Sunteți pe pagina 1din 21

C3

ORGANIZAREA MATERIALULUI GENETIC


Sistemele biologice cuprind dou tipuri fundamentale de organizare:
- viral (molecular) i
- celular.
La rndul ei organizarea celular cuprinde dou categorii divergente de organizare:
- cea procariot i
- cea eucariot

Organizarea genomului viral


Virusurile se caracterizeaz prin:
Nu au organizare celulara, ele se replica exclusiv in celulele vii pe care le infecteaza;
Materialul genetic este reprezentat de un singur tip de acid nucleic: fie ADN, fie ARN, niciodat
ambele.
Virusurile nu cresc, nu se divid i nu posed un aparat enzimatic pentru producere de energie, deci
nu au metabolism.
Niciodat o particul viral nu provine n urma diviziunii unei particule preexistente.
O particula virala rezult din autoasamblarea componentelor sale moleculare sintetizate de celula
gazd pe baza instruciunilor nscrise n acidul nucleic viral.
Ele se deosebesc de sistemele biologice existente n natur dar pot fi considerate sisteme biologice
deoarece prezint caracteristici structurale i dimensiuni constante, pot suferi mutaii i
recombinri.
Virusurile au organizare acelular.
Particula viral matur, numit i virion sau virus infecios matur reprezint o structur alctuit
dintr-un:
- nveli proteic capsid i
- un miez de acid nucleic
Miezul de acid nucleic genomul viral este constituit din:
fie ADN (dublu catenar sau monocatenar) la adenovirusuri
Exemple de virusuri ADN: hepatitei B, papilloma virus, herpesului, v. Epstein-Barr, variolei,
bacteriofagi, orf virus (dermatite pustulare la capre si oi)
fie ARN (dublu catenar sau monocatenar) la ribovirusuri
Exemple de virusuri ARN:poliovirus, enterovirus, hepatitei A si C, rubeolei, rabic, Ebola, gripale,
rotavirus, retrovirusuri etc
ntr-un acelai virion nentlnindu-se niciodat ambele tipuri de acizi nucleici.

1
Miezul de acid nucleic se numete cromosom viral (genom viral) i conine informaia genetic pentru
planurile arhitecturale ale virusului care sunt reproduse de componentele celulei gazd.
Din acest motiv virusurile sunt parazii obligatoriu intracelular la nivel genetic i manifest o
nalt i strict specificitate de gazd.
n cazul deoxiribovirusurilor (adenovirusuri),
ADN poate fi dublu catenar (linear sau circular) (T4, SV40) sau monocatenar (circular)
(phiX174).
n acest din urm caz devine dublu catenar n timpul replicrii.
De obicei, ADN viral dublu catenar este transcris la ARNm cu ajutorul ARN-polimerazei ce
aparine gazdei;
La virusurile cu genom ADN monocatenar sinteza catenei ADN complementare corespunztoare
ca i transcrierea genelor virale se realizeaz cu ajutorul enzimelor gazdei.
Ribovirusurile,
Au genomul reprezentat de o macromolecula de ARN si sunt de mai multe categorii:
Cu ARN monocatenar pozitiv (tip +) cum sunt aproape toate virusurile plantelor,
bacteriofagii R17, MS2, virusul poliomielitei, guturaiului etc au un material genetic care
serveste concomitent ca ARNm si pentru replicare.
Dupa ce genomul viral a patruns in celula gazda , ARN viral functioneaza ca ARNm, realizandu-se
astfel sinteza unor proteine necesare replicarii si a unor proteine virale. Apoi genomul viral incepe
replicarea ce consta in sinteza unei catene complementare (-) pe baza careia se sintetizeaza un numar
mare de genomuri virale.
ARN monocatenar pozitiv (tip -) virusul gripei, VMT etc.
In acest caz dupa ce genomul viral patrunde in celula, are loc mai intai sinteza unei catene de ARN
complementara care poate servi ca ARNm pentru sinteza de enzime si de proteine virale.
Dimensiunea capsidei virale limiteaz cantitatea de acid nucleic pe care virusul l poate conine.
De aceea, anumite tipuri de virusuri au mecanisme specifice prin care produc o cantitate mai mare
de ARNm, ceea ce conduce la o economie semnificativ de material genetic.
2
De exemplu, bacteriofagul X174 are genomul format dintr-o molecul de ADN monocatenar ce
conine 5385 nucleotide, lungime suficient pentru a codifica 4-5 proteine.

S-a dovedit insa, c acesta determin sinteza a 11 proteine virale diferite, ceea ce nseamn c, la nivelul
genomului su exist gene suprapuse (de fapt mai multe cadre de citire cu situsuri de iniiere diferite),
fapt constatat si in cazul altor virusuri, precum:
parvovirusurile (virusuri animale care au genom ADN monocatenar),
geminivirusurile (virusuri vegetale cu genom ADN monocatenar) i
levivirusurile (bacteriofagi cu genom ARN monocatenar de tip +)
Cele mai mici genomuri virale (ca n cazul bacteriofagilor MS2 i Q) au o talie de aproximativ 1,2-
1,8 x 106 daltoni, suficient pentru a conine informaia genetic necesar sintezei a 3-4 proteine.
La extrema cealalt se gsesc virusurile din categoria fagilor T par, herpesvirusul i virusul vaccinei
(cu genom ADN-variola vaci, cai) al cror genom are aproximativ 2 x 108 daltoni i codific sinteza a cel
puin 100 proteine diferite.
Compoziia n baze (G+C%) a genomului variaz n limite foarte largi, ntre 35 i 74%.
In cazul virusurilor cu potenial oncogen, coeficientul G+C este de aproximativ 40%, fiind foarte apropiat
de cel al genomului celulelor mamaliene.

