larvas de T.

solanivora (El autor, 2006). Pp. 69.


Figura 25. Desarrollo de la infeccin del aislamiento del Per en larvas de T.

Figura 26. Comportamiento de los nstares larvales de P. operculella infectada



con el aislamiento de granulovirus del Per. Pp. 72.
Figura 30. Mortalidad de larvas de P. operculella infectadas con los diferentes

aislamientos de granulovirus. Tratamientos con la misma letra no presentan
diferencias significativas segn prueba de Tukey (=0.05). Pp. 75.
Figura 31. Larvas de P. operculella sin infeccin viral (larvas sanas) (El autor,
2006). Pp. 77.
Figura 32. Desarrollo de la infeccin del aislamiento VG003 en larvas de



Figura 35. Desarrollo de la infeccin del aislamiento del Per en larvas de

Figura 36. Eficacia de aislamientos de granulovirus formulados y sin formular en

larvas de T. solanivora. Tratamientos con la misma letra no presentan diferencias
significativas segn prueba de DMS (=0.05). Pp. 80.
Figura 37. Eficacia de aislamientos de granulovirus formulados y sin formular en

larvas de P. operculella. Tratamientos con la misma letra no presentan diferencias
significativas segn prueba de DMS (=0.05). Pp. 81.
NDICE DE ANEXOS
Anexo 1. Absorbancia (450nm) de las suspensiones virales obtenidas con cada

larva de P. operculella y T. solanivora infectadas con los diferentes aislamientos
de granulovirus (Repeticiones 1 y 2). Pp. 95.
Anexo 2. Productividad viral en larvas de P. operculella y T. solanivora (CI / mg

de tejido larval). Pp. 97.
Anexo 3. Anlisis estadstico de los resultados de productividad de los diferentes

aislamientos de granulovirus evaluados para P. operculella y T. solanivora,
mediante una prueba de Tukey ( = 0.05). Pp. 98.
Anexo 4. Anlisis estadstico de los resultados de productividad de los

aislamientos de granulovirus evaluados en diferentes hospederos (T. solanivora y
P. operculella), mediante una prueba de Diferencia Mnima Significativa LSD
( = 0.05). Pp. 100.
Anexo 5. Distribucin de frecuencias del ancho de la capsula ceflica para larvas

sanas de T. solanivora y P. operculella. Pp. 103.
Anexo 6. Anlisis estadstico de los porcentajes de mortalidad causados por los

aislamientos de granulovirus en larvas de T. solanivora para cada da de medicin,
mediante una prueba de Tukey (=0.05). Pp. 104.
Anexo 7. Anlisis estadstico de los porcentajes de mortalidad causados por los

aislamientos de granulovirus en larvas de P. operculella para cada da de
medicin, mediante una prueba de Tukey (=0.05). Pp. 108.
Anexo 8. Anlisis estadstico de los resultados de eficacia de los aislamientos de

granulovirus evaluados en T. solanivora y P. operculella, mediante una prueba de
Diferencia Mnima Significativa LSD ( = 0.05). Pp. 115.
Anexo 9. Porcentajes de importancia de cada factor segn el criterio de los

expertos consultados. Pp. 117.
RESUMEN
El uso de baculovirus como agentes de control biolgico ha sido ampliamente

estudiado, llegando al punto de utilizarlos como principio activo de productos
biolgicos para el control de plagas como es el caso de un granulovirus de
Phthorimaea operculella aislado en el Per, el cual se utiliza para la proteccin de
semilla de papa en almacenamiento. En el Laboratorio de Control Biolgico de
Corpoica durante los aos 2004 y 2005 se aislaron, identificaron y caracterizaron
aislamientos nativos de granulovirus obtenidos a partir de larvas de Tecia
solanivora encontradas en los departamentos de Cundinamarca, Nario y Norte de
Santander. En el presente trabajo se realiz la purificacin de los aislamientos de
granulovirus nativos y el granulovirus de referencia del Per y se estudiaron los
efectos de estos agentes infecciosos sobre el desarrollo de las polillas de la papa T.
solanivora y P. operculella, evaluando como variables el ancho de la cpsula
ceflica, los signos de infeccin viral y la mortalidad. Tambin se determin el
efecto de la formulacin sobre la actividad biocontroladora de los diferentes
aislamientos, evaluando la eficacia de stos formulados y sin formular y se
compararon los rendimientos de produccin de partculas virales de cada uno de
ellos por espectrofotometra. Los mayores rendimientos de produccin se
obtuvieron en larvas de P. operculella, mostrando diferencias significativas con
respecto a los resultados obtenidos en T. solanivora para todos los aislamientos
nativos. La infeccin por granulovirus en larvas de T. solanivora y P. operculella
ocasion algunos efectos notorios en el desarrollo de la larvas, como una mayor
duracin de los nstares larvales y por ende se observ un traslapamiento de los
mismos. Tambin produjo signos caractersticos como la presencia de estructuras
blanquecinas puntuales que luego se esparcieron por todo el cuerpo de las larvas,
dando una coloracin blanca generalizada. Adems se encontr que el proceso de
formulacin no potencializ ni disminuy la eficacia de los granulovirus
evaluados; sin embargo, se observ un mayor porcentaje de eficacia con todos los
virus sobre larvas de P. operculella. Con los resultados anteriormente
mencionados se construy una matriz de decisin y se eligi el aislamiento de
Norte de Santander como el ms promisorio para el desarrollo de un bioplaguicida
por presentar las mejores caractersticas desde el punto de vista tecnolgico y
biolgico.
ABSTRACT
The use of baculovirus as agents of biological control has been widely studied
thus getting to the point of using them as the active principle of biological
products for plague control, as is the case of one granulovirus called Phthorimaea
operculella Granulosis virus. It was isolated in Peru and its used to protect stored
potato seeds. During 2004 and 2005 in Corpoicas Lab of Biological Control
different native isolates of granulovirus obtained from Tecia solanivora larvae
found in Cundinamarca, Nario and Norte de Santander were isolated, identified
and characterized. In this study the native granulovirus, and reference
granulovirus from Peru isolates were purified and the effects of these infectious
agents over potato moths T. solanivora and P. operculella were studied testing
variables such as cephalic capsule, viral infection signs and mortality. It was also
determined the effect of the formulation over the biocontrol activity of the
different isolates testing the efficiency of the formulates and non-formulates. The
yields of viral particle productions were studied using spectrophotometry. The
highest yields were obtained from larvae of P. operculella showing significant
differences with the results obtained from T. solanivora for all the native isolates.
The granulovirus infection in larvae of T. solanivora and P. operculella had some
important effects in the larvae development, as it was the longer larvae phases,
thus observing an overlapping of these phases. It also produced characteristic
signs as the presence of white punctual structures that later spread over the whole
body of the larvae producing a general white coloration. It was also found that the
formulation process did not increase either decrease the efficiency of the
granulovirus tested; however, a greater percentage of efficiency with all the
viruses over the P. operculella larvae was observed. With the results presented
here, a decision matrix was built up choosing the Norte de Santander isolate as the
most promising for the development of a bio-pesticide because it showed the best
characteristics from the technological and biological points of view.
1. INTRODUCCIN
Las condiciones agroecolgicas en las que se lleva a cabo el cultivo de papa en

Colombia son muy variadas; lo que influye en la cantidad de especies de insectos
plagas, en su comportamiento, en su distribucin y en su manejo.
Es as como el manejo tanto en cosecha como en postcosecha de las dos

principales polillas de la papa Tecia solanivora (Povolny) y Phthorimaea
operculella (Zeller) (Lepidoptera: Gelechiidae), limitan el proceso productivo por
los altos costos y contaminacin ambiental que se genera con el uso de
agroqumicos. Este problema ha llevado a la bsqueda de mtodos de control
menos riesgosos, ms ecolgicos y ms sostenibles, como es el uso de productos
biolgicos a base de virus de la granulosis que afectan de forma natural las larvas
de estas dos especies de insectos.
En diferentes partes del mundo se han encontrado larvas de Phthorimaea

operculella muertas a causa de una enfermedad natural producida por un virus del
tipo granulosis que pertenece a la familia Baculoviridae. A partir de larvas de
P. operculella infectadas con un granulovirus encontradas en Per, el Centro
Internacional de la Papa (CIP), desarroll un bioplaguicida en polvo para la
proteccin de semilla de papa en almacenamiento, el cual ha sido usado en
diferentes pases para el control de esta plaga.
Con respecto a Tecia solanivora, hasta el ao 2004 slo se haba reportado un

aislamiento de virus de la granulosis encontrado naturalmente infectando larvas en
condiciones de campo en Mrida, Venezuela. Sin embargo, el Laboratorio de
Control Biolgico de la Corporacin Colombiana de Investigacin Agropecuaria-
Corpoica, durante los aos 2004 y 2005 realiz la bsqueda de aislamientos
nativos de virus de la granulosis afectando de forma natural larvas de T.
solanivora. A partir de este trabajo se aislaron, identificaron y caracterizaron
cinco aislamientos obtenidos de los departamentos de Cundinamarca, Nario y
Norte de Santander.
Los aislamientos nativos, se identificaron como virus de la granulosis mediante
tcnicas de microscopa, tcnicas moleculares e inmunolgicas; y se encontraron
diferencias entre estos virus y el Baculovirus de Phthorimaea operculella
proveniente del Per.
Con miras a desarrollar un nuevo bioplaguicida a base de uno de los aislamientos

nativos para el control de las polillas de la papa bajo condiciones de
almacenamiento y campo, surge la necesidad de seleccionar el aislamiento ms
virulento y el ms promisorio desde el punto de vista tecnolgico. A este respecto
las caractersticas ms importantes son la obtencin de altos rendimientos en la
produccin de partculas virales y en segundo lugar, que el aislamiento viral
soporte el proceso de formulacin sin perder patogenicidad.
Determinar cual aislamiento es ms eficiente en el control de las polillas y

conocer como se desarrolla la infeccin en las dos especies plagas, as como
seleccionar el aislamiento ms productivo en trminos de partculas virales por
miligramo de tejido larval, permitirn el desarrollo de bioplaguicidas eficientes
para el control de estos dos insectos.
2. MARCO TERICO
2.1. Cultivo de la Papa.

La papa pertenece a la familia Solanaceae, cuyo nombre cientfico es Solanum
tuberosum L. Es una planta herbcea, vivaz, dicotilednea, provista de un sistema
areo conformado por tallos, hojas, flores y frutos y otro subterrneo de naturaleza
rizomatosa del cual se originan los tubrculos (Sinaipa, 2002)..
Es una de las especies cultivadas de mayor importancia para la produccin

agrcola del pas. La superficie dedicada a este cultivo, la cantidad de productores
dedicados a su explotacin, la alta generacin de empleos directos a nivel rural, la
generacin de ingresos familiares, la utilizacin de medios de transporte, la
condicin de ser la especie eje en la mayora de los sistemas de produccin de
clima fro, la incidencia positiva en el crecimiento de la agroindustria nacional y
el creciente impacto esperado en la generacin de divisas, son slo algunos de los
factores que califican a este cultivo dentro de los primeros en la actividad
agroeconmica nacional (Moreno, 1996).
Este cultivo se destina principalmente a la alimentacin humana como producto

fresco. Sin embargo, su consumo como alimento procesado ha ido adquiriendo
cada vez ms importancia; en este sentido se destacan fundamentalmente, las
papas prefritas congeladas y las papas fritas en forma de hojuelas (chips). Otros
productos industriales, de importancia relativamente menor, son el pur
deshidratado y la harina (Sinaipa, 2002).
2.1.1. Importancia Agrcola.

El cultivo de la papa es la actividad agrcola ms sobresaliente en la zona fra en
Colombia por diferentes razones: econmicamente en el ao 2002 fueron
sembradas unas 163.841 hectreas, con una produccin de 2.834.820 toneladas y
un rendimiento de 17.3 toneladas por hectrea siendo el mayor en los ltimos diez
aos (Cevipapa, 2006). Es el cultivo de mayor demanda de plaguicidas qumicos
y el segundo despus del caf, en uso de fertilizantes, tambin es el producto
agrcola que genera ms transporte terrestre en Colombia. (Vargas, et al., 2004).
Desde el punto de vista social, alrededor de 95.000 familias dependen

directamente del cultivo, equivalente stos a unas 500.000 personas; adems de
los transportadores, comerciantes, lavadores, seleccionadores, procesadores,
productores y otros agentes que intervienen en la cadena de la papa (Vargas, et al.,
2004).
Aproximadamente el 90% de la produccin comercial de papa se concentra en los

departamentos de Cundinamarca (35%), Boyac (30%), Nario (15%) y
Antioquia (10%). El porcentaje restante se distribuye en las zonas de Caldas,
Tolima, Santanderes y otras zonas de menor importancia (Cevipapa, 2004).
2.1.2. Plagas de la Papa.

Las condiciones ecolgicas bajo las cuales se desarrolla el cultivo de la papa son
muy variadas. Se siembra entre 1.700 y 3.600 m.s.n.m., con temperaturas que
oscilan de 5 a 18C y precipitaciones que van desde 500 a 2.000 mm al ao. Estas
variaciones tienen una gran influencia en la cantidad de especies de insectos plaga
en las diferentes reas y determinan su presencia y abundancia y a menudo su
manejo. Por esta circunstancia se podra decir que el carcter de insecto plaga
vara un poco de una zona a otra. Sin embargo, de las 57 especies de insectos
registradas en papa, son pocas las que llegan a nivel de plaga, pudiendo resumirse
a las ms importantes en la siguiente Tabla 1 (Estrada y Sierra, 1997).
Aunque las especies plaga de importancia econmica y que justifican su control

son pocas, sus daos y las prdidas que ocasionan son bastante significativas;
debido a que daan la calidad y demeritan el producto. Adems, los costos de
produccin aumentan, ya que para el control de estas plagas los agricultores
acuden al uso de una gran cantidad de plaguicidas qumicos, los cuales aplican
con frecuencia mediante la modalidad calendario, en la mayora de los casos sin
justificacin tcnica y slo con el criterio de proteger la cosecha contra el eventual
ataque de los insectos (Lpez-vila, 1996).
Tabla 1. Plagas de la papa en Colombia (Cevipapa, 2004).

Plagas de la papa en Colombia
SUELO FOLLAJE ALMACENAMIENTO
Gusano Blanco de la
Polilla pequea
Papa Pulguilla
Phthorimaea operculella
Premnotrypes vorax Epitrix cucumeris (Harris)
(NFERM)
(Hustache)
Polilla Grande de la Papa Tostn o entretelado
Polilla Grande
Tecia solanivora Liriomyza quadrata (Meyrick)
Tecia solanivora (Povolny)
(Povolny) Liriomyza huidobrensis (Blanchard)
Polilla pequea Muques o comedores de hoja Polilla Gigante
Phthorimaea operculella Copitarsia consueta (NFERM) Symmetrischema
(NFERM) Peridroma sp. (Hubner) plaesiosema (Turner)
Chisa
Ancognatha Afidos
Polilla pequea
scarabaeoides Rhopalosiphoninus
Phthorimaea operculella (NFERM)
(Burmeister) latysiphon (Davidson)
Ancognatha ustulata
Babosa
Polilla Gigante
Milax gagates
Symmetrischema plaesiosema (Turner)
(Draparnaud)
Trozadores
Trips
Agrotix ipsilon
Frankliniella tuberosi (Moulton)
(Hufnagel)
Thrips palmi
Feltia sp.
Chupadores
Mosca blanca Trialeurodes vaporariorum
(Westwood)
Afidos
Myzus persicae (Sulzer)
2.2. Tecia solanivora (Povolny).

Una de la plagas de mayor importancia econmica en el cultivo de la papa y que
afecta de forma directa la calidad del tubrculo es la polilla guatemalteca de la
papa (Vargas, et al. 2004). La polilla de la papa Tecia solanivora (Povolny)
pertenece al complejo de polillas pertenecientes a la familia Gelechiidae (Orden
Lepidoptera) que atacan la papa (Solanum tuberosum L.). Se le conoce con varios
nombres comunes: polilla gigante, palomilla grande, polilla centroamericana,
gusano guatemalteco y principalmente como polilla guatemalteca. Fue descrita
por primera vez en Guatemala, siendo considerada en varios pases de
Centroamrica y en los pases andinos (Venezuela, Colombia y Ecuador) como
una de las principales plagas de este cultivo. Actualmente constituye una amenaza
potencial para los cultivos de papa ubicados en los dems pases del rea andina y
en Europa (Nio, 2004).
2.2.1. Distribucin Geogrfica.

Esta plaga es originaria de Centro Amrica en donde se reportaron daos desde
1956 en Guatemala. En 1970 fue introducida a Costa Rica, a la zona productora
de Cartago. En 1973 se observ en Panam, afectando la principal zona
productora de papa ubicada en Cerro Punta, tambin se ha reseado su presencia
en Honduras y San Salvador (Nio, 2004). Fue introducida a Sur Amrica en una
importacin de semilla hecha por Venezuela desde Costa Rica en 1983. Dicha
semilla fue distribuida a los agricultores de Tchira, de donde fue introducida a
Colombia (Araque y Garca, 1999; citado por Vargas et al., 2004).
La polilla se estableci en la zona papera de Norte de Santander registrndose por

primera vez en 1985 en el municipio de Chitag (Soriano, 1999; citado por Vargas
et al., 2004). De all inici su dispersin a todas las zonas productoras,
conocindose por primera vez en Boyac y Cundinamarca en 1991, produciendo
porcentajes de dao entre el 10 y el 40% (Nio, 2004). Antioquia se propag
durante el ao 1994 y en 1996 lleg a Nario y a Ecuador (Espitia, 1999; citado
por Vargas et al., 2004). En 1999 se detect en la zona noroeste de Tenerife, Islas
Canarias en Espaa (Hilje, 1994; Herrera, 1997; Torres, 1999; Pozo y Zambrano,
2002; Garca et al., 2002; citados por Nio, 2004) (Figura 1).
Cabe destacar que el transporte comercial de papa entre los pases y dentro de un
mismo pas, as como la introduccin subrepticia de unos pocos tubrculos por
inters en nuevas variedades de papa, ha conllevado a una rpida diseminacin de
esta plaga a lugares en los cuales, por las barreras geogrficas no hubiese sido
posible la dispersin natural de dicha especie (Nio, 2004).
Figura 1. Distribucin de la Polilla Guatemalteca de la papa en Colombia
(Lpez-vila y Espitia-Malagn, 2000).
2.2.2. Importancia Econmica.

Las larvas de Tecia solanivora causan daos directos a los tubrculos de papa
tanto en campo como en almacenamiento, afectando la calidad de los mismos, lo
cual ocasiona prdidas econmicas por el rechazo del material afectado, adems
contribuye al incremento del uso de agroqumicos y de los costos de produccin
(Nio, 2004).
Cuando las condiciones climticas son favorables para la plaga y se cuenta con
fuentes de infestacin significativas, la polilla guatemalteca es una de las plagas
ms dainas en las zonas productoras de papa, causando prdidas significativas
del producto tanto en campo como en almacn. En ocasiones los tubrculos se
deterioran de tal manera que no pueden ser utilizados para el consumo humano,
animal y mucho menos como semilla. Para estimar la magnitud de los daos se
utiliza la informacin sobre el porcentaje de tubrculos con dao o porcentaje de
infestacin, teniendo en cuenta adems la distribucin de la plaga en las
principales zonas productoras y su alta densidad poblacional (Nio, 2004).
As por ejemplo, en Norte de Santander las prdidas en campo y almacenamiento

superaron el 50% en 1986. En Boyac y Cundinamarca las prdidas iniciales
alcanzaron hasta un 80% en campo en el ao 1994. En el municipio de
Ventaquemada en la vereda el Hato, la plaga arras con lotes en los cuales hasta el
90% de la papa de la cosecha fue atacada. En 1996, se calcul que 540 toneladas
de papa fueron consumidas por la plaga en sitios de almacenamiento y ms de
2000 toneladas en los lotes de cultivo para el altiplano cundiboyacense (Espitia,
1999; citado por Vargas et al., 2004).
2.2.3. Biologa y Comportamiento.

Durante su ciclo de vida, la polilla de la papa pasa por una metamorfosis completa
(holometbolo) que comprende cuatro estados de desarrollo: huevo, larva, pupa y
adulto. La duracin de cada uno de estos estados y consecuentemente la duracin
total del desarrollo de esta especie es afectada por las condiciones ambientales,
siendo la temperatura y la humedad relativa los factores que ms influyen (Nio,
2004). La duracin del ciclo de vida vara entre 65 y 93 das dependiendo
principalmente de la temperatura ambiental (Lpez-vila, 1996) (Figura 2).
2.2.3.1. Huevo.
Los huevos son de forma ovoide a casi redonda y miden 0.5 mm de dimetro;
recin colocados presentan una superficie lisa y un color blanco aperlado, luego se
tornan amarillo intenso y oscuros cuando van a eclosionar. Los huevos son
puestos masivamente sobre los tubrculos y en forma individual cuando los
colocan en las hojas bajeras de la planta, sobre los terrones y grietas del suelo. En
este estado duran de nueve a quince das (Lpez-vila, 1996; Pea y Ypes,
1997; Estrada y Sierra, 1997; Herrera, 1998).
Figura 2. Ciclo de vida de la Polilla Guatemalteca (2200 a 2800 msnm)
(Lpez-vila y Espitia-Malagn, 2000).
2.2.3.2. Larva.
Del huevo nace una larva de 1mm de longitud. Es de tipo erusciforme o forma de
gusano con cabeza esclerotizada (Lpez-vila y Espitia-Malagn, 2000). Las
larvas pasan por cuatro nstares o estados intermedios (Herrera, 1998; Nio y
Notz, 2000a; Villamizar et al., 2006) Presentan una forma alargada y poseen tres
pares de patas torcicas, cuatro pares de pseudopatas abdominales y un par de
pseudopatas anales. Las larvas de primer nstar miden 1.3mm de largo y las del
ltimo, 14mm. En el primer nstar las larvas muestran una coloracin hialina
blancuzca pero al desarrollarse, adquieren una coloracin amarillo verdosa; en el
ltimo nstar toman una coloracin prpura en la regin dorsal. Presentan una
cabeza bien definida de color pardo claro. El escudo protorcico ocupa
completamente el dorso del primer segmento abdominal. Las larvas de Tecia
solanivora presentan lunares o manchas (pinculas) de forma trapezoidal sobre el
dorso de cada segmento, lo que las distingue de las larvas de Phthorimaea
operculella (Herrera, 1998).
Cuando las larvas emergen de los huevos, inician la fase de migracin hacia los
tubrculos y all pasan por los cuatro nstares larvales (Lpez-vila y Espitia-
Malagn, 2000). En el ltimo nstar, la larva abandona el tubrculo a travs de
orificios de salida circulares (Herrera, 1998) y forman un capullo de seda que
recubren con tierra u otras partculas; mantienen su forma pero pierden su
movilidad y dejan de comer, fase que se conoce como prepupa; luego se van
transformando hasta pasar al estado de pupa (Nio, 2004).
2.2.3.3. Pupa.
Se forma dentro del capullo formado por la larva donde ocurre la metamorfosis de
larva a pupa y de pupa a adulto (Herrera, 1998). Es de tipo obtecta, exhibe una
coloracin caf rojiza que se va oscureciendo conforme madura. Se presenta
diferencia en tamao entre las pupas que dan origen a hembras o a machos. La
que produce una hembra mide en promedio 8.5mm de largo y la que dar lugar a
un macho 7.8mm. Esta fase dura de 15 a 23 das (Lpez-vila y Espitia-Malagn,
2000).
2.2.3.4. Adulto.
El adulto es una pequea polilla cuyo color vara del pardo oscuro a gris. Existe
un marcado dimorfismo sexual entre hembras y machos, relacionado con el
tamao del adulto y su coloracin (Hembras: 12mm largo por 3.4mm de ancho; y
Machos: 9.7mm de largo por 2.9mm de ancho). En ambos sexos, las alas tienen
una forma de copa con flecos. La hembra se distingue por tener un abdomen
abultado y claro, mientras que el del macho es delgado y oscuro (Herrera, 1998.
Nio, 2004).
Los adultos son ms activos durante el atardecer, la noche y el amanecer. Durante

el da permanecen refugiados en sitios oscuros, ocultos bajo el follaje y el rastrojo
de las plantas. El adulto tiene la capacidad de volar, lo cual le permite desplazarse
distancias relativamente largas. La proporcin de sexos es de 1:1 las hembras
producen una sustancia llamada feromona, que atrae poderosamente a los machos
para la cpula, la cual ocurre por lo general al da siguiente de la emergencia del
adulto. Las hembras pueden ovipositar durante 10 das; cada hembra fecundada
puede ovipositar entre 150 y 360 huevos, de manera individual o en grupos
(Herrera, 1998).
2.2.4. Descripcin de los Daos.

La larva es el nico estado del insecto que causa dao (Nio, 2004). Al entrar en
el tubrculo, las larvas dejan un orificio de entrada muy pequeo. La larva de
T. solanivora consume la pulpa y forma galeras o tneles cuya profundidad se
incrementa a medida que crece y aumenta su densidad (Herrera, 1998). Las larvas
se alimentan slo de la pulpa del tubrculo y aunque el consumo por larva es bajo,
aproximadamente un gramo (Hilje, 1994; citado por Nio, 2004), cuando se
incrementa la densidad de larvas por tubrculo, llegan a consumir gran parte de la
pulpa y profundizan ocasionando un deterioro significativo de la calidad del
mismo (Nio, 2004).
Cuando las poblaciones de larvas en los tubrculos son muy altas, stas pueden
migrar hacia otros tubrculos. Por otra parte, las condiciones de almacenamiento
de la papa son ideales para la reproduccin de T. solanivora, puesto que all los
tubrculos no tienen ninguna proteccin y porque la oscuridad de la mayora de
los lugares de almacenamiento favorece la actividad de los adultos (Herrera,
1998).
En el ltimo instar, la larva abandona el tubrculo a travs de orificios de salida

circulares con bordes regulares, los cuales son caractersticos de la infestacin. En
consecuencia la papa picada por la polilla guatemalteca se distingue por su
apariencia limpia cuando el ataque es moderado. Otra de las lesiones
ocasionadas por la polilla guatemalteca, son los rastros de heces que las larvas
dejan en las galeras, lo que se puede ver al partir los tubrculos afectados; como
consecuencia, los tubrculos daados no se pueden utilizar para consumo humano
ni animal (Herrera, 1998) (Figura 3).
Figura 3. Daos ocasionados por Tecia solanivora en tubrculos de papa
(Plagas Agrcolas de Venezuela, 2006).
Por lo tanto, los daos principales son: (Estrada y Sierra, 1997).

Deterioro de la calidad.
Favorece la penetracin de microorganismos y pudricin del tubrculo.
Ocasiona perjuicios econmicos por disminucin en el precio de venta.
2.2.5. Manejo Integrado de Tecia solanivora (Povolny).

En las regiones productoras de papa en Centroamrica, as como en los pases
andinos (Venezuela, Colombia y Ecuador), donde T. solanivora se ha establecido
como una de las principales plagas actuales o potenciales del cultivo de papa, se
han realizado en mayor o menor cuanta investigaciones tendentes a aportar
conocimientos sobre la biologa y comportamiento de la plaga, dinmica
poblacional, generacin y evaluacin de prcticas de control que han permitido
generar una serie de recomendaciones para el manejo integrado de la plaga. La
estrategia de control ha estado dirigida a reducir los niveles de poblacin de la
plaga y con ello las prdidas econmicas (Nio, 2004).
Las tcnicas o mtodos de control de la polilla de la papa T. solanivora generados,

evaluados y validados en las diferentes investigaciones realizadas con este fin,
estn enmarcadas dentro del control cultural, etolgico, qumico y biolgico; los
cuales al utilizarse de manera compatible con las condiciones agroecolgicas y
teniendo en cuenta las condiciones socioeconmicas en los sistemas de
produccin del cultivo de papa, permiten el diseo de programas de manejo
integrado del cultivo. Cuando las poblaciones son altas, normalmente ningn
mtodo de control individual proporciona una proteccin adecuada (Ortiz et al.,
1996; Cisneros et al., 2001; citados por Nio, 2004).
2.2.5.1. Control Cultural.

Ofrece una serie de prcticas que estn dirigidas principalmente a destruir las
fuentes de infestacin de la plaga, crear condiciones desfavorables para el
desarrollo e interrumpir la sucesin de generaciones de los insectos (Cisneros,
1995; citado por Nio, 2004).
Varias prcticas culturales son indispensables para el manejo adecuado de la

plaga, entre las que se tienen: seleccin de tubrculos (semilla sana), construccin
de silos para almacenamiento de papa, limpieza del lugar de almacenamiento,
aporque alto de semilla, control de malezas, riego por aspersin, preparacin
adecuada del suelo, cosecha oportuna, eliminacin de residuos de cosecha y
rotacin de cultivos (Pea y Ypes, 1997; Nio, 2004).
2.2.5.2. Control Etolgico.

La etologa es el estudio del comportamiento de los animales en relacin al
ambiente y el control etolgico es el control de plagas que aprovecha el
comportamiento de algunos insectos. El comportamiento est determinado por la
presencia u ocurrencia de estmulos que son predominantemente de naturaleza
qumica, aunque tambin hay estmulos fsicos y mecnicos (RAAA, 2006).
Las alternativas de control etolgico para esta plaga incluyen las siguientes
prcticas: trampas con feromona de hembras que atraen machos en el campo y en
el silo o bodega (Pea y Ypes, 1997). Este tipo de trampas se utilizan
principalmente para la deteccin y monitoreo o seguimiento de la plaga tanto en
campo como en almacn, sirven para determinar la conveniencia o no de las
aplicaciones de insecticidas qumicos (Nio, 2004).
2.2.5.3. Control Qumico.
En las recomendaciones emitidas por los centros de investigacin y de asistencia
tcnica se destaca el uso de insecticidas qumicos slo como una medida
complementaria dentro del manejo integrado de plagas de la papa (Nio, 2004).
Este tipo de control, considerado dentro de un plan de manejo integrado de plagas,
incluye el uso de umbrales econmicos, los cuales constituyen la herramienta que
permite decidir sobre la necesidad de aplicar o no insecticidas y el momento de
hacerlo; si no existe este sistema de aviso, las aplicaciones de insecticidas se
hacen de una manera fija, esto es, de acuerdo a un calendario (Poston et al. 1983;
citado por, Corredor y Flrez, 2003). Para el caso de T. solanivora, el ICA y el
Ministerio de Agricultura determinaron que una captura de 50 polillas
machos/trampa/semana podra ser un buen parmetro para un umbral nominal
(Corredor y Flrez, 2003) .En Colombia alrededor del 15% de los costos de la
produccin por hectrea del cultivo de la papa estn representados por el control
qumico de plagas y enfermedades, lo que significa un gasto anual a nivel
nacional cercano a los cien mil millones de pesos (Rodrguez, A. 1996).
En el perodo 19951997, por solicitud de FEDEPAPA, las empresas titulares de

los registros, el gremio y el ICA, registraron 10 insecticidas para controlar
T. solanivora en campo (Tabla 2) (Arvalo y Castro, 2003).
Tabla 2. Estado actual de los insecticidas registrados en Colombia para controlar Tecia
solanivora (Povolny 1973) en campo (Arvalo y Castro, 2003).
NOMBRE NOMBRE COMN EMPRESA ESTADO ACTUAL
COMERCIAL
Pirestar 38 EC Permetrina Dupont de Colombia S.A. Vigente
Orthene 75% SP Acefato Proficol S.A. Vigente
Lorsban 4 EC Clorpirifos Dow Agrosciences de Colombia S.A. Vigente
Trapper EC Clorpirifos Dow Agrosciences de Colombia S.A. Vigente
Curacron 500 EC Profenofos Syngenta S.A. Vigente
Eltra 48 EC Carbosulfan Dupont de Colombia S.A. Cancelada la ampliacin
Larvin 375 SC Tiodicarb Bayer Cropscience Cancelada la ampliacin
Profitox 80 SP Triclorfon Proficol S.A. Cancelada la ampliacin
Ofunack 40% EC Pyridafention Proficol S.A. Registro cancelado
Tess 50 EW Deltametrina Bayer Cropscience Registro suspendido
En Colombia el Instituto Colombiano Agropecuario-ICA en el ao 2002, retir el

registro de uso a la mayora de plaguicidas qumicos que existan en el pas para el
control de T. solanivora (Villamizar et al., 2003). Sin embargo, la medida ms
utilizada por los agricultores continua siendo el uso de insecticidas de alta
toxicidad y elevado costo, con las implicaciones negativas que acarrea su uso
indiscriminado (Nio y Notz, 2000b); a pesar de que estos insecticidas solo tienen
un porcentaje promedio de control del 50% (Arvalo y Castro, 2003).
2.2.5.4. Control Biolgico.

Se han realizado varios trabajos de bsqueda, reconocimiento y evaluacin de
posibles controladores biolgicos para T. solanivora, no obstante, con excepcin
de los virus entomopatgenos del genero Baculovirus (Zeddam et al., 2002; citado
por Nio, 2004), se han identificado hasta ahora pocos agentes benficos que
puedan desempear un papel significativo en el manejo de esta plaga (Nio,
2004). A diferencia de los insecticidas qumicos, los Baculovirus son altamente
especficos para ciertos insectos y han sido considerados por la Organizacin
Mundial para la Agricultura y la Alimentacin-FAO y la Organizacin Mundial
de la Salud-OMS, como una de las alternativas promisorias para el control de
plagas (CIP, 2000).
En varios pases se han realizado observaciones sobre la presencia de un virus de

la granulosis infectando larvas de la polilla de la papa Phthorimaea operculella
(Zeller). En el caso de T. solanivora, recientemente se inform sobre la presencia
de larvas infectadas con un virus de la granulosis similar al de P. operculella, las
cuales se recolectaron en tubrculos cosechados en Mucuches, estado Mrida
(Nio de Gualdrn, 1996; citado por Nio y Notz, 2000a). En Colombia Corpoica
ha realizado el aislamiento y caracterizacin de cinco aislamientos nativos de
virus de la granulosis afectando de forma natural larvas de T. solanivora en los
departamentos de Cundinamarca, Nario y Norte de Santander (Villamizar et al.,
2006).
Para realizar varias pruebas en los pases afectados por la plaga se introdujo del
Centro Internacional de la Papa (CIP), el virus de la granulosis de Phthorimaea
operculella para su multiplicacin en larvas de T. solanivora, siguiendo como
base la metodologa empleada en el CIP (Torres, 1998; Sotelo et al., 2002;
Alcazar et al.; 2002; citado por Nio, 2004).
Actualmente, el bioinsecticida en polvo formulado a partir de larvas de la polilla

guatemalteca infectadas con el virus de la granulosis del Per, diseado para
proteger los tubrculos durante el almacenamiento, constituye el producto
biolgico ms promisorio para el manejo de esta plaga en nuestro pas (Herrera,
2004; citado por Nio 2004).
Teniendo en cuenta que T. solanivora es una plaga extica, reviste especial

importancia considerar la estrategia de Control Biolgico Clsico, es decir, la
introduccin o importacin de enemigos naturales de la polilla, nativos del pas de
origen de la plaga y preferentemente, de zonas agroecolgicamente similares a las
zonas productoras de papa en Colombia. Entre los enemigos naturales con
potencial para el Control Biolgico de T. solanivora se destacan los siguientes:
parasitoides altamente especficos, insectos depredadores generalistas y
microorganismos entomopatgenos como el Bacillus thuringiensis, las cepas
especficas de Baculovirus anteriormente mencionadas y aislamientos de hongos
entomopatgenos como el Metarhizium anisopliae y Neumorea rileyi (Valencia,
2003).
2.3. Phthorimaea operculella (Zeller).

La palomilla de la papa Phthorimaea operculella (Zeller) es una de las plagas ms
importantes en el cultivo de la papa en muchas regiones tropicales y subtropicales
del mundo, ya que afecta de forma directa los tubrculos y las hojas de esta planta
(Sporleder et al., 2005b). La palomilla de la papa Phthorimaea operculella
(Zeller) pertenece al complejo de las polillas de la familia Gelechiidae, orden
Lepidoptera que atacan la papa (Solanum tuberosum L.) (Lopz-vila, 1996).
2.3.1. Distribucin Geogrfica.
La palomilla de la papa P. operculella fue reportada por primera vez por Bretn
en Tasmania, Australia en 1855. Sin embargo, se cree que el insecto fue
encontrado en Nueva Zelanda un ao antes (Bretn, 1855; citado por Das, 1995).
Graf (1917) analiz la presencia de esta plaga en California y encontr que estuvo
presente all desde 1856. Pese a la distribucin de este insecto, es generalmente
aceptado que la palomilla de la papa P. operculella tiene su origen en Sur
Amrica (Graf, 1917; Picard, 1912; citado por Das, 1995), lugar donde tambin se
origin su planta hospedera (Correl, 1992; citado por Das, 1995).
La relativa riqueza de complejos parasitoides de esta plaga en Latino Amrica,

reafirma que esta rea es la fuente original de la palomilla de la papa P.
operculella. Sin embargo, esta polilla es una especie cosmopolita
(Commonwealth Institute of Entomology, 1968; Izhevskiy, 1985; Lloyd, 1972;
citados por Das, 1995), originaria de Sudamrica y que se ha diseminado en
muchas reas del mundo en donde se cultiva papa. Se le puede hallar desde el sur
de Europa hasta Australia y Nueva Zelanda, y desde Estados Unidos de Norte
Amrica hasta Japn. Adems se puede encontrar atacando tambin otros cultivos
como tomate, tabaco, berenjena y en general otras solanceas (CIP, 2000).
2.3.2. Importancia Econmica.

La palomilla de la papa es una de las plagas ms importantes de los cultivos de
papa en las zonas tropicales y subtropicales, donde produce hasta un 80% de dao
en campo e importantes prdidas durante almacenamiento (Mamani et al.; 1997).
Para disminuir el dao ocasionado por la polilla de la papa, 52.5% de los

agricultores realizan aplicacin de insecticidas qumicos (Folidol, Malathion,
DDT, Phostoxin), en condiciones altamente riesgosas para la salud, debido a que
no utilizan proteccin durante la aplicacin. Almacenan los tubrculos-semillas en
sus viviendas y quedan directa o indirectamente expuestos a la accin de los
plaguicidas (Mamani et al., 1997).
Prdidas mayores al 50% han sido registradas en cultivos comerciales en Per
(Anon, 1980; citado por Das, 1995). Las prdidas en almacenamiento ocasionadas
por esta plaga alcanzan niveles del 100% en India (Rahman, 1944; citado por Das,
1995), del 90% en Kenya (Ojero, 1980; citado por Das, 1995), 86% en Tunz,
Argelia y Turqua (Anon, 1980; citado por Das, 1995) y del 100% en las Filipinas
sin ninguna medida de control (Anon, 1985; citado por Das, 1995).
La palomilla de la papa Phthorimaea operculella (Zeller) es un grave problema,

ya que en algunos casos esta plaga necesita medidas de control legislativas, en
donde el gobierno exija alguna legislacin para su control (Das, 1995).
2.3.3. Biologa y Comportamiento.

Durante su ciclo de vida, la palomilla de la papa pasa por una metamorfosis
completa (holometbolo) que comprende cuatro estados de desarrollo: huevo,
larva, pupa y adulto. La duracin de cada uno de estos estados y
consecuentemente la duracin total del desarrollo de esta especie es afectada por
las condiciones ambientales, siendo la temperatura y la humedad relativa los
factores que ms influyen (Nio, 2004). La duracin del ciclo de vida vara entre
22 y 55 das dependiendo principalmente de la temperatura ambiental (Lpez-
vila, 1996) (Figura 4).
Anualmente pueden desarrollarse de 2 a 12 generaciones, dependiendo de la

temperatura y del hospedante, donde las fases del insecto son afectadas por la
temperatura en forma inversa. Los adultos durante el da se esconden bajo los
desechos, terrones de suelo o bajo las hojas de las plantas, siendo difciles de
detectar y pueden encontrarse durante todo el ao, tanto en el campo como en las
bodegas de almacenamiento (Ortega, 1995).
a. Huevo (4-8 das)
b. Larva (16-28 das)
d. Adulto (10-30 das)

c. Pupa (6-7 das)
Figura 4. Ciclo de vida de la Palomilla de la Papa Phthorimaea operculella

(Tomado y modificado de Gamboa y Notz, 1990).
2.3.3.1. Huevo.
Los huevos son de forma ligeramente ovalada, miden 0.45mm, de superficie lisa y
son de color blanco aperlado recin puestos, posteriormente se tornan amarillos.
No existe un lugar preferido para la oviposicin, los huevos se encuentran en
diversos lugares de la planta como son: hojas, tanto en el haz como en el envs,
pecolos, tallos, tubrculos. Por lo general son depositados en forma individual,
pero ocasionalmente se encuentran en los ojos de los tubrculos en pequeos
grupos. Tambin pueden ser colocados en las basuras, en los desechos o
directamente sobre la tierra (Estrada y Sierra, 1997).
2.3.3.2. Larva.
La larva al emerger mide aproximadamente 1.25 +/- 0.007mm, es de color
amarillo a crema y presenta el escudo protorcico marrn oscuro en casi toda su
extensin, coloracin que se mantiene durante el perodo larval y puede variar con
la alimentacin, ya que puede ser verdosa si se alimenta de hojas. La larva recin
emergida cubre con seda el lugar donde se encuentra y empieza a perforar el
tubrculo formando una galera, generalmente en el mismo lugar donde se
encontraba el huevo o muy cerca de ste. Una vez completado el perodo larval se
inicia la fase de prepupa, la cual ocurre entre 16 y 28 das despus de la eclosin.
Para prepupar la larva abandona la galera y adquiere una coloracin rosada,
empieza a confeccionar la cmara puparia con seda, restos de heces y epidermis
del tubrculo, posteriormente se torna verde, comienza a aletargarse y a acortarse
en longitud, muda por ltima vez y toma la forma caracterstica de una pupa
obtecta (Gamboa y Notz, 1990).
2.3.3.3. Pupa.
Es de tipo obtecta, es de color marrn claro casi amarillo recin formada que
luego cambia a oscuro a medida que transcurre este estado. Se localiza sobre
cualquier material vegetal seco, sobre los tubrculos o en el suelo donde se cubre
de partculas de ste; posteriormente de all salen nuevas polillas pasados unos
siete das (Lpez-vila, 1996).
2.3.3.4. Adulto.
El adulto es una pequea polilla de color caf grisceo, el cuerpo mide
aproximadamente 1cm de largo con una envergadura de 12 a 15mm. En las alas
anteriores presenta un patrn de manchas caracterstico de la especie y en las alas
posteriores presentan un borde ancho de flecos. Durante el da, las polillas se
mantienen ocultas en el follaje y al comienzo de la noche vuelan en el campo o en
las bodegas para copular y ovipositar. Los adultos viven de 15-30 das, siendo un
poco mayor el tiempo de vida de las hembras que el de los machos. Una hembra
puede depositar en promedio unos 150 huevos durante su vida y presenta un
perodo de preoviposicin de tres das (Lpez-vila, 1996).
2.3.4. Descripcin de los Daos.
El primer ataque y el ms severo se observa inmediatamente germina la papa. La
segunda generacin acta como minador de follaje, caso en el cual carece de
importancia econmica. La tercera se presenta como minador y como barrenador
y la cuarta puede afectar los tubrculos prximos a cosecha. Sin embargo, el dao
de mayor importancia se encuentra en almacenamiento (Estrada y Sierra, 1997).
Las larvas de Phthorimaea operculella hacen minas en las hojas, barrenan los
tallos, pecolos y en los tubrculos forman tneles o galeras a travs de la pulpa
hasta destruirla completamente. Las plantas afectadas por la palomilla de la papa
se adormecen inicialmente, los tallos se doblan, se presenta un amarillamiento y
posteriormente se secan. El dao causado por P. operculella en los tubrculos se
diferencia de otros por la presencia de excrementos que dan la apariencia de
aserrn y se localizan en forma abundante en las entradas de las galeras (Lpez-
vila, 1996) (Figura 5).
Figura 5. Daos ocasionados por Phthorimaea operculella en papa

(El autor, 2006; Plagas Agrcolas de Venezuela, 2006).
2.3.5. Manejo Integrado de Phthorimaea operculella (Zeller).

El manejo integrado de la palomilla de la papa incluye prcticas de control
cultural, etolgico, qumico y biolgico (Ortega, 1995).
2.3.5.1. Control Cultural.
Varias prcticas culturales son indispensables para el manejo adecuado de la
plaga, entre las que se tienen: programas adecuados de fecha de siembra y
cosecha, tcnicas de irrigacin adecuadas, adecuada profundidad de plantacin
(mnimo 15cm), eliminacin de restos de cosecha y de malezas (eliminacin de
focos de infeccin), rotacin de cultivos, y control fsico con barreras repelentes,
por ejemplo el Cariaquito (Lannata spp.), el follaje de rbol seco Neem
(Azaridachta indica) y Eucalyptus globulus (Ortega, 1995).
2.3.5.2. Control Etolgico.