Virusurile pot exista n mai multe stri:


virion sau virus infecios matur;
virus vegetativ sau genom viral -liber n citoplasma celulei infectate; poate fi replicat
cu ajutorul echipamentelor enzimatice ale gazdei; faza vegetativ este neinfecioas;
provirus sau genom viral integrat n cromosomul celulei gazd; nu este patogen;

3
Replicarea Virala

Virusurile nu conin echipament enzimatic de biosintez i catabolism, deci nu au metabolism;


- Nu cresc, nu se divid, iar multiplicarea este strict dependent de celula gazd infectat;
- Sunt parazii intracelulari obligatorii.

Genomul viral conine informaia genetic necesar pentru propria replicare i pentru
devierea metabolismului gazdei n sensul sintezei constituenilor virali (echipamentul
enzimatic necesar replicrii genomului viral, a transcrierii genelor virale i a sintezei proteinelor
virale) i a asamblrii noilor particule virale.

Particula viral rezult din autoasamblarea componentelor sale moleculare sintetizate de


celula gazd pe baza instruciunilor nscrise n acidul nucleic viral.

Multiplicarea virusurilor cu genom ADN

In cazul virusurilor cu genom ADN, pe lng diferenele de dimensiune i de conformaie


molecular mai apar i anumite particulariti legate de prezena la nivelul ADN a unor baze
azotate neobinuite:
de exemplu, bacteriofagii din grupul T par conin hidroximetilcitozin n locul citozinei.
Prin convenie, catena (-) a ADN dublucatenar este cea care servete pentru transcrierea la
ARNm.
Prin urmare, ARNm tradus la proteine este considerat plus (+).
Exist i excepii:
de exemplu, geminivirusurile, care infecteaz diferite specii de plante, conin ADN
monocatenar care, n celulele gazd, i sintetizeaz catena complementar, iar ambele catene ale
ADN rezultat servesc pentru transcrierea la ARNm.

Multiplicarea virusurilor cu genom ARN


O atenie special a fost acordat virusurilor cu genom ARN segmentat; se pare c fiecare segment
codific pentru un anumit tip de proteine.
In majoritatea cazurilor, fragmentele de ARN genomic sunt nchise n aceeai capsid, chiar dac este
vorba de 10-12 segmente. De ex. virusul gripal al crui genom este alctuit din 8 segmente de ARN
monocatenar, reunite n aceeai capsid. Exist ns i situaii n care nu toate segmentele se gsesc n
acelai virion.

4
Spre exemplu, la virusurile fungilor genomul este alctuit din 2-4 segmente de ARN cu lungimi
diferite incluse n capside diferite dar cu aceeai compoziie chimic.
Producerea de virus i mbolnvirea organismelor gazd se realizeaz doar n cazul infeciei simultane cu
cel puin un exemplar din fiecare tip de particul viral.

Semnificaia genomului segmentat:


confer anumite avantaje virusurilor respective legate de posibilitatea reasortrii
segmentelor genomice provenite de la virusuri diferite, cu formarea unor virusuri noi.

Acest mecanism a primit denumirea de pseudorecombinare, el conducnd la mrirea


variabilitii virusurilor i permind acestora s nving rezistena organismelor gazd.

Fenomenul de pseudorecombinare ar putea explica apariia de noi tulpini de virus gripal i a


pandemiilor de mbolnviri umane prin schimbarea de fragmente genomice ntre virusul
gripal uman i virusurile similare aviare, porcine sau ecvine.

Retrovirusurile (din care face parte i virusul rspunztor de producerea SIDA)


- sunt virusuri cu genom ARN care infecteaz celulele mamaliene
- dup infecie are loc revers-transcrierea ARN viral la ADNc;
- ADNc se integreaz n genomul celulei gazd, devenind provirus.
- Provirusul determin producerea de ARN viral.
ARN sintetizat funcioneaz att ca ARNm, utilizat pentru sinteza proteinelor virale, ct i ca ARN
viral genomic.
In cazul retrovirusurilor Genomul viral conine (fig. de mai jos):
- dou secvente situate la extremitile genomului viral
- o secven de nucleotide necesar ncapsidrii
- i trei gene ce codific o serie de proteine virale:
gag (codific sinteza proteinelor din miezul intern al virusului);
pol (codific sinteza mai multor enzime virale, inclusiv a reverstranscriptazei);
env (codific sinteza proteinelor din nveliul viral).