Esta medida de control para esta plaga se utiliza principalmente mediante el uso
de feromonas sexuales. Las feromonas se utilizan como instrumento de monitoreo
para detectar la aparicin temprana de infestaciones, de modo que se puede
calcular mejor el tiempo oportuno de la aplicacin de insecticidas y otras medidas
drsticas de control, detectar su presencia en reas nuevas y tomar la decisin de
aplicar o no un insecticida, con lo cual se gana en efectividad, economa y
seguridad ambiental (Ortega, 1995).
Para la captura de adultos machos se recomienda el uso de trampas de agua

cebadas con dedales de goma impregnados con la feromona y preferiblemente de
color amarillo, determinndose el nmero ptimo bajo las condiciones locales. En
general, se han recomendado entre 8 a 42 trampas/ha en campo y de 1 a 2
trampas /10 m2 de almacn. Aunque la feromona en algunos dedales dura un ao,
en general se recomienda la colocacin de nuevos dedales por poca de plantacin
cada seis meses (Ortega, 1995).
2.3.5.3. Control Qumico.

El uso de agroqumicos ha sido el componente tecnolgico tradicionalmente ms
utilizado, con un nmero elevado de aplicaciones para cumplir con las exigencias
del mercado de tubrculos libres de dao y apariencia agradable (Ortega, 1995).
Sin embargo, al efectuarse el control de la palomilla de la papa casi
exclusivamente con insecticidas de sntesis qumica, se incrementa los riesgos de
intoxicaciones y se elevan los costos de produccin; adems, este tipo de
productos ocasionan resistencia de la plaga, erradicacin de parasitoides o
enemigos naturales que puedan encontrarse dentro del cultivo y aparicin de
nuevas plagas (CIP, 2000).
2.3.5.4. Control Biolgico.

Se han realizado varios trabajos de bsqueda, reconocimiento y evaluacin de
posibles controladores biolgicos para P. operculella; de los cuales se han
encontrado diferentes alternativas de control, como el uso de Bacillus
thuringiensis Berliner (BT), Parasitoides, Virus de la granulosis (Granulovirus de
Phthorimaea operculella) y el uso del hongo entomopatgeno Beauveria bassiana
(Ortega 1995).
2.3.5.4.1. Bacillus thuringiensis.

En el mercado existen diferentes productos bioinsecticidas a base de BT que
pueden aplicarse por aspersin o por espolvoreo. La frmula comercial de Dipel
(0,5% producto comercial) asperjada a los tubrculos antes del almacenamiento
reduce significativamente los daos causados por las polillas de la papa (Ortega,
1995). La bacteria Bacillus thuringiensis es un bacilo flagelado y esporulado,
gram positivo que produce durante la esporulacin un cristal de protena txico
que causa una enfermedad mortal para el insecto. Las larvas de los insectos
ingieren estos cristales diseminados sobre las hojas o el sustrato alimenticio, y una
vez dentro del tubo digestivo de los insectos estos cristales se convierten en
toxinas activas que se unen a receptores especficos de las clulas epiteliales de las
clulas del intestino e inducen la formacin de poros que causan la prdida del
contenido celular, seguida de lisis, causando as la muerte del insecto por
inanicin y deshidratacin (Madigan et al., 2000).
2.3.5.4.2. Parasitoides.
La polilla tiene ms de 20 especies de enemigos naturales, de los cuales se destaca
Copidosoma koehleri (Hymenoptera: Encyrtidae) cuya eficacia de parasitismo
oscila entre 30 y 90% (Ortega, 1995). Otro parasitoide importante en el control de
P. operculella es Orgilus lepidus Muesebeck (Hymenoptera: Braconidae), sin
embargo, este parasitoide es muy sensible a la aplicacin de plaguicidas y por lo
tanto no se puede usar en un programa de manejo integrado que utilice control
qumico (Symington, 2003).
2.3.5.4.3. Beauveria bassiana.

Una serie de investigaciones han sido llevadas a cabo para determinar los efectos
del hongo entomopatgeno Beauveria bassiana en diferentes estados de
desarrollo de P. operculella, encontrando que las larvas de primer y segundo
nstar son los estados ms susceptibles; adems una infeccin en los estados de
prepupa y pupa, dan como resultado una disminucin en la emergencia y en la
longevidad de los adultos y en las tasas de oviposicin (Hafez et al., 1994).
2.3.5.4.4. Virus de la Granulosis (VG).

Este virus de la granulosis se encuentra en forma natural afectando larvas de las
polillas de la papa, en las que acta como un insecticida estomacal. El VG puede
aplicarse en forma lquida o en polvo. La formulacin lquida, cuando se realiza
en campo, produce entre 70 y 100% de mortalidad larval y su persistencia alcanza
hasta 60 das despus de la aplicacin. La formulacin en polvo se utiliza a las
dosis de 5 kg/Ton de papa y su persistencia en el almacn indica que el virus es
efectivo hasta 120 das (Ortega, 1995).
El virus de la granulosis de Phthorimaea operculella fue encontrado por primera

vez en 1977 en Ceiln infectando naturalmente larvas de esta polilla y luego en
diferentes partes del mundo (Tabla 3) (Steinhaus & Marsh, 1967; citado por
Zeddam et al., 1999). En algunos pases incluidos Per, Bolivia, Colombia, Tnez
y Egipto, en colaboracin con en Centro Internacional de la Papa-CIP, se ha
empezado a producir localmente este virus que est siendo aplicado en campo y
en almacenamiento (CIP, 1996; citado por Zeddam et al., 1999).
Tabla 3. Distribucin geogrfica de poblaciones de Granulovirus en P. operculella

(Tomado y modificado de Zeddam et al., 1999).
PAS REFERENCIAS AO
Sri Lanka Steinhaus & Marsh 1974
Australia Reed 1969
Sur frica Broodryk & Pretorius 1974
Nueva Zelanda Foot 1979
India Amonkar et al 1979
Crimea Simchuk et al. 1984
Per Raman et al. 1988
Yemen Kroshel 1990
Kenia Annimo 1992
Tnez Ben Salah & Aalbu 1992
Venezuela Zeddam et al. 1994
Egipto Zeddam Sin publicar
Bolivia Caldern et al. 1995
Turqua Zeddam Sin publicar
Indonesia Zeddam et al. 1999
Colombia Villamizar et al. 2006
A diferencia de los insecticidas qumicos, los baculovirus son altamente

especficos para las plagas de insectos y junto con otros virus de insectos han sido
considerados como los ms promisorios, recomendando su uso en programas de
control integrado de plagas (CIP, 2000).
El Granulovirus de Phthorimaea operculella acta como un insecticida estomacal,

pues para que se infecten las larvas es necesario que ingieran las partculas virales.
De esta manera el virus acta como un insecticida biolgico o bioinsecticida. El
signo tpico de una larva infectada por el virus es la coloracin blanca, de aspecto
lechoso; las larvas se vuelven lentas en sus movimientos, se hinchan ligeramente
y ninguna larva infectada logra pupar (CIP, 2000).
La multiplicacin del virus y la elaboracin de formulados se realiza a partir de

larvas del insecto afectadas por el agente infeccioso. El CIP desarroll una
formulacin en forma de polvo seco consistente en macerar 20 larvas infectadas y
diluirlas en 1L de agua; a esta preparacin se le agrega 1Kg de material inerte y
luego se mezcla manualmente hasta obtener una pasta, la cual es extendida sobre
un plstico en una superficie horizontal protegida de la luz y cuando la pasta ha
secado, se muele con un rodillo manualmente hasta obtener un polvo que es
empacado y distribuido para su uso (CIP, 2000).
2.4. Baculovirus.
La familia Baculoviridae es la ms numerosa y ampliamente estudiada de todos
los grupos de virus patgenos de insectos. La familia consta de dos gneros:
Nucleopolyhedrovirus (virus de la polihedrosis nuclear, NPV) y Granulovirus
(virus de la granulosis, GV). Son virus de ADN circular de doble cadena, cuyos
viriones estn caractersticamente incluidos en cuerpos de inclusin proteicos
(CIs). La infeccin de los hospederos ocurre por ingestin. Posteriormente en el
intestino medio de los insectos, donde se dan condiciones alcalinas (pH 9-11), se
disuelve la protena que compone los CIs y se liberan los viriones que se unen a la
membrana de las clulas epiteliales del mesentern. Los viriones entran en las
clulas por un proceso de fusin con la membrana celular y el ADN viral se
replica en el ncleo de la clula produciendo nuevos viriones que diseminan la
infeccin por todos los tejidos del insecto y al final del proceso se producen
grandes cantidades de CIs (Granados y Williams, 1986; citados por Caballero et
al., 2001).
Los virus pertenecientes a la familia Baculoviridae solo se han encontrado

infectando a organismos del phylum Arthropoda, mayoritariamente a los de la
clase Insecta (Groner, 1986; citado por Caballero et al., 2001). Ninguna otra
familia de virus entomopatgenos presenta esta caracterstica, lo que permite
desarrollarlos con un menor numero de restricciones de bioseguridad (Caballero et
al., 2001).
Adicionalmente, al igual que muchos otros virus, la gran mayora de las cepas de
los baculovirus presentan un reducido espectro de huspedes. Esta cualidad
implica que las diversas cepas de baculovirus pueden utilizarse como
bioinsecticidas contra muchas especies de insectos, sin afectar a las plantas y a los
vertebrados incluyendo al hombre, a los insectos benficos que son parasitoides y
depredadores de las plagas o a otros insectos benficos como las abejas (Yearian y
Young, 1982; citados por Caballero et al., 2001).
2.4.1. Estructura y Composicin.
2.4.1.1. Nucleocpside.
Su funcin es la de transportar la informacin gentica del virus en forma
compacta hasta la clula hospedera (Federici, 1986; citado por Caballero et al.,
2001). Dicha estructura consiste en una vaina o cpside cilndrica, tapada en
ambos extremos, cuyo interior constituye el ncleo donde se encuentra el ADN
genmico enrollado y condensado. sta tiene un dimetro medio comprendido
entre 30 y 60nm y una longitud de entre 250 y 300nm (Ayres, et al., 1994; Ahrens
et al., 1997; Ijkel et al., Gomi et al., 1999; Kuzio et al., 1999; Hayakawa et al.,
1999; citados por Caballero et al., 2001).
2.4.1.2. Viriones.
Son los principales elementos infecciosos de los baculovirus tanto en la dispersin
del virus entre los individuos de una poblacin como entre los distintos rganos y
tejidos dentro de un mismo hospedero. El virin maduro se forma cuando la
nucleocpside adquiere, en un momento determinado de la replicacin del virus,
una envuelta o membrana que tiene una estructura trilaminar tpica compuesta por
una capa de lpidos entre dos capas de protenas (Federici, 1986; citado por
Caballero et al., 2001). Dicha membrana, y por tanto las protenas, lpidos y
cidos grasos que la componen, pueden proceder de dos orgenes distintos que
van a dar lugar a dos tipos de viriones diferentes: viriones derivados de cuerpos de
inclusin y viriones brotados (Caballero et al., 2001).
2.4.1.3. Cuerpos de Inclusin.

Todos los granulovirus sintetizan al final del proceso infeccioso grandes
cantidades de granulina, protena que cristaliza formando una matriz o cuerpo de
inclusin (CI) con forma de grnulo. En los CIs durante su morfognesis, queda
incluido un virin ODV, lo que les permite preservar su capacidad infecciosa
(Caballero et al., 2001).
Los CIs son insolubles en agua y resistentes a la putrefaccin y desintegracin por

agentes qumicos (Benz, 1986; citado por Caballero et al., 2001) y tambin a
tratamientos fsicos como la congelacin, la desecacin o la liofilizacin (Jacoues,
1985; citado por Caballero et al., 2001), caractersticas que les confieren
persistencia en el ambiente. Sin embargo, los CIs son solubles en soluciones
alcalinas como las que se presentan en el tubo digestivo de algunos insectos
(Granados & Williams, 1986; citados por Caballero et al., 2001), lo cual facilita la
liberacin de los viriones en el intestino medio donde se inicia la infeccin
(Caballero et al., 2001).
2.4.2. Clasificacin.
Los Baculovirus son un grupo de virus patgenos de artrpodos que han sido
identificados en diferentes partes del mundo afectando alrededor de 600 especies,
la mayora del orden Lepidoptera, pero tambin se pueden encontrar en los
Ordenes Diptera, Hymenoptera, y en los crustceos del orden Decapoda. La
familia Baculoviridae es subdividida en dos gneros: Nucleopolyhedrovirus
(NPV) y Granulovirus (GV) (Herniou et al., 2003). Ambos gneros se diferencian
por la morfologa de sus CIs y tambin en aspectos citopatolgicos (Caballero et
al., 2001).
Los granulovirus (GV) han sido aislados de ms de 100 especies, todas ellas
pertenecientes al orden Lepidoptera (Volkman et al., 1995; citado por Caballero et
al., 2001). El tamao de los CIs de los granulovirus es de 0.16-0.3m de ancho
por 0.3-0.5 m de largo. En campo oscuro se observan como pequeos puntos
brillantes, los cuales tienen un rpido movimiento browniano, mientras que en
contraste de fases aparecen como pequeos puntos grises. Se han estudiado
particularmente algunos GVs entre los cuales se destacan los granulovirus de
Cydia pomonella (Lepidoptera: Torticidae), Heliothis armigera (Lepidoptera:
Noctuidae), Scotogramma trifolii (Lepidoptera: Noctuidae) y Phthorimaea
operculella (Caballero et al., 2001).
2.4.3. Proceso de Infeccin.

El ciclo de infeccin comienza cuando los cuerpos de inclusin son ingeridos por
las larvas al alimentarse, contina con la dispersin de la enfermedad dentro del
insecto y finaliza tras la muerte del mismo, con la liberacin de nuevos cuerpos de
inclusin que contienen partculas infectivas (Caballero et al., 2001).
Durante este ciclo se producen dos fenotipos de viriones con idntico genotipo
(Blissard y Rohrmann, 1990; Blissard, 1996; citados por Caballero et al., 2001).
Los primeros son los viriones derivados de los cuerpos de inclusin (VDC) que
son los responsables de la transmisin horizontal de la enfermedad y por ende, los
causantes de la infeccin primaria en el insecto; estos cuerpos de inclusin
contienen en su matriz una protena mayoritaria, que para el caso de los
granulovirus es la granulina, esta protena es la encargada de permitir la
persistencia del virus en la naturaleza, protegindolo de factores ambientales
adversos. En este tipo de viriones la envoltura es generada durante el proceso de
morfognesis de los cuerpos de inclusin (Caballero et al., 2001). Los segundos
son los viriones brotados (VB) que son los encargados de diseminar la
enfermedad dentro del hemocele del insecto, provocando la infeccin secundaria
que dar como resultado final la generacin de nuevos cuerpos de inclusin y,
eventualmente, la muerte de los individuos afectados. Este tipo de viriones poseen
en su envoltura ciertas estructuras y protenas diferentes a las de los VDC, que
juegan una funcin especfica. La envoltura de los VB es adquirida cuando las
nucleocpsidas sintetizadas brotan a travs de la membrana citoplasmtica de la
clula infectada (Volkman et al., 1984; Blissard y Rohrmann, 1989, 1992; citados
por Caballero et al., 2001).
2.4.3.1. Infeccin Primaria.
La forma ms comn de inicio de la infeccin primaria es por ingestin de los
cuerpos de inclusin presentes como contaminantes en el alimento de las larvas
(Granados y Williams, 1986; citados por Caballero et al., 2001). Otras vas de
entrada e infeccin incluyen la transmisin transovrica o por contaminacin
superficial de los huevos al ovipositar hembras infectadas (Smith y Vlak, 1988;
Fuxa y Richter, 1991; Tanada y Kaya, 1993; Kukan, 1999; citados por Caballero
et al., 2001), el paso a travs de los espirculos (Kirkpatrick et al., 1994; citado
por Caballero et al., 2001) y el parasitismo (Caballero et al., 2001).
Ingeridos los cuerpos de inclusin, debido a la alta alcalinidad presente en los

jugos intestinales del insecto hospedero (pH 9,5-11), se produce la hidrlisis de la
granulina, facilitada por la accin de una proteasa alcalina (Granados y Williams,
1986; Horton y Burand, 1993; citados por Caballero et al., 2001). Una vez
liberados los viriones deben atravesar la membrana peritrfica del intestino,
ayudados por protenas denominadas factores encadenantes de virus (FsEV) que
se encuentran contenidas en los grnulos de los granulovirus; estas protenas
actan alterando la integridad de la membrana peritrfica (Caballero et al., 2001).
Posteriormente, los viriones se unen por fusin a la membrana citoplasmtica de

las microvellosidades de las clulas del intestino medio (Granados, 1978;
Granados y Lawler, 1981; Horton y Burand, 1993; Engerhard et al., 1994; citados
por Caballero et al., 2001). Una vez producida la fusin, las nucleocpsides
penetran en el citoplasma de las clulas y se dirigen al ncleo, donde se desnudan
y liberan el ADN a travs de los poros nucleares (Granados y Williams, 1986;
citados por Caballero et al., 2001). Comienza entonces la trascripcin de los genes
virales, se genera nueva progenie viral y se producen alteraciones en las funciones
fisiolgicas del insecto en beneficio de un mejor desarrollo de la enfermedad en el
hospedero (Caballero et al., 2001).
Se forman as nuevas nucleocpsides, las cuales pasan a travs de la membrana

nuclear adquiriendo una envoltura de dicha membrana; se alinean con la
membrana plasmtica en la base de la clula, emergen a travs de esta membrana
como viriones brotados (VB) que atraviesan la lmina basal circulando a travs de
la hemolinfa (Granados y Lawler, 1981; citados por Caballero et al., 2001).
En los GVs al producirse la ruptura de la membrana nuclear, normalmente se

observan las nucleocpsides entre los componentes ncleo-citoplasmticos
resultantes de la mezcla de ambos contenidos a las 36 horas post-infeccin. Una
vez producida la primera progenie comienza la dispersin del virus hacia las
clulas de los tejidos al ser infectados, producindose la infeccin secundaria
dentro del hemocele (Caballero et al., 2001).
2.4.3.2. Infeccin Secundara.

La diseminacin de la enfermedad dentro del hospedero es causada por la
progenie de virus brotantes que infectan clulas vecinas y diversos tejidos, por dos
vas principales de diseminacin: los hemocitos y las clulas traqueales. Una vez
producida la infeccin secundaria, desde cada sitio de infeccin inicial se produce
la dispersin de la enfermedad por paso de los viriones brotados de clula a clula
por endocitosis (Keddie et al., 1989; Monsma et al., 1996; Volkman y Goldsmith,
1984, 1985; citados por Caballero et al., 2001).
Avanzada la infeccin el insecto muere y en el caso de infecciones

poliorganotrpicas en donde se ve afectada la epidermis, se produce la lisis del
tegumento y la liberacin de masas de cuerpos de inclusin que darn origen a un
nuevo ciclo y proceso de infeccin (Caballero et al., 2001).
2.4.4. Sntomas de la Enfermedad.

El estudio de la biologa y patognesis viral es de importancia fundamental en la
determinacin de las interacciones virus-hospedero y en la estimacin de los
factores que condicionan los mecanismos de infeccin (Caballero et al., 2001).
Las infecciones por granulovirus en Lepidpteros, como es el caso de la infeccin
causada en T. solanivora y en P. operculella, son de tipo poliorganotrpicas en
donde los tejidos que se presentan ms afectados incluyen el cuerpo graso y la
matriz traqueal (Caballero et al., 2001).
Las larvas infectadas por baculovirus exhiben un conjunto de sntomas

caractersticos que empiezan a manifestarse uno o varios das despus de haberse
iniciado la infeccin (Vasconcelos et al., 1996; citado por Caballero et al., 2001).
En general, se observa un cambio de coloracin, debido a la acumulacin de
cuerpos de inclusin en los tejidos afectados, que va desde amarillo a blanco
(Figura 6); adems los insectos exhiben una menor movilidad, mayor flacidez,
prdida de apetito y retraso en el desarrollo. Tambin se observa que las larvas de
lepidpteros infectadas (incluidas las larvas de T. solanivora y P. operculella)
tienden a alejarse de su fuente de alimentacin, emigrando hacia las partes
superiores de las plantas. Tras la muerte de las larvas los tejidos se desintegran, se
produce la ruptura del tegumento larval y la liberacin de masas de cuerpos de
inclusin (Caballero et al., 2001).
Figura 6. Larvas de Tecia solanivora infectadas con el Granulovirus de Phthorimaea

operculella (El autor, 2006).
La aparicin de los primeros signos de enfermedad y el tiempo letal dependen de

una serie de factores, tales como: virulencia del aislamiento, dosis ingerida, edad
larval, temperatura y estado nutricional (Caballero et al., 2001).
2.4.5. Transmisin.
La transmisin de los Baculovirus puede ser directa, cuando ocurre sin la
necesidad de agentes intermedios (vectores), siendo la adquisicin del patgeno
resultante de una interaccin hospedero-hospedero u hospedero-ambiente
(Andreadis, 1987; citado por Caballero et al., 2001).
Los componentes espaciales y temporales del proceso de transmisin pueden ser

agrupados en dos categoras: horizontal y vertical. La transmisin horizontal
consiste en la transmisin de la enfermedad entre individuos de la misma
generacin, principalmente a travs de consumo de follaje contaminado con CIs
originarios de un cadver infectado. En cambio, la transmisin vertical consiste en
el paso del virus de una generacin a otra y se usa este trmino para describir
especficamente la transmisin del patgeno de un adulto infectado directamente a
su progenie (Caballero et al., 2001).
3. FORMULACIN DEL PROBLEMA Y JUSTIFICACIN
3.1. Formulacin del Problema.

A nivel mundial se ha trabajado en el control biolgico de las polillas de la papa
Tecia solanivora y Phthorimaea operculella con un producto formulado a base de
un Baculovirus aislado de Phthorimaea operculella en el Per.
En el Laboratorio de Control Biolgico de la Corporacin Colombiana de

Investigacin Agropecuaria-Corpoica, durante los aos 2004 y 2005, se
colectaron e identificaron cinco aislamientos nativos de virus de la granulosis
afectando de forma natural larvas de T. solanivora. Estos aislamientos
posiblemente estn ms adaptados a las condiciones climticas de nuestro pas y a
su hospedero natural, por lo que podran ser ms eficientes que el virus peruano.
Por tal razn, surge la necesidad de seleccionar uno de estos aislamientos con
miras a formular bioplaguicidas para el control de las dos polillas de la papa en
condiciones de campo y almacenamiento. Sin embargo, para desarrollar dicha
actividad se requiere caracterizar la actividad biolgica de estos granulovirus y
establecer cual es el ms eficiente desde el punto de vista tecnolgico.
3.2. Justificacin de la Investigacin.