5
Viroizii
Alturi de virusuri, n categoria sistemelor biologice acelulare sunt inclui i viroizii. Acetia
reprezint cele mai mici particule infecioase, mai mici dect cel mai simplu virus, ei fiind
alctuii din cte o molecul de ARN nud, neasociat cu nici un fel de proteine.
Spre exemplu, viroidul ce determin infecii severe la cocotier este alctuit dintr-o molecul de
ARN format din 246 ribonucleotide, ea prezentnd regiuni bicatenare ce alterneaz cu regiuni
monocatenare (datorit formrii de legturi de hidrogen intracatenare)

Reprezentarea schematic a viroidului ce determin infecii la cocotier, cu evidenierea regiunilor


bicatenare ce alterneaz cu regiuni monocatenare (buclele)

Infectarea celulelor vegetale depinde de existena unor rni la nivelul unor organe ale
gazdei.
Dei exist unele cercetri n domeniu, pn n prezent nu se cunoate modul n care viroizii
produc bolile de care sunt rspunztori i nici modul n care se replic ARN viroidal.

Identificarea virusurilor
Are loc prin mai multe metode, cum ar fi:
Efecte citopatice
Teste serologice
Identificarea anticorpilor la pacient

6
Utilizarea anticorpilor pentru identificarea virusurilor (teste Elisa, de hemaglutinare, Western blot)
Identificarea tipului de genom viral (ADN/ARN)
RFLPs
PCR
Metode noi de identificare (metoda biofotonica)

C4
Organizarea celular
Toate organismele actuale prezint o anumit organizare celular. Aceast organizare a
reprezentat o etap esenial n evoluia materiei vii care a deschis noi perspective de
evoluie.
Organizarea celular actual cuprinde dou tipuri principale de organizare genetic:
procariot i eucariot
Organizarea genomului procariot
Organizarea procariot este ntlnit la bacterii, inclusiv la actinomicete i ciano-bacterii, i prezint toate
atributele organizrii celulare:
autoreproducerea i morfogeneza autonom.
Genomul procariot este alctuit din dou categorii de determinani genetici:
1. gene eseniale, localizate n structura cromosomului i
2. gene accesorii prezente n structura plasmidelor i a elementelor genetice transpozabile.
Cromosomul procariotelor rpoart n structura sa toat informaia genetic necesar pentru existena
unei celule, respectiv setul de determinani genetici care codifica arhitectura celulei, metabolismul
energetic i de biosintez, creterea i diviziunea, ca i reglarea activitii celulae.
Elementele genetice extracromosomale conin informaie genetic suplimentar, accesorie, care permite
celulelor procariote o mai bun adaptare la condiii de mediu noi sau modificate.

Cromosomul bacterian este inclavat direct n citoplasm i formeaz o structura cunoscut sub
numele de nucleoid, nucleoplasm, material nuclear sau nucleu de tip procariot (lipsit de
membran nuclear). La nivelul cromosomului se gsesc genele implicate n procesele eseniale
supravieuirii, ele fiind grupate n operoni.
Deseori, n afar de informaia genetic esenial coninut de cromosom, bacteriile pot prezenta i o
informaie genetic suplimentar care poate conferi avantaje selective majore n condiii modificate de
mediu. Majoritatea genelor ce codific o asemenea informaie genetic sunt localizate pe plasmide.

7
Cromosomul bacterian ocup o regiune limitat, n general la nivelul zonei centrale a celulei bacteriene,
avnd un aspect mai clar pe electronografii
Regiunea celular ocupat de cromosom este plin de fibrile fine, paralele, ondulate, cu diametrul
de 2-5 nm care dispar dup digestie cu dezoxiribonucleaz (DN-az).
Mrimea i forma nucleoidului bacterian variaz foarte mult n funcie de natura mediului de
cultur i a condiiilor de mediu.
S-a demonstrat c din punct de vedere chimic, nucleoidul este un complex ADN-ARN-proteine n
care ADN reprezint 80% i constituie cromosomul propriu-zis.
Componenta proteic reprezint 10% din nucleoid i este format n cea mai mare parte din
enzime cu rol in replicarea materialului genetic numit polimeraze.
cromosomul bacterian consta din 40-50 de bucle de marimi diferite ale macromoleculei de ADN,
care contin mici de ARN si proteine. Fircare bucla prezinta super-rasuciri secundare.
Aceasta structura a cromozomului circular bacterian este stabila si ii confera continuitate de-a
lungul generatiilor.

8
Elementele genetice accesorii (EGA)
Numite i elemente genetice extracromosomale (EGE) sau elemente ADN accesorii, EGA sunt
reprezentate de:
plasmide,
secvene de inserie (SI),
transpozoni (Tn) i
de unii bacteriofagi.

Comparativ cu informaia genetic cromosomal, EGA prezint anumite proprieti:


includ informaie genetic accesorie, neesenial pentru reproducerea organismului purttor, iar
unele dintre ele nu confer nici o proprietate detectabil;
sunt capabile de replicare i chiar suprareplicare independent fa de cromosomul bacteriei
purttoare
Plasmidele
Dintre EGA existente la procariote cele mai importante sunt plasmidele.
Ele sunt spaial separate de cromosom, au capacitatea de a se replica autonom fa de acesta i pot
fi perpetuate stabil n aceast stare.
Plasmidele conin informaie genetic neesenial pentru creterea normal a celulelor gazd, ele putnd fi
pierdute sau dobndite fr s afecteze viabilitatea celulei gazd.
Plasmidele pot fi considerate cromosomi miniaturali (reprezint 1-2% din cromosomul
bacterian), ele fiind alctuite din molecule de ADN dublu catenare, covalent nchise sau, n
anumite cazuri, lineare, care conin informaie genetic suplimentar pentru bacteriile
posesoare (Summers, 1996).
Masa molecular a plasmidelor variaz n limite foarte largi: de la 1,5 x 106 Da pn la 150 x 106
Da sau chiar mai mult la unele plasmide mari.
Cercetri recente au artat c proprietile de nodulare i fixare a azotului la bacteriile din genul
Rhizobium sunt determinate de gene localizate pe plasmide mari (megaplasmide) ce ajung la 400-450
MDa.
Plasmidele sunt denumite i clasificate n mod curent dup efectul cel mai evident produs asupra
celulelor gazd.Aceast clasificare este ns nesatisfctoare deoarece multe plasmide au mai mult
de un efect (plasmidele de rezisten pot determina i alte caracteristici fenotipice, cum ar fi
conjugarea bacterian). n plus, plasmidele pot pierde sau ctiga prin recombinare diferii
determinani genetici care codific proprieti noi. Pentru a se evita acest neajuns s-a propus
clasificarea lor pe criteriul incompatibilitii, adic al capacitii lor de a exclude alte plasmide

9
de acelai tip de la coexistena n aceeai celul gazd. Pe acest criteriu au fost descrise la
bacteriile Gram negative peste 30 de grupuri de incompatibilitate, iar la cele Gram pozitive 18
grupuri de incompatibilitate.
Elementele genetice transpozabile
- Reprezinta segmente de ADN capabile s-i modifice poziia fie pe acelai cromosom fie pe
cromosomi diferii. Consecinta: modificarea constitutiei genetice a organismului.
Identificate iniial la porumb de ctre Barbara McClintock, elementele genetice transpozabile au
fost evideniate i la alte organisme, inclusiv la bacterii, ele fiind reprezentate de anumite segmente de
ADN capabile s-i modifice poziia fie pe acelai replicon fie pe repliconi diferii.
Cele mai simple elemente genetice transpozabile sunt secvenele de inserie (SI) -sunt secvente de
dimensiuni mici (aproximativ 800 perechi de baze)
SIcodifica doar pentru proteine implicate in transpozitie (de exemplu, gena pentru transpozaz,
enzima ce catalizeaz procesul de transpoziie).
Secvenele de inserie sunt flancate de segmente de nucleotide terminale repetate inversat (lungi
de 9-41 pb), care servesc drept situsuri de recunoatere pentru transpozaz.

De ex, secventa din partea stanga alcatuita din 5 perechi de baze, este repetata si inversata pentru a
forma secventa din partea dreapta.
Astfel, daca secventa initiala este 5'-TTACG-3' , cu bazele complementere: 3'- AATGC-5'
Secventa repetata invers va fi: 5'---TTACGnnnnnnCGTAA---3'

La E.coli exista secvene de inserie care servesc drept situsuri de recunoatere i integrare
ale plasmidei F n cromosomul tulpinilor de E.coli, ele gsindu-se att la nivelul cromosomului
bacterian ct i la nivelul plasmidei F, conducnd n final la formarea celulelor de tip Hfr.
In ceea ce privete transpoziia secvenelor de inserie, au fost descrise dou mecanisme:
10
conservativ i replicativ.

In primul caz (conservativ) secvena de inserie este excizat din locusul iniial i apoi este
inserat la nivelul unui nou locus, astfel nct numrul de secvene de inserie per molecul
de ADN nu se modific.
In cazul mecanismului replicativ al transpoziiei, o secven de inserie se integreaz ntr-un
nou locus fr ca secvena iniial s fie excizat ci numai copiat.
Secvenele de inserie se pot gsi n mai multe copii per molecul de ADN.
In acest fel are loc mrirea numrului de secvene de inserie per molecul de ADN.

Uneori, dou secvene de inserie alturate pot prelua n timpul transpoziiei segmente specifice de
ADN aparinnd cromosomului n care sunt integrate. Rezult n acest fel un transpozon (Tn) ce
conine dou secvene de inserie marginale i, n plus, gene specifice ce confer un fenotip decelabil
celulelor purttoare (de exemplu, rezisten la aciunea unor antibiotice cum ar fi ampicilin, kanamicin,
cloramfenicol etc).
In alte cazuri transpozonii prezint secvene terminale repetate care nu sunt ns secvene de inserie
(de exemplu, transpozonul Tn3).
Semnificaia elementelor genetice transpozabile:
mresc cantitatea de material genetic, (se pot integra n diferite situsuri ale unui replicon sau la
nivelul unor repliconi diferii),
pot produce modificri n funcionarea genelor (activeaz gene silenioase sau inactiveaz gene
normal funcionale).