El cultivo de la papa en Colombia es uno de los ms importantes a nivel
productivo en el sector agrcola del pas, debido a diferentes factores como la gran
magnitud de reas sembradas, el volumen de produccin y los aspectos sociales
que incluye por ser el principal cultivo de la zona Andina, y la base para el
sustento de la poblacin campesina de la regin.
Las polillas de la papa T. solanivora y P. operculella, afectan el cultivo de la

papa, tanto durante el cultivo como en almacenamiento; llegando a ocasionar en
algunos casos prdidas en la calidad de la produccin hasta de un 100%.
Su biologa y hbitos dentro del cultivo de papa se ven favorecidos por la
variabilidad de los factores ambientales y el manejo que se le d al cultivo. Es as
que su diseminacin y supervivencia se favorecen por las malas prcticas de
cultivo y de almacenamiento que se realizan en el pas.
La inadecuada seleccin de tubrculos, la mala preparacin del suelo, la presencia

de malezas, los cultivos sin cosechar y los controles qumicos irracionales, entre
otros, son algunos de los factores que conllevan a una reinfestacin continua, que
asegura la presencia de la plaga durante todos los ciclos del cultivo.
Para el control de estas dos especies de polilla, los campesinos recurren al uso de
una gran variedad de productos de sntesis qumica, los cuales son aplicados
indiscriminadamente. Esta prctica adems de ser costosa, ayuda eventualmente a
que los insectos sean cada vez ms resistentes a estos productos, a que se eliminen
sus enemigos naturales y a que se genere una alta contaminacin ambiental por
los residuos qumicos de plaguicidas que quedan en el suelo, en el agua y en el
aire.
Es por eso que dentro de un programa de manejo integrado de plagas se

recomienda el uso de productos biolgicos y dentro de estos, de bioplaguicidas
formulados a partir de microorganismos que afectan de forma natural a los
insectos plaga, los cuales son ms especficos y menos contaminantes que los
productos de sntesis qumica.
Dentro del control biolgico de las polillas de la papa T. solanivora y

P. operculella se ha implementado el uso de un virus del tipo granulosis que
pertenece a la familia Baculoviridae. Este virus acta como un insecticida
estomacal, ya que se necesita de la ingestin de las partculas virales y
posteriormente genera una infeccin cuyos sntomas son un cambio de coloracin,
menor movilidad, flacidez, prdida de apetito y retraso en el desarrollo.
Corpoica cuenta con una planta de produccin de Baculovirus registrada ante el
ICA, que tiene una capacidad de produccin de 12 toneladas por mes.
Actualmente esta planta tiene registro de productor, de un producto a base del
aislamiento de granulovirus de P. operculella proveniente de Per. La elaboracin
de este producto se hace bajo un sistema de multiplicacin viral in vivo sobre
larvas de T. solanivora y este producto se utiliza para proteccin de semilla en
condiciones de almacenamiento.
Actualmente Corpoica tambin cuenta con cinco granulovirus nativos aislados de

T. solanivora con alto potencial para la formulacin de bioplaguicidas para el
control eficaz de T. solanivora y P. operculella. Sin embargo es necesario
seleccionar entre estos aislamientos, aquel que presente la mayor patogenicidad y
unas adecuadas caractersticas tecnolgicas, como la obtencin de altos
rendimientos en los sistemas de produccin viral y alta estabilidad frente a los
procesos de formulacin.
Por tales razones es necesario conocer cmo se desarrolla la infeccin con cada
aislamiento viral en las dos especies de polillas, seleccionar el virus ms virulento
y eficiente para la produccin masiva de partculas virales y determinar si el
proceso de formulacin del bioplaguicida afecta la actividad biocontroladora de
los mismos.
4. OBJETIVOS
4.1. Objetivo General.

Estudiar el desarrollo de los signos de la infeccin y el efecto de la formulacin de
diferentes aislamientos nativos de granulovirus sobre las polillas de la papa Tecia
solanivora y Phthorimaea operculella.
4.2. Objetivos Especficos.

Estudiar la sintomatologa de la infeccin causada por los aislamientos nativos de
granulovirus en las polillas de la papa T. solanivora y P. operculella.
Determinar el efecto de la formulacin sobre la actividad biocontroladora de los

granulovirus nativos en las dos especies de polillas de la papa T. solanivora y P.
operculella.
Comparar el rendimiento de produccin de partculas virales de los aislamientos

nativos de granulovirus en las polillas de la papa Tecia solanivora y Phthorimaea
operculella.
Seleccionar el aislamiento de granulovirus que presente las mejores caractersticas

biolgicas y tecnolgicas para el control de las polillas de la papa T. solanivora y
P. operculella.
5. MATERIALES Y MTODOS
5.1. Ubicacin.
Este trabajo se realiz en las instalaciones del Laboratorio de Control Biolgico
de la Corporacin Colombiana de Investigacin Agropecuaria-Corpoica, centro de
investigaciones Tibaitat (Mosquera-Cundinamarca).
5.2. Aislamientos virales.

En este estudio se utilizaron los aislamientos nativos de granulovirus VG003,
VG005 y VG001 obtenidos a partir de larvas de T. solanivora colectadas en los
departamentos de Cundinamarca, Norte de Santander y Nario, respectivamente;
y una cepa de granulovirus de P. operculella proveniente del Per.
Los aislamientos nativos fueron identificados por Villamizar et al., (2006)

mediante tcnicas de microscopa ptica y electrnica y tcnicas moleculares.
Estos se encuentran crioconservados en el Banco de Germoplasma de
Microorganismos con Inters en Control Biolgico de Corpoica a -70C.
5.3. Propagacin viral.

Para contar con el inculo viral necesario para todos los ensayos se realiz una
propagacin viral con cada uno de los aislamientos en estudio. Para tal fin se
inocularon posturas de T. solanivora provenientes de la cra del insecto ubicada en
el Laboratorio de Entomologa de Corpoica. Para cada uno de los aislamientos se
tom un disco de papel toalla de 10 cm de dimetro con posturas del insecto (400-
500 huevos/disco) de dos das de edad y se inocularon con 2 ml de suspensin
viral. Despus de inocular los huevos, se dejaron secar completamente a
temperatura ambiente en un lugar con buena aireacin; una vez secos se guard
cada disco de papel en una caja de Petri limpia y desinfectada, que contena un
algodn estril humedecido y se incub en el cuarto de bioensayos a una
temperatura promedio de 23C hasta la emergencia de las larvas
(aproximadamente 5 das).
En el interior de cubetas plsticas de 4 l con tapa, limpias y secas (una por

aislamiento), se ubic una servilleta absorbente estril y sobre esta se colocaron
aproximadamente 12 tubrculos de papa pastusa limpios y previamente
perforados superficialmente con una aguja estril para facilitar la entrada de las
larvas.
Una vez se observ la eclosin de los huevos y la emergencia de las larvas, se

distribuyeron uniformemente sobre los tubrculos con un pincel No. 0. Las
cubetas se taparon e incubaron en el cuarto de bioensayos a una temperatura
promedio de 23C por 20 das, momento en el cual se realiz un anlisis
destructivo de los tubrculos y se recuperaron todas las larvas presentes en ellos.
Las larvas se ubicaron en cajas de Petri estriles (una caja por aislamiento para
evitar la contaminacin cruzada de estos), las cuales se sellaron y se almacenaron
a -14C.
5.4. Purificacin viral.

Este procedimiento se llev a cabo de forma independiente para cada aislamiento
siguiendo la metodologa modificada a partir de la descrita por Gmez (2005).
Todas las larvas obtenidas de la propagacin viral de cada aislamiento se
maceraron con 10 ml de tampn Tris 0.1M y el macerado se filtr por un velo
suizo. El lquido obtenido se mezcl con 5 ml de SDS al 0.5% y se incub durante
30 minutos a 25C. Despus de la incubacin el lquido se centrifug en una
centrfuga SERIAL Biofuge con rotor de ngulo fijo a 100 g durante siete minutos
descartando el sedimento y recuperando el sobrenadante. Este se centrifug a
27000 g durante 30 minutos y se descart el sobrenadante. El sedimento se
resuspendi en 0.5 ml de tampn Tris al 0.1M y se ubic sobre un colchn de
glicerol de 40% y de 80% (7 ml de cada concentracin), para posteriormente ser
centrifugado a 8000 g durante 20 minutos. Terminada la centrifugacin se retir la
banda blanca formada entre las concentraciones de 40% y de 80%, y se
resuspendi en tampn Tris 0.1 M en una relacin 1:3 (Virus: Tampn). Dicha
mezcla se coloc en tubos eppendorf de 2 ml y se centrifug a 15000 g durante
nueve minutos. El sedimento se resuspendi en agua destilada y se centrifug a
18000 g durante diez minutos, recuperando el sedimento. El virus purificado se
resuspendi nuevamente en 0.5 ml de tampn Tris 0.1M y se centrifug a 18000 g
durante diez minutos eliminando el sobrenadante. El sedimento correspondiente al
virus purificado se almacen a -14C.
5.5.Determinacin del rendimiento de produccin de partculas virales de los

aislamientos nativos de Granulovirus en las polillas de la papa.
Se realiz una propagacin viral de cada aislamiento en las dos especies de polilla
de la papa (T. solanivora y P. operculella) como se describi previamente en el
numeral 5.3 y se evalu la produccin de partculas virales expresada como
cuerpos de inclusin (CI) por miligramo de tejido larval, siguiendo la metodologa
descrita por Gmez (2005).
Se seleccionaron 15 larvas de cada especie de polilla infectadas con cada

aislamiento viral, las cuales presentaban la sintomatologa tpica de la infeccin
caracterizada por una coloracin blanca-lechosa. Cada larva se pes en una
balanza analtica marca AND (electronic balance) de sensibilidad 0.001g y se
ubic en un tubo eppendorf. Cada larva se macer independientemente en 1 ml de
suero fisiolgico y cada muestra se filtr utilizando un filtro para jeringa con un
tamao de poro de 0.8 m. Posteriormente, el filtrado se adicion en un tubo de
ensayo con 9 ml de suero fisiolgico para un volumen final de 10 ml. A
continuacin, se colocaron 100 l de cada una de las diferentes suspensiones de
todos los aislamientos de granulovirus en un pozo de una microplaca de 96 pozos
por duplicado y se ley la absorbancia en un lector de Elisa (Asys Hitech. Expert
96) a 450 nm.
Los resultados de absorbancia se extrapolaron en la curva de calibracin

estandarizada por Gmez (2005), la cual relaciona la densidad ptica leda a
450 nm y la concentracin de cuerpos de inclusin. Con este resultado y el peso
de cada una de las larvas se determin la concentracin de cuerpos de inclusin
por miligramo de tejido en larvas de T. solanivora y P. operculella. El diseo
experimental fue completamente al azar con 15 repeticiones por tratamiento. Los
resultados de concentracin se transformaron calculando el logaritmo natural para
obtener una distribucin normal de los mismos. Estos se analizaron con el
programa SAS 9.1 mediante un anlisis de varianza y una prueba de comparacin
de medias de Tukey (= 0.05) para determinar el aislamiento ms productivo para
cada especie de polilla y mediante el programa Statistix 8.1.1.0 mediante un
anlisis de varianza y una prueba de comparacin de diferencias mnimas
significativas (DMS) (= 0.05) para determinar diferencias en la productividad de
partculas virales de cada aislamiento en las dos especies de polilla.
5.6. Estudio del desarrollo de los signos de la infeccin de los diferentes

aislamientos de Granulovirus en larvas de Tecia solanivora y Phthorimaea
operculella.
Para estudiar el desarrollo de la infeccin con los diferentes aislamientos de
granulovirus en las dos especies de polilla, fue necesario en primer lugar,
establecer el desarrollo normal de las larvas sanas de T. solanivora y
P. operculella bajo las condiciones experimentales del presente trabajo.
Cada unidad experimental correspondi a una cubeta plstica de 16 onzas con

tapa, en las cuales se coloc una capa de arena cernida estril en el fondo y sobre
ella un tubrculo de papa criolla (Solanum phureja) en el caso de P. operculella y
un tubrculo de papa parda pastusa (Solanum tuberosum. ssp andigena) para T.
solanivora, limpios y previamente perforados en su superficie con una aguja
estril. Sobre cada tubrculo segn la variedad del mismo se ubicaron 10 larvas
neonatas de P. operculella o 15 larvas neonatas de T. solanivora, obtenidas de las
cras mantenidas en el laboratorio. Las cubetas se taparon y se mantuvieron en el
cuarto de bioensayos a una temperatura promedio de 23C y una humedad
relativa del 65%.
Cada da de medicin se eligieron siete cubetas al azar de P. operculella y tres
cubetas al azar de T. solanivora y se realiz un muestreo destructivo de los
tubrculos en busca de todas las larvas presentes. Las larvas se ubicaron sobre una
lmina portaobjeto en vista dorsal y se midi el ancho de la cpsula ceflica con
un micrmetro adaptado en el ocular de un microscopio ptico con un aumento de
4 X.
El establecimiento de los estados de desarrollo se realiz basados en la ley de

Dyar, la cual considera que el crecimiento de las partes esclerotizadas (cpsula
ceflica) de nstares sucesivos sigue una progresin geomtrica regular (Dyar,
1935, citado por Gamboa y Notz, 1990). La nica variable medida fue el ancho de
la cpsula ceflica (ACC) de las larvas, empezando por el tiempo 0 (larvas recin
emergidas) y cada dos das para P. operculella y cada cuatro das para
T. solanivora durante 32 das. Para cada medicin se utilizaron siete unidades
experimentales de P. operculella para un total de 119 unidades y tres unidades
experimentales de T. solanivora para un total de 27.
Con los resultados obtenidos se realiz una distribucin de frecuencias con el fin
de determinar el momento de aparicin y la duracin de los diferentes nstares
larvales y de esta forma se estableci el rango de ancho de la cpsula ceflica
correspondiente a los nstares larvales de P. operculella y de T. solanivora.
5.6.1. Desarrollo de los signos de la infeccin de los diferentes aislamientos de

Granulovirus.
El desarrollo de los signos de la infeccin se evalu en larvas de T. solanivora y
P. operculella infectadas con los aislamientos nativos de granulovirus: el
aislamiento de Cundinamarca-VG003, Norte de Santander-VG005 y Nario-
VG001 y el granulovirus del Per. Las distribuciones de nstares obtenidas se
compararon con las establecidas en el numeral 5.6 correspondientes a larvas sanas
de T. solanivora y P. operculella.
El montaje de los ensayos se realiz de la misma forma para todos los
aislamientos de granulovirus en las dos especies de polilla, la nica diferencia fue
la variedad de tubrculo que se utiliz como sustrato. Para los ensayos con
T. solanivora se utilizaron tubrculos de papa variedad parda pastusa y para los
ensayos con P. operculella se utilizaron tubrculos de papa criolla considerando
las preferencias alimenticias de cada especie de insecto.
Un papel toalla con posturas de las polillas (400-500 posturas/papel) proveniente

de la cra se inocul con cada aislamiento viral. Se utiliz una jeringa con 3 ml de
suspensin viral ajustada a una concentracin de 5x106 CI/ml (CL 50 determinada
previamente para el granulovirus del Per), con la cual se aplic el virus mediante
goteo sobre los huevos. Despus de inoculados, los huevos se dejaron secar
completamente a temperatura ambiente en un lugar con buena aireacin; una vez
secos cada papeleta se ubic en una caja de Petri limpia y desinfectada, que
contena un algodn estril humedecido. Las cajas se sellaron y se incubaron en el
cuarto de bioensayos a una temperatura promedio de 23C esperando la
emergencia de las larvas (aproximadamente 5 das).
En el interior de cubetas plsticas de 16 onzas (unidad experimental) se coloc

una capa de arena cernida estril y sobre ella un tubrculo de papa limpio y
previamente perforado en su superficie con una aguja estril. Sobre cada tubrculo
se colocaron 15 larvas recin emergidas obtenidas a partir de las posturas
inoculadas. Las cubetas se taparon y se incubaron en el cuarto de bioensayos a
una temperatura promedio de 23C. Se montaron 51 unidades experimentales por
tratamiento en el caso de P. operculella y 27 unidades experimentales por
tratamiento para el caso de T. solanivora.
A partir del montaje del ensayo y cada cuatro das para T. solanivora y cada dos
das para P. operculella, se tomaron aleatoriamente tres unidades experimentales
durante 32 das y se realiz un muestreo destructivo en bsqueda de todas las
larvas presentes en los tubrculos. Las larvas obtenidas se colocaron sobre una
lmina portaobjeto en posicin dorsal y se midi el ancho de la cpsula ceflica
con un micrmetro adaptado en el ocular de un microscopio ptico con un
aumento de 4 X. Con los resultados se realiz una distribucin de frecuencias para
cada aislamiento viral y se compar con la determinada previamente para las
larvas sanas. En cada da de medicin tambin se determin el nmero de larvas
muertas y se calcul el porcentaje de mortalidad para cada tratamiento. Los
resultados de mortalidad para cada da de evaluacin, obtenidos con los diferentes
aislamientos virales y para cada una de las polillas de la papa, se analizaron con el
programa SAS 9.1 mediante un anlisis de varianza y una prueba de comparacin
de medias de Tukey (=0.05).
5.7. Evaluacin de la eficacia de los diferentes aislamientos de Granulovirus

formulados y sin formular en larvas de Tecia solanivora y Phthorimaea
operculella.
Para este bioensayo se utilizaron los aislamientos de granulovirus formulados a
una concentracin de 1x106 CI/g. Las formulaciones se desarrollaron siguiendo la
metodologa utilizada para la produccin del bioplaguicida a base de la cepa del
Per en la planta semicomercial de Corpoica. Los aislamientos sin formular
consistieron en suspensiones virales ajustadas a una concentracin de 1x106 CI/ml
y se cont con un testigo en el cual no se hizo ninguna aplicacin viral.
Tres tubrculos de papa variedad parda pastusa para T. solanivora y tres de papa
criolla para P. operculella, limpios y previamente perforados con una aguja estril
se pesaron y se ubicaron en una bolsa plstica limpia para los tratamientos
correspondientes a los productos formulados. En cada bolsa se adicion la
cantidad de virus formulado requerida segn la dosis recomendada para el
bioplaguicida (5g bioplaguicida / Kg papa). Las bolsas se cerraron y se agitaron
hasta que los tubrculos quedaron cubiertos con el producto. Para los tratamientos
con los virus sin formular se utilizaron de igual forma tres tubrculos de papa
variedad parda pastusa para T. solanivora y tres de papa criolla para
P. operculella, en las mismas condiciones mencionadas anteriormente. Cada
tubrculo se inocul con una brocha limpia de pulgada aplicando la suspensin
viral dos veces en toda la superficie y dejando secar. Se inocularon tres tubrculos
de cada variedad con cada aislamiento viral en estudio.
En el interior de cubetas plsticas de 16 onzas (tres por cada tratamiento) se

coloc una capa de arena cernida estril en el fondo y sobre ella un tubrculo de
papa previamente tratado. Para el tratamiento testigo (larvas sanas) se utilizaron
tubrculos previamente perforados en su superficie con una aguja estril sin
aplicacin viral. Sobre cada tubrculo se colocaron 15 larvas recin emergidas y
las cubetas se taparon e incubaron en el cuarto de bioensayos a una temperatura
promedio de 23C durante 20 das.
Pasados 20 das se realiz un muestreo destructivo de los tubrculos en busca de

todas las larvas presentes en los mismos. Se cont el nmero de larvas muertas o
desaparecidas, de larvas sanas, de larvas vivas con sntomas y el nmero de pupas.
Los resultados de mortalidad de cada tratamiento, se corrigieron determinando el
porcentaje de eficacia mediante la frmula de Schneider-Orelli (Zar, 1999):
% Eficacia = b - K x 100
100 K
En donde b es el porcentaje de mortalidad en el tratamiento y K es el porcentaje

de mortalidad del testigo. El diseo experimental fue completamente al azar con
tres repeticiones por tratamiento. El porcentaje de eficacia de los productos
formulados y sin formular para cada aislamiento en cada una de las especies de
polillas, se analiz por el programa Statistix 8.1.1.0 mediante un anlisis de
varianza y una prueba de comparacin de diferencias mnimas significativas
(DMS) (= 0.05).
5.8. Seleccin del aislamiento de granulovirus ms promisorio.

Con el fin de seleccionar el mejor aislamiento de granulovirus para ser utilizado
como principio activo de un bioplaguicida para el control de las polillas de la papa
T. solanivora y P. operculella, segn sus caractersticas tecnolgicas y biolgicas,
se analizaron los valores obtenidos en cuanto a la eficacia y la productividad de
cada uno de ellos. Con estos valores se obtuvieron los coeficientes de seleccin de
cada aislamiento viral (CSAV) en cada especie de polilla mediante ponderacin
de las variables seleccionadas; adems se realiz una consulta con cuatro expertos
en el tema y se definieron los coeficientes de importancia de cada factor (CIF).
Con el coeficiente de seleccin de cada aislamiento viral y con el coeficiente de
importancia se construy una matriz de decisin para la seleccin del mejor
aislamiento con base en el ndice de seleccin final (ISF = CIF x CSAV)
(Mndez, 2005).
6. RESULTADOS Y DISCUSIN
6.1. Propagacin y purificacin viral.