C5
Genomul eucariot
Cromozomii eucariotelor au o structura mai complexa fiind alcatuiti din ADN, ARN, proteine
histonice si non-histonice, ioni de Mg si de Ca.
Deoarece materialul genetic de la eucariote, prin localizarea sa n nucleu, este separat de sediul sintezei
proteice, transcrierea genetic nu mai este cuplat cu traducerea: primul fenomen se desfoar n nucleu,
iar cel de-al doilea se realizeaz n citoplasm, unde se gsesc i ribozomii.
La eucariote complexarea permanent a ADN cromosomal cu anumite proteine bazice (histonele)
face ca substana nuclear (cromatina) s prezinte la nivel ultrastructural un aspect fibros, unitatea
structural a cromosomilor fiind fibra de cromatin.

11
Tipuri de cromatin : eucromatin i heterocromatin
Eucromatina sufer o condensare intens n diviziune i decondensare puternic n interfaz;
ea apare sub form dispersat la nivelul nucleului interfazic.
Heterocromatina este condensat pe tot parcursul ciclului celular, aprnd mai intens colorat
dect eucromatina; ea se localizeaz, de obicei, la nivelul anumitor regiuni cromosomale.
Celulele specializate prezint o distribuie specific a eucromatinei i heterocromatinei, n funcie de
starea lor funcional.
Heterocromatina este adesea asociat cu membrana intern a nveliului nuclear, implicata n schimburile
materiale, energetice i informaionale dintre nucleu citoplasm.
Au fost descrise 2 tipuri de heterocromatin:
heterocromatina constitutiv format din regiuni care nu sunt exprimate (transcrise).
Aceasta include sateliii si are un rol structural pentru cromosom. Deseori aceste
secvene sunt concentrate la nivelul unor regiuni specifice, de obicei n jurul
centromerului;
heterocromatina facultativ care ia forma unor cromosomi ntregi n anumite tipuri
celulare. Cel mai cunoscut exemplu este cromatina sexual ce reprezint unul dintre
cromosomii X de la femelele de mamifere care se inactiveaz permanent, randomic, prin
heterocromatinizare.

Compoziia cromosomilor eucariotelor


n privina compoziiei chimice, cromosomii la eucariote sunt constituii din ADN (1315%),
ARN (12-13%), proteine histonice i nonhistonice (68-72%), mici cantiti de lipide, ioni de Ca2+
i Mg2+, unele poliamine (spermina i spermidina).
Cantitatea acestor componente la nivelul nucleului i al cromosomilor la eucariote este variabil n
funcie de specie, tip morfofuncional de celul, etap ontogenetic sau treapt filogenetic.
Cantitatea de ADN n celula eucariot este foarte mare comparativ cu celulele bacteriene.
La om, de exemplu, cantitatea de ADN este de 1000 de ori mai mare dect la E.coli.
ADN cromosomal formeaz componenta esenial a cromosomului eucariot fiind stabilit faptul c
n fiecare cromosom exist o molecul de ADN asociat cu proteine spre a forma fibra
nucleohistonic sau fibra de cromatin.
Plierea determin n final structura morfogenetic denumit cromosom (corpuscul colorat
conform denumirii pe care Waldeyer le-a atribuit-o n 1888).
Ca i n cazul procariotelor, lungimea extrem de mare a moleculei de ADN este redus printr-o
mpachetare specific realizat, de aceast dat, n urma complexrii ADN cu alte componente
moleculare i, n primul rnd, cu proteine bazice denumite histone. Fiecare cromosom interfazic
12
conine o singur molecul linear de ADN dublu catenar (aceasta corespunde unei
cromatide) (Darnell i colab., 1986).
Cromosomul replicat este bicromatidic, fiind alctuit din dou molecule identice de ADN i
se prezint ntr-o stare mult mai condensat (de 5-10 ori) comparativ cu cel interfazic.

Clasele de secven din ADN eucariot. Tehnicile biochimice i biofizice care implic secvenierea
(stabilirea ordinii nucleotidelor n molecula de ADN), stabilirea punctului de topire ca i
ultracentrifugarea n gradient de clorur de cesiu au pus n eviden mai multe benzi;
benzile mai mici au cptat denumirea de ADN satelit. El reprezint, de regul, secvene simple
dar repetate de foarte multe ori. Aceste secvene sunt localizate n special la nivelul unor anumite
regiuni ale cromatinei (la nivelul heterocromatinei).
Datorit repetrii de foarte multe ori a acestor secvene simple ADN satelit se mai numete i
ADN repetitiv
S-a stabilit c exist trei tipuri distincte de secvene n ADN eucariot (Gavril, 2003):
secvene unice sau nerepetate, prezente ntr-o singur copie n genom: ele corespund genelor
structurale ce codific sinteza catenelor polipeptidice i a genelor reglatoare adiacente.
Aceste secvene sunt localizate la nivelul eucromatinei, existnd ns i secvene necodificatoare care nu
se repet;
secvene moderat repetate: sunt secvene simple cu lungimea de 100-150 pb repetate de 102-105
ori n genom; ele reprezint aproximativ 30-60% din ADN total. Secvenele menionate formeaz
hibrizi cu ARN, ceea ce nseamn c ADN este parial transcris. Se consider c unele secvene de
ADN moderat repetate reprezint genele pentru ARNr, ARNt sau pentru histone, ele fiind
localizate la nivelul regiunilor de eucromatin;
secvene nalt repetate: constituie o parte important a ADN care se mai numete i ADN satelit.
Unitatea de repetiie este format dintr-un numr mic de nucleotide care sunt repetate de pn la un
milion de ori per genom haploid; la aceste secvene renaturarea este foarte rapid.
Aceste secvene sunt localizate mai ales la nivelul heterocromatinei din regiunea centromerului, a
telomerelor i a constriciilor secundare.
Dac aceste secvene sunt alctuite din cteva zeci de nucleotide repetate sub form tandemic se
vorbete despre microsatelii.

Proteinele histonice
ADN eucariot cu localizare nuclear este asociat n permanen cu proteine bazice denumite
histone. Aceste proteine au ncrctur pozitiv i interacioneaz cu gruprile fosfat ale ADN.
Complexul nucleohistonic rezultat se numete cromatin.

13
Histonele
au un rol structural n meninerea i controlul conformaiei cromosomului i, pe de alt
parte, asigur reglarea genic grosier.
acioneaz ca represori ai activitii genetice, deoarece prin condensarea cromatinei i
superspiralizarea ADN determin inhibiia steric a transcrierii, starea condensat a ADN
nefiind propice pentru transcriere.
La eucariotele superioare, au fost descrise 5 tipuri de histone, notate H1, H2A, H2B, H3 i H4
care se pot separa prin cromatografie pe schimbtori de ioni. Cu excepia histonei H1, toate
celelalte histone se afl n raport echimolar cu ADN.
Legarea histonelor la ADN
se realizeaz prin intermediul unor legturi ionice ntre gruprile fosfat (PO4) ale ADN i
gruprile amino (NH2) ale histonelor.
nu are specificitate de secven dar exist anumite preferine de legare a resturilor de lizin
la perechile A-T i de arginin la G-C.
Asocierea ADN histone este realizat n egal msur la nivelul eucromatinei i heterocromatinei,
a secvenelor unice sau repetitive din ADN.
Prin clonarea genelor pentru histone de la ariciul de mare n E.coli s-a demonstrat faptul c aceste
gene pentru histone sunt linkate, fiind localizate pe acelai segment de ADN (de aproximativ 7000
pb). Astfel, a fost stabilit ordinea acestor gene: H1 H4 - H2B H3 H2A, acest tandem
repetndu-se de aproximativ 1000 ori, iar regiunile codificatoare sunt separate de secvene
spaiatoare (necodificatoare) intergenice.
Genele pentru histone nu prezint introni ci au doar secvene informaionale.
Sinteza histonelor se desfoar n citoplasm i odat sintetizate ele sunt transferate rapid n
nucleu. Cnd sinteza ADN este blocat, producerea de histone scade i ea rapid.
Activarea acestor gene se realizeaz prin interaciunea respectivelor segmente de ADN cu
proteine nonhistonice fosforilate care au probabil capacitatea de a recunoate specific aceste gene.
Proteine nonhistonice sau hertone
In afara histonelor, n structura cromatinei nucleare, intim asociate cu ADN, mai intr un grup
heterogen de proteine numite proteine nonhistonice sau hertone. Acestea sunt bogate n aminoacizi cu
caracter acid aa cum sunt triptofanul i acidul aspartic.
Grupul de proteine nonhistonice
este foarte heterogen i numeros, cu peste 120 tipuri diferite, cu greuti moleculare cuprinse ntre
10.000 i 150.000 Da.
Ele au specificitate de specie dar mai ales de esut, variind calitativ i cantitativ n funcie de
intensitatea proceselor metabolice ale esuturilor respective.

14
Proteinele nonhistonice sunt implicate n reglajul fin al activitii genelor, asigurnd prin
interaciunea lor cu histonele activarea specific a genelor care trebuie s funcioneze la un
moment dat. Activarea genelor se realizeaz n special prin fosforilare.
Nonhistonele cuprind o serie de enzime ale metabolismului nuclear, cum ar fi: ADN-
polimeraze, ARN-polimeraze, NAD-sintetaze, nucleozid-trifosfataza, metilaze, fosfokinaze,
proteine cu caracter contractil de tipul miozinei, actinei, tubulinei (proteine implicate n
micrile cromosomilor).
Ca i proteinele histonice, proteinele nonhistonice sunt sintetizate n citoplasm i apoi transferate n
nucleu. Activitatea lor presupune interaciuni complexe att cu histonele ct i cu ADN i ARN.

Organizarea molecular a fibrei de cromatin


S-a precizat anterior ca, ADN asociat cu histonele formeaza fibra de cromatina.
Cromatina eucariotelor este alcatuita din unitati ce se repeta denumite nucleosomi.
Nucleosomul reprezint un corpuscul histonic asociat cu un segment de ADN de 146 pb, partea
intern corespunznd miezului globular histonic.