Inicialmente se realiz una propagacin viral con cada uno de los aislamientos
para contar con el inculo viral necesario para la realizacin de los diferentes
bioensayos.
Se observaron sntomas tpicos de infeccin por granulovirus en la mayora de

larvas recuperadas de la propagacin de los diferentes aislamientos, caracterizadas
por una coloracin blanca lechosa, la desintegracin de tejidos y el retraso en el
crecimiento. Todas las larvas encontradas se almacenaron a -14 C y despus de
20 das de almacenamiento, se maceraron y purificaron segn la metodologa
descrita anteriormente.
Al macerar las larvas inicialmente se obtuvieron suspensiones turbias en las que

se observaron restos de tejidos larvales e impurezas que daban una coloracin
oscura a la muestra (Figura 7).
Figura 7. Macerado de larvas de T. solanivora infectadas con el Granulovirus de

P. operculella (La autora, 2006).
Despus de las centrifugaciones diferenciales y de correr todas las muestras en el

colchn de glicerol, se evidenci la formacin de una banda blanca entre las
concentraciones de 40% y 80%, correspondientes a los cuerpos de inclusin
purificados de cada aislamiento de granulovirus (Figura 8).
Figura 8. Banda de granulovirus purificados suspendida en un colchn de glicerol
(La autora, 2006).
Procedimientos similares de purificacin viral han sido utilizados en diferentes

trabajos con granulovirus, como los realizados por Sporleder et al. (2005a) y
Taha et al. (2000) quienes realizaron la purificacin de granulovirus de
P. operculella y de Spodoptera littoralis (Lepidoptera: Noctuidae) utilizando
centrifugaciones diferenciales y gradientes de sacarosa. En estos trabajos tambin
se evidenci una banda blanca, la cual fue recuperada y se confirm que
corresponda a partculas virales mediante microscopa electrnica que permiti
ver cuerpos de inclusin de granulovirus.
La recuperacin de la banda blanca correspondiente a los cuerpos de inclusin

purificados se realiz por medio de una pipeta Pasteur tomando nicamente la
suspensin o banda que se encontraba entre las dos capas de glicerol, evitando
extraer las impurezas que se encontraban en el resto del tubo. Este mtodo de
purificacin viral, permiti obtener de forma fcil y rpida las partculas virales
purificadas para la realizacin de los diferentes bioensayos.
6.2.Determinacin del rendimiento de produccin de partculas virales de los

aislamientos nativos de Granulovirus en las polillas de la papa.
Para el desarrollo de un bioplaguicida a base de granulovirus, desde el punto de
vista tecnolgico, es necesario contar con un aislamiento que adems de virulento,
sea capaz de producir altos rendimientos de partculas virales. Por esta razn, en el
presente trabajo se evalu la produccin de partculas virales expresada como
cuerpos de inclusin (CI) por miligramo de tejido larval con todos los
aislamientos de granulovirus, con miras a determinar cul de ellas produce una
mayor progenie viral. Adems, se realiz la evaluacin en las dos especies de
polilla de la papa con miras a seleccionar aquella en que se obtiene la mayor
produccin viral.
Las 15 larvas seleccionadas a partir de la propagacin viral de cada aislamiento en

las dos especies de polilla mostraron claros signos de la infeccin por
granulovirus, correspondiente a una coloracin blanca lechosa y un retraso notorio
en el crecimiento (Figura 9).
Figura 9. Larvas de T. solanivora infectadas con el aislamiento VG003 de granulovirus

(La autora, 2006).
Los datos de absorbancia ledos a 450 nm (Anexo 1) en todos los casos fueron
mayores a 0.04. Los rendimientos de produccin de partculas virales para cada
uno de los aislamientos estuvieron en un rango de 109 a 1010 cuerpos de inclusin
por miligramo de tejido larval tanto para P. operculella como para T. solanivora
(Anexo 2).
Para P. operculella se encontr que la produccin de cuerpos de inclusin por

miligramo de tejido larval fue significativamente mayor (P<.0001) con el
aislamiento VG005 (2.93x1010 CI/mg) en comparacin con los dems
aislamientos, mientras que los aislamientos VG001 (1.36x1010 CI/mg), Per
(1.36x1010 CI/mg) y VG003 (1.33x1010 CI/mg) no presentaron diferencias
significativas entre s (Figura 10).
100000000000 A
B B B
10000000000
1000000000
Rendimiento (CI/mg) 100000000

10000000
1000000
100000
10000
1000
100
10
VG001 VG003 VG005 Per

P. operculella. Tratamientos con la misma letra no presentan diferencias significativas
segn prueba de Tukey (=0.05).
Teniendo en cuenta que el granulovirus VG005 se aisl a partir de larvas de

T. solanivora, las diferencias de productividad encontradas podran sugerir que
este aislamiento est menos adaptado a P. operculella y que por lo tanto, produce
una mayor progenie viral, para garantizar su mantenimiento y supervivencia en
este hospedero. Segn Moscardi (1999) la virulencia de diferentes aislamientos
dentro de un nuevo hospedero est determinada por variaciones genticas y
depende del grado de adaptacin que los aislamientos tengan al hospedero y de la
cantidad de pases secuenciales que el virus haya tenido en dicha especie.
Otra posible razn para las diferencias en productividad encontradas entre los
aislamientos de granulovirus en larvas de P. operculella, puede ser la cantidad de
inculo inicial consumido por cada larva, debido a que es imposible asegurar que
todos los individuos consuman la misma cantidad de partculas virales en el
momento de la inoculacin. Ballard et al. (2000) encontraron que la cantidad de
cuerpos de inclusin que ingiere una larva de primer nstar condiciona el nivel de
infeccin y depende del tiempo de exposicin y de la concentracin viral
suministrada.
En T. solanivora se encontr que la produccin de cuerpos de inclusin por
miligramo de tejido larval fue mayor con el aislamiento de Per (1.19x1010
CI/mg), resultado que no fue significativamente diferente a los obtenidos con los
aislamientos VG005 (1.03x1010 CI/mg) y VG001 (9.67x109 CI/mg), pero si fue
estadsticamente superior (P=0.0202) al rendimiento obtenido con el aislamiento
VG003 (7.46x109 CI/mg) (Figura 11).
100000000000
AB AB A
10000000000 B
1000000000
Rendimiento (CI/mg)
100000000
10000000
1000000
100000
10000
1000
100
10
VG001 VG003 VG005 Per

T. solanivora. Tratamientos con la misma letra no presentan diferencias significativas
segn prueba de Tukey (=0.05).
El granulovirus proveniente de Per fue aislado a partir de larvas de

P. operculella; sin embargo, produjo el mayor rendimiento en larvas de
T. solanivora en comparacin con los resultados obtenidos con los aislamientos
virales cuyo hospedero original era este mismo insecto. Este resultado podra estar
relacionado con diversos mecanismos que los virus utilizan para poder mantenerse
y reproducirse dentro de un nuevo hospedero (Dennehy et al., 2006). Sin
embargo, no se encontraron diferencias significativas entre este aislamiento
peruano y los aislamientos VG001 y VG005, lo que sugiere un avanzado proceso
de adaptacin del virus del Per al hospedero alternativo, debido posiblemente a
la constante propagacin que se ha realizado de este, en larvas de T. solanivora
(ms de 20 pases). Moscardi (1999) sugiri que los pases secuenciales de un
aislamiento en una nueva especie, pueden incrementar la virulencia y la
susceptibilidad del hospedero, ya que permiten la seleccin de aislamientos ms
activos pasando de poblaciones heterogneas a poblaciones ms homogneas y
patgenas de la especie no hospedera.
En cuanto a los procesos de adaptacin de los virus en una nueva especie, segn
Dennehy et al. (2006) existen varios factores que determinan la aparicin de una
enfermedad viral en un nuevo hospedero, como la ecologa, la evolucin, la
biologa de la poblacin viral, sus hospederos, y las comunidades en las que estos
organismos habitan. Los virus tienen la capacidad de mutar rpidamente y
adaptarse a una nueva especie hospedera. Cuando esto ocurre la capacidad
reproductiva e infectiva del virus en el nuevo hospedero puede ser menor que en
el hospedero natal, debido a la menor adaptacin en la nueva especie. Por tal
razn, el virus en su proceso de adaptacin debe asegurarse de producir la
progenie necesaria para poder mantenerse all y consecuentemente causar una
infeccin que asegure su supervivencia en el ecosistema. Herniou et al. (2004) y
Parnell et al. (2002) mencionan tambin que la presin de seleccin ejercida por
los nuevos hospederos en los baculovirus, promueve su adaptacin y su
especializacin progresiva, por lo que se pueden observar variaciones en el
proceso de infeccin de diferentes aislamientos virales sobre un mismo
hospedero.
Los resultados de la prueba estadstica para comparar la produccin de partculas

virales se presentan en el Anexo 4 (Diferencia mnima significativa DMS
(=0.05)). La prueba estadstica determin que para los aislamientos VG003,
VG001 y VG005, se obtuvo una produccin de CI por miligramo de tejido
significativamente mayor en larvas de P. operculella que en larvas de T.
solanivora, con resultados de 1.33x1010 CI/mg (P=0.0002), 1.37x1010 CI/mg
(P=0.0130) y 2.94x1010 CI/mg (P=0.0002) respectivamente. Para el caso del
aislamiento del Per la produccin de partculas virales no present diferencias
significativas en las dos especies de polillas estudiadas.
Los resultados mostraron que la produccin de cuerpos de inclusin de los
granulovirus nativos es mayor en larvas de P. operculella que en larvas de
T. solanivora, a pesar de que los tres virus se aislaron originalmente de
T. solanivora. Este resultado confirma lo sugerido previamente en cuanto a que
los virus requieren producir una mayor progenie para poder sobrevivir y adaptarse
adecuadamente a un nuevo hospedero (Dennehy et al., 2006).
Los resultados podran sugerir que tras pases sucesivos de los granulovirus
nativos en larvas de P. operculella, la productividad viral podra disminuir por el
proceso de coevolucin y adaptacin de los virus en este hospedero, ya que al
estar mejor adaptados segn lo planteado por Dennehy et al. (2006) el virus no
producira una gran cantidad de progenie viral; sin embargo, estos procesos deben
demostrarse con estudios filogenticos y moleculares.
Tambin se pudieron presentar diferencias en cuanto a la cantidad de inculo viral

consumido por cada especie de polilla. Dichas diferencias pueden ser debidas a
los hbitos de cada insecto, considerando que en el presente trabajo se observ
que cuando las larvas tanto de T. solanivora como de P. operculella emergen de
los huevos, consumen una pequea parte del corin para formar el orificio de
salida, superficie que fue contaminada con el virus. Sin embargo, no es posible
asegurar una concentracin viral homognea en todos los puntos de la superficie
de los huevos inoculados. Adems, algunas larvas posteriormente a la emergencia
se desplazan en busca de alimento, probando los diferentes sustratos que
encuentran a su paso, lo que incluye restos de huevos, escamas y la servilleta de
oviposicin, los cuales posiblemente estaran contaminados con partculas virales,
teniendo en cuenta el mtodo de inoculacin utilizado. De esta manera, algunas
larvas podran consumir un mayor inculo viral debido a las diferentes fuentes y
momentos de infeccin (obs. pers).
Con el mtodo de aplicacin del virus utilizado en este bioensayo, no se puede

asegurar una concentracin homognea de partculas virales en la superficie del
huevo, por lo que la cantidad de inculo consumido por cada larva puede ser
variable. Ballard et al. (2000) sugieren que para asegurar la homogeneidad en la
aplicacin de partculas virales en una superficie y por ende el nivel de infeccin,
es necesario contar con tcnicas de aplicacin mucho ms precisas como el uso de
nebulizadores que distribuyan de manera homognea la suspensin viral y por lo
tanto se asegure el consumo relativamente constante de partculas infectivas por
parte del hospedero; adems la respuesta que se presente puede relacionarse
tambin con el tiempo de exposicin y con la concentracin viral que se utilice.
El estado de desarrollo y el comportamiento del hospedero, tambin podra

determinar la replicacin viral. OReilly et al. (1998) encontraron que la
produccin de progenie viral est determinada por la habilidad que tenga el virus
para bloquear el desarrollo del hospedero. Adicionalmente, Zeddam et al. (1999)
encontraron que la produccin de cuerpos de inclusin depende del contacto del
patgeno y su hospedero, el cual se ve limitado por un corto perodo de tiempo
desde la eclosin de la larva hasta su ingreso al tubrculo.
Otra posible razn para las diferencias en productividad viral entre las dos
especies de polilla, es el efecto del sustrato alimenticio utilizado, debido a que
para T. solanivora se utiliz papa parda pastusa y para P. operculella se emple
papa criolla, especies vegetales que varan en su contenido nutricional. Ali et al.
(2002) encontr que la produccin de cuerpos de inclusin y la infectividad de los
baculovirus se ve influenciada por el sustrato que consuman los insectos
hospederos durante la infeccin, siendo mayor la produccin cuando las larvas
consumen tejidos vegetativos y no cuando consumen tejidos reproductivos. Por
ejemplo la papa criolla contiene un 25% ms de protena y una mayor cantidad de
precursores de vitamina A, en comparacin con las otras variedades de papa,
incluyendo la papa parda pastusa (Redepapa, 2001).
Otro factor que podra influir en la productividad de un granulovirus, es la

temperatura bajo la cual se desarrolle todo el proceso de infeccin. Shao-Hua et
al. (1998) encontraron que un factor determinante en la replicacin de los
baculovirus es la oscilacin de la temperatura, debido a que cualquier clula
infectada del insecto, sobrevive ms tiempo en temperaturas que oscilan desde
puntos bajos a ms altos y esto da ms tiempo para que haya una mayor
produccin viral. Adems, cuando se desarrolla una infeccin lenta como
resultado de la oscilacin de la temperatura, algunas clulas viables del insecto
dejan de dividirse ocasionando una infeccin secundaria y un incremento en la
produccin del virus (Shao-Hua et al., 1998). Sin embargo, en el presente estudio
no se tuvo en cuenta la oscilacin de la temperatura, ya que las condiciones
ambientales que se manejaron durante los ensayos incluan una temperatura
aproximada de 23 C, pero que pudo variar ligeramente dependiendo de la hora
del da.
Para seleccionar el aislamiento ms productivo de granulovirus tanto en larvas de

P. operculella como de T. solanivora, es importante tener en cuenta la capacidad
replicativa de los virus en estos hospederos, su historia evolutiva, su adaptacin y
la facilidad, costos y eficiencia de las cras de los dos insectos. A partir de los
resultados obtenidos se podra sugerir la utilizacin de larvas de P. operculella
para la produccin masiva de los granulovirus estudiados, pues se obtuvieron los
mayores rendimientos de partculas virales; sin embargo, estos rendimientos
podran disminuir tras pases consecutivos de los virus en este hospedero debido a
los procesos de adaptacin mencionados anteriormente. Teniendo en cuenta este
fenmeno se recomienda mantener un inculo viral original crioconservado
abundante y adecuadamente alicuotado, de manera que despus de algunos pases
en el insecto se vuelva a la cepa original no adaptada al hospedero.
6.3. Estudio del desarrollo de los signos de la infeccin de los diferentes

aislamientos de Granulovirus en larvas de Tecia solanivora y Phthorimaea
operculella.
Para la realizacin de este trabajo fue necesario conocer el desarrollo normal de
las larvas de T. solanivora y P. operculella bajo las condiciones de laboratorio
anteriormente mencionadas, en donde la temperatura promedio fue de 23C y la
humedad relativa del 65%.
6.3.1. Estados de desarrollo de Tecia solanivora y Phthorimaea operculella.

El crecimiento de las larvas de T. solanivora y P. operculella cumpli con la ley
de Dyar, debido a que el crecimiento de las partes esclerotizadas como la cpsula
ceflica de nstares sucesivos sigui una progresin geomtrica regular (Dyar,
1935, citado por Gamboa y Notz 1990). Con el anlisis de distribucin de
frecuencias del ancho de la cpsula ceflica (intervalo de 0.1 para T. solanivora y
0.04 para P. operculella) (Anexo 5), se establecieron cuatro grupos definidos y sin
traslapamiento que sugieren la formacin de cuatro nstares larvales tanto para T.
solanivora como para P. operculella, lo que se evidencia con la formacin de
cuatro picos en las Figuras 12 y 13.
60
50
I
Frecuencia (%)
40 II III IV
30
20
10
0
0.18-0.28
0.29-0.38
0.39-0.48
0.49-0.58
0.59-0.68
0.69-0.78
0.79-0.88
0.89-0.98
0.99-1.08
1.09-1.18
1.19-1.28
Intervalos ACC (mm)
Figura 12. Distribucin de frecuencias del ancho de la cpsula ceflica de larvas sanas de
T. solanivora bajo condiciones de laboratorio (T 23C y HR 65%).
Este comportamiento de T. solanivora fue registrado tambin por Villamizar et al.
(2006), quienes determinaron que bajo condiciones de laboratorio, el desarrollo de
las larvas cumpli con la ley de Dyar, encontrando por medio de un anlisis de
distribucin de frecuencias del ancho de la cpsula ceflica (ACC), cuatro grupos
de poblacin predominante que sugieren la presencia de igual nmero de nstares
larvales en esta especie de polilla. Con estos resultados se estableci la escala del
ACC para cada uno de los nstares. Este nmero de nstares larvales en
T. solanivora tambin han sido reportados en otros estudios como el realizado por
Nio y Notz, (2000a), el cual estableci cuatro grupos de poblacin larval
claramente definidos y sin traslapamiento entre ellos.
100
90 I
80
Frecuencia (%)
70 IV
60
50 II III
40
30
20
10
0
0.26-0.3
0.3-0.34
0.46-0.5
0.5-0.54
0.66-0.7
0.7-0.74
0.86-0.9
0.9-0.94
0.18-0.22
0.22-0.26
0.34-0.38
0.38-0.42
0.42-0.46
0.54-0.58
0.58-0.62
0.62-0.66
0.74-0.78
0.78-0.82
0.82-0.86
0.94-0.98
0.98-1.02
Intervalos ACC (mm)
Figura 13. Distribucin de frecuencias del ancho de la cpsula ceflica de larvas sanas de
P. operculella bajo condiciones de laboratorio (T 23C y HR 65%).
Para el caso de P. operculella se obtuvo el mismo comportamiento, observndose

tambin cuatro grupos de poblacin predominante, que sugiere la presencia de
cuatro nstares larvales. Este mismo comportamiento fue reportado por Llanderal
(1993) y Gamboa; y Notz (1990), quienes determinaron por medicin del ancho
de la cpsula ceflica, que la palomilla de la papa P. operculella presenta cuatro
nstares larvales y adems, cumple con la ley de Dyar. Estos autores encontraron
al realizar la distribucin de frecuencias, que no se presentaba superposicin de
los valores que separaban los lmites de cada nstar, por lo que sugirieron que hay
un una progresin geomtrica regular en el crecimiento de la cpsula ceflica de
las larvas de dicha polilla.
Los resultados obtenidos permitieron establecer la escala del ancho de la cpsula

ceflica para cada uno de los nstares de las dos polillas de la papa bajo las
condiciones experimentales del presente estudio (Tablas 4 y 5).
T. solanivora.
Instar ACC Mn. (mm) ACC Mx. (mm)
I 0,18 0,38
II 0,39 0,68
III 0,69 0,88
IV 0,89 1,28
En T. solanivora, Villamizar et al. (2006) establecieron que a 23C y humedad

relativa del 65% (condiciones iguales a las utilizadas en el presente trabajo), el
rango de ACC para larvas de primer nstar va de de 0.2 a 0.4 mm, para larvas de
segundo nstar de 0.4 a 0.6 mm, para larvas de tercer nstar de 0.6 a 1 mm y para
larvas de cuarto nstar de 1 a 1.4 mm. Se encontraron algunas diferencias en la
escala reportada por Villamizar et al. (2006) con respecto a la escala determinada
en el presente estudio, lo que podra atribuirse a los diferentes das de medicin
utilizados en cada bioensayo (cuatro y dos das, respectivamente) y a los criterios
utilizados para la elaboracin de la distribucin de frecuencias. Sin embargo,
dichas diferencias son mnimas (7.3%) y se podra considerar que las dos escalas
son prcticamente iguales.
P. operculella.
Instar ACC Mn. (mm) ACC Mx. (mm)
I 0,18 0,26
II 0,27 0,42
III 0,43 0,66
IV 0,67 1,02
Para P. operculella, Llanderal (1993) determin que el ACC para larvas de primer
nstar oscila entre 0.17 y 0.24, para larvas de segundo nstar entre 0.27 y 0.43,
para larvas de tercer nstar entre 0.49 y 0.65 y para larvas de cuarto nstar entre
0.83 y 1, trabajo en el cual el ancho de la cpsula ceflica de las larvas fue medido
cada tres das. En este caso tampoco se observaron grandes diferencias en el rango
de ACC reportado con respecto al establecido en el presente estudio (Tabla 5).
Las diferencias encontradas en el rango de ACC reportado en diferentes
bioensayos puede atribuirse a los diferentes intervalos de medicin utilizados, a
cambios ambientales, a condiciones nutricionales variables debido a diferencias
en el sustrato alimenticio, al cambio en la proporcin de sexos y a variaciones en
el estado fisiolgico de las larvas (Llanderal, 1993).
Una vez determinados los nstares larvales para cada especie se procedi a
establecer su comportamiento en el tiempo, es decir, los das en que cada nstar
era detectado y el posible traslapamiento de los mismos (Figuras 14 y 15).
En el caso de T. solanivora se encontraron larvas hasta el da 24. Las larvas de

primer nstar se observaron desde el da cero hasta el da cuatro con poblaciones
del 100% el primer da de medicin (da cero) y del 6.6% a los cuatro das. Para el
da cuatro de evaluacin se presentaron tanto larvas del primer nstar, en muy baja
proporcin, como larvas de segundo nstar de desarrollo con un 93.3% de la
poblacin, es decir que a los cuatro das, la mayora de los individuos se
encontraban en segundo nstar, quedando una pequea poblacin prxima a la
muda. El segundo nstar se encontr desde el da cuatro hasta el da 12 con una
poblacin final del 3%. Cabe destacar, que para el da ocho, el nmero de
individuos en segundo nstar era del 18.4% y ya la mayora de la poblacin
(81.6%) se encontraba en tercer nstar. El tercer nstar fue detectado desde el da
ocho con un 81.6% de la poblacin hasta el da 12 con un 11.4% de la poblacin;
ntese que para el da 12 se present tanto el segundo, como el tercer y cuarto
estado larval. El cuarto nstar apareci desde el da 12 con una poblacin de
85.7%, observndose conjuntamente con el estado de pupa hasta el da 24. Para el
da 28 el 100% de la poblacin se encontraba en estado de pupa (Figura 14).
Para las larvas sanas de T. solanivora se observ en varios nstares, una pequea
poblacin que present un desarrollo ms lento, especialmente en el segundo
nstar para el da 12 y en cuarto nstar para los das 20 y 24. Esta poblacin que se
caracteriza por su menor crecimiento, se podra presentar debido a las condiciones
de muestreo establecidas, ya que para cada da de medicin se utilizaban
individuos completamente diferentes debido a que los muestreos fueron
destructivos. Cada uno de estos individuos podra presentar diferencias genticas,
ya que todas las larvas utilizadas provenan de una cra masiva mantenida en el
laboratorio y sus progenitores no eran los mismos. Tambin podra haber algunas
diferencias nutricionales relacionadas con el consumo variable de alimento para
cada individuo. Este comportamiento fue observado tambin por Heeley et al.
(2003) quienes encontraron que en el ciclo de vida de la polilla Rhyacionia
buoliana (Lepidoptera: Tortricidae) se presentan algunas variaciones en la
distribucin de frecuencias de los estados larvales, estas diferencias se atribuyen
a las variaciones nutricionales y fisiolgicas de los insectos y la proporcin de
sexos de las poblaciones de insectos muestreadas, considerando que los machos
presentan menores tamaos del ancho de la cpsula ceflica en comparacin con
las hembras.
En el caso de P. operculella se encontraron larvas hasta el da 16 de evaluacin.