Nucleosomii
au forma aproximativ sferic cu un diametru de 11 nm.
miezul globular histonic prezint dou zone:
- una bazal, tetramer constituit din 2H3 i 2H4,
- deasupra creia este localizat cealalt parte tetrameric constituit din 2H2A i 2H2B.

15
Fibra fundamental de cromatin, cu diametrul de 100 nm, se spiralizeaz ntr-o structur cu 3-6
nucleosomi per tur de spir, numit solenoid, avnd diametrul de 30nm i nlimea pasului de 11 nm.
Helixul poate avea att sens dextral ct i senestru. n cadrul solenoidului nucleosomii sunt astfel aezai
nct histonele H1 se dispun n centrul helixului.

A-cromosomi metafazici;
B-cromosomii sexului X si Y;
C-fibra de cromatina;
D- implicarea histonelor H1 in organizarea nucleosomului modelul solenoid;
E-structura fibrei de cromatina;
F-molecula de ADN

16
La rndul ei, fibra de cromatin sufer alte condensri n spire cu configuraii helicale de ordin superior.

Structura cromosomilor eucariotelor


Cromosomii eucariotelor reprezint entiti genetice ale genomului eucariot, purttori ai
genelor, fiind deci genoforii acestora.
Programul genetic al unei celule eucariote este distribuit pe mai multe genomuri:
nuclear, mitocondrial i plastidial.
Cromosomii sunt structuri n care se organizeaz cromatina nucleului interfazic la debutul
diviziunii nucleului, n urma unor procese de spiralizare i condensare progresiv a fibrelor de
cromatin. Aceasta nseamn c structurile cromosomale sunt stri fizice diferite ale fibrei de
cromatin ce apar n dinamica acestei fibre. Structurile fibroase interfazice care reprezint
cromosomi despiralizai s-au mai numit cromoneme sau genoneme.
Conversia cromosomilor de la structura unicromatidic (din anafaz pn la stadiul S al interfazei) la
structura bicromatidic (de la sfritul fazei S pn la sfritul metafazei) i revenirea la structura
unicromatidic se realizeaz prin mecanisme replicative complexe, urmate de mecanisme distributive cu
intervenia aparatului mitotic (fusul de diviziune) care asigur o repartizare echilibrat a produilor de
replicare.
Fiecrei cromatide din cromosomul eucariot i corespunde o singur fibr de cromatin, pliat
transversal i longitudinal dup un model care red morfologia cromosomului metafazic.
La nivelul constriciei primare (centromer) cele dou fibre nucleohistonice ale cromosomilor
metafazici bicromatidici interfer.
Centromerul este o regiune specific a cromosomilor de la eucariote care devine vizibil ca o
entitate morfologic distinct n cursul condensrii; el este responsabil de deplasarea cromosomilor n
cursul diviziunii mitotice sau meiotice deoarece la nivelul su se gsete kinetocorul (o structur
proteic trilamelar) i fibrele kinetocorului prin intermediul crora cromosomii se fixeaz la fibrele
fusului de diviziune.
Telomerele reprezint de fapt secvenele terminale ale cromosomilor conferind moleculelor
lineare (i deci cromosomilor la nivelul crora se gsesc) stabilitate. Recent, s-a dovedit c lungimea
telomerelor variaz n cursul existenei unei celule, telomerele scurtndu-se pe msur ce respectivele
celule mbtrnesc. Telomerele sunt alctuite de obicei din scurte secvene de ADN repetitiv, bogate n
G, care sunt repetate de sute de ori (uneori chiar de mii de ori) i care sunt complexate cu proteine
specifice. S-a observat c, n cursul diviziunii mitotice a celulelor mamaliene are loc o scurtare
progresiv a telomerelor deoarece ADN-polimeraza care asigur replicarea nu este capabil s replice
complet extremitile moleculei lineare de ADN cromosomal. Aceast pierdere de secvene nucleotidice
este compensat n cazul celulelor sexuale i a celulelor canceroase de aciunea unei enzime numit
telomeraza. Aceasta este un complex ribonucleoproteic, format din mai multe subuniti
17
TIPURI DE CROMOSOMI
1. Cromosomi uriai sau politeni
Cercetrile de citogenetic efectuate la Drosophila melanogaster au evideniat faptul c, n
celulele glandelor salivare ale larvelor exist un tip special de cromosomi ce au primit
denumirea de cromosomi politeni.
In anumite condiii anormale sau sub aciunea unor factori mutageni care afecteaz funciile
celulare, replicarea cromosomilor nu este urmat de replicarea nucleului i de diviziunea celular ceea
ce are drept consecin formarea diplocromosomilor, care nu se separ. Acest proces determin dublarea,
triplarea, multiplicarea cantitii iniiale de ADN fenomen cunoscut sub numele de endociclu. Dac
cromosomii pstreaz morfologia tipic cromosomilor metafazici, un asemenea endociclu poart numele
de endomitoz.
De exemplu, endocicluri apar la neparea plantelor de ctre unele insecte sau n cazul
infeciilor virale sau cu micoplasme, urmate de formarea galelor sau a altor malformaii.
Unele endocicluri sunt legate de procese normale de citodifereniere. Aa este cazul glandelor
salivare de la larvele de diptere ca i n cazul glandelor sericigene de la viermele de mtase,
endociclurile respective ducnd la formarea cromosomilor uriai sau politeni.
La nivelul fiecrui cromosom politen, prin colorare specific pot fi observate numeroase benzi
ntunecate, separate de benzi mai clare (fig.).