El primer nstar se observ del da cero al da cuatro con poblaciones del 100% y
del 6.4%, respectivamente. El segundo nstar se present nicamente en el da
cuatro de evaluacin con una poblacin del 93.7%. Ntese que en este da se
presentaba an una pequea poblacin de individuos de primer nstar (6.4%). El
tercer nstar fue detectado desde el da seis con un 100% de la poblacin hasta el
da 14 (1.7%). Se observ que el da seis todos los individuos se encontraban en
tercer nstar y para el da ocho el 88.5% ya se encontraba en el siguiente estado
larval. El cuarto nstar apareci desde el da ocho con una poblacin del 88.5% y
se observ conjuntamente con el estado tres hasta el da 14, ya para el da 16 no
se encontraron larvas de tercer nstar, pero s se presentaron larvas de cuarto nstar
y pupas. Para el da 18 de evaluacin se encontr que el 100% de la poblacin
corresponda a pupas (Figura 15).
100
90
80
Frecuencia (%)
70
60 Instar 1
50 Instar 2
40 Instar 3
30
Instar 4
20
10 Pupas
0 Da 0
Da 4
Da 8
Da 12
Da 16
Da 20
Da 24
Da 28
Figura 14. Comportamiento de los nstares larvales de T. solanivora con respecto al
tiempo bajo condiciones de laboratorio (T 23C y HR 65%).
100
90
80
Frecuancia (%)
70
60 Instar 1
50 Instar 2
40 Instar 3
30 Instar 4
20 Pupas
10
0
Da 0
Da 2
Da 4
Da 6
Da 8
Da 10
Da 12
Da 14
Da 16
Da 18
Figura 15. Comportamiento de los nstares larvales de P. operculella con respecto al

tiempo bajo condiciones de laboratorio (T 23C y HR 65%).
Igual que para las larvas sanas de T. solanivora en P. operculella se encontr una
pequea poblacin de larvas con un menor crecimiento, principalmente durante el
tercer nstar de desarrollo, el cual se observ hasta el da 14. Este comportamiento
puede deberse, como se mencion anteriormente, a las diferencias genticas,
fisiolgicas y nutricionales que se puedan presentar entre los diferentes individuos
analizados. Por otro lado, Llanderal (1993) encontr que en la definicin de
nstares larvales de P. operculella por medicin de la cpsula ceflica, el tercer
nstar present un carcter bimodal, es decir no se present un grupo de
observacin bien definido sino varios grupos con diferentes frecuencias,
comportamiento similar al observado en el presente estudio para el nstar en
mencin. La proporcin de sexos en P. operculella normalmente es 1:1 lo que
podra indicar que ambos sexos estn igualmente representados en la poblacin;
sin embargo, algunos autores mencionan que cuando existen diferencias entre
sexos, se obtienen distribuciones bimodales en cuanto al ancho de la cpsula
ceflica (Llanderal, 1993)
Estos resultados permitieron conocer los estados de desarrollo de las larvas sanas
de T. solanivora y P.operculella bajo condiciones controladas de temperatura
(23C) y humedad relativa (65%), con miras a comparar este comportamiento con
el de larvas enfermas por infeccin con diferentes aislamientos de granulovirus.
6.3.2. Desarrollo de los signos de la infeccin causada por diferentes

aislamientos de Granulovirus en larvas de T. solanivora.
En cuanto al comportamiento de los estados de desarrollo larval del insecto
infectado con los diferentes aislamientos de granulovirus se observ en todos los
casos una mayor duracin de los diferentes nstares, lo que gener un traslape de
los mismos. Para el da ocho se determin la presencia de larvas de primer,
segundo y tercer nstar cuando estas estaban infectadas con cualquiera de los virus
de la granulosis evaluados, en comparacin con las larvas sanas las cuales al da
ocho ya se encontraban la mayor proporcin en segundo o tercer nstar. Esto
indicara que el primer nstar tuvo una mayor duracin por efecto de la infeccin
viral, comportamiento que ha sido reportado por otros autores como Villamizar et
al. (2006) (Figuras 14 y 16 a 19).
Para el segundo nstar tambin se observ una mayor duracin con respecto al
comportamiento obtenido con las larvas sanas. Las larvas infectadas de segundo
nstar se encontraron desde el da cuatro hasta el da 28 para los aislamientos
VG003 y Per y desde el da ocho hasta el da 32 para los aislamientos VG001 y
VG005, en comparacin con el testigo en el que las larvas sanas de segundo nstar
se encontraron nicamente hasta el da 12. Debido a la mayor duracin de este
estado de desarrollo, en los das 16, 20, 24 y 28 y an en el da 32 para el
aislamiento VG005, se presenta traslape de los nstares segundo, tercero y cuarto
(Figuras 14 y 16 a 19).
En cuanto al tercer nstar, nuevamente se observ una mayor duracin en las

larvas infectadas que en las larvas sanas. Este nstar se encontr para las larvas
infectadas desde el da ocho hasta el da 32 para todos los aislamientos virales en
estudio. Para el caso de las larvas sanas, se encontraron larvas de tercer nstar
solamente desde el da ocho hasta el da 12 (Figuras 14 y 16 a 19).
Las larvas de cuarto nstar se detectaron por primera vez en el mismo da tanto
para las larvas sanas como para las larvas infectadas con granulovirus (da 12).
Sin embargo, la duracin y el porcentaje de la poblacin en este nstar se vieron
afectadas, llegndose a encontrar larvas en cuarto nstar desde el da 12 hasta el
da 32 para todos los aislamientos virales, mientras que para las larvas sanas, al
da 28 el 100% haba pupado. Para las larvas sanas, el cuarto nstar se encontr
nicamente desde el da 12 hasta el da 24 (Figuras 14 y 16 a 19).
100
90
80
Frecuencia (%)
70
60 Instar 1
50 Instar 2
40 Instar 3
30 Instar 4
20 Pupas
10
0
Da 0
Da 4
Da 8
Da 12
Da 16
Da 20
Da 24
Da 28
Da 32
Figura 16. Comportamiento de los nstares larvales de T. solanivora infectada con el

aislamiento de granulovirus VG003.
100
90
80
Frecuencia (%)
70
60 Instar 1
50 Instar 2
40 Instar 3
30 Instar 4
20 Pupas
10
0
Da 0
Da 4
Da 8
Da 12
Da 16
Da 20
Da 24
Da 28
Da 32
100
90
80
70
Frecuencia (%)
60 Instar 1
50 Instar 2
40 Instar 3
30 Instar 4
Pupas
20
10
0
Da 0
Da 4
Da 8
Da 12
Da 16
Da 20
Da 24
Da 28
Da 32

100
90
80
Frecuecia (%)
70
60
50 Instar 1
40 Instar 2
30 Instar 3
20 Instar 4
10 Pupas
0
Da 0
Da 4
Da 8
Da 12
Da 16
Da 20
Da 24
Da 28
Da 32

aislamiento de granulovirus del Per.
Este comportamiento indica que los granulovirus tienen un efecto sobre el
desarrollo larval evidenciado por un retraso en el desarrollo, lo que genera una
mayor duracin de los diferentes nstares larvales. Este efecto fue reportado por
Villamizar et al. (2006), quienes encontraron que el desarrollo de larvas de
T. solanivora infectadas con estos mismos aislamientos de granulovirus,
presentaron un aumento en la duracin de los nstares larvales, inclusive sin que
los insectos pudieran llegar al estado de pupa.
En un trabajo similar, Nio y Notz (2000a) no observaron una separacin clara

entre cada nstar en larvas de T. solanivora infectadas por un granulovirus nativo
ya que no se presentaron grupos discontinuos. Adems, observaron una alteracin
en el desarrollo (inhibicin o retraso) de estas larvas, lo que se vio reflejado en el
incremento en la duracin de la fase larval, de la misma forma que se evidenci en
el presente estudio.
El retraso en el desarrollo de las larvas infectadas con los diferentes aislamientos

de granulovirus puede deberse al efecto negativo que tiene el virus en los hbitos
alimenticios y en la expresin hormonal de las larvas durante el cambio sucesivo
de nstares. Segn Moscardi (1999), una caracterstica de la infeccin ocasionada
por baculovirus es el retraso del desarrollo y la reduccin de la capacidad
alimenticia de las larvas. Estas caractersticas se deben a la expresin de genes
que codifican para las protenas extraas del genoma de los baculovirus, genes
dentro de los cuales se destacan los que codifican para toxinas insecto especficas,
para hormonas como la esterasa juvenil y para enzimas como la UDP-
glucosiltransferasa (Moscardi, 1999). Como lo reportaron Subramanian et al.
(2005), quienes concluyeron que el proceso de infeccin viral tiene una influencia
negativa en la expresin de los genes del hospedero y en la produccin de
protenas. En otro trabajo Burand y Park (1992) y Nakai et al. (2004) concluyeron
que en el desarrollo de las larvas infectadas no ocurren los procesos de apolisis y
hay un bloqueo de la pupacin, debido a la presencia del antgeno de
proliferacin celular, el cual detiene el crecimiento de las larvas y ayuda a la
replicacin viral. Adems, a la presencia del gen que codifica para la ecdisteroide
UDP-glucosiltransferasa, la cual interrumpe el desarrollo normal del hospedero
por inactivacin de la hormona encargada de la muda de las larvas (ecdisteroide).
Como otra variable tambin se determin el porcentaje de individuos muertos con

los diferentes aislamientos virales en cada da de evaluacin, resultados que
fueron analizados mediante un anlisis de varianza y una prueba de comparacin
de medias de Tukey (=0.05) (SAS 9.1) (Anexo 6).
En la figura 20 se observa que para el da cuatro, el aislamiento que produjo

mayor mortalidad fue el granulovirus de Per con un 48.89%, no encontrndose
diferencias estadsticas con respecto a las mortalidades obtenidas con los
aislamientos VG001, VG005 y el tratamiento testigo; pero si present un
porcentaje de mortalidad estadsticamente superior (P=0.0718) con respecto al
aislamiento VG003 (13.33%). Para los das ocho, 12 y 32 se observ que el
aislamiento que produjo una mayor mortalidad fue el VG001 con 42.22%,
42.22% y 62.22% respectivamente, pero no se encontraron diferencias
estadsticamente significativas con respecto a las mortalidades obtenidas con los
aislamientos VG003, VG005, Per y el tratamiento testigo. Igualmente para los
das 16, 20 y 24 el aislamiento que produjo una mayor mortalidad fue el
granulovirus VG003 con 31.11%, 42.22% y 39.99% respectivamente, pero no
present diferencias significativas con respecto a los aislamientos VG001,
VG005, Per y el tratamiento testigo. Para el da 28 se observ que el aislamiento
que produjo una mayor mortalidad fue el VG003 con 48.88%, no encontrndose
diferencias estadsticas con respecto a las mortalidades obtenidas con los
aislamientos VG005, Per y el tratamiento testigo; pero si present un porcentaje
de mortalidad estadsticamente superior (P= 0.6041) con respecto al aislamiento
VG001 el cual present una mortalidad del 20%.
En trminos generales, no se encontraron diferencias marcadas en los porcentajes

de mortalidad ocasionados por los diferentes aislamientos virales en todos los das
de evaluacin, lo que sugiere que no hay diferencias en la virulencia de todos los
virus estudiados. Tampoco se encontraron diferencias entre las mortalidades
causadas por los granulovirus y la obtenida con el tratamiento testigo (larvas
sanas), lo que sugiere que a la dosis evaluada (5x106 CI/mL) los virus utilizados
no causan una mortalidad significativa de las larvas y viablemente su efecto se
limita a interferir el desarrollo de las mismas, posiblemente debido a que se us
una concentracin subletal de los virus en el montaje del bioensayo, ya que la
eficacia de un baculovirus depende de la dosis y adems de la evolucin de este en
el hospedero (Moscardi, 1999).
70
A
60 A
A A A A
50
Mortalidad (%)
A A A A
40 AB A
AB A
AB A AB AB
30 A A A A A
A A A A AB
A A B
20 B A A A A
A A
A
10
0
Da 4 Da 8 Da 12 Da 16 Da 20 Da 24 Da 28 Da 32
Control Per VG001 VG003 VG005
Figura 20. Mortalidad de larvas de T. solanivora infectadas con los diferentes

aislamientos de granulovirus. Tratamientos con la misma letra no presentan diferencias
significativas segn prueba de Tukey (=0.05).
En cuanto a los signos del desarrollo de la infeccin que se manifestaron en las

larvas de T. solanivora infectadas con granulovirus se observ que en general para
todos los tratamientos, estos no se evidenciaron en los primeros das de desarrollo,
presentando las larvas una coloracin parda translcida. Sin embargo, a partir del
octavo da se detect la aparicin de aglomeraciones de estructuras blanquecinas
observadas a travs del abdomen de las larvas, principalmente en la parte
posterior. Estas fueron aumentando a medida que transcurri el tiempo de
infeccin, hasta que las larvas adquirieron un color blanco lechoso en todo su
cuerpo (Figuras 21 a 25).
La ausencia de signos notorios de infeccin viral en los primeros das de
desarrollo de las larvas, quizs se deba a que en estos primeros das las partculas
virales estn comenzando su proceso de replicacin en las clulas del intestino
medio de los insectos (infeccin primaria) y an no se han diseminado por el resto
del cuerpo de la larva. Segn Caballero et al. (2001), el proceso de infeccin por
baculovirus ocurre durante dos etapas, la infeccin primaria en donde las
partculas virales entran a la larva y en las clulas del intestino medio se genera
una nueva progenie viral que es la encargada de la infeccin secundaria, es decir,
de la dispersin de la enfermedad por el resto de las clulas para una posterior
acumulacin de masas de cuerpos de inclusin que se evidencian por la coloracin
blanca lechosa que adquieren las larvas.
Para los ltimos das de medicin (das 28 y 32) se encontr que las larvas
infectadas con el granulovirus VG005 y Per adquirieron una tonalidad rosada en
la parte dorsal del cuerpo, pero sin perder el color blanco-lechoso adquirido por la
infeccin de granulovirus. Segn Nio (2004) y Villamizar et al. (2006), esta
pigmentacin rosada que aparece en la parte dorsal de las larvas en los ltimos
das de desarrollo, denotara el inicio del cambio del estado de larva al estado de
pupa, el cual se presentara normalmente para larvas sanas. Esta coloracin
tambin ha siso reportada para el caso del Gusano Rosado de la India
Pectinophora gossypiella. (Lepidoptera: Gelechiidae) en donde se ha observado
que la coloracin rosada de las larvas aparece despus de la ltima ecdisis o muda
(Portal agrario, 2006).
Adems se encontr una diferencia en el tamao de las larvas y en el ancho de la

capsula ceflica. En general se observ que las larvas infectadas que alcanzaron
los mayores tamaos correspondieron a las infectadas con los aislamientos
VG003, VG005 y Per, a diferencia de las larvas encontradas en el tratamiento
con el granulovirus VG001, que presentaron un notorio retraso en el crecimiento.
Figura 21. Larvas de T. solanivora sin infeccin viral (sanas).
Figura 22. Desarrollo de la infeccin del aislamiento VG003 en larvas de T. solanivora.

Figura 25. Desarrollo de la infeccin del aislamiento del Per en larvas de T. solanivora.
Resultados similares fueron reportados por Villamizar et al. (2006), quienes

encontraron que los signos del desarrollo de la infeccin ocasionados por
diferentes aislamientos de granulovirus (incluyendo los utilizados en este trabajo)
en larvas de T. solanivora, correspondan a la presencia de parches o
agregaciones de grnulos blancos en los ltimos segmentos abdominales a partir
del da 12 de infeccin, los cuales se fueron generalizando en todo el cuerpo de la
larva a medida que se desarroll la enfermedad. Ellos tambin observaron que
haba una diferencia evidente de tamaos larvales, longitud, ancho de cpsula
ceflica y peso de los individuos.
De igual forma, Nio y Notz (2000a) encontraron que las larvas de T. solanivora
infectadas con un virus de la granulosis presentaron los signos externos tpicos de
la infeccin viral a partir del segundo nstar, estos signos se caracterizaron por la
presencia de manchas de color blanco lechoso que se observaron a travs del
integumento, las cuales con el tiempo cubrieron todo el cuerpo.
6.3.3. Desarrollo de los signos de la infeccin causada por diferentes

aislamientos de Granulovirus en larvas de P. operculella.
Cuando se evalu el efecto de los granulovirus sobre larvas de P. operculella se
observ en todos los casos una mayor duracin de los diferentes nstares, lo que
gener un traslape de los mismos. En el desarrollo del primer nstar se observ
una mayor duracin con respecto al testigo, ya que sin incluir el aislamiento de
Per, con los dems aislamientos virales se encontraron larvas en este estado
desde el da 0 y hasta el da 10 y para la cepa del Per hasta el da 8, a diferencia
del testigo en donde slo se encontraron desde el da cero hasta el da cuatro. Para
el da ocho se determin la presencia de larvas de primer, segundo y tercer nstar
en todos los tratamientos con los granulovirus evaluados. Este comportamiento
igual al observado en larvas de T. solanivora indica que el primer nstar tuvo una
mayor duracin por efecto de la infeccin viral (Figuras 15 y 26 a 29).
Para el segundo nstar tambin se observ una mayor duracin en comparacin al

comportamiento obtenido con las larvas sanas. Las larvas infectadas de segundo
nstar se encontraron desde el da cuatro hasta el da 14 para el aislamiento
VG001, hasta el da 20 para el aislamiento de Per, hasta el da 24 para el
aislamiento VG005 y hasta el da 26 para el aislamiento VG003. Mientras que en
el testigo las larvas sanas de este estado se encontraron nicamente en el da
cuatro (Figuras 15 y 26 a 29).
Debido a la mayor duracin de este estado de desarrollo en los das 12, 14, 16 y
18 se present traslape de los nstares segundo, tercero y cuarto para el
aislamiento VG005. En los das 16, 18, 20, 22 y 26, se present traslape de los
nstares segundo, tercero, cuarto y del estado de pupa para el aislamiento VG003.
Sin embargo para el aislamiento VG001 se present traslape del segundo, tercer y
cuarto nstar nicamente para los das 12 y 14 (Figuras 15 y 26 a 29).
100
90
80
70
Frecuencia (%)
60
Instar 1
50 Instar 2
Instar 3
40
Instar 4
30 Pupas
20
10
0
Da 0
Da 2
Da 4
Da 6
Da 8
Da 10
Da 12
Da 14
Da 16
Da 18
Da 20
Da 22
Da 24
Da 26
Da 28
Figura 26. Comportamiento de los nstares larvales de P. operculella infectada con el

100
90
80
70
Frecuencia (%)
60 Instar 1
50 Instar 2
Instar 3
40
Instar 4
30 Pupas
20
10
0
Da 0
Da 2
Da 4
Da 6
Da 8
Da 10
Da 12
Da 14
Da 16
Da 18
Da 20
Da 22
Da 24
Da 26
Da 28
100
90
80
70
Frecuencia (%)
60 Instar 1
50 Instar 2
Instar 3
40
Instar 4
30
Pupas
20
10
0
Da 0
Da 2
Da 4
Da 6
Da 8
Da 10
Da 12
Da 14
Da 16
Da 18
Da 20
Da 22
Da 24

100
90
80
70
Frecuencia (%)
60 Instar 1
50 Instar 2
40 Instar 3
30 Instar 4
Pupas
20
10
0
Da 0
Da 2
Da 4
Da 6
Da 8
Da 10
Da 12
Da 14
Da 16
Da 18
Da 20
Da 22
Da 24
Da 26
Da 28

aislamiento de granulovirus del Per.
Con todos los aislamientos se observ mayor duracin con respecto al tiempo en
el desarrollo del segundo nstar en comparacin con el testigo; sin embargo, se
presentaron algunas variaciones en el tipo de respuesta segn el aislamiento viral
evaluado. Segn Herniou et al. (2004) estas variaciones obedecen al proceso de
adaptacin de los diferentes baculovirus a sus hospederos y al grado de
especializacin que tengan, ya que de este depende la capacidad reproductiva,
infectiva y la virulencia del patgeno. Por lo tanto, hay que tener en cuenta que
los aislamientos virales VG001, VG003 y VG005 se aislaron inicialmente de
larvas de T. solanivora presentes en el campo y que pueden presentar variaciones
en el proceso de infeccin primaria que ocasionan en larvas de P. operculella
segn su grado de adaptacin.
En cuanto al tercer nstar tambin se observ una mayor duracin con respecto al
tiempo en las larvas infectadas que en las larvas sanas. Este nstar se encontr para
las larvas infectadas desde el da ocho hasta el da 24 para el aislamiento VG005 y
hasta el da 28 para los aislamientos VG001, VG003 y Per. Para el caso de las
larvas sanas, se encontr presencia de tercer nstar nicamente desde el da seis
hasta el da 14 (Figuras 15 y 26 a 29).
El mismo comportamiento se observ en el cuarto nstar, en donde las larvas

infectadas se encontraron desde el da 10 hasta el da 28 para los aislamientos
VG003 y Per, desde el da 10 hasta el da 24 para el aislamiento VG005 y desde
el da 12 hasta el da 28 para el aislamiento VG001; en comparacin con las larvas
sanas de este estado, las cuales slo se encontraron desde el da 8 hasta el da 16
y para el da 18 ya se encontraban en estado de pupa (Figuras 15 y 26 a 29).
En general, este comportamiento indic que los granulovirus tienen un efecto

negativo en el desarrollo larval de P. operculella, lo que se evidencia en la mayor
duracin de todos sus nstares de desarrollo. Este comportamiento ha sido
reportado tambin por Alczar et al. (1992) y Reed (1971) citado por Alczar et
al. (1992), quienes observaron la mayor duracin de los nstares de desarrollo en
las larvas infectadas con baculovirus y la no formacin de pupas. El retraso en el
desarrollo de las larvas infectadas puede deberse a el efecto negativo que tiene el
virus en los hbitos alimenticios y en la expresin hormonal de las larvas como se
mencion anteriormente (Burand y Park, 1992; Moscardi, 1999; Nakai et al.,
2004 y Subramanian et al., 2005).
En cada da de evaluacin tambin se determin el porcentaje de individuos

muertos, como otra variable para estudiar el efecto de los diferentes aislamientos
virales, resultados que se sometieron a un anlisis de varianza y una prueba de
comparacin de medias de Tukey (=0.05) independientemente para cada da
(SAS 9.1) (Anexo 7).
En la figura 30 se observa que para los das 2, 6, 8, 10, 12, 18, 22 y 24 no se