Aspect microscopic al unui cromosom politen


Zonele mai puternic condensate (cromomerele) sunt dispuse la acelai nivel constituind benzi mai
ntunecate.

Alctuirea benzilor transversale ntunecate ale cromosomilor politeni


18
Benzile ntunecate alterneaz cu cele clare ntr-un model ce are specificitate de specie.
Ex. La D.melanogaster, la nivelul cromosomilor politeni au fost identificate 5.000 asemenea benzi, pe
baza aspectului lor fiind alctuit aa numita hart citologic.

Fiecare cromosom politen se formeaz n cursul unui proces ce presupune mai multe evenimente
(Hartl i col., 1987; Darnell i col., 1986):
fiecare cromosom este supus unui ciclu de replicri (9 cicluri), cromatidele rezultate neseparndu-
se deoarece nici celulele n care se desfoar fenomenul (celulele glandelor salivare) nu se mai
divid (nu are loc cariochineza);
fenomenul de acest tip se numete endoreduplicare.
cromosomii omologi se asociaz ntr-un mod similar mperecherii ce se realizeaz n cursul
procesului de meioz, de aceea fenomenul a fost denumit mperechere somatic.
mperecherea somatic a cromosomilor omologi n cursul desfurrii procesului de politenie,
conduce i la reducerea la jumtate a numrului de cromosomi fa de complementul normal
diploid;
perechile de cromosomi se unesc ntre ele prin intermediul centromerilor; zona de fuziune
formeaz cromocentrul

Examinarea cromosomilor politeni a permis evidenierea creterii diametrului unor anumite


regiuni ale acestora i un aspect lax al acestora.
Explicaia ar fi urmtoarea: cnd genele de la nivelul unor cromomere sunt activate (trebuie s
fie transcrise) are loc o despiralizare localizat a cromomerelor; procesul confer aspectul difuz
al fibrelor de cromatin care apar ca nite funde de jur mprejurul cromosomilor constituind
pufele.
Cnd pufele sunt de dimensiuni mai mari ele se numesc inelele Balbiani.
Aceste zone reprezint sediul unor bogate sinteze de ARN, astfel c pufele i inelele Balbiani
reprezint sediul transcrierii genetice la nivelul cromosomilor politeni

19
In cursul dezvoltrii larvare, pufele apar i dispar ntr-un mod caracteristic, specific de stadiul larvar i
de esut. De asemenea, formarea lor poate fi indus experimental .
Cromosomi politeni au mai fost descrii la unele plante angiosperme, la protozoare i chiar n
celule maligne.

2.Cromosomii perie de lamp (lampbrush) reprezint un alt tip particular de organizare a


cromosomilor la eucariote. Ei apar n timpul meiozei desfurate n ovogeneza multor grupe de
vertebrate, mai ales la amfibienii urodeli, dar i la unele nevertebrate i au fost denumii astfel dup
forma lor particular asemntoare unei perii de curat sticla de lamp. Au mai fost denumii i
cromosomi plumoi i sunt caracteristici stadiului de diploten prelungit al meiozei.

Forma lor este reversibil n stadiul urmtor, diakineza, revenind la forma obinuit a cromosomilor
meiotici. Cromosomul lampbrush este un bivalent meiotic format din dou perechi de cromatide
surori; fiecare pereche de cromatide formeaz o serie de cromomere elipsoidale, cu un diametru de 1-
2 m, care sunt conectate la un ax central. De la nivelul cromomerelor de dimensiuni i forme diferite
emerg lateral, simetric, bucle filiforme de diferite dimensiuni. Prin urmare, axul principal al fiecrui
cromosom de acest tip este format din dou filamente longitudinale care reprezint cele patru
cromatide ale filamentului.
20
Buclele laterale pornesc simetric din aceste cromatide de la nivelul cromomerelor omoloage prezentndu-
se ca un filament subire care se ngroa progresiv pe msur ce bucla revine n cromomer, ntr-un
punct adiacent celui de ieire. Buclele respective reprezint zone despiralizate ale fibrei de cromatin
la nivelul crora ADN este supus unui proces activ de transcriere.
Morfologia i funcia buclelor laterale ale cromosomilor lampbrush sunt echivalente celor
ale pufelor i inelelor Balbiani din sistemul politen, ele fiind implicate n optimizarea eficienei
transcrierii genice.

Reprezentarea schematic a cromosomilor de tip lampbrush


Deosebirea dintre cromosomii politeni i cei lampbrush este c prima categorie este ireversibil (ei nu mai
revin niciodat la forma iniial), pe cnd cei lampbrush sunt structuri reversibile: dup ce i ndeplinesc
funcia de sinteza intens de ARNr sau alte tipuri de ARN revin la forma normal de bivaleni.

21