encontraron diferencias estadsticas con respecto a las mortalidades obtenidas con
todos los tratamientos. Para los das 4, 14 y 16 se observ que el aislamiento que
produjo una mayor mortalidad fue el VG005 con 35.55%, 42.21% y 46.66%
respectivamente, no encontrndose diferencias estadsticas con las mortalidades
obtenidas con los aislamientos VG003, Per y el tratamiento testigo; pero s
present porcentajes de mortalidad estadsticamente superiores (P=0.034) con
respecto al aislamiento VG001 (8.88% y 11.11% para lo das 4 y 14,
respectivamente). Para el da 20 se observ que el aislamiento que produjo la
mayor mortalidad fue el VG001 con un 44.4%, no encontrndose diferencias
estadsticas con las mortalidades obtenidas con los aislamientos VG005 y Per.
Sin embargo, este resultado fue significativamente superior (P=0.0057) con
respecto a la mortalidad obtenida con el aislamiento VG003 (15.55%) y con el
tratamiento testigo (19.99%). Para el da 26 se observ que el aislamiento que
produjo la mayor mortalidad fue el VG005 con un 100%, resultado que fue
estadsticamente superior (P<0.0001) a los obtenidos con los aislamientos VG001,
VG003 y Per, los que a su vez presentaron diferencias estadsticas entre s. Para
el da 28 se observ nuevamente que el aislamiento que produjo la mayor
actividad biocontroladora fue el VG005 con un 100% de mortalidad, resultado
que no fue estadsticamente diferente de los obtenidos con los aislamientos
VG001 y Per; pero s fue estadsticamente superior (P=0.0326) a la mortalidad
causada por el aislamiento VG003 (51.11%).
En trminos generales se observ que en los primeros das de medicin (2 al 12)
no se presentaron diferencias marcadas en los porcentajes de mortalidad
ocasionados por los diferentes aislamientos virales, lo que sugiere que no hay
diferencias en el proceso de infeccin primaria entre los diferentes aislamientos.
Para estos das tampoco se encontraron diferencias entre las mortalidades
causadas por los aislamientos virales con respecto a la mortalidad del tratamiento
testigo (larvas sanas), lo que como se mencion anteriormente, sugiere que a la
dosis evaluada (5x106 CI/mL) los virus utilizados no causan porcentajes de
mortalidad significativos de las larvas y posiblemente su efecto es slo sobre el
desarrollo de los insectos. Sin embargo, a partir del da 14 se observ una
tendencia numrica a mayores porcentajes de mortalidad con los aislamientos
VG005 y VG001, los cuales produjeron los mayores porcentajes de mortalidad, lo
que sugiere posiblemente una mayor virulencia de estos aislamientos en P.
operculella. Segn Caballero et al. (2001), el desarrollo de la infeccin y el ciclo
de replicacin del virus dentro de la clula dependen del aislamiento viral y del
gnero al que pertenece. Adems, la forma de diseminacin de la enfermedad
dentro del hospedero puede variar dependiendo del aislamiento de granulovirus
utilizado. La infeccin causada por baculovirus tambin depende de la
patogenicidad, de la virulencia, del proceso de invasin, replicacin, desarrollo y
diseminacin que ocurra dentro del insecto segn el hospedero y el aislamiento
viral utilizado (Caballero et al., 2001).
En cuanto a los signos del desarrollo de la infeccin que se manifestaron en las

larvas de P. operculella infectadas con granulovirus, para todos los tratamientos,
estos no se evidenciaron en los primeros das de desarrollo, debido a que las
larvas presentaban una coloracin parda translcida. Sin embargo, a partir del da
diez se observ la aparicin de estructuras blanquecinas en la parte posterior del
abdomen de las larvas, estas estructuras se fueron diseminando a medida que
transcurri el tiempo pos infeccin, hasta que la larva adquiri un color blanco
lechoso en todo su cuerpo (Figuras 31 a 35). Estos signos tambin han sido
reportados por Alczar et al. (1992) quienes observaron un cambio de coloracin
en las larvas de P. operculella infectadas con un granulovirus, el cual se present
nicamente a partir del segundo nstar (da seis de desarrollo). Como se mencion
anteriormente la ausencia de signos notorios de infeccin viral en los primeros
das de desarrollo lo que se debe posiblemente a que el proceso de infeccin
primaria que se desarrolla en el insecto en los primeros das de infeccin, el cual
se limita al epitelio intestinal y no ocasiona un cambio notorio en la coloracin de
las larvas (Caballero et al., 2001).
La coloracin rosada en el dorso de las larvas, que se present en las larvas de

T. solanivora infectadas con algunos aislamientos virales, slo se observ en las
larvas de P. operculella infectadas con el aislamiento del Per, a partir del da 16
y con el aislamiento VG005, en una forma ms tenue. Esta coloracin es una
tonalidad normal de las larvas de P. operculella y se presenta en los ltimos
estados de desarrollo (Alczar et al., 1992). La ausencia de la coloracin rosada
en algunas larvas, podra deberse al efecto de la infeccin viral sobre el desarrollo
de las mismas, dependiendo de la patogenicidad y virulencia de los aislamientos
(Alczar et al., 1992; Caballero et al., 2001).
Figura 31. Larvas de P. operculella sin infeccin viral (larvas sanas).
Figura 32. Desarrollo de la infeccin del aislamiento VG003 en larvas de P. operculella.

Figura 35. Desarrollo de la infeccin del aislamiento del Per en larvas de P. operculella.
Resultados similares fueron reportados por Alczar et al. (1992) quienes

encontraron que el sntoma tpico de una larva de P. operculella infectada con un
granulovirus, es el cambio de coloracin de un verde violceo translcido, que es
el color de una larva normal, a un blanco-cremoso de aspecto lechoso. Adems,
observaron que algunas larvas infectadas dejan de alimentarse, no crecen, se
vuelven lentas en sus movimientos y no reaccionan rpidamente mientras que
otras siguen su desarrollo normal. Las larvas infectadas tambin se hinchan
ligeramente, mueren y luego el integumento se vuelve muy frgil y flexible,
rompindose fcilmente y permitiendo la salida de las partculas virales.
En conclusin, la infeccin por granulovirus en larvas de T. solanivora y

P. operculella ocasiona algunos efectos notorios en el desarrollo de las larvas,
como la mayor duracin de los nstares larvales, lo que ocasiona un
traslapamiento de los mismos. Tambin produce signos caractersticos como la
presencia de estructuras blanquecinas puntuales que luego se esparcen por todo el
cuerpo de las larvas, dando al individuo un color blanco generalizado.
6.4. Evaluacin de la eficacia de los diferentes aislamientos de Granulovirus

formulados y sin formular en larvas de Tecia solanivora y Phthorimaea
operculella.
En este ensayo se compar la actividad biocontroladora de los aislamientos de
baculovirus anteriormente mencionados formulados y sin formular, en cada una
de las polillas de la papa.
Para T. solanivora se encontr que los tratamientos que produjeron un mayor

porcentaje de eficacia fueron los aislamientos VG003 formulado (81.8%) y sin
formular (69.6%), el VG005 formulado (75.7%) y sin formular (72.7%) y el
aislamiento del Per sin formular (75.7%), los cuales no presentaron diferencias
estadsticas (DMS =0.05, Anexo 8) con respecto a la eficacia obtenida para los
aislamientos de Per formulado y VG001 sin formular; pero s presentaron un
porcentaje de eficacia estadsticamente superior (P=0.1658) con respecto al
aislamiento VG001 formulado (36.37%) (Figura 36).
Estos resultados sugieren que el proceso de formulacin no potencializ ni

disminuy la eficacia de los granulovirus evaluados. Resultados similares fueron
reportados por Nio y Notz (2000b), quienes no encontraron diferencias en la
mortalidad de las larvas de T. solanivora ocasionada por un granulovirus aplicado
como suspensin acuosa de partculas virales y el mismo granulovirus formulado.
Cossentine y Jensen (2004) tampoco encontraron un incremento significativo de
la eficacia de un granulovirus de Cydia pomonella (Lepidoptera: Olethreutidae) al
incorporar algunos aceites en su formulacin. Por lo contrario, Ballard et al.
(2000) encontraron una mayor actividad biolgica con un granulovirus de C.
pomonella cuando se adicionaron algunos aditivos de formulacin. El proceso de
formulacin adems de darle forma al producto, en la mayora de los casos
contribuye a incrementar la mortalidad de las larvas, debido a que los materiales
inertes que se utilizan en su elaboracin producen un taponamiento de los
espirculos de las larvas ocasionando la muerte de estas por asfixia y
deshidratacin (Nio y Notz, 2000b).
90 A
80 A A A A
70 AB AB
Eficacia (%)
60
50
B Sin formular
40
Formulado
30
20
10
0
Per VG005 VG003 VG001
Figura 36. Eficacia de aislamientos de granulovirus formulados y sin formular en larvas

de T. solanivora. Tratamientos con la misma letra no presentan diferencias significativas
segn prueba de DMS (=0.05).
La baja mortalidad obtenida con al aislamiento VG001 formulado podra deberse

a una distribucin no homognea del virus en la superficie de la papa, lo que pudo
generar un menor consumo del virus por parte de las larvas. Si la aplicacin del
virus no es homognea se pueden presentar puntos en el sustrato sin partculas
virales o muy baja concentracin, existiendo la posibilidad de que las larvas
ingresen al tubrculo por estos espacios (Ballard et al., 2000) sin ingerir las dosis
letales del agente infeccioso (Moscardi, 1999).
La mortalidad obtenida con el tratamiento testigo (26.6%) fue alta, posiblemente

debido a la utilizacin de larvas neonatas para el montaje. Segn Sporleder et al.
(2005a) los bioensayos que se realizan utilizando larvas de primer nstar pueden
presentar un porcentaje alto de mortalidad natural en el testigo por la alta
susceptibilidad de las larvas en ese estado de desarrollo.
En general no se encontraron diferencias en la virulencia de todos los

aislamientos evaluados. La virulencia es una caracterstica biolgica adaptable
que puede estar asociada a diferencias bioqumicas o genticas de los aislamientos
y que le da ventajas a un entomopatgeno para poder ser utilizado como agente de
control; sin embargo, esta caracterstica puede ser modificada al infectarse
continuamente hospederos alternativos (Caballero et al., 2001; Castro et al., 1999,
citado por Caballero et al., 2001; Villamizar et al., 2006).
En el caso de P. operculella, la prueba de comparacin de medias de DMS

(=0.05) (Anexo 8) detect que los tratamientos VG001 formulado (94.7%) y sin
formular (100%), VG003 formulado y sin formular (97.3%), Per formulado
(94.7%) y sin formular (96.7%) y VG005 sin formular (97.4%) no presentaron
diferencias estadsticas entre s, pero si produjeron una mortalidad
significativamente superior (P= 0.1120) con respecto al aislamiento VG005
formulado (84.2%) (Figura 37).
A A A A A A A
100
90 B
80
70
Eficacia (%)
60
50 Sin formular
40 Formulado
30
20
10
0
Per VG005 VG003 VG001
Figura 37. Eficacia de aislamientos de granulovirus formulados y sin formular en larvas

de P. operculella. Tratamientos con la misma letra no presentan diferencias significativas
segn prueba de DMS (=0.05).
Estos resultados sugieren que para los aislamientos VG001, VG003 y Per el
proceso de formulacin no afect la eficacia de los granulovirus al igual que se ha
reportado en otros trabajos (Nio y Notz, 2000b; y Cossentine y Jensen 2004).
En general se observ que los mayores porcentajes de mortalidad ocasionada por

los diferentes aislamientos de granulovirus se encontraron en larvas de
P. operculella, lo que podra deberse al proceso de adaptacin de los virus nativos
a este nuevo hospedero, debido a que el virus produce una mayor progenie para
poder sobrevivir, lo que lleva a mayores cantidades de partculas infectivas
capaces de ocasionar una mayor mortalidad de los insectos (Dennehy et al.,
2006).
6.5. Seleccin del aislamiento de granulovirus ms promisorio.

Con miras a seleccionar el aislamiento ms promisorio para el desarrollo de un
bioplaguicida para el control de T. solanivora y P. operculella, los valores
obtenidos para las dos variables ms importantes correspondientes a la actividad
biocontroladora expresada como eficacia y a la productividad fueron analizados
mediante una matriz de decisin (Tabla 6).
Tabla 6. Criterios de seleccin de los diferentes aislamientos de granulovirus en

T. solanivora y P. operculella.
CRITERIOS DE SELECCIN
POLILLA AISLAMIENTO Productividad
Eficacia (%)
(CI/mg)
Per 66.66 1.19x1010
VG001 36.37 9.67x109
T. solanivora
VG003 81.78 7.46x109
VG005 75.74 1.04x1010
Per 94.74 1.36x1010
VG001 94.74 1.38x1010
P. operculella
VG003 97.37 1.33x1010
VG005 84.21 2.94x1010
Con el fin de determinar la importancia de cada criterio de seleccin, se

calcularon los coeficientes de importancia para cada uno de los factores (CIF), los
cuales indican la importancia relativa que tiene cada una de las variables
evaluadas segn el criterio de los expertos1 consultados (Tabla 7) (Anexo 9).
Tabla 7. Coeficientes de importancia de cada factor.

COEFICIENTE DE IMPORTANCIA
CRITERIO DE SELECCIN
DEL FACTOR (CIF)
Eficacia 0.5875
Productividad 0.4125
TOTAL 1.00
Posteriormente se llev a cabo la ponderacin de los factores de seleccin para

cada uno de los aislamientos virales con base en los datos obtenidos en los
ensayos de productividad viral y eficacia (Tabla 6) y se obtuvieron los valores
correspondientes a los coeficientes de seleccin de cada aislamiento viral (CSAV)
que indicaron la importancia de cada variable para cada uno de los aislamientos
virales (Tabla 8).
Tabla 8. Coeficientes de seleccin de los aislamientos de granulovirus.

COEFICIENTE DE SELECCIN DE LOS AISLAMIENTOS
CRITERIO
VIRALES (CSAV)
DE
T. solanivora P. operculella
SELECCIN
Per VG001 VG003 VG005 Per VG001 VG003 VG005
Eficacia 0.105 0.057 0.129 0.120 0.150 0.150 0.154 0.133
Productividad 0.108 0.088 0.068 0.095 0.124 0.126 0.121 0.268
Los coeficientes de importancia del factor (CIF) obtenidos y los coeficientes de

seleccin de aislamientos virales (CSAV) obtenidos a partir de la ponderacin de
los factores de seleccin de cada aislamiento para cada polilla de la papa, se
utilizaron para generar los ndices de seleccin finales (ISF) mediante una matriz
de decisin (Mndez, 2005) (Tabla 9).
1
Espinel Carlos. Bilogo, M.Sc. Investigador mster asistente. Laboratorio de Control Biolgico
Corpoica.
Lry Xavier. Ph.D. Director de la Unidad de Baculovirologa. IRD. Sede Saint Christol. Les-Als.
Francia.
Villamizar Laura. Qumica Farmacutica, M.Sc. Investigadora mster asociada. Laboratorio de
Control Biolgico Corpoica.
Zeddam Jean-Louis. Ph.D. Director Laboratorio de Entomovirologa. IRD. Sede Universidad
Catlica de Ecuador.
Tabla 9. Matriz de decisin para la seleccin del mejor aislamiento viral para el
desarrollo de un bioplaguicida para el control de T. solanivora y P. operculella.
CRITERIO DE SELECCIN NDICE DE
POLILLA AISLAMIENTO SELECCIN FINAL
Eficacia Productividad (ISF= CIF x CSAV)
Per 0.062 0.045 0.107
VG001 0.033 0.036 0.069
T. solanivora
VG003 0.076 0.028 0.104
VG005 0.071 0.040 0.111
Per 0.088 0.051 0.139
VG001 0.088 0.052 0.140
P. operculella
VG003 0.091 0.050 0.141
VG005 0.078 0.111 0.189
TOTAL 1.00
Segn los resultados, el granulovirus seleccionado por presentar las mejores

caractersticas tecnolgicas y biolgicas con miras al desarrollo de un
bioplaguicida para el control de T. solanivora y P. operculella, es el aislamiento
nativo VG005 proveniente de Norte de Santander. Con base en los resultados
obtenidos para la elaboracin de un bioplaguicida a base de este virus se
recomendara su produccin en larvas de P. operculella, considerando los mejores
rendimientos obtenidos y debe tenerse en cuenta que cada cierto nmero de pases
en este hospedero se debe volver a la cepa original para evitar los problemas
consecuencia de la adaptacin viral.
7. CONCLUSIONES
La sintomatologa de infeccin causada por granulovirus en las polillas de la papa

caracteriza por el retraso en el crecimiento, traslapamiento de nstares y
coloracin blanca lechosa.
El proceso de formulacin no afect la virulencia de los granulovirus evaluados

sobre larvas de T. solanivora y P. operculella.
El rendimiento de produccin de partculas virales de los aislamientos de

granulovirus se compar, obtenindose mayores rendimientos de los tres
aislamientos nativos en larvas de P. operculella.
El aislamiento VG005 de granulovirus procedente de Norte de Santander fue

seleccionado por presentar las mejores caractersticas biolgicas (produccin de
cuerpos de inclusin y actividad biocontroladora) y tecnolgicas (resistencia a los
procesos de formulacin) para ser utilizado como principio activo de un
bioplaguicida para el control de T. solanivora y P. operculella.
8. RECOMENDACIONES
Desarrollar una dieta artificial para T. solanivora y P. operculella que permita

realizar bioensayos con un manejo ms preciso de las dosis virales consumidas.
Caracterizar molecularmente los diferentes aislamientos de granulovirus

evaluados, con el fin de determinar si existen diferencias genticas entre los
aislamientos de granulovirus estudiados.
Determinar los hbitos alimenticios de las larvas neonatas de T. solanivora y

P. operculella, para establecer el momento en el que ocurre la infeccin viral.
Comprobar si existe una relacin directa entre la oscilacin de la temperatura y la

produccin de cuerpos de inclusin.
Determinar la CL50 y la CL90 para todos los aislamientos de granulovirus

estudiados.
Emplear larvas de P. operculella para la produccin masiva del virus seleccionado

e iniciar los estudios de formulacin de un bioplaguicida para el control de las
polillas de la papa en campo.
9. REFERENCIAS
ALCZAR, J.; CERVANTES, M.; RAMAN, K. 1992. Caracterizacin y

patogenicidad de un virus granulosis de la polilla de la papa Phthorimaea
operculella. Revista Peruana de Entomologa. Vol. 35. 107-111. p.
ALI, M.; YOUNG, S.; FELTON, G.; McNEW, R. 2002. Influence of the host
plant on occluded virus production and lethal infectivity of a baculovirus. Journal
of Invertebrate Pathology. Vol. 81. 158-165. p.
AREVALO, A.; CASTRO, R. 2003. Evaluacin post-registro de los insecticidas

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10. ANEXOS
10.1. Anexo 1.
Absorbancia (450nm) de las suspensiones virales obtenidas con cada larva de
P. operculella infectada con los diferentes aislamientos de granulovirus.
Repeticin 1.
MUESTRA VG003 VG001 PER VG005

1 0,080 0,055 0,196 0,173
2 0,180 0,070 0,166 0,173
3 0,412 0,089 0,160 0,095
4 0,229 0,052 0,230 0,306
5 0,217 0,066 0,108 0,229
6 0,248 0,055 0,278 0,132
7 0,156 0,081 0,231 0,206
8 0,116 0,085 0,164 0,239
9 0,132 0,142 0,193 0,463
10 0,151 0,082 0,152 0,331
11 0,115 0,099 0,099 0,373
12 0,174 0,111 0,104 0,259
13 0,167 0,110 0,221 0,319
14 0,351 0,141 0,145 0,529
15 0,223 0,112 0,167 0,540
Repeticin 2.

1 0,074 0,055 0,194 0,160
2 0,195 0,066 0,161 0,161
3 0,432 0,083 0,171 0,093
4 0,237 0,047 0,220 0,315
5 0,256 0,070 0,115 0,195
6 0,210 0,058 0,292 0,119
7 0,159 0,086 0,214 0,204
8 0,118 0,085 0,160 0,226
9 0,131 0,132 0,182 0,451
10 0,153 0,089 0,129 0,301
11 0,113 0,095 0,103 0,365
12 0,177 0,109 0,104 0,262
13 0,171 0,112 0,231 0,313
14 0,348 0,122 0,143 0,496
15 0,219 0,101 0,179 0,528
Absorbancia (450nm) de las suspensiones virales obtenidas con cada larva de
T. solanivora infectada con los diferentes aislamientos de granulovirus.
Repeticin 1.

1 0,193 0,334 0,127 0,175
2 0,117 0,170 0,367 0,190
3 0,112 0,176 0,233 0,279
4 0,187 0,193 0,399 0,434
5 0,161 0,155 0,295 0,376
6 0,198 0,177 0,273 0,213
7 0,185 0,151 0,453 0,202
8 0,231 0,144 0,261 0,375
9 0,172 0,119 0,204 0,386
10 0,091 0,080 0,302 0,179
11 0,273 0,217 0,367 0,174
12 0,196 0,107 0,243 0,320
13 0,147 0,178 0,205 0,482
14 0,098 0,192 0,435 0,295
15 0,076 0,163 0,672 0,193
Repeticin 2.

1 0,198 0,306 0,116 0,176
2 0,110 0,159 0,317 0,173
3 0,097 0,160 0,223 0,263
4 0,180 0,170 0,420 0,438
5 0,145 0,136 0,285 0,382
6 0,164 0,155 0,260 0,190
7 0,173 0,137 0,421 0,189
8 0,227 0,136 0,223 0,400
9 0,159 0,125 0,217 0,379
10 0,084 0,085 0,294 0,174
11 0,249 0,216 0,351 0,157
12 0,186 0,116 0,230 0,304
13 0,148 0,177 0,183 0,488
14 0,108 0,196 0,402 0,304
15 0,072 0,170 0,652 0,177
10.2. Anexo 2.
Productividad viral en larvas de P. operculella (CI / mg de tejido larval).

1 5,83E+09 8,00E+09 1,11E+10 5,32E+10
2 2,01E+10 1,53E+10 1,42E+10 2,67E+10
3 1,73E+10 1,98E+10 1,98E+10 7,25E+09
4 1,08E+10 7,08E+09 1,36E+10 1,90E+10
5 1,35E+10 7,63E+09 7,46E+09 2,28E+10
6 2,02E+10 1,24E+10 1,46E+10 1,48E+10
7 1,00E+10 1,28E+10 1,54E+10 3,30E+10
8 1,22E+10 1,30E+10 1,41E+10 3,76E+10
9 9,58E+09 2,17E+10 1,39E+10 2,50E+10
10 1,45E+10 1,57E+10 1,21E+10 3,09E+10
11 1,19E+10 1,29E+10 1,57E+10 2,78E+10
12 7,66E+09 1,29E+10 8,08E+09 1,33E+10
13 1,08E+10 6,93E+09 1,68E+10 2,58E+10
14 1,63E+10 2,08E+10 1,37E+10 2,81E+10
15 1,95E+10 1,99E+10 1,38E+10 7,53E+10
Productividad viral en larvas de T. solanivora (CI / mg de tejido larval).

1 1,18E+10 1,57E+10 8,81E+09 1,12E+10
2 8,88E+09 1,43E+10 6,57E+09 5,82E+09
3 9,75E+09 6,44E+09 6,91E+09 6,60E+09
4 1,26E+10 6,02E+09 1,15E+10 1,38E+10
5 3,40E+09 7,69E+09 1,23E+10 6,64E+09
6 5,27E+09 8,37E+09 8,95E+09 9,73E+09
7 5,06E+09 7,21E+09 7,82E+09 7,25E+09
8 5,84E+09 1,02E+10 8,10E+09 8,65E+09
9 4,80E+09 7,67E+09 8,85E+09 1,25E+10
10 5,75E+09 8,39E+09 1,94E+10 9,97E+09
11 1,21E+10 1,16E+10 1,30E+10 4,95E+09
12 7,08E+09 9,50E+09 9,98E+09 1,39E+10
13 6,11E+09 1,55E+10 7,79E+09 1,41E+10
14 8,00E+09 9,84E+09 1,71E+10 1,95E+10
15 5,58E+09 6,65E+09 3,28E+10 1,11E+10
10.3. Anexo 3.
Anlisis estadstico de los resultados de productividad de los diferentes aislamientos
de granulovirus evaluados para P. operculella, mediante una prueba de Tukey
( = 0.05).
F. V G. L Suma de cuadrados C. M F-valor P ()

Tratamiento 3 5.26 1.75 10.53 <.0001
Error 56 9.32 0.16
Total 59 14.59
R-cuadrado Coef Var Raz MSE LOGPRODUCTIVIDAD

Media
0.360707 1.740440 0.408153 23.45115
Tests para normalidad

Test --Estadstico-- -----P-valor------
Shapiro-Wilk #11 X 0.963845 Pr < W 0.0727
Prueba de Tukey (HSD)

Nmero de
Tukey Agrupamiento Media observaciones Aislamiento
A 23.9632 15 VG005
B 23.3072 15 PERU
B 23.2780 15 VG001
B 23.2562 15 VG003
Anlisis estadstico de los resultados de productividad de los diferentes aislamientos

de granulovirus evaluados para T. solanivora, mediante una prueba de Tukey
( = 0.05).

Tratamiento 3 1.56 0.52 3.54 0.0202
Error 56 8.26 0.14
Total 59 9.83
R-cuadrado Coef Var Raz MSE LOGPRODUCTIVIDAD Media

0.159583 1.675616 0.384158 22.92639

Nmero de
Tukey Agrupamiento Media observaciones Aislamiento
A 23.1017 15 PERU
B A 22.9950 15 VG005
B A 22.9448 15 VG001
B 22.6640 15 VG003
10.4. Anexo 4.
Anlisis estadstico de los resultados de productividad de los aislamientos de
granulovirus evaluados en diferentes hospederos (T. solanivora y P. operculella),
mediante una prueba de Diferencia Mnima Significativa LSD ( = 0.05).
Aislamiento VG003
One-Way AOV for: P T
Source DF SS MS F P
Between 1 2.590E+20 2.590E+20 17.9 0.0002
Within 28 4.063E+20 1.450E+19
Total 29 6.653E+20
Grand Mean 1.04E+10 CV 36.60

Chi-Sq DF P
Bartlett's Test of Equal Variances 2.51 1 0.1131
Cochran's Q 0,7058
Largest Var / Smallest Var 2.3996
Component of variance for between groups 1.630E+19

Effective cell size 15,0
Variable Mean
Po 1.33E+10
Ts 7.47E+09
Observations per Mean 15
Standard Error of a Mean 9.835E+08
Std Error (Diff of 2 Means) 1.391E+09
LSD All-Pairwise Comparisons Test
Variable Mean Homogeneous Groups

Po 1.33E+10 A
Ts 7.47E+09 B
Alpha 0.05 Standard Error for Comparison 1.391E+09

Critical T Value 2,048 Critical Value for Comparison 2.849E+09
All 2 means are significantly different from one another.
Aislamiento VG001
Source DF SS MS F P
Between 1 1.271E+20 1.271E+20 7.04 0.0130
Within 28 5.058E+20 1.806E+19
Total 29 6.329E+20

Chi-Sq DF P
Cochran's Q 0,7113

Variable Mean
Po 1.37E+10
Ts 9.67E+09

Po 1.37E+10 A
Ts 9.67E+09 B

Aislamiento VG005
Source DF SS MS F P
Between 1 2.704E+21 2.704E+21 18.3 0.0002
Within 28 4.133E+21 1.476E+20
Total 29 6.837E+21

Chi-Sq DF P
Cochran's Q 0,9471

Variable Mean
Po 2.94E+10
Ts 1.03E+10

Po 2.94E+10 A
Ts 1.03E+10 B
Aislamiento Per
Source DF SS MS F P
Between 1 1.994E+19 1.994E+19 0.71 0.4073
Within 28 7.888E+20 2.817E+19
Total 29 8.087E+20

Chi-Sq DF P
Cochran's Q 0,8292
Component of variance for between groups -5.485E+17

Variable Mean
Po 1.36E+10
Ts 1.19E+10

Po 1.36E+10 A
Ts 1.19E+10 A
Alpha 0.05 Standard Error for Comparison

1.938E+09
Critical T Value 2,048 Critical Value for Comparison
3.970E+09
There are no significant pairwise differences among the means.
10.5. Anexo 5.
Distribucin de frecuencias del ancho de la capsula ceflica para larvas sanas de
T. solanivora.
FREQUENCY DISTRIBUTION OF ANCHOCC
CUMULATIVE
LOW HIGH FREQ PERCENT FREQ PERCENT
0.18 0.28 45 23 45 23
0.28 0.38 2 1.1 47 24.1
0.38 0.48 28 14.3 75 38.4
0.48 0.58 4 2.1 79 40.5
0.58 0.68 3 1.5 82 42
0.68 0.78 31 15.9 113 57.9
0.78 0.88 5 2.6 118 60.5
0.88 0.98 6 3.1 124 63.6
0.98 1.08 7 3.6 131 67.2
1.08 1.18 51 26.1 182 93.3
1.18 1.28 13 6.7 195 100
TOTAL 195 100
0 MISSING CASES 1 CASES OUTSIDE SCALE
Distribucin de frecuencias del ancho de la capsula ceflica para larvas sanas de

P. operculella.
FREQUENCY DISTRIBUTION OF ANCHOCC
CUMULATIVE
LOW HIGH FREQ PERCENT FREQ PERCENT
0.18 0.22 111 25.4 111 25.4
0.22 0.26 2 0.5 113 25.9
0.26 0.3 33 7.6 146 33.4
0.3 0.34 9 2.1 155 35.5
0.34 0.38 2 0.5 157 35.9
0.38 0.42 0 0 157 35.9
0.42 0.46 0 0 157 35.9
0.46 0.5 25 5.7 182 41.6
0.5 0.54 29 6.6 211 48.3
0.54 0.58 15 3.4 226 51.7
0.58 0.62 0 0 226 51.7
0.62 0.66 0 0 226 51.7
0.66 0.7 0 0 226 51.7
0.7 0.74 2 0.5 228 52.2
0.74 0.78 18 4.1 246 56.3
0.78 0.82 29 6.6 275 62.9
0.82 0.86 92 21.1 367 84
0.86 0.9 62 14.2 429 98.2
0.9 0.94 6 1.4 435 99.5
0.94 0.98 1 0.2 436 99.8
0.98 1.02 1 0.2 437 100
TOTAL 437 100
0 MISSING CASES 1 CASES OUTSIDE SCALE
10.6. Anexo 6.
Anlisis estadstico de los porcentajes de mortalidad causados por los aislamientos
de granulovirus en larvas de T. solanivora para cada da de medicin, mediante una
prueba de Tukey (=0.05).
Da 4.
Tratamiento 4 2032.75 508.19 3.01 0.0718
Error 10 1689.15 168.91
Total 14 3721.90
R-cuadrado Coef Var Raz MSE DIA_4 Media

0.546158 40.06150 12.99675 32.44200


Nmero de
Tukey Agrupamiento Media observaciones Tratamiento
A 48.89 3 PERU
B A 37.78 3 VG001
B A 33.33 3 Control
B A 28.89 3 VG005
B 13.33 3 VG003
Da 8.
Tratamiento 4 1582.22 395.55 2.78 0.0864
Error 10 1422.40 142.24
Total 14 3004.62

0.526596 49.70041 11.92644 23.99667


Nmero de
A 42.220 3 VG001
A 26.660 3 PERU
A 22.220 3 VG005
A 15.553 3 Control
A 13.330 3 VG003
Da 12.
Tratamiento 4 977.82 244.45 0.72 0.5953
Error 10 3377.82 337.78
Total 14 4355.64

0.224495 68.92759 18.37885 26.66400


Nmero de
A 42.22 3 VG001
A 26.66 3 VG005
A 22.22 3 VG003
A 22.22 3 Control
A 20.00 3 PERU
Da 16.
Tratamiento 4 1167.32 291.83 1.02 0.4446
Error 10 2874.23 287.42
Total 14 4041.55

0.288830 82.93501 16.95358 20.44200


Nmero de
A 31.11 3 VG003
A 26.66 3 VG001
A 24.44 3 PERU
A 11.11 3 Control
A 8.89 3 VG005
Da 20.
Tratamiento 4 1937.37 484.34 2.72 0.0905
Error 10 1777.86 177.78
Total 14 3715.24

0.521467 58.83365 13.33367 22.66333


Nmero de
A 42.22 3 VG003
A 26.66 3 VG005
A 20.00 3 Control
A 15.55 3 VG001
A 8.89 3 PERU
Da 24.
Tratamiento 4 1285.89 321.47 3.19 0.0622
Error 10 1007.30 100.73
Total 14 2293.20

0.560743 32.73112 10.03645 30.66333


Nmero de
A 39.997 3 VG003
A 37.777 3 VG005
A 35.550 3 VG001
A 24.440 3 PERU
A 15.553 3 Control
Da 28.
Tratamiento 4 1463.76 365.94 3.63 0.0446
Error 10 1007.25 100.72
Total 14 2471.02

0.592371 32.73040 10.03623 30.66333


Nmero de
A 48.887 3 VG003
B A 31.107 3 VG005
B A 28.883 3 Control
B A 24.443 3 PERU
B 19.997 3 VG001
Da 32.
Tratamiento 3 311.17 103.72 0.65 0.6041
Error 8 1274.01 159.25
Total 11 1585.19

0.196303 23.18022 12.61950 54.44083


Nmero de
A 62.22 3 VG001
A 55.55 3 VG003
A 51.11 3 VG005
A 48.88 3 PERU
10.7. Anexo 7.
Anlisis estadstico de los porcentajes de mortalidad causados por los aislamientos
de granulovirus en larvas de P. operculella para cada da de medicin, mediante una
prueba de Tukey (=0.05).
DIA 2.
Tratamiento 4 1404.31 351.07 2.32 0.1275
Error 10 1510.93 151.09
Total 14 2915.24
R-cuadrado Coef Var Raiz MSE DIA_2 Media

0.481713 40.08698 12.29200 30.66333


Nmero de
A 42.22 3 Control
A 42.22 3 VG005
A 26.66 3 VG003
A 22.22 3 PERU
A 20.00 3 VG001
DIA 4.
Tratamiento 4 1262.21 315.55 3.67 0.0433
Error 10 859.09 85.90
Total 14 2121.30

0.595016 35.96068 9.268745 25.77467


Nmero de
A 35.553 3 VG005
B A 31.110 3 PERU
B A 24.440 3 VG003
B 8.887 3 VG001
DIA 6.
Tratamiento 4 906.69 226.67 1.53 0.2663
Error 10 1481.71 148.17
Total 14 2388.41

0.379622 40.88328 12.17259 29.77400


Nmero de
A 37.773 3 Control
A 37.773 3 VG005
A 31.110 3 PERU
A 24.440 3 VG003
A 17.773 3 VG001
DIA 8.
Tratamiento 4 1214.74 303.68 2.85 0.0818
Error 10 1066.62 106.66
Total 14 2281.36

0.532463 42.25638 10.32774 24.44067


Nmero de
A 39.997 3 Control
A 28.883 3 VG005
A 19.997 3 PERU
A 17.773 3 VG001
A 15.553 3 VG003
DIA 10.
Tratamiento 4 847.32 211.83 0.76 0.5741
Error 10 2785.48 278.54
Total 14 3632.80

0.233242 60.57404 16.68976 27.55267


Nmero de
A 37.77 3 VG005
A 35.55 3 VG001
A 22.22 3 VG003
A 22.22 3 Control
A 20.00 3 PERU
DIA 12.
Tratamiento 4 1037.14 259.28 2.08 0.1580
Error 10 1244.62 124.46
Total 14 2281.76

0.454535 45.64632 11.15626 24.44067


Nmero de
A 33.330 3 VG005
A 31.107 3 PERU
A 28.887 3 VG001
A 15.550 3 Control
A 13.330 3 VG003
DIA 14.
Tratamiento 4 2014.38 503.59 3.95 0.0355
Error 10 1274.05 127.40
Total 14 3288.44

0.612565 42.33207 11.28742 26.66400


Nmero de
A 42.217 3 VG005
B A 33.330 3 PERU
B A 15.553 3 VG003
B 11.110 3 VG001
DIA 16.
Tratamiento 4 2708.13 677.03 4.48 0.0248
Error 10 1511.15 151.11
Total 14 4219.29

0.641846 45.34678 12.29291 27.10867


Nmero de
A 46.66 3 VG005
B A 35.55 3 VG003
B A 24.44 3 Control
B A 22.22 3 PERU
B 6.66 3 VG001
DIA 18.
Tratamiento 4 1433.93 358.48 1.53 0.2658
Error 10 2340.32 234.03
Total 14 3774.26

0.379925 48.48441 15.29812 31.55267


Nmero de
A 44.44 3 VG005
A 35.55 3 PERU
A 35.55 3 VG003
A 26.66 3 VG001
A 15.55 3 Control
DIA 20.
Tratamiento 4 2014.69 503.67 7.09 0.0057
Error 10 710.84 71.08
Total 14 2725.54

0.739191 27.10287 8.431160 31.10800


Nmero de
Tukey Agrupamiento Media observaciones
Tratamiento
A 44.440 3 VG001
B A 42.220 3 VG005
B A C 33.330 3 PERU
B C 19.997 3 Control
C 15.553 3 VG003
DIA 22.
Tratamiento 3 2740.99 913.66 3.63 0.0644
Error 8 2014.91 251.86
Total 11 4755.91

0.576334 36.62647 15.87025 43.33000


Nmero de
A 62.22 3 VG005
A 53.33 3 VG001
A 33.33 3 PERU
A 24.44 3 VG003
DIA 24.
Tratamiento 3 370.11 123.37 0.63 0.6168
Error 8 1570.56 196.32
Total 11 1940.68

0.190716 40.68165 14.01144 34.44167


Nmero de
A 42.22 3 VG005
A 35.55 3 VG001
A 33.33 3 PERU
A 26.67 3 VG003
DIA 26.
Tratamiento 3 7804.25 2601.41 35.11 <.0001
Error 8 592.74 74.09
Total 11 8396.99

0.929410 13.71163 8.607706 62.77667


Nmero de
A 100.000 3 VG005
B 66.667 3 VG001
B 55.553 3 VG003
C 28.887 3 PERU
DIA 28.
Tratamiento 3 4278.46 1426.15 4.87 0.0326
Error 8 2340.94 292.61
Total 11 6619.41

0.646351 23.50546 17.10610 72.77500


Nmero de
A 100.00 3 VG005
B A 80.00 3 VG001
B A 60.00 3 PERU
B 51.11 3 VG003
10.8. Anexo 8.
Anlisis estadstico de los resultados de eficacia de los aislamientos de granulovirus
evaluados en T. solanivora, mediante una prueba de Diferencia Mnima Significativa
LSD ( = 0.05).
One-Way AOV for: FC FP FT FU SFC SFP SFT SFU
Source DF SS MS F P
Between 7 4016.85 573.835 1.76 0.1658
Within 16 5225.25 326.578
Total 23 9242.10
Grand Mean 68.162 CV 26.51

Chi-Sq DF P
Cochran's Q 0,3790
Component of variance for between groups 82.4190

Variable Mean
FVG005 75.747
FPer 66.663
FVG003 81.787
FVG001 36.370
SFVG005 72.707
SFPer 75.747
SFVG003 69.660
SFVG001 66.617
Standard Error of a Mean 10.434
Std Error (Diff of 2 Means) 14.755

FVG003 81.787 A
FVG005 75.747 A
SFPer 75.747 A
SFVG005 72.707 A
SFVG003 69.660 A
FPer 66.663 AB
SFVG001 66.617 AB
FVG001 36.370 B
Alpha 0.05 Standard Error for Comparison 14.755

Critical T Value 2,120 Critical Value for Comparison 31.280
There are 2 groups (A and B) in which the means
are not significantly different from one another.
Anlisis estadstico de los resultados de eficacia de los aislamientos de granulovirus
evaluados en P. operculella, mediante una prueba de Diferencia Mnima
Significativa LSD ( = 0.05).
One-Way AOV for: FC FP FT FU SFC SFP SFT SFU
Source DF SS MS F P
Between 7 777.97 111.138 1.86 0.1120
Within 30 1792.47 59.749
Total 37 2570.44
Grand Mean 95.152 CV 8.12
At least one group variance is near zero,

variance-equality tests cannot be computed.
Component of variance for between groups 10.8316

Variable N Mean SE
FVG005 5 84.21 3.4568
FPer 5 94.74 3.4568
FVG003 5 97.37 3.4568
FVG001 5 94.74 3.4568
SFVG005 5 97.37 3.4568
SFPer 4 96.71 3.8649
SFVG003 5 97.37 3.4568
SFVG001 4 100.00 3.8649

SFVG001 100.00 A
FVG003 97.368 A
SFVG005 97.368 A
SFVG003 97.368 A
SFPer 96.710 A
FPer 94.736 A
FVG001 94.736 A
FVG005 84.208 B
Alpha 0.05
Critical T Value 2,042
There are 2 groups (A and B) in which the means
are not significantly different from one another.
10.9. Anexo 9.
Porcentajes de importancia de cada factor segn el criterio de los expertos
consultados.
Expertos consultados Eficacia Productividad
Carlos Espinel. M.Sc. 60% 40%

Xavier Lry. Ph.D. 75% 25%
Laura Villamizar. M.Sc. 50% 50%
Jean-Louis Zeddam. Ph.D. 50% 50%
Promedio 58.75% 41.25%

Tesis 295

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ESTUDIO DEL DESARROLLO DE LA INFECCIN Y DEL EFECTO DE

LA FORMULACIN DE AISLAMIENTOS DE GRANULOVIRUS SOBRE

Tecia solanivora (Povolny) y Phthorimaea operculella (Zeller)

PAOLA EMILIA CUARTAS OTLORA

Microbilogo Agrcola y Veterinario

Laura Villamizar, M. Sc.

PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA

Artculo 23 de la Resolucin N13 de Julio de 1946

LA FORMULACIN DE AISLAMIENTOS DE GRANULOVIRUS SOBRE

Tecia solanivora (Povolny) y Phthorimaea operculella (Zeller)

PAOLA EMILIA CUARTAS OTLORA

LAURA VILLAMIZAR CARLOS ESPINEL

AMANDA VARELA, Ph.D EDISON VALENCIA, Ph.D

LA FORMULACIN DE AISLAMIENTOS DE GRANULOVIRUS SOBRE

Tecia solanivora (Povolny) y Phthorimaea operculella (Zeller)

PAOLA EMILIA CUARTAS OTLORA

ANGELA UMAA, M.Phil. DAVID GMEZ, M.Sc.

A Alba Marina Cotes, Ph.D. Directora del Laboratorio de Control Biolgico de

A Laura Villamizar, Q.F. M.Sc., investigadora del Laboratorio de Control

A Carlos Espinel, B. M.Sc., investigador del Laboratorio de Control Biolgico de

A Aristbulo Lopez-vila, Ph.D. Director del Laboratorio de Entomologa de

A los auxiliares del Laboratorio de Control Biolgico y del Laboratorio de

A los investigadores del Laboratorio de Control Biolgico de Corpoica-Tibaitat

A todos los estudiantes del Laboratorio de Control Biolgico de Corpoica-

2.1. CULTIVO DE LA PAPA. 3

3. FORMULACIN DEL PROBLEMA Y JUSTIFICACIN 34

3.1. FORMULACIN DEL PROBLEMA. 34

4.1. OBJETIVO GENERAL. 37

6.1. PROPAGACIN Y PURIFICACIN VIRAL. 47

Tabla 1. Plagas de la papa en Colombia (Cevipapa, 2004). Pp. 5.

Tabla 2. Estado actual de los insecticidas registrados en Colombia para controlar

Tabla 3. Distribucin geogrfica de poblaciones de Granulovirus en P.

Tabla 6. Resultados de eficacia y productividad de los diferentes aislamientos de

Tabla 7. Coeficientes de importancia de factor para los aislamientos de

Tabla 8. Coeficientes de seleccin de los aislamientos de granulovirus. Pp. 83.

Figura 1. Distribucin de la Polilla Guatemalteca de la papa en Colombia (Lpez-

Figura 2. Ciclo de vida de la Polilla Guatemalteca (2200 a 2800 msnm) (Lpez-

Figura 3. Daos ocasionados por T. solanivora en tubrculos de papa (Plagas

Figura 4. Ciclo de vida de la Palomilla de la Papa P. operculella. (Tomado y

Figura 6. Larvas de Tecia solanivora infectadas con el Granulovirus de P.

Figura 7. Macerado de larvas de T. solanivora infectadas con el Granulovirus de

Figura 8. Banda de granulovirus purificados suspendida en un colchn de glicerol

Figura 9. Larvas de T. solanivora infectadas con el aislamiento VG003 de

Figura 10. Productividad viral de aislamientos de granulovirus en larvas de

Figura 11. Productividad viral de aislamientos de granulovirus en larvas de

Figura 12. Distribucin de frecuencias del ancho de la cpsula ceflica de larvas

Figura 14. Comportamiento de los nstares larvales de T. solanivora con respecto

Figura 15. Comportamiento de los nstares larvales de P. operculella con

Figura 16. Comportamiento de los nstares larvales de T. solanivora infectada

Figura 17. Comportamiento de los nstares larvales de T. solanivora infectada

Figura 18. Comportamiento de los nstares larvales de T. solanivora infectada

Figura 19. Comportamiento de los nstares larvales de T. solanivora infectada

Figura 20. Mortalidad de larvas de T. solanivora infectadas con los diferentes

Figura 22. Desarrollo de la infeccin del aislamiento VG003 en larvas de T.

Figura 23. Desarrollo de la infeccin del aislamiento VG005 en larvas de T.

Figura 24. Desarrollo de la infeccin del aislamiento VG001 en larvas de T.

Figura 25. Desarrollo de la infeccin del aislamiento del Per en larvas de T.

Figura 27. Comportamiento de los nstares larvales de P. operculella infectada

Figura 28. Comportamiento de los nstares larvales de P. operculella infectada

Figura 29. Comportamiento de los nstares larvales de P. operculella infectada

Figura 30. Mortalidad de larvas de P. operculella infectadas con los diferentes

Figura 32. Desarrollo de la infeccin del aislamiento VG003 en larvas de

Figura 33. Desarrollo de la infeccin del aislamiento VG005 en larvas